一种活细胞精华液的制备方法及其应用
【专利摘要】本发明公开了一种活细胞精华液的制备方法及其应用，所述活细胞精华液的制备方法，包括步骤：A）使用间充质干细胞培养基对脐带组织来源的间充质干细胞或胎盘组织来源的间充质干细胞进行培养，收集细胞培养液；B）向步骤A）所得细胞培养液中加入纯玫瑰花露，即得活细胞混合液。本发明所述的活细胞精华液的制备方法摆脱了传统的植物成分萃取和精细化工生产工艺，采用细胞工程的方法、通过培养人脐带组织来源的间充质干细胞获得含有亲人体皮肤的有益活性蛋白分子的间充质干细胞培养液，将所得细胞培养液作为整个产品充质干细胞混合液的基础配方，而且间充质干细胞混合液中不添加化工添加物，最大程度保证了产品持续使用的安全性。
【专利说明】
一种活细胞精华液的制备方法及其应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物技术领域，涉及一种活细胞精华液的制备方法及其应用。
[0002]
【背景技术】
[0003] 皮肤衰老的主要原因是皮肤失水和皮脂过氧化。随着年龄的增加，皮脂腺分泌逐 渐减少，加上日晒和游离基的不良作用，表皮逐渐变薄，表皮隆起，乳头体扁平，蛋白质生成 降低，皮下脂肪减少，容易造成下垂或皱纹，肤色晦暗；另一方面，皮肤的血流流通衰退，血 管抵抗力变弱，逐渐生成斑，导致皮肤的衰老。
[0004] 随着生活水平的提高，人民对美的追求，尤其是女性对日常生活护肤愈加重视。从 最初清洁和保护皮肤的功效，到现在带有生理功效甚至特别定制的化妆品，高安全性及更 科学性，将是未来的发展趋势。
[0005]
【发明内容】
[0006] 鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种活细胞混合液及其制备方法、美 容制剂，该美容制剂效果较好。
[0007] 本发明提供了一种抗衰美白的活细胞精华液，由有效成分和美容领域可接受的辅 料组成，所述有效成分包括人间充质干细胞细胞因子，所述辅料包括熊果苷、海藻糖、维生 素 E和甘油，步骤如下： (1)使用间充质干细胞培养基对脐带组织来源的间充质干细胞进行培养，收集细胞培 养液； (2 )向步骤(1)所得细胞培养液中加入体积比为20%--40%的纯玫瑰花露(纯玫瑰花露来 自广州市绿香岛日用品有限公司，批号N020160418)，即得活细胞混合液。
[0008] 所述人干细胞生长因子为分泌型人干细胞生长因子，包括碱性成纤维细胞生长因 子(bFGF)，角质细胞生长因子(KGF)，转化生长因子-m(TGF-m)，血管内皮生长因子(VEGF) 和胰岛素样生长因子(IGH中的至少两种。
[0009] 人干细胞生长因子浓度为1~40mg/ml。
[0010] 其中优选方案为：角质细胞生长因子的浓度为l〇mg/ml，碱性成纤维细胞生长因子 的浓度为8mg/ml，转化生长因子-β?的浓度为7mg/ml，血管内皮生长因子的浓度为10mg/ml， 胰岛素样生长因子的浓度为5mg/ml; 进一步的:还向步骤(2)所得细胞培养液中加入熊果苷、海藻糖、维生素 E和甘油。
[0011] 在所述间充质干细胞混合液中：熊果苷的浓度为l-5mg/ml;海藻糖的浓度为1-5mg/ml;维生素 E的浓度为l-5mg/ml，甘油的浓度为5-10mg/ml。
[0012 ]其中活细胞混合液的制备，更为具体的步骤为： (1)采集并获取新生儿脐带间充质干细胞：用含有青链霉素的生理盐水冲洗新生儿脐 带组织，剪成小块后铺在细胞培养皿中培养； (2 )细胞培养皿用多聚赖氨酸包被，自然晾干后使用； (3) 用原代培养基对将贴壁的干细胞进行原代培养，每三天更换一次细胞培养液，消化 细胞，消化结束后传代培养基进行终止消化，按贴壁面积1:3比例进行传代； (4) 收集细胞培养液，收集传代前的细胞培养上清液，得到细胞培养液； (5) 收集的细胞培养液经过过滤系统，滤去细胞碎片及微生物； (6) 所得培养液与玫瑰纯露混合，即得到所述的活细胞混合液;置于0-8 °C储存。
