一种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及动物模型技术领域，具体是一种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法。
【背景技术】
[0002]动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。在现代医学研究中，建立脑缺血动物模型，已成为研究脑血管疾病损伤机理及药物开发的关键。但是现有的脑缺血和再灌注动物模型制作复杂、成功率低。
【发明内容】
[0003]本发明的目的在于提供一种操作也极为简便、成功率高的脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0004]为实现上述目的，本发明提供如下技术方案:
[0005]—种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，包括以下步骤:
[0006]1)麻醉:实验动物在手术前禁食12小时，自由饮水，用戊巴比妥钠将实验动物进行颈部麻醉，每千克实验动物服用戊巴比妥钠45_50mg ;
[0007]2)脑缺血:切开实验动物的颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，切断双侧颈总动脉或者在双侧颈总动脉中植入球囊导管，并在植入球囊导管中充气至球囊导管堵塞大脑中双侧颈总动脉的起始部，使实验动物的大脑中动脉供血区缺血持续2.5_3h，制得脑缺血损伤动物；
[0008]3)脑缺血后再灌注:切断双侧颈总动脉2h后用软管连接双侧颈总动脉并缝合，并向软管内注入血液；或者将球囊导管中的气体放出，将其颈部麻醉后，抽出球囊导管，使缺血区再次灌注血液；
[0009]4)评分:根据需要在不同时间内进行神经功能缺损评分，并用录像机记录。
[0010]作为本发明进一步的方案:实验动物采用老鼠或兔子。
[0011]作为本发明进一步的方案:步骤3)中，血液为手术前20-25天从该实验动物上抽取的血液。
[0012]作为本发明进一步的方案:步骤3)中，注入的血液的流速为50-60mm/s。
[0013]作为本发明进一步的方案:实验动物植入球囊导管的过程是:钝性分离实验体颈总动脉，结扎颈总动脉，在结扎点下方出剪开2-3_的小口，球囊导管插入到小口内。
[0014]作为本发明进一步的方案:神经功能缺损评分的标准包括自主活动的程度、左前肢偏瘫、提尾时左前肢伸不直、抗侧推能力、向左倾斜度、向左环行度与对触须的反应。
[0015]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
[0016]本发明中采用球囊导管置入大脑动脉，对其造成的损伤小，再灌注的操作也极为简便，可以控制脑缺血时间，为脑缺血和再灌注提供合理模型。而采用切断双侧颈总动脉后再用软管连接缝合，能够保证脑缺血情况的快速进行，且手术极为简单，成功率高，经试验:术后10小时内试验动物不会死亡。
【具体实施方式】
[0017]下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0018]实施例1
[0019]本发明实施例中，一种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，包括以下步骤:
[0020]1)麻醉:老鼠在手术前禁食12小时，自由饮水，用戊巴比妥钠将老鼠进行颈部麻醉，每千克老鼠服用戊巴比妥钠45mg ;试验中根据需要给予补充适量的戊巴比妥钠。
[0021]2)脑缺血:将老鼠固定在脑立体定位仪上，切开老鼠的颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，切断双侧颈总动脉使老鼠的大脑中动脉供血区缺血持续2.5h，制得脑缺血损伤动物。
[0022]3)脑缺血后再灌注:切断双侧颈总动脉2h后用软管连接双侧颈总动脉并缝合，并向软管内注入血液；血液为手术前20天从该老鼠上抽取的血液。注入的血液的流速为55mm/s。
[0023]4)评分:根据需要在不同时间内进行神经功能缺损评分，并用录像机记录。神经功能缺损评分的标准包括自主活动的程度、左前肢偏瘫、提尾时左前肢伸不直、抗侧推能力、向左倾斜度、向左环行度与对触须的反应。
[0024]实施例2
[0025]本发明实施例中，一种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，包括以下步骤:
