一种含绿茶的植物组合物提取方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及中药制剂技术领域，具体设及一种含绿茶的植物组合物提取方法及应 用。
【背景技术】
[0002] 含绿茶的植物组合物由绿茶lOOg，龙牙草根60g、杜茎山70g、通梗花90g作为原料 药制成，目前的提取方法是加水煎煮二次，每次2-3小时，合并煎液，滤过，浓缩成稠膏，制 粒，干燥，压制成1000片，包糖衣，即得，能清热解毒。
[0003] 现有技术中，尚未有含绿茶的植物组合物在提取制备方面采用微波技术的报道， 而采用水煎煮的方法，工艺粗糖、落后，杂质多，导致患者用量过大，不方便服用，严重影响 了本品在临床上应用。
【发明内容】
[0004] 发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种含绿茶的植物组合物 提取方法。
[0005]本发明的另一个目的在于提供一种含绿茶的植物组合物在制备抑制大鼠胶质瘤 C6细胞增殖药物中的应用。
[0006] 技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：
[0007] -种含绿茶的植物组合物提取方法，植物组合物由绿茶lOOg，龙牙草根60g、杜茎 山70g、通梗花90g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入 化的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次 4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体 积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒 剂。
[0008] 上述一种含绿茶的植物组合物提取方法，制备方法中微波萃取功率为500W，每次 萃取6分钟。
[0009] -种含绿茶的植物组合物在制备抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖药物中的应用，含 绿茶的植物组合物由绿茶lOOg，龙牙草根60g、杜茎山70g、通梗花90g作为原料药制成，审U 备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入化的70%乙醇，投入微波萃取装置中进 行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到D101 大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥， 得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。
[0010] 上述一种含绿茶的植物组合物在制备抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖药物中的应 用，制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。
[0011] 现有技术中，含绿茶的植物组合物每片〇.4g，每次4片，一日3次，采用本发明制备 成的含绿茶的植物组合物每片0. 4g，但含有的药材量是原来的2倍，因此每次仅需2片，一 日服用3次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。
【具体实施方式】
[0012] W下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此 理解为本发明上述主题的范围仅限于W下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均 属于本发明的范围。
[001引实施例1
[0014]取绿茶lOOg，龙牙草根60g、杜茎山70g、通梗花90g，粉碎，加入化的70 %乙醇，投 入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取 液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收 乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂，每片0. 4g。
[001引 实施例2
[0016] 取绿茶lOOg，龙牙草根60g、杜茎山70g、通梗花90g，粉碎，加入化的70%乙醇，投 入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取 液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收 乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成胶囊。
[0017] 实施例3
[0018] 取绿茶lOOg，龙牙草根60g、杜茎山70g、通梗花90g，粉碎，加入化的70%乙醇，投 入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取 液，浓缩，加到D101大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收 乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成颗粒剂。
[0019] 龙牙草根为菩薇科植物龙芽草的根。秋后采收，洗净，除去芦头。味辛涩，溫，无毒。 治赤白频疾，妇女经闭，肿毒，驱缘虫。
[0020] 杜茎山为紫金牛科杜茎山属植物杜茎山MaesajaponicaCrhunb. )Mo;ritzi，W根、 叶入药。全年可采，洗净晒干。桂风利尿，止血，消肿。根：头痛，腰痛，水肿，腹水；叶：外用 治创伤出血。本发明W根入药。
[0021] 通梗花，拉下名为Abeliaengle;riana(Graebn. )Rehd.，六道木属，科中文名：忍冬 科，根：理气止痛，清热燥湿。用于牙痛，高热，火眼。果实或花：桂风湿，解热毒。用于风湿 筋骨疼痛，外用于痛疮红肿。本发明W根入药。
[0022] 实施例4 :含绿茶的植物组合物抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖的实验研究资料
[002引 1实验材料
[0024] 1. 1实验用细胞株
[00巧]大鼠胶质瘤C6细胞，南京医科大学实验动物中屯、实验室细胞库，DMEM+10%FBS常 规培养。
[0026] 1. 2实验药物
[0027] 研究药物：本发明含绿茶的植物组合物：按实施例1方法制备。
[0028]药液储液：称取lOOmg含绿茶的植物组合物，溶于5ml无水乙醇中，0. 2ym滤器过 滤，500y1doff管分装，-20°C存储，同时0. 2ym滤器过滤无水乙醇W备对照组之用。
[002引 1. 3实验试剂
