Mntf肽的化妆和皮肤病制剂的制作方法

专利名称：Mntf肽的化妆和皮肤病制剂的制作方法
MNTF肽的化妆和皮肤病制剂相关申请的交叉引用本申请要求2008年2月21日提交的题为“运动神经营养因子肽的化妆和皮肤病 制剂”的美国临时专利申请No. 61/066，670的优先权，其内容通过引用整体并入本文。
背景技术：
本公开内容总的涉及化妆和皮肤病制剂，其包含改善皮肤外观、减少或抑制皮肤 的环境损伤或所述的一些组合的肽。紫外线辐射(UV)是皮肤(皮肤(cutaneous))衰老的主要致病因素。已报道反复 暴露于紫外线辐射(例如阳光)可引起皮肤过早老化(被称为“光_衰老”的疾病)(John J. Voorhees, New England J. Med, Nov. 13，1997)。光衰老皮肤的特征在于皱纹、褐斑的存 在、色素沉着和/或表面粗糙度的变化。所述变化不是皮肤组织自然、正常衰老过程的一部 分。另外，暴露于环境因素(如烟雾、饮酒、烟草和应激)也可导致皮肤的过早衰老。此外， 与各种皮肤损伤(如割伤，烧伤)及皮肤疾病(如皮肤感染，痤疮)相关的发炎反应也导致 皮肤的过早衰老。化妆工业正不断寻找新型成分以对抗皮肤过早衰老的不良反应及方法以减少与 疑似处的皮肤发炎相关的不良反应。因此，需要具有新型的化妆和/或皮肤病组合物以对 抗与皮肤过早衰老相关的疾病。UV和自由基引起的皮肤衰老的一般方面有对于导致皮肤过早老化的皮肤中累积的细胞损伤的各种致病因素。其中所述的 为由UV光(例如阳光)、烟雾、毒素、香烟烟雾、X射线、药物和其他环境应激所致的氧化过 程和相关的自由基损伤。尽管可使用防晒霜来减少皮肤癌和日光灼伤，但其不可完全防止 皮肤光衰老，因为日光灼伤和光衰老可为不同类型的紫外(例如UVA、UVB、UVC)线及由某种 UV引起的活性氧诱发损伤的所致。通常而言，当皮肤受到所述的潜在损伤变化时，有细胞修复和/或更新的足够细 胞能量三磷酸腺苷(ATP)。然而，随着个人年龄增大，提供抗氧化活性的酶(如超氧化物歧 化酶(SOD)和过氧化氢酶)变得越来越少，其导致可减轻自由基、活性氧和/或过氧化物的 抗氧化酶的减少。手、脸、颈部和臂之类的器官为长期暴露于光下的区域，且所述阳光下的 连续暴露可导致真皮层中自由基的产生。某些皮肤成分对自由基诱导的氧化应激或伴随和/或随后真皮中发炎改变尤其 敏感。皮肤蛋白胶原对自由基损伤和由此产生的胶原交联尤其敏感。胶原交联的特征在于 正常的弹性/流动性的胶原转变为僵硬和缺乏弹性/流动性。其结果为衰老的外观(例如 皱纹)和在皮肤中减少的张力。另外，痤疮的存在也与自由基/过氧化物产生有关。本领域认为抗氧化剂能给自由基赠送一个电子，这可稳定自由基且停止化学反应 链和潜在损伤。以相似的方式，抗氧化剂可预防自由基损伤，这可减慢衰老过程。已发现胚胎运动神经元的存活取决于源自相关的发育中骨骼肌的特定营养物质。 已报道某些骨骼肌产生能够通过预防胚胎运动神经元的衰退和随后的自然细胞死亡来增
4强运动神经元存活和发育的物质。这些物质被广泛称为神经营养因子(NTF)，其为对选定 神经元群的存活、生长、维持及功能性能力起促进作用的一类专化蛋白质(例如Chau，et al.，1990，Chin. J Neuroanat. 6 129)。US6309877、US7183373、US6841531、US6759389 和 US20060052299 公开了运动神经 元营养因子(MNTF)，其为对运动神经元显示营养作用的肽。
发明概述本发明源自MNTF肽和MNTF肽类似物的意外发现，当其被施用给皮肤时可抑制和 减少光损伤、氧化损伤、皱纹及皮肤衰老和相关疾病的其他症状。可使用所述肽来改善皮肤 的外观，如通过改善皮肤色调、减少疤痕、减少或抑制瘢痕疙瘩形成及促进皮肤再生。本发明描述了显示出所述特性的衍生化和非衍生化形式的新型MNTF肽。本公开 内容也描述了其他地方描述的也显示出所述特性的MNTF肽的使用。在一实施方式中，本发 明涉及局部组合物，其包含具有至少含SEQ ID NO 1的残基17和18的氨基酸序列及化妆 学、皮肤病学或药学可接受载质的MNTF肽。在局部组合物的某些实施方式中，MNTF肽或其 类似物选自SEQ ID NO :1 SEQ ID NO :27或它们的功能衍生物。在局部组合物的某些实 施方式中，MNTF肽或其类似物选自SEQ ID NO :2和8 21的任一个或它们的功能衍生物。在一实施方式中，MNTF肽或其类似物通过与渗透增强剂共价键合而被N-末端修 饰，由此所述组合物渗透进皮肤的能力被提高。渗透增强剂可包含亲脂性部分。一合适的 增强剂为2 22碳的脂肪酸链，其中所述脂肪酸链被羟基化或非羟基化、饱和或不饱和、 线性化或分支化、硫化或非硫化、环化或非环化，或生物素基，或选自苄氧羰基(Z)、叔丁氧 羰基(tBoc)、9-芴甲基氧基羰基(Fmoc)和烯丙氧基-羰基(Alloc)的保护基。优选的作 为渗透增强剂有用的脂肪酸和它们的盐包括、但不限于=Cabrylic酸、油酸、月桂酸、癸酸、 辛酸、己酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、戊酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、油酸、反油酸、芥 酸、神经酸。从约2 22碳的烷基链也为合适的渗透增强剂。同样提供组合物，其中MOTT^ii)被包裹于选自下列的载体中巨囊、微囊、纳米 囊、脂质体、乳糜微粒和微海绵，或ii)被吸附于选自下列的材料上粉状有机聚合物、滑 石、皂粘土及其他矿物支持物，或iii)与选自下列的其他成分混合提取的脂质、蔬菜提取 物、脂溶性有效成分、水溶性有效成分、无水凝胶、乳化聚合物、表面张力活性聚合物、合成 的脂质、凝胶化聚合物、组织提取物、海洋提取物、维生素A、维生素C、维生素D、维生素E、太 阳光过滤剂和抗氧化剂。