专利名称：一种从大兴安岭野生杜香里提纯精油和熊果酸的制备方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生杜香里提取杜香精油和熊果酸的方法，特别是涉及一种利用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取、再结合柱层析的方法，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法。
背景技术：
杜香，是杜鹃花科杜香属常绿小灌木，高达50厘米以上，多分枝，枝较细，叶质稍厚，密而互生，有强烈香味，狭线性，长2-4厘米，宽1. 5-3毫米。杜香耐阴，且喜水湿，对土壤要求不高，常生于河谷或苔藓沼泽地，成片生长成群落。该种主要分布于北半球温带或寒温带地区，在我国分布于东北，集中分布于大兴安岭地区落叶松林和落叶松白桦针阔混交林， 资源十分丰富。
杜香不同部位化学成分种类含量有差别，我国对杜香这一野生植物资源的研究起步较晚，至目前仅限于对用水蒸汽蒸馏法取得的挥发性成分的研究。从目前的研究结果，杜香油可用于香料工业。
国内一般用水蒸气蒸馏法萃取精油，存在着操作温度高，热敏物质易分解，产品质量不稳定等缺点，本发明的不同之处在于采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取、再结合柱层析的方法，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法。本发明原料利用度高，它的意义不仅在于综合利用当地野生资源，开发新产品，而且也对充分利用类似的林下资源提供了参考依据。
发明内容
本发明优点
本发明主要采用超临界二氧化碳萃取技术，再与分子蒸馏藕联，得到提纯精油；提取渣用超声波提取再用柱层析纯化，得到高纯度熊果酸。本发明同时得到精油和熊果酸两种产品，且纯度高，无溶剂化学残留。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是
一种采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其步骤如下
(I)杜香叶粉碎至40-60目，采用超临界二氧化碳萃取，在一定温度和压力下，以l-2L/h的CO2流量，萃取4-6h，回收CO2，得到精油粗品；
(2)用刮膜式分子蒸馏器，采用两级分离，一级蒸馏在进料速度l_1.5ml/min、 200-300r/min刮膜转速下以一定压力蒸馏，蒸馏温度为90_95°C ;二级蒸馏在进料速度1.2-2. 0ml/min、250-360r/min刮膜转速下以一定压力蒸馏，蒸馏温度为100_105°C，除去精油异味，进一步提纯精油。采用GC-MS分析，精油相对含量为75%以上；
(3)提取后渣子加入一定体积浓度的乙醇，超声波提取，超声频率50-70KHZ，料液比1: 10-15，超声时间30-50min，薄层层析检测分析， 收集得到熊果酸提取液；
(4)回收乙醇，初步浓缩，得熊果酸浸膏，溶于丁醇，上200-300目硅胶柱层析，对提取物进行纯化；
(5)先用石油醚除去残余脂类等杂质；再用甲醇-丙酮以一定比例做为洗脱液洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以95%熊果酸为对照品对照)；
(6)收集洗脱液浓缩，真空干燥，得到含量为98%以上的熊果酸成品。
具体实施例方式
实施例1 :一种采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其步骤如下
(I) IOOOg杜香叶粉碎至40目，采用超临界二氧化碳萃取，萃取压力lOMpa，在 40°C，时间4h，CO2流量为lL/h，回收CO2，得到精油粗品；
(2)用刮膜式分子蒸馏器，采用两级分离，一级蒸馏压力3帕，在lml/min进料速度、刮膜转速200r/min蒸馏，蒸馏温度为90°C ;二级蒸馏压力8帕，在1. 2ml/min进料速度、刮膜转速250r/min蒸馏，蒸馏温度为100°C，除去精油异味，进一步提纯，收集精油，采用GC-MS分析，相对含量为75. 3% ；
(3)提取后渣子加入体积比80%乙醇，超声波提取，超声频率50KHZ，料液比 I 10，超声时间50min，薄层层析检测分析，收集得到熊果酸提取液；
(4)回收乙醇，初步浓缩，得熊果酸浸膏，溶于丁醇，上200-300目硅胶柱层析，对提取物进行纯化；
(5)洗脱先用石油醚除去残余脂类等杂质；用甲醇-丙酮10 :1做为洗脱液洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以95%熊果酸为对照品对照)；
(6)收集洗脱液浓缩，真空干燥，得到含量为98. 2%的熊果酸成品。
实施案例2 :—种采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其步骤如下
(I) IOOOg杜香叶粉碎至40目，采用超临界二氧化碳萃取，在45 °C，萃取压力 12Mpa，时间5h，CO2流量为1. 5L/h，回收CO2，得到精油粗品；
(2)用刮膜式分子蒸馏器，采用两级分离，一级蒸馏压力5帕，在1. 2ml/min进料速度、刮膜转速280r/min蒸馏，蒸馏温度为95°C ;二级蒸馏压力9帕，在1. 5ml/min进料速度、刮膜转速300r/min蒸馏，蒸馏温度为105°C，除去精油异味，进一步提纯，收集精油，采用GC-MS分析，相对含量为73. 8% ；
