桢楠挥发油提取物、其制备方法、用途及药物组合物的制作方法
【专利摘要】本发明属于中药或天然药物制药技术领域，具体公开了一种桢楠挥发油提取物，同时还公开了其制备方法、用途以及含有该桢楠挥发油提取物的药物组合物。该桢楠挥发油提取物，以桢楠木为原料，采用水蒸气蒸馏法对桢楠木进行提取，得到桢楠挥发油提取物粗品，桢楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃取，萃取所得的有机相经脱水、挥干溶剂，得到桢楠挥发油提取物。本发明提供的桢楠挥发油提取物是首次从桢楠木中提取得到的中药挥发油提取物，经研究发现其具有广谱的抗菌活性，可以进一步开发成抗菌药物。
【专利说明】
侦楠挥发油提取物、其制备方法、用途及药物组合物
技术领域
[0001] 本发明属于中药或天然药物制药技术领域，特别是设及一种侦楠挥发油提取物， 同时还设及其制备方法、用途W及含有该侦楠挥发油提取物的药物组合物。
【背景技术】
[0002] 侦楠是中国特有的珍贵木材，习称"金丝楠"，为精科植物侦楠 (PhoebezhennanS.Lee)的木质茎。侦楠树是常绿大乔木，幼枝有棱，被黄褐色或灰褐色柔 毛，二年生枝黑褐色，无毛。叶长圆形、长圆状倒披针形或窄楠圆形。树干通直，高可达30mW 上，胸径可达Im。树姿优美。既是上等的用材树种，又是极好的绿化树种。侦楠树分布区位于 亚热带常绿中霖区西部，气候溫暖湿润，年平均气溫17°C，1月平均气溫rC，年降水量1400- 1600毫米，±壤是黄壤。侦楠属国家二级保护植物，是我国的特产树种，主要分布于我国的 四川地区。
[0003] 目前还未见有关于侦楠药用研究的深入报道，本发明的目的拟在深入研究侦楠， 开发其药用效果，使侦楠发挥更大的经济价值和药用价值。
【发明内容】
[0004] 本发明解决的技术问题之一是:提供一种侦楠挥发油提取物，本发明提供的侦楠 挥发油提取物是首次从侦楠木中提取得到的中药挥发油提取物，经研究发现其具有广谱的 抗菌活性。
[0005] 本发明解决的技术问题之二是:提供一种侦楠挥发油提取物的制备方法，提取的 得率高，可用于工业化生产。
[0006] 本发明解决的技术问题之Ξ是:提供一种侦楠挥发油提取物的用途。
[0007] 本发明解决的技术问题之四是:提供一种含有侦楠挥发油提取物的药物组合物。 [000引为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案分别陈述如下。
[0009] -种侦楠挥发油提取物，W侦楠木为原料，采用水蒸气蒸馈法对所述侦楠木进行 提取，得到侦楠挥发油提取物粗品，所述侦楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃取，萃取所 得的有机相经脱水、挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。
[0010] 优选的，所述的有机溶剂任选自石油酸、乙酸、甲基叔下基酸、正己烧、环己烧、二 氯甲烧、乙酸乙醋、Ξ氯甲烧。
[0011] 进一步优选的，所述有机溶剂为石油酸。
[0012] 所述侦楠挥发油提取物为墨绿色，密度为0.87~0.93g/ml。提取工艺参数发生变 化时，会导致提取得到的侦楠挥发油提取物密度发生微小变化。
[0013] 进一步限定的，所述侦楠挥发油提取物的密度为0.90g/ml。
[0014] 本发明提供的一种侦楠挥发油提取物的制备方法，包括W下步骤：
[0015] S1:W侦楠木为原料，将所述侦楠木粉粹成侦楠木粉，将所述侦楠木粉放入水中浸 泡5~12小时，之后采用水蒸气蒸馈法进行提取，提取时间为5~10小时，得到侦楠挥发油提 取物粗品；
[0016] S2:所述侦楠挥发油提取物粗品用有机溶剂萃取，萃取得到的有机相经脱水干燥， 然后挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。
[0017] 优选的，所述侦楠木粉粒度为20~60目。
[001引优选的，所述侦楠木粉放入水中浸泡时，侦楠木粉与水的比例为1:8~1:12g/ml。
[0019] 本发明提供的侦楠挥发油提取物的用途为:侦楠挥发油提取物在制备抑菌药物中 的用途。
[0020] 其中，所述抑菌药物包括抑制革兰氏阳性菌的药物和抑制革兰氏阴性菌的药物。 [0021 ]优选的，所述革兰氏阳性菌包括金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌。
[0022] 优选的，所述革兰氏阴性菌包括大肠杆菌、铜绿假单胞菌。
[0023] 本发明还提供了一种药物组合物，其含有侦楠挥发油提取物和药学可接受的载 体。
[0024] 本发明运用中药挥发油提取技术对侦楠进行了深入研究，具体采用水蒸气蒸馈法 提取得到了侦楠挥发油提取物，提取挥发油的得率最高可达1.4006%，提取的得率高，可用 于工业化生产。
