Vulgarisin A在制备治疗抗结核菌药物中的应用
【技术领域】
[0001 ]本发明设及化合物Vulgarisin A的新用途，尤其设及Vulgarisin A在制备治疗抗 结核菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 近年来全球结核病的发病呈增高趋势，据世界卫生组织(WHO)估计，目前全球受结 核分枝杆菌(Mycobacteri皿tuberculosis，MTB)感染的人口占世界人口的S分之一，其中 5~10%的感染者成为结核病患者。我国每年出现活动性肺结核病人130万例，其中传染性 肺结核约60万例，其中传染性肺结核约60万例，是全球结核病高负担国家之一。
[0003] 自抗结核药物相继问世，使结核病的治疗起到划时代的变化。然而由于结核病患 者的治疗管理尚不十分规范，不规则化疗，滥用抗结核药物，使结核病耐药情况日益严重， 且耐药性的变化更趋向于多种药物同时耐药，运给结核病的防治工作造成极大困难。因此 寻找新的抗结核药物，尤其是抗多药耐药性的抗结核药物对保护人民身体健康，具有重要 意义。
[0004] 本发明设及的化合物Vulgarisin A是一个2014年发表巧uayong Lou，et曰1., Vulgarisin A,a New Diterpenoid with a Rare 5/6/4/5 Ring Skeleton from the Qiinese Medicinal Plant Prunella vulgaris.Org.Lett.2014,16,2696-2699.)的新化 合物，该化合物拥有全新的骨架类型（Huayong Lou, et al.,Vulgarisin A,a New Diterpenoid with a Rare 5/6/4/5 Ring Skeleton from the Chinese Medicinal Plant Prunel la vulgaris .Or g. Lett.2014,16,2696-2699.)，对于本发明设及的 Vulgarisin A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类 型，而且其对于抗结核菌的活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能， 具备突出的实质性特点，同时用于抗结核菌显然具有显著的进步。
【发明内容】
[000引本发明的目的在于根据现有Vulgarisin A研究中未发现其具有抗抗结核菌活性 的报道的现状，提供了化Igarisin A在制备抗抗结核菌药物中的应用。
[0006] 所述化合物化Igarisin A结构如式（I)所示：
[0008]所述化Igarisin A在制备抗结核菌药物中的应用，结核菌为耐多药结合分枝杆菌 (MDRMTB)。
[0009] -种抗结核菌药物，由Vulgarisin A为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为 取5克化合物化IgariSin A，加入糊精195克，混匀，常规压片制成1000片。
[0010] -种抗结核菌药物，由Vulgarisin A为活性成分添加辅料制备而成，制备方法为 取5克化合物化Igarisin A，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0011] 发明人先用卡介苗做应试菌株，采用纸片扩散法对化Igarisin A的抗结核菌活性 进行初步试验，根据初步试验的结果，本发明再用固体培养基稀释法测定了该化合物对卡 介苗、结核分枝杆菌标准株H37RV株和耐多药结核分枝杆菌(MDR MTB)S种结核菌的最小抑 菌浓度，实验结果证实Vulgarisin A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为 治疗结核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。
[0012] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0013] 1.本发明提供了一种可用于抗结核病治疗的化Igarisin A，从而扩大了抗结核菌 药物的种类；
[0014] 2.针对目前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株及人体免疫缺陷病毒双重感 染的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，本发明发现Vulgarisin A具有抗 结核菌和耐药性结核菌活性的特点，可用于抗结核药物的制备，具有非常广阔的应用前景；
[0015] 3.本发明设及的化Igarisin A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开， 由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由 其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显 然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0016] 本发明所设及化合物Vulgarisin A的制备方法参见文献巧uayong Lou,et al., Vulgarisin A,a New Diterpenoid with a Rare 5/6/4/5 Ring Skeleton from the Qiinese Medicinal Plant Prunella vulgaris.0;rg丄ett.2014,16,2696-2699.)
