具改善老年痴呆症作用的多肽组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物活性成分提取利用技术领域，特别是涉及一种具有生物活性的多 肽组合物及其制备方法和应用。
【背景技术】
[0002] 老年痴呆症是一种渐进发展的致死性神经退行性疾病，其症状主要表现为记忆力 和认知能力不断减弱，日常生活能力障碍，并有各种神经精神症状和行为障碍，多起病于老 年期，潜隐起病，病程缓慢且不可逆。随着我国进入老龄社会，老年性痴呆症的发病率也在 逐年增高。老年痴呆症的病因及发病机制尚未阐明，特征性病理改变为在大脑皮层和海马 区出现β淀粉样蛋白（Αβ)聚集形成老年斑，Tau蛋白异常聚集形成神经纤维缠结以及脑 皮层和海马区神经细胞减少。
[0003] 目前治疗老年痴呆症的药物主要包括胆碱能药物，防止神经纤维缠结药物，抗A β 蛋白沉积药物，生长因子促进剂以及脑功能改善药物等。但是，现有药物具有治疗效果不理 想，毒副作用大，特异性不强等缺点，而中草药具有天然，多效，毒性小等特点。从中药和天 然药物中寻找能够预防和/或治疗老年痴呆症的有效成分是迫切需要解决的课题。
【发明内容】
[0004] 基于此，本发明提供一种具改善老年痴呆症作用的多肽组合物，该多肽组合物对 神经细胞具有保护及营养作用，能够改善老年痴呆小鼠的学习记忆能力。
[0005] -种具改善老年痴呆症的多肽组合物，所述多肽组合物的有效成分主要由以下重 量份的原料，通过酶解制备而成：
[0006] 猴头菇2-4份、北冬虫夏草子实体1-3份、紫苏籽1-3份、香菇0. 5-1. 5份、木耳 0· 5-1. 5 份。
[0007] 上述原料中，猴头菇又叫猴头菌，是齿菌科的菌类，菌伞表面长有毛茸状肉刺，长 约1~3厘米，它的子实体圆而厚，新鲜时白色，干后由浅黄至浅褐色，基部狭窄或略有短 柄，上部膨大，直径3. 5~10厘米，远远望去似金丝猴头，故称"猴头菇"。猴头菇性平味甘， 有利五脏、助消化、滋补身体等功效。现代医学陆续证明猴头菌有良好的药用价值，临床应 用表明，猴头菇可治疗神经衰弱、消化不良、胃溃疡、胃胀等疾病，还具有提高记忆力、抗衰 老、提高免疫力、抗癌等作用。
[0008] 北冬虫夏草，也叫蛹虫草或蛹草或北虫草，是虫与菌结合的药用真菌，现代珍稀中 草药。北冬虫夏草属于真菌门麦角菌科虫草属，主要生长在我国的北方地区。北冬虫夏草 不仅含有丰富的蛋白质和氨基酸，而且含有30多种人体所需的微量元素，是上等的滋补佳 品。研宄证实，北冬虫夏草具有明显的抗衰老作用，其能有效清除人体自由基，抑制过氧化 脂质的产生，保护细胞免受过氧化物的损害，延缓器官和整个集体的衰老，同样能够调节血 液粘稠度，扩张心脑血管，保护心肌细胞，增强免疫力等。北冬虫夏草多肽为北冬虫夏草的 主要活性成分之一，是经过酶解工艺直接制得的水解物，具有极强的药理作用和生理功能 多样性，但有关其预防或治疗老年痴呆症的报道较少。
[0009] 紫苏籽，为唇形科植物紫苏的干燥成熟果实。味辛，性温。归肺经。功效降气消痰、 止咳平喘、润肠。紫苏种子中含大量油脂，出油率高达45%左右，油中含亚麻酸62. 73%、亚 油酸15. 43%、油酸12. 01%。种子中蛋白质含量占25%，内含18种氨基酸，其中赖安酸、 蛋氨酸的含量均高于高蛋白植物籽粒苋。此外还有谷维素、维生素E、维生素B1、缁醇、磷脂 等。现代医学研宄证明紫苏籽对视觉功能和学习行为活动起促进作用，还具有调节血压、调 节血脂、抑制肿瘤、抑制血小板聚集、防止血栓形成的功效。
[0010] 香菇，为侧耳科植物香蕈的子实体。是高蛋白、低脂肪的营养保健食品。香菇富 含维生素B群、铁、钾、维生素D原，味甘，性平。主治食欲减退，少气乏力。香菇中还含有30 多种酶和18种氨基酸。人体所必需的8中氨基酸中，香菇就含有7种，因此香菇又成为纠 正人体酶缺乏症和补充氨基酸的首选食物。现代研宄表明，香菇对提高机体适应力有很大 作用，此外，香菇还对记忆力减退、神经炎、消化不良、糖尿病等有一定治疗作用。
[0011] 木耳，是木耳科真菌，含蛋白质、脂肪、多糖和钙、磷、铁等元素以及胡萝卜素、维生 素B1、维生素B2、烟酸等，还含磷脂、固醇等营养素。具有补气养血、润肺止咳、止血、降压、 抗癌等功效。现代医学研宄表明，木耳具有延缓衰老、增强免疫力、治疗心脑血管疾病、抗 癌、抗突变、降血糖等作用。
