专利名称：Il－8受体拮抗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的苯并-2-三唑取代的化合物，其药物组合物，其制备方法以及它们在治疗IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2介导的疾病中的用途。
背景技术：
白介素-8(IL-8)有很多不同的名字，例如中性白细胞诱引剂/活化蛋白-1(NAP-1)、单核细胞衍化的中性白细胞趋化因子(MDNCF)、中性白细胞活化因子(NAF)和T-细胞淋巴细胞趋化因子。白介素-8是中性白细胞、嗜碱细胞和T-细胞子集的化学引诱物。它由多数成核细胞包括巨噬细胞、成纤维细胞、内皮和表皮细胞与TNF、IL-1α、IL-1β或LPS接触产生，并且由嗜中性白细胞自身与LPS或趋化因子例如FMLP接触产生。M.Baggiolini等，J.Clin.Invest.84，1045(1989)；J.Schroder等，J.Immunol.139，3474(1987)和J.Immunol.144，2223(1990)；Strieter等，Science 243，1467(1989)和J.Biol.Chem.264，10621(1989)；Cassatella等，J.Immunol.148，3216(1992)。
GROα、GROβ、GROγ和NAP-2也属于趋化因子a-族。和IL-8一样，这些趋化因子也有不同的名称.例如GROα、β、γ分别被称作MGSAa、b和g(黑素瘤生长刺激活性)，参见Richmond等，J.CellPhysiology 129，375(1986)和Chang等，J.Immunol 148，451(1992)。所有具有直接先于CXC基元的ELR基元的a-族趋化因子均与IL-8B受体结合。
IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2和ENA-78刺激许多体外功能。它们对于嗜中性白细胞均具有化学引诱剂的性质，而IL-8和GROα已经证实具有T-淋巴细胞和嗜碱细胞趋化活性。另外，IL-8可以诱导嗜碱细胞从正常和特应性个体中释放组胺，并且GRO-α和IL-8还可以诱导溶菌酶释放和中性白细胞的呼吸爆发。IL-8还显示增加Mac-1(CD11b/CD18)在中性白细胞上的表面表达、而不使蛋白合成重新开始。这有助于增加中性白细胞与血管内皮细胞的粘着。许多已知的疾病是以大量中性白细胞浸润为特征的。与IL-8一样，GROα、GROβ、GROγ和NAP-2促进中性白细胞的蓄积和活化，这些趋化因子与许多急性和慢性炎性疾病有关，所述疾病包括牛皮癣和类风湿性关节炎，Baggiolini等，FEBS Lett.307，97(1992)；Miller等，Crit.Rev.Immunol.12，17(1992)；Oppenheim等，Annu.Rev.Immunol.9，617(1991)；Seitz等，J.Clin.Invest.87，463(1991)；Miller等，Am.Rev.Respir.Dis.146，427(1992)；Donnely等，Lancet341，643(1993)。另外，ELR趋化因子(含有恰先于CXC基元的氨基酸ELR基元的那些趋化因子)还与血管扩张有关。Strieter等，Science 258，1798(1992)。
在体外，IL-8和NAP-2通过与7种转膜(G-蛋白连结的一族)受体结合并使其活化，特别是通过与IL-8受体、尤其是B-受体结合，导致中性白细胞形态发生变化、趋化性、颗粒释放和呼吸爆发。Thomas等，J.Biol.Chem.266，14839(1991)；和Holmes等，Science 253，1278(1991)。对于该族受体的非肽小分子拮抗剂的开发已有先例。参阅R.Freidinger，Progress in Drug Research，Vol.40，pp.33-98，Birkhauser Verlag，Basel 1993。因此IL-8受体代表了新抗炎剂开发的有希望的目标。
已经描绘出两种高亲和性人IL-8受体(77％同源性)的特性IL-8Ra仅仅与IL-8高度亲和地结合，而IL-8Rb则对IL-8以及GROα、GROβ、GROγ和NAP-2均具有高亲和性。参见Holmes等，见上文；Murphy等，Science 253，1280(1991)；Lee等，J.Biol.Chem.267，16283(1992)；LaRosa等，J.Biol.Chem.267，25402(1992)；和Gayle等，J.Biol.Chem.268，7283(1993)。
在该领域中，对于治疗应用，始终对能够与IL-8a或b受体结合的化合物存有需求。因此，与IL-8产生增加有关的疾病将会受益于作为IL-8受体结合抑制剂的化合物，IL-8的产生造成中性白细胞和T-细胞子集趋于炎性部位。
发明概述本发明提供了治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中趋化因子是与IL-8α或β受体结合的趋化因子，该方法包括施用有效量的式(I)或(II)化合物或其可药用盐。趋化因子尤其是IL-8。
本发明还涉及在需要的哺乳动物中抑制IL-8与其受体结合的方法，该方法包括给所述哺乳动物施用有效量的式(I)或(II)化合物。
本发明还提供了新的式(I)和(II)化合物，以及含有式(I)化合物和式(II)化合物与可药用载体或稀释剂的药物组合物。
适用于本发明的式(I)化合物由下列结构表示 其中R是-NH-C(X2)-NH-(CR13R14)v-Z；Z是W、HET、 任选被取代的C1-10烷基、任选被取代的C2-10链烯基、或任选被取代的C2-10炔基；X是C(X1)2、C(O)、C(S)、S(O)2、PO(OR4)或C＝N-R19；X1独立地为氢、卤素、C1-10烷基、NR4R5、C1-10烷基-NR4R5、C(O)NR4R5、任选被取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、羟基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂环、杂环C1-4烷基、或杂芳基C1-4烷氧基；X2是＝O或＝S；R1独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、卤代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、叠氮基、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂环，杂环C1-4烷基、杂芳基C1-4烷氧基、芳基C2-10链烯基、杂芳基C2-10链烯基、杂环C2-10链烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10链烯基C(O)R11、C2-10链烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R17、或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个R1部分结合在一起可以形成O-(CH2)sO或5-6元饱和或不饱和环；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；n是1-3的整数；m是1-3的整数；q是0或1-10的整数；s是1-3的整数；t是0或1或2的整数；v是0或1-4的整数；p是1-3的整数；HET是任选被取代的杂芳基；R4和R5独立地为氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，或者R4和R5与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地含有其他选自O/N/S的杂原子；Y独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、卤代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、叠氮基、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基C1-4烷氧基、杂环，杂环C1-4烷基、芳基C2-10链烯基、杂芳基C2-10链烯基、杂环C2-10链烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10链烯基C(O)R11、C2-10链烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Ra、或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个Y部分结合在一起形成O-(CH2)sO或5-6元饱和或不饱和环；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R6和R7独立地为氢或C1-4烷基，或者R6和R7与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地含有其他选自氧、氮或硫的杂原子；R8独立地为氢或C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11是氢、C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、或任选被取代的杂环C1-4烷基；R12是氢、C1-10烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的芳烷基；R13和R14独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基，或者R13和R14中的一个可以是任选被取代的芳基；R15和R16独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基；R17是C1-4烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R18是氢、任选被取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、羟基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基，其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R19是氰基、硝基、S(O)2NR4R5、S(O)2R17、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基；并且其中含有烷基、芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；Ra是NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；W是 含E的环任选地选自 星号*是指环的连接点；或其可药用盐。
