一种紫荆总黄酮的制备方法及其应用
【专利摘要】本发明属于医药技术领域，具体涉及一种紫荆总黄酮的制备方法及其应用。其制备方法包括如下步骤：a.将紫荆皮干燥粉碎，过40目筛；b.微波?超声波提取；c.聚酰胺树脂柱纯化，乙醇洗脱，收集洗脱液；d.浓缩，干燥，即得紫荆总黄酮。经药效学评价，该提取物具有良好的抗氧化作用，可将其用于制备抗氧化的药品中，具有疗效显著、价格低廉、使用方便等优点，是开发新型高效的天然抗氧化剂的一个好选择。
【专利说明】
一种紫荆总黄酮的制备方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种紫荆总黄酮的制备方法及其应用。
【背景技术】
[0002] 自由基是人体生命活动中多种生化反应的中间代谢产物。细胞在正常的代谢过程 中，或者受到高能辐射，以及高压氧、药物、香烟烟雾和光化学空气污染等作用，都会产生自 由基。
[0003] 研究表明，自由基从产生到衰亡的过程就是电子转移的过程。在生命体系中，电子 的转移是一种最基本的运动，而氧的得电子能力很强，因此，生物体内许多化学反应都与氧 有关。研究发现损害人体健康的自由基几乎都与那些活性较强的含氧物质有关，与这些物 质相结合的自由基叫做活性氧自由基。活性氧自由基对人体的损害实际上是一种氧化过 程。因此，要降低自由基的损害，就要从抗氧化做起。
[0004] 紫荆，又名满条红，豆科紫荆属植物，为落叶乔木或大灌木。紫荆树皮和木材可入 药，具有活血行气，清热解毒，消肿止痛等功效。紫荆花可用于治疗风湿骨痛、鼻中疳疮。紫 荆果可用于治疗咳嗽。紫荆皮具有活血通经，消肿解毒等功效，可用于治疗风寒湿痹、妇女 经闭、血气疼痛、痈肿、跌打损伤、蛇虫咬伤等病症，是中医外科疮疡的要药。
[0005] 自然植物中广泛存在具有多种生理和药理活性黄酮类化合物，在生理学、医学和 营养学上都有较高的应用价值，特别是在心血管疾病的临床治疗方面显示了良好的生理药 理作用，具有扩张血管、强心且抗心律失常、防止心肌缺血、可有效地降低血脂、预防动脉粥 样硬化等多种作用，并且能有效抑制血小板聚集防止血栓形成。此外，黄酮类化合物还具有 较强的天然抗氧化性，及强有力的自由基清除性，还有抗病毒、抗癌、抗炎、抗衰老等多方面 的作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于寻求新型高效的天然抗氧化剂的开发利用，提供了一种紫荆总 黄酮的制备方法及其应用。
[0007] 本发明是通过如下技术方案完成的； a. 原料处理:将紫荆皮干燥粉碎，过40目筛； b. 微波-超声波提取:将原料置于微波-超声波装置中，加入原料重量3~5倍的60~70% 的乙醇溶液，控制超声波500W常开，微波功率600~800W提取1~2h，过滤，滤液减压浓缩得浓 缩液； c. 纯化:将步骤b中所得的浓缩液转入径高比为1:4~6的聚酰胺树脂柱，先用2~3倍柱 体积的蒸馏水洗脱，后用4~6倍柱体积的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液； d. 干燥:步骤c中所得的洗脱液浓缩，干燥，即得紫荆总黄酮。
[0008] 本发明获得的紫荆总黄酮在制备具有抗氧化作用的药物中的应用 本发明获得的紫荆总黄酮，通过对其抗脂质过氧化能力、清除超氧阴离子自由基Γ〇2)2 能力和清除DPPH自由基能力等指标的研究表明：紫荆总黄酮具有很强的抗脂质过氧化能 力，同时还可以有效清除超氧阴离子自由基和DPPH自由基。
[0009] 下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限 于下列实施方式。
[0010]
【具体实施方式】： 实施例1: 将紫荆皮干燥粉碎，过40目筛;将原料置于微波-超声波装置中，加入原料重量3倍的 60%的乙醇溶液，控制超声波500W常开，微波功率600W提取lh，过滤，滤液减压浓缩得浓缩 液;将所得的浓缩液转入径高比为1:4的聚酰胺树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用 4倍柱体积的80%的乙醇洗脱，收集洗脱液;将所得的洗脱液浓缩，干燥，即得紫荆总黄酮，以 芦丁为对照品经UV检测，其黄酮含量为70.08%。
[0011] 实施例2: 将紫荆皮干燥粉碎，过40目筛;将原料置于微波-超声波装置中，加入原料重量4倍的 70%的乙醇溶液，控制超声波500W常开，微波功率800W提取1.5h，过滤，滤液减压浓缩得浓缩 液;将所得的浓缩液转入径高比为1:6的聚酰胺树脂柱，先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用 5倍柱体积的60%的乙醇洗脱，收集洗脱液;将所得的洗脱液浓缩，干燥，即得紫荆总黄酮，以 芦丁为对照品经UV检测，其黄酮含量为71.69%。
