美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种可延长美沙拉嗪在结肠内滞留时间的温敏凝胶型灌肠液及其制备方法，该制剂由主药美沙拉嗪、温敏型凝胶基质泊洛沙姆、生物粘附材料、稳定剂及适量水组成。本发明提供的美沙拉嗪结肠用温敏凝胶灌肠液在室温下为自由流动的液体，以液体形式推注到结肠，具有药物分布均匀、铺展性好的优点；随之在体温条件下迅速发生相转变，形成非化学交联的半固体凝胶，加上生物粘附材料的黏膜粘附作用，从而延长药物在结肠内的滞留时间。与常规美沙拉嗪灌肠液相比，该制剂能有效减少药液泄漏而改善疗效，且具有制备简单，刺激性小的优点。
【专利说明】
美沙拉瞎溫敏凝胶灌肠液及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明属药物制剂领域，设及一种美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 溃瘍性结肠炎化Icerative colitis, UC)是一种病因尚不十分明确的慢性非特 异性肠道炎症，病变部位主要在结直肠的黏膜及黏膜下层，可形成肉眼可见的糜烂和溃瘍。 其病变范围多自远端结肠开始，可逆性向近端发展，甚至累及全结肠，偶尔波及末端回肠， 呈连续性分布。该病在欧美地区发病率高，亚非国家相对较低，近年来国内报告的病例数逐 渐增加，我国UC的发病率已呈现上升趋势。由于该病的病因和发病机制尚未阐明，治疗缺乏 特异性，导致病情迁延反复，甚至癌变，严重影响患者的身屯、健康，被世界卫生组织列为疑 难病。
[0003] 药物治疗是轻中度UC的主要治疗方式，目前临床上用于UC的治疗药物主要有氨基 水杨酸类、类固醇激素、免疫抑制剂、抗生素等。美沙拉嗦(mesalamine)又称为5-氨基水杨 酸巧-aminosalic^ic acid, 5-ASA)由于疗效确切，是目前临床上治疗轻中度UC的一线药 物。它是通过抑制前列腺素 E和白Ξ締的形成而发挥抗炎作用，其作用是局部的，即与肠黏 膜接触及络合时发挥作用，其治疗效果与炎性肠黏膜接触的药物浓度和持续时间有关，与 血药浓度关系不大。
[0004] 美沙拉嗦化学结构式 美沙拉嗦在临床治疗UC中主要采用口服和直肠给药两种方式。口服制剂多为能够在肠 道定位释放的缓释制剂，主要用于近端结肠炎的治疗。对于末端和左侧结肠的治疗首选的 是经直肠给药的局部制剂。有资料显示对于轻至中度的直肠炎、乙状结肠炎，局部应用美沙 拉嗦的疗效优于口服制剂。在中国直肠乙状结肠炎或直肠炎占70%左右，UC的主要病变部位 在直肠、直一乙状结肠、左侧结肠，，通过直肠给药成为美沙拉嗦一种非常重要的给药方式。
[0005] 目前临床上使用的经直肠给药的剂型有栓剂和灌肠液。栓剂进入体内的深度和与 病灶的接触面积均有限，只能作用于直肠部位，通常仅用于直肠型溃瘍性结肠炎的治疗。市 售的美沙拉嗦灌肠液主要由卡波姆组成，是一种能够自由流动的液体，可W到达乙状结肠， 但几乎没有生物粘附性，易受肠蠕动的影响出现泄漏，在病变部位停留的时间有限。因此， 开发药物分布均匀、生物粘附性强的美沙拉嗦经直肠给药制剂，用于治疗末端和左侧结肠 炎具有良好的临床应用价值。
[0006] 原位凝胶为上述问题的解决提供了良好的解决方案。原位凝胶（in situ gel)是 一类W溶液状态给药后，响应环境的改变，在用药部位发生相转变，形成非化学交联的半固 体凝胶制剂。它融合了溶液剂与凝胶剂的优点，还兼具制备工艺简单，使用方便，黏膜组织 亲和力强，可作为药物储库延长在给药部位的滞留时间等优点。根据形成机制不同，原位凝 胶可分为溫度敏感型、pH敏感型、离子敏感型等。由于结肠部位组织液少，肠道的缓冲能力 有限，将灌肠液制成抑敏感型或离子敏感型的凝胶并不适宜，而将灌肠液制成溫度敏感型 则是一个不错的选择。
