人参皂苷c-k与拉莫三嗪的组合物在制备抗癫痫药物中的应用

人参皂苷c-k与拉莫三嗪的组合物在制备抗癫痫药物中的应用
【专利摘要】本发明涉及新药物及用途，具体提供了人参皂苷C?K与拉莫三嗪的组合物在制备抗癫痫药物中的应用。本发明经动物实验证实，人参皂苷C?K与拉莫三嗪的组合物能显著延长癫痫发作潜伏期，降低癫痫发作强度，缩短癫痫发作持续时间，降低发作后体重丢失。表明人参皂苷C?K与拉莫三嗪组合物能缓解或控制癫痫发作，抑制癫痫发生发展，并可通过减少拉莫三嗪的使用剂量、进而减轻拉莫三嗪导致的药物不良反应。
【专利说明】
人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物在制备抗癫痫药物中的 应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种新药物组合物及其新用途领域，特别涉 及人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物在制备抗癫痫药物中的新用途。
【背景技术】
[0002] 癫痫是一种脑部疾患，其特点是持续存在能产生癫痫发作的脑部持久性改变，并 出现相应的神经生物学、认知、心理学以及社会学等方面的后果。全球约有7000万癫痫患 者，其中中低等收入国家占90%以上，且每年约240万新诊断患者。据中国抗癫痫协会统计 显示，我国约有1000万癫痫患者，每年新增45万多癫痫患者，其中农村地区约占三分之二， 治疗缺口达70%。癫痫发作本身突然、不可预知，易造成认知损害和心理障碍，严重影响患 者的身心健康，给家庭和社会带来沉重的经济负担。癫痫已成为妨碍人类健康和社会发展 的复杂性神经系统疾病。
[0003] 临床上癫痫的治疗包括药物治疗、手术治疗、心理治疗、饮食治疗等，其中以药物 治疗为主。传统的抗癫痫药物如卡马西平、苯妥英钠、丙戊酸钠、苯巴比妥等存在个体差异 大、治疗范围窄、不良反应严重、以及药物相互作用等缺陷。拉莫三嗪是一种苯三嗪衍生物， 于1991年在欧洲首次上市，主要通过阻滞电压门控钠通道，减少钠离子内流，增加神经元的 稳定性而发挥抗癫痫作用。因其疗效确切，对认知功能、睡眠、行为等方面无显著影响，国内 外多份指南和共识推荐为治疗顽固部分性癫痫发作、原发性全身性癫痫、失神性发作、青少 年肌阵挛性癫痫的首选药物。随着拉莫三嗪在临床上的广泛应用，其不良反应也逐渐报道， 如共济失调、复视、头晕、头痛、恶心、皮疹、致畸等，尤以皮疹最为常见，发生率在10%，曾有 发生罕见致命性不良反应Stevens-Jonhson综合征和中毒性表皮坏死松解症的病例报道。 研究结果显示，拉莫三嗪的药物不良反应发生与用药剂量有关。然而，减少给药剂量的同时 也将降低拉莫三嗪的抗癫痫作用。因此，临床上迫切需要寻求既能维持拉莫三嗪的抗癫痫 作用和疗效、又能降低其药物不良反应的有效途径。
[0004] 人参皂苷C-K是一种四环三萜达玛烷型人参皂苷。其化学名为:20(S)-0-f3-D-吡喃 葡萄糖基原人参二醇，分子式:C36H6108，分子量:621.88，脂溶性较强，水溶性低。该化合物 在天然植物中含量极少，是人参皂苷Rbl、Rb2和Rc在机体肠道的主要降解产物，目前主要利 用生物转化法制备而成。研究发现人参皂苷C-K具有抗癌、抗炎、降糖、改善记忆、保肝等药 理学活性。近年来人参皂苷C-K在神经系统疾病的研究备受科研人员关注。人参皂苷C-K可 抑制脑缺血再灌注引起的神经损伤。此外，人参皂苷C-K可抑制钠离子通道开放，调控GABA/ NMDA受体活性增强GABA介导的神经抑制效应。鉴于人参皂苷C-K的神经保护、调控神经效应 以及其皮肤保护作用，推测人参皂苷C-K可能具有抗癫痫作用，可能减轻拉莫三嗪引起的不 良反应。然而，迄今国内外尚未见人参皂苷C-K抗癫痫的研究、以及人参皂苷C-K与拉莫三嗪 的组合物用于癫痫治疗的研究报道。
[0005]
[0006] 人参皂苷C-K的化学结构式

