专利名称：发酵芳酸果烟用香料及其制备方法
技术领域：
本发明涉及烟用香料的制取方法，属于烟草技术领域，具体地说是以芳酸果为原料利用微生物发酵技术生产的特色烟用香料以用它的制备方法。
背景技术：
在烟草制品中，烟草的香气和吸味是至关重要的，向消费者提供一些香气和吸味满意的卷烟制品是烟草行业产品设计者追求的目标。目前，我国烟草中添加的烟用香料大多是采用传统的方法配制的，即以天然提取物单体和合成单体混合调配而成，这样所制得的烟用香料虽然生产操作简单，但存在香气单调、对烟草改善性不足，容易被模仿，而且改善卷烟抽吸品质效果不明显等缺点。
芳酸果为鼠李科枣属植物，学名毛叶枣(Zizyphus mauritiana)，也叫滇刺枣、西西枣、西西果、茅利枣、棉枣、印度枣、南枣、缅枣(广西、云南)、酸枣(广东、云南)、柿枣、麻荷(傣语)等，也俗称苹果枣、金苹枣、台湾枣、台湾青枣、台湾甜枣等，原产小亚细亚南部、北非、印度南部一带，常绿小乔木或大灌木。树冠为自然开心形，枝干发达，斜上侧生。叶片互生呈椭圆形或心脏形，叶面浓绿色具光泽，叶背密生白色绒毛，叶缘锯齿，为腋生聚伞花序花，两性花，黄绿色，属虫媒花，靠蜜蜂、蚂蚁及蝇类传粉，花期在7～9月份，最适宜生长温度为20℃～35℃。果实为核果，圆球形、椭圆形或橄榄形，绿色、淡绿色或金黄色，是一种热带、南亚热带名优水果。芳酸果是一种速生、早实、丰产、质优(脆、甜)，冬春淡季上市的优质果树，具有较高的经济价值。芳酸果在我国分布较广，大部分热带地区均有野生种分布。果实成熟主要在水果淡季的12～3月份，可作为调节淡季水果市场供求矛盾的主要果树之一，是值得开发利用的重要新型野生热带果树树种。近年来云南、海南、广东、广西、福建、四川等省的热带、亚热带地区相继从台湾引进大果乃至特大果型的良种，并表现良好。当前，芳酸果已为一种新兴的的水果，倍受消费者青睐，种植热潮正在逐渐兴起。芳酸果是我国南方枣种，果实椭圆型，生食清脆爽口、营养丰富、风味独特，有牛奶香味，有“热带小苹果”之称，因有“日食三枣，长生不老”之誉，所以又被名为“长寿果”。果实颜色为青黄色、赤褐色，鲜味香甜、清脆可口、营养丰富，属上等天然保健果品。其碳水化合物含量最高，维生素C及磷、钙和铁含量较高。枣果是高品位药、食两用佳品，鲜食、蒸食或煎汁饮均味道鲜美，是理想的补血强身食品。有治疗高血压、贫血、眩晕虚弱、营养不良等作用，用于烹调配料对强身健体、调理气血有独到功效。
目前所采用的天然烟用香料多为香料植物的直接萃取物，而以芳酸果为原料利用微生物发酵技术生产特色烟用香料的方法未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供以芳酸果为原料利用微生物发酵技术生产的特色烟用香料及其制备方法。该香料具有酸香、酿甜香韵等特征，添加在卷烟或烟草薄片中具有降低刺激，改善余味，增加甜润，使烟香柔和绵长的作用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的本发明的发酵芳酸果烟用香料由以下方法制备而得方法之一1、芳酸果的固态发酵①菌种活化取微生物菌株，接种于准备好的培养基斜面上，在恒温培养箱中，于20℃～35℃培养12～36h；或用10～50倍30℃～40℃温水(加入2％的葡萄糖或蔗糖)活化20～30min，得到活化菌种；②配制种子液取上述活化菌种，接种于一级种子培养基(MM培养基，115℃～121℃灭菌15～30min)，于20℃～35℃培养1～5d，得到一级种子；取一级种子，接种于二级种子培养基(MM培养基，115℃～121℃灭菌15～30min)，接种比例为一级种子∶二级种子液＝1∶5～15(W/W)，在室温或20℃～35℃下培养3～5d，得到二级种子；③原料处理选取芳酸果做原料，经干燥、粉碎后得到芳酸果粗粉；在115℃～121℃灭菌15～60min，得到无菌芳酸果粗粉