一种辛芩颗粒的制备方法及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂技术领域，具体涉及一种辛芩颗粒的制备方法及应用。
【背景技术】
[0002] 辛芩颗粒记载于中国药典标准，处方为细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝 l〇g、苍耳子l〇g、石菖蒲l〇g、黄芪l〇g、白术l〇g、防风l〇g，采用水提醇沉的方法制备，能益 气固表，祛风通窍，用于肺气不足.风邪外袭所致的鼻痒、喷嚏、流清涕、易感冒、过敏性鼻 炎见上述证候者，开水冲服，一次1袋，一日3次，20日为一个疗程，每袋装20g。
[0003] 现有技术中，尚未有辛芩颗粒在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用水 提取等方法，工艺粗糙、复杂、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响了本 品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种辛芩颗粒的制备方法。
[0005] 本发明的另一个目的在于提供一种辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增 殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种辛芩颗粒的制备方法，由细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、苍耳 子10g、石菖蒲10g、黄苗10g、白术10g、防风IOg作为原料药制成，所述的方法由下列步骤 组成：取上述药材加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体 积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，C02流量l-3ml/g生药·π?η，萃取时 间150-180min，得超临界萃取物，制粒，制备成颗粒剂，每袋重20g。
[0008] 所述辛芩颗粒的制备方法，所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分 比为5%。
[0009] 所述辛芩颗粒的制备方法，所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02 流量2ml/g生药· min，萃取时间160min。
[0010] 所述辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用，辛芩颗粒由细 辛3g、黄苳10g、荆芥10g、白]E 10g、桂枝10g、苍耳子10g、石菖蒲10g、黄苗10g、白术10g、 防风IOg作为原料药制成，制备方法为：取细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、 苍耳子l〇g、石菖蒲l〇g、黄芪l〇g、白术l〇g、防风l〇g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作 为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C， C02流量l-3ml/g生药·π?η，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，制粒，制备成颗粒剂， 每袋重20g。
[0011] 所述辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用，其特征在于辛 芩颗粒的制备方法中所述C02超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%。
[0012] 所述辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用，其特征在于辛 芩颗粒的制备方法中所述C02超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生 药· min，萃取时间160min。
[0013] 现有技术中，辛芩颗粒每袋20g，口服，一次1袋，一日3次，采用本发明制备成的辛 芩颗粒每袋20g，但含有的药材量比原来多，在同样服用量的情况下具有更多活性成分。
【具体实施方式】
[0014] 以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[0015] 实施例1 :取细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、苍耳子10g、石菖蒲 log、黄芪log、白术log、防风l〇g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占 总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力30MPa，温度30°C，C02流量lml/g生药·π?η，萃 取时间180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒剂，每袋重3g。
[0016] 实施例2 :取细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、苍耳子10g、石菖蒲 l〇g、黄芪l〇g、白术l〇g、防风l〇g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占 总萃取溶剂的体积百分比为6%，萃取压力15MPa，温度50°C，C02流量lml/g生药·π?η，萃 取时间180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒剂，每袋重3g。
[0017] 实施例3 :取细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、苍耳子10g、石菖蒲 l〇g、黄芪l〇g、白术l〇g、防风l〇g，加入到C02超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占 总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力20MPa，温度40°C，C02流量2ml/g生药·π?η，萃 取时间160min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒剂，每袋重3g。
[0018] 实施例4 :辛芩颗粒抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖的实验研究资料
[0019] 1实验材料
[0020] I. 1实验用细胞株：人纤维肉瘤HT-1080,南京医科大学实验室细胞库，DMEM+10% FBS常规培养。
[0021] 1. 2实验药物：研究药物：本发明辛芩颗粒：按实施例3方法制备。药液储液：称 取IOOmg辛芩颗粒内容物，混悬于5ml无水乙醇中，0.2 μπι滤器过滤，500 μ I doff管分 装，-20°C存储，同时0. 2 μπι滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。
[0022] 1. 3 实验试剂：DMEM(GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061Lot. No. 758137);胎牛血清 (浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司Cat. No.11810-033Lot. No. 1088387) Jrypsin(AMRESC0 公司批号：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批号：2009/10) !Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批号：2010242); Str印tomycin Sulfate (AMRESC0公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182) ;MTT(Biosharp 批号：0793) ;PBS(实验室自配）；
