一种氨基葡萄糖-山嵛酸嫁接物及制备方法
【专利摘要】本发明提供一种氨基葡萄糖?山嵛酸嫁接物，由氨基葡萄糖和山嵛酸作为原料，在EDC·HCl催化下通过酰胺化反应制得。本发明提供的氨基葡萄糖?山嵛酸嫁接物可以通过胶束的形式包载疏水性药物，得到高载药量的载药胶束，并增强疏水性药物在水中的溶解度和稳定性，可在制备高载药量的载药胶束中的应用。本发明提供的氨基葡萄糖?山嵛酸嫁接物有理想的生物相容性和生物可降解性，对人体无毒害。氨基葡萄糖与山嵛酸反应形成的嫁接物能在水中自组装成胶束，而且合成方法、处理过程简单；对环境无污染。
【专利说明】
-种氨基葡萄糖-山崭酸嫁接物及制备方法
技术领域
[0001] 本发明设及给药系统领域，具体设及一种能在水中W胶束形态包载疏水性药物， 尤其设及一种氨基葡萄糖-山斋酸嫁接物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 很多药物水溶性差，生物利用度低，因此在临床应用时需要合适的给药系统来增 加运些难溶性药物的水溶性。如今纳米制剂越来越受到学者们的关注。纳米颗粒体积小，可 W防止被网状内皮系统所吞隧，目前相关制剂的研究已经有许多。胶束是一种新型的药物 载体，疏水性内核是药物的储存库，而亲水性外壳能有效延长在血液中的循环时间，在疏水 性药物增溶和保持药效稳定性方面具有重要的研究价值（Xu JP，Ji J，Chen WD，et al.Novel biomimetic polymersomes as polymer therapeutics for drug delivery [J].Journal of con化oiled release.2005,107(3):502-512.)。胶束给药系统与传统给 药系统相比，具有许多优势：由于粒径小而均匀，具有优良的组织透过性，尤其是可在具有 渗漏性血管的组织（如肿瘤、炎症区或梗死区）聚集，即所谓增强透过和滞留效应化PR)，运 使胶束具有天然的被动祀向作用。胶束具有克服血-脑屏障(blood brain barriers，BBB) 的功能，由于其外壳的亲水结构(如PEG)不易被蛋白或吞隧细胞识别，胶束在血液和组织内 的滞留时间长，延长药物的作用时间，提高了药物的生物利用度(颜淑蓉，辛建娟，黄奠稻， 等.聚合物胶束联合给药系统的构建及体外释药研究[J].广东药学院学报.2011,27(5): 450-454.)〇
[0003] 氨基葡萄糖是葡萄糖的一个径基被一个氨基取代的化合物，分子式C6出3〇sN，广泛 存在于自然界，W2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖通常WN-乙酷基衍生物(如甲壳素)或WN-硫酸 醋和N-乙酷-3-0-乳酸酸(胞壁酸)形式存在于微生物、动物来源的多糖和结合多糖中。氨基 葡萄糖，是形成软骨细胞的重要营养素，是健康关节软骨的天然组织成份。随着年龄的增 长，人体内的氨基葡萄糖的缺乏越来越严重，关节软骨不断退化和磨损。美国、欧洲和日本 的大量医学研究表明：氨基葡萄糖可W帮助修复和维护软骨，并能刺激软骨细胞的生长(吴 文坚，曾炳芳.硫酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎新进展[J].国外医学:骨科学分册.2005，26 (1): 22-24.)。市售的氨基葡萄糖盐酸盐和硫酸盐都具有较好的疗效和安全性(邱贵兴，翁 习生，张克.盐酸/硫酸氨基葡萄糖治疗骨关节炎的平行对照临床研究[J].中华医学杂志 .2005,85(43):3067-3070.)。
[0004] 山斋酸是含有22个碳的直链脂肪酸，存在于菜巧油及芥子油中，可W由芥酸氨化 制备得到，现在已广泛应用于表面活性剂及洗涂剂，食品及其添加剂，化妆品及医药行业 (秦振平.采用NP催化剂的芥酸氨化制备山斋酸工艺研究[J].延安大学学报：自然科学版 .1998，17(1): 49-53;朱培基.工业硬脂酸，油酸，芥酸，山斋酸及其衍生物原料，用途，市场 状况[J].粮食与油脂.1997，3:009.)。山斋酸本身无毒，稳定，用于合成药物载体，生物安全 性比较高。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供一种氨基葡萄糖-山斋酸嫁接物，具有式I的结构：
[0006]
[0007]本发明的另一个目的是提供所述的氨基葡萄糖-山斋酸嫁接物的制备方法，通过 W下步骤实现：
