一种含有厄洛替尼和熊果酸的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用
【专利摘要】一种含有厄洛替尼和熊果酸的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明提供一种药物组合物，其中包含物质的量比为10?20:1?50的熊果酸与厄洛替尼。该药物组合物具有良好的抗肿瘤活性，通过将EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼与高效低毒的抗肿瘤天然产物熊果酸进行联合用药，其可降低组合物中药物的毒副作用，同时具备良好的抗增殖作用，最终提高治疗癌症的效果，可应用于制备抗肿瘤的药物领域。
【专利说明】
-种含有厄洛替尼和熊果酸的药物组合物及其在制备抗肿瘤 药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于抗癌药物领域，具体地，本发明设及厄洛替尼和熊果酸联合用于癌症 的治疗，特别是在抗肺癌中用途。
【背景技术】
[0002] 熊果酸即30-径基-熊果-12-締-28-酸（30-hy化ox}f-urs-12-en-28-〇ic acid， UA)，又名乌索酸、属于a-香树脂醇（a-amyrin)型五环Ξ祗类化合物，其相对分子量为 456.68,分子式为C30化地3,结果如式I所示，是自然界中分布较广的天然活性化合物，主要W 游离或糖巧的形式存在其广泛分布于批把叶、熊果、山植、白花蛇舌草等多种天然植物中， 也是许多传统中药的主要活性成分之一，具有广泛的药理作用，如抗癌、保肝、抗炎、抗病 毒、抗氧化等其中W抗癌活性最为显著，不仅对多种致癌物有抵抗作用，而且对多种肿瘤细 胞在体内、外均有抑制作用。因其副作用小，毒性低，显示出较大的临床应用潜力。近年来国 内外对UA的抗肿瘤研究日趋深入，并发现其在肿瘤预防、治疗W及防止晚期复发转移等方 面有着独特的优势及潜在的应用前景。专利Ν201510097801.9公开了一种含有熊果酸和环 憐酷胺的药物组合物，所述组合物既可W增强单组分的抗肿瘤药效，也能降低其对正常组 织的毒性，从而提高肿瘤治疗的效果，在肿瘤治疗领域具有很大的应用前景。专利 Ν03150714.Χ公开了熊果酸对人肝癌细胞、人乳腺癌细胞、人淋己瘤细胞、人成淋己细胞白 血病和人急性成淋己细胞白血病、人急性早幼粒白血病及人慢性髓性白血病都有细胞毒效 应。
[0003] 厄洛替尼(Erlotinb，简Ε1)，结构如式Π 所示，是近年来才上市的治疗晚期非小细 胞肺癌药物，在国际及国内肺癌指引中厄洛替尼均被列为晚期非小细胞肺癌二线治疗药物 之一，它是通过口服治疗非小细胞肺癌的祀向药物，厄洛替尼作为EGFR小分子酪氨酸激酶 抑制剂，因其有口服简便、副作用小、易于被患者接受而临床应用广泛。结构如图2所示。专 利N201510360703.X公开了苦鬼白毒和厄洛替尼联合用药用于肺癌的治疗，两者联合使用 后会产生协同抗肺癌作用；专利N 200680041064.x公开了将N-辛二酷苯胺异径朽酸和厄洛 替尼联合使用用于肺癌、乳腺癌、膜腺癌等多种癌症的治疗。
[0004] W不同类型肿瘤细胞作为研究对象，通过熊果酸和厄洛替尼进行联合用药，对不 同肿瘤细胞进行体外抗癌活性测试，结果表明，熊果酸和厄洛替尼的联合使用对癌细胞特 别是对非小细胞肺癌具有显著的增殖抑制作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的就是提供厄洛替尼和熊果酸联合抗肿瘤细胞增殖的用途，通过将 EGFR小分子酪氨酸激酶抑制剂厄洛替尼与高效低毒的抗肿瘤天然产物熊果酸进行联合用 药，考察其联合用药后对癌细胞的抗增殖作用，从而降低药物的毒副作用，最终提高治疗癌 症的效果，可应用于制备抗肿瘤的药物领域。
[0006] -种药物组合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于包含物质的量比为 10-20:1-50的熊果酸与厄洛替尼。
【附图说明】