优选本文提供的MNTF组合物包含对于促进皮肤的恢复或保护而言有效量的MNTF 肽。可用化妆学、皮肤学或药学可接受的载质，优选作为局部制剂施用所述组合物。本发明包括为化妆、抗发炎、抗氧化损伤、抗光衰老或抗皱纹的目的或所述目的的 一些结合施用包含MNTF肽或其类似物的组合物的方法。本发明另一方面涉及通过施用MNTF组合物恢复或保护皮肤的方法。所述方法还 包括减少或抑制光损伤相关的发炎或自由基损伤、减少皮肤中过氧化物或自由基的产生、 减少皱纹、改善皮肤色调、减少UV或光损伤、促进皮肤再生。本发明另一方面涉及通过以对改善或减少所述痤疮疤痕而言的有效量局部施用 MNTF组合物而改善痤疮疤痕的方法。本发明另一方面涉及通过以对减少所述瘢痕疙瘩形成而言的有效量施用MNTF组合物而减少受试者中的瘢痕疙瘩形成的方法。MNTF肽和MNTF肽类似物基于序列SEQ ID NO :1，其为在其他地方已公开的33聚体肽(即33个残基的多肽)。如本文所述，在本文所 述的组合物和方法中有用的MNTF肽和MNTF肽类似物优选包括SEQ IDNO 1的少至2个和 多至全部33个连续氨基酸残基。在一优选的实施方式中，本文所述的MNTF肽和MNTF肽类 似物至少包含在SEQID NO 1的残基17和18处存在的FS残基。在另一实施方式中，所述MNTF肽或其类似物包含SEQ ID NO=I的苯丙氨酸-丝氨 酸二肽和SEQ ID NO :1中的1 30个额外的氨基酸、任选具有在SEQ ID NO :1中所述序列 的1 5个连续氨基酸取代的所述MNTF肽或其类似物、或酯、酰胺、前药和/或它们的盐形 式。在其他的实施方式中，MNTF肽由i)SEQ ID NO 1的2个和6个之间的连续氨基酸； ii)SEQ ID NO :1的2个和5个之间的连续氨基酸；iii) SEQ ID NO :1的3个和5个之间的 连续氨基酸；iv) SEQID NO 1的至少2个连续氨基酸；v) SEQ ID NO 1的至少3个连续氨基 酸；或vi)它们中任一项的类似物，例如i) ν)中任一项的功能衍生物构成。在i)、iv) 和ν)中所述MNTF肽不具有由SEQ IDNO 2构成的氨基酸序列。通过举例，合适的MNTF肽 和MNTF肽类似物可具有SEQ ID NO :1 27中任一个的氨基酸序列。LGTFffGDTLN CWMLSAFSRY ARCLAEGHDG PTQ(SEQID NO 1)FSRYAR (SEQ ID NO 2)WMLSAFS(SEQ ID NO 3)MLSAFSRYAR(SEQ ID NO 4)FSRYARCLAE G(SEQ ID NO 5)CWMLSAFSRY ARC(SEQ ID NO 6)MLSAFSRYAR CLAEGHDGPT Q (SEQ ID NO 7)FS (SEQ ID NO :8)FSR (SEQ ID NO :9)AFS (SEQ ID NO : 10)FSRY (SEQ ID NO : 11)SAFS (SEQ ID NO : 12)AFSR (SEQ ID NO : 13)LSAFS (SEQ ID NO : 14)SAFSR (SEQ ID NO : 15)AFSRY (SEQ ID NO : 16)FSRYA (SEQ ID NO : 17)MLSAFS(SEQ ID NO: 18)LSAFSR(SEQ ID NO: 19)SAFSRY (SEQ ID NO 20)AFSRYA(SEQ ID NO 21)SRYAR (SEQ ID NO : 22)RYAR (SEQ ID NO : 23)YAR (SEQ ID NO : 24)
6
SRYA (SEQ ID NO 25)RYA (SEQ ID NO : 26)SRY (SEQ ID NO : 27)


图1为示在人瘢痕疙瘩成纤维细胞应答本文所述的MNTF肽(Pal-六肽)的增殖 中的剂量性依赖性减少/抑制的条形图。图2A为示可显示本文所述MNTF分子(Pal-六肽)对角质形成细胞中Y -干扰素 依赖性的一氧化氮产生(即发炎的指标)的抑制/减少的作用的剂量依赖性数据的条形 图。图2B为示由本文所述的MNTF六肽的角质形成细胞中一氧化氮产生减少的条形图。图3A为示可显示本文所述MNTF分子(Pal-六肽)对内源和外源性细胞过氧化物 水平(即抗氧化能力的指标)的抑制/减少的作用的剂量依赖性数据的条形图。图3B为 示由本文所述的MNTF六肽的内源和外源性细胞过氧化物水平的减少的条形图。图4A为比较如通过UV (UVA)诱导的β-胡萝卜素的自由基漂白的减少(即抗氧化 能力的指标)所测量的对应于胡萝卜素(菱形)和对应于本文所述的MNTF肽(Pal-六 肽，三角形)的色指数的坐标图。图4B为比较如通过测量β-胡萝卜素的漂白的减少所测 量的对应于胡萝卜素(菱形)和对应于本文所述的MNTF六肽(“肽”，三角形)的色指 数的坐标图。图5为示棕榈酰化MNTF六肽(图5Α)和非棕榈酰化MNTF六肽(图5Β)对刺激成 纤维细胞中透明质酸的作用的条形图。发明详述本公开内容涉及包含MNTF肽(即MNTF蛋白的一部分，其已之前被描述为显示出 神经营养活性)的组合物具有重要的皮肤病和化妆用途的意外发现。所述组合物包括化妆 学及皮肤病学可接受的组合物(例如本文所述的MNTF肽的局部应用制剂)。本文公开了源自显示出化妆学和皮肤病学有益特性的MNTF的肽。本文所述肽可 选地和可互换地被称为“MNTF肽”及“表皮因子肽”。描述了制备和使用包括一种或多种所 述肽的组合物的方法，所述组合物对于化妆和皮肤病目的有用。本公开内容包括对减少皱纹、痤疮和其他皮肤疤痕的外观是有效的组合物。所述 组合物对刺激胶原更新、改善皮肤张力(即其软化皮肤、紧致皮肤或两者)、还改善皮肤外 观(例如皮肤光泽)、氧化和辐射引发的皮肤损伤是有用的。可给皮肤局部施用本文所述组合物来刺激皮肤成纤维细胞的产生以达到各种化 妆和皮肤病疗效。