适用于本发明的式(II)化合物由下列结构表示 其中R是-NH-C(X2)-NH-(CR13R14)v-Z；Z是W、HET、 任选被取代的C1-10烷基、任选被取代的C2-10链烯基、或任选被取代的C2-10炔基；X是N或C(X1)；X1为氢、卤素、C1-10烷基、NR4R5、C1-10烷基-NR4R5、C(O)NR4R5、C1-10烷基C(O)NR4R5、任选被取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、羟基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂环、杂环C1-4烷基、或杂芳基C1-4烷氧基；X2是＝O或＝S；R1独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、卤代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、叠氮基、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂环，杂环C1-4烷基、杂芳基C1-4烷氧基、芳基C2-10链烯基、杂芳基C2-10链烯基、杂环C2-10链烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10链烯基C(O)R11、C2-10链烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R17、或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个R1部分可以结合在一起形成O-(CH2)s-O或5-6元饱和或不饱和环；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；n是1-3的整数；m是1-3的整数；q是0或1-10的整数；t是0或1或2的整数；s是1-3的整数；v是0或1-4的整数；p是1-3的整数；HET是任选被取代的杂芳基；R4和R5独立地为氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环、杂环C1-4烷基，或者R4和R5与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地含有其他选自O/N/S的杂原子；Y独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、卤代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、叠氮基、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基C1-4烷氧基、杂环、杂环C1-4烷基、芳基C2-10链烯基、杂芳基C2-10链烯基、杂环C2-10链烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10链烯基C(O)R11、C2-10链烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Ra、或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个Y部分可以结合在一起形成O-(CH2)s-O或5-6元饱和或不饱和环；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R6和R7独立地为氢或C1-4烷基，或者R6和R7与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地含有其他选自氧、氮或硫的杂原子；R8独立地为氢或C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11是氢、C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、或任选被取代的杂环C1-4烷基；R12是氢、C1-10烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的芳烷基；R13和R14独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基，或者R13和R14中的一个可以是任选被取代的芳基；R15和R16独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基；R17是C1-4烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；Ra是NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；W是 含E的环任选地选自 星号*是指环的连接点；或其可药用盐。
发明详述式(I)和(II)化合物除了用于人之外，还可用于需要抑制与IL-8a和b受体结合的IL-8或其他趋化因子的哺乳动物的兽医治疗。对于治疗性或预防性治疗，趋化因子介导的动物疾病包括例如在治疗方法一节中所述的疾病。
显而易见，式(I)与式(II)化合物的区别在于含A的环的不饱和性，并因此在于X部分上的取代基。除非另外指明，下文中定义的其余的术语对于式(I)和式(II)化合物是相同的。
在式(I)化合物中，合适的R1独立地选自氢；卤素；硝基；氰基；卤代C1-10烷基，例如CF3；C1-10烷基，例如甲基、乙基、异丙基或正丙基；C2-10链烯基；C1-0烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；卤代C1-0烷氧基，例如三氟甲氧基；叠氮基；(CR8R8)qS(O)tR4，其中t是0、1或2；羟基；羟基C1-4烷基，例如甲醇或乙醇；芳基，例如苯基或萘基；芳基C1-4烷基，例如苄基；芳氧基，例如苯氧基；芳基C1-4烷氧基，例如苄氧基；杂芳基；杂芳烷基；杂芳基C1-4烷氧基；芳基C2-10链烯基；杂芳基C2-10链烯基；杂环C2-10链烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10链烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10链烯基C(O)R11；C2-10链烯基C(O)OR11；C(O)R11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNHS(O)2R17；或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个R1部分可以结合在一起形成O-(CH2)s-O或5-6元饱和或不饱和环。所有含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以如下文所定义任选地被取代。
优选地，R1是氢、卤素、氰基、硝基、CF3、(CR8R8)qC(O)NR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)R4R10、C2-10链烯基C(O)OR12、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-10链烯基或S(O)2NR4R5。更优选的是，R1是卤素、氰基或硝基。对于式(I)和式(II)化合物，R1优选在4-位。
本文所用术语″含有芳基、杂芳基和杂环的部分″是指环和烷基，或如果包括的话，烯基环例如芳基、芳烷基和芳基烯基环。术语″部分″和″环″在全文中可以交换使用。
适宜地，s是1-3的整数。
应该理解，如果可能，R1部分可以是在苯环上取代，也可以在含X的环上取代。
当R1形成二氧桥时，s优选为1。当R1形成其它的不饱和环时，其优选可形成萘环系的6元环。这些环系可以被如上定义的其它R1部分独立地取代1-3次。
适宜地，R4和R5可以独立地为氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环或杂环C1-4烷基，或者R4和R5与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地包括其它选自O/N/S的杂原子。
适宜地，R6和R7独立地为氢或C1-4烷基，或者R6和R7与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地包括其它选自氧、氮或硫的杂原子。
适宜地，R8独立地为氢或C1-4烷基。
适宜地，q是0或1-10的整数。
适宜地，R10是C1-10烷基C(O)2R8，例如CH2C(O)2H或CH2C(O)2CH3。
适宜地，R11是氢、C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环或杂环C1-4烷基。
适宜地，R12是氢，C1-10烷基，任选被取代的芳基或任选被取代的芳烷基。
适宜地，R13和R14独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基，该烷基可以是如本文所定义的直链或支链烷基，或者R13和R14中的一个是任选被取代的芳基。
适宜地，v是0或1-4的整数。
当R13或R14是任选被取代的烷基时，烷基部分可以独立地被下列基团取代1-3次卤素；卤代C1-4烷基例如三氟甲基；羟基；羟基C1-4烷基；C1-4烷氧基例如甲氧基或乙氧基；卤代C1-10烷氧基；S(O)tR4；芳基；NR4R5；NHC(O)R4；C(O)NR4R5；或C(O)OR8。
适宜地，R17是C1-4烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环或杂环C1-4烷基，其中所有含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代。
适宜地，Y独立地选自氢；卤素；硝基；氰基；卤代C1-10烷基；C1-10烷基；C2-10链烯基；C1-10烷氧基；卤代C1-10烷氧基；叠氮基；(CR8R8)qS(O)tR4；羟基；羟基C1-4烷基；芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；杂芳基；杂芳烷基；杂芳基C1-4烷氧基；杂环；杂环C1-4烷基；芳基C2-10链烯基；杂芳基C2-10链烯基；杂环C2-10链烯基；(CR8R8)qNR4R5；C2-10链烯基C(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R5；(CR8R8)qC(O)NR4R10；S(O)3H；S(O)3R8；(CR8R8)qC(O)R11；C2-10链烯基C(O)R11；C2-10链烯基C(O)OR11；(CR8R8)qC(O)OR12；(CR8R8)qOC(O)R11；(CR8R8)qC(NR4)NR4R5；(CR8R8)qNR4C(NR5)R11；(CR8R8)qNR4C(O)R11；(CR8R8)qNHS(O)2Ra；或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个Y部分可以结合在一起形成O-(CH2)s-O或5-6元饱和或不饱和环。上述所有含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以如下文所定义任选地被取代。
当Y形成二氧桥时，s优选为1。当Y形成其它的不饱和环时，其优选可形成萘环系的6元环。这些环系可以被如上定义的其它Y部分独立地取代1-3次。
适宜地，Ra是NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、杂环C1-4烷基、其中所有含有芳基、杂芳基和杂环的部分均可任选地被取代。
Y优选为卤素、C1-4烷氧基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳氧基或芳烷氧基、亚甲基二氧基、NR4R5、C1-4烷硫基(thio C1-4 alkyl)、芳硫基(thioaryl)、卤代烷氧基、任选被取代的C1-4烷基或羟烷基。Y更优选为一取代的卤素、二取代的卤素、一取代的烷氧基、二取代的烷氧基、亚甲基二氧基、芳基或烷基，更优选的是这些基团是在苯基环的2′-位或2′-、3′-位一-或二-取代的。
尽管Y可以在环的任何位置上被取代，但是n优选为1。尽管R1和Y可以均为氢，但是优选至少一个环是被取代的，优选两个环均被取代。
适宜地，R是-NH-C(X2)-NH-(CR13R14)v-Z。适宜地，Z是W、HET、 任选被取代的C1-10烷基、任选被取代的C2-10链烯基或任选被取代的C2-10炔基。
适宜地，p是1-3的整数。