[0007] 图1.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24h后对A549细胞增殖的抑制结果； 图2.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用48h后对A549细胞增殖的抑制结果； 图3.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用72h后对A549细胞增殖的抑制结果； 图4.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24h后对H1975细胞增殖的抑制结果； 图5.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用48h后对H1975细胞增殖的抑制结果； 图6.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用72h后对H1975细胞增殖的抑制结果； 图7.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24h后对H1299细胞增殖的抑制结果； 图8.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用48h后对H1299细胞增殖的抑制结果； 图9.熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用72h后对H1299细胞增殖的抑制结果。
【具体实施方式】
[000引为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合【具体实施方式】对本发明所述的 技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
[0009] 实施例1 熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24、48、72 h对A549细胞的增殖抑制作用:采用 标准Μ?Τ比色法测定了熊果酸和厄洛替尼不同联合比例对A549细胞株的增殖抑制活性。 [0010]将对数期的细胞，用膜酶消化后，细胞计数，配成SXloVml的细胞浓度，将制得的 细胞悬液，每孔100 μ1接种到96孔板，放于37°C、5% C〇2培养箱中；弃掉旧的培养基，每孔加 入100 μ1含有不同药物浓度梯度的培养基。置于37°C、5% 0)2培养箱中培养24、48和72 h， 弃掉含药培养基，每孔加入100 yl含有MTT(0.5 mg/ml)的无血清无酪红培养基，继续解育4 h;小屯、吸取各孔中的上清液，每孔加入DMSO 150 pL，摇床中振荡摇匀10 min,使蓝紫色结 晶全部溶解，酶标仪巧70 nm)测定各孔光吸收值(0D值），并计算细胞的存活率，结果如图1- 3所示：
[00川如图1所示，当药物作用24 h之后，熊果酸在10 μΜ的条件下，它抑制A549细胞增殖 的效果不明显；单用Ε1在>50 liM的条件下，能表现出明显的抑制Α549细胞的增殖;但当两 者联合用药时，当El^lO μΜ时就能表现出明显的抑制A549细胞增殖，且随着E1浓度的增大 抑制细胞的增殖越明显。如图2所示，当药物作用48 h之后，熊果酸在10 liM的条件细胞存活 率大约在70%左右;E1在>10 μΜ的条件下，能有效的抑制A549细胞的增殖;但联合给药的时 候当Ε1浓度>5 μΜ的条件下就能够明显的抑制细胞的增殖，两者联用可W起到协同的抑制 细胞的增殖；如图3所示，当药物作用72 h之后，熊果酸在10 μΜ的条件下细胞细胞死伤一 半;厄洛替尼>10 μΜ的条件下能够抑制Α549细胞的增殖;但两者联用之后厄洛替尼在>2 μΜ的条件就能够表现出明显的抑制细胞的增殖。综上结果可W发现，两者联合给药能够明 显降低Ε1的给药剂量，可W起到协同的抑制Α549细胞的增殖，且随着Ε1浓度的增大和作用 时间的延长抑制Α549细胞的增殖越明显。
[0012] 实施例2 采用金氏修正式计算熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h 对A549细胞的协同作用，筛选出最佳的药物配比，结果如表1-3所示。计算出UA=10 μΜ的条 件下对Α549细胞的抑制率为ΕΑ，计算出不同厄洛替尼浓度对Α549细胞的抑制率为邸1、邸2、 ΕΒ3等，再计算出两者联合给药在不同配比下对Α549细胞的抑制率分别为EC1、EC2、EC3等， 通过W下公式计算联合用药指数q值，q=EC/化B+EA-EB*EA)，当q值〉1.15为协同效应，0.85< q<l. 15为相加效应，q<0.85为括抗效应。通过上述联合用药指数的计算进一步判断两种药 物联合用药的最终药效。
[0013」