所述施用可重建表皮基质分子、通过刺激胶原的产生和增厚表皮来再生 皮肤的上层、抑制触发发炎的炎症介质(如白介素)、及另外抑制或预防对皮肤的氧化和发 炎损伤。暴露于有害辐射(例如UV光或阳光)可引起在真皮层中炎症介质(如白介素) 的释放，其可导致活性炎症物质的创建及在皮肤和邻近组织中发炎。当对受试者的皮肤局 部使用本文所述组合物时，其显示出抗发炎、抗氧化(例如抗自由基)特性。本公开内容包括保护皮肤以免出现衰老症状(例如与暴露于UV光有关的衰老症 状)的方法。所述方法包括对皮肤使用包含本文所述MNTF肽或其类似物的制剂。例如，所述组合物提供保护以防出现与紫外光的UV-A、UV-B和UV-C类型有关的症状。可使用本文所述组合物来抑制、预防或减少皮肤中的化妆或皮肤病变化。所述使 用包括对皮肤使用本文所述的MNTF肽或其类似物，优选以化妆或皮肤病制剂。可被抑制、 减少或预防的皮肤的化妆和皮肤病学变化包括在皮肤的外观和/或张力中的变化，例如皱 纹和褐斑的发展。可使用本文所述组合物来促进皮肤水化和用于一般的皮肤护理(即普通的皮肤 保养)。所述组合物可在被使用组合物的皮肤中抑制、减少或预防日光灼伤、皱纹、光损伤、 痤疮、与皮肤衰老有关的其他疾病、日光性皮肤病(heliodermia)、自由基损伤、及发炎。在一实施方式中，本公开内容涉及包含本文所述组合物、用其涂或用其浸渍的化 妆或皮肤病擦(例如垫，小毛巾、拭子、或其他吸收性材料)。所述擦是用于给皮肤局部施用 本文所述化合物的方便装置。MNTF肽及其类似物本文所述化妆和皮肤病化合物包括至少一种MNTF肽或其类似物。在本公开内容 所述的用于所述目的的MNTF肽和其类似物包括氨基酸序列SEQ ID NO 1代表的部分MNTF 分子的至少两个连续氨基酸残基。在一优选的实施方式中，所述肽至少包含在SEQ ID NO 1的残基17和18处存在的FS (苯丙氨酸和丝氨酸)残基。肽和其类似物可在FS残基的氨 基-末端或羧基-末端上包含SEQ ID NO :1的更多连续氨基酸残基。合适的MNTF肽的例 子包括在美国专利No. 6，309，877、美国专利No. 7，183，373、美国专利No. 6，841，531、美国 专利No. 6，759，389、和美国专利申请公开No. 2006/0052299中报道的例子。本文所述MNTF肽和其肽类似物包括源自MNTF的肽(即具有SEQ ID NO=I的两 个或更多个连续残基的肽)和所述肽的功能衍生物。MNTF肽的合适例子包括具有SEQ ID NO :1 27之一的氨基酸序列的肽及所述肽的功能衍生物。可以盐、酯和其他普通的剂型 使用MNTF肽和其类似物。合适的类似物包括例如其中一个或多个氨基酸残基被非天然存 在的(例如D-异构体)氨基酸残基取代的肽。其他类似物包括其中SEQ ID N0:1的一个 或多个氨基酸残基被如表I、II和III所述的同义氨基酸残基取代的肽。表I
同义氨基酸的优选组
氨基酸I同义组
SerSer > Thr > Gly、Asn
ArgArg、Gin、Lys> Glu、His
LeuIle、Phe、Tyr、Met、Val、Leu
ProGly、Ala、Thr、Pro
ThrPro、Ser> Ala、Gly、His、Gin、Thr
AlaGly、Thr、Pro、Ala
ValMet、Tyr、Phe、lie、Leu、Val
GlyAla、Thr、Pro、Ser>Gly
IleMet、Tyr、Phe、Val、Leu、lie
PheTrp> Met> Tyr> lie、Val、Leu、Phe
TyrTrp、Met、Phe、lie、Val、Leu、Tyr
8
CysSer λ Thr λ Cys
HisGlu、Lysλ Gin、Thr、Arg-
GlnGlu、Lys、Asn、His、Thr.
AsnGin、Asp、Serλ Asn
LysGlu、Gin、His、Arg、Lys
AspGlu、Asn、Asp
GluAsp、Lys、Asn、Gin、His
MetPheλ lie、VaK Leu、Met
TrpTrp
表II
同义氨基酸的更优选组
氨基酸同义组
SerSer
ArgHis、Lysλ Arg
LeuIle、Phe、Met、Leu
ProAla、Pro
ThrThr
AlaPro、Ala
ValMet、lie、Val
GlyGly
IleIle、Met、Phe、Val、Leu
PheMet、Tyrλ lie、Leu、Phe
TyrPheλ Tyr
CysSerλ Cys
HisArgλ Gin、His
GlnGlu、His、Gln
AsnAsp、Asn
LysArg、Lys
AspAsn、Asp
GluGin、Glu
MetPhe> lie、Val> Leu、Met
TrpTrp
表III
同义氨基酸的最优选组
氨基酸同义组
SerSer
ArgArg
LeuIle、Met、Leu
ProPro
明书
6/24 页
9
Thr ThrAla Ala
Val ValGly Glylie Ile、Met、LeuPhe PheTyr TyrCys Ser、CysHis HisGln GlnAsn AsnLys LysAsp AspGlu GluMet lie、Leu、MetTrp Trp本文所述MNTF肽及MNTF肽类似物的氨基酸残基可为天然存在或合成的氨基酸残 基。可在化合物中利用氨基酸残基的L-和D-对映体。