[0023] 1. 4实验器材：莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DMlL);可见-紫外光微孔板检 测仪（美国MD公司型号：SPECTRA MAX 190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏 净集团安泰公司制造型号：SW-CJ-ZFD);纯水仪（美国Spring公司型号：S/N 020579);精 密移液器（法国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323S); 全自动高压灭菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密 实验设备公司型号：DHG9123A);冰箱（西门子公司型号：KG18V21TI);液氮罐（CBS型号： 2001);低速离心机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0. 2μπι滤器（MILLIPORE型号： SLGP033RB) ;10cm培养皿（NEST公司）、96孔培养板（NEST公司）；细胞计数板；离心管、移 液管、Tips若干。
[0024] 2实验方法：I) HT-1080细胞用DMEM+10 % FBS于37 °C、5 % C02进行常规培 养（IOcm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入 311110.25%胰蛋白酶-0.04^^0了4,37°(：消化21^11后，向其中加入51111完全培养基中和反 应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000 rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3X 104个/ml。 2)将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180 μ 1，培养板放入细胞培养箱中（37°C， 5 % C02)常规培养。3)根据细胞生长情况，一般长至50 % -70 %，加入辛芩颗粒溶液，继续培 养24h。4) 24h后加入20 μ I MTT溶液（5mg/ml，即0. 5 % MTT)，继续培养4h。5) 4h后扣板法 倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200 μ 1二甲基亚砜，置摇床上低速振荡lOmin，使 结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6)同时设置本底（不加 细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）， 每组设定6个复孔。7)结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率（％) =(对照 孔OD值-给药孔OD值）/对照孔OD值X 100%。实验重复3次。
[0025] 3实验结果：MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对 HT-1080细胞增殖抑制有差异（P〈0. 05)，剂量在10mg/ml时该差异具有显著性（P〈0. 01)，当 剂量达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P〈0. 001)。
[0026] 表1辛芩颗粒对人纤维肉瘤HT-1080增殖抑制影响研究（X土SD)
[0027]
[0028] 注：与对照组比较，*P〈0.0 l ;#Ρ〈0· OOl
[0029] 4实验结论：辛芩颗粒可以抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖，减少人纤维肉瘤 HT-1080的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种辛芩颗粒的制备方法，由细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、苍 耳子l〇g、石菖蒲l〇g、黄苗l〇g、白术l〇g、防风IOg作为原料药制成，其特征在于所述的方 法由下列步骤组成：取上述药材加入到〇) 2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总 萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力15-30MPa，温度30-50°C，OV流量l-3ml/g生 药? min，萃取时间150-180min，得超临界萃取物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒剂，每袋重 20g〇2. 根据权利要求1所述辛芩颗粒的制备方法，其特征在于所述CO 2超临界萃取夹带剂 占总萃取溶剂的体积百分比为5%。3. 根据权利要求1所述辛芩颗粒的制备方法，其特征在于所述CO 2超临界萃取的萃取 压力20MPa，温度40°C，CO2流量2ml/g生药? min，萃取时间160min。4. 根据权利要求1所述辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用， 其特征在于辛苳颗粒由细辛3g、黄苳10g、荆芥10g、白]E10g、桂枝10g、苍耳子10g、石菖蒲 l〇g、黄芪l〇g、白术l〇g、防风IOg作为原料药制成，制备方法为：取细辛3g、黄芩10g、荆芥 l〇g、白]El〇g、桂枝l〇g、苍耳子l〇g、石菖蒲l〇g、黄苗l〇g、白术l〇g、防风IOg加入到CO2 超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4-6%，萃取压力 15-30MPa，温度30-50°C，OV流量l-3ml/g生药.min,萃取时间150-180min，得超临界萃取 物，粉碎成细粉，制粒，制备成颗粒剂，每袋重20g。5. 根据权利要求4所述辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用， 其特征在于辛芩颗粒的制备方法中所述CO 2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比 为5% 〇6. 根据权利要求4所述辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用， 其特征在于辛芩颗粒的制备方法中所述〇) 2超临界萃取的萃取压力20MPa，温度40°C，CO2 流量2ml/g生药? min，萃取时间160min。
【专利摘要】本发明属于中药制剂领域，具体提供一种辛芩颗粒的制备方法，由细辛3g、黄芩10g、荆芥10g、白芷10g、桂枝10g、苍耳子10g、石菖蒲10g、黄芪10g、白术10g、防风10g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了辛芩颗粒在制备抑制人纤维肉瘤HT-1080增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K9/16, A61P35/00, A61K36/888
【公开号】CN104997966
【申请号】CN201510364601
【发明人】赵明亮
【申请人】赵明亮
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年6月28日