专利名称：具有神经营养活性的靛红衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的靛红衍生物、包含本发明靛红衍生物的药物组合物、制备本发明靛红衍生物的方法、它们在神经变性疾病治疗以及损害与损伤神经元再生或预防变性中的用途、神经变性疾病的治疗方法以及损害与损伤神经元的再生或预防变性的方法。
背景技术：
生长因子(或神经营养因子)在发育和成年期间促进大量外周与中枢神经系统神经元的分化、生长和生存。已经鉴定了大量神经营养因子的分子特征、调节和信号转导机理。治疗学上最有希望的这些分子是神经生长因子(NGF)、得自脑的神经营养因子(BDNF)、睫状神经营养因子(CNTF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)和得自神经胶质细胞系的神经营养因子(GDNF)。
有数据提示，神经营养因子将可用于治疗神经变性疾病，例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病和肌萎缩性侧索硬化。另外，神经营养因子在外周神经损伤和毒素诱导神经病的动物模型中显示有益效果[CNSDrugs(CNS药物)1994 2(6)465-478]。
各种大鼠研究预言，模拟或增强NGF功能的化合物能够解救中间胆碱能神经元，减轻见于老年性痴呆的良性健忘和记忆减弱[Science(科学)1994 264 772-774]。
最近的研究显示，NGF对脑缺血后的海马神经元具有神经保护作用，这预言NGF在脑缺血性神经元损伤的治疗中具有潜在的治疗作用[NeuroReport(神经报道)1995 6(4)669-672]。
生长因子通过与特异性细胞表面受体结合而引发它们的生物学作用。生长因子与其受体的结合激活细胞内信号转导，引起各种次级信使的产生和酶级联的活化，涉及酪氨酸激酶和蛋白激酶C，达到生物学作用的顶峰。细胞内信号转导途径尚未得到充分的认识。
NGF和有关的神经营养素是大型的肽，这使它们不太可能成为治疗剂的候选。药动学参数差(例如口服吸收差和体内半衰期短)和对靶器官给药差是主要的问题。
继续需要开发新颖的化合物，它们能够相互作用于神经营养素受体，显示不同于神经营养素的物理化学性质。
发明概述按照本发明，提供了新颖的神经营养活性化合物。神经营养活性尚未归因于NGF与其受体之间的相互作用中或NGF信号转导途径中的特定步骤。
本发明化合物的神经营养活性使它们可用于治疗或预防神经的各种变性疾病，包括阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病和肌萎缩性侧索硬化(ALS)，用于减轻见于老年性痴呆或与神经变性疾病有关的良性健忘和记忆减弱。
而且，已经显示本发明化合物可用于治疗神经病，特别是例如由遗传异常导致的外周神经病，和其他疾病，例如糖尿病、脊髓灰质炎、疱疹和AIDS，尤其是大多数癌症患者在化学疗法之后或期间所经历的神经病和外周神经病。
本发明化合物被认为特别可用于治疗外周神经、髓质和/或脊髓的创伤性损害，和脑缺血，例如心博停止、中风或新生儿窒息后脑损伤继发的缺血性神经元损伤或者濒临淹溺继发的缺血性神经元损伤。
本发明在第一方面提供新颖的由通式(I)代表的靛红衍生物或其药学上可接受的盐， 其中，
A代表式-C(NOR2)-或-NR2-CO-基团；R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；
其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
本发明在另一方面提供药物组合物，包含治疗学上有效量的本发明化合物以及至少一种药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明在第三方面涉及本发明化合物的用途，用于制备治疗或减轻哺乳动物、包括人的疾病或障碍或疾患的药物，该疾病或障碍或疾患对神经营养剂的活性有应答。
本发明在第四方面提供治疗或减轻哺乳动物、包括人的疾病或障碍或疾患的方法，该疾病或障碍或疾患对神经营养剂的活性有应答，该方法包含在需要时对所述哺乳动物给以有效量的本发明化合物。
其他发明目的通过下列详细说明和实施例将对本领域技术人员来说是显而易见的。
发明的详细公开新的神经营养性化合物本发明在第一方面提供新颖的由通式(I)代表的靛红衍生物或其药学上可接受的盐， 其中，A代表式-C(NOR2)-或-NR2-CO-基团；R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；
R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
在一种实施方式中，R1代表氢。在第二种实施方式中，R1代表烷基，特别是甲基。
在进一步的实施方式中，R2代表氢、烷基、酰基或异噁唑基，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组。
在更进一步的实施方式中，R2代表氧代-四氢呋喃或异噁唑基-烷基，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组。
在进一步的实施方式中，R2代表被一个或多个羟基或羧基取代的烷基。在特定的实施方式中，R2代表被羟基和羧基取代的C3-6-烷基，例如羟基丁酸基。
在特定的实施方式中，R2代表氢。在进一步的实施方式中，R2代表(3-甲氧基-5-甲基-异噁唑-4-基)-甲基。在更进一步的实施方式中，R2代表烷基，特别是甲基。在进一步的实施方式中，R2代表2-氧代-四氢呋喃-3-基。在更进一步的实施方式中，R2代表4-羟基丁酸-2-基。
在进一步的实施方式中，R5代表苯基，该基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基或苯基取代一次或多次。在特定的实施方式中，R5代表在4-位被卤素、CF3、NO2、氨基、烷基或烷氧基取代的苯基。在进一步特定的实施方式中，R5代表苯基、4-氯苯基、4-三氟甲基苯基、4-甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-乙氧羰基苯基、4-溴苯基、4-三氟甲氧基苯基或4-(N，N-二甲基氨磺酰)苯基。
在更进一步的实施方式中，R5代表噻吩基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基或噻唑基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、NO2、氨基、烷基、烷氧基或苯基取代一次或多次。在特定的实施方式中，R5代表5-苯基-噻吩-2-基、5-氯吡啶-2-基、6-氯吡啶-3-基、5-氯嘧啶-2-基、2-氯嘧啶-5-基、6-氯哒嗪-3-基、5-氯吡嗪-2-基、5-氯噻吩-2-基、5-氯-1，1-二氧基-噻吩-2-基、5-氯噻唑-2-基、2-氯噻唑-5-基。