如表1-3所示，熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对A549 细胞当厄洛替尼在低浓度的条件下两者联药效基本为相加效应;当厄洛替尼在高浓度的条 件下两者联药效基本为协同效应，可W协同的抑制A549细胞的增殖，药物浓度越大，抑制越 明显。
[0014] 实施例3 熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24、48、72 h对H1975细胞的增殖抑制作用，步 骤同实施例1，结果如图4-6所示。
[001引如图4所示，当药物作用24 h之后，UA在10 μΜ的条件下，它抑制H1975细胞增殖的 效果不明显;厄洛替尼在>50 μΜ的条件下，才能表现出明显的抑制Η1975细胞的增殖;当两 者联合给药时厄洛替尼>10 μΜ的条件下就可W明显的抑制细胞的增殖;如图5所示，当药 物作用48 h之后，UA在10 μΜ的条件下能够有效的抑制细胞的增殖;单用厄洛替尼在>25 μ Μ条件下，可W有效的抑制细胞的增殖;但联合给药的时候，当厄洛替尼>5 μΜ的条件下就 能够明显的抑制细胞的增殖;如图6所示，当药物作用72 h之后，熊果酸在10 liM的条件下就 死伤过半；厄洛替尼>10 μΜ的条件下能够抑制H1975细胞的增殖；但联合给药时，抑制 Η1975细胞的杀伤比单用厄洛替尼来的强。综上结果可W发现，UA和Ε1联用能够明显降低厄 洛替尼的给药剂量，可W起到协同的抑制Η1975细胞的增殖，且呈浓度依赖性和时间依赖性 的抑制化975细胞的增殖。
[0016] 实施例4 采用金氏修正式计算UA和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对 H1975细胞的协同作用，筛选出最佳的药物配比，方法同实施例2,结果如表4-6所示。
[0017] 如表4-6所示，熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对 H1975细胞当厄洛替尼在低浓度的条件下两者联药效基本为相加效应；当厄洛替尼在高浓 度的条件下两者联药效基本为协同效应，可W协同的抑制H1975细胞的增殖，药物浓度越 大，抑制越明显。
[001引实施例5 熊果酸和厄洛替尼单独使用及联合使用24、48、72 h对H1299细胞的增殖抑制作用，步 骤同实施例1，结果如图7-9所示。
[0019]如图4所示，当药物作用24 h之后，UA在10 μΜ的条件下，它抑制H1299细胞增殖的 效果不明显;厄洛替尼在>50 μΜ的条件下，才能表现出明显的抑制Η1299细胞的增殖;当两 者联合给药时厄洛替尼>5 μΜ的条件下就可W明显的抑制细胞的增殖;如图5所示，当药物 作用48 h之后，UA在10 μΜ的条件下能够有效的抑制细胞的增殖;单用厄洛替尼在>25 μΜ 条件下，可W有效的抑制细胞的增殖;但联合给药的时候，当厄洛替尼>2 μΜ的条件下就能 够明显的抑制细胞的增殖;如图6所示，当药物作用72 h之后，熊果酸在10 μΜ的条件下就死 伤过半;厄洛替尼> 10 μΜ的条件下能够抑制Η1299细胞的增殖;但联合给药时，厄洛替尼> 1 liM的条件下能够有效的抑制Η1299细胞的增殖。综上结果可W发现，UA和化联用能够明显 降低厄洛替尼的给药剂量，可W起到协同的抑制H1299细胞的增殖，且呈浓度依赖性和时间 依赖性的抑制化299细胞的增殖。
[0020] 实施例6 采用金氏修正式计算UA和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对 H1299细胞的协同作用，筛选出最佳的药物配方法同实施例3,结果如表7-9所示。
[0021]如表7-9示，熊果酸和厄洛替尼两者联合给药在不同配比下作用24、48、72 h对 H1299细胞当厄洛替尼在低浓度的条件下两者联药效基本为相加效应；当厄洛替尼在高浓 度的条件下两者联药效基本为协同效应，可W协同的抑制H1299细胞的增殖，药物浓度越 大，抑制越明显D
【主权项】
1. 一种具有抗肿瘤活性的药物组合物，其特征在于包含物质的量比为10-20:1-50的熊 果酸与厄洛替尼。2. 如权利要求1所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
【文档编号】A61P35/00GK105998033SQ201610520707
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月5日
【发明人】邵敬伟, 郑桂容, 刘亚军, 江凯
【申请人】福州大学