一种组合物在制备具有保湿功能的化妆品中的用图
【专利摘要】本发明提供一种组合物在制备具有保湿功能的化妆品中的用途，其中该组合物包含一P-113肽，其中该P-113肽具有SEQ ID NO：1的序列。其为低致敏性及无细胞毒性，即代表不会对皮肤造成伤害及过敏，可用于作为化妆品的成份。该P-113 肽片段具有保湿及保水的功效，因此与其它保湿化妆品成分相互搭配，更可加强其它保湿成分的保湿功效。而且该P-113肽片段因可抑制MMP-9的生成，故可降低胶原蛋白的分解，而达到抗皱及防老的效果。本发明的化妆品除了包含肽之外，进一步包含化妆品活性成份及精华液配方等，因此主要功效除了具有保湿及抗皱外，更因添加上述有效成份，用以加强其它复合功效，如收敛、美白、抗老化、抗氧化或肌肤组织活化等。
【专利说明】
一种组合物在制备具有保湿功能的化妆品中的用途
技术领域
[0001] 本发明涉及一种组合物在制备具有保湿功能的化妆品中的用途，尤其涉及一种富 组蛋白的肽在保湿化妆品中的应用。
【背景技术】
[0002] 目前化妆品（或称彩妆）是除了简单的清洁用品以外，被用来提升人体外貌美丽程 度的物质，其主要用途为局部涂敷至皮肤以提供抗老化、水合和/或皮肤质活化的功效。
[0003] 因人类皮肤会随着年纪、生理因素或环境因素，而有老化、肤质粗糙或产生皱纹等 现象，如正常年轻人的皮肤都具一定的弹性和张力，当表情肌松弛后，皮肤会很快复原，使 皱纹消失。但进入中年后，皮肤开始明显老化，皮肤变薄、变硬、干燥、张力降低；真皮弹力纤 维变性、断裂，使皮肤的张力和弹性降低。因此，当表情肌松弛后，皮肤不能很快复原，久之 则使皱纹成形。而且，随年龄的增大，皮肤和皮下组织更加松弛，加上面部支持组织的萎缩 或缺失，以及肌肉的松软，皮肤会在重力的作用下发生滑坠，形成更深的皱纹。而肌肤粗糙 是由于干燥、紫外线、清洁剂或化学物质等刺激性物质等外在重要因素，或激素平衡的紊乱 等内在重要因素而产生的肌肤困扰，并伴随角质层屏障功能下降、角质层水分量下降、表皮 代谢回转亢进、鳞肩产生而角质粗糙化等现象。因此皮肤上的细胞若失去弹性及保湿功能， 会引起皮肤褶皱、干燥及失去光泽等现象。
[0004] "肽（p印tide)"为受到目前注目的保养成分；因肽是一种小分子物质，其系由氨基 酸所组成，氨基酸是组成蛋白质的最小单位，故肽体积较一般蛋白质小很多，不仅容易被体 内细胞吸收，也能刺激身体产生较快速的反应，相较于胶原蛋白、弹力蛋白等大分子蛋白质 更容易为肌肤所吸收，且天然成分对人体的刺激更小，为一种具抗老、除皱、抗发炎、强化皮 肤耐受力、减少黑色素生成等功效的保养品，能使肌肤活化重生水嫩弹性有光泽。肽由二 到数十个不等的氨基酸组成，例如：两个氨基酸组成二肽（dipeptide)，三个氨基酸组成三 肽。短分子氨基酸多肽能完整穿透表皮角质层到细胞基底层，具生物活性使受损细胞有修 复作用。
[0005] 是以，随肤质保养及高龄化时代来临，因此如何开发出含有新的保养液成分以达 到保水或保湿的功效，为现代的一个重要课题。
【发明内容】
[0006] 本发明公开了一种新的化妆品成分，即以富组蛋白（Histatin)肽以及一化妆品活 性成份为主体的化妆品及其应用。本发明的该富组蛋白肽具有保湿及抗皱的功效。并且发 现该富组蛋白肽与玻尿酸以及其它多种植物萃取物等多种化妆品活性成分复配后，协同增 效，而能有保湿、抗老化、肌肤组织活化等功效，而且此肽更对皮肤无刺激性。
[0007] 本发明的范围不应该局限于实例中所述。更确切地讲，这些具体实例提供使本发 明彻底和完整的说明，并对本领域技术人员充分表达本发明的范围。在本说明书中，熟知的 特点和技术细节可以省略，以避免不必要地模糊本发明的具体内涵。
[0008] 此处所使用的术语只为特定具体内涵的描述，并非用来限制本发明的范围。在本 说明书中使用术语"包括"和/或"包含"或"涵盖"和/或"含有"时，是指特征、区域、整数、 步骤、操作、组件及/或组件的存在；但并不排除一个或多个其它特征、区域、整数、步骤、操 作、组件、组件及/或其群组的存在或增加。除非另有注明，此处使用的所有术语(包括技术 和科学术语)相同于普通技术人员一般理解的含义。将进一步理解的是，例如字典常用定义 的术语，应解释为其含义是符合相关技艺和本发明的文脉；除非另有定义，否则并不会理想 化或超过其正式涵义。