；④固体发酵将培养好的二级种子接种于无菌芳酸果粗粉中，接种比例为二级种子液∶无菌芳酸果粗粉＝1∶1～10(W/W)，使固体与液体充分混合均匀，将接种好的芳酸果置于室温或20℃～35℃下密闭发酵5～12d；2、提取精制取发酵好的芳酸果，加入一定量的萃取溶剂提取，其物料比为，固体发酵物∶萃取溶剂＝1∶1～10(W/W)，热回流提取2次，每次1～3h，提取液过滤后，减压浓缩成浸膏；加入萃取溶剂，膏体∶萃取溶剂＝1∶1～5(W/W)，使膏体充分回溶，在4℃～-20℃下静置冷冻6～24h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
方法之二1、芳酸果的液态发酵①菌种活化取微生物菌种，接种于准备好的培养基斜面上，在恒温培养箱中，于20℃～40℃培养12～36h，再接种于MM培养基(115℃～121℃灭菌15～30min)，于20℃～40℃培养1～5d，得到活化菌种；或用10～50倍30℃～40℃温水(先加入2％的葡萄糖或蔗糖)活化20～30min，得到活化菌液。
②芳酸果提取液选取干燥的芳酸果做原料，粉碎后，加入一定量的萃取溶剂提取，其物料比为，芳酸果∶萃取溶剂＝1∶1～10(W/W)，热回流提取1～3h，过滤，得到芳酸果提取液。
③液体发酵将活化好菌液接种于芳酸果提取液中，接种比例为活化菌液∶芳酸果提取液＝1∶20～200(W/W)，搅拌均匀后，置于室温或20℃～35℃下密闭发酵5～12d。
2、浓缩精制取发酵好的芳酸果发酵液，灭活后过滤，减压浓缩成浸膏；加入萃取溶剂，膏体∶萃取溶剂＝1∶1～5(W/W)，使膏体充分回溶，在4℃～-20℃下静置冷冻6～24h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
本发明所述的产香微生物菌种为芽孢杆菌、根霉、曲霉、啤酒酵母、南阳酵母、K字酵母、汉逊氏酵母等中的一种或几种，菌种可为菌曲或菌液形式。
本发明所述的微生物培养基为牛肉膏蛋白胨培养基、查氏培养基、PDA培养基、MM培养基[营养液成分磷酸氢二钾(K2HPO4·3H2O)、硫酸铵((NH4)2SO4)、柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)、硫酸镁(MgSO4·2H2O)、葡萄糖]等中的一种或几种，培养基可为固体或液体形式。
本发明所述的萃取溶剂为水、醇类(乙醇、丙二醇)、水与醇类的复合溶剂(水与乙醇或丙二醇的复合溶剂)。
本发明与现有技术比较具有以下优点本发明的香料对卷烟的香气和吸味品质改善作用效果明显，香气逼真，强度高，与烟香协调。本发明的方法工艺过程简单易行，设备简单，可直接用于卷烟加香加料，生产的产品可溶性好，便于推广应用。本发明所用的原料来源广泛，成本低，价值低廉。
具体实施例方式
实施例1用固态发酵方法制备发酵芳酸果烟用香料。
①菌种活化取芽孢杆菌，接种于准备好的牛肉膏蛋白胨培养基(或查氏培养基或PDA培养基)斜面上，在恒温培养箱中，于25℃培养24h，得到活化菌种；②配制种子液取上述活化菌种，接种于一级种子培养基(MM培养基，115℃灭菌30min)，于28℃培养3d，得到一级种子；取一级种子，接种于二级种子培养基(MM培养基，115℃灭菌30min)，接种比例为一级种子∶二级种子液＝1∶5(W/W)，在室温或25℃下培养3～5d，得到二级种子；③原料处理选取芳酸果做原料，经干燥、粉碎后得到芳酸果粗粉，在115℃灭菌50min，得到无菌芳酸果粗粉；④固体发酵将培养好的二级种子接种于无菌芳酸果粗粉中，接种比例为二级种子液∶无菌芳酸果粗粉＝1∶2(W/W)，使固体与液体充分混合均匀；将接种好的芳酸果置于室温或25℃下密闭发酵7d。
