专利名称：药物组合物的制作方法
背景技术：
本领域的状况通过免疫抑制治疗来抑制免疫系统活性对于在接受移植患者中防止同种移植物排斥和治疗自免疫疾病来说具有非常的医学重要性。过去数年来，仅仅开发了少量适用于免疫抑制治疗的新的药物，例如环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab和雷怕霉素。
实际上仍然需要开发更有效的和可耐受的治疗自免疫疾病和防止接受移植患者中同种移植物排斥的方法。因此，本发明寻求提供新的用于该治疗领域的药物组合物和产品。
已经表明，2’,2’-二氟核苷具有体外抗病毒作用(US4,808,614)，并且在标准癌筛网中具有溶瘤细胞活性(US5,464,826)。在这些化合物中，已经对2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷(吉西他滨，dFdC)的溶瘤细胞活性进行了深入研究。Kaye,J．Clin.Oncol.12,1527(1994)。根据这些研究结果，吉西他滨盐酸盐已经在50个以上的国家经官方批准用于治疗非小细胞肺癌和/或胰腺癌。对吉西他滨对乳腺癌、膀胱癌和卵巢癌的治疗的研究则正在进行中。
发明概述本发明提供了式Ⅰ化合物或其可药用盐在制备用于人或动物体的免疫抑制治疗的药物中的应用 其中R1是下式之一定义的碱 R2是氢、C1-C4烷基、溴、氟、氯或碘。
本发明还涉及式Ⅰ化合物在制备用于治疗人和动物自免疫疾病的药物中的应用。
本发明还提供了式Ⅰ化合物在制备用于抑制人和动物移植物排斥、优选的是抑制骨髓移植、心脏移植、角膜移植、肠移植、肝移植、肺移植、胰移植、肾移植和皮肤移植的排斥的药物中的应用。
本发明另一方面是，式Ⅰ化合物在制备治疗下列疾病或病症的药物中的应用红斑痤疮、持续性肢皮炎、光化性类网状细胞增多症、AIDS、脱发、Alport’s综合征、肌萎缩性侧索硬化、口疮性口炎、红细胞成形不全、再生障碍性贫血、哮喘、特应性皮炎、自身免疫性肠病、贝切特氏综合征、大疱性多形红斑、大疱性类天疱疮、胆汁性肝硬变、角膜熔化综合征、节段性回肠炎、疱疹样皮炎、皮肤肌炎、糖尿病、杜兴氏肌营养不良、湿疹、大疱性表皮松解、结节性红斑麻风(leprosum)、家族性噬红细胞淋巴细胞组织细胞与浆细胞增多病(familial hemophagocytic lymphohistiocytosis)、费耳提氏综合征、环形肉芽肿、格雷夫斯眼病、溶血性贫血、血友病、肝炎、鳞癣、炎性肠疾病、间质性膀胱炎、间质性肺病、角膜结膜炎、朗格罕氏细胞组织细胞增多病、T细胞白血病、B细胞白血病、淋巴瘤、扁平苔癣、巨噬细胞活化综合征、莫伦氏溃疡、硬斑病、多发性硬化、重症肌无力、肾病、肾变病综合征、掌跖脓疱病、天疱疮、顽固性光敏感、毛发红糠疹、多肌炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺纤维变性、坏疽性脓皮病、网状红斑粘蛋白沉积症、类风湿性关节炎、肉样瘤病、巩膜炎、硬皮病、匐行性脉络膜炎、斯耶格伦氏综合征、口炎性腹泻、Sweet氏综合征(急性发热性中性白细胞增多性皮肤病)、全身性红斑狼疮、全身性硬化、血小板减少、毒性上皮坏死溶解、溃疡性结膜炎、眼色素层炎、韦-克二氏病(回归型发热性结节性非化脓性脂膜炎)、药物引起的韦-克二氏脂膜炎、韦格内氏肉芽肿病。
优选的是，将式Ⅱ的2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷或其可药用盐用作上述应用的化合物。优选使用的可药用盐是盐酸盐。 本发明还涉及吉西他滨盐酸盐与环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素和一种或多种皮质类固醇中的一种或多种的联合应用。
因此，本发明另一方面提供了含有1-10毫克吉西他滨盐酸盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的单位剂型的药物组合物。