[0007] Bostan等将壳聚糖与聚N-异丙基丙締酷胺交联，W交联化产物为凝胶材料制备了 一种美沙拉嗦溫度和pH双重敏感型凝胶（Bostan MS，et al. Int J Biol Macromol， 2013，52:177-83.)，该项研究尚未设及药效学及刺激性评价等内容，从制备工艺看，交联化 反应过程复杂，引入的有机溶剂在一定程度上影响了制剂的安全性。Ramadass等采用胶原 为凝胶基质制备美沙拉嗦直肠给药原位凝胶，该凝胶亦兼具pH和溫度敏感性(Ramadass SK，et al. Eur J Pharm Sci, 2013，48(1-2) :104-10.),由于载体材料胶原蛋白稳定性 较差的原因，该凝胶体系必须保存在l〇°CW下，运为制剂的储存带来不便。上述两种双敏凝 胶体系的抑均设计在4~5,发生相转变的pH在7~8,由于肠道缓冲能力十分有限，再加上一次 灌肠的体积较大，实际用药时制剂抑很难在短时间内达到相转变所需pH，因此抑敏感性可 能难W体现。
【发明内容】
[0008] 针对现有美沙拉嗦直肠给药制剂的不足，本发明目的在于提供一种新型的美沙拉 嗦溫敏凝胶灌肠液。本发明的另一目的是提供一种所述制剂的制备方法。
[0009] 为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下： 本发明提供的美沙拉嗦结肠用溫敏凝胶，成分包括:主药、溫敏型凝胶基质、生物粘附 材料、稳定剂及适量水组成，其中主药为美沙拉嗦，在处方中的质量百分比为6.7%。
[0010] 所述的溫敏型凝胶基质为泊洛沙姆407、泊洛沙姆188及其混合物。泊洛沙姆 (poloxamer)是一种非离子型表面活性剂，为聚氧乙締(PE0)和聚氧丙締(PP0)组成的ΑΒΑ型 嵌段共聚物，是目前研究较为深入的一类溫敏型凝胶高分子材料，其中W泊洛沙姆407和泊 洛沙姆188最为常用。泊洛沙姆相对分子质量大，化学性质稳定，且在体内不会发生代谢转 化，生物相容性好。通过调节处方中泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的比例，可W将体系胶凝化 溫度控制在体溫附近。按质量百分比计，泊洛沙姆407的含量为16%~19%;泊洛沙姆188的含 量为3%~1^)。
[0011] 所述的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液，是将美沙拉嗦混悬在溫敏凝胶溶液中，而凝胶 基质泊洛沙姆本身具有的助悬特性，有利于体系的稳定。
[0012] 所述的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液中，美沙拉嗦化学结构式如下：
从结构上看一OH和一N出处于对位，不稳定，易氧化降解。经过试验发现，美沙拉嗦稳定 性与抑有关，在抑4~5的溶液中稳定性较好。因此，将凝胶体系的抑控制在4~5之间。
[0013] 所述生物粘附材料为壳聚糖、透明质酸钢、径丙甲基纤维素、黄原胶、魔芋胶、白巧 胶或聚卡波非中的一种或其组合。
[0014] 所述的生物粘附材料按质量百分比计，其在所述美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液中含量 (质量百分比）为0.1%~0.4%，优选为0.2%。优选地，所述生物粘附材料由聚卡波非和透明质 酸钢组成，聚卡波非和透明质酸钢的质量比为1:3~3:1，最优选为3:1。
[0015] 聚卡波非(polycarbo地i 1，PCP)为交联聚丙締酸类聚合物，能与黏膜糖蛋白相互 作用，形成物理性连接，产生较强的粘液凝胶网状结构，使黏膜粘附系统保持较长的粘附时 间，且不会对黏膜产生刺激，具有良好的生物粘附性和生物相容性。此外PCP为弱酸性物质， 具有良好的缓冲能力，PCP的加入可W为凝胶体系提供弱酸性环境。透明质酸钢是一种酸性 粘多糖，它W独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，能够调节 血管壁的通透性，还具有促进创伤愈合的作用等。也有少量文献报道透明质酸钢具有一定 的生物粘附性。本发明W聚卡波菲和透明质酸钢作为生物粘附剂，能够发挥协同作用增加 制剂的粘附力，同时还兼有促进创面愈合的作用。
[0016] 所述的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液，其特征在于所述的稳定剂主要由水溶性抗氧 剂、金属络合剂和防腐剂组成，其中水溶性抗氧剂优选为焦亚硫酸盐，其在处方中的质量百 分比为0.8%~1.2%;金属络合剂优选依地酸二钢，在处方中的质量百分比为0.1%~0.2%。