在进一步的实施方式中，R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、NO2、氨基、烷基、烷氧基或苯基取代一次或多次。
在一种实施方式中，R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH基团或烷基。
在进一步的实施方式中，R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。在特定的实施方式中，R6代表氢，R7代表氢。在进一步特定的实施方式中，R6代表甲基，R7代表甲基。
在更进一步的实施方式中，R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-NR12-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；或-CH2-NR12-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH基团或烷基。
在进一步的实施方式中，R12代表氢。在更进一步的实施方式中，R12代表烷基，例如甲基或乙基。在进一步的实施方式中，R12代表-CO-CH3。在更进一步的实施方式中，R12代表-SO2-CH3。
在进一步的实施方式中，R12代表氢、式-CH2CH2OH基团或烷基。
在优选的实施方式中，本发明的靛红衍生物可以以通式(II)或其药学上可接受的盐为特征， 其中，R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
在另一种优选的实施方式中，本发明的靛红衍生物可以以通式(III)为特征 其中R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基。
在更优选的实施方式中，通式(II)的靛红衍生物是7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-甲基肟；5-(4-氯苯基)-7-甲基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-肟；7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3肟；7-甲基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮3-肟；7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮-3-乙酰肟；7-乙基-5-(4-氯苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮-3-肟盐酸盐；7-乙基-5-(4-氯苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮-3-甲基肟；或其药学上可接受的盐。
在第三种优选的实施方式中，本发明的靛红衍生物可以是以通式(IV)、(V)或(VI)为特征的 其中R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基。
在更优选的实施方式中，通式(IV)的靛红衍生物是5-[5-苯基-2-噻吩基]-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯吡啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(6-氯吡啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯嘧啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(2-氯嘧啶-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(6-氯哒嗪-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯吡嗪-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯-1，1-二氧基-噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯噻唑-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(2-氯噻唑-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(3-(2-氧代)四氢呋喃基)肟；5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯吡啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(6-氯吡啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯嘧啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(2-氯嘧啶-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(6-氯哒嗪-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯吡嗪-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)；5-(5-氯噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯-1，1-二氧基-噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯噻唑-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(2-氯噻唑-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；或其药学上可接受的盐。
在更优选的实施方式中，通式(V)的靛红衍生物是5-(4-氯苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-溴苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；