[0009] 本文中所用的术语"一"、"一个"及"该"意指"一个或多个"，此术语仅为了叙述方 便及给予本发明基本观念。此叙述应被理解为包括一种或至少一种，且除非明显地另有所 指，表示单数时亦包括复数。
[0010] 本文中的用语"或"，其意同"和/或"。
[0011] 本发明提供一种组合物在制备具有保湿功能的化妆品中的用途，其中该组合物包 含一 P-113肽（P印tide P-113)，其中该P-113肽具有SEQ ID NO :1的序列。
[0012] 在一具体实施例中，该化妆品（cosmetic)为一医学美容化妆品（cosmeceutical)。
[0013] 在另一具体实施例中，该P-113肽系选自于一富组蛋白-5(histatin_5)。在一较 佳的具体实施例中，该P-113肽系由一富组蛋白-5上24个氨基酸所组成。在一更佳具体 实施例中，该P-113肽系为一富组蛋白-5上24个氨基酸中的12个具功能性的氨基酸片段 结构。因此该P-113肽为十二肽，而该P-113肽的氨基酸序列为SEQ ID N0:1，其氨基酸序 列为AKRHHGYKRKFH，其化学结构式如下：
[0014] 该P-113肽（p印tide P-113)的制备或取得可参照于美国专利公告号第5631228 号、第5646119号、第5885965号与第5912230号等四项专利申请案，上述案件内容揭示了 富组蛋白（histatin)家族的氨基酸序列定义及P-113肽的氨基酸序列。
[0015] 在一具体实施例中，其中该P-113肽为一经修饰的P-113肽片段。在一较佳实施 例中，该修饰方式包含该P-113肽的重复序列、蛋白质加工、醣基化、羧基末端酰胺化或氨 基酸异构化。
[0016] 在另一具体实施例中，该P-113肽片段的吸湿率为30%至80%。在一较佳具体实 施例中，该P-113肽片段的吸湿率为40%至70%。
[0017] 在一具体实施例中，该P-113肽的保水率为70%至100%。在一较佳具体实施例中， 该P-113肽的保水率为80%至90%。
[0018] 在一具体实施例中，该P-113肽具有低致敏性及无细胞毒性。
[0019] 在另一具体实施例中，该P-113肽具有抗皱功能，其系透过抑制基质金属蛋白 酶-9(Matrix metallopoateinase-9，MMP_9)以降低皮肤上胶原蛋白的分解。因此该P-113 肽藉由降低皮肤上的胶原蛋白的分解，即抑制MMP-9的生成，以达到防止皮肤皱纹及老化 的产生。
[0020] 本文所述的化妆品，即含有上述P-113肽制成的化妆品产品，包含但不限于面膜、 洗面奶、去角质凝胶、化妆水、精华液、乳液、面霜或防晒乳等产品。在一具体实施例中，该化 妆品的剂型为面膜、洗面奶、去角质凝胶、精华液、化妆水、乳液、面霜或防晒乳。在一较佳具 体实施例中，该化妆品为选自由保湿剂、软膏、清洁剂、卸妆剂、化妆水、夜间护理剂、皮肤修 护剂、防晒剂、皮肤美白剂、有色粉底、眼影及美黑剂（tanner)所组成的群组的化妆品。因 此该P-113可作为配制成化妆品组成物，如柔肤化妆水、收敛化妆水、滋润乳液、滋养精华、 营养霜、按摩膏、精华素、眼霜、眼部精华、清洁霜、清洁泡沫、洁净水、化妆包、凝胶、化妆粉、 粉底，身体乳液、身体霜、按摩油、身体精华，或类似组成物。此外，它可配制成透皮配方，如 化妆水，药膏，凝胶，乳液，贴片或喷雾剂。依据一具体实例中，该化妆品组成物可用于滋润 皮肤。
[0021] 在一具体实施例中，该化妆品进一步包含其它有效的保养成份。在一较佳具体实 施例中，该化妆品进一步包含一精华液配方，其中该精华液配方包含天然保湿因子、保湿 剂、低碳醇类、乳化剂、润肤剂、高分子胶、植物萃取液或活性成份。在一更佳具体实施例中， 该精华液配方进一步包含一辅助成份，其中该辅助成份包含抗菌剂、防腐剂、螯合剂、酸碱 调和试剂或香精。