[0013] 由上述方法制备的间充质干细胞混合液，可以广泛应用于化妆品中。 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 细胞生长因子对多种细胞生理功能和代谢活动发挥生理调节作用，它们在体内含量极 微，但生物活性极高。在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合 中有重要作用。 细胞因子中富含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，角质细胞生长因子(KGF)，转化生长 因子-m(TGF-m)，血管内皮生长因子(VEGF)和胰岛素样生长因子(IGF)及其它多种营养物 质，作用是： 1、 提供营养:精华中含有皮肤日常需要的、足够的营养成分，给肌肤补充足够滋润； 2、 表皮生长因子与角质细胞因子、胰岛素样生长因子联合熊果苷促进皮肤的表皮层及 角质层增生分化，增强皮肤的厚度及弹性； 3、 血管内皮生长因子会促进表皮毛细血管的血供，调节浅表层的平衡状态，改善肌肤 缺水情况，起到锁水保湿的作用； 4、 成纤维细胞生长因子促进肌肤纤维的形成及胶原蛋白的填充，让肌肤更有光泽； 5、 有效抑制黑色素的形成，减淡瘢痕，延缓皮肤衰老。
[0014] 本产品不添加香精，因大部分含细胞因子的护肤品有轻微的血腥味，使用玫瑰纯 露可以遮盖血腥味，还有美白作用。
[0015] 本发明所述各原料的用量和理化性质产生协调作用，积极效果在于:修复细胞，美 白养颜。PH值与人体皮肤的PH值接近，对皮肤无刺激作用。使用后明显感到滋润、柔软，无油 腻感。对皮肤具有明显的美白滋润，护肤美容的效果。
[0016] 本发明间充质干细胞混合液摆脱了传统的植物成分萃取和精细化工生产工艺，采 用细胞工程的方法、通过培养人脐带组织来源的间充质干细胞获得含有亲人体皮肤的有益 活性蛋白分子的间充质干细胞培养液，将所得细胞培养液作为整个产品充质干细胞混合液 的基础配方，而且间充质干细胞混合液中不添加化工添加物，如：乙醇、铅汞、着色剂、矿物 油等致敏毒素，最大程度保证了产品持续使用的安全性。
[0017] 本发明在间充质干细胞混合液中加入熊果苷与维生素 E，微量熊果苷能刺激细胞 生长速度增快，提高皮肤真皮层组织细胞和成纤维细胞的分裂增殖力;维生素 E能让熊果苷 在精华液中更稳定，还有抗皱、抗老化作用;本发明在间充质干细胞混合液中含有碱性成纤 维细胞生长因子、角质细胞生长因子、转化生长因子-m，这几种生长因子具有强化皮肤屏 障防御机能、对抗自由基抗氧化的功效;其中的活性因子包括血管内皮生长因子、胰岛素样 生长因子，对于皮肤的美白补水修复具有更好的效果。本发明还特别添加海藻糖，其能够促 进皮肤内在胶原及弹性纤维产生、加强皮肤角质层细胞对外界环境的防御机能;本发明间 充质干细胞混合液中的各种配方成分互相协同，得以实现其最佳的皮肤保养效果。
[0018] 本发明间充质干细胞混合液的制备方法简单，可以进行大规模推广形成产业化生 产加工。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明： (1)使用间充质干细胞培养基对脐带组织来源的间充质干细胞进行培养，收集细胞培 养液； (2 )向步骤（1)所得细胞培养液中加入加入体积比为30%的纯玫瑰花露(纯玫瑰花露来 自广州市绿香岛日用品有限公司，批号N020160418)，即得活细胞混合液。
[0020] 进一步的:还向步骤(2)所得细胞培养液中加入熊果苷、海藻糖、维生素 E和甘油。
[0021] 步骤一:将熊果苷、维生素 E均匀分散在甘油中，然后将该混合物加热至50°C，全部 溶解； 步骤二:将干细胞混合液加热至37 °C解冻； 将步骤一物料缓慢加入至步骤二中的物料中，搅拌均匀后冷却出料。
[0022] 所述的活细胞精华液，其配方中的原料及重量比分别是：人干细胞生长因子浓度 为40mg/ml;熊果苷的浓度为5mg/ml;海藻糖的浓度为5mg/ml;维生素 E的浓度为5mg/ml，甘 油的浓度为l〇mg/ml。
