一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法及其应用
【专利摘要】本发明涉及中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法及其在抗氧化方面的应用。该提取物是由中国被毛孢菌丝体经粉碎、提取、大孔树脂吸附、浓缩干燥所得。该提取物是一种天然的，微生物源的、无毒的抗氧化剂；经检测该其清除自由基IC50为0.052±0.003mg/mL，其活性能达到Vc的1/10；该提取物作为活性成分制成各种剂型的抗氧化产品，具有功效活性显著和作用机理清楚等特点，且性质稳定，成分确定，安全性高，可靠性强。本发明中国被毛孢菌丝体提取物能用于抗氧化药品、保健食品和食品。
【专利说明】
一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法及其应用
技术领域
[0001]本发明涉及中药技术领域。具体涉及中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法及其在抗氧化方面的应用。
【背景技术】
[0002]中国被毛孢(Hirsutella sinensis)是从天然虫草中分离得到的无性型虫草菌株。由于野生冬虫夏草本身的生长周期和生长环境限制，其表现为资源稀缺，而且产业化对其资源和生境具有毁灭性伤害。因此，通过人工方法分离和培育的菌种来获得冬虫夏草菌丝体，对冬虫夏草药用价值的开发和产业化具有重要的意义。
[0003]现代药理研究结果表明，冬虫夏草有较明显的抗氧化功效。实验证实天然冬虫夏草和冬虫夏草菌丝体均表现出较好的抗氧化活性，可以保护脂质、蛋白质和低密度脂蛋白过氧化。
[0004]越来越多的研究显示抗氧化是预防衰老的重要步骤，因为自由基或氧化剂会将细胞和组织分解，影响代谢功能，并会引起不同的健康问题。如果能够消除过多的氧化自由基，对于许多由自由基引起的、与老化相关的疾病都能够预防。例如常见的癌症、动脉硬化、糖尿病、白内障、心血管病、老年痴呆、关节炎等，这些疾病都被认为与自由基相关。而目前抗氧化剂大都为化学合成产品，随着生活水平的提高，人们越来越追求纯天然产品，因此，以天然抗氧化剂取代合成抗氧化剂是今后的发展趋势。
【发明内容】
[0005]本发明目的是提供一种中国被毛孢菌丝体提取物，其重金属含量低、溶解性好、产品不易氧化，服用剂量小，能用于抗氧化药品、保健食品和食品。为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案:
一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，包含以下步骤:中国被毛孢菌丝体干燥，粉碎，取60目筛粉，得到中国被毛孢菌粉;将中国被毛孢菌粉和提取溶剂乙醇混合均匀，微波提取1~3次，得到中国被毛孢菌丝体提取液;提取液减压浓缩，大孔树脂静态吸附12?24h后，分别用水、30?50% (v/v)乙醇和80?90%( v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥，得到中国被毛孢菌丝体提取物。
[0006]所述的提取溶剂乙醇的浓度为50%?70%(v/v)。
[0007]所述的提取溶剂的用量与中国被毛孢菌粉的比例为20:1?40:1mL/go
[0008]所述的微波提取的条件为:微波功率500?600W，温度40?60°C，提取时间15?45min。
[0009]所述的大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。
[0010]所述的乙醇洗脱液为80?90%( v/v)的乙醇洗脱液。
[0011]本发明还包含上述中国被毛孢菌丝体提取物在制备抗氧化药物、保健食品和食品中的应用。本发明提取物经药理活性检验，具有较强的抗氧化活性，且所需剂量低。
[0012]本发明的有益效果: (I)本发明从中国被毛孢菌丝体中可制取得到一种具有抗氧化活性的提取物，是一种天然的，微生物源的、无毒的抗氧化剂。
[0013](2)本发明得到的提取物具有显著地抗氧化活性，测定结果显示，中国被毛孢菌丝体提取物的清除自由基IC5Q为0.052 ± 0.003mg/mL，其活性能达到Vc的1/10。
[0014](3)本发明的提取物作为活性成分制成各种剂型的抗氧化产品，具有功效活性显著和作用机理清楚等特点，且性质稳定，成分确定，安全性高，可靠性强，符合药物制剂的开发要求。
[0015](4)冬虫夏草是一种珍稀的药用资源，本发明从中国被毛孢菌丝体中制取的提取物，可替代冬虫夏草的部分功效，对其资源的保护和产业的开发具有一定的意义。