[0017] 所述的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液中，溶剂为水。凝胶体系pH 4~5的弱酸性环境可 由聚卡波非和焦亚硫酸钟提供，因此直接选用水作为溶剂，简化了制备工艺。
[0018] 所述的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液在25°C±0.5°C时的动力黏度为小于500mPa · S， 可满足制剂在室溫条件下为自由流动的液体，具有良好的可推注性，药物易于肠道内铺展； 胶凝溫度控制在30~38°C，可保证制剂在体内迅速胶凝，减少渗漏;粘附力大于70mNcnf2,可 进一步延长制剂在病变部位的滞留时间。
[0019] 本发明的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液W溫敏凝胶作为美沙拉嗦经直肠局部给药制 剂的载体，该凝胶在室溫下为自由流动的液体，W液体形式推注到结肠，具有药物分布均 匀、铺展性好的优点;在体溫条件下迅速发生相转变，形成非化学交联的半固体凝胶，再加 上生物粘附材料的黏膜粘附作用，可延长药物在结肠内的滞留时间。处方中的泊洛沙姆既 作为溫敏凝胶材料，又可充当助悬剂，起到维持体系稳定的作用。W聚卡波菲和具有一定促 进伤口愈合作用的透明质酸钢配伍作为生物粘附性材料，可W进一步提高制剂的生物粘附 性。初步药效学证实本发明优于普通的美沙拉嗦灌肠液。此外，本发明所述的美沙拉嗦溫敏 凝胶灌肠液与已有的相关研究比较，还具有w下优势： (1)与已报道的美沙拉嗦溫敏液体栓相比，本发明具有载药量大，胶凝溫度适宜，生物 粘附性和稳定性良好的优点。①本发明所述的溫敏凝胶美沙拉嗦灌肠液主药W混悬的形式 分散在凝胶体系中，相对于将药物完全溶解，所需凝胶基质量更少，能保证制剂W适宜的体 积进行灌肠给药，并在局部维持较高的药物浓度;②本发明所述的溫敏凝胶美沙拉嗦灌肠 液的胶凝溫度在30~38°C，稍低于体溫，能保证灌肠液在体溫下迅速胶凝;③本发明制剂中 除添加了较常用的生物粘附材料聚卡波非外，还添加了透明质酸钢，透明质酸钢是一种可 促进创面愈合的粘附材料，其与聚卡波菲配伍，，在保证制剂常溫下具有良好流动性同时， 进一步提高了制剂的粘附性能，本发明所述的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液体外粘附力可大于 70 mN · cnf2,可持续释药化;④稳定性良好 (3)相对于8〇31日11等和1?日1]1日(1日33等制备的溫度/9昭^重敏感凝胶，本发明制备工艺简 单，未使用任何有机溶剂。同时，还避免了由于肠道缓冲能力有限导致的pH敏感性难W实 现，影响相转变过程的问题。
[0020] (4)本发明所选择的溫敏凝胶材料泊洛沙姆和生物粘附材料聚卡波非均具有良好 的生物相容性，对黏膜几乎无刺激性，被美国FDA收录为药用辅料安全的一类，辅料的安全 性和可获得性也为本项目未来的推广应用提供了重要保障。
【附图说明】
[0021 ]图1:美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的制备工艺流程图。
[0022] 图2:美沙拉嗦结肠用溫敏凝胶的体外释放曲线。
[0023] 图3:试验期间各组小鼠体重变化曲线。
[0024] 图4:试验期间各组小鼠大便性状评分。
[0025] 图5:试验期间各组小鼠粪便隐血评分。 图6:给药7天后各组大鼠结肠病理学观察。
[0026] A:生理盐水组;B:空白凝胶组;C:实施例1。
【具体实施方式】
[0027] 下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，W使本领域的技术人员可W更好地 理解本发明并能予W实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
[0028] 本发明W下实施例中美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的成分(余量为水)及其在美沙拉 嗦溫敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比如下表：