⑤提取精制取发酵好的芳酸果500g，加入2000g的水提取[其物料比为，固体发酵物∶水＝1∶4(W/W)]，热回流提取2次，每次2h，提取液过滤后，减压浓缩成浸膏(为原料重量的50％)，按膏体∶萃取剂＝1∶5(W/W)加入95％乙醇(萃取剂)，使膏体充分回溶，在-20℃下静置冷冻12h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
实施例2用固态发酵方法制备发酵芳酸果烟用香料。
①菌种活化取根霉菌株，接种于准备好的牛肉膏蛋白胨培养基(或PDA培养基)斜面上，在恒温培养箱中，于30℃培养24h，得到活化菌种1；取啤酒酵母、南阳酵母、K字酵母、汉逊氏酵母各5g，用100ml·30～40℃温水，加入2％的葡萄糖或蔗糖，活化20～30min，得到活化菌种2；②配制种子液取活化两接种环菌种1、10mL活化菌种2，接种于一级种子培养基--MM培养基，121℃灭菌15min，于25℃培养3d，得到一级种子；取一级种子，接种于二级种子培养基，用MM培养基，121℃灭菌15min，接种比例为一级种子∶二级种子液＝1∶15(W/W)，在室温或30℃下培养5d，得到二级种子；③原料处理选取芳酸果做原料，经干燥、粉碎后得到芳酸果粗粉，121℃灭菌30min，得到无菌芳酸果粗粉；④固体发酵将培养好的二级种子接种于无菌芳酸果粗粉中，接种比例为二级种子液∶无菌芳酸果粗粉＝1∶10(W/W)，使固体与液体充分混合均匀，将接种好的芳酸果置于室温或25℃下密闭发酵7d。
⑤提取精制取发酵好的芳酸果500g，加入5000g的水提取[其物料比为，固体发酵物∶水＝1∶10(W/W)]，热回流提取2次，每次2h，提取液过滤后，减压浓缩成浸膏(为原料重量的50％)，按膏体∶萃取剂＝1∶3(W/W)加入95％乙醇萃取剂，使膏体充分回溶，在-10℃下静置冷冻20h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
实施例3用液态发酵方法制备发酵芳酸果烟用香料。
①菌种活化取芽孢杆菌菌种，接种于准备好的牛肉膏蛋白胨培养基、查氏培养基(或PDA培养基)斜面上，在恒温培养箱中，于28℃培养24h，再接种于MM培养基(121℃灭菌15min)，于28℃培养3d，得到活化菌种；②芳酸果提取液选取1000g干燥的芳酸果做原料，粉碎后，加入5000ml的水提取，热回流提取3h，过滤，得到芳酸果提取液；④液体发酵将活化好菌液100ml接种于芳酸果提取液中，搅拌均匀后，置于室温或30℃下密闭发酵7d；⑤浓缩精制取发酵好的芳酸果发酵液，灭活后过滤，减压浓缩成浸膏；加入95％乙醇，膏体∶95％乙醇＝1∶5(W/W)，使膏体充分回溶，在-20℃下静置冷冻6～24h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
实施例4液态发酵①菌种活化取根霉、曲霉菌种，分别接种于准备好的牛肉膏蛋白胨培养基(或PDA培养基)斜面上，在恒温培养箱中，于30℃培养24h，再各接入两接种环菌种于MM培养液(115℃灭菌30min)，于30℃培养3d，得到活化菌液1；用啤酒酵母0.5g、南阳酵母0.5g、K字酵母0.5g、汉逊氏酵母0.5g经500ml、30℃温水(先加入2％的葡萄糖或蔗糖)活化20～30min，得到活化菌液2；②芳酸果提取液选取1000g干燥的芳酸果做原料，粉碎后，加入9000g的水提取，热回流提取3h，过滤，得到芳酸果提取液；④液体发酵将活化好菌液1和活化菌液2各取45mL接种于芳酸果提取液中，搅拌均匀后，置于室温下密闭发酵7d；⑤浓缩精制取发酵好的芳酸果发酵液，灭活后过滤，减压浓缩成浸膏(为原料重量的50％)，加入95％乙醇，膏体∶95％乙醇＝1∶3(W/W)，使膏体充分回溶，在-20℃下静置冷冻24h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
权利要求