[0022] 本文中所提及的"天然保湿因子" 一词包含但不限于玻尿酸、PCA - NA等。"保 湿剂" 一词包含但不限于甘油（Glycerin)、1，3-丁二醇（Butylene Glycol)、丙二 醇（Propylene Glycol)、山梨醇（Sorbitol)等。"低碳醇类" 一词包含但不限于乙醇 (Ethanol)、异丙醇（Isopropyl alcohol)等。"乳化剂" 一词包含但不限于PEG-40氢化 蓖麻油（PEG-40 Hydrogenated castor oil)、三仙胶（Xanthum Gum)等。"润肤剂" 一 词包含但不限于精制天然油脂、乙氧基化酯类。"高分子胶" 一词包含但不限于水解胶原 蛋白（Hydrolyzed Collagen)、阿拉伯胶（Gum Arabic)、轻乙基纤维素 （Hydroxyethyl Cellulose，HEC)、聚丙稀酸（Carbopol 940)等。"活性成份"一词包含但不限于尿囊素 (Allantoin)、维生素 B5 (Panthenol)、辅酶 QlO 等。
[0023] 本发明所提供的含有P-113肽的化妆品，与其它现有技术相互比较时，更具有下 列优点。
[0024] (1)本发明的含有肽的皮肤保湿产品，为含有P-113肽片段成份的产品，其由一 富组蛋白（Histatin)上12个氨基酸所组成的活性肽，其为低致敏性及无细胞毒性，即代 表不会对皮肤造成伤害及过敏，可用于作为化妆品的成份。
[0025] (2)该P-113肽片段具有保湿及保水的功效，因此与其它保湿化妆品成分相互搭 配，更可加强其它保湿成分的保湿功效。而且该P-113肽片段因可抑制MMP-9的生成，故可 降低胶原蛋白的分解，而达到抗皱及防老的效果。
[0026] (3)本发明的化妆品除了包含肽之外，进一步包含化妆品活性成份及精华液配方 等，因此主要功效除了具有保湿及抗皱外，更因添加上述有效成份，用以加强其它复合功 效，如收敛、美白、抗老化、抗氧化或肌肤组织活化等。
【附图说明】
[0027] 图1为P-113与MI防腐剂的致敏性比较分析。
[0028] 图2为P-113肽与MI防腐剂的细胞存活率比较分析。
[0029] 图3为P-113肽的吸湿率的试验结果。
[0030] 图4为P-113肽的保水率的试验结果。
[0031] 图5为P-113肽对MMP-9的抑制效果。
[0032] 图6为本发明的含有肽的面膜的外观图。
【具体实施方式】
[0033] 本发明可能以不同的内容来实施，并不仅限于下列文中所提及的实例。下列实施 例仅作为本发明不同面向及特点中的代表。
[0034] (I)P-113 肽的制备 本发明中的P-113肽为人类唾腺的富组蛋白-5 (histatin-5)的氨基酸片段，即由富 组蛋白-5中12个氨基酸所组成，其序列为SEQ ID NO :1，其化学结构式如下：
〇
[0035] 而该P-113肽的氨基酸序列合成，系参考美国专利申请案第5631228号、第 5646119号、第5885965号与第5912230号等四项专利的实施内容来进行合成与制备。
[0036] (2) P-113肽的致敏性及细胞毒性分析 本发明藉由致敏性及细胞存活实验以研究该P-113肽的致敏性及细胞毒性问题。 P-113低致敏特性分析的实验原理是以去颗粒作用（degranulation)为嗜碱性白血球 (basophil)参与发炎反应的指标。当过敏反应发生，过敏原与嗜碱性白血球上的受体结 合，释放生理作用的媒介物，如：组胺（histamine)、肝素（heparin)、β-氨基己糖苷酶 (β -hexosaminidase)等物质。
[0037] 本发明利用大鼠嗜喊性球细胞株RBL-2H3 (Rat basophilic leukemia cell line)处理P-113肽与化妆品中常添加的防腐剂甲基异噻唑啉酮 (Methylisothiazolinone, MI)，以分光光度计（spectrophotometer)侦测 405 nm 波长， 分析过敏媒介物释放情形，以评估化妆品原料的致敏现象。
[0038] 化妆品原料若造成细胞致敏时，组胺与β -氨基己糖苷酶会大量释放，本发明以 低到高浓度（0、20、100与200 Pg/ml)的P-113肽以及MI防腐剂(浓度约0.01 %)处理 RBL-2H3细胞株，侦测其去颗粒化后的β -氨基己糖苷酶的释放指数，以此为致敏性结果 的依据。