如图1所示，上述实施例的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的带备方法，步骤如下： (1) 将生物粘附材料置于水中，揽拌至分散均匀，制得第一种混合物； (2) 在揽拌下缓慢向第一种混合物中加入溫敏型凝胶基质，使其充分润湿，于4 °C下放 置24小时，至溫敏型凝胶基质完全溶胀为无团块的澄明溶液，揽拌使之均匀，制得第二种混 合物； (3) 取稳定剂在揽拌下缓慢加入到第二种混合物中，揽拌至完全溶解，最后加入主药美 沙拉嗦并补加水至足量，避光继续揽拌直至药物均匀混悬即得。
[0029] 对上述实施例制得的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的性质进行测定，结果如下： 一、评价指标 胶凝溫度(Tgel)的测定:采用倒置试管法测定Tgel，取凝胶溶液2mL于试管中，置于恒溫 水浴中缓慢升溫，升溫速率约为0.2°C ·mirfi，每升高0.2°C，迅速倒置试管，观察溶液的流动 情况，定义试管内溶液不再流动时的溫度为胶凝溫度，每个样品测定3次，取平均值。
[0030] 成胶前黏度的测定:使用旋转黏度计测定样品成胶前黏度，每个样品测定3次，取 平均值。
[0031 ] 沉降体积比的测定：用具塞量筒取含药凝胶溶液25mL，密塞，用力振摇1分钟，记下 混悬物的开始高化，静置化，记下混悬物的最终高度H，按下式计算:沉降体积比=Η/?ο。
[0032]粘附力的测定:参考文献粘附力测定方法并稍作改进考察制剂的粘附性能。将直 径6cm的玻璃表面皿装满水，装盖后置于37 °C水浴中，顶部高出水面约0.5cm，平衡一段时 间。将适量样品加入到表面皿顶端，完全化凝后，将预热的玻片（2.5cm X 2.5cm)置于样品 上，并用50g破码压制3min使玻片与凝胶紧密贴合，安装小钩、细线、小杯和滴流装置，打开 滴流控制阀向小杯中匀速滴加水巧mLmirTi)直至玻片开始移动，取下小杯称重。单位面积粘 附力计算公式:f=9.8m/s，m为小杯质量，S为玻片的面积。
[0033] 从上表中，综合分析各实施例的粘附力、凝胶溫度和凝胶前的粘度等数据： 1、对比实施例^3可看出，泊洛沙姆407在所述美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液中所占的质量 百分比最佳为17.6%，泊洛沙姆188在所述美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比最 佳为 8.〇〇/〇。
[0034] 2、对比实施例1、4、5可看出，生物粘附材料的加入能够提高体系的粘附力，随着生 物粘附材料浓度的升高，粘附力逐渐增大，随着生物粘附材料浓度的升高，胶凝溫度有所升 高，但升高幅度不大;成胶前黏度和沉降体积比均随生物粘附材料浓度的升高而增大;生物 粘附材料对凝胶体系抑略有影响，随着生物粘附材料浓度升高，体系抑逐渐降低。当生物粘 附材料的比例大于增加至0.4%时，粘附力最大，但是此时成交前粘度已经超过1000m化.S， 在室溫下不能自由流动。
[0035] 3、对比实施例1、6和7可看出，生物粘附材料为聚卡波非和透明质酸钢的质量比为 1:3~3:1的混合物时，美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的粘附力、凝胶溫度和凝胶前的粘度均较适 宜，而生物粘附材料的最佳为聚卡波非和透明质酸质量比3:1的混合物。
[0036] 4、对比实施例1、8和9,实施例1的生物粘附材料为聚卡波非和透明质酸钢的质量 比为3:1的混合物，实施例1美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的粘附力性能明显优于生物粘附材料 选择透明质酸钢或聚卡波非的实施例9和10。
[0037] 5、对比实施例1和10~13,抗氧剂、金属络合剂和防腐剂的加入对美沙拉嗦溫敏凝 胶灌肠液的粘附力、凝胶溫度、成胶前粘度和沉降体积比几乎没有影响，随着抗氧剂焦亚硫 酸钟用量的增加，pH略有降低。