适宜地，X2是＝0或＝S。
在式(I)化合物中，适宜地，X是C(X1)2、C(O)、C(S)、S(O)2、PO(OR4)或C＝N-R19。
适宜地，R19是氰基、硝基、S(O)2NR4R5、S(O)2R17、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基-C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、杂环C1-4烷基，其中含有烷基、芳基、杂芳基和杂环的环均可以任选地被取代。R19优选为氰基。
当X是C(X1)2时，X1适宜地独立为氢，卤素，NR4R5，C1-10烷基NR4R5，C(O)NR4R5，C1-10烷基-C(O)NR4R5，任选被取代的C1-10烷基，C1-10烷氧基；卤代C1-10烷氧基，芳基；芳基C1-4烷基；芳氧基；芳基C1-4烷氧基；杂芳基；杂芳烷基；杂环，杂环C1-4烷基；或杂芳基C1-4烷氧基。C1-10烷基可以任选地被羟基、NR4R5或卤素取代一次或多次。优选的是，至少一个X1是氢。
对于式(I)化合物，优选的是，X是C(S)或C(O)部分，更优选C(O)。
适宜地，R18是氢，任选被取代的C1-10烷基，C1-10烷氧基，卤代C1-10烷氧基，羟基，芳基C1-4烷基，芳基C2-4链烯基，杂芳基，杂芳基-C1-4烷基，杂芳基C2-4链烯基，杂环或杂环C1-4烷基，其中所有的芳基、杂芳基和杂环均可以任选地被取代。优选的是，R18是氢或烷基，更优选为氢。
在式(II)化合物中，适宜地，X是N或C(X1)，优选X是N。
优选的是，当X是C(X1)时，X1是氢或卤代烷基。
应该理解，在式(II)化合物中，环系可以以互变异构形式存在。
适宜地，当Z是杂芳基(HET)环时，其适宜地为杂芳基环或环系。如果HET部分是多环系，则含有杂原子的环不需要通过环的(R13R14)v联接与脲部分直接连接，在这些环系中可以如本文所定义任选地取代。优选的HET部分是吡啶基，可以是2-、3-或4-吡啶基。如果该环是多环系，则优选苯并咪唑、二苯并噻吩或吲哚环。其他令人关注的环包括、但不限于噻吩、呋喃、嘧啶、吡咯、吡唑、喹啉、异喹啉、喹唑啉基、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、或苯并咪唑。
HET环可以独立地被如上定义的Y任选地取代1-5次，优选1-3次。这些取代基可以在HET环系的任一环上，例如在苯并咪唑环上。
适宜地，R15和R16独立地为氢或如上对R13和R14所定义的任选取代的C1-4烷基。
适宜地，W是 适宜地，含E的环任选地选自 星号*是指环的连接点。
通过星号(*)所示连接点表示的E环可以任选地存在。如果不存在E环，则该环是被所示R1取代的苯基部分。E环可以在任一环上被(Y)n部分取代，是饱和或不饱和的，并且对于本发明的目的仅仅示出了在不饱和环上被取代。
尽管在W中的Y可以在苯基部分5个环位置中的任何一个上取代(当不存在E环时)，Y优选在2’-位或3’-位被一取代，优选4’-位是未取代的。如果苯基环是二取代的，取代基优选位于单环系的2’或3’位。尽管R1和Y均可以是氢，但是优选至少一个环是被取代的，更优选两个环均被取代。
除非另外指明，本文所用术语″任选被取代的″是指下述基团例如卤素如氟、氯、溴或碘；羟基；羟基取代的C1-10烷基；C1-10烷氧基如甲氧基或乙氧基；S(O)m′C1-10烷基，其中m’是0、1或2，例如甲硫基、甲基亚磺酰基或甲基磺酰基；氨基，一-和二-取代的氨基，例如NR4R5基团；NHC(O)R4；C(O)NR4R5；C(O)OH；S(O)2NR4R5；NHS(O)2R20，C1-10烷基例如甲基、乙基、丙基、异丙基或叔丁基；卤代C1-10烷基如CF3；任选被取代的芳基，例如苯基，或任选被取代的芳烷基如苄基或苯乙基，任选被取代的杂环，任选被取代的杂环烷基，任选被取代的杂芳基，任选被取代的杂芳烷基，其中芳基、杂芳基或杂环部分可以被下列基团取代1-2次卤素；羟基；羟基取代的烷基；C1-10烷氧基；S(O)m′C1-10烷基；氨基、一-和二-取代的氨基例如NR4R5基团；C1-10烷基，或卤代C1-10烷基如CF3。
R20适宜地是C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环或杂环C1-4烷基。
合适的可药用盐是本领域专业人员公知的，包括无机和有机酸的碱盐，所述酸是例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯乙酸和扁桃酸。此外，式(I)化合物的可药用盐还可以是与可药用阳离子形成的盐，例如，在取代基包括羧基部分的情况下。合适的可药用阳离子是本领域专业人员公知的，包括碱、碱土、铵和季铵阳离子。
下面定义了本文所用的一些术语·″卤素″-是指所有的卤素，即氯、氟、溴和碘。
·″C1-10烷基″或″烷基″-除非另外限制链长度，均是指1-10个碳原子的直链和支链基团，它们包括、但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基等。
·本文所述术语″环烷基″是指环基，优选3-8个碳原子的环基，包括、但不限于环丙基、环戊基、环己基等。
·除非限制链长度，本文所用术语″链烯基″在所有情况下均是指2-10个碳原子的直链或支链基团，它们包括、但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基等。
·″芳基″-是指苯基和萘基；·″杂芳基″(其本身或任何结合形式，例如″杂芳氧基″或″杂芳烷基″)-是指5-10元芳环系，其中一个或多个环含有一个或多个选自N、O或S的杂原子，例如、但不限于吡咯、吡唑、呋喃、噻吩、喹啉、异喹啉、喹唑啉基、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、或苯并咪唑。
·″杂环″(其本身或任何结合形式，例如″杂环烷基″)-是指饱和或部分不饱和的4-10元环系，其中一个或多个环含有一个或多个选自N、O或S的杂原子；例如、但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、四氢吡喃、或咪唑烷。
·除非另外指明，本文所用术语″芳烷基″或″杂芳烷基″或″杂环烷基″是指如上定义的与同样是如上定义的芳基、杂芳基或杂环部分连接的C1-10烷基。
·″亚磺酰基″-是指相应硫化物的氧化物S(O)，术语″硫代″是指硫化物，术语″磺酰基″是指完全氧化的S(O)2部分。
·本文所用术语″其中两个R1部分(或者两个Y部分)可以结合在一起形成5或6元饱和或不饱和环″是指形成芳环系例如萘，或者是连接有6元部分饱和或不饱和环如C6环烯基即己烯或C5环烯基部分如环戊烯的苯基部分。
式(I)化合物的实例包括N-4-(苯并咪唑啉-2-酮-N’-(2’-溴苯基)脲；N-4-(1H，3H-2，1，3-苯并噻唑-2，2-二氧化物)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-1-N-甲基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-1-甲基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2-溴苯基)脲；
N-4-(7-氰基-1-甲基苯并咪唑啉-2-酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-酮)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-亚胺)-N’-(2-溴苯基)脲；和N-(4-氰基-2-氧代-3-甲基苯并咪唑-7-基)-N’-(2-溴苯基)脲。
式(II)化合物的实例包括N-7-(苯并三唑)-N’-(2-溴苯基)脲；N-7-(4-溴苯并三唑)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-7-(4-溴-2-三氟甲基-苯并咪唑基)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(2-三氟甲基-苯并咪唑基)-N’-(2-溴苯基)脲；N-7-(4-氰基-苯并三唑)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-7-(4-氰基-苯并三唑)-N’-(2-溴苯基)脲；N-7-(4-氰基-2-三氟甲基-苯并咪唑基)-N’-(2-溴苯基)脲；N-7-(4-氰基-苯并咪唑基)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；和N-7-(4-氰基-苯并咪唑基)-N’-(2-溴苯基)脲。
对于本发明，上述命名是以下列环系编号方式为基础的 (适用于式(I))；和(适用于式(II))。
制备方法可以通过合成方法获得式(I)化合物，在下列反应方案中举例说明其中一些合成方法。在这些反应方案中提供的合成方法适用于制备具有各种不同可反应Z和R基团的式(I)化合物，该合成使用适于进行保护以达到与所述反应相容的任选取代基。在那种情况下，之后脱保护，得到通常公开的原形态化合物。一旦构建了脲核，这些通式的其它化合物还可以采用本领域公知的官能团相互转换的标准技术进行制备。尽管结合各种式(I)化合物说明了反应方案，但这仅仅是说明性的，而非将合成方法限制在仅使用这些方法上。
反应方案1 如果2-硝基取代的杂环化合物2-反应方案1不是市售的，则可以通过在质子溶剂如HOAc中用亚硝酸钠处理市售3-硝基亚苯基二胺1-反应方案1进行制备。
反应方案2 a)三光气，Et3N，DMF如果2-硝基取代的杂环化合物2-反应方案2不是市售的，则可以通过在DMF中用三光气和三乙胺处理市售3-硝基亚苯基二胺1-反应方案2进行制备，或者用硫光气处理形成硫脲。或者与另一个不含离去基的羰基如羰基二咪唑反应。
反应方案3 a)三氟乙酸酐b)甲苯，回流如果2-硝基取代的杂环化合物2-反应方案3不是市售的，则可以通过用相应的酐处理市售3-硝基亚苯基二胺1-反应方案3，然后在甲苯中回流进行制备。
反应方案4 如果2-硝基取代的杂环化合物3-反应方案4不是市售的，则可以通过在标准硝化条件下(使用HNO3或NaNO3)、在23℃处理化合物2-反应方案4进行制备。如果杂环化合物2-反应方案4不是市售的，则可以在-70℃用三乙胺、然后用亚硫酰氯处理市售1，2-二苄基二胺1-反应方案4，然后用m-CPBA氧化并在甲醇中用H2/Pd使苄基还原进行制备。
反应方案5 如果2-硝基取代的杂环化合物2-反应方案5不是市售的，则可以通过用PhOP(O)Cl2、然后采用标准硝化条件(用HNO3或NaNO3)在23℃处理市售1，2-二胺1-反应方案5进行制备。
反应方案6 a)甲醛，回流如果杂环化合物2-反应方案6不是市售的，则可以通过用甲醛在回流下处理市售1，2-二胺1-反应方案6进行制备。
反应方案7 如果所需的苯胺2-反应方案7不是市售的，则在标准条件下(H2Pd/C或SnCl2)使相应的硝基化合物1-反应方案4还原。邻位取代的苯基脲3-反应方案7可以采用标准条件，使市售的取代异氰酸芳基酯(Aldrich Chemical Co.，Milwaukee，Wi.)与相应的苯胺2-反应方案7在非质子传递溶剂(如DMF或甲苯)中缩合进行制备。
反应方案8 如果7-氨基取代的杂环化合物4-反应方案8不是市售的，则可以通过用亲核试剂如氰化铜(I)处理市售2-溴-5-硝基苯胺1-反应方案8进行制备，或者可以在非质子传递溶剂如DMF中用吡啶进行钯催化偶合反应以生成2-氰基-5-硝基苯胺2-反应方案8。通过2-氰基-5-硝基苯胺2-反应方案8与碘化四甲基肼和强位阻碱如叔戊醇钠在非质子传递溶剂如DMSO中反应，可以形成二胺3-反应方案8。通过二胺3-反应方案8与亚硝酸钠在非质子传递溶剂如HOAc中反应，然后用合适的还原剂例如在MeOH中的Pd/C使硝基还原，可以制备7-氨基-4-氰基苯并三唑4-反应方案8。或者二胺3-反应方案8可用于合成本文所述的其他杂环。化合物的芳环还可以采用本领域公知的条件例如溴化或其他亲电取代反应进一步官能化。这些取代基可以用标准的亲核取代基进一步处理，例如与阴离子(如甲醇钠)反应，或者在钯催化偶合反应化学中进行处理。