[0017] W下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加 W限定。
[0018]实施例1:本发明所设及化合物化Igarisin A片剂的制备：
[0019] 取5克化合物化Igarisin A，加入糊精195克，混匀，常规压片机制成1000片。
[0020]实施例2:本发明所设及化合物化Igarisin A胶囊剂的制备：
[0021 ] 取5克化合物化Igarisin A，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成1000粒。
[0022] 实验例1固体培养基稀释法测定化Igarisin A抗卡介苗(BCG)绝对浓度
[0023] 从斜面上刮取卡介苗培养物，加入到3ml Middlebrook7朋肉汤培养基中，加入少 量玻璃珠，旋紧试管盖，于縱满振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管 (MacF'ar IandNo. 1)比浊，即配成Img/ml的卡介苗(BCG)菌悬液。
[0024] 将化Igarisin A用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐溫-80无菌超纯水稀释原 液至所需浓度，将稀释好的Vulgarisin A按所需剂量加入到4ml MiddlebrookTHll琼脂培 养基（该培养基已经12 1°C高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55°C)，混匀，制成含 化1邑31'13；[]14，浓度分别为6.0雌/1111，4.0雌/1111，3.0雌/1111，2.0雌/1111，1.加旨/1111，1.0雌/1111， 0.75ug/ml，0.加 g/ml等浓度的斜面培养基。
[002引将浓度为Img/ml的卡介苗（BCG)菌悬液用接种环薩取数环，分别接种于含 Vulgarisin A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37°C培养4~8周，观察实 验结果，结果如表1所示。
[0026] 本实施例中所用Middlebrook7H9肉汤培养基和Middlebrook7Hll琼脂培养基为本 领域技术人员进行结核菌培养时的常用培养基，其配方采用常规配方即可。
[0027] 实验例2固体培养基稀释法测定化Igarisin A抗结核分枝杆菌标准株H37RV株绝 对浓度
[0028] 从斜面上刮取结核分枝杆菌标准株H37RV株培养物，加入到3ml Middlebrook7朋 肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于縱满振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏 比浊管(MacF'arland No. 1)比浊，即配成Img/ml的册7Rv株菌悬液。
[0029] 将化Igarisin A分别用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐溫-80无菌超纯水稀 释原液至所需浓度，将稀释好的化Igarisin A按所需剂量加入到4ml MiddlebrookTHll琼 脂培养基（该培养基已经121°C高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55°C)，混匀，制成含 化1邑31'13；[]14，浓度分别为6.0雌/1111，4.0雌/1111，3.0雌/1111，2.0雌/1111，1.加旨/1111，1.0雌/1111， 0.75ug/ml，0.加 g/ml等浓度的斜面培养基。
[0030] 将浓度为Img/ml的H37RV株菌悬液用接种环薩取数环，分别接种于含Vulgarisin A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37°C培养4~8周，观察实验结果，结果 如表1所示。
[0031] 实验例3固体培养基稀释法测定Vulgarisin A抗结核分支杆菌临床分离耐ISRE MTB株绝对浓度
[0032] 从斜面上刮取结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株(耐异烟阱、链霉素、利福平、 乙胺下醇结核分枝杆菌临床分离柱)培养物，加入到3ml Middlebrook7H9肉汤培养基中，加 入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于縱满振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管 (MacF'arland No. 1)比浊，即配成Img/ml的菌悬液。
[0033] 将化Igarisin A分别用DMSO配成高浓度的原液，用含5%的吐溫-80无菌超纯水稀 释原液至所需浓度，将稀释好的化Igarisin A按所需剂量加入到4ml MiddlebrookTHll琼 脂培养基（该培养基已经121°C高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55°C)，混匀，制成含 化1邑31'13；[]14，浓度分别为6.0雌/1111，4.0雌/1111，3.0雌/1111，2.0雌/1111，1.加旨/1111，1.0雌/1111， 0.75ug/ml，0.加 g/ml等浓度的斜面培养基。
[0034] 将浓度为Img/ml的结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株菌悬液用接种环薩取数 环，分别接种于含化Igarisin A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37°C培 养4~8周，观察实验结果，结果如表1所示。
[0035] 表1固体培养基稀释法测定化Igarisin A抗结核菌绝对浓度结果
[0037]结论:Vulgarisin A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为治疗结 核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。
【主权项】
1. Vulgarisin A在抗结核菌药物中的应用，所述化合物Vulgarisin A结构如式（I)所 示： 式(I)。2. 如权利要求1所述Vulgarisin A在抗结核菌药物中的应用，其特征在于结核菌为耐 多药结合分枝杆菌(MDRMTB)。3. -种抗结核菌药物，其特征在于由权利要求1所述Vulgarisin A为活性成分添加辅 料制备而成，制备方法为取5克化合物Vulgarisin A,加入糊精195克，混匀，常规压片制成 1000 片。4. 一种抗结核菌药物，其特征在于由权利要求1所述Vulgar isin A为活性成分添加辅 料制备而成，制备方法为取5克化合物Vulgar is in A，加入淀粉195克，混匀，装胶囊制成 1000粒。
【专利摘要】本发明公开了Vulgarisin？A在制备抗结核菌药物中的应用。本发明针对当前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，发现Vulgarisin？A具有显著抑制结核菌的活性，具有很好的应用前景。本发明涉及的Vulgarisin？A在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61K31/22, A61P31/06
【公开号】CN105496998
【申请号】CN201510968797
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月20日