[0012] 本发明的多肽组合物，选用猴头菇、北冬虫夏草子实体、紫苏籽、香菇、木耳作为原 料，经过多次酶解得到的多肽组合物，对神经细胞具有保护及营养作用，能够改善老年痴呆 小鼠的学习记忆能力。
[0013] 本发明还公开了上述多肽组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0014] (1)胃蛋白酶酶解：按重量份称取猴头菇、北冬虫夏草子实体、紫苏籽、香菇和木 耳，按照10-20ml水/Ig原料的量加入水，调节溶液pH值为1. 0-3. 0,按照原料重量百分比 2.0% -3.0%的量加入胃蛋白酶，酶解3-5h ;随后将溶液煮沸，使其中的酶灭活，再将溶液 经截留分子量为25000D-35000D的超滤柱过滤，得到酶解液1 ;
[0015] (2)胰蛋白酶酶解：取上述酶解液1，调节溶液pH值为7. 0-9. 0,按照原料质量百 分比1. 0% -2. 0%的量加入胰蛋白酶，酶解3-5h ;随后将溶液煮沸，使其中的酶灭活，再将 溶液经截留分子量为8000D-12000D的超滤柱过滤，得到酶解液2 ;
[0016] (3)中性蛋白酶酶解：取上述酶解液2,调节溶液pH值为6. 5-7. 5,按照原料质量 百分比0. 25% -0. 75%的量加入中性蛋白酶，酶解3-5h ;随后将溶液煮沸，使其中的酶灭 活，将溶液经截留分子量为3000D-7000D的超滤柱过滤，得到酶解液3,即得多肽组合物。
[0017] 上述多肽组合物的制备方法，按照特定的顺序加入选定的酶，对猴头菇、北冬虫夏 草子实体、紫苏籽、香菇、木耳等原料进行酶解，并在每一步酶解之后以超滤柱进行了超滤， 得到预定分子量大小的多肽后再进行下一步的酶解，最终得到的多肽组合物的分子量主要 集中在1000D-3000D的范围内。以该多肽组合物作用于Αβ损伤PC12细胞，具有非常好的 抗凋亡作用；以该多肽组合物作用于老年痴呆模型小鼠，对其学习记忆作用具有非常好的 促进作用。说明以上述制备方法得到的多肽组合物具有预防和治疗老年痴呆症的效果。
[0018] 在其中一个实施例中，在（1)胃蛋白酶酶解步骤之前，还包括预处理步骤，该预处 理步骤为：按重量份称取猴头菇、北冬虫夏草子实体、紫苏籽、香菇和木耳，加入石油醚浸 泡，过滤得滤渣，滤渣烘干，即得脱脂的原料。先对原料进行脱脂，可获得更干燥的原料粉 末，并可增加其亲水性，酶解效果更好。
[0019] 在其中一个实施例中，所述预处理步骤中，按重量份称取猴头菇、北冬虫夏草子实 体、紫苏籽、香菇和木耳，粉碎，以原料：石油醚为1:2-4的质量体积比加入馏程为60_90°C 的石油醚，在50-60°C下振荡浸泡2-4h，过滤得滤渣，滤渣于40-50°C下烘干，即得粉末状脱 脂的原料。以上述条件进行脱脂，具有非常好的脱脂效果。
[0020] 在其中一个实施例中，所述步骤（1)胃蛋白酶酶解中，酶解温度为37_45°C ;所述 步骤（2)胰蛋白酶酶解中，酶解温度为37-45°C ;所述步骤（3)中性蛋白酶酶解中，酶解温 度为37-45°C。将酶解温度控制在上述范围内，能够使酶发挥最佳功效，获得较好的酶解效 果。
[0021] 在其中一个实施例中，所述步骤（1)胃蛋白酶酶解中，超滤柱的截留分子量为 30000D ;所述步骤（2)胰蛋白酶酶解中，超滤柱的截留分子量为10000D ;所述步骤（3)中性 蛋白酶酶解中，超滤柱的截留分子量为5000D。上述截留分子量的超滤柱具有方便、易得的 优点。
[0022] 在其中一个实施例中，所述步骤（1)胃蛋白酶酶解中，使溶液中酶灭活后，先以 4000-5000r ^mirT1离心5-15min，再取上清液过超滤柱过滤。先离心除去固体物后再过滤， 既有利于超滤的进行，也可避免超滤柱堵塞的问题。
[0023] 在其中一个实施例中，所述步骤（3)中性蛋白酶酶解后，得到的活性多肽组合物 中，分子量在1000D-3000D范围内的多肽占多肽总量的80% -90%，分子量在3000D-5000D 范围内的多肽占多肽总量的5%-8%。当多肽组合物中多肽分子量按照上述范围分布，具 有最佳的保护及营养神经细胞作用，并有最佳的改善老年痴呆小鼠的学习记忆能力效果。
[0024] 本发明还公开了上述的活性多肽组合物在制备预防和治疗老年痴呆症的药物中 的应用。
[0025] 在其中一个实施例中，所述药物或保健食品的剂型为片剂、颗粒剂、硬胶囊、软胶 囊、口服液、丸剂或滴丸。
[0026] 上述剂型可以采用本领