一种生防菌营养型片剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种防治植物病害的生防菌营养型片剂。
【背景技术】
[0002] 目前，植物病害的防治主要以化学农药为主，而化学农药的长期使用造成对病原 菌的选择压力大，病原菌容易产生抗药性。同时化学农药的高残留、高污染对环境和人、畜 的安全造成严重的影响。因此低毒、低残留的生物农药成为发展的热点。河北农业大学于 2005年11月2日、2009年6月9日和2011年11月22日对玫瑰黄链霉菌（Str印tomyces roseoflavus)Men-myco_93-63的诱导菌种0116申请了三个专利，分别为"一种生物杀菌 剂及其制备方法，已授权，专利号：200510117421. 3"、"一种生物杀菌剂可湿性粉剂专利 【申请号】200910074685. 3"和"一种玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂的可湿性粉剂专利【申请号】 201110375945.8"。该新菌种玫瑰黄链霉菌 0116 (Streptomyces roseoflavus)已于 2005 年9月30日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市海 淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC NO. 1471。玫瑰黄 链霉菌（Streptomyces roseoflavus)的诱变菌株0116菌株以下简称菌株0116,是经一株 玫瑰黄链霉菌（Streptomyces roseoflavus)诱变得到的菌株，其活菌和发酵液对多种重要 的植物病原菌有抑制作用，例如棉花黄萎病病原菌、马铃薯疮痂病病原菌、小麦根腐病病原 菌、番茄灰霉病病原菌、黄瓜白粉病病原菌等。温室及大田试验均表明，0116菌株发酵液对 棉花黄萎病有较好的防治效果。其活菌和发酵液对多种重要的植物病原菌有抑制作用，例 如棉花黄萎病病原菌、马铃薯疮痂病病原菌、小麦根腐病病原菌、番茄灰霉病病原菌、黄瓜 白粉病病原菌等。温室及大田试验均表明，该菌发酵液对棉花黄萎病有较好的防治效果。 上述三个专利申请存在的缺陷是：第一个专利中微生物次生代谢产物应用为农药或者其先 导化合物，需要明确该次生代谢产物的准确结构，该0116菌株发酵液中起主要作用的是菌 株的次生代谢产物，而对发酵液的组分进行分离、纯化、结构鉴定成本较大、周期较长。故还 不能化学合成，不能进行规模化生产。同时由于发酵液的主要成分是水，因此发酵液直接应 用于田间的单位用量大，造成包装和运输成本大。第二个专利由于其具体实施过程中需要 先液体种子培养，然后转接到玉米秸杆中固体发酵，然后再冷冻干燥，收集纯孢子粉，最后 再混合一定的载体及润湿分散剂制成可湿性粉剂。整个过程需要的时间较长，步骤繁琐，且 冷冻干燥收集纯孢子粉过程在规模化生产中不现实。第三个专利由于具体实施过程中需 要先液体种子培养，然后转接到载体上固体发酵，然后再加入润湿分散剂，最后干燥粉碎制 成可湿性粉剂。由于该剂型中缺少营养物质，从而使得施用后生防菌的定殖能力差、持效期 短。所以有必要进一步改进。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种能够进行规模化生产、应用于田 间的单位用量小，包装和运输成本较低且持效期长的生防菌株营养型片剂。
[0004] 本发明的目的是以如下技术方案实现的：一种生防菌株营养型片剂，其组份及含 量为：m (载体）：V (发酵液）=2:1 ;碳源15% ;氮源15% ;粘合剂6%。
[0005] 所述的载体为硅藻土。
[0006] 所述的碳源为蔗糖。
[0007] 所述的氮源为花生饼粉。
[0008] 所述粘合剂为玉米淀粉或聚乙二醇6000。
[0009] 本发明申请具有开发周期短、成本低、工艺简单且可开发为多种剂型的特点，能够 进行规模化生产。研究工作表明，菌株0116繁殖体的活体对植物病原物的抑制作用十分明 显，生长繁殖所需的营养条件较低。通过平板测定法对各种载体和助剂进行筛选，确定了硅 藻土作载体、蔗糖和花生饼粉作为碳氮源、玉米淀粉或聚乙二醇6000作粘合剂与菌株0116 相容性较好，而且，采用定期检测活菌数测定菌株0116片剂储存稳定性，结果表明0116片 剂4°C贮存4个月后活菌数在IO5 cfu/g以上。由于用菌株0116繁殖体作为营养型片剂的 主要有效成分，故相较于菌株0116的发酵液来说大大缩小了田间的单位用量，大大降低了 包装和运输成本。又由于片剂中含有碳氮源，从而延长了持效期，减少了施药次数。