本文对氨基酸残基使用下列缩写 丙氨酸(Ala，A)；精氨酸(Arg，R)；天冬酰胺(Asn，N)；天冬氨酸(Asp，D)；半胱氨酸(Cys， C)；甘氨酸(Gly，G)；谷氨酸(Glu，E)；谷氨酰胺(Gln，Q)；组氨酸(His，H)；异亮氨酸(lie， I)；亮氨酸(Leu，L)；赖氨酸(Lys，K)；蛋氨酸(Met，Μ)；苯丙氨酸(Phe，F)；脯氨酸(Pro， P)；丝氨酸(Ser,S)；苏氨酸(Thr，T)；色氨酸(Trp，W)；酪氨酸(Tyr，Y)及缬氨酸(ValjV)0不天然存在并可在本发明化合物中存在的氨基酸残基包括β -丙氨酸(b-Ala) 和其他ω-氨基酸(如3-氨基丙酸(Dap)、2，3-二氨基丙酸(Dpr，Z)、4_氨基丁酸等)、 α -氨基异丁酸(Aib)、ε -氨基己酸(Aha)、δ -氨基戊酸(Ava)、甲基甘氨酸(MeGly)、鸟 氨酸(Orn)、瓜氨酸(Cit)、叔丁基丙氨酸(t-BuA)、叔丁基甘氨酸(t_BuG)、N_甲基异亮氨酸 (MeIle)、苯基甘氨酸(Phg)、环己丙氨酸(Cha)、正亮氨酸(Nle, J)、2_萘丙氨酸(2_Nal)、 4_氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))、2-氟苯丙氨酸(Phe (2-F))、3_氟苯丙氨酸(Phe (3-F))、4_氟 苯丙氨酸(Phe(4-F))、青霉胺(Pen)、1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)、β _2_噻吩丙 氨酸(Thi)、蛋氨酸亚砜(MSO)、高精氨酸(hArg)、N-乙酰赖氨酸(AcLys)、2，3-二氨基丁酸 (Dab)、2，3-二氨基丁酸(Dbu)、对氨基苯基丙氨酸(Phe (pNH2))、N_甲基缬氨酸(MeVal)、高 半胱氨酸(hCys)、3-苯并噻唑-2-基-丙氨酸(BztAla，B)和高丝氨酸(hSer)。涉及的更 多氨基酸类似物包括磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、羟脯氨酸、Y-羧基谷氨酸、 马尿酸、八氢吲哚-2-羧酸、抑胃酶氨酸、α -甲基-丙氨酸、对_苯甲酰_苯基丙氨酸、炔 丙基甘氨酸和肌氨酸。可互相取代的氨基酸通常属于相似的类或亚类。如本领域任一技术人员所知，主 要取决于所述氨基酸侧链的化学和物理特性而将氨基酸分进不同类中。例如，通常认为一 些氨基酸为亲水性或极性氨基酸而认为其他的为疏水性或非极性氨基酸。极性氨基酸包 括有酸性、碱性或亲水性侧链的氨基酸而非极性氨基酸包括有芳香族或疏水性侧链的氨基酸。可进一步将非极性氨基酸细分成包括尤其是脂肪族氨基酸。
可通过常规的化学合成(固相或液相合成)或通过酶法合成从组成型氨基酸或它 们的衍生物获得本文所述的化妆组合物实施方式。^JL阐述了在本公开内容所属的技术中使用的某些术语。除另有说明外，在本文和随 附的权利要求中使用时下列术语具有下列含义。本文术语“盐”指本发明所述肽或其类似物的羧基盐和氨基的酸加成盐。可通过 本领域已知的方法形成羧基盐，且其包括无机盐(例如钠、钙、铵、铁或锌盐等)和与有机碱 (例如，与胺(如三乙醇胺、精氨酸或赖氨酸、哌啶、普鲁卡因等))所形成的盐。酸性盐包 括，例如与无机酸(如盐酸或硫酸)的盐和与有机酸(如醋酸或草酸)的盐。当然，所述的 任何盐必须保留本发明的肽或其类似物的活性。本申请所用“类似物”包括已被修饰但保留MNTF活性(例如相对于33聚体MNTF， SEQ ID NO: 1，通过截短、取代、共价连接至另一部分等)的肽。MNTF肽类似物包括例如MNTF 肽的酯、酰胺、前药和盐形式。MNTF肽类似物包括通过连接至另一部分而被共价修饰的 MNTF肽，例如将MNTF肽共价连接至亲脂部分(例如脂肪酸)、载质分子或异源多肽以产生 融合蛋白。在某些实施方式中，本发明所述的类似物包括“保守”取代(例如相对于SEQ ID NO :1)。保守的氨基酸取代包括使用同组内的同义氨基酸的氨基酸替换，其具有足够相似的 物理化学特性即组成员间的取代会保持分子的生物学功能(Grantham，Science, Vol. 185， pp. 862-864(1974))。MNTF肽类似物还包含本文所述的肽或类似物的MNTF功能衍生物。在 一些实施方式中，与在SEQ ID NO 1或其截短形式(包括SEQ ID NO :2 22)所示的序列 相比，所述MNTF类似物包括20 %、25 %、30 %、35 %或多达40 %的保守氨基酸取代。本文所用定义“功能衍生物”指依据已知方法从氨基酸部分侧链或末端的N-或 C-基上存在的功能基制备的衍生物，且当其为化妆学可接受时即当其不破坏蛋白活性或不 把不可接受的毒性给予包含它们的化妆组合物时其被包含在本公开内容中。所述衍生物包 括例如羧基的脂肪酯或酰胺和游离氨基的N-酰基衍生物、及游离羟基的0-酰基衍生物和 用酰基形成的例如链烷酰基或芳酰基、前药、功能基的盐或它们的组合。可通过对MNTF肽 进行共价修饰来制备功能衍生物。通过靶氨基酸与能与选定的侧链或末端残基反应的有机 衍生化试剂间的反应将共价修饰引入至肽中。使用有机衍生化试剂共价修饰多肽为本领域 技术人员所熟知。例如，用α-卤代乙酸(和相应的胺)(如氯乙酸或氯乙酰胺)与半胱氨 酰残基反应以给出羧甲基或甲酰氨基甲基衍生物。可通过与ΡΗ5. 5 7. 0的焦碳酸二乙酯 或与ΡΗ6的对溴苯酰甲基溴在IM二甲胂酸钠溶液中反应而将组氨酰残基衍生化。赖氨酰和 氨末端残基可与琥珀酸或其他羧酸酐反应。可通过与苯甲酰甲醛、2，3_ 丁二酮、1，2_环己 二酮、茚三酮之中的一种或多种常规试剂的反应修饰精氨酰残基。通过与芳香族重氮化合 物或四硝基甲烷反应将谱标记引入至酪氨酰残基；最常见的是，使用N-乙酰咪唑和四硝基 甲烷来分别形成0-乙酰酪氨酰类和3-硝基衍生物。可通过与碳二亚胺类(R’-N-C-N-R’) (如1-环己基-3- (2-吗啉-(4-乙基)碳二亚胺或1-乙基-3 (4氮鐺4，4- 二甲基戊基) 碳二亚胺)反应来选择性地修饰羧基侧基(天冬氨酰或谷氨酰)。此外，通过与铵离子反应 使天冬氨酰和谷氨酰残基转换成天冬酰胺酰或谷氨酰胺酰残基。谷氨酰胺酰和天冬酰胺酰 残基可被去酰胺至相应的谷氨酰和天冬氨酰残基。其他修饰包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α “氨基的甲基 化(Τ.