本发明还提供了药物组合物，该组合物含有式Ⅰ化合物或其可药用盐，环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素和一种或多种皮质类固醇中的一种或多种，和可药用载体、稀释剂或赋形剂。
另一方面，本发明还提供了同时、分别或相继使用以治疗人或动物体的、含有式Ⅰ化合物或其可药用盐和环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素和一种或多种皮质类固醇中的一种或多种的联合药物产品。
优选的是，将式Ⅱ的2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷或其可药用盐用作本发明药物组合物和药物产品的化合物。优选地，所用的可药用盐是盐酸盐。
发明详述优选通过下述方法制备用于本发明的式Ⅰ化合物(2’,2’-二氟胞苷)将D-glyceraldehyde ketonide与溴二氟乙酸C1-C4烷基酯反应，得到3-二氧戊环基-2,2-二氟-3-羟基丙酸烷基酯。将所得羟基丙酸酯水解得到内酯，将该内酯保护并还原，得到2-去氧-2,2-二氟核糖或木糖衍生物。使该化合物带上羟基离去基团，并将所得碳水化物与合适的碱偶合。最终使所得被保护的核苷脱保护，得到用于本发明的化合物。在US5,464,826中描述了本发明所用化合物制备方法的细节，该专利引入本文作为参考。
环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素以及皮质类固醇是可以购买到的。
本发明药物组合物和产品是含有活性成分(式Ⅰ化合物)和其药物载体、稀释剂或赋形剂的药物制剂。该组合物和产品的制剂是常规的，并且符合药物化学家的常规实践。
制剂中活性成分的含量为1％-90％(重量)。活性成分通常与载体混合、或者用载体稀释，或者用胶囊、小药囊、纸或其他容器形式的载体包封。当载体用作稀释剂时，它可以是用作活性成分的载体、赋形剂或介质的固体、半固体或液体物质。因此该组合物和产品可以是片剂、丸剂、粉末、锭剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、气雾剂(固体形式或在液体基质中)、含例如最多10％(重量)活性化合物的软膏、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌注射溶液和无菌包装粉末形式。
合适的载体、赋形剂和稀释剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和丙酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。该制剂还可以包括润滑剂、润湿剂、乳化剂和悬浮剂、防腐剂、甜味剂或矫味剂。本发明组合物和产品可以采用本领域公知的的方法配制成在患者或动物服用后速释、持续释放活性成分的制剂。
该组合物和产品优选配制成单位剂型，每一剂含有约0.1至约100毫克活性成分。术语“单位剂型”是指适于用作人或其他哺乳动物单元剂量的可物理分离的单元，每一单元含有预定量的、经计算产生所需治疗作用的活性成分以及合适的可药用载体。
如果活性成分是吉西他滨盐酸盐，则单位剂量优选为约0.5至约25毫克、更优选约1至约15毫克。特别优选的是，吉西他滨盐酸盐的单位剂量为约1至约10毫克、最优选约2至约5毫克。
下面的制剂实施例代表了部分使用吉西他滨盐酸盐作为活性成分的具体的药物制剂。该制剂可以使用任何式Ⅰ化合物作为活性成分。这些实施例仅仅用于说明、而非以任何方式限制本发明的范围。
制剂1用下列成分制备硬明胶胶囊，其中“活性成分”是式Ⅰ化合物含量(毫克/粒胶囊)活性成分 25干淀粉 425硬脂酸镁 10将上述成分混合并填充到硬明胶胶囊中，每粒胶囊重460毫克。
制剂2用下列成分制备片剂含量(毫克/片)活性成分2微晶纤维素500雾化二氧化硅 10硬脂酸 8将上述成分混合并压制成片，每片重520毫克。
制剂3
制备含有下列成分的气溶胶溶液重量％活性成分0.10乙醇29.90抛射剂22(氯二氟甲烷)70.00将活性成分与乙醇混合，并将该混合物加入到一部分抛射剂22中，冷却至-30℃并转入填充装置中。然后将所需量加入到不锈钢容器中，用剩余的抛射剂稀释。然后给容器装上阀。