然后，可以通过与市售异氰酸酯缩合，将氨基取代的杂环化合物4-反应方案8转化为相应的脲。
本发明另一方面涉及新的下式化合物 其中R1和m如在式(II)中所定义。优选地，R1是溴或氰基。R1优选在环的4-位取代。
本发明另一方面涉及新的式(IV)化合物 其中R1和m如在式(II)中所定义，条件是R1不是氢。R1优选为氰基或溴。
本发明另一方面涉及新的制备下式化合物的方法 该方法包括在质子溶剂中将下式化合物 与亚硝酸钠反应，然后使硝基还原，得到式(III)化合物。
最后，本发明另一方面涉及制备如上定义的式(II)化合物的相似方法，该方法包括a)将下式化合物 与式C(X2)-N-(CR13R14)v-Z化合物反应；其中R1、m、X2、R13、R14、v和Z如在式(II)中所定义，得到式(II)化合物。
合成实施例下面将参照下列实施例对本发明进行描述，这些实施例仅仅是说明性的，而非对本发明范围的限制。除非另外指明，所有的温度均为摄氏度，所有的溶剂均是最高纯度的，并且所有的反应均是在氩气氛下在无水条件下进行。
在实施例中，所有温度均为摄氏度(℃)。除非另外指明，质谱是在VG Zab质谱仪上、采用快原子轰击法进行。1H-NMR(在下文中以″NMR″表示)谱用Bruker AM 250或Am 400光谱仪在250MHz记录。峰的多重态是s＝单峰、d＝双峰、t＝三峰、q＝四峰、m＝多峰，并且br表示宽峰。Sat.表示饱和溶液，eq表示试剂相对于主要反应物的摩尔当量比。
一般方法B合成N，N’-苯基脲。向异氰酸苯基酯(1.0当量)在二甲基甲酰胺(1ml)中的溶液中加入相应的苯胺(1.O当量)。在80℃搅拌反应混合物直至反应完全(3-16小时)，然后真空除去溶剂。每一具体化合物的纯化、产率和光谱特征如下所述。
实施例1制备N-[5-溴-2-苯并三唑]-N’-[2，3-二氯苯基]脲a)制备4-硝基苯并三唑在搅拌下，向3-硝基-亚苯基二胺(15.3g，100毫摩尔(在下文中以mmol表示))在乙酸(50毫升(在下文中以″ml″表示))中的溶液中加入亚硝酸钠(6.9g，100mmol)。该混合物在60℃加热1小时(在下文中以″hr″表示)。然后使反应物冷却至室温并加入水，所需产物从溶液中沉淀出来并将混合物过滤，得到所需产物(10.7克(在下文中以″g″表示)，65％).1H NMR(CD3SOCD3)δ8.58(d，1H)，8.44(d，1H)，7.61(t，1H)。b)制备4-氨基苯并三唑向4-硝基苯并三唑(4g，24.4mmol)在甲醇(250ml)中的溶液中加入10％Pd/C(1.0g)。向该混合物中通入氩气，然后向该溶液中鼓泡通入氢气10分钟(在下文中以″min″表示)，并以球压保持氢气氛4小时。向反应混合物中通入氩气，再加入10％Pd/C(1.0g)，并以球压保持氢气氛过夜。混合物经硅藻土过滤，硅藻土用甲醇洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(5％MeOH/CH2Cl2)，得到所需产物(2.0g，82％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ8.71(s，1H)，7.16(t，1H)，6.75(d，1H)，6.36(d，1H)，5.90(s，1H)。c)制备4-氨基-7-溴苯并三唑向4-氨基苯并三唑(550毫克(在下文中以″mg″表示)，4.1mmol)在乙酸(10ml)中的溶液中加入溴化钾(520mg，4.4mmol)、钼酸铵(67mg，0.55mmol)和过氧化氢(0.5ml，30％)。该混合物在25搅拌3小时。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷(1当量/1当量))得到所需产物(400mg，45％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ7.29(d，1H)，6.49(d，1H)，6.05(bs，3H)。d)制备N-7-[4-溴-[2，4]-苯并三唑]-N’-[2，3-二氯苯基]脲按照一般方法B中所述的方法，由4-氨基-7-溴苯并三唑(330mg，1.50mmol)制备N-[5-溴-2-苯并三唑]-N’-[2，3-二氯苯基]脲。通过将所得固体在硅胶上进行色谱，使产物纯化(EtOAc/己烷(2当量/3当量))。(410mg，68％)。1H NMR(CD3SOCD3)δ10.42(s，1H)，9.25(s，1H)，8.20(dd，1H)，7.96(d，1H)，7.64(d，1H)，7.33(m，2H)。
实施例2制备N-7-[苯并咪唑啉-3-酮]-N’-[2-溴苯基]脲a)制备4-硝基-苯并咪唑啉-2-酮向3-硝基-亚苯基二胺(1.0g，6.53mmol)在二甲基甲酰胺(20ml)中的溶液中加入三光气(0.775g，2.60mmol)和三乙胺(1ml，7.80mmol)。然后将该混合物加热至80℃约1小时。蒸发溶剂，使用二氯甲烷/己烷(1当量/20当量)将产物从溶液中沉淀出来。(700mg，64％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ11.61(s，1H)，11.35(s，1H)，7.85(d，1H)，7.34(d，1H)，7.15(t，1H)。b)制备4-氨基-苯并咪唑啉-2-酮向4-硝基苯并咪唑啉-2-酮(700mg，3.9mmol)在甲醇(50ml)和乙酸(10ml)中的溶液中加入10％Pd/C(200mg)。向该混合物中通入氩气，然后向该溶液中鼓泡通入氢气10分钟，并以球压保持氢气氛过夜。混合物经硅藻土过滤，硅藻土用甲醇洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(10％MeOH/CH2Cl2)，得到所需产物(500mg，86％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ10.34(s，1H)，10.01(s，1H)，6.66(t，1H)，6.24(d，1H)，6.22(d，1H)，5.15(bs，2H)。c)制备N-[苯并咪唑啉-3-酮]-N’-[2-溴苯基]脲按照一般方法B中所述的方法，由4-氨基苯并咪唑啉-2-酮(80mg，0.54mmol)制备N-[苯并咪唑啉-3-酮]-N’-[2-溴苯基]脲。通过将所得固体在硅胶上进行色谱，使产物纯化(EtOAc/己烷(1当量/1当量))。(120mg，64％)。1H NMR(CD3SOCD3)δ10.68(s，1H)，10.03(s，1H)，9.08(s，1H)，8.15(d，1H)，8.08(s，1H)，7.62(d，1H)，7.34(t，1H)，6.99(t，1H)，6.92(d，2H)，6.73(d，1H)。
实施例3制备N-[4-溴-2-三氟甲基-7-苯并咪唑基]-N’-[2-溴苯基]脲a)制备4-硝基-2-三氟甲基苯并咪唑向3-硝基-亚苯基二胺(1.0g，6.53mmol)溶液中加入三氟乙酸酐(1.37g，6.53mmol)。然后搅拌该混合物1小时。蒸发溶剂，产物在甲苯中回流2小时。蒸发溶剂，得到所需产物(1.43g，95％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ9.40(s，1H)，8.31(d，1H)，8.39(d，1H)，7.58(t，1H)。b)制备4-氨基-2-三氟甲基苯并咪唑向4-硝基-2-三氟甲基苯并咪唑(700mg，3.0mmol)在甲醇(50ml)中的溶液中加入10％Pd/C(200mg)。向该混合物中通入氩气，然后向该溶液中鼓泡通入氢气10分钟。并以球压保持氢气氛过夜。混合物经硅藻土过滤，硅藻土用甲醇洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(10％ MeOH/CH2Cl2)，得到所需产物(560mg，93％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ10.49(s，1H)，7.09(t，1H)，6.72(d，1H)，6.30(d，1H)，5.52(bs，2H)。c)制备4-氨基-7-溴-2-三氟甲基苯并咪唑向4-氨基-2-三氟甲基苯并咪唑(180mg，0.9mmol)在乙酸(10ml)中的溶液中加入溴化钾(117mg，0.99mmol)、钼酸铵(12mg，0.099mmol)和过氧化氢(0.2ml，30％)。该混合物在25℃搅拌3小时，蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷(1当量/1当量))，得到所需产物(103mg，39％)。1H NMR(CD3OD)δ7.11(d，1H)，6.35(d，1H)。d)制备N-[4-溴-2-三氟甲基-7-苯并咪唑基]-N’-[2-溴苯基]脲按照一般方法B中所述的方法，由4-氨基-7-溴-2-三氟甲基苯并咪唑(33mg，0.54mmol)制备N-[4-溴-2-三氟甲基-7-苯并咪唑基]-N’-[2-溴苯基]脲。所得固体经硅胶色谱纯化(EtOAc/己烷(1当量/1当量))。(35mg，63％)。1H NMR(CD3SOCD3)δ9.95(s，1H)，9.54(s，1H)，9.07(s，1H)，8.06(d，1H)，7.99(d，1H)，7.62(d，1H)，7.33(t，1H)，7.01(t，1H)。
实施例4制备N-[4-三唑并苯基]-N′-[2-溴苯基]脲a)制备2，6-二硝基(1-苯磺酰基)苯胺向2，6-二硝基苯胺(2g，10.92mmol)在THF(20ml)中的溶液中加入氢化钠(473mg，10.92mmol)。10分钟后，加入苯磺酰氯(1.4mL，10.92mmol)。在室温搅拌反应混合物16小时。然后将反应混合物在乙酸乙酯和水之间分配。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，所得固体经硅胶色谱纯化(己烷/乙酸乙酯(5当量/1当量))，得到产物(2.6g，74％)。EI-MS m/z 324(M+)。b)制备2，6-二氨基(1-苯磺酰基)苯胺向2，6-二硝基(1-苯磺酰基)苯胺(450mg，1.39mmol)在乙醇(10mL)中的溶液中加入氯化锡(II)(1.57g，6.95mmol)。使反应混合物搅拌回流4小时。然后冷却至室温。加入NaHCO3水溶液至pH＝7。然后用乙酸乙酯萃取(3x)。合并的有机层用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到产物(338mg，92％)。EI-MS m/z 264(M+)。c)制备N-(2-苯磺酰基氨基-3-氨基苯基)-N’-(2-溴苯基)脲向异氰酸2-溴苯基酯(0.16mg，1.28mmol)在DMF(1.5mL)中的溶液中加入2，6-二氨基(1-苯磺酰基)苯胺(338mg，1.28mmol)。在80℃搅拌反应混合物16小时，然后冷却至室温。所得液体经硅胶色谱纯化(己烷/乙酸乙酯(5当量/1当量至1当量/1当量))，得到产物(430mg，73％)。EI-MS m/z 461(M+)。d)制备N-(4-三唑并苯基)-N’-(2-溴苯基)脲将N-(2-苯磺酰基氨基-3-氨基苯基)-N’-(2-溴苯基)脲(235mg，0.51mmol)加入HCl/H2O(0.51mL/1.02mL)中，冷却至0℃。向反应混合物中加入硝酸钠(35.4mg，0.51mmol)。反应混合物在0搅拌30分钟。向反应混合物中加入氰化钠(25mg，0.51mmol)，并温热至室温。在室温搅拌反应混合物18小时，然后用乙酸乙酯萃取3次。合并有机提取液，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，所得固体经硅胶色谱纯化，得到产物(100mg，59％)。EI-MS m/z 333(M+)。