Ε.Creighton, 1983, Proteins Structure and Molecule Properties, W. H.Freeman & Co.，San Francisco, pp. 79-86)，N-末端胺的乙酰化和在一些情况下、C-末端羧基的酰胺化。本文所用术语“生物活性肽”和“生物活性片段”指依据上述运动神经元分化因子 (MNDF)和/或运动神经元营养因子(MNTF)的肽或多肽，其中MNDF可使干细胞分化成运动 神经元，而其中MNTF显示出神经保护、修复和治疗功能。本文所用术语“蛋白”指如当键合至一个氨基酸的α -C的羧酸基的羧基碳原子被 共价结合至邻近的氨基酸残基的氨基氮原子时所发生，经肽键连接的两个或更多个独立氨 基酸残基(无论是否为天然存在)的任何聚合物。所述肽键键合和包含它们(即α-C原 子、羧基C原子(及它们的取代氧原子)和氨基N原子(及它们的取代氢原子))的原子形 成蛋白的“多肽骨架”。另外，认为本文所用术语“蛋白”包括术语“多肽”和“肽”(它们可 在本文互换使用)。术语蛋白的“片段”指包含少于蛋白的全部氨基酸残基的多肽。蛋白的 “结构域”也为片段，且包含蛋白通常所需的氨基酸残基以赋予活性或功能。“抑制”指在频率、范围、程度或持久性上的减少。因此，当症状被抑制时，症状发生 的频率、症状的范围(即症状在身体上显示的几何面积)、症状被表现出的程度(即症状的 严重程度)和症状的持久性(即症状显示出的持续时间)的至少一个被减少。本文所用“纤维化”疾病、病症或病况包括本文所述疾病，且还包括急性和慢性，临 床或亚临床表现，其中与生物学或病理学相关的纤维化是显而易见的。纤维化疾病、病症或 病况包括通过纤维化材料的过量产生(包括在细胞外基质内纤维化材料的过量生产，或正 常组织元件被异常、非功能组织元件的取代和/或基质相关成分的过量积累)整体或部分 表征的疾病、病症或病况。“纤维化”疾病、病症或病况包括例如通过纤维化表征的纤维化相 关的生物学或病理学。例示“纤维化”疾病、病症或病况包括例如硬皮病(包括硬斑病、全 身性硬斑病或线性硬皮病)。本文所用“预防”指整体或部分预防、或改善或控制。在某些方面，“预防”包括抑 制或减少归因于皮肤过早衰老的不良皮肤病反应。本文所用“受试者”指被分类为哺乳动物的任何动物，其包括人、家养和耕作动物、 动物园动物、竞技动物或宠物，如狗、马、猫、绵羊、猪、牛等。优选的受试者为人。术语“百分比(％ )同一性”指在两个或更多个序列的比较中发现的序列相似性的 百分比。例如，可使用任何合适的生物信息学软件(例如BLAST)电子确定百分比同一性。 同样，通过将一个序列与第二个序列的序列相比较来确定两个序列(或两个序列中各个或 两个的一个或更多个部分)间的相似性。本文所用术语“同源性和同源物”包括包含同源 于目的蛋白序列的氨基酸序列的肽。所述肽与相关序列(例如超过所述同源序列的至少约 15、20、30、40、50、100个以上的连续氨基酸/多肽的区域)通常具有至少约70%的同源性， 并可为至少约80 %、90 %、95 %、97 %或99 %同源性。取决于所述肽和参照序列的长度，相 对于参照序列(例如SEQ ID NO 1)其还可包含多达约25%、30%、40%或50%的保守氨基 酸变化。制备MNTF肽和其类似物的方法用于制备本文所述MNTF肽的方法不是关键。基本上可使用已知的任何肽合成方
12法，今后发展的方法也可使用。如熟知本领域和本公开内容的技术人员所了解，包含MNTF 活性结构域的序列和其肽类似物可将神经保护、修复和治疗功能体内和体外给予运动神经 元。可合成或重组产生、或从自然细胞中分离本文所述的MNTF因子。技术人员应了解，取决于大量因素，包含各种MNTF肽或其类似物的肽的准确化学 结构会有所不同。例如，因为在分子中发现了可电离的氨基和羧基，可以酸性盐或碱性盐、 或中性形式获得给定的多肽。可通过本领域熟知的任何方案(如固相合成或液相合成)制备本公开内容的肽。 作为固相合成，例如对应于要合成的肽C末端的氨基酸被结合至不溶于有机溶剂的支持物 上，并通过反应的交替重复，其中一个反应为具有用适当的保护基保护的α-氨基和侧链 功能基的氨基酸以C-末端至N-末端的顺序依次被缩短，而其中另一个为释放结合至树脂 或肽α-氨基的保护基的氨基酸，所述肽链从而以此方式延伸。取决于使用的保护基的类 型，在很大程度上由tBoc方法和Fmoc方法分类固相合成方法。通常使用的保护基包括对于氨基的tBoc (叔丁氧羰基)Xl-Z (2-氯苄氧羰基)、 Br-Z (2-溴苄氧羰基)、Bzl (苄基)、Fmoc (9-芴甲氧羰基)、Mbh (4,4' - 二甲氧基二苯甲 基)、Mtr (4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺酰基)、Trt (三苯甲基)、Tos (甲苯磺酰基)、Z (苄 氧羰基)和Cl2-Bzl (2，6 二氯苄基)；对于胍基的NO2 (硝基)和Pmc (2，2，5，7，8-五甲基色 烷-6-磺酰基；及对于羟基的tBu (叔丁基)。应了解可通过本领域熟知的方法(包括但不限于通过固相合成的化学合成和通 过HPLC从化学反应的其他产物的纯化、或通过在体外翻译系统或在活细胞中编码包含本 文所述的MNTF肽的肽或多肽的核酸序列(例如DNA序列)的表达)制备包含本公开内容 所述MNTF肽组合物。可分离和大规模透析组合物的MNTF肽以去除一种或多种不需要的小 分子量分子和/或被冻干以使更易制剂进入所需媒质。还应了解在制备入MNTF肽成分中 的额外氨基酸、突变、化学修饰等(无论何者)应基本上不干扰MNTF对接序列的受体识别。在所需肽的合成后，其要经受去保护反应并从固体支持物上切割出。可用Boc方 法的氟化氢或三氟甲烷磺酸及用Fmoc方法的TFA进行所述肽切割反应。