[0025] 对提取得到的侦楠挥发油提取物用于抗菌活性进行了评价。试验菌种包括革兰氏 阳性菌(金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌）、革兰氏阴性菌(大肠杆菌、铜绿假单 胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌)和真菌（白色念珠菌）。试验采用传统滤纸片扩散法测定侦楠挥发 油提取物对上述菌种的抑制活性。试验结果显示，侦楠挥发油提取物对革兰氏阳性菌和革 兰氏阴性菌有较好的抑制作用，即侦楠挥发油提取物有广谱的抗菌作用。侦楠挥发油提取 物对金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的抑菌圈分别 为11.2±1.0mm、10.5±0.5mm、15.5±0.5mm、9.2±l .8mm和8.6±1.5mm。
[0026] 进一步，还对侦楠挥发油提取物用于最小抑菌浓度进行了测定。试验菌种包括革 兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌、铜绿假 单胞菌。试验采用微量肉汤稀释法，所用材料有肉汤培养基、96孔板、移液器、立式蒸汽灭菌 锅、超净工作台和恒溫培养箱等。试验结果如下：侦楠挥发油提取物抑制金黄色葡萄球菌、 藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的最小浓度分别是18.5±1.5uL/mL、 15.5 ±1.加 L/mL、8.0 ± 0.加 L/mL、20.0 ± 2.OuL/mL、35.5 ± 0.加 L/mL。
[0027] 本发明的有益效果是:本发明提供的侦楠挥发油提取物是首次从侦楠木中提取得 到的中药挥发油提取物，经研究发现其具有广谱的抗菌活性，可W进一步开发成抗菌药物。
[0028] 本发明提供的侦楠挥发油提取物的制备方法，提取的得率高，可用于工业化生产。
[0029] 本发明研究了侦楠挥发油提取物的抑菌活性，其对五种常见的致病菌有抑制活 性，为下一步开发应用侦楠挥发油提取物提供了科学依据。可用于由金黄色葡萄球菌和大 肠杆菌等引起的病症。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合各实施例，对本发明的技术方案进行详细说明。
[0031] 实施例1
[0032] -种侦楠挥发油提取物，W侦楠木为原料，采用水蒸气蒸馈法对侦楠木进行提取， 得到侦楠挥发油提取物粗品，侦楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃取，萃取所得的有机 相经脱水、挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。
[0033] 侦楠挥发油提取物的制备方法，包括步骤：
[0034] S1: W侦楠木为原料，将侦楠木粉粹成侦楠木粉，侦楠木粉粒度为20目，将侦楠木 粉放入水中浸泡12小时，侦楠木粉放入水中浸泡时，侦楠木粉与水的比例为1: 8g/ml，即侦 楠木粉的质量(单位为g)与水的体积(单位为ml)比例为1:8,之后采用水蒸气蒸馈法进行提 取，提取时间为5小时，得到侦楠挥发油提取物粗品；
[0035] S2:侦楠挥发油提取物粗品用石油酸萃取两次，萃取得到的有机相合并，然后用无 水硫酸钢脱水干燥，再用旋转蒸发仪挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。所得侦楠挥发油提 取物为墨绿色。
[0036] 萃取所用的有机溶剂可W是任选自石油酸、乙酸、甲基叔下基酸、正己烧、环己烧、 二氯甲烧、乙酸乙醋、Ξ氯甲烧中的一种或两种。在本发明的实施例中选用了石油酸。
[0037] 实施例2
[0038] -种侦楠挥发油提取物，W侦楠木为原料，采用水蒸气蒸馈法对侦楠木进行提取， 得到侦楠挥发油提取物粗品，侦楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃取，萃取所得的有机 相经脱水、挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。
[0039] 侦楠挥发油提取物的制备方法，包括步骤：
[0040] S1: W侦楠木为原料，将侦楠木粉粹成侦楠木粉，侦楠木粉粒度为60目，将侦楠木 粉放入水中浸泡5小时，侦楠木粉放入水中浸泡时，侦楠木粉与水的比例为1:12g/ml，之后 采用水蒸气蒸馈法进行提取，提取时间为10小时，得到侦楠挥发油提取物粗品；
[0041 ] S2:侦楠挥发油提取物粗品用石油酸萃取两次，萃取得到的有机相合并，然后用无 水硫酸钢脱水干燥，再用旋转蒸发仪挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。所得侦楠挥发油提 取物为墨绿色。