1.一种发酵芳酸果烟用香料，其特征在于由以下方法制备而得1)芳酸果的固态发酵①菌种活化取微生物菌株，接种于准备好的培养基斜面上，在恒温培养箱中，于20℃～35℃培养12～36h；或用10～50倍30℃～40℃温水，先加入2％的葡萄糖或蔗糖，活化20～30min，得到活化菌种；②配制种子液取步骤①的活化菌株，接种于一级种子培养基，于20℃～35℃培养1～5d，得到一级种子；取一级种子，接种于二级种子培养基，接种比例为重量比的一级种子∶二级种子液＝1∶5～15，在室温或20℃～35℃下培养3～5d，得到二级种子；③原料处理选取芳酸果做原料，经干燥、粉碎后得到芳酸果粗粉；在115℃～121℃灭菌15～60min，得到无菌芳酸果粗粉；④固体发酵将培养好的二级种子接种于无菌芳酸果粗粉中，接种比例为重量比的二级种子液∶无菌芳酸果粗粉＝1∶1～10，使固体与液体充分混合均匀，将接种好的芳酸果置于室温或20℃～35℃下密闭发酵5～12d；2)提取精制取发酵好的芳酸果，加入一定量的萃取溶剂提取，其物料比为，固体发酵物∶萃取溶剂＝1∶1～10重量比，热回流提取2次，每次1～3h，提取液过滤后，减压浓缩成浸膏；加入萃取溶剂，膏体∶萃取溶剂＝1∶1～5重量比，使膏体充分回溶，在4℃～-20℃下静置冷冻6～24h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料；或者1)芳酸果的液态发酵①菌种活化取微生物菌种，接种于准备好的培养基斜面上，在恒温培养箱中，于20℃～40℃培养12～36h，再接种于MM培养基，于20℃～40℃培养1～5d，得到活化菌种；或用10～50倍30℃～40℃温水，先加入2％的葡萄糖或蔗糖，活化20～30min，得到活化菌液；②芳酸果提取液选取干燥的芳酸果做原料，粉碎后，加入一定量的萃取溶剂提取，其物料比为重量比，芳酸果∶萃取溶剂＝1∶1～10，热回流提取1～3h，过滤，得到芳酸果提取液；③液体发酵将活化好菌液接种于芳酸果提取液中，接种比例为重量比的活化菌液∶芳酸果提取液＝1∶20～200，搅拌均匀后，置于室温或20℃～35℃下密闭发酵5～12d；2)浓缩精制取发酵好的芳酸果发酵液，灭活后过滤，减压浓缩成浸膏；加入萃取溶剂，膏体∶萃取溶剂＝1∶1～5重量比，使膏体充分回溶，在4℃～-20℃下静置冷冻6～24h，过滤，减压浓缩即得发酵芳酸果烟用香料。
2.按权利要求1所述的发酵芳酸果烟用香料，其特征在于所述的方法中微生物菌种为芽孢杆菌、根霉、曲霉、啤酒酵母、南阳酵母、K字酵母、汉逊氏酵母中的一种或几种，菌种可为菌曲或菌液形式。
3.按权利要求1所述的发酵芳酸果烟用香料，其特征在于所述的方法中的微生物培养基为牛肉膏蛋白胨培养基、查氏培养基、PDA培养基、MM培养基中的一种或几种，培养基可为固体或液体形式。
4.按权利要求1所述的发酵芳酸果烟用香料，其特征在于所述的方法中的萃取溶剂为水、醇类、水与醇类的复合溶剂。
全文摘要
本发明是一种发酵芳酸果烟用香料及其制备方法。它是由以下方法制备而得1)芳酸果的固态发酵法经菌种活化、配制种子液、制备一级种子及二级种子、将芳酸果粗粉进行固态发酵，取发酵好的芳酸果提取精制后，得发酵芳酸果烟用香料；2)芳酸果的液态发酵法经菌种活化、制备酸果提取液、芳酸果提取液的液体发酵后，浓缩精制，得发酵芳酸果烟用香料。本发明的香料对卷烟的香气和吸味品质改善作用效果明显，香气逼真，强度高，与烟香协调。本发明的方法工艺过程简单易行，设备简单，可直接用于卷烟加香加料，生产的产品可溶性好，便于推广应用。本发明所用的原料来源广泛，成本低，价值低廉。
文档编号C11B9/00GK1903088SQ20061004860
公开日2007年1月31日 申请日期2006年8月7日 优先权日2006年8月7日
发明者林瑜, 陈永宽, 蒋美红, 刘坚, 端李祥, 王松峰, 杨黎华, 范志伟 申请人:云南瑞升烟草技术(集团)有限公司