[003引6.对比实施例1和对比例1、2，生物粘附材料的添加能够增加体系的粘附力，而添 加量过多则会导致体系粘度过高，不适宜美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液的应用。
[0039] 二体外释放 采用动态透析法测定美沙拉嗦从溫敏凝胶中的释放。取实施例1中制备的美沙拉嗦溫 敏凝胶灌肠液2g置于经过预处理的透析袋中，透析袋两端用线系紧W防止泄露，37°C条件 下充分胶凝后将透析袋放入lOOmL 37°C PH7.4憐酸盐缓冲溶液中，于37.0°C±0.5°C恒溫 振荡器中W100 rmin-1 速率振荡，分别于0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0、 12.化取样5血，并立即补加等量37°C PH7.4憐酸盐缓冲溶液。样品经合理稀释后，316nm处 测定吸光度，然后计算累积释放度，每个样品测定3次，取平均值。同法测定市售美沙拉嗦灌 肠液体外释放度，结果见图2。
[0040] 由图2可知，市售美沙拉嗦灌肠液药物在化约释放79.0%，4h内释放完全;而实施例 1的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液中美沙拉嗦巧-ASA)在化的累积释放率为42.8%，4h时释放达 到74.2%，化内释放完全，说明实施例1的5-ASA溫敏凝胶灌肠液具有一定缓释作用。
[OOW S、稳定性测试 1.影响因素试验 取实施例1和10~13的美沙拉嗦溫敏凝胶灌肠液在高溫(60°C)条件放置5d和lOd的稳定 性数据如下。结果显示与初始状态(0时)相比，第5d主药含量都有非常明显的降低。
[0042] 对比实施例1，10~12和实施例13,美沙拉嗦稳定性有了大幅提高，说明在处方中加 入焦亚硫酸钟是非常有必要的。
[0043] 对比实施例1、10和11，随着抗氧剂焦亚硫酸钟在处方中的用量增加，稳定性略有 提高，但当焦亚硫酸钟在处方中的用量达到0.8%后，再继续增加焦亚硫酸钢的用量，对美沙 拉嗦稳定性的贡献不大。
[0044] 对比实施例1和实施例12，说明在处方中加入金属络合剂邸TA有助于提高稳定性。
[0045] 稳定试验 取实施例1的5-ASA溫敏凝胶灌肠液供试品Ξ批，模拟市售包装，置于溫度40°C ±2°C、 相对湿度25%±5%条件下放置6个月，试验期间分别于第0、1、2、3、6个月取样一次，观察并记 录供试品外观性状，测定胶凝溫度、pH、黏度、沉降体积比、5-ASA含量及有关物质。
[0046] 结果见下表：
与初始状态(ο时)相比，混悬液颜色由乳白色逐渐变为淡栋色，pH无明显变化均控制在 4.0~5.0范围内；主药含量略有降低，但降低幅度在3%W内，仍在标示范围内，有关物质符合 要求;胶凝溫度、黏度和沉降体积比无明显变化。因此各项指标性质稳定。
[0047] 四、动物实验 选取健康雌性BALB/c小鼠40只，6~8周龄，体重20~22g，随机分为4组，分别为A:正常组； B:生理盐水组;C:美沙拉嗦灌肠液组(简称:市售组）;D:实施例1的5-ASA溫敏凝胶灌肠液组 (简称:实施例1)。
[0048] 急性溃瘍性结肠炎模型的制备与给药方法 采用自由饮用DSS水溶液的方式制备小鼠急性溃瘍性结肠炎模型，除A组外，其他Ξ组 均造模，自由饮用3.5%DSS水溶液5天，每天更换新鲜的DSS溶液，A组给予正常饮用水5天。模 型建立成功的标志为小鼠出现半稀便、腹泻、粪便隐血阳性和肉眼血便中的任一症状。造模 成功次日灌肠给予相应药物，C、D两组给药剂量为人每日灌肠剂量折算成小鼠等效剂量为 520mg/kg(按5-ASA计），连续7天;B组剂量为相对于D组剂量计算的与含药凝胶等量的生理 盐水，连续7天;A组正常饮食，不做任何处理。
[0049] 疾病活动指数(disease activity index,DAI)评估 自试验开始每天观察小鼠一般活动情况，记录体重变化、大便性状及粪便隐血情况，参 考文献标准并做适当修改进行DAI评分，见下表。
[0050] ~*正常大便:成形大便;松散大便:不粘附于肛口的糊状、半成形大便;稀便:可粘附胃 于肛口的稀水样大便。