[0042] 实施例3
[0043] -种侦楠挥发油提取物，W侦楠木为原料，采用水蒸气蒸馈法对侦楠木进行提取， 得到侦楠挥发油提取物粗品，侦楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃取，萃取所得的有机 相经脱水、挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。
[0044] 侦楠挥发油提取物的制备方法，包括步骤：
[0045] S1: W侦楠木为原料，将侦楠木粉粹成侦楠木粉，侦楠木粉粒度为40目，将侦楠木 粉放入水中浸泡8小时，侦楠木粉放入水中浸泡时，侦楠木粉与水的比例为1: lOg/ml，之后 采用水蒸气蒸馈法进行提取，提取时间为9小时，得到侦楠挥发油提取物粗品；
[0046] S2:侦楠挥发油提取物粗品用石油酸萃取两次，萃取得到的有机相合并，然后用无 水硫酸钢脱水干燥，再用旋转蒸发仪挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。所得侦楠挥发油提 取物为墨绿色。
[0047] 实施例4
[0048] -种侦楠挥发油提取物，W侦楠木为原料，采用水蒸气蒸馈法对侦楠木进行提取， 得到侦楠挥发油提取物粗品，侦楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃取，萃取所得的有机 相经脱水、挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。
[0049] 侦楠挥发油提取物的制备方法，包括步骤：
[0050] SI: W侦楠木为原料，将侦楠木粉粹成侦楠木粉，侦楠木粉粒度为60目，将侦楠木 粉放入水中浸泡8小时，侦楠木粉放入水中浸泡时，侦楠木粉与水的比例为1: lOg/ml，之后 采用水蒸气蒸馈法进行提取，提取时间为9小时，得到侦楠挥发油提取物粗品；
[0051 ] S2:侦楠挥发油提取物粗品用石油酸萃取两次，萃取得到的有机相合并，然后用无 水硫酸钢脱水干燥，再用旋转蒸发仪挥干溶剂，得到侦楠挥发油提取物。所得侦楠挥发油提 取物为墨绿色，密度为0.90g/ml。
[0052] 试验例1侦楠挥发油提取物提取方法的选择
[0053] 分别考察了超声提取法、溶剂萃取法和水蒸气蒸馈法。
[0054] 超声提取法:取侦楠木粉50.OOg，侦楠木粉粒度为40目，侦楠木粉与水的比例为1: lOg/ml，浸泡2小时，加热功率100W，加热时间1小时，提取两次。
[0055] 溶剂萃取法:取侦楠木粉50.OOg，侦楠木粉粒度为40目，侦楠木粉与水的比例为1: lOg/ml，浸泡10小时，加热回流提取3小时，萃取两次。
[0056] 水蒸气蒸馈法:取侦楠木粉50.0 Og，侦楠木粉粒度为40目，侦楠木粉与水的比例为 1: lOg/ml，浸泡10小时，水蒸气蒸馈6小时。
[0057] W上Ξ种方法所提侦楠挥发油提取物得率分别为:超声提取法0.7208%、溶剂萃 取法0.7198%、水蒸气蒸馈法1.0080%，比较可知水蒸气蒸馈法提取挥发油的得率最高，因 此本发明选择采用水蒸气蒸馈法进行侦楠挥发油提取物的提取。
[0058] 试验例2水蒸气蒸馈法提取侦楠挥发油提取物工艺参数的选择
[0059] 通过正交试验方法进行确定。正交试验选取侦楠粉碎程度、料液比（侦楠木粉与水 的比例，单位为g/ml)、浸泡时间、加热提取时间为考察因素，按照L9(34)正交设计表进行四 因素 Ξ水平试验。正交试验因素水平表见表1所示。正交试验结果见表2所示。
[0060] 表1正交试验因素水平表
[0061]
[0062] 表2正交试验结果
[0063]
[0064] 表2结果表明，采用水蒸气蒸馈法提取侦楠挥发油提取物最佳工艺条件为 D2C1B3A2，即侦楠粉碎至60目，料液比1:10，浸泡8小时，加热提取时间9小时，在此条件下，侦 楠挥发油提取物的得率最高。
[0065] 试验例3侦楠挥发油提取物的抑菌活性试验
[0066] 试验样品配制:取本发明实施例3提供的侦楠挥发油提取物，配制成lOOul/ml的侦 楠挥发油样品，过微孔滤膜备用。
[0067] 试验菌种:革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌）、革兰氏 阴性菌(大肠杆菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌)和真菌（白色念珠菌）。
[0068] 试验采用传统滤纸片扩散法测定侦楠挥发油提取物对各菌种的抑制活性。试验步 骤如下。
[0069] 配制培养基：取牛肉膏3g、蛋白腺lOg、氯化钢5g、琼脂15g、水1000ml，按照该配方 配制培养基；
[0070] 倒板:每板 15-20ml;
[0071] 菌悬液的配置:在超净台里将接种好的菌种注入适量生理盐水，用移液器吹打菌 落，转入EP管，离屯、，倾出上层生理盐水，加生理盐水，用麦氏比浊法配制1M的菌悬液；