实施例5制备N-7-[2-三氟甲基苯并咪唑基]-N’-[2-溴苯基]脲a)制备4-硝基-2-三氟甲基苯并咪唑向3-硝基-亚苯基二胺(1.0g，6.53mmol)溶液中加入三氟乙酸酐(1.37g，6.53mmol)。然后搅拌该混合物1小时。蒸发溶剂，产物在甲苯中回流2小时。蒸发溶剂，得到所需产物(1.43g，95％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ9.40(s，1H)，8.31(d，1H)，8.39(d，1H)，7.58(t，1H)。b)制备4-氨基-2-三氟甲基苯并咪唑向4-硝基-2-三氟甲基苯并咪唑(700mg，3.0mmol)在甲醇(50ml)中的溶液中加入10％Pd/C(200mg)。向该混合物中通入氩气，然后向该溶液中鼓泡通入氢气10分钟，并以球压保持氢气氛过夜。混合物经硅藻土过滤，硅藻土用甲醇洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(10％ MeOH/CH2Cl2)，得到所需产物(560mg，93％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ10.49(s，1H)，7.09(t，1H)，6.72(d，1H)，6.30(d，1H)，5.52(bs，2H)。c)制备N-7-[2-三氟甲基苯并咪唑基]-N’-[2-溴苯基]脲按照一般方法B中所述的方法，由4-氨基-2-三氟甲基苯并咪唑(360mg，1.79mmol)制备N-7-[2-三氟甲基苯并咪唑基]-N’-[2-溴苯基]脲。通过将所得固体在硅胶上进行色谱，使产物纯化(EtOAc/己烷(1当量/1当量))。(35mg，63％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ9.94(s，1H)，9.89(s，1H)，9.02(s，1H)，8.09(d，1H)，8.00(d，1H)，7.61(d，1H)，7.32(m，2H)，7.20(d，1H)，7.00(t，1H)。
实施例6制备N-(4-氰基-1H-苯并三唑-7-基)-N’-(2，3-二氯苯基)脲a)制备2-氰基-5-硝基苯胺在搅拌下，向2-溴-5-硝基苯胺(5.0g，23mmol)在二甲基甲酰胺(100ml)和吡啶(20ml)中的溶液中加入氰化铜(I)(2.05g，64mmol)。然后将该混合物在160℃加热48小时。然后使反应物冷却至室温，经硅藻土过滤，硅藻土用乙酸乙酯洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(25％EtOAc/己烷)，得到所需产物(2.64g，70％)。1H NMR(CD3COCD3)δ7.75(s，1H)，7.70(d，1H)，7.44(dd，1H)，6.25(bs，2H)。b)制备2-氰基-5-硝基-亚苯基二胺向2-氰基-5-硝基苯胺(435mg，2.67mmol)在二甲基亚砜(25ml)中的溶液中加入碘化四甲基肼(534mg，2.67mmol)和叔戊醇钠(880mg，8.01mmol)。在室温搅拌该混合物12小时，用10％盐酸终止反应。滤出沉淀的固体，剩余的溶液用乙酸乙酯萃取，蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(25％EtOAc/己烷)，得到所需产物(254mg，53％)。1H NMR(CD3COCD3)δ7.49(d，1H)，7.03(bs，2H)，6.80(d，1H)，5.78(bs，2H)。c)制备4-氰基-7-硝基苯并三唑在搅拌下，向2-氰基-5-硝基亚苯基二胺(120mg，0.67mmol)在乙酸(20ml)中的溶液中加入亚硝酸钠(50mg，0.72mmol)。然后在60℃加热该混合物1小时。使反应物冷却至室温，蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(50％ EtOAc/己烷)，得到所需产物(120mg，95％)。1H NMR(CD3COCD3)δ8.70(d，1H)，8.25(d，1H)。d)制备4-氰基-7-氨基苯并三唑向4-氰基-7-硝基苯并三唑(120mg，0.63mmol)在甲醇(250ml)中的溶液中加入10％Pd/C(1.0g)。向该混合物中通入氩气，然后向该溶液中鼓泡通入氢气10分钟，并以球压保持氢气氛4小时。向反应混合物中通入氩气，再加入10％Pd/C(1.0g)，并以球压保持氢气氛1小时。混合物经硅藻土过滤，硅藻土用甲醇洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(5％ MeOH/CH2Cl2)，得到所需产物(95mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ7.58(d，1H)，6.53(d，1H)。e)制备N-[5-氰基-2-苯并三唑]-N’-[2，3-二氯苯基]脲按照一般方法B中所述的方法，由7-氨基-4-氰基苯并三唑(95mg，0.60mmol)制备N-[5-氰基-2-苯并三唑]-N’-[2，3-二氯苯基]脲。通过将所得固体在硅胶上进行色谱，使产物纯化(EtOAc/己烷(2当量/3当量))。(410mg，68％)。1H NMR(CD3COCD3)δ10.85(s，1H)，9.40(s，1H)，8.34(d，1H)，8.20(d，1H)，7.94(d，1H)，7.36(d，1H)，7.31(t，1H)。
实施例7制备N-(2-溴苯基)-N’-(4-氰基-1H-苯并三唑-7-基)脲在搅拌下，向2-溴-5-硝基苯胺(5.0g，23mmol)在二甲基甲酰胺(100ml)和吡啶(20ml)中的溶液中加入氰化铜(I)(2.05g，64mmol)。然后将该混合物在160℃加热48小时。使反应物冷却至室温，经硅藻土过滤，硅藻土用乙酸乙酯洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(25％ EtOAc/己烷)，得到所需产物(2.64g，70％)。1H NMR(CD3COCD3)δ7.75(s，1H)，7.70(d，1H)，7.44(dd，1H)，6.25(bs，2H)。b)制备2-氰基-5-硝基亚苯基二胺向2-氰基-5-硝基苯胺(435mg，2.67mmol)在二甲基亚砜(25ml)中的溶液中加入碘化四甲基肼(534mg，2.67mmol)和叔戊醇钠(880mg，8.01mmol)。在室温搅拌该混合物12小时，用10％盐酸终止反应。滤出沉淀的固体，剩余的溶液用乙酸乙酯萃取，蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(25％ EtOAc/己烷)，得到所需产物(254mg，53％)。1H NMR(CD3COCD3)δ7.49(d，1H)，7.03(bs，2H)，6.80(d，1H)，5.78(bs，2H)。c)制备4-氰基-7-硝基苯并三唑在搅拌下，向2-氰基-5-硝基-亚苯基二胺(120mg，0.67mmol)在乙酸(20ml)中的溶液中加入亚硝酸钠(50mg，0.72mmol)。然后将该混合物在60℃加热1小时。使反应物冷却至室温，蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(50％ EtOAc/己烷)，得到所需产物(120mg，95％)。1H NMR(CD3COCD3)δ8.70(d，1H)，8.25(d，1H)。d)制备4-氰基-7-氨基苯并三唑向4-氰基-7-硝基苯并三唑(120mg，0.63mmol)在甲醇(250ml)中的溶液中加入10％ Pd/C(1.0g)。向该混合物中通入氩气，然后向该溶液中鼓泡通入氢气10分钟，并以球压保持氢气氛4小时。向反应混合物中通入氩气，再加入10％Pd/C(1.0g)，并以球压保持氢气氛1小时。混合物经硅藻土过滤，硅藻土用甲醇洗涤。蒸发溶剂，所得固体经硅胶色谱纯化(5％ MeOH/CH2Cl2)，得到所需产物(95mg，94％)。1H NMR(CD3OD)δ7.58(d，1H)，6。53(d，1H)。e)制备N-[4-氰基-[1，4]-苯并三唑-7-基]-N’-[2-溴苯基]脲按照一般方法B中所述的方法，由7-氨基-4氰基苯并三唑(95mg，0.60mmol)制备N-[5-氰基-2-苯并三唑]-N’-[2-溴苯基]脲。通过将所得固体在硅胶上进行色谱，使产物纯化(EtOAc/己烷(2当量/3当量))。(410mg，68％)。1H NMR(CD3SO2CD3)δ10.83(s，1H)，9.18(s，1H)，8.20(d，1H)，8.05(d，1H)，7.99(d，1H)，7.66(d，1H)，7.40(t，1H)，7.06(t，1H)。
采用与上述或反应方案中所述类似的方法，可以合成下列化合物实施例8N-(2H，4H-3，2，4-苯并噻唑-3，3-二氧化物)-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ10.96(s，1H)，10.32(s，1H)，9.05(s，1H)，8.49(s，1H)，8.08(d，1H，J＝11.50Hz)，7.63(d，1H，J＝11.50Hz)，7.35(t，1H)，7.18(d，1H，J＝11.50)，7.01(t，1H)，6.91(t，1H)，6.60(d，1H，J＝11.50)。实施例9N-(5-氰基-4-N-甲基苯并咪唑啉-3-硫酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ11.20(s，1H)，9.52(s，1H)，8.62(s，1H)，8.15(m，2H)，7.61(d，IH，J＝13.25Hz)，7.45(d，1H，J＝13.25Hz)，7.37(m，2H)，3.94(d，3H)。实施例10N-(5-氰基-苯并咪唑啉-3-硫酮)-N’-(2-溴苯基)脲。1HNMR(DMSO-d6)δ11.57(s，1H)，10.43(s，1H)，9.51(s，1H)，8.31(s，1H)，8.09(d，1H，J＝13.25Hz)，7.68(d，1H，J＝13.25Hz)，7.54(d，1H，J＝13.25)，7.44-7.36(m，2H)，7.07(t，1H)。实施例11N-(5-氰基-4-N-甲基苯并咪唑啉-3-硫酮))-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ11.25(s，1H)，9.51(s，1H)，8.31(s，1H)，8.09(d，1H，J＝13.25)，7.67(d，1H，J＝13.25Hz)，7.61(d，1H，J＝13.25Hz)，7.50(d，1H，J＝13.25)，7.39(t，1H)，7.06(t，1H)，3.94(s，3H)。实施例12N-(4-氰基-2-氧代-3-甲基苯并咪唑-7-基)-N’-(2，3-二氯苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ10.94(s，1H)，9.46(s，1H)，8.65(s，1H)，8.18(m，1H)，7.40-7.31(m，3H)，7.26(d，1H，J＝13.25Hz)，3.55(s，3H)。实施例13N-(4-氰基-2-氧代-2，3-二氢苯并咪唑-7-基)-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ11.86(s，1H)，10.82(s，1H)，9.94(s，1H)，8.70(s，1H)，8.65(d，1H，J＝13.25Hz)，8.11(d，1H，J＝13.25Hz)，7.85(t，1H)，7.76(m，2H)，7.50(t，1H)。实施例14N-(4-氰基-2-三氟甲基-7-苯并咪唑基)-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ10.30(s，1H)，9.25(s，1H)，8.24(s，1H)，7.96(m，2H)，7.85(d，1H，J＝13.25Hz)，7.66(d，1H，J＝13.25Hz)，7.49(t，1H)，7.07(t，1H)。