[000引（1)将盐酸氨基葡萄糖置于烧杯中，再加入Ξ乙胺，室溫下6(K)rpm揽拌反应化。然 后双层滤纸过滤，收集固体，再用无水乙醇洗至无氨味，自然干燥，得到氨基葡萄糖。
[0009] (2)把上述氨基葡萄糖加入到去离子水中，揽拌溶解。把山斋酸加入到无水乙醇 中，再加入邸C .肥1，60°C揽拌30分钟。混合上述两种溶液，400巧m，8(TC条件下密闭揽拌反 应化。
[0010] (3)反应结束后，将所有反应液移至分子量3500的透析袋中透析48小时，水量为 5L。前24h每隔一小时换一次水，后24h每隔2小时换一次水。然后将反应液从透析袋中移入 塑料烧杯中，先在-80 °C预冷化，然后移入冻干机冻干。
[00川反应式如下：
[0012]
[0013] 本发明的再一个目的是提供所述的氨基葡萄糖-山斋酸嫁接物在制备高载药量的 载药胶束中的应用。本发明可W通过胶束的形式包载疏水性药物，得到高载药量的载药胶 束，并增强疏水性药物在水中的溶解度和稳定性。
[0014] 本发明利用氨基葡萄糖与山斋酸合成药物载体有许多优势，有理想的生物相容性 和生物可降解性，对人体无毒害。氨基葡萄糖与山斋酸反应形成的嫁接物能在水中自组装 成胶束，而且合成方法、处理过程简单;对环境无污染。
【附图说明】
[0015] 图1是空白胶束数均粒径分布图。
[0016] 图視载药胶束-1数均粒径分布图（丙戊酸:嫁接物=1:5，w/w)。
[0017] 图3是载药胶束-2数均粒径分布图（丙戊酸:嫁接物=1:2，w/w)。
[0018] 图4是载药胶束-3数均粒径分布图（丙戊酸:嫁接物=1:1，w/w)。
[0019] 图5是载药胶束-4数均粒径分布图（丙戊酸:嫁接物=3:2，w/w)。
[0020] 图6是载药胶束-4药物体外释放曲线图。
【具体实施方式】
[0021] 本发明结合附图和实施例作进一步的说明。运些实施例的目的只是为了解释而不 是W任何方式限制本发明。
[0022] 实施例1
[0023] 精密称取5mg本发明提供的氨基葡萄糖-山斋酸嫁接物，加入到5mL去离子水中，水 浴超声溶解，得到氨基葡萄糖-山斋酸嫁接物胶束溶液，用马尔文激光粒径电位仪测定数均 粒径为55nm，参见图1。
[0024] 实施例2
[0025] 精密称取4mg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡萄 糖-山斋酸嫁接物，水浴超声溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固体用20mL水超声溶解，即载药胶 束-1。用马尔文激光粒径电位仪测定数均粒径为29nm，参见图2。
[00%] 实施例3
[0027] 精密称取lOmg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡 萄糖-山斋酸嫁接物，水浴超声溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固体用20mL水超声溶解，即载药 胶束-2。用马尔文激光粒径电位仪测定数均粒径为102nm，参见图3。
[0028] 采用高效液相色谱测定其包封率与载药量，色谱条件如下:流动相：（四下基漠化 锭巧mmol/L)-憐酸二氨钟(20mmol/L)):甲醇=25:75，pH = 3.6;柱溫40°C ;检测波长216nm; 进样体积20化。采用标准曲线法测定丙戊酸含量，标准曲线制备方法如下：用流动相配制 500yg/mL的丙戊酸溶液，然后用流动相稀释成一系列浓度，通过高效液相色谱检测其色谱 峰面积，W色谱峰面积为纵坐标，丙戊酸浓度为横坐标，绘制得到丙戊酸标准曲线。
[0029] 移取所得到的载药胶束-2适量，用甲醇稀释10倍，20000rpm转速超滤离屯、30min， 取下清液，用流动相稀释10倍，高效液相色谱测定峰面积。根据标准曲线计算丙戊酸浓度， 根据下列公式计算包封率与载药量：
[0030] 包封率化 E%) = (C〇-Ci)/C〇X100%
[0031] 载药量(DL% ) =Co X邸％/载药胶束总量X 100%
[0032] 其中Co为投药量，Cl为上清液中药物量。
[0033] 测得载药胶束-2的包封率为77.63%，载药量为25.88%。
[0034] 实施例4
[0035] 精密称取20mg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡 萄糖-山斋酸嫁接物，水浴超声溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固体用20mL水超声溶解，即载药 胶束-3。用马尔文激光粒径电位仪测定数均粒径为42nm，参见图4。