(3)提取后渣子加入体积比90%乙醇，超声波提取，超声频率60KHZ，料液比 I 12，超声时间40min，薄层层析检测分析，收集得到熊果酸提取液；
(4)回收乙醇，初步浓缩，得熊果酸浸膏，溶于丁醇，上200-300目硅胶柱层析，对提取物进行纯化；
(5)洗脱先用石油醚除去残余脂类等杂质；再用甲醇-丙酮9 I做为洗脱液洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以95%熊果酸为对照品对照)；
(6)收集洗脱液浓缩，真空干燥，得到含量为98. 73%的熊果酸成品。
实施案例3 :—种采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其步骤如下
(I) IOOOg杜香叶粉碎至60目，采用超临界二氧化碳萃取，在45°C，萃取压力 15Mpa，时间6h，CO2流量为2L/h，回收CO2，得到精油粗品；
(2)用刮膜式分子蒸馏器，采用两级分离，一级蒸馏压力6帕，在1. 5ml/min进料速度、刮膜转速300r/min蒸馏，蒸馏温度为95°C ;二级蒸馏压力10帕，在2. Oml/min进料速度、刮膜转速360r/min蒸馏，蒸馏温度为100°C，除去精油异味，进一步提纯，收集精油，采用GC-MS分析，相对含量为77. 4% ；
(3)提取后渣子加入体积比95%乙醇，超声波提取，超声频率70KHZ，料液比 I 15，超声时间30min，薄层层析检测分析，收集得到熊果酸提取液；
(4)回收乙醇，初步浓缩，得熊果酸浸膏，溶于丁醇，上200-300目硅胶柱层析，对提取物进行纯化；
(5)洗脱先用石油醚，除去残余脂类等杂质；用甲醇-丙酮8 I做为洗脱液洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以95%熊果酸为对照品对照)；
(6)收集洗脱液浓缩，`真空干燥，得到含量为98. 5%的熊果酸成品。
权利要求
1.一种采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其步骤如下 (1)杜香叶粉碎至40-60目，采用超临界二氧化碳萃取，在一定温度和压力下，以1-2L/h的CO2流量，萃取4-6h，回收CO2，得到精油粗品； (2)用刮膜式分子蒸馏器，采用两级分离，一级蒸馏在进料速度l_1.5ml/min、200-300r/min刮膜转速下蒸馏，蒸馏温度为90-95°C ;二级蒸馏在进料速度1. 2-2. Oml/min、250-360r/min刮膜转速下蒸馏，蒸馏温度为100_105°C，除去精油异味，进一步提纯精油，采用GC-MS分析，精油相对含量为65%以上； (3)提取后渣子加入一定体积浓度乙醇，超声波提取，超声频率50-70KHZ，料液比I 10-15，超声时间30-50min，薄层层析检测分析，收集得到熊果酸提取液； (4)回收乙醇，初步浓缩，得熊果酸浸膏，溶于丁醇，上200-300目硅胶柱层析，对提取物进行纯化， (5)先用石油醚除去残余脂类等杂质；再用甲醇-丙酮以一定比例做为洗脱液洗脱，洗脱液用薄层层析跟踪监测(以95%熊果酸为对照品对照)； (6)收集洗脱液浓缩，真空干燥，得到含量为98%以上的熊果酸成品。
2.根据权利要求1所述的采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其特征是所述的步骤(I)中，超临界二氧化碳萃取温度为40-45°C，萃取压力10-15Mpa。
3.根据权利要求2所述的采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其特征是所述的步骤(2)中，一级蒸馏压力为3-5帕，二级蒸馏压力8-10帕。
4.根据权利要求3所述的采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其特征是所述的步骤(3)中，有机溶剂乙醇体积浓度为80-95%。
5.根据权利要求4所述的采用超临界二氧化碳萃取并与分子蒸馏技术藕联，超声波提取再结合柱层析，分别得到精油、熊果酸二种成分的方法，其特征是所述的步骤(5)中，洗脱溶剂甲醇-丙酮比例为8-10 I。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，本发明的优点是1.超临界CO2萃取技术，萃取过程系统密闭，避免小分子易挥发油的破坏，整个精油萃取在接近室温条件下进行，活性损失极少。2.运用分子蒸馏技术纯化精油，操作温度远低于物质常压下沸点温度，且加热时间非常短，不会对物质本身造成破坏，精油分离纯化程度及产品收率高。3.采用超声波提取，有效成分受热时间降低、生物活性高；硅胶柱层析纯化技术，使熊果酸的纯度进一步提高，简单易操作，生产成本大大降低。本发明大大降低了萃取时间，提高了萃取速度，同时纯化效果明显，有效成分含量高，可以同时得到精油和熊果酸两种产品，且精油相对含量达到77.4％，熊果酸纯度提高到98.73％。
文档编号C11B9/02GK103045371SQ20121059553
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者张亚红, 姚德坤, 姚德利, 万莉 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司