实施例15N-(4-氰基-7-苯并咪唑基)-N’-(2，3-二氯苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ10.45(s，1H)，10.34(s，1H)，9.48(s，1H)，8.44(s，1H)，8.15(m，2H)，7.68(d，1H，J＝13.25Hz)，7.85(t，1H)，7.37(m，2H)。实施例16N-(4-氰基-7-苯并咪唑基)-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(丙酮-d6)δ11.81(s，1H)，9.45(s，1H)，8.84(s，1H)，8.34(s，1H)，8.26(m，2H)，7.65(d，2H)，7.41(t，1H)，7.06(t，1H)。实施例17N-(5-氰基-苯并咪唑啉-3-硫酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ11.54(s，1H)，10.42(s，1H)，9.52(s，1H)，8.62(s，1H)，8.15(m，1H)，7.54(d，1H，J＝13.25Hz)，7.40-7.30(t，m，3H)。实施例18N-(5-氰基-N-氰基-2-胍)-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，11.02(s，1H)，9.66(s，1H)，8.42(s，1H)，8.04(d，1H，J＝13.25Hz)，7.66(d，1H，J＝13.25Hz)，7.50(m，1H)，7.40(t，1H)，7.06(t，1H)。实施例19N-(4-氰基-2-氧代-3-甲基苯并咪唑-7-基)-N’-(2-溴苯基)脲，或者称作N-4-(7-氰基-1-甲基苯并咪唑啉-2-酮)-N’-(2-溴苯基)脲。1H NMR(DMSO-d6)δ10.89(s，1H)，9.39(s，1H)，8.30(s，1H)，8.10(d，1H，J＝13.25)，7.76(d，1H，J＝13.25Hz)，7.45-7.32(m，2H)，7.26(d，1H，J＝13.25)，7.03(t，1H)，3.57(s，3H)。
治疗方法式(I)和/或式(II)化合物或其可药用盐可用于制备预防性或治疗性治疗人或其他哺乳动物的、由哺乳动物细胞(例如、但不限于单核细胞和/或巨噬细胞)过多或失控产生IL-8细胞因子或者由其他与IL-8α或β受体(也称作I型或II型受体)结合的趋化因子所引起或恶化的疾病状况的药物。
因此，除非另外指明，出于本发明的目的，术语″式(I)化合物″或″式(I)″也是指″式(II)化合物″或″式(II)″。
因此，本发明提供了治疗趋化因子介导的疾病的方法，其中趋化因子是与IL-8α或β受体结合的，该方法包括施用有效量的式(I)化合物或其可药用盐。尤其是，趋化因子是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。
式(I)化合物以足以抑制细胞因子功能，特别是IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的量给药，由此可以使其生物学下调至生理机能的正常水平，或者在某种情况下下调至低于正常的水平，从而改善疾病状况。在本发明中，异常的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78水平是指(i)游离的IL-8水平大于或等于1微微克/mL；(ii)任何细胞结合的IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78水平大于正常的生理水平；或(iii)IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的含量高于分别产生IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78的细胞或组织中的基础水平。
许多其中IL-8过多或失控产生的疾病状况与这些疾病的恶化和/或引起有关。趋化因子介导的疾病包括牛皮癣、特应性皮炎、关节炎、气喘、慢性阻塞性肺病、成人呼吸窘迫综合征、炎性肠疾病、节段性回肠炎、溃疡性结膜炎、中风、脓毒性休克、内毒素休克、格兰氏脓毒病、中毒性休克综合征、心和肾再灌注损伤、肾小球性肾炎、血栓形成、移植物对宿主的反应、阿耳茨海默氏病、同种移植物排斥、疟疾、再狭窄、血管生成、动脉粥样硬化、骨质疏松、龈炎、不希望的造血干细胞释放和由呼吸病毒引起的疾病，包括但不限于鼻病毒和流感病毒，疱疹病毒，包括但不限于I型和II型单纯性疱疹病毒，和肝炎病毒，包括但不限于肝炎B和肝炎C病毒。
白介素-8与鼻病毒的关系可见于下列文章，例如Turner等，Clin.Infect.Dis.(1998)，26(4)，840-846；Sanders等，J.Virol.(1998)，72(2)，934-942；Sethi等，Clin.Exp.Immunol.(1997)，110(3)，362-369；Zhu等，Am.J.Physiol.(1997)，273(4，Pt.1)，L814-L824；Terajima等，Am.J.Physiol.(1997)，273(4，Pt.1)，L749-L759；Grunberg等，Clin.Exp.Allergy(1997)，27(1)，36-45；和Johnston等，J.Infect.Dis.(1997)，175(2)，323-329。
白介素-8与骨质疏松的关系可见于下列文章，例如Streckfus等，J.Gerontol.，Ser.A(1997)，52A(6)，M343-M351；Hermann，T.WO95/31722；和Chaudhary等，Endocrinology(Baltimore)(1992)，130(5)，2528-34。
这些疾病的主要特征是大量中性白细胞浸润、T-细胞浸润或新血管生长，并且与IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2的产生增加有关，正是由于它们的产生增加造成中性白细胞向炎性部位或内皮细胞方向性生长的趋化性。与其他炎性细胞因子(IL-1、TNF和IL-6)相反，IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2具有独特的促进中性白细胞趋化性、酶释放(包括但不限于弹性硬蛋白酶释放)和过氧化物产生与活化的性质。通过IL-8 I型或II型受体作用的α-趋化因子、尤其是GROα、GROβ、GROγ或NAP-2可以通过促进内皮细胞方向性生长来促进肿瘤的新血管生成。因此，抑制IL-8引起的趋化性或活化作用将会导致直接减少中性白细胞浸润。
目前的证据还涉及趋化因子在治疗HIV感染中的作用，Littleman等，Nature 381，pp661(1996)和Koup等，Nature 381，pp 667(1996)。
本发明还提供了用趋化因子受体拮抗剂式(I)化合物紧急处置治疗以及预防被认为易受CNS损伤个体的方法。
本发明所定义的CNS损伤包括开放性或穿透性头部创伤例如外科手术，或者封闭性头部创伤性损伤例如头部区域的损伤。该定义还包括局部缺血性中风，特别是脑部区域。
局部缺血性中风可以定义为特别是向脑部供血不足引起的灶性神经障碍，通常的结果是栓子、血栓或血管局部动脉粥样化封闭。炎性细胞因子在其中的作用已经发生，并且本发明提供了可能的治疗这些损伤的方法。对于急性损伤采取较小的治疗已经是可行的。
TNF-α是具有前炎性作用、包括内皮白细胞粘着分子表达的细胞因子。白细胞浸润局部缺血脑损害部位，因此抑制或降低TNF水平的化合物适用于治疗局部缺血脑损伤。参见Liu等，Stoke，Vol.25.，No.7，pp 1481-88(1994)，其中公开的内容结合在本文中作为参考。
Shohami等在J.of Vaisc & Clinical Physiology andPharmacology，Vol.3，No.2，pp.99-107(1992)中讨论了封闭性头部损伤的模型和用混合5-LO/CO药物进行治疗，其中公开的内容结合在本文中作为参考。已发现，减少水肿形成的治疗使接受治疗的动物得到了功能性的改善。
目前的证据还表明IL-8抑制剂可用于治疗动脉粥样硬化。第一篇参考文献，Boisvert等，J Clin Invest，1998，101353-363表明经过骨髓移植，干细胞(并且因此单核细胞/巨噬细胞)上的IL-8受体缺乏，导致LDL受体不足小鼠中动脉粥样硬化斑的发展减少。其他可供支持的参考文献是Apostolopoulos等，ArteriosclerThromb Vasc Biol.1996，161007-1012；Liu等，ArteriosclerThromb Vasc Biol，1997，17317-323；Rus等，Atherosclerosis.1996，127263-271.；Wang等，J Biol Chem.1996，2718837-8842；Yue等，Eur J Pharmacol.1993，24081-84；Koch等，Am J Pathol，1993，1421423-1431.；Lee等，Immunol Lett，1996，53，109-113.；和Terkeltaub等，Arterioscler Thromb，1994，1447-53。
式(I)化合物以足以抑制IL-8与IL-8α或β受体结合的量给药，从而抑制与这些受体的结合，例如以中性白细胞趋化性和活化的减少为证据。式(I)化合物是IL-8结合抑制剂的发现是以式(I)化合物在本文所述的体外受体结合实验中的作用为基础的。已经表明式(I)化合物是II型IL-8受体的抑制剂。
本文所有术语″IL-8介导的疾病或疾病状况″是指其中IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78起作用的任何和所有疾病状况，IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78或者通过它们自身的产生发挥作用，或者通过它们引起另一种单核因子释放、例如但不限于IL-1、IL-6或TNF发挥作用。因此，其中例如IL-1是主要成分、并且作为对IL-8的响应它的产生或作用加剧的疾病状况应该被认为是IL-8介导的疾病状况。
本文所用术语″趋化因子介导的疾病或疾病状况″是指其中与IL-8α或β受体结合的趋化因子起作用的任何和所有疾病状况，例如、但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2或ENA-78。这包括其中IL-8起作用的的疾病状况，IL-8或者通过其自身的产生发挥作用，或者通过其引起另一种单核因子释放、例如但不限于IL-1、IL-6或TNF发挥作用。因此，其中例如IL-1是主要成分、并且作为对IL-8的响应它的产生或作用加剧的疾病状况应该被认为是IL-8介导的疾病状况。
本文所用术语″细胞因子″是指任何分泌的多肽，它们影响细胞的功能，并且是调节免疫、炎性或生血反应中细胞间相互作用的分子。细胞因子包括、但不限于单核因子和淋巴因子，而不管是由哪种细胞产生的。例如，单核因子通常是指单核细胞例如巨噬细胞和/或单核白细胞产生和分泌的因子。然而，许多其他细胞也产生单核因子，例如自然杀伤细胞、成纤维细胞、嗜碱细胞、中性白细胞、内皮细胞、脑星形细胞、骨髓基质细胞、表皮角化细胞和B-淋巴细胞。淋巴因子通常是指由淋巴细胞产生的因子。细胞因子的实例包括、但不限于白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子β(TNF-β)。
与上述术语″细胞因子″类似，本文所用术语″趋化因子″是指任何分泌的多肽，它们影响细胞的功能，并且是调节免疫、炎性或生血反应中细胞间相互作用的分子。趋化因子主要是通过细胞跨膜分泌的，并使得特定的白血细胞和白细胞、中性白细胞、单核细胞、巨噬细胞、T-细胞、B-细胞、内皮细胞和平滑肌细胞具有趋化性以及活化。趋化因子的实例包括、但不限于IL-8、GROα、GROβ、GROγ、NAP-2、ENA-78、IP-10、MIP-1α、MIP-β、PF4和MCP1、2和3。
