侧耳内酯在制备治疗炎症药物中的应用
【专利说明】侧耳内醋在制备治疗炎症药物中的应用 -、技术领域：
[0001] 本发明设及天然药物领域，具体设及薄荷烧型单祗抑制憐脂酶A2(PLA2)活性和在 制备抗炎药物中的用途。 二、【背景技术】：
[0002] 憐脂酶A2(PLA2)存在于各种生物体中.其生理功能是专一性水解憐脂sn-2 脂键，使之分解为脂肪酸和溶血憐脂。若脂肪酸为花生四締酸（arachidonicacid), 则被环氧合酶（cyclooxygenase)和5-脂氧合酶（lipoxygenase)分别分解为前列腺 素（prostaglandins)和白S締（leukotrienes)，前列腺素是炎症的前体，而白S締在引 发哮喘的发病机理中起着重要的作用；溶血憐脂代谢成的血小板活化因子（plateletactivatingfactor) 也是导致炎症的重要介质。PLA2 处于炎症调节因子生物合成的关键 位置.如果能够有效地抑制PLA2的活性，与炎症过程密切相关的S个调节因子的生物合成 都将被抑制。高效专一的PLA2抑制剂有可能发展成为新型的非酱体抗炎药。 阳00；3] 侧耳属（Pleurotus(Fr.)Kumm.)是由真菌学家P.Kummer首先W磨茹属的Agari州SOStreatsJacqRr.为模式种而建立的，属于香茹科Lentinaceae。全世界约有 50种，我国目前包括野生和引种栽培的已知种类达36种，是侧耳属真菌种类资源较为丰富 的国家之一。从真菌杏鲍茹（Pleurotuseryngii)的发酵液分离鉴定了一个新化合物侧耳 内醋，其结构如下：
[0004]
阳0化]侦[|耳内醋（pleurolactone) H、
【发明内容】
：
[0006] 技术问题
[0007] 本发明的目的之一是提供一种薄荷烧型单祗化合物在制备PLA2抑制剂和抗炎药 物的新用途。按照本发明，可把该新化合物制备成药物，用于制备P1A抑制剂和炎症等相 关疾病的治疗。 阳00引技术方案
[0009] 本发明提供了一种侧耳内醋在制备治疗炎症药物中的应用。
[0010] 所述的侧耳内醋在制备治疗炎症药物中的应用，其通过作为PLA2的抑制剂实现 的。
[0011] 本发明提供了侧耳内醋与医学上可接受的药用辅料组成药物组合物及其制剂。 如，片剂、丸剂、膏剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂W及注射液粉针剂或水针液。
[0012] 从真菌杏鲍茹的发酵液提取、分离、纯化得到的运种新的薄荷烧型单祗化合物，命 名为侧耳内醋（pleurolactone)。化学结构式为：
[0013]
[0014] 上述侧耳内醋的制备方法，其特征在于真菌杏鲍茹的发酵液为原料，经水或有 机溶剂或混合溶剂提取，水提取液直接过大孔树脂吸附，有机溶剂或混合溶剂提取液浓缩 后加水溶解再经大孔树脂吸附或正下醇萃取，大孔树脂吸附物或正下醇萃取物经柱层析分 离而得。其中，大孔树脂包括D10UAB-5、或HP-20 ;柱层析用担体选自硅胶、氧化侣、聚酷胺 和0DS中的一种或几种；有机溶剂包括甲醇、乙醇或正下醇；提取溫度低于100°C。
[001引本发明提供了侧耳内醋制备P1A抑制剂和抗炎药物的应用。在体外，侧耳内醋的ICs。值与吗I噪PLA2抑制剂的1C5。相近，体内实验表明侧耳内醋20mg?kg1和40mg?kg1两 剂量组可通过对PLAz活性的显著抑制作用，从而减少炎症介质PGE的含量，提示侧耳内醋 有类似于P1A抑制剂的作用；此外，40mg?kg1和80mg?kg1两剂量组对二甲苯所致小鼠 耳肿胀有明显的抑制作用。
[0016] 有益效果