[0072] 涂布:用移液器取lOOul菌悬液注入平板，放置lOmin，用涂布棒涂布均匀；
[0073] 贴片：设置平行组和空白对照组，用綴子把滤纸片贴在适当的位置，用移液枪取 lOul的侦楠挥发油样品滴在滤纸片上，轻压使其牢固；
[0074] 培养:倒置放入培养箱中培养，设定溫度37Γ，培养18小时记录结果。
[0075] 试验结果显示，侦楠挥发油提取物对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有较好的抑制 作用，即侦楠挥发油提取物有广谱的抗菌作用。侦楠挥发油提取物对金黄色葡萄球菌、藤黄 微球菌、枯草芽抱杆菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的抑菌圈分别为11.2±1.0mm、10.5± 0.5mm、15.5±0.5mm、9.2±l .8mm和8.6±1.5mm。
[0076] 进一步，还对侦楠挥发油提取物用于最小抑菌浓度进行了测定。试验菌种包括革 兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌和革兰氏阴性菌大肠杆菌、铜绿假 单胞菌。试验采用微量肉汤稀释法，所用材料有肉汤培养基、96孔板、移液器、立式蒸汽灭菌 锅、超净工作台和恒溫培养箱等。试验结果如下：侦楠挥发油提取物抑制金黄色葡萄球菌、 藤黄微球菌、枯草芽抱杆菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌的最小浓度分别是18.5±1.5uL/mL、 15.5 ±1.加 L/mL、8.0 ± 0.加 L/mL、20.0 ± 2.OuL/mL、35.5 ± 0.加 L/mL。
[0077] W上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发 明说明书内容所作的等效变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均包括在本发 明的专利保护范围内。
【主权项】
1. 一种桢楠挥发油提取物，其特征在于，以桢楠木为原料，采用水蒸气蒸馏法对所述桢 楠木进行提取，得到桢楠挥发油提取物粗品，所述桢楠挥发油提取物粗品再用有机溶剂萃 取，萃取所得的有机相经脱水、挥干溶剂，得到桢楠挥发油提取物。2. 根据权利要求1所述的桢楠挥发油提取物，其特征在于，所述的有机溶剂任选自石油 醚、乙醚、甲基叔丁基醚、正己烷、环己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、三氯甲烷。3. 根据权利要求2所述的桢楠挥发油提取物，其特征在于，所述有机溶剂为石油醚。4. 根据权利要求1-3任一所述的桢楠挥发油提取物，其特征在于，所述桢楠挥发油提取 物为墨绿色，密度为0.87~0.93g/ml。5. 根据权利要求4所述的桢楠挥发油提取物，其特征在于，所述桢楠挥发油提取物的密 度为 0.90g/ml。6. -种桢楠挥发油提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤： S1:以桢楠木为原料，将所述桢楠木粉粹成桢楠木粉，将所述桢楠木粉放入水中浸泡5 ~12小时，之后采用水蒸气蒸馏法进行提取，提取时间为5~10小时，得到桢楠挥发油提取 物粗品； S2:所述桢楠挥发油提取物粗品用有机溶剂萃取，萃取得到的有机相经脱水干燥，然后 挥干溶剂，得到桢楠挥发油提取物。7. 根据权利要求6所述的桢楠挥发油提取物的制备方法，其特征在于，所述桢楠木粉粒 度为20~60目。8. 根据权利要求6或7所述的桢楠挥发油提取物的制备方法，其特征在于，所述桢楠木 粉放入水中浸泡时，桢楠木粉与水的比例为1:8~1:12g/ml。9. 权利要求1-5任一所述的桢楠挥发油提取物在制备抑菌药物中的用途。10. 根据权利要求9所述的桢楠挥发油提取物的用途，其特征在于，所述抑菌药物包括 抑制革兰氏阳性菌的药物和抑制革兰氏阴性菌的药物。11. 根据权利要求10所述的桢楠挥发油提取物的用途，其特征在于，所述革兰氏阳性菌 包括金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、枯草芽孢杆菌。12. 根据权利要求10所述的桢楠挥发油提取物的用途，其特征在于，所述革兰氏阴性菌 包括大肠杆菌、铜绿假单胞菌。13. -种药物组合物，其特征在于，其含有权利要求1-5任一所述的桢楠挥发油提取物 和药学可接受的载体。
【文档编号】A61P31/04GK105998186SQ201610541080
【公开日】2016年10月12日
【申请日】2016年7月11日
【发明人】刘辉, 贾陆, 贾贝西, 张泽丹, 贾奥, 王雯雯, 李寅超, 刘玲
【申请人】河南蜀山金楠文化科技有限公司