【发明内容】

[0007] 本发明旨在克服现有技术的问题，提供了人参皂苷c-κ与拉莫三嗪的组合物在制 备抗癫痫药物中的应用。人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物可直接作为抗癫痫药物用。所述 人参皂苷C-κ是经常规的微生物转化或酶转化制备而成，纯度要求达98%以上。所述抗癫痫 药物中人参皂苷C-K占总药量的1 一 99%。优选地，所述抗癫痫药物中人参皂苷C-K与拉莫三 嗪的质量比（临床用量mg/d)为（10-1800): (5-700)。所述抗癫痫药物是缓解或控制癫痫 发作、抑制癫痫发生发展以及癫痫疾病相关并发症的药物，包括皮疹、共济失调、焦虑、失 目民、抑郁、精神疾病等。所述癫痫发作是顽固性部分性癫痫、原发性全身性癫痫、失神性发 作、肌阵挛性癫痫等。所述慢性癫痫发生是热性惊厥、脑外伤、脑血管疾病、感染、脑肿瘤、癫 痫持续性发作、神经退行性疾病等原因导致的癫痫，以及由神经元损伤后炎症、胶质增生、 海马神经再生等引起的癫痫发生。所述抗癫痫药物可以是人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合 物，还可以是组合物与药学赋形剂或载体组成的药物，还可以是组合物与其他抗癫痫药物 的组合物。所述其他抗癫痫药物为苯妥英钠、苯巴比妥、卡马西平、奥卡西平、左乙拉西坦、 托吡酯、拉莫三嗪、加巴喷丁中的至少一种。其剂型可以是任何剂型，包括注射剂、溶液剂、 乳剂、口服液、混悬剂、栓剂、膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、冻干粉针剂、散剂、颗粒剂、冲剂、胶 囊剂、丸剂、片剂、贴剂或缓释制剂。给药方式可以是口服、注射、口鼻喷雾、肠腔或经皮给 药。所述药学上可接受的载体包括包括抗氧化剂、螯合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、润 湿剂、分散剂、润滑剂、肠溶材料、PH调节剂、矫味剂、色素等。
[0008] 本发明人参皂苷C-κ用于大鼠的剂量为1 一320mg/kg/次，一日2次。优选为80-320mg/kg次，一日2次。本发明拉莫三嗪用于大鼠的剂量为1 一40mg/kg/次，一日1次。优选为 5-40mg/kg次，一日1次。通过研究发现，人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物具有协同增强抗 癫痫的作用和疗效，能减少拉莫三嗪的使用剂量、进而降低其药物不良反应的发生，可用于 制备防治癫痫及其并发症的药物。
[0009] 本发明人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物治疗癫痫发作以及癫痫疾病诊治过程中 并发的皮疹、共济失调、精神障碍、认知损害等。能协同增强抗癫痫的作用和疗效，减少拉莫 三嗪的使用剂量，进而减轻其导致的药物不良反应。
[0010] 总之，本发明利用癫痫动物模型首次证实人参皂苷C-K具有抗癫痫作用，同时首次 研究了人参皂苷C-K与拉莫三嗪组合物的抗癫痫作用，结果显示该组合物能协同增强抗癫 痫作用和疗效，减少拉莫三嗪的药物用量，进而降低其导致的皮疹、共济失调、复视等不良 反应的发生率。
【附图说明】
[0011] 图1.人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物抑制氯化锂-匹罗卡品诱导的癫痫发作;B、 C、D、E分别为癫痫模型组，拉莫三嗪（20mg/kg)组，人参皂苷C-K(160mg/kg)组，拉莫三嗪 (20mg/kg)+人参皂苷C-K(160mg/kg)组，#表示与人参皂苷C-K或拉莫三嗪组比较，P〈 0.05 ;*，**，*** 表示与癫痫模型组比较，Ρ〈0· 05,0.01,0.0001;