[0039] 如图1所示，致敏性测试结果显示出处理低到高浓度的Ρ-113肽均不会有过敏反 应，与MI防腐剂相比，致敏程度更是非常低。现行经常使用的MI防腐剂亦只有个案指出 其具有刺激皮肤且引起过敏反应现象，而Ρ-113的致敏程度更是相对低很多，因此，由此 可见Ρ-113使用于化妆品中相当安全。
[0040] 细胞毒性试验是以MTT ( Methylthiazol tetrazolium bromide )分析法测试细 胞存活率方法进行。原理为MTT为一种可溶于水的黄色染剂，在与细胞作用后，会被细胞中 的NADPH还原为不溶于水的深藍色结晶，再将蓝色结晶以DMSO (dimethyl sulfoxide)溶 解，分析吸光值，细胞活性愈强则藍色越深，反之若细胞死亡则呈现黄色。
[0041] 本发明以低到高浓度（0、20、100与200 Pg/ml)的P-113肽以及MI防腐剂处 理细胞2小时，再加入MTT溶液作用，以分光光度计（spectrophotometer)侦测595 nm 波长，进行细胞存活率分析，判定化妆品原料对于细胞不良毒性影响。
[0042] 如图2所示，在细胞存活率分析中，在处理不同浓度P-113肽后，发现细胞不受 影响，仍有良好活性，而MI防腐剂则造成细胞存活下降。以MTT分析法评估结果，P-113 肽为不具细胞毒性的良好化妆品原料。故由上述结果可以得知该P-113肽为无致敏性及无 细胞毒性的成份。
[0043] (3) P-113肽的吸湿性与保水效能测定 P-113肽的吸湿性测定是以氯化镁(MgCl2)和氯化钾（KCl)两种盐类溶于水中，分别 以两种盐类的溶解度配制成过饱和溶液，分别置于密闭瓶中以创造出32%和84%的相对 湿度，取P-113肽与玻尿酸（hyaluronic acid)进行比较测试。玻尿酸的透明质分子能 携带500倍以上的水分，为现今公认的最佳保湿成分，广泛应用于化妆品与保养品。
[0044] 称取0· Ig p-113肽与玻尿酸粉末置于康威氏皿（Conway's dish)内室中，再于 外室加入饱和溶液，在康威氏皿盖子边缘涂油使之能完全密闭，置于30°C烘箱中24小时 后，取出样品秤重。
[0045] 在不同湿度下的吸湿率（Moisture absorption capacity )依下列公式进行计 算： 吸湿率（％)=[ (Wt-W0)/W0 ] X 100% 其中WO :起始的样品总重量（g)，而Wt :24小时后取出的样品重量（g)。
[0046] 如图3所示，以第一次试验的32%相对湿度的玻尿酸吸湿率为100%，再比较32% 与84%的相对湿度中的P-113肽与玻尿酸的吸湿率。P-113肽的吸湿率显示于32%，相对湿 度下为玻尿酸的70%，而在高相对湿度（84%)下亦有40%的吸湿率。
[0047] 另外，P-113肽的保水性测定与吸水性试验，亦以氯化镁和氯化钾两种盐类溶于 水中，分别以两种盐类的溶解度配制成过饱和溶液，分别置于密闭瓶中以创造出32%和84% 的相对湿度，取P-113肽与玻尿酸（hyaluronic acid)进行比较测试。
[0048] 称取0· Ig p-113肽与玻尿酸粉末置于康威氏皿（Conway's dish)内室中，再加 入0.1 ml去离子水，于外室加入饱和溶液，再以康威氏皿盖子密封，置于30°C烘箱中24 小时后，取出样品秤重。
[0049] 在不同湿度下的保水率（Moisture retention)依下列公式进行计算： 保水率（％)= [I-(Cfft-WO)/WO)] X 100% 其中WO :起始的样品总重量（g)，而Wt :24小时后取出的样品重量（g)。
[0050] 如图4所示，以第一次试验的32%相对湿度的玻尿酸保水率为100%，再比较32% 与84%的相对湿度中的P-113与玻尿酸的保水率。P-113肽的保水率，与玻尿酸比较，在 32%和84%的相对湿度下，均不比玻尿酸较差，表示P-113肽具有极佳的保水能力。故由 上述结果可以得知该P-113肽的吸湿率可达40%至70%，且保水率可达100%，与玻尿酸的效 果相似。
[0051] (4) P-113肽的防皱抗老测试 胶原蛋白为身体的主要结构蛋白，其由三条以紧密三螺旋形式卷绕在一起的蛋白链组 成以形成原纤维。原纤维于细胞外基质中交联以提供围绕细胞的结构骨架，其有助于支持 细胞形状及分化。网状胶原蛋白网络使细胞结合在一起，且提供其中细胞发育及起作用的 支持构架或环境。胶原蛋白的刺激为皮肤提供其强度、耐久性及光滑、丰润的外观。