[0030] DMEM(GIBC0公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03(上海久亿化学试剂有限公司化t. No.11810-033Lot.No. 1088387) ;T巧psin(AMRESC0公司批号：2010/04);邸TA(AMRESC0 公司批号：2009/10);PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批号：2010242); Str巧tomycinSul化te(AMRESC0公司批号：2010382);无水乙醇（南京化学试剂有限公司 批号：080310182);MTT度iosha巧批号：0793);PBS(实验室自配）；
[0031] 1.4实验器材
[00础莱卡倒置显微镜（德国Leica型号：DM1L);可见-紫外光微孔板检测仪（美国MD公司型号：S阳CTRAMAX190) ;C02培养箱（FORMA型号：3111);超净台（苏净集团安泰公 司制造型号：SW-CJ-Z抑）；纯水仪（美国Spring公司型号：S/N020579);精密移液器（法 国吉尔森公司型号：P2);电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BT323巧；全自动高压灭 菌锅（日本SANYO公司型号：MLS-3020);台式电热鼓风干燥箱（上海精密实验设备公司型 号：畑G9123A);冰箱（西口子公司型号：KG18V2m);液氮罐仰S型号：2001);低速离屯、 机（上海安亭科学仪器厂型号：KA-1000) ;0.滤器（MILLIP0RE型号：SLGP033RB);10cm 培养皿（肥ST公司）、96孔培养板（肥ST公司）；细胞计数板；离屯、管、移液管、Tips若干。 [003引 2实验方法
[0034] 1)大鼠胶质瘤C6细胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02进行常规培养（10cm培 养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0. 25%膜 蛋白酶-0. 04%邸TA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后 将其转入离屯、管中，100化pm离屯、5min，调整细胞悬液浓度3X104个/ml。
[003引。将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180y1，培养板放入细胞培养箱 中（37°C，5%C02)常规培养。
[0036] 3)根据细胞生长情况，一般长至50% -70%，加入含绿茶的植物组合物溶液，继续 培养2地。
[0037]4) 2地后加入20y1MTT溶液巧mg/ml，即0. 5 %MTT)，继续培养地。
[003引 W4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200y1二甲基亚讽，置摇 床上低速振荡lOmin，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。 [003引 6)同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解 介质、培养液、MTT、二甲基亚讽），每组设定6个复孔。
[0040] 7)结果W药物对细胞的抑制率表示：
[0041] 细胞增值抑制率（％ )=(对照孔0D值-给药孔0D值）/对照孔0D值X100 %。 实验重复3次。
[004引 3统计处理
[0043] 采用MicrosoftExcel2003软件中的相关分析和Studentt检验，数据W mean+S.D.表不。
[0044] 4实验结果
[004引 MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mg/ml时，对大鼠胶质瘤 C6细胞增殖抑制有差异（P<0. 05)，剂量在lOmg/ml时该差异具有显著性（P<0. 01)，当剂量 达到15-20mg/ml时有极显著性差异（P<0. 001)。
[0046] 表1含绿茶的植物组合物对大鼠胶质瘤C6细胞增殖抑制影响研究
[0047] 犀±如）
[0048]
[0049] 注：与对照组比较，冲<0. 01 ;*冲<0. 001
[0050] 5实验结论
[0051] 含绿茶的植物组合物可W抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖，减少大鼠胶质瘤C6细胞 的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。
【主权项】
1. 一种含绿茶的植物组合物提取方法，其特征在于植物组合物由绿茶l〇〇g，龙牙草根 60g、杜茎山70g、通梗花90g作为原料药制成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉 碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2 次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5 倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶 囊或颗粒剂。2. 根据权利要求1所述一种含绿茶的植物组合物提取方法，其特征在于制备方法中微 波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。3. -种含绿茶的植物组合物在抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖药物中的应用，其特征在 于含绿茶的植物组合物由绿茶l〇〇g，龙牙草根60g、杜莖山70g、通梗花90g作为原料药制 成，制备方法由下列步骤组成：取上述原料药，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取装 置中进行微波萃取，萃取功率为400-600W，萃取2次，每次4-8分钟，合并萃取液，浓缩，加 到DlOl大孔吸附树脂柱上，50%乙醇洗脱，收集5倍量柱体积洗脱液，减压回收乙醇，浓缩 并干燥，得微波提取物，加常规辅料制备成片剂、胶囊或颗粒剂。4. 根据权利要求3所述一种含绿茶的植物组合物在抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖药物 中的应用，其特征在于制备方法中所述微波萃取功率为500W，每次萃取6分钟。
【专利摘要】本发明提供一种含绿茶的植物组合物提取方法，由绿茶100g，龙牙草根60g、杜茎山70g、通梗花90g作为原料药制成，采用微波提取方法制备而成，使得含量有很大提高，用量减少，本发明还提供了含绿茶的植物组合物在制备抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖药物中的应用。
【IPC分类】A61K36/82, A61P35/00
【公开号】CN105147869
【申请号】CN201510641893
【发明人】陈爱华
【申请人】陈爱华
【公开日】2015年12月16日
【申请日】2015年10月3日