[0010] 为了说明本发明专利申请的实用性，现将本发明专利申请样品的检验、测定方法 及数据公开如下： 质量差异的检测方法 采用重量差异检测法，随机选取20片片剂，全部称重，再计算平均值，最后按照《中国 药品检验标准操作规范》中的标准进行检测。
[0011] 本发明专利申请样品符合《中国药品检验标准操作规范》中的标准。
[0012] 贮存稳定性试验 采用平板计数法来测定活菌数，本发明专利申请样品在4°C储藏4个月内单位含孢量 在IO5 cfu/g以上。
[0013] 田间防治试验 在活体条件下测定了 0116活菌营养型片剂对棉花黄萎病的防治效果，具体方法和结 果如下： 1试验方法： 将制得的玫瑰黄链霉菌raseo/yanAs) Men-myc〇-93_63营养型片剂设 为0. 2g/株、0. 5g/株和1.0 g/株；每个处理重复3次，每小区200株全部调查，每株调查全 部叶片，每片叶病斑占叶面积的百分率分级纪录。
[0014] 病情分级标准为： 0级：无病； 3级：植株30%~50%成叶嵌色状； 5级：植株50%~100%成叶嵌色状，或叶片凋落，但有棉铃； 7级：植株成叶脱落，无棉铃； 9级：植株死亡。
2.试验结果：
0116活菌营养型片剂对棉花黄萎病有较好的防治效果，试验结果见下表。
[0016] 0116活菌营养型片剂对棉花黄萎病的防治效果
【具体实施方式】
[0017] 步骤一：将0116菌株于PDA培养基上28°C培养7天，制备孢悬液，将孢悬液以10% 的比例接种到种子培养基中。培养条件为：28°C，160rpm，培养5天。
[0018] 种子培养基为：3%花生饼粉，4. 5%淀粉，1. 5%葡萄糖，0. 75%氯化钠，0. 3%醇母 膏，0. 9 %硫酸铵，0. 03 %磷酸二氢钾，0. 375 %碳酸钙，0. 105%硫酸亚铁，0. 105 %硫酸锌， 3%蔗糖，0.3%果糖，pH自然； 步骤二：将种子培养液与硅藻土以1:2的比例混匀。
[0019] 步骤三：加入15%的蔗糖和15%的花生饼粉，混匀。
[0020] 步骤四：加入6%玉米淀粉或聚乙二醇6000,混匀。
[0021] 步骤五：将上述混合物于鼓风干燥箱中烘至近干，条件为：28°C，6~12h。
[0022] 步骤六：将干燥后的产物进行混匀，粉碎，压片即可得到0116活菌营养型片剂。
[0023] 片剂的性状 成型的片剂外观白色，表面完整光洁，边缘整齐，色泽均匀，无杂斑 含水量（％) < 2 质量差异检测符合标准 贮存稳定性：4°C贮存4个月含菌量（cfu/g)彡105。
【主权项】
1. 一种生防菌营养型片剂，其特征在于，其组分及含量为：m (载体）:V (发酵液）=2:1; 碳源15% ;氮源15% ;粘合剂6%。2. 根据权利要求1所述的一种生防菌营养型片剂，其特征在于，所述的载体为娃藻土。3. 根据权利要求1所述的一种生防菌营养型片剂，其特征在于，所述的碳源为蔗糖。4. 根据权利要求1所述的一种生防菌营养型片剂，其特征在于，所述的氮源为花生饼 粉。5. 根据权利要求1所述的一种生防菌营养型片剂，其特征在于，所述的粘合剂为玉米 淀粉或聚乙二醇6000。
【专利摘要】本发明公开了一种生防菌株营养型片剂，其组分及含量为：确定了硅藻土作载体、m(硅藻土):V(发酵液)=2:1，碳源为15%的蔗糖、氮源为15%的花生饼粉以及6%的玉米淀粉或聚乙二醇6000作粘合剂。而且，采用平板计数法定期检测活菌数来测定菌株0116营养型片剂的储存稳定性，结果表明菌株0116营养型片剂在4℃贮存4个月活菌数≥105cfu/g。本发明申请具有开发周期短、成本低、工艺简单且持效期长的特点，能够进行规模化生产。由于用菌株0116繁殖体作为营养型片剂的主要成分，能够进行规模化生产，而相较于菌株0116的发酵液来说大大缩小了田间用量，降低了包装和运输成本。CGMCC No147120050930
【IPC分类】C05G3/00, A01P3/00, A01N63/02
【公开号】CN105016838
【申请号】CN201410156782
【发明人】李亚宁, 冯龙, 赤国彤, 刘大群, 魏娇洋, 张汀
【申请人】河北农业大学
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月18日