[0017] 本发明公开了从真菌杏鲍茹的发酵液中提取分离的一种内醋类新化合物的化学 结构，W及该化合物制备方法及在医药领域中的用途，尤其在制备憐脂酶A2(PLA2)抑制剂 和抗炎药物的用途。鉴于PLA2抑制剂的研究可W为研究P1A在细胞及分子水平复杂的作 用过程提供有力的手段，同时也为临床抗炎及多种自身免疫疾病的治疗开辟广阔的治疗前 景，本发明对于充分开发利用真菌杏鲍茹的发酵液中的内醋类化合物具有十分重要的现实 意义。 阳01引试验证明，在体外，侧耳内醋的ICg。值与吗I噪PLA2抑制剂的1CW相近，体内实验 表明侧耳内醋20mg?kg1和40mg?kg1两剂量组可通过对PLA2活性的显著抑制作用，从 而减少炎症介质PGE的含量，提示侧耳内醋有类似于PLAz抑制剂的作用；此外，40mg?kg1 和80mg?kg巧剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，说明侧耳内醋可用于 P1A抑制剂和抗炎药物的开发。 四、【具体实施方式】：
[0019] 结合【具体实施方式】对本发明作进一步说明，但本发明的内容并不仅仅限于所列举 的实施方式。 阳〇2〇] 实施例1
[0021] 本发明自真菌杏鲍茹的发酵液中提取、分离、纯化得到的运种内醋类新化合物，命 名为侧耳内醋。 阳0巧 1.提取分离
[0023] 本发明将真菌杏鲍茹的发酵液依次用石油酸、乙酸乙醋萃取，得石油酸部位和乙 酸乙醋部位。乙酸乙脂部位进行硅胶柱层析，流动相依次为氯仿-甲醇（10 :1、4 :1、1 :1)、 甲醇。其中氯仿-甲醇（2:1)部分经反复反相柱分离及凝胶柱纯化得到单体化合物侧耳内 醋。
[0024] 2.结构鉴定 阳0巧]无色油状体，[a]〇25. 9 =巧8. 5。（C0. 02,MeOH)，UV(MeOH)Amax:213皿，IR(邸r)Vmax3389,1760,1630cm1，ESI-MS显示分子离子峰为221 [M+Na]+。结合氨谱和碳 谱推测，分子式。化A，分子量198。 阳0%] 表1新的薄荷烧型单祗的核磁共振数据（S，ppm, 0 =TMS，CDCI3)
[0027]
[0028] 本发明的新化合物作为药物活性成分可W制成常规的药用剂型，如，片剂、丸剂、 膏剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂W及注射液粉针剂或水针液。
[0029] 3.体外抑制PIA作用
[0030] WSIBLINKS类似物为底物，WnajanajaPlA(眼镜蛇蛇毒中提取的P1A)作为水 解酶，吗I噪P1A抑制剂5-甲氧基-1-苄基-1H-吗I噪-3-乙酷胺为对照，通过酶标仪比色 系统测定水解的最大反应速率，进行抑制活性的定性定量比较，结果见表2。
[0031] 表2对化ja化jaPIA抑制作用和SCORE的预测值
[0032]
[0034] 从表2的结果表明，侧耳内醋的ICs。值与吗I噪PLA2抑制剂的1C5。相化实验测定 值与SCORE预测值呈对应关系，提示侧耳内醋有类似于PLA2抑制剂的作用。 阳0对 4.抗炎作用
[0036] (1)对小鼠耳廓二甲苯炎症的影响
[0037]对雄性小鼠60只随机分5组，①对照组②侧耳内醋I(20mg?kg1)、 II(40mg'kg1)、III(80mg'kg1)立个剂量组③吗I噪美辛组（8mg-kg1)，各组灌胃给药或给 予等量的生理盐水，每天1次，连续3d，末次给药后30min，每鼠右耳廓内外侧滴涂20y1二 甲苯致炎，左耳作为对照，致炎后30min脱颈椎处死小鼠，用直径7mm打孔器分别于左、右耳 相同部位打下耳片，称重，W左、右耳片重量差值表示肿胀度，结果见表3。 阳0測表3侧耳内醋对二甲苯所致小鼠耳廓炎症耳肿胀度的影响狂±器，I尸巧
[0039]
[0040]与模型组比较*P<0. 05, **P<0. 01 阳041] 实验结果表明，侧耳内醋40mg?kg嘴80mg ? kg 1两剂量组对二甲苯所致小鼠耳 肿胀有明显的抑制作用，提示侧耳内醋有一定抗炎作用。