[0012] 图2.人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物抑制戊四氮诱导的癫痫发作;B、C、D、E分别 为癫痫模型组，拉莫三嗪（20mg/kg)组，人参阜苷C-K( 160mg/kg)组，拉莫三嗪（20mg/kg)+人 参皂苷C-K(160mg/kg)组，#，##表示与人参皂苷C-K或拉莫三嗪组比较，P〈0.05， 0.01 ;*，**，*** 表示与癫痫模型组比较，Ρ〈0· 05,0.01,0.0001;
[0013] 图3.不同质量配比的组合物对戊四氮诱导的急性癫痫模型大鼠行为学的影响;Β、 (：、04、？、6分别为癫痫模型组，人参皂苷(：-1((32〇1^/1^)组，人参皂苷(：-1((32〇1^/1^)+拉莫 三嗪（10mg/kg)组，人参阜苷C_K( 160mg/kg)+拉莫三嗪（20mg/kg)组，人参阜苷C_K(80mg/ kg) +拉莫三嗪(40mg/kg)组，拉莫三嗪(40mg/kg)组;#，##，###表示与人参皂苷C-K或拉莫三 嗪组比较，Ρ〈〇· 05,0.01,0.001 ;*，#，*# 表示与癫痫模型组比较，Ρ〈0· 05,0.01,0.001。
【具体实施方式】
[0014] 实施例1人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物干预氯化锂-匹罗卡品诱导的急性癫痫 模型
[0015] 1.实验方法
[0016] 1.1剂量设计和分组
[0017]实验分为正常对照组、癫痫模型组、拉莫三嗪组（20mg/kg)、人参皂苷C-K组 (160mg/kg)、人参阜苷C-K(160mg/kg)合用拉莫三嗪组(20mg/kg)组。（见表1).
[0018] 表1实验分组和剂量设计
[0020] 1.2实验步骤
[0021] SPF级健康雄性SD大鼠50只（体重180-220g)，随机分为正常对照组(A组）、癫痫模 型组(B组）、拉莫三嗪组(C组）、人参皂苷C-K组(D组）、人参皂苷C-K+拉莫三嗪组(E组），每组 10只。每日实验前将拉莫三嗪或人参皂苷C-K用0.5 %CMC-Na按剂量配制成相应浓度，现配 现用。每天给药前称量大鼠体重，按IOmVkg灌胃给药，人参皂苷C-K 2次/日，拉莫三嗪1次/ 日，连续4天且每天给药时间相同。A组给予相同体积生理盐水，B组给予相同体积0.5%CMC-Na。第4天下午4:00左右腹腔注射氯化锂溶液（127 1^/1^，1.?.)。第5天给药后3〇1^11进行腹 腔注射溴甲基东莨菪碱溶液（111^/1^，1?.)以减轻匹罗卡品引起的外周不良反应。随后 30min腹腔注射盐酸匹罗卡品溶液（30mg/kg，i.p.)，使氯化锂与匹罗卡品给药间隔在18-20h之间。给予匹罗卡品后利用视频监控系统密切观察大鼠行为变化2h，按Ra Cine分级标准 评估癫痫发作强度，记录癫痫发作潜伏期（自盐酸匹罗卡品给药完毕开始计时、直至首次出 现前肢阵挛为止）、发作强度（以发作级别最高为准）。（分级见表2)
[0022] 表2 Racine分级标准
[0024] 1.3检测指标
[0025]按照表2的Racine分级标准评估大鼠行为学变化，记录大鼠癫痫发作强度、发作潜 伏期。
[0026] 1.4统计方法
[0027]采用SPSS19.0进行统计分析，统计学意义的水平设定为P〈0.05。采用均数土标准 差(mean 土 SD)。用Leven ' s test方法检验正态性和方差齐性。如果符合正态性和方差齐性， 用单因素方差分析(One-way AN0VA)和post Hoc LSD进行统计分析;如果不符合正态性和 方差不齐，则用Kruskal -Wal I i s检验。如果Kruskal -Wal I i s检验有统计学意义(P〈0.05 )，则 用Dunnett's Test(非参数方法)进行比较分析。评价时考虑统计学差异和生物学意义。
[0028] 2.结果