制剂4如下制备每片含5毫克活性成分的片活性成分 5毫克淀粉 75毫克微晶纤维素58毫克聚乙烯吡咯烷酮(10％水溶液)5毫克羧甲基淀粉钠 5.5毫克硬脂酸镁 0.5毫克滑1毫克将活性成分、淀粉和纤维素过45目美国筛并充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，然后过14目美国筛。所得颗粒在50-60℃干燥，过18目美国筛。将羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石预先过60目美国筛，然后加入上述制得的颗粒中，混合后，在压片机上压片，得到各重150毫克的片。
制剂5如下制备每粒含0.5毫克活性成分的胶囊活性成分0.5毫克淀粉98.5毫克微晶纤维素 98.5毫克硬脂酸镁2.5毫克将活性成分、纤维素、淀粉和硬脂酸镁混合，过45目美国筛，并填充到硬明胶胶囊中，每粒胶囊重200毫克。
制剂6
如下制备每粒含0.1毫克活性成分的栓剂活性成分 0.1毫克饱和脂肪酸甘油酯至2克将活性成分过60目美国筛，并悬浮在预先用最低所需热量融化的饱和脂肪酸甘油酯中。然后将该混合物倒入2克容量的栓剂模中并使其冷却。
制剂7如下制备每5毫升剂量含10毫克活性成分的悬浮液活性成分 10毫克羧甲基纤维素钠50毫克糖浆 1.25毫升苯甲酸溶液0.10毫升矫味剂适量着色剂适量纯化水至 5毫升将活性成分过45目美国筛并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合，形成调匀的糊剂。用少量水稀释苯甲酸溶液、矫味剂和着色剂，并在搅拌下加入上述糊中。然后向所得产物中加入足量的水至所需体积。
如下制备静脉制剂制剂8吉西他滨盐酸盐0.1毫克等渗盐水 1000毫升制剂9吉西他滨盐酸盐0.5毫克等渗盐水 1000毫升制剂10吉西他滨盐酸盐1.0毫克等渗盐水 1000毫升制剂11吉西他滨盐酸盐5毫克等渗盐水 1000毫升制剂12吉西他滨盐酸盐10毫克等渗盐水 1000毫升制剂13吉西他滨盐酸盐15毫克等渗盐水 1000毫升制剂14吉西他滨盐酸盐25毫克等渗盐水 1000毫升将上述成分的溶液以例如1毫升/分钟的速度静脉内给药。
本发明组合物和产品可以通过各种途径对人或动物体给药，包括口服、直肠、透皮、皮下、静脉内、肌内或鼻内途径。如果以吉西他滨盐酸盐为活性成分，则优选通过静脉内途径给药。
每日剂量通常为约0.01至约10毫克/千克体重(BW)，以单次剂量或多次剂量给药。每日优选剂量为约0.025至约5毫克/千克，最优选约0.05至约0.25毫克/千克。但是应该理解，化合物的实际用量将由医生根据相关的情况决定，这些情况包括所治疗的病症、所施用的具体化合物、所选择的给药途径、每个患者的年龄、体重和药物反应以及患者症状的严重程度，因此上述剂量范围并不以任何方式限制本发明的范围。
典型的式Ⅰ化合物2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷(吉西他滨，dFdC)的免疫抑制作用已经通过下面所述的体外和体内实验得到证实。dFdC的用途仅仅代表本发明优选的具体实施方式
，而不是以任何方式限制本发明的范围并且不应作这种解释。
dFdC是具有抗肿瘤活性的嘧啶抗代谢药，它可以抗各种实体瘤，包括转移胰腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌和乳腺癌。Kaye,J.Clin.Oncol.12,1527(1994)。它是脱氧胞苷类似物，一旦进入细胞，即被脱氧胞苷激酶以分步的方式磷酰化形成相应的最终的二磷酸酯和三磷酸酯。Plunkett等，Nucleosides Nucleotides 8,775(1989)。dFdC的三磷酸酯掺合到DNA中被假定是其导致DNA合成抑制和细胞死亡的主要机理。