[0052] 而基质金属蛋白酶中的MMP-9为第五型的胶原蛋白酶（type IV collagenase)、 明胶蛋白酶（gelatinase)或明胶蛋白酶B (gelatinase B，GELB)，其分子量为92 kDa。MMP-9会分解结缔组织的细胞外基质，如蛋白多醣（proteoglycan)、纤维结合素 (fibronectin)、层黏蛋白（laminin)、弹性蛋白（elastin)，以及胶原蛋白（collagen)，同 时胶原蛋白原（procollagen)的合成也会抑制，这些大分子被分解会使得皮肤产生皱纹、 老化。
[0053] 故本发明的P-113肽的抗皱力测试是以基质金属蛋白酶-9 (Matrix metallopoateinase-9, MMP-9)的酵素活性抑制试验进行。基质金属蛋白酶属于分泌及膜 结合锌的内肽酶（secreted and membrane-bound zinc endopeptidases)，能够分解细胞外 基质（extracellular matrix，ECM)〇
[0054] 测试MMP-9的酵素活性抑制活性，以评估P-113肽抗皱功效。本发明以 SensoLyte? 520 MMP-9 Assay Kit测试P-113肽抑制MMP-9的能力。如图5所示，其显 示P-113肽对MMP-9的抑制率，其ICM=3. 50±3. 89 mg/mL(详细数据请参见表一)。该结果 显示P-113肽对于MMP-9具有抑制活性，意即P-113肽能保护胶原蛋白及弹力蛋白等大分 子不被分解，而进一步达到防皱抗老的功效。
[00551 丟一 MMP-9蛋白_的柚制盡 (5) P-113肽在面膜上的应用
由上述实验可知P-113肽具有抗菌、保湿、低致敏及防皱护肤等功效，因此本发明将 P-113肽应用于面膜上。
[0056] 该如图6所示，本发明的一种含有肽的面膜10,其包含一面膜本体20,其中该面膜 本体20系呈对应人的脸部的形状，且包含对应于二个眼部、一鼻部、一 口部的复数个开口。
[0057] 该面膜本体20含有许多保养精华成分，其中主要保养精华成分为十二肽，即 由12个氨基酸所组成，其中该十二肽系P-113肽，其来自于人类唾腺的富组蛋白-5 (histatin-5)的片段。此外，该面膜本体20的主要保养精华成分进一步包含一化妆品活性 成份。而该面膜本体20除了主要保养精华成分外，亦进一步包含一精华液配方及一辅助成 份，可更进一步提供复合功效，如能给肌肤补充所需的水份营养及天然保湿，而达到真正的 肌肤活化重生，且水嫩弹性有光泽，及美白等美容功效。
[0058] 上列详细说明是本发明的一较佳实施方式的具体说明，然其并非用以限定本发 明，故任何本领域普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内作些许等效实施或变更， 均应包含在本发明的专利范围内。
【主权项】
1. 一种组合物在制备具有保湿功能的化妆品中的用途，其中该组合物包含一 P-113 肽，其中所述P-113肽具有SEQ ID NO :1的序列。2. 根据权利要求1所述的用途，其中该P-113肽选自于一富组蛋白-5。3. 根据权利要求1所述的用途，其中所述P-113肽的吸湿率为30%至80%。4. 根据权利要求1所述的用途，其中所述P-113肽的保水率为70%至100%。5. 根据权利要求1所述的用途，其中所述P-113肽具有抗皱功能，其通过抑制基质金 属蛋白酶-9以降低皮肤上胶原蛋白的分解。6. 根据权利要求1所述的用途，其中所述化妆品的剂型为面膜、洗面奶、去角质凝胶、 化妆水、乳液、面霜或防晒乳。7. 根据权利要求1所述的用途，其中所述化妆品为一医学美容化妆品。
【文档编号】A61K8/64GK105982825SQ201510080933
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月13日
【发明人】刘明山, 郑文琦
【申请人】普生股份有限公司