[0029] 2.1人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物抑制氯化锂-匹罗卡品诱导的癫痫大鼠发作
[0030]与模型组相比，人参皂苷C-K显著延长癫痫发作潜伏期，降低发作级别（图1)。此 外，与拉莫三嗪或人参皂苷C-K单独用药相比，人参皂苷C-K与拉莫三嗪合用能够显著延长 癫痫发作潜伏期，降低发作强度。表明人参皂苷C-K具有一定的抗癫痫作用，且能增强拉莫 三嗪的抗癫痫疗效。
[0031 ]实施例2人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物干预戊四氮诱导的急性癫痫模型
[0032] 1.实验方法
[0033] 1.1剂量设计和分组
[0034]实验分为正常对照组、癫痫模型组、拉莫三嗪组（20mg/kg)、人参皂苷C-K组 (160mg/kg)、人参阜苷C-K(160mg/kg)合用拉莫三嗪组(20mg/kg)组。（见表3)。 「00351 妄·拍知客I丨是沿ff
[0037] 1.2实验步骤
[0038] SPF级健康雄性SD大鼠50只（体重180-220g)，随机分为正常对照组(A组）、癫痫模 型组(B组）、拉莫三嗪组(C组）、人参皂苷C-K组(D组）、人参皂苷C-K+拉莫三嗪组(E组），每组 10只。每日实验前将拉莫三嗪或人参皂苷C-K用0.5 %CMC-Na按剂量配制成相应浓度，现配 现用。每天给药前称量大鼠体重，按IOmVkg灌胃给药，人参皂苷C-K 2次/日，拉莫三嗪1次/ 日，连续4天且每天给药时间相同。A组给予相同体积生理盐水，B组给予相同体积0.5%CMC-Na。第5天上午给药后Ih进行腹腔注射戊四氮溶液(60mg/kg，i.p.)随后视频监控系统密切 观察大鼠行为变化30min，按Racine分级标准评估癫痫发作强度，记录癫痫发作潜伏期（自 戊四氮给药完毕开始计时、直至首次出现肌阵挛为止）、发作级别（以最高级别为准）、发作 持续时间。
[0039] 1.3检测指标
[0040] 按照表2的Racine分级标准评估大鼠行为学变化，记录大鼠癫痫发作强度、发作潜 伏期、发作持续时间。
[0041 ] 1.4统计方法
[0042]采用SPSS19.0进行统计分析，统计学意义的水平设定为P〈0.05。采用均数土标准 差(mean 土 SD)。用Leven ' s test方法检验正态性和方差齐性。如果符合正态性和方差齐性， 用单因素方差分析(One-way AN0VA)和post Hoc LSD进行统计分析;如果不符合正态性和 方差不齐，则用Kruskal -Wal I i s检验。如果Kruskal -Wal I i s检验有统计学意义(P〈0.05 )，则 用Dunnett's Test(非参数方法)进行比较分析。评价时考虑统计学差异和生物学意义。 [0043] 2.结果
[0044] 2.1人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物延长戊四氮诱导的癫痫大鼠发作
[0045]与癫痫模型组相比，人参皂苷C-K与拉莫三嗪合用显著降低癫痫发作级别，延长癫 痫发作潜伏期，缩短发作持续时间（图2)。与拉莫三嗪或人参皂苷c-κ单用相比，人参皂苷εκ 与拉莫三嗪合用后其抗癫痫作用更强。
[0046] 3.实验小结
[0047]人参皂苷C-K延长癫痫发作潜伏期，人参皂苷C-K与拉莫三嗪合用的抗癫痫作用强 于拉莫三嗪或人参皂苷C-K单用。因此，人参皂苷C-K与拉莫三嗪组合物具有协同抗癫痫的 作用和疗效，可通过减少拉莫三嗪的使用剂量、进而减轻拉莫三嗪用药导致的药物不良反 应。
[0048] 实施例3不同质量配比人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物干预戊四氮诱导的急性 癫痫模型
[0049] 1.实验方法
[0050] 1.1剂量设计和分组
[0051] 实验分为正常对照组、癫痫模型组、组合物干预组。（见表4)。