对dFdC作为抗癌药已经进行了大量Ⅰ期实验，并且以周日程表进行的Ⅱ期研究已经获得了很多经验。Kaye,J.Clin.Oncol.12,1527(1994)。在该治疗方案中，dFdC以连续3周、每周一次30分钟静脉注射的方式给药，然后休息一周。据报道，这种给药方式在不到1％的患者中引起脊髓抑制，导致严重感染(WHO Ⅲ/Ⅳ级)。甚至在重复施用dFdC之后，CD4+和CD8+淋巴细胞亚型也没有显著减少，即没有观察到明显的免疫抑制。Dalkeler等，Anti-Cancer Drugs8,643(1997)。相反，用象2-氯脱氧腺苷(cladribine,2-CdA)这样的嘌呤类似物以每日×5给药方案治疗恶性淋巴瘤使得CD4+淋巴细胞严重抑制超过12个月。Seymour等，Blood 83,2906(1994)。
按照每日×5给药方案，以9mg/m2的剂量水平对dFdC进行Ⅰ期实验引起了显著量的非血液学毒性，包括散发性发热和严重的高血压。O’Rourke等，Eur.J.Cancer 30A,417(1994)。由于这一结果，不推荐对该方案进行进一步评估。到目前为止，尚未对每日施用低剂量dFdC后其在细胞内的聚集及其对免疫活性细胞的作用进行测量。
出于本发明的目的，通过以下方法对dFdC的免疫抑制作用进行了评估采用淋巴细胞集落生长分析法测定dFdC对淋巴细胞的作用，以及检测dFdC在大鼠心脏移植模型中的作用。-dFdC对T淋巴细胞集落形成的影响dFdC是可以购买到的。药物对活化T淋巴细胞集落形成能力的干扰可以作为证明淋巴细胞毒性作用的工具是已知的。Aye,Blood 58,1043(1981)。因此，将外周血单核细胞(PBMC)与凝集植物凝集素(PHA)和不同浓度的dFdC在Petzer等描述的微琼脂培养系统(Blood 78,2583(1991))中进行培养。将PBMC悬浮在含有20％胎牛血清和0.3％琼脂的Iscove’s培养基中。然后以250μl的等分量，将含有2×105PBMC的该悬浮液涂布在多孔组织培养板上。使琼脂在室温固化，然后覆盖上含有0.5％PHA和0.5％2-巯基乙醇的培养基(终浓度为1×10-4mol/l)。在37℃和饱和湿度的、含5％CO2的气氛中孵育该培养物，并在孵育的7天后用倒用显微镜对细胞集落计数。
如
图1所示，dFdC以剂量依赖的方式抑制PHA诱导的淋巴细胞增殖，其50％抑制浓度为3.25±0.9nmol/l。-dFdC在大鼠心脏移植模型中的作用从“Zentralinstitut für Versuchstierzucht”(Hannoyer,Germany)得到重200-270克的同系繁殖雄性LEWIS(LEW)大鼠和Brown Norway(BN)大鼠。如Schmid等所述，采用显微手术技术进行异位心脏移植(Eur.Surg.Res.30,61(1998))。手术后，使所有大鼠随意饮水和随意取用标准大鼠饮食。
手术后立即开始皮下注射dFdC，每天一次，连续注射50天。日剂量为(动物数/组)25(n=6)、50(n=5)、75(n=6)、100(n=6)、125(n=6)、150(n=6)、300(n=6)、600(n=2)或6000(n=1)μg/kg体重(BW)。对照组(n=8)不接受治疗。
每天通过扪诊检查心脏同种移植物的搏动活性。当心脏同种移植物停止搏动时，用过量乙醚将动物处死，并将心脏和所有重要的器官切除供组织学检查。将移植物左心室和每种原有器官的多份切片用4％缓冲的福尔马林固定。将石蜡包埋的探针切入5μm厚的切片中，并用苏木精和曙红染色。由病理学家对载玻片进行单盲检测，并根据ISHT标准对排斥进行计分。Billingham等，J.Heart Transplant9,587(1990)。
dFdC在大鼠心脏移植模型中的作用示于表1中。结果以不同的dFdC剂量组和不接受dFdC治疗的对照组的同种移植物存活天数表示。
施用少于150μg/kg dFdC时，在所有动物中均出现了剂量依赖型白细胞减少并且是可逆的。
表1
上述实验结果首次证明了dFdC显著的免疫抑制能力。与对照组相比，施用75-600μg/kg BW的药物使移植物在所有动物中的存活期延长。施用100-125μg/kg BW达到最长的存活期。超过125μg/kgBW引起过免疫抑制和不可逆的骨髓中毒性。
