Rad51l1基因突变检测特异性引物和液相芯片的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种RAD51L1基因突变检测液相芯片和特异性引物，该液相芯片主要包括有：每种由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成的ASPE引物，所述特异性引物序列为：针对C167T位点的SEQ?ID?NO.9及SEQ?ID?NO.10，针对A76T位点的SEQ?ID?NO.11及SEQ?ID?NO.12，针对T187G位点的SEQ?ID?NO.13及SEQ?ID?NO.14，和/或针对T99G位点的SEQ?ID?NO.15及SEQ?ID?NO.16；有anti-tag序列包被的微球；扩增引物。本发明所提供的检测液相芯片的检测结果与测序法的吻合率高达100％，实现多个突变位点的野生型和突变型并行检测。
【专利说明】RAD51L1基因突变检测特异性引物和液相芯片
【技术领域】
[0001]本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种RAD51L1基因突变检测特异性引物和液相芯片。
【背景技术】
[0002]RAD51 样 I (RAD51_likel，RAD51L1)也称为 hREC2 或者 RAD51B，位于 14 号染色体14q23-24的长臂上，具体位于14号染色体68286495到69062737碱基对之间，RAD51L1基因是编码修复双链DNA断裂的一种酶，但是这种基因的过度表达将导致细胞周期Gl延迟和细胞凋亡，这表明这种蛋白质在DNA损伤时发挥一定的作用。RAD51L1编码的蛋白质是Rad51蛋白家族的成员。RAD51家族成员对于同源重组DNA修复是不可缺少的保守蛋白，在DNA复制过程中，参与双链DNA断裂的同源重组修复途径。另外，RAD51L1基因发生的染色体变异与肺软骨样错构瘤和子宫平滑肌瘤的发生有相关性，而且RAD51L1基因多态性会增加乳腺癌发生的风险。
[0003]目前，RAD51L1基因突变检测方法主要有=Illumina光纤微珠芯片技术、微阵列技术和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，微阵列技术存在成本昂贵、复杂、检测灵敏度较低、重复性差、分析范围较狭窄，探针的合成与固定比较复杂等问题，另外，由于杂交位于固相表面，有一定程度的空间阻碍作用。荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型，同样不能满足实际应用的需要。
[0004]本发明目标检测的RAD51L1基因突变位点，如表所示:
【权利要求】
1.一种RAD51L1基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有: (A).针对RAD51L1基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对:每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为:针对C167T位点的SEQ ID N0.9及SEQ ID N0.10，针对A76T位点的SEQ ID N0.11 及 SEQ ID N0.12，针对 T187G 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或针对 T99G 位点的 SEQID N0.15 及 SEQ ID N0.16 ;所述 tag 序列选自 SEQ ID N0.1 ~SEQID N0.8 ； (B).有不同ant1-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球,所述ant1-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述ant1-tag序列选自SEQ ID N0.17~SEQ ID N0.24，且所述ant1-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对； (C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。
2.根据权利要求1所述的RAD51L1基因突变检测液相芯片，其特征是，所述扩增引物为:针对 C167T 位点的 SEQ ID N0.25 及 SEQ ID N0.26，针对 A76T 位点的 SEQ ID N0.27 及SEQ ID N0.28，针对 T187G位点的 SEQ ID N0.29 及 SEQ ID N0.30，和 / 或针对 T99G位点的SEQ ID N0.31 R SEQ IDN0.32。
3.根据权利要求1或2所述的RAD51L1基因突变检测液相芯片，其特征是，所述ASPE引物对为:针对C167T位点的由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.9组成的序列及由SEQ ID N0.2和SEQ IDN0.10组成的序列，针对A76T位点的由SEQ ID N0.3和SEQ ID N0.11组成的序列及由SEQ ID N0.4和SEQ ID N0.12组成的序列，针对T187G位点的由SEQ ID N0.5和SEQID N0.13组成的序列及由SEQ ID N0.6和SEQ ID N0.14组成的序列，和/或针对T99G位点的由SEQ ID N0.7和SEQ IDN0.15组`成的序列及由SEQ ID N0.8和SEQ ID N0.16组成的序列。
4.根据权利要求1或2所述的RAD51L1基因突变检测液相芯片，其特征在于，所述间隔臂为5 — 10个T。
5.用于RAD51L1基因突变检测的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物为:针对C167T 位点的 SEQ ID N0.9 及 SEQ ID N0.10，针对 A76T 位点的 SEQ ID N0.11 及 SEQ IDN0.12，针对 T187G 位点的 SEQ ID N0.13 及 SEQ ID N0.14，和 / 或针对 T99G 位点的 SEQ IDN0.15 及 SEQID N016。
【文档编号】C40B40/06GK103849939SQ201210512190
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月4日 优先权日:2012年12月4日
【发明者】陈昌华, 许昌有 申请人:益善生物技术股份有限公司