[0052] 表4分组给药
[0054] 1.2实验步骤
[0055] SPF级健康雄性SD大鼠70只（体重180-220g)，随机分为正常对照组(Α组）、癫痫模 型组(B组）、组合物干预1、2、3、4、5组(C、D、E、F、G组），每组10只。每日实验前将拉莫三嗪、人 参皂苷C-K和组合物用0.5 % CMC-Na按剂量配制成相应浓度，现配现用。每天给药前称量大 鼠体重，按lOml/kg灌胃给药，2次/日，连续5天且每天给药时间相同。A组给予相同体积生理 盐水，B组给予相同体积0.5%CMC-Na。第5天上午给药后lh(8:00-10:00)进行腹腔注射戊四 氮溶液(60mg/kg，i .p.)随后视频监控系统密切观察大鼠行为变化30min，按Racine分级标 准评估癫痫发作强度，记录癫痫发作潜伏期（自戊四氮给药完毕开始计时、直至首次出现肌 阵挛为止）、发作级别（以最高级别为准）、发作持续时间。
[0056] 2.实验结果
[0057] 1.不同配比人参皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物抑制戊四氮诱导的癫痫发作
[0058]与癫痫模型组相比较，人参皂苷C-K与拉莫三嗪组合物显著降低癫痫发作级别，延 长发作潜伏期，缩短发作持续时间（图3)。与人参皂苷C-K或拉莫三嗪单独应用相比较，人参 皂苷C-K与拉莫三嗪的组合物质量配比为32:1-2:1时，其抗癫痫疗效最强。
[0059] 3.实验小结
[0060]人参皂苷C-K与拉莫三嗪组合物质量配比为(32:1) - (2:1)时，其抗癫痫作用和疗 效最强，且更有利于维持正常体重，降低拉莫三嗪因用药剂量过多引起的不良反应，为制备 新的抗癫痫药物提供了充分的科学依据。
【主权项】
1. 一种抗癫痫药物，其特征在于，所述所述抗癫痫药物由人参皂苷c-κ与与拉莫三嗪组 成;所述抗癫痫药物中人参皂苷c-κ占总药量的1 一99 %。2. 如权利要求1所述的抗癫痫药物，其特征在于，所述抗癫痫药物中人参皂苷C-Κ与拉 莫三嗪的质量比为（10-1800): (5-700)。3. 人参皂苷C-Κ与拉莫三嗪的组合物在制备抗癫痫药物中的应用，所述抗癫痫药物中 人参皂苷C-Κ占总药量的1 一99 %。4. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗癫痫药物中人参皂苷C-Κ与拉莫三嗪 的质量比为（10-1800): (5-700)。5. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗癫痫药物是缓解或控制癫痫发作、抑 制癫痫发生发展以及癫痫疾病相关并发症的药物。6. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗癫痫药物中还含有其他抗癫痫药物。7. 如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述其他抗癫痫药物为苯妥英钠、苯巴比妥、 卡马西平、奥卡西平、左乙拉西坦、托吡酯、拉莫三嗪、加巴喷丁中的至少一种。8. 如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗癫痫药物的剂型为注射剂、溶液剂、乳 剂、口服液、混悬剂、栓剂、膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、冻干粉针剂、散剂、颗粒剂、冲剂、胶囊 剂、丸剂、片剂、贴剂或缓释制剂。
【文档编号】A61P25/08GK105963311SQ201610548493
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年7月13日
【发明人】曾祥昌, 欧阳冬生, 胡凯, 陈露露, 周露萍, 罗伟, 王欣桐, 高青, 李晓辉, 周宏灏
【申请人】欧阳冬生, 胡凯