[0051] 从图3可看出，给药期间，生理盐水组小鼠体重减轻趋势逐渐减缓，市售组与实施 例1组小鼠于第8天开始体重不再减轻，随着给药天数增加，一些小鼠体重出现回升;给药结 束后，市售组与实施例1组小鼠体重均明显高于生理盐水组(P<〇.05)，但两组之间无显著 性差异(P>〇.05)。通过每天观测各组小鼠大便性状和粪便隐血情况发现，正常组小鼠大便 正常，评分始终维持在零水平;经过造模的Ξ组小鼠在第3天开始逐渐出现大便松散、稀便， 严重者可见肉眼血便，垫料上可见血迹，便隐血呈不同程度阳性;给药期间，随着给药天数 的增加，Ξ组小鼠大便性状与粪便隐血评分均呈下降趋势，实施例1组的评分值显著低于其 他两组。结果见图4~5。
[0052] 结肠外观形态损伤及组织学损伤评估 小鼠末次给药后，禁食2地，麻醉处死，解剖，取出肛口端至盲肠末端的整个肠段，观察 各组结肠外观形态变化，参照下表标准进行评分。_
[0053] ~将小鼠结肠沿肠系膜边缘纵向剖开
，冰生理盐水清洗肠内容物，于有严重炎症或' 溃瘍处取组织标本经4%多聚甲醒固定后，常规脱水及石蜡包埋，5WI1切片后，进行常规皿染 色，光学显微镜下进行结肠组织病理学检查，参照下表标准进行评分。_^
[0054] 采用SPSS19.0软件对结果进行统计学分析，计量资料均用mean±SD表示，方差齐 性检验后，各组间差异的比较采用单因素方差分析(One-way AN0VA)，WP<0.05为差异具 有统计学意义。
[0055] 结果见下表：
a与正常组比较，P<0.05 ;b与生理盐水组比较，p<0.05 ;e与市售组比较，p<0.05 肉眼观察各组小鼠结肠外观形态，正常组小鼠结肠黏膜光滑，肠壁薄，黏膜下血管纹理 清晰，无充血、水肿，无糜烂及溃瘍；生理盐水组小鼠结肠表面粗糖呈颗粒状，肠壁增厚，扭 曲变形，肠黏膜充血、水肿，可见轻至重度糜烂及溃瘍；市售组小鼠结肠肠壁增厚，肠粘膜充 血、水肿，轻度糜烂，少数可见小溃瘍灶;实施例1组小鼠结肠肠壁增厚，肠粘膜轻度充血、水 月中，仅有2只小鼠可见轻度糜烂，但未见溃瘍灶。市售组和实施例1组小鼠的结肠外观形态损 伤评分明显低于生理盐水组(P<〇.05);实施例1组与市售组相比，具有更低的结肠外观形 态损伤评分，且两者差异具有统计学意义(P<〇.05)。小鼠结肠组织学损伤评分结果表明， 市售组和实施例1组的评分显著低于生理盐水组(P<〇.05)，实施例1组评分最低，与市售组 相比，两者差异具有统计学意义(P<〇.05)。
[0化6] 综上所述，与生理盐水组和市售组相比，实施例1组(实施例1的美沙拉嗦溫敏凝胶 灌肠液）的疗效更优。同时给药期间还发现，生理盐水组和市售组小鼠灌肠给药后，几乎都 出现了不同程度的泄露，而实施例1组则偶有小鼠出现泄露，说明W溫敏凝胶作为美沙拉嗦 载体，再辅W生物粘附材料，能有效延长美沙拉嗦在结肠部位的滞留时间，从而改善疗效。 [0化7] 五、病理学 选取雌性SD大鼠9只，体重200~250g，随机分为3组，分别为A:生理盐水组;B:空白实施 例1组;C:美沙拉嗦结肠用溫敏实施例1组。C组每天灌肠给予美沙拉嗦结肠用溫敏凝胶（按 照实施例3制备），剂量为360mg/kg(按美沙拉嗦计），连续7天;A组和B组每天给予生理盐水 和不含美沙拉嗦的空白凝胶，剂量为相对于C组剂量计算出的与含药凝胶等量的相应药物， 连续7天。每天观察各组大鼠体重、精神状态和活动情况。于末次给药后，大鼠禁食2地，麻醉 处死。解剖，取出肛口端至盲肠末端的整个肠段，肉眼观察各组结肠外观形态变化。将结肠 沿肠系膜缘剪开，冰生理盐水冲洗粪便，为避免因灌肠给药过程中机械刺激引起的炎性干 扰试验结果，组织标本取距灌肠深度上端1cm左右结肠标本经4%多聚甲醒固定后，常规脱水 及石蜡包埋，切片巧皿），常规肥染色，光学显微下进行结肠组织病理学检查。
[005引结果显示，用药期间各组大鼠体重、摄食、大便性状均正常，解剖后肉眼观察各组 结肠外观形态，均未见明显充血、水肿或黏膜下出血等现象。光学显微镜下观察结肠组织病 理切片，见图6，Ξ组结肠粘膜上皮细胞均无变性、坏死，固有层腺体分布正常，未见充血、水 肿和炎细胞浸润，黏膜下层、黏膜肌层与外膜组织结构完整，未见异常改变。实验结果表明 美沙拉嗦结肠用溫敏凝胶具有良好的体内生物相容性。