出人意料的是，上述结果证明的dFdC的有效免疫抑制剂量远远低于预期的治疗恶性病所需的药物剂量。
权利要求
1．式Ⅰ化合物或其可药用盐在制备用于人或动物体的免疫抑制治疗的药物中的应用 其中R1是下式之一定义的碱 R2是氢、C1-C4烷基、溴、氟、氯或碘。
2．权利要求1的应用，该应用是用于制备治疗人和动物自免疫疾病的药物。
3．权利要求1的应用，该应用是用于制备抑制人和动物移植物排斥的药物。
4．权利要求1的应用，该应用是用于制备治疗下列疾病或病症的药物红斑痤疮、持续性肢皮炎、光化性类网状细胞增多症、AIDS、脱发、Alport’s综合征、肌萎缩性侧索硬化、口疮性口炎、红细胞成形不全、再生障碍性贫血、哮喘、特应性皮炎、自身免疫性肠病、贝切特氏综合征、大疱性多形红斑、大疱性类天疱疮、胆汁性肝硬变、角膜熔化综合征、节段性回肠炎、疱疹样皮炎、皮肤肌炎、糖尿病、杜兴氏肌营养不良、湿疹、大疱性表皮松解、结节性红斑麻风、家族性噬红细胞淋巴细胞组织细胞与浆细胞增多病、费耳提氏综合征、环形肉芽肿、格雷夫斯眼病、溶血性贫血、血友病、肝炎、鳞癣、炎性肠疾病、间质性膀胱炎、间质性肺病、角膜结膜炎、朗格罕氏细胞组织细胞增多病、T细胞白血病、B细胞白血病、淋巴瘤、扁平苔癣、巨噬细胞活化综合征、莫伦氏溃疡、硬斑病、多发性硬化、重症肌无力、肾病、肾变病综合征、掌跖脓疱病、天疱疮、顽固性光敏感、毛发红糠疹、多肌炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、肺纤维变性、坏疽性脓皮病、网状红斑粘蛋白沉积症、类风湿性关节炎、肉样瘤病、巩膜炎、硬皮病、匐行性脉络膜炎、斯耶格伦氏综合征、口炎性腹泻、Sweet氏综合征、全身性红斑狼疮、全身性硬化、血小板减少、毒性上皮坏死溶解、溃疡性结膜炎、眼色素层炎、韦-克二氏病、药物引起的韦-克二氏脂膜炎、韦格内氏肉芽肿病。
5．权利要求3的应用，该应用是用于抑制骨髓移植、心脏移植、角膜移植、肠移植、肝移植、肺移植、胰移植、肾移植和皮肤移植的排斥。
6．权利要求1-5之一项或多项的应用，其中所述式Ⅰ化合物是式Ⅱ的2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷或其可药用盐
7．权利要求6的应用，其中所述可药用盐是盐酸盐。
8．权利要求7的应用，其中吉西他滨盐酸盐与环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素和一种或多种皮质类固醇中的一种或多种联合应用。
9．含有1-10毫克吉西他滨盐酸盐和可药用载体、稀释剂或赋形剂的单位剂型药物组合物。
10．药物组合物，含有-权利要求1中述及的式Ⅰ化合物或其可药用盐；-环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素和一种或多种皮质类固醇中的一种或多种；和-可药用载体、稀释剂或赋形剂。
11．权利要求10的药物组合物，其中所述式Ⅰ化合物是权利要求6中述及的式Ⅱ的2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷或其可药用盐。
12．权利要求11的药物组合物，其中所述可药用盐是盐酸盐。
13．同时、分别或相继使用以治疗人或动物体的、含有权利要求1中述及的式Ⅰ化合物或其可药用盐和环孢菌素A、他克莫司、霉酚酸莫非替克、daclizumab、雷怕霉素和一种或多种皮质类固醇中的一种或多种的联合药物产品。
14．权利要求13的药物产品，其中所述式Ⅰ化合物是权利要求6中述及的式Ⅱ的2’-去氧-2’,2’-二氟胞苷或其可药用盐。
15．权利要求14的药物产品，其中所述可药用盐是盐酸盐。
全文摘要
本发明提供了式Ⅰ化合物或其可药用盐在制备用于人或动物体的免疫抑制治疗的药物中的应用,式Ⅰ中,R
文档编号A61P7/00GK1312719SQ99807371
公开日2001年9月12日 申请日期1999年4月14日 优先权日1998年4月14日
发明者R·马格雷特尔, G·康瓦林卡 申请人:伊莱利利公司