然后获得的粗肽要经受纯化。通过所述目的已知的任一方法即包括提取、沉淀、色 谱、电泳等的任何常规方案进行纯化。例如，可使用HPLC(高效液相色谱)。可使用常用于 蛋白纯化的基于水_乙腈的溶剂进行所述洗脱。对应于MNTF —种或多种片段的肽或多肽在长度上通常可为至少两个氨基酸残 基，且可包含多达2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、约15、约20或约30个氨基酸残基左右， 及功能衍生物，例如棕榈酰化物。优选，本文所述MNTF肽或其类似物包含不多于SEQID NO 1的33个氨基酸残基的氨基酸残基。合适的肽包含SEQ IDNO :1的32个连续氨基酸残基、 31个连续氨基酸残基、30个连续氨基酸残基等、缩短至同二肽一样小的肽。在优选的实施 方式中所述MNTF肽和其类似物包含SEQ ID NO 1的位置17和18处的苯丙氨酸和丝氨酸 残基。可在测定和用于测定的试剂盒中以游离的形式或连接至载质分子(如蛋白或固 体颗粒)的形式及连接至标记物或示踪物(例如生物素或荧光素异硫氰酸酯)的修饰的肽 使用本文所述的MNTF肽或其类似物。可用本领域熟知的双功能试剂(包括1，1双(重氮乙酰基)2乙苯、戊二醛、N-羟
13基琥珀酰亚胺酯(例如4-叠氮基水杨酸酯、同型双功能酰亚胺酯(包括双琥珀酰亚胺酰 酯(如3，3’ - 二硫代双(琥珀酰亚胺丙酸))和双功能马来酰亚胺(如双-N-马来酰亚胺 基-1，8-辛烷))))进行MNTF肽或其类似物与水不溶性支持基质间的交联。甲基-3-[(对 叠氮基苯基)二硫代]丙亚胺酸酯之类的双功能试剂产生在光存在下能形成交联的光活性 中间体。另外，可将反应性水不溶性基质(如溴化氰活化的碳水化合物)用于蛋白固定。可使用本文所述的双功能试剂进行MNTF肽或其类似物与包括第二 MNTFl肽或其 类似物的第二蛋白间的交联。在一些实施方式中，有插入的间隔基，例如二巯基或二氨基或 多个氨基酸残基(例如，甘氨酸)。所述间隔基也可为同型或异型双功能交联剂，例如异型 双功能交联剂N-(4-羧基-环己基-甲基)_马来酰亚胺。化妆和皮肤病组合物 本文所述使用的组合物可包含与一种或多种合适的稀释剂、载质和其他相对惰性 成分一起的一种或多种MNTF肽或类似物。所述组合物包括大量防腐剂、溶剂、粘合剂、乳化 稳定剂，膜生成剂、消结块剂、保湿剂、及常用于化妆用品、皮肤病产品和其他局部施用产品 的其他成分的任一种。本领域已知所述大量的各种成分。本发明的化妆制剂包括化妆学可接受的载质、稀释剂、增溶剂或乳化剂、及本领域 可得类型的盐。除了本文所述MNTF肽之外，在化妆组合物中包含的合适的试剂的例子包括 化妆学可接受载质、增稠剂、稀释剂、缓冲剂、防腐剂、表面活性剂、中性或阳离子脂质、脂质 复合物、脂质体、渗透增强剂、载质化合物及其他化妆学可接受的载质或赋形剂等。已知渗透增强剂的大量类型，如脂肪酸、胆汁盐、螯合剂、表面活性剂和非表面 活性齐Ll (Lee et al.，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 8， 91-192(1991) ；Muranishi,Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 7， 1-33(1990))。在本文所述组合物中可包含一种或多种渗透增强剂。作为渗透增强剂的各种脂肪酸和它们的衍生物包括例如=CabryliC酸、油酸、 月桂酸、癸酸、辛酸、己酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、戊酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、 油酸、反油酸、芥酸、神经酸、二癸酸酯、三癸酸酯、蓖酸酯、甘油单油酸酯(又名ι-单油酰 基-消旋-甘油酯)、二月桂精、花生四烯酸、甘油1-癸酸酯、1-十二烷基氮杂环庚-2-酮、 酰基肉毒碱、酰基胆碱、单_和双_甘油酯及其生理可接受的盐(即油酸盐、月桂酸盐、癸 酸盐、肉豆蔻酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、亚油酸盐等)。(Lee et al. , Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems page 92(1991) ；Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 7,1 (1990) ；El-Hariri et al. , J. Pharm. Pharmacol. 44，651-654(1992))。在某些实施方式中，例示MNTF肽和其类似物包括通过脂肪酸和/或从2 22个 碳原子的烷羰基(Alk-C(O)-)的N-末端修饰的肽、或保护基(其选自苄氧羰基、叔丁氧羰 基、芴-甲氧羰基和烯丙氧基羰基)且Y为OH或NH2及它们的盐。在某些实施方式中，所 述烷羰基包含10 20、12 18或2 22个碳，例如6、8、10、12、14或16个碳。在一特定 的实施方式中，在MNTF肽或类似物上适合的N末端修饰为通过棕榈酰化(例如棕榈酸)。可以各种形式中的任一种局部施用本文所述组合物。局部施用的制剂包括皮贴、软膏、洗剂、血清、霜、凝胶剂、滴剂、喷雾剂、液体和粉 末。也可使用常规的化妆载质、水、粉末或含油碱、增稠剂等。