[0026]1)麻醉:兔子在手术前禁食12小时，自由饮水，用戊巴比妥钠将兔子进行颈部麻醉，每千克兔子服用戊巴比妥钠50mg ;试验中根据需要给予补充适量的戊巴比妥钠。
[0027]2)脑缺血:将兔子固定在脑立体定位仪上，切开兔子的颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，在双侧颈总动脉中植入球囊导管。兔子植入球囊导管的过程是:钝性分离实验体颈总动脉，结扎颈总动脉，在结扎点下方出剪开2-3mm的小口，球囊导管插入到小口内。在双侧颈总动脉中植入球囊导管后，并在植入球囊导管中充气至球囊导管堵塞大脑中双侧颈总动脉的起始部，使兔子的大脑中动脉供血区缺血持续3h，制得脑缺血损伤动物。
[0028]3)脑缺血后再灌注:将球囊导管中的气体放出，将其颈部麻醉后，抽出球囊导管，使缺血区再次灌注血液。
[0029]4)评分:根据需要在不同时间内进行神经功能缺损评分，并用录像机记录。神经功能缺损评分的标准包括自主活动的程度、左前肢偏瘫、提尾时左前肢伸不直、抗侧推能力、向左倾斜度、向左环行度与对触须的反应。
[0030]对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0031]此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
【主权项】
1.一种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，其特征在于，包括以下步骤: 1)麻醉:实验动物在手术前禁食12小时，自由饮水，用戊巴比妥钠将实验动物进行颈部麻醉，每千克实验动物服用戊巴比妥钠45-50mg ; 2)脑缺血:切开实验动物的颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，切断双侧颈总动脉或者在双侧颈总动脉中植入球囊导管，并在植入球囊导管中充气至球囊导管堵塞大脑中双侧颈总动脉的起始部，使实验动物的大脑中动脉供血区缺血持续2.5-3h，制得脑缺血损伤动物； 3)脑缺血后再灌注:切断双侧颈总动脉2h后用软管连接双侧颈总动脉并缝合，并向软管内注入血液；或者将球囊导管中的气体放出，将其颈部麻醉后，抽出球囊导管，使缺血区再次灌注血液； 4)评分:根据需要在不同时间内进行神经功能缺损评分，并用录像机记录。2.根据权利要求1所述的脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，其特征在于，实验动物采用老鼠或兔子。3.根据权利要求1所述的脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，其特征在于，步骤3)中，血液为手术前20-25天从该实验动物上抽取的血液。4.根据权利要求1所述的脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，其特征在于，步骤3)中，注入的血液的流速为50_60mm/s。5.根据权利要求1所述的脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，其特征在于，实验动物植入球囊导管的过程是:钝性分离实验体颈总动脉，结扎颈总动脉，在结扎点下方出剪开2-3mm的小口，球囊导管插入到小口内。6.根据权利要求1所述的脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，其特征在于，神经功能缺损评分的标准包括自主活动的程度、左前肢偏瘫、提尾时左前肢伸不直、抗侧推能力、向左倾斜度、向左环行度与对触须的反应。
【专利摘要】本发明公开了一种脑缺血再灌注损伤动物模型的制作方法，用戊巴比妥钠将实验动物进行颈部麻醉，切开实验动物的颈部两侧皮肤，分离双侧颈总动脉和迷走神经，切断双侧颈总动脉或者在双侧颈总动脉中植入球囊导管，并在植入球囊导管中充气至球囊导管堵塞大脑中双侧颈总动脉的起始部，缺血持续2.5-3h，制得脑缺血损伤动物；切断双侧颈总动脉2h后用软管连接双侧颈总动脉并缝合，并向软管内注入血液；或者将球囊导管中的气体放出，使缺血区再次灌注血液；根据需要在不同时间内进行神经功能缺损评分，并用录像机记录。本发明操作简便，成功率高，为脑缺血和再灌注提供合理模型。
【IPC分类】A61D7/00, A61D1/00
【公开号】CN105326578
【申请号】CN201510863185
【发明人】侯软玲, 李颖虹, 王国红, 魏林郁, 郭直岳, 赵红岗, 李东亮
【申请人】新乡医学院
【公开日】2016年2月17日
【申请日】2015年11月25日