【具体实施方式】
[0016]实施例1
中国被毛孢菌丝体提取物的制备及检测 (I)中国被毛孢菌丝体提取物的制备
中国被毛孢菌丝体干燥，粉碎，过60目筛，得到中国被毛孢菌粉;将中国被毛孢菌粉和提取溶剂50%乙醇溶液混合均匀，置于微波萃取仪中，微波功率500W，固液比1:20g/mL，提取时间45min，萃取温度60°C的条件下，提取I次，得到中国被毛孢菌丝体微波提取液;将提取液减压浓缩，上DlOl型大孔吸附树脂，静态吸附24h，依次用水、30%(v/v)和90%(v/v)乙醇洗脱，收集90%( v/v)乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到中国被毛孢菌丝体提取物。
[0017](2)中国被毛孢菌丝体提取物的检测
DPPH乙醇溶液配制:精确称取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL无水乙醇中，DPPH溶液浓度为0.05 mg/mL，备用；
样品溶液的配制:待测物配制成100mg/mL储备液，准确量取IyL储备液加入含199yL无水乙醇的EP管中，得到浓度为0.500mg/mL的最大浓度待测溶液，等比稀释分别得到浓度为0.250、0.100、0.050 和 0.025mg/mL 待测溶液；
试验步骤:先在96孔板中分别加入各受试样品10yL，空白孔加入等量无水乙醇，每个样品浓度3孔重复，分组标记，用多道移液器每孔加入200yLDPPH乙醇溶液，室温避光反应30min，在波长517nm处测定各孔吸光度值，抗氧化能力以对自由基DPPH的清除率表示，计算待测物的IC50。
[0018]测定结果显示，中国被毛孢菌丝体提取物I的清除自由基IC5Q为0.074 mg/mL，维生素 C( ICso=0.005mg/mL)为其 15 倍，芦丁( IC5q=0.015mg/mL)为其 5 倍。
[0019]实施例2
中国被毛孢菌丝体提取物的制备及检测 (I)中国被毛孢菌丝体提取物的制备
中国被毛孢菌丝体干燥，粉碎，过60目筛，得到中国被毛孢菌粉;将中国被毛孢菌粉和提取溶剂70%(v/v)乙醇溶液混合均匀，置于微波萃取仪中，微波功率600W，固液比1:40g/mL，提取时间15min，萃取温度40°C的条件下，提取3次，得到中国被毛孢菌丝体微波提取液；将提取液减压浓缩，上D1I型大孔吸附树脂，静态吸附12h，依次用水、50%(v/v)和80%( v/v)乙醇洗脱，收集80%(v/v)乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到中国被毛孢菌丝体提取物。
[0020](2)中国被毛孢菌丝体提取物的检测
DPPH乙醇溶液配制:精确称取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL无水乙醇中，DPPH溶液浓度为0.05 mg/mL，备用；
样品溶液的配制:待测物配制成100mg/mL储备液，准确量取IyL储备液加入含199yL无水乙醇的EP管中，得到浓度为0.500mg/mL的最大浓度待测溶液，等比稀释分别得到浓度为0.250、0.100、0.050和0.025 mg/mL待测溶液；
试验步骤:先在96孔板中分别加入各受试样品10yL，空白孔加入等量无水乙醇，每个样品浓度3孔重复，分组标记，用多道移液器每孔加入200yL DPPH乙醇溶液，室温避光反应30min，在波长517nm处测定各孔吸光度值，抗氧化能力以对自由基DPPH的清除率表示，计算待测物的IC50。
[0021 ]测定结果显示，中国被毛孢菌丝体提取物I的清除自由基IC5Q为0.054mg/mL，维生素C( ICso=0.005mg/mL)为其 11倍，芦丁( IC5q=0.015mg/mL)为其4倍。
[0022]实施例3
中国被毛孢菌丝体提取物的制备及检测 (I)中国被毛孢菌丝体提取物的制备
中国被毛孢菌丝体干燥，粉碎，过60目筛，得到中国被毛孢菌粉;将中国被毛孢菌粉和提取溶剂60%(v/v)乙醇溶液混合均匀，置于微波萃取仪中，微波功率550W，固液比1: 30g/mL，提取时间30min，萃取温度50°C的条件下，提取2次，得到中国被毛孢菌丝体微波提取液；将提取液减压浓缩，上D1I型大孔吸附树脂，静态吸附18h，依次用水、40%(v/v)和85%( v/v)乙醇洗脱，收集85%(v/v)乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得到中国被毛孢菌丝体提取物。
[0023](2)中国被毛孢菌丝体提取物的检测