本文所用的用于化妆、护肤和/或皮肤病应用的本文所述MNTF肽和类似物的制剂 包括例如已知的抗皱活性成分(包括例如黄酮苷类(如α-glycosylrutin)、辅酶Qltl、维生 素E和衍生物等)及已知的阳光阻断成分、保湿剂和香水。可为“化妆”或“护肤”(即皮肤病)应用单独或作为与其他合适的试剂或成分相 组合的“添加剂”施用本文所述的包含MNTF肽或类似物的组合物。本文所用“化妆”或“护 肤”应用包括例如与皮肤中皮肤病变化(例如，在皮肤过早衰老期间、干燥、粗糙、干燥皱 纹的形成、瘙痒、减少的加脂(refatting)(如清洗后)、可见血管扩张(如毛细血管扩张， cuperosis)、痿、皱纹(wrinkles)和皱纹(lines)的形成、局部色素沉着、色素沉着不足、不 正确的色素沉着(如老年斑)、增强的对机械应激的敏感性(如裂缝等)、皮肤松弛(如硬 度不足)及干燥或粗糙的皮肤表面特征的出现)相关的预防性和/或恢复性应用。
可将本文所述MNTF肽和类似物制备成用于局部施用的皮肤药物制剂，以对抗通 过异常疤痕、肥厚性疤痕、烧伤、皮肤创伤、瘢痕疙瘩、银屑病、皮肤疾病、全身性疾病、病变、 肿瘤和癌症、痤疮/滤泡性疾病、湿疹、皮炎和过敏症、水泡病、免疫性皮肤病、鳞状皮肤疾 病、糜烂及溃疡、血管性皮肤问题、色素沉着问题、过多的瘙痒(瘙痒)、对外部试剂的局部 皮肤反应、及深度皮肤疾病和纤维化疾病来整体或部分表征的任何皮肤病疾病、病症或病 况。在其他的实施方式中，可使用本公开内容的方法来最小化或预防在人或其他哺乳动物， 尤其是倾向于过度疤痕的个体中的疤痕(如肥厚性疤痕、瘢痕疙瘩和过度烧伤疤痕、萎缩 性疤痕、及普遍的疤痕)形成。可通过各种方法将本文所述MNTF肽和类似物制备成用于局部施用的皮肤药物制 齐U。所述方法的例子包括包裹适当量的MNTF肽或类似物于选自下列的载体中巨囊、微囊、 纳米囊、脂质体、乳糜微粒和微海绵。所述方法的另一例子包括吸附MNTF肽或类似物于选 自下列的材料上粉状有机聚合物、滑石、皂粘土及其他矿物支持物。所述方法的第三个例 子包括混合所述MNTF肽或类似物与选自下列的成分提取的脂质、蔬菜提取物、脂溶性有 效成分、水溶性有效成分、无水凝胶、乳化聚合物、表面张力活性聚合物、合成的脂质、凝胶 化聚合物、组织提取物、海洋提取物、维生素A、维生素C、维生素D、维生素E、太阳光过滤剂 和抗氧化剂。例如可在美国专利申请公开No. 2005/0249720中发现合适组合物的其他例 子。可将本文所述MNTF肽和类似物并入任何gelanic形式，如0/W型乳剂和W/0型 乳剂、乳、洗剂、胶凝剂和增厚剂、表面活性和乳化聚合物、润发油、洗剂、毛细管、洗发水、月巴 皂、粉末、棒和铅笔、喷雾剂、体油。无论通过何种方法将化合物施用于患者，可使用胶体分散系统作为递送媒质以增 强肽的体内稳定性和/或使所述肽靶向特定的器官、组织或细胞类型。胶体分散系统包括 但不限于高分子复合物、纳米胶囊、微球、珠和基于脂质的系统(包括水包油乳剂、胶束、 混合胶束、脂质体和脂质未鉴定结构的肽复合物)。胶体分散系统的例子为多种脂质体。 脂质体为微观球体，其具有由双层构型中排列的脂质构成的一个或多个外层包围的水性核 心(通常见 Chonn et al.，Current Op. Biotech. 6，698-708 (1995))。可使用本文所述化 合物的持续释放剂型剂量和施用施用于受试者的MNTF肽或类似物的准确量不是关键，除非其为足以实现被施用包含所述肽或类似物的组合物的疾病的改善的量。剂量可取决于大量因素，其包括要治疗 的病情的严重性和反应性，和持续数天至数月的治疗过程、或直到实现治疗或达到病情的 减弱。
举例而言，可施用MNTF肽和类似物以在靶位点处达到约0. 01微克/毫升(μ g/ mL) 约 10mg/ml、约 0. 1 μ g/mL 约 500 μ g/mL、约 0. 1 μ g/mL 约 1500 μ g/mL、约 1 μ g/ mL 约2000 μ g/mL及约0. 1 μ g/mL 约5000 μ g/mL (包括所述范围的任一范围)的最终 浓度。包含以在所述范围的一个或多个中的浓度的所述肽或类似物的组合物是合适的。同 样地，可基于本文所提供的实验数据估计合适的剂量值。合适的剂量值可取决于要被施用所述组合物的位点的特征和所述肽的形式。举例 而言，棕榈酰化的MNTF肽类似物的水溶性比对应的非棕榈酰化MNTF肽小许多。例如，具有 氨基酸序列SEQ ID NO 2的棕榈酰化六聚体的水溶性在约lmg/ml。包含约lmg/ml的所述 肽类似物的凝胶可被稀释约20倍，以产生适于人日常局部使用的产物，所述产物每毫升包 含约50 μ g所述肽。在文献中提供了给药具体剂量和具体方法的指导且对于本领域技术人员通常可 得。本领域技术人员将使用不同的核苷酸制剂，而非蛋白或其抑制剂。基于在体液或组织 中测量的药物残留时间和浓度，本领域普通技术人员可轻易估计给药的重复频率。成功治 疗后，需要使患者经历维持性治疗以防止病情的复发，其中以在0. 01mg/kg 100mg/kg体 重的范围内的维持剂量、每天一次或多次至每20年一次施用所选定化合物。在某些疾病的 治疗和预防中，适当的剂量水平通常应为约0. 001mg/kg 100mg/kg患者体重/天，其可以 单剂量或多剂量施用。合适的剂量水平可为约1 约40mg/kg/天。在某些实施方式中， 以达至Ij约 Iumol 约 lOmmol、约 IOymol 约 5000ymol、或约 30 μ mo 1 约 3000 μ mo 1 和约25μπιο1 约3000μπιο1损伤位点上最终浓度的体内浓度，且包括约25μπιο1、或 约1600μπιΟ1或约3000μπιΟ1损伤位点上的最终浓度，且仍更通常在约1 μ mol 约 1000 μ mol之间的量施用本文所提供的包括MNTF肽或其类似物的化合物。可参考下列实施例、通过举例的方式而不通过限制的方式提供的某些方面中了解 本发明。可从商业来源获得在下列例子中参考的材料和试剂等，除非另有强调。