[0012] 实施例3: 将紫荆皮干燥粉碎，过40目筛;将原料置于微波-超声波装置中，加入原料重量5倍的 65%的乙醇溶液，控制超声波500W常开，微波功率700W提取2h，过滤，滤液减压浓缩得浓缩 液;将所得的浓缩液转入径高比为1:5的聚酰胺树脂柱，先用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，后用 6倍柱体积的70%的乙醇洗脱，收集洗脱液;将所得的洗脱液浓缩，干燥，即得紫荆总黄酮，以 芦丁为对照品经UV检测，其黄酮含量为73.87%。
[0013] 具体药效学研究实验： 将lg上述3个实施例中所得的紫荆总黄酮，分别用30%的乙醇将其溶解定容在50mL容量 瓶中，记为A、B、C，备用。
[0014] a.抗脂质过氧化能力的测定 分别于样品管中依次加入lmL 1 Omg/mL卵磷脂溶液(LLS)、1 mL 0.4mmo 1 /L硫酸亚铁、 lmL上述A、B、C三个样品，混匀，避光于37°C水浴60min，加入2mL三氯乙酸(TCA)-硫代巴比妥 酸(TBA)-HCl混合液，90°0100°C水浴15min，迅速冷却，以3000r/min离心10min，取上清液 在535nm测吸光度(As)，参比管中以lmL蒸馏水代替lmL卵磷脂。抗坏血酸(VC)为阳性对照。 结果见表1。
[0015] 抑制率=[Ac_As/ Ac] X100% 式中:Ac为对照品（以蒸馏水代替样品）的吸光度； As为加入A、B、C三个样品时的吸光度。
[0016] 表1紫荆总黄酮抗脂质过氧化能力测定(?土 S)
紫荆总黄酮对Fe2+引发的卵磷脂脂质体过氧化有明显的抑制作用，抑制率随样品中总胃 黄酮含量的增加而增大。由表1可以看出，紫荆总黄酮抗脂质过氧化能力明显优于抗坏血 酸，且效果明显。
[0017] b.清除超氧阴离子自由基Γ〇2)2能力的测定 采用邻苯三酚自氧化法，取50mmol/L Tris-HCl缓冲溶液(ρΗ=8.2)4.5mL，置于25°C水 浴中预热20min，分别加入lmL样品和0.4mL 25mmol/L邻苯三酸溶液，混勾后于25°C水浴中 反应5min后，加入8mol/L HC1 0.8mL终止反应。自氧化管以lmL蒸馏水代替样品管中样品， 操作方法同样品管，在325nm处测定吸光值，以等体积pH值8.2的Tris-HCl缓冲液为空白。结 果见表2: 超氧阴离子的清除率zUtHU/Ao] X100% 式中:A〇为自氧化管的吸光度； Μ为样品管的吸光度。
[0018] 表2紫荆总黄酮清除超氧阴离子自由基能力测定（jt 土S)
由表2可以看出，，紫荆总黄酮对清除超氧阴离子自由基有较好的清除效果，清除率随 样品中总黄酮含量的增加而增大，紫荆总黄酮对超氧阴离子自由基的清除率尤为显著，明 显强于Vc(在浓度为lmg/mL时，清除率为71.34%)。
[0019] c.对DPPH自由基的清除作用 在试管中分别加入2 . 0 0 m L各浓度的紫荆总黄酮溶液，编号为A、B、C，加入 2. OOmLO. 2mml/LDPPH乙醇溶液，摇匀，放置30min，以2.OOmL无水乙醇代替样品和2.00mL70% 乙醇混合后作为参比，测定517nm波长处的吸光度(仏）。空白对照组以2.OOmL无水乙醇代替 样品，测定517nm波长处的吸光度(A〇)，同时测定2 · OOmL待测液与2 · OOmL无水乙醇在517nm 波长处的吸光度(Aj)。以Vc为对照品。结果见表3: DPPH自由基清除率按一下公式计算： 清除率=[Αο - (Ai-Aj)]/ ΑοΧΙΟΟ% 式中:A〇-不加黄酮的吸光值，Ai-测定液的吸光值，Aj-黄酮的本底吸光值。
[0020] 表3紫荆总黄酮对DPHH自由基能力测定（$±S)
' 从表3中可以看出，随着含量的增加，紫荆总黄酮清除DPPH自由基的能力随着浓度的增胃 大而增大，有明显的剂量依赖性，实验结果说明紫荆总黄酮是良好的质子供体，具有显著的 抗氧化作用。
【主权项】
1. 一种紫荆总黄酮的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： a. 原料处理:将紫荆皮干燥粉碎，过40目筛； b. 微波-超声波提取:将原料置于微波-超声波装置中，加入原料重量3~5倍的60~70% 的乙醇溶液，控制超声波500W常开，微波功率600~800W提取1~2h，过滤，滤液减压浓缩得浓 缩液； c. 纯化:将步骤b中所得的浓缩液转入径高比为1:4~6的聚酰胺树脂柱，先用2~3倍柱 体积的蒸馏水洗脱，后用4~6倍柱体积的60~80%的乙醇洗脱，收集洗脱液； d. 干燥:步骤c中所得的洗脱液浓缩，干燥，即得紫荆总黄酮。2. 根据权利要求1所述的紫荆总黄酮在制备抗氧化药物中的应用。
【文档编号】A61P39/06GK106038673SQ201610303293
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月10日
【发明人】杨成东
【申请人】南京泽朗医药科技有限公司