DPPH乙醇溶液配制:精确称取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL无水乙醇中，DPPH溶液浓度为0.05 mg/mL，备用；
样品溶液的配制:待测物配制成100mg/mL储备液，准确量取IyL储备液加入含199yL无水乙醇的EP管中，得到浓度为0.500mg/mL的最大浓度待测溶液，等比稀释分别得到浓度为0.250、0.100、0.050和0.025 mg/mL待测溶液；
试验步骤:先在96孔板中分别加入各受试样品10yL，空白孔加入等量无水乙醇，每个样品浓度3孔重复，分组标记，用多道移液器每孔加入200yL DPPH乙醇溶液，室温避光反应30min，在波长517nm处测定各孔吸光度值，抗氧化能力以对自由基DPPH的清除率表示，计算待测物的IC50。
[0024]测定结果显示，中国被毛孢菌丝体提取物I的清除自由基IC5Q为0.068mg/mL，维生素 C( ICso=0.005mg/mL)为其 14 倍，芦丁( IC50=0.015mg/mL)为其 4.5 倍。
[0025]从上述结果可以表明，中国被毛孢菌丝体提取物具有较强的抗氧化活性，且所需剂量也很低。
[0026]实施例4
中国被毛孢菌丝体提取物片剂及检测
(I)中国被毛孢菌丝体提取物片剂的制备:
取实施例2中制得的中国被毛孢提取物，干燥，粉碎，过100目筛，备用;干燥粉碎后的中国被毛孢提取物，麦芽糊精，微晶纤维素，硬脂酸镁按5:3:2:0.1的比例混合，制粒、压片，得到中国被毛孢提取物片剂。
[0027](2)中国被毛孢菌丝体提取物片剂的检测:
DPPH乙醇溶液配制:精确称取2.5mg DPPH，避光充分溶解于50mL无水乙醇中，DPPH溶液浓度为0.05 mg/mL，备用；
样品溶液的配制:中国被毛孢菌丝体提取物片剂配制成100mg/mL储备液，准确量取IyL储备液加入含199yL无水乙醇的EP管中，得到浓度为0.500mg/mL的最大浓度待测溶液，等比稀释分别得到浓度为0.250,0.100,0.050和0.025 mg/mL待测溶液；
试验步骤:先在96孔板中分别加入各受试样品10yL，空白孔加入等量无水乙醇，每个样品浓度3孔重复，分组标记，用多道移液器每孔加入200yL DPPH乙醇溶液，室温避光反应30min，在波长517nm处测定各孔吸光度值，抗氧化能力以对自由基DPPH的清除率表示，计算待测物的IC50。
[0028]测定结果显示，中国被毛孢菌丝体提取物片剂的清除自由基IC5Q为0.132mg/mL，说明具有抗氧化活性。
【主权项】
1.一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，包含以下步骤: 中国被毛孢菌丝体干燥，粉碎，取60目筛粉，得到中国被毛孢菌粉； 将中国被毛孢菌粉和提取溶剂乙醇混合均匀，微波提取I?3次，得到中国被毛孢菌丝体提取液； 提取液减压浓缩，大孔树脂静态吸附12?24h后，分别用水、30?50%(v/v)乙醇和80?90%(v/v)乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩、干燥，得到中国被毛孢菌丝体提取物。2.根据权利要求1所述的一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，其特征在于:所述的提取溶剂乙醇的浓度为50%?70%( v/v)。3.根据权利要求1所述的一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，其特征在于:所述的提取溶剂的用量与中国被毛孢菌粉的比例为20:1?40:1 mL/go4.根据权利要求1所述的一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，其特征在于:所述的微波提取的条件为微波功率500?600W，温度40?60 °C，提取时间15?45min。5.根据权利要求1所述的一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，其特征在于:所述的大孔树脂为DlOl型大孔吸附树脂。6.根据权利要求1所述的一种中国被毛孢菌丝体提取物的制备方法，其特征在于:所述的乙醇洗脱液为80?90%( v/v)的乙醇洗脱液。7.根据权利要求1所述的一种中国被毛孢菌丝体提取物的应用，其特征在于:中国被毛孢菌丝体提取物在抗氧化药物、保健食品和食品中的应用。
【文档编号】A61K36/068GK105878297SQ201610314218
【公开日】2016年8月24日
【申请日】2016年5月13日
【发明人】王洪伦, 韩发, 刘鑫年, 邓黎
【申请人】中国科学院西北高原生物研究所湖州高原生物资源产业化创新中心