[0023] 对比试验 选取30位25-55岁身体健康、无皮肤病的女性，随机分为实验组和对照组;试验前使试 验组和对照组的志愿者在室温20-25Γ，湿度40-60%的条件下，提前1小时进入测试环境中 安静待测，在测试对象的左右前手臂确定测试区域并提前20分钟暴露，面积大约30mmX 30mm； 使用TMT210TeWameter皮肤水分散失测试仪进行电容及水分经皮肤散失率测试，使用 SEM575型皮肤弹性检测仪进行皮肤弹性及紧实性检测，测试结果为初始值； 试验组使用活细胞精华液，对照组使用10%透明质酸钠溶液;使用方法分为早晚各涂 抹同一区域一次，连续使用28天。在试验第28天当天最后一次使用试验样品和对照品后，使 试验组和对照组的志愿者在室温20-25°C，湿度40-60%的环境中保持1小时，测定前20分钟 暴露受试验区域测试，测试结果为试验值； 对照组试验值与初始值进行比较，对照组的皮肤水分散失率增加了 14.29%;平均电容 增加了 1.8%;皮肤弹性增加6.3%;皮肤平均紧实性增加0.2%; 试验组试验值与初始值进行比较，试验组的皮肤水分散失率增加了 50%;平均电容增加 了 11%;皮肤弹性增加〇. 4%;皮肤平均紧实性增加4.5%。
[0024] 对照组试验结果：
试验组试验结果：
上述结果表明，活细胞精华液具有明显促进角质形成细胞生长繁殖的生理活性，能够 修复皮肤，增强皮肤的紧实性和弹性，可以产生抵抗皮肤衰老的效果。同时，活细胞精华液 中的细胞因子含有大量的极性基团，可以作为保湿因子，因而又具有阻止皮肤中的酪氨酸 转化为黑色素的作用，使皮肤保湿美白。
【主权项】
1. 一种活细胞精华液的制备方法，其特征是:包括以下步骤： A) 使用间充质干细胞培养基对脐带组织来源的间充质干细胞或胎盘组织来源的间充 质干细胞进行培养，收集细胞培养液； B) 向步骤A)所得细胞培养液中加入加入体积比为20%-40%的纯玫瑰花露，即得活细胞 混合液。2. 如要求1所述的活细胞精华液的制备方法，其特征是:所述干细胞培养基中的干细胞 生长因子为分泌型干细胞生长因子，为碱性成纤维细胞生长因子，角质细胞生长因子，转化 生长因子-m，血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子中的至少两种。3. 如权利要求2所述的活细胞精华液的制备方法，其特征是:干细胞生长因子浓度为1 ~40mg/ml〇4. 如权利要求3所述的活细胞精华液的制备方法，其特征是:所述干细胞生长因子包括 5种，其中角质细胞生长因子的浓度为10mg/ml，碱性成纤维细胞生长因子的浓度为8mg/ml， 转化生长因子-β?的浓度为7mg/ml，血管内皮生长因子的浓度为10mg/ml，胰岛素样生长因 子的浓度为5mg/ml。5. 如权利要求1所述的活细胞精华液的制备方法，其特征是:还包括步骤： C) 向步骤B)所得细胞培养液中加入熊果苷、海藻糖、维生素 E和甘油。6. 如权利要求5所述的活细胞精华液的制备方法，其特征是：所述熊果苷的浓度为1-5mg/ml，海藻糖的浓度为l-5mg/ml，维生素 E的浓度为l-5mg/ml，甘油的浓度为5-10mg/ml。7. 根据权利要求1所述的一种活细胞混合液的制备方法，其特征在于： 所述A)步骤包括： A1)采集并获取新生儿脐带间充质干细胞：用含有青链霉素的生理盐水冲洗新生儿脐 带组织，剪成小块后铺在细胞培养皿中培养； A2)细胞培养皿用多聚赖氨酸包被，自然晾干后使用； A3)用原代培养基对将贴壁的干细胞进行原代培养，每三天更换一次细胞培养液，消化 细胞，消化结束后传代培养基进行终止消化，按贴壁面积1:3比例进行传代； A4)收集细胞培养液，收集传代前的细胞培养上清液，得到细胞培养液； A5)收集的细胞培养液经过过滤系统，滤去细胞碎片及微生物。8. -种美容制剂，其特征是，所述美容制剂包括权利要求1-7任一项所述制备方法制备 而来的活细胞混合液。
【文档编号】A61K8/97GK106074356SQ201610633526
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年8月4日 公开号201610633526.2, CN 106074356 A, CN 106074356A, CN 201610633526, CN-A-106074356, CN106074356 A, CN106074356A, CN201610633526, CN201610633526.2
【发明人】方珍, 王宇环, 罗晓玲
【申请人】深圳市合一康生物科技股份有限公司