[0059] W上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范 围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明 的保护范围之内。本发明的保护范围W权利要求书为准。
【主权项】
1. 一种美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，其成分包括:主药、温敏型凝胶基质、生 物粘附材料和水， 其中所述主药为美沙拉嗪，其在所述美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比为 6.7% ； 所述温敏型凝胶基质由泊洛沙姆407和泊洛沙姆188组成，泊洛沙姆407在所述美沙拉 嗪温敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比为16%~19%，泊洛沙姆188在在所述美沙拉嗪温 敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比为3%~12% ; 所述述生物粘附材料为壳聚糖、透明质酸钠、羟丙甲基纤维素、黄原胶、魔芋胶、白芨胶 或聚卡波非中的一种或其组合，所述生物粘附材在所述美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液中所占的 质量百分比为0.1 %~0.4%，优选0.2%。2. 根据权利要求1所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，所述生物粘附材料由 聚卡波非和透明质酸钠组成，聚卡波非和透明质酸钠的质量比为1:3~3:1。3. 根据权利要求1所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，所述生物粘附材料由 聚卡波非和透明质酸钠组成，聚卡波非和透明质酸钠的质量比为3:1。4. 根据权利要求1所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，泊洛沙姆407在所述 美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比为17.6% ;泊洛沙姆188在所述美沙拉嗪温 敏凝胶灌肠液中所占的质量百分比为8.0%。5. 根据权利要求1所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，还包括稳定剂，所述 的稳定剂包括:金属络合剂、防腐剂和抗氧剂。6. 根据权利要求5所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，所述抗氧剂为焦亚硫 酸钾。7. 根据权利要求5所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，所述金属络合剂为依 地酸二钠。8. 根据权利要求5所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，所述防腐剂为苯甲酸 钠。9. 根据权利要求1所述的美沙拉嗪温敏凝胶灌肠液，其特征在于，所述美沙拉嗪温敏凝 胶灌肠液的pH值为4.0~5.0。10. 权利要求1~9任一项所述的美沙拉嗪结肠用温敏凝胶的制备方法，其特征在于，包 括以下步骤： (1) 将生物粘附材料置于水中，搅拌至分散均匀，制得第一种混合物； (2) 在搅拌下向第一种混合物中加入温敏型凝胶基质，使其充分润湿，于0~5°C下放 置，至温敏型凝胶基质完全溶胀为无团块的澄明溶液，搅拌使之均匀，制得第二种混合物； (3) 取稳定剂在搅拌下加入到第二种混合物中，搅拌至完全溶解，最后加入主药并补加 水至足量，避光继续搅拌直至药物均匀混悬即得。
【文档编号】A61K9/06GK105878177SQ201610310802
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月12日
【发明人】符旭东, 罗梦颖, 刘宏, 彭丽君
【申请人】中国人民解放军广州军区武汉总医院