实施例^MM 1 H^feil MNTF肽的泡丨备方法禾Π共彳介连接通过为Merrifield所述的肽制备所良好建立的固相合成方法合成所述成分。用 Fmoc基保护每个氨基酸的α-氨基。也用各种合适的保护基阻断侧链功能基。通过c_末 端氨基到树脂上的衍生化形成肽链。所述保护基被去除(去阻断步骤)且与序列中的各氨 基酸偶联。通过茚三酮(NIN)测试监测每个偶联的完成。对贯穿整个肽链的每个氨基酸进 行所述添加/偶联过程。当完成了全肽序列时，彻底清洗和干燥肽树脂，然后所述肽可从所 述肽树脂被切割。通过RP-HPLC检查所述粗肽的纯度。当所述粗肽达到了所需的最低纯度 标准时，提交通过制备性RP-HPLC纯化的纯化。达到最终纯度标准(> 95% )的所述级分 被集中且被发送以冻干。将冻干的六肽与棕榈酰衍生物缀合以依据Rijkers，D. Τ. S. , et al. ,Tetrahedron Letters 46(19) =3341-3345(2005)所述的方案产生棕榈酰六肽。所述方法利用S-棕榈酰跨膜肽的方便的固相合成。对于半胱氨酸侧链的保护，高度酸不稳定性S-(4-甲氧三苯甲 基)基团优于S-(叔丁基硫基)基团，因为后者在树脂去保护期间可引起定量脱硫。用棕 榈酸经碳二亚胺介导的偶联修饰所得游离巯基功能，且以很好的产量和纯度获得标题化合 物。通过制备性的RP-HPLC将棕榈酰六肽送去离子交换以转换为乙酸盐。使用Rijkers, D. T. S.，et al所述方案，将具有SEQ ID NO :2 27的MNTF肽被缀 合至具有5、6、8、10、12、14和16个碳的脂肪酸及具有替代数量的碳的脂肪酸。缀合至MNTF 肽和其类似物的脂肪酸选自下列=Cabrylic酸、油酸、月桂酸、癸酸、辛酸、己酸、肉豆蔻酸、 棕榈酸、戊酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸、油酸、反油酸、芥酸和神经酸。然后就 其在利于皮肤渗透的局部制剂中被使用的能力，对通过共价连接至所述脂肪酸形成的MNTF 肽或其类似物及其他的肽进行测试。实施例2 下列为MNTF肽(棕榈酰化MNTF肽类似物)化妆制剂的例子，其被制成局部无水 凝胶的形式。
权利要求
用于恢复或保护皮肤的局部组合物，其含(a)有效量的具有至少含SEQ ID NO1的残基17和18的氨基酸序列的MNTF肽或其类似物；和(b)化妆学、皮肤病学或药学可接受载质。
2.权利要求1的组合物，其中所述MNTF肽或其类似物选自SEQID NO :1 27。
3.权利要求1的组合物，其中所述MNTF肽或其类似物选自SEQID NO :2和8 21。
4.权利要求1的组合物，其中所述MNTF肽或其类似物是SEQIDNO :9。
5.权利要求1的组合物，其中所述MNTF肽或其类似物是SEQIDNO :11。
6.权利要求1的组合物，其中所述MNTF肽或其类似物是SEQIDNO :17。
7.权利要求1 6中任一项的MNTF肽或其类似物，其中所述MNTF肽或其类似物通过 与渗透增强剂共价键合而被修饰，由此所述组合物的组织渗透能力被提高。
8.权利要求7的丽TF肽或其类似物，其中所述MNTF肽或其类似物于通过其N-末端与 所述渗透增强剂共价键合而被修饰。
9.权利要求8的MNTF肽或其类似物，其中所述渗透增强剂通过游离氨基的N-酰基衍 生物与所述MNTF肽或其类似物共价连接。
10.权利要求9的MNTF肽或其类似物，其中所述渗透增强剂是任选被取代的2 22碳 的烷基羧酸，其中所述烷基羧酸任选被羟基化、不饱和化和/或硫化。
11.权利要求10的MNTF肽或其类似物，其中所述渗透增强剂是选自下列的脂肪酸 cabrylic酸、油酸、月桂酸、癸酸、辛酸、己酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、戊酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻 酸、花生四烯酸、油酸、反油酸、芥酸、神经酸。
12.权利要求1 11中任一项的组合物，其中(a)所述量的肽被包裹于选自下列的载体中巨囊、微囊、纳米囊、脂质体、乳糜微粒和 微海绵，或(b)所述肽被吸附于选自下列的材料上粉状有机聚合物、滑石、皂粘土及其他矿物支 持物，或(c)所述肽与选自下列的成分混合提取的脂质、蔬菜提取物、脂溶性有效成分、水溶 性有效成分、无水凝胶、乳化聚合物、表面张力活性聚合物、合成的脂质、凝胶化聚合物、组 织提取物、海洋提取物、维生素A、维生素C、维生素D、维生素E、太阳光过滤剂和抗氧化剂。
13.用于恢复或保护皮肤的化妆方法，所述方法包括给受试者局部施用权利要求1 12中任一项的组合物，其中所述组合物以对促进皮肤的恢复或保护而言有效的量施用。
14.权利要求13的化妆方法，其中所述方法减少或抑制有需要的受试者的伴随光损伤 的发炎或自由基损伤。
15.权利要求13的化妆方法，其中所述方法减少有需要的受试者的皮肤中过氧化物或 自由基产生。
16.权利要求13的化妆方法，其中所述方法减少有需要的受试者的皱纹。
17.权利要求13的化妆方法，其中所述方法改善有需要的受试者的皮肤色调。
18.权利要求13的化妆方法，其中所述方法减少有需要的受试者的皮肤的UV或光损伤。
19.权利要求13的化妆方法，其中所述方法促进有需要的受试者的皮肤再生。
20.用于改善受试者所患的痤疮疤痕的化妆方法，所述方法包括给受试者局部施用 权利要求1 12中任一项的组合物，其中所述组合物以对改善所述痤疮疤痕而言有效的量 施用。
21.用于减少有需要的受试者的瘢痕疙瘩形成的化妆方法，所述方法包括给受试者 局部施用权利要求1 12中任一项的组合物，其中所述组合物以对减少所述瘢痕疙瘩形成 而言有效的量施用。
全文摘要
本发明涉及包含用于化妆和皮肤病目的的运动神经营养因子(MNTF)肽和它们的类似物的方法和组合物。
文档编号A61Q19/00GK101952306SQ200980105891
公开日2011年1月19日 申请日期2009年2月23日 优先权日2008年2月21日
发明者P-Y·D·寇 申请人:皮护神经科学协会