为了将式(I)化合物或其可药用盐用于治疗，通常按照标准的药学实践将其配制成药物组合物。因此，本发明还涉及含有有效、无毒量式(I)化合物及可药用载体或稀释剂的药物组合物。
式(I)化合物、其可药用盐和含有它们的药物组合物可以方便地通过任何常规给药途径施用，例如口服、局部、非肠道或吸入给药。式(I)化合物可以以常规剂型给药，该常规剂型是通过将式(I)化合物与标准的药物载体按照常规方法结合制成的。式(I)化合物还可以与已知的第二种治疗活性化合物结合、以常规剂型给药。根据所需的制剂形式，这些方法包括将各分成混合、造粒和压片或者溶解。可以理解，可药用载体或稀释剂的形式和特性取决于与其结合的活性成分的含量、给药途径以及其他公知的可变因素。从与制剂中的其他成分相容的意义上讲，载体必须是″可接受的″，并且不能对接受其治疗者造成伤害。
所使用的可药用载体可以是例如固体或液体的。固体载体的实例是乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油、水等。类似地，载体或稀释剂可以包括本领域公知的延时物质，例如纯的甘油一硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯或者与蜡的混合物。
可以使用多种药物形式。因此，如果使用固体载体，可以将制剂压片、以粉末或小丸的形式置于硬明胶胶囊中、或者制成糖锭或锭剂。固体载体的含量可以在很宽的范围内变化，但是优选约25mg至约1g。当使用液体载体时，该制剂是糖浆、乳液、软明胶胶囊、无菌注射液如安瓿或非水液体悬浮液。
式(I)化合物可以通过非系统给药的方式局部施用，包括将式(I)化合物施于表皮上或口腔中，以及将化合物滴注到耳、眼和鼻中，这样化合物就不会大量地进入血流中。相反，系统给药是指口服、静脉内、腹膜内和肌内给药。
适于局部给药的制剂包括适于经皮肤渗透到炎性部位的液体或半固体制剂，例如搽剂、洗剂、乳膏、软膏或糊剂，以及适于对眼、耳或鼻给药的滴剂。对于局部给药，活性成分可以占制剂重量的0.001％-10％w/w，例如1％-2％。当然，其含量也可以高达占制剂的10％w/w，但是优选少于5％w/w，更优选0.1％-1％w/w。
本发明的洗剂包括适用于皮肤或眼的那些。眼用洗剂可以含有无菌水溶液，其中任选地含有杀菌剂，并且可以按照与制备滴剂相似的方法进行制备。用于皮肤的洗剂或搽剂还可以含有使皮肤快干和冷却的试剂，例如醇或酮，和/或增湿剂例如甘油或油如蓖麻油或花生油。
本发明的乳膏、软膏或糊剂是外部使用的活性成分的半固体制剂。它们可以通过将细分散的或粉末状的活性成分本身或其在水或非水液体中的溶液或悬浮液借助合适的机器与多脂的或非多脂的基质混合制成。基质可以包括烃如硬、软或液体石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；胶浆；天然来源的油如杏仁，玉米，花生，蓖麻或橄榄油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸如硬脂酸或油酸与醇例如丙二醇或大粒凝胶的混合物。制剂中可以掺入任何适宜的表面活性剂例如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂，如脱水山梨醇酯或其聚氧化乙烯衍生物。还可以含有悬浮剂例如天然胶、纤维素衍生物或无机物如silicaceoussilicas，以及其他成分如羊毛脂。
本发明的滴剂可以包括无菌水或油溶液或悬浮液，并且可以通过将活性成分溶解在合适的杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任何其他合适的防腐剂的水溶液中进行制备，并且优选其中含有表面活性剂。然后过滤使所得溶液澄清，转入合适的容器中，然后密封容器，并用高压灭菌法或在98-100℃保持半小时灭菌处理。或者，该溶液可以通过过滤灭菌，并采用无菌技术将其转入容器中。适于作为滴剂中包涵物的杀菌剂和杀真菌剂的实例是硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、氯化苄烷铵(0.01％)和醋酸洗必太(0.01％)。制备油溶液的合适的溶剂包括甘油、稀释的醇和丙二醇。
式(I)化合物可以经非肠道给药，即通过静脉内、肌内、皮下、鼻内、直肠内、阴道内或腹膜内给药。通常优选的是皮下或肌内形式的非肠道给药。这种给药方式的合适的剂型可以通过常规技术制备。式(I)化合物还可以通过吸入给药，即通过鼻内和口腔吸入给药。这种给药方式的合适的剂型例如气雾剂或压力定量气雾剂可以通过常规技术制备。
对于本发明公开的式(I)化合物的所用应用方法，日口服剂量方案优选为约0.01至约80mg/kg总体重。日非肠道剂量方案优选为约0.001至约80mg/kg总体重。日局部剂量方案优选为0.1mg-150mg，每天给药1-4次，优选2-3次。日吸入剂量方案优选为约0.01mg/kg至约1mg/kg/天。本领域专业人员还应该认识到，式(I)化合物或其可药用盐的最佳用量和每次给药的时间间隔将取决于所治疗疾病的性质和程度，给药的剂型、途径和部位，以及所治疗的具体患者，并且最佳用量可以通通过常规技术确定。对于本领域专业人员同样显而易见的是，式(I)化合物或其可药用盐最佳的疗程，即在一定的天数中每天给予式(I)化合物或其可药用盐的次数，可以由本领域专业人员采用常规过程的治疗测定试验进行确定。
下面将参照下列生物学实施例对本发明进行说明，这些实施例仅仅是说明性的，而非意在限制本发明的范围。
生物学实施例本发明化合物的IL-8和Gro-α趋化因子抑制作用通过下列体外实验进行测定受体结合实验由Amersham Corp.，Arlington Heights，IL得到[125I]IL-8(人重组物)，其比活性为2000Ci/mmol.由NEN-New England Nuclear得到Gro-α。所有其他化学试剂均是分析级的。如上所述，高水平的重组人IL-8α和β受体分别在中国仓鼠卵细胞中表达(Holmes，等，Science，1991，253，1278)。按照上述方案使中国仓鼠卵膜均化(Haour，等，J Biol Chem.，249pp 2195-2205(1974))。只是将均化缓冲物加入10mM Tris HCL、1mM MgSO4、0.5mM EDTA(乙二胺四乙酸)、1m MPMSF(甲苯磺酰氟)、0.5mg/L白胃素(pH7.5)中。使用Pierce Co.的微量分析试剂盒，以牛血清白蛋白作为标准品，测定膜蛋白浓度。所有的分析均是在96-孔微滴板上进行。每一反应混合物在含1.2mM MgSO4、0.1mM EDTA、25mM NaCl和0.03％ CHAPS的20mM Bis-Trispropane和0.4mM Tris HCl缓冲液(pH8.0)中含有125I IL8(0.25nM)或125I Gro-α和0.5μg/mL IL-8Ra或1.0μg/mL IL-8Rb膜。此外，加入预先溶解在DMSO中的令人关注的药物或化合物，以达到0.01nM至100uM的终浓度。由加入125I-IL-8开始该实验。在室温1小时后，用Tomtec 96-孔收集器将该板收集到玻璃纤维滤器上，该滤器是用1％聚亚乙基亚胺/0.5％ BSA阻断，并用25mM NaCl、10mM Tris HCl、1mM MgSO4、0.5mM EDTA、0.03％CHAPS(pH7.4)洗涤3次。然后将滤器干燥，并用Betaplate液体闪烁计数器计数。在本发明中，重组的IL-8 Ra或I型受体还可以称作非自由的(non-permissive)受体，并且重组IL-8 Rb或II型受体还可以称作自由受体。
在该分析中已经证明，典型的式(I)和式(II)化合物、本文的实施例1-11和13-19的阳性抑制活性＜30μmg。在该分析中，似乎是由于溶解度问题，实施例12的化合物在＜30μmg时未能证明有活性。趋化性分析如在Immunology，vo1.I，Suppl 1，Unit 6.12.3.中的通行方案(Current Protocols)所述，在中性白细胞趋化性分析中证明这些化合物的体外抑制性质，该文献公开的内容全部结合在本文中作为参考。如在Immunology Vol.I，Suppl 1 Unit 7.23.1中的通行方案所述，从人血中分离中性白细胞，该文献公开的内容全部结合在本文中作为参考。将浓度为0.1-100nM的化学引诱物IL-8、GROα、GROβ、GROγ和NAP-2置于48多孔室(Neuro Probe，Cabin John，MD)的底部室中。两室之间以5um聚碳酸酯滤膜分隔。当对本发明化合物进行试验时，在恰好将细胞加入上部室中之前，将其与细胞混合(0.001-1000nM)。在约37℃和5％CO2存在下，在保湿培养器中培养约45-90分钟。培养结束时，除去聚碳酸酯膜，洗涤顶部，然后采用DiffQuick染色方案(Baxter Products，McGaw Park，IL，USA)将膜染色。用显微镜对已经对趋化因子产生趋化性的细胞计数。通常，对每一样品的四个区域进行计数，将这些数据平均得到迁移细胞的平均数。对每一样品重复进行三次试验，并且对每一化合物重复进行至少四次试验。某些细胞(阳性对照细胞)中不加化合物，这些细胞表现出最大的细胞趋化性应答。如果需要阴性对照(未刺激的)，则不向底部室中加入趋化因子。在阳性对照与阴性对照之间的差别表示了细胞的趋化活性。弹性蛋白酶释放分析对本发明化合物进行试验，以测定其防止从人中性白细胞中释放弹性蛋白酶的能力。如在Immunology Vol.I，Suppl 1 Unit 7.23.1中的通行方案所述，从人血中分离中性白细胞。将PMN 0.88×106细胞悬浮在林格氏溶液(NaCl118，KCl4.56，NaHCO325，KH2PO41.03，葡萄糖11.1，HEPES 5mM，pH7.4)中，并向96孔板的每一孔中加入50ul向该拌板中加入50ul实验化合物(0.001-1000mM)、50ul(20ug/ml)细胞松弛素B和50ul林格氏缓冲液。使这些细胞温热(37℃，5％CO2，95％ RH)5分钟，然后加入最终浓度为0.01-1000nM的IL-8、GROα、GROβ、GROγ或NAP-2。反应进行45分钟，然后将96孔板离心(800xg 5分钟)，并取出100ul上清液。向96孔板中加入该上清液，然后加入最终浓度达6ug/ml的溶解在磷酸盐缓冲的盐水中的人造弹性蛋白酶底物(MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Va1-AMC，NovaBiochem，La Jolla，CA)。将该板立即置于荧光96孔板读数器(Cytofluor 2350，Millipore，Bedford，MA)下，并按照Nakajima等，J.Biol Chem 254 4027(1979)的方法，以3分钟的间隔采集数据。通过测定MeOSucAla-Ala-Pro-Val-AMC降解的速度计算弹性蛋白酶从PMN中释放的量。TNF-α在创伤性脑损伤中的分析该分析提供了肿瘤坏死因子mRNA在特定脑部区域中表达、从而实验性地引起大鼠侧面流体-叩诊创伤性脑部损伤(TBI)的测定方法。由于TNF-α能够诱导神经生长因子(NGF)并刺激其他细胞因子从活化的星形细胞中释放，该TNF-α在损伤后的基因表达变化在对CNS损伤的急性和再生性应答中起着重要作用。适宜的分析方法可以见于WO 97/35856或WO 97/49286，其中公开的内容结合在本发明中作为参考。IL-β mRNA的CNS损伤模型该分析描绘出白介素-1β(IL-1β)mRNA在特定脑部区域中的区域性表达、从而实验性地引起大鼠侧面流体-叩诊创伤性脑部损伤(TBI)的特性。分析结果表明TBI后，在特定脑部区域中IL-β mRNA的暂时表达得到区域性的刺激。这些区域的细胞因子发生变化，例如IL-1β在脑损伤的损伤后病理性或再生性后遗症中起着重要作用。适宜的分析方法可以见于WO 97/35856或WO 97/49286，其中公开的内容结合在本发明中作为参考。