[0036] 采用高效液相色谱测定其包封率与载药量，色谱条件如下:流动相：（四下基漠化 锭巧mmol/L)-憐酸二氨钟(20mmol/L)):甲醇=25:75，pH = 3.6;柱溫40°C ;检测波长216nm; 进样体积20化。采用标准曲线法测定丙戊酸含量，标准曲线制备方法如下：用流动相配制 500yg/mL的丙戊酸溶液，然后用流动相稀释成一系列浓度，通过高效液相色谱检测其色谱 峰面积，W色谱峰面积为纵坐标，丙戊酸浓度为横坐标，绘制得到丙戊酸标准曲线。
[0037] 移取所得到的载药胶束-3适量，用甲醇稀释10倍，20000rpm转速超滤离屯、30min， 取下清液，用流动相稀释10倍，高效液相色谱测定峰面积。根据标准曲线计算丙戊酸浓度， 根据下列公式计算包封率与载药量：
[003引包封率化 E%) = (C0-Ci)/C0X100%
[0039] 载药量(DL%)=C日X邸％/载药胶束总量X100%
[0040] 其中Co为投药量，Cl为上清液中药物量。
[0041] 测得载药胶束-3的包封率为71.15%，载药量为35.58%。
[0042] 实施例5
[0043] 精密称取30mg丙戊酸，溶于4mL乙醇中，加入到25mL旋蒸瓶中，再加入20mg氨基葡 萄糖-山斋酸嫁接物，水浴超声溶解。旋蒸除去乙醇，得到的固体用20mL水超声溶解，即载药 胶束-4。用马尔文激光粒径电位仪测定数均粒径为62nm，参见图5。
[0044] 采用高效液相色谱测定其包封率与载药量，色谱条件如下:流动相：（四下基漠化 锭巧mmol/L)-憐酸二氨钟(20mmol/L)):甲醇=25:75，pH = 3.6;柱溫40°C ;检测波长216nm; 进样体积20化。采用标准曲线法测定丙戊酸含量，标准曲线制备方法如下：用流动相配制 500yg/mL的丙戊酸溶液，然后用流动相稀释成一系列浓度，通过高效液相色谱检测其色谱 峰面积，W色谱峰面积为纵坐标，丙戊酸浓度为横坐标，绘制得到丙戊酸标准曲线。
[0045] 移取所得到的载药胶束-4适量，用甲醇稀释10倍，20000rpm转速超滤离屯、30min， 取下清液，用流动相稀释10倍，高效液相色谱测定峰面积。根据标准曲线计算丙戊酸浓度， 根据下列公式计算包封率与载药量：
[0046] 包封率化 E%) = (C〇-Ci)/C〇X100%
[0047] 载药量(DL%)=C()X邸％/载药胶束总量X100%
[004引其中Co为投药量，Cl为上清液中药物量。
[0049] 测得载药胶束-4的包封率为86.00 %，载药量为51.60 %。
[0050] 取所得到的载药胶束-4 2血，放在3500分子量的透析袋中，把透析袋放入20mLPBS (抑=7.4)中，37°C恒溫震荡，分别在0.5、l、2、4、6、24h取样。每次取样时，把20血PBS全部取 出，然后用高效液相色谱测定PBS(pH = 7.4)中丙戊酸浓度，并且加入新的PBS(pH= 7.4) 20mL。计算丙戊酸的累积释放百分率，并对时间作图，参见图6。
【主权项】
1. 一种氨基葡萄糖-山嵛酸嫁接物，其特征在于，结构式(I)所述：2. 根据权利要求1所述的一种氨基葡萄糖-山嵛酸嫁接物的制备方法，其特征在于，通 过以下步骤实现： (1) 将盐酸氨基葡萄糖置于烧杯中，再加入三乙胺，室温下600rpm搅拌反应5h。然后双 层滤纸过滤，收集固体，再用无水乙醇洗至无氨味，自然干燥，得到氨基葡萄糖。 (2) 把上述氨基葡萄糖加入到去离子水中，搅拌溶解。把山嵛酸加入到无水乙醇中，再 加入EDC · HC1，60°C搅拌30分钟。混合上述两种溶液，400rpm，80°C条件下密闭搅拌反应8h。 (3) 反应结束后，将所有反应液移至分子量3500的透析袋中透析48小时，水量为5L。前 24h每隔一小时换一次水，后24h每隔2小时换一次水。然后将反应液从透析袋中移入塑料烧 杯中，先在_80°C预冷3h，然后移入冻干机冻干； 反应式如下所示：3. 根据权利要求1所述的氨基葡萄糖-山嵛酸嫁接物在制高载药量的载药胶束中的应 用。
【文档编号】A61K31/7008GK105920612SQ201610409018
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年6月12日
【发明人】掲丽勇, 应晓英, 邬嘉晖, 杜永忠
【申请人】浙江大学