[0042] (2)对角叉菜胶制备大鼠气囊滑膜炎炎症模型的影响 柳创取健康SD雄性大白鼠，随机分为6组：①正常组；②模型组；③侧耳内醋I(lOmg.kg1)、II(20mg.kg1)、111 (40mg.kg1)S个剂量；④地塞米松组（0. 15mg.kg1)。 各组动物乙酸轻度麻醉，背部正中s.c无菌空气20ml，3d补充注射空气10ml维持气囊肿 胀，6d气囊内注射角叉菜胶50皿?kg1致炎，正常对照组同法注射生理盐水等容积。各组 动物于第3d开始灌胃给药①②组给予等容积生理盐水，6d致炎前30min再给药给药一次。 致炎化后动物i.P戊己比妥钢25mg?kg1麻醉，气囊内注射无菌无巧儀Hank'S平衡盐液 (皿SS)4ml灌洗，收集灌洗液，进行灌洗液中白细胞数和蛋白质含量的测定；采用微量酸滴 定法测定PLA2活性；采用放免法测定PGE的含量，结果见表4。 W44] 表4侧耳内醋对大鼠气囊滑膜炎灌洗液中白细胞数、 W45]蛋白质和PGE含量及P1A活性的影响（玄±S，巧=8)
[0046]
[0047]与模型组比较*P<0. 05, **P<0. 01
[0048] 在小鼠耳廓炎症实验的基础上，又进行了大鼠气囊滑膜炎症试验，结果与上次实 验基本一致，侧耳内醋可减少灌流液中白细胞的渗出和蛋白质的含量；与此同时，侧耳内醋 20mg?kg1和40mg?kg1两剂量组可通过对PLA2活性的显著抑制作用，从而减少炎症介质 PGE的含量，此实验结果与其体外抑制PLA2作用一致，说明侧耳内醋可用于PLA2抑制剂和 抗眼药物的开发。 W例实施例2
[0050] 真菌杏鲍茹的发酵液40Kg，依次用石油酸、乙酸乙醋萃取。乙酸乙醋萃取物经柱层 析分离后分别得到侧耳内醋4克。 阳0川实施例3
[0052] 真菌杏鲍茹的发酵液lOKg，经大孔树脂值101、AB-5、HP-20等）吸附，用水，30% 乙醇冲洗后用70%乙醇洗脱，70%乙醇洗脱液减压回收溶剂得总浸膏。总浸膏再经柱层析 (硅胶柱层析：氯仿-甲醇系统，RP-C18柱层析：水-甲醇系统）分离后，分别得到侧耳内 醋0.8克。
[0053] 实施例4含本发明新的薄荷烧型单祗单体的片剂 阳054] 取实施例1制得的新的薄荷烧型单祗化合物lOOmg与淀粉50mg，糊精50mg混合， 用适量30%乙醇做湿润剂，制成软材，常规方法制粒，加入适量硬脂酸儀混合，制成片剂。
[0055] 实施例5含本发明新的薄荷烧型单祗的胶囊剂
[0056] 取新的薄荷烧型单祗化合物50mg与淀粉70mg，糊精lOmg，糖粉lOmg混合，用适量 30%乙醇做湿润剂，制成软材，常规方法制粒，装入硬胶囊中。
[0057] 实施65含本发明新的薄荷烧型单祗的缓释胶囊剂
[0058] 取新的薄荷烧型单祗化合物80mg与径丙基甲基纤维素K15M120mg，乙基纤维素 45cps40mg，乳糖40mg混合，用10%乙締化咯烧酬k30乙醇溶液适量，制成软材，常规方法 制粒，装入硬胶囊中制成缓释胶囊。
【主权项】
1. 一种侧耳内酯在制备治疗炎症药物中的应用。2. 根据权利要求1所述的所述的侧耳内酯在制备治疗炎症药物中的应用，其通过作为 PLA2的抑制剂实现的。
【专利摘要】本发明涉及天然药物领域，具体涉及薄荷烷型单萜抑制磷脂酶A2（PLA2）活性和在制备抗炎药物中的用途。本发明提供了一种侧耳内酯在制备治疗炎症药物中的应用。试验证明，在体外，侧耳内酯的IC50值与吲哚PLA2抑制剂的IC50相近，体内实验表明侧耳内酯20mg?kg-1和40mg?kg-1两剂量组可通过对PLA2活性的显著抑制作用，从而减少炎症介质PGE的含量，提示侧耳内酯有类似于PLA2抑制剂的作用；此外，40mg?kg-1和80mg?kg-1两剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用，说明侧耳内酯可用于PLA2抑制剂和抗炎药物的开发。
【IPC分类】A61K31/365, A61P37/02, A61P29/00
【公开号】CN105213371
【申请号】CN201510671985
【发明人】罗瑞雪
【申请人】苏州普罗达生物科技有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年10月18日