体内动脉粥样硬化实验体内测定小鼠动脉粥样硬化的模型是以Paigen等的实验为基础，并如下所述对其进行小的改变。参见Paigen B，Morrow A，HolmesPA，Mitchell D，Williams RA.小鼠动脉粥样硬化损害的定量测定(Quantitative assessment of atherosclerotic lesions inmice)。Atherosclerosis 68231-240(1987)；和Groot PHE，vanVlijmen BJM，Benson GM，Hofker MH，Schiffelers R，Vidgeon-HartM，Havekes LM.APOE*3 Leiden转基因小鼠主动脉粥样硬化的定量测定及其与血清胆固醇接触的关系(Quantitative assessment ofaortic atherosclerosis in APOE*3 Leiden transgenic mice andits relationship to serum cholesterol exposure)。ArteriosclerThromb Vasc Biol.16926-933(1996)。主动脉窦的解剖和染色如前面所述(1，2)，在主动脉根取十字切片。简单地说，就是在恰好低于心房的水平将心脏对切，并取出心脏的底部与主动脉根进行分析。在用OCT化合物使组织平衡过夜后，在低温控制器卡盘(BrightInstrument Company Ltd.，UK)上，使主动脉朝向卡盘，将心脏浸入OCT化合物中。在卡盘周围放置干冰将组织冷冻。然后沿主动脉轴的垂直方向取心脏切片，从心脏内开始并切向主动脉。一旦通过三瓣膜小叶出现找到主动脉根，则以10mm为间隔的取切片并固定在凝胶化的载片上。将切片空气干燥1小时，然后简单地用60％异丙醇淋洗。切片用Oil Red O染色，用迈尔氏苏木精对比染色，用甘油明胶滑动覆盖，并用指甲油密封。主动脉根中动脉粥样硬化的定量使用装有4x物镜和视频照相机(Hitachi，HV-C10)的O1ympusBH-2显微镜，使10个预备的主动脉根切片成象。获得24位彩色图像，使用装有帧接受器板(Snapper，Active Imaging Ltd，Berks，U.K.)的PC(Datacell Pentium P5-133，Datacell，Berks，U.K.)，运行Optimas软件(version 5.1，Optimas Corp.，WA，U.S.A.)进行分析。在同样的光、显微镜、照相机和PC条件下获得图象。使用Optimas软件，通过手绘出损害区域，对动脉粥样硬化损害区域进行定量。设置颜色阈以定量损害部位中染有红色的区域。通过使用血球计载片上的栅格图象校准软件，得到十字截面损害区域和染有红色的区域的绝对值。
尽管在本文中是以参见的方式特定地和独立地引入了每一公开出版物，但是在本说明书中引用的所有公开出版物，包括、但不限于专利和专利申请均全文结合在本文中作为参考。
上面的描述充分公开了本发明、包括其优选的具体实施方案。对本文特别公开的具体实施方案的修改和改进包括在下列权利要求的范围内。无需进一步的加工，可以相信，本领域专业人员可以采用前面的说明，充分地利用本发明。因此，本文的实施例仅仅是说明性的，而不是以任何方式限制本发明的范围。要求了独占性或排他性的本发明的具体实施方案如下所定义。
权利要求
1.治疗哺乳动物的由趋化因子介导的疾病的方法，其中趋化因子与IL-8α或β受体结合，所述疾病选自疟疾、再狭窄、血管生成、动脉粥样硬化、骨质疏松、龈炎、不希望的造血干细胞释放和由呼吸病毒、疱疹病毒和肝炎病毒引起的疾病，该方法包括给所述哺乳动物施用有效量的式(I)化合物或其可药用盐 其中R是-NH-C(X2)-NH-(CR13R14)v-Z；Z是W、HET、 任选被取代的C1-10烷基、任选被取代的C2-10链烯基、或任选被取代的C2-10炔基；X是C(X1)2、C(O)、C(S)、S(O)2、PO(OR4)或C＝N-R19；X1独立地为氢、卤素、C1-10烷基、NR4R5、C1-10烷基-NR4R5、C(O)NR4R5、任选被取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、羟基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂环、杂环C1-4烷基、或杂芳基C1-4烷氧基；X2是＝O或＝S；R1独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、卤代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、叠氮基、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂环，杂环C1-4烷基、杂芳基C1-4烷氧基、芳基C2-10链烯基、杂芳基C2-10链烯基、杂环C2-10链烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10链烯基C(O)R11、C2-10链烯基C(O)OR11、C(O)R11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qNHS(O)2R17、(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个R1部分可以结合在一起形成O-(CH2)sO或5-6元饱和或不饱和环；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；n是1-3的整数；m是1-3的整数；q是0或1-10的整数；s是1-3的整数；t是0或1或2的整数；v是0或1-4的整数；p是1-3的整数；HET是任选被取代的杂芳基；R4和R5独立地为氢、任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，或者R4和R5与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地含有其他选自O/N/S的杂原子；Y独立地选自氢、卤素、硝基、氰基、卤代C1-10烷基、C1-10烷基、C2-10链烯基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、叠氮基、(CR8R8)qS(O)tR4、羟基、羟基C1-4烷基、芳基、芳基C1-4烷基、芳氧基、芳基C1-4烷氧基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基C1-4烷氧基、杂环，杂环C1-4烷基、芳基C2-10链烯基、杂芳基C2-10链烯基、杂环C2-10链烯基、(CR8R8)qNR4R5、C2-10链烯基C(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R5、(CR8R8)qC(O)NR4R10、S(O)3R8、(CR8R8)qC(O)R11、C2-10链烯基C(O)R11、C2-10链烯基C(O)OR11、(CR8R8)qC(O)OR12、(CR8R8)qOC(O)R11、(CR8R8)qNR4C(O)R11、(CR8R8)qC(NR4)NR4R5、(CR8R8)qNR4C(NR5)R11、(CR8R8)qNHS(O)2Ra、或(CR8R8)qS(O)2NR4R5；或者两个Y部分可以结合在一起形成O-(CH2)sO或5-6元饱和或不饱和环；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R6和R7独立地为氢或C1-4烷基，或者R6和R7与和它们相连的氮原子一起形成5-7元环，该环可以任选地含有其他选自氧、氮或硫的杂原子；R8独立地为氢或C1-4烷基；R10是C1-10烷基C(O)2R8；R11是氢、C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂芳基C1-4烷基、任选被取代的杂环、或任选被取代的杂环C1-4烷基；R12是氢、C1-10烷基、任选被取代的芳基或任选被取代的芳烷基；R13和R14独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基，或者R13和R14中的一个可以是任选取代的芳基；R15和R16独立地为氢或任选被取代的C1-4烷基；R17是C1-4烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环、或杂环C1-4烷基，其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R18是氢、任选被取代的C1-10烷基、C1-10烷氧基、卤代C1-10烷氧基、羟基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基，其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；R19是氰基、硝基、S(O)2NR4R5、S(O)2R17烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基；并且其中含有烷基、芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；Ra是NR6R7、烷基、芳基C1-4烷基、芳基C2-4链烯基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂芳基C2-4链烯基、杂环、或杂环C1-4烷基；并且其中含有芳基、杂芳基和杂环的部分都可以任选地被取代；W是 含E的环任选地选自 星号*是指环的连接点；或其可药用盐。
2.按照权利要求1的方法，其中R1是卤素、氰基、硝基、CF3、C(O)NR4R5、链烯基C(O)NR4R5、C(O)R4R10、链烯基C(O)OR12杂芳基、杂芳烷基、杂芳基链烯基或S(O)NR4R5。
3.按照权利要求1的方法，其中X是C(O)或C(S)。
4.按照权利要求1-3中任何一项的方法，其中Z是W。
5.按照权利要求4的方法，其中Y是卤素、C1-4烷氧基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳烷氧基、亚甲基二氧基、NR4R5、C1-4烷硫基、芳硫基、卤代烷氧基、任选被取代的C1-4烷基、或羟烷基。
6.按照权利要求1的方法，其中化合物选自下列一组N-4-(苯并咪唑啉-2-酮)-N’-(2’-溴苯基)脲；N-4-(1H，3H-2，1，3-苯并噻唑-2，2-二氧化物)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-1-N-甲基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-1-甲基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2-溴苯基)脲；N-(4-氰基-2-氧代-3-甲基苯并咪唑-7-基)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-酮)-N’-(2-溴苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-硫酮)-N’-(2，3-二氯苯基)脲；N-4-(7-氰基-苯并咪唑啉-2-亚胺)-N’-(2-溴苯基)脲；或其可药用盐。
全文摘要
本发明涉及新的式(I)化合物,其药物组合物,以及治疗趋化因子白介素－8(IL－8)介导的疾病的方法。
文档编号C07D249/00GK1356899SQ00809090
公开日2002年7月3日 申请日期2000年6月15日 优先权日1999年6月16日
发明者G·M·本森, M·C·鲁特莱格, K·L·威多森 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司