5-(4-三氟甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-三氟甲基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-甲苯甲酰基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-(4-(N，N-二甲基氨磺酰基)苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-O-((3-甲氧基-5-甲基-异噁唑-4-基)甲基)肟；8-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-(4-硝基苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-(4-氟苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-乙酰基肟；8-甲基-5-(4-乙基苯甲酰基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-乙酰基-5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-氯苯基)-8-甲磺酰基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；或其药学上可接受的盐。
在更优选的实施方式中，通式(VI)的靛红衍生物是7-甲基-5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-]H-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；
5-苯基-7-甲基-6，7，8，9-四氢-1-甲基-吡咯并[3.2-f]异喹啉2，3-二酮-3-肟；7-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；7-乙基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；或其药学上可接受的盐。
在第四种优选的实施方式中，本发明的靛红衍生物可以是以通式(VII) 或其药学上可接受的盐为特征的，其中，R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；
-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
在第五种优选的实施方式中，本发明的靛红衍生物可以是以通式(VIII)为特征的 其中R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基。
在更优选的实施方式中，通式(VIII)的靛红衍生物是5-(4-氯苯基)-1，4，7，8，9，10-六氢吡啶并-8-甲基[4，3-f]喹喔啉-2，3-二酮；5-(4-硝基苯基)-1，4，7，8，9，10-六氢吡啶并-8-乙基[4，3-f]喹喔啉-2，3-二酮；或其药学上可接受的盐。
取代基的定义在本发明的上下文中，卤素代表氟、氯、溴或碘原子。
在本发明的上下文中，烷基表示一价饱和的直链或支链烃链。烃链优选地含有一至十八个碳原子(C1-18-烷基)，更优选为一至六个碳原子(C1-6-烷基；低级烷基)，包括戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、己基和异己基。在优选的实施方式中，烷基代表C1-4-烷基，包括丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。在本发明优选的实施方式中，烷基代表C1-3-烷基，特别可以是甲基、乙基、丙基或异丙基。
在本发明的上下文中，烷氧基表示“烷基-O-”基团，其中的烷基是如上所定义的。
在本发明的上下文中，酰基表示羧基(-COOH)或烷基羰基(烷基-CO-)，其中的烷基是如上所定义的。本发明优选的酰基实例包括羧基、乙酰基和丙酰基。
在本发明的上下文中，氨基可以是伯氨基(-NH2)、仲氨基(-NH-烷基)或叔氨基(-N(烷基)2)，也就是说它可以被如上所定义的烷基取代一次或两次。
在本发明的上下文中，杂环基是在其环结构中具有一个或多个杂原子的化合物。优选的杂原子包括氮(N)、氧(O)和硫(S)。杂环基特别可以是芳族的(也就是杂芳基)、饱和的或部分饱和的。本发明优选的单环杂环基包括5-与6-元单环杂环基。
本发明优选的芳族5-或6-元杂环基实例包括1，3，2，4-或1，3，4，5-二噁二唑基、二噁三嗪基、二噁嗪基、1，2，3-、1，2，4-、1，3，2-或1，3，4-二噁唑基、1，3，2，4-或1，3，4，5-二噻二唑基、二噻三嗪基、二噻嗪基、1，2，3-二噻唑基、2-或3-呋喃基、呋咱基、1-、2-或4-咪唑基、异吲唑基、异噻唑-3-、-4-或-5-基、异噁唑-3-、-4-或-5-基、1，2，3-、1，2，4-、1，2，5-或1，3，4-噁二唑-3-、-4-或-5-基、噁四嗪基、噁三嗪基、1，2，3，4-或1，2，3，5-噁三唑基、噁唑-2-、-4-或-5-基、2-或3-吡嗪基、1-、3-或4-吡唑基、3-或4-哒嗪基、2-、3-或4-吡啶基、2-、4-或5-嘧啶基、1-、2-或3-吡咯基、1，2，3，4-或2，1，3，4-四唑基、噻二唑-3-、-4-或-5-基、噻唑-2-、-4-或-5-基、2-或3-噻吩基、1，2，3-、1，2，4-或1，3，5-三嗪基、和1，2，3-、1，2，4-、2，1，3-或4，1，2-三唑基。本发明最优选的芳族杂环基包括呋喃-2-基、呋喃-3-基、2-、4-或5-咪唑基、3-、4-或5-异噁唑基、1-、2-或3-吡啶基、和1-或2-噻吩基。
本发明优选的饱和或部分饱和5-或6-元杂环基实例包括1，3，5，6，2-二噁二嗪基、1，2，3，4，5-或1，2，3，5，4-二噁二唑基、二噁烷基、1，3-二氧杂环戊烯基、1，3，5，6，2-二噻二嗪基、1，2，3，4，5-或1，2，3，5，4-二噻二唑基、2-异咪唑基、异吡咯基、异四唑基、1，2，3-或1，2，4-异三唑基、吗啉基、噁二嗪基、1，2，4-、1，2，6-、1，3，2-、1，3，6-或1，4，2-噁嗪基、哌嗪基、高哌嗪基、哌啶基、1，2-、1，3-或1，4-吡喃基、和1，2，3-吡咯烷基。
立体异构体本发明的化合物可以存在(+)和(-)型以及外消旋型。这些异构体的外消旋物和单独的异构体本身属于本发明的范围。
外消旋型可以被已知的方法和工艺拆分为旋光对映体。分离非对映异构盐的一种方法是利用旋光活性酸，通过碱的处理释放旋光活性的胺化合物。拆分外消旋物为旋光对映体的另一种方法基于旋光活性基质色谱法。本发明的外消旋化合物因而可以被拆分为它们的旋光对映体，例如通过d-或l-盐(例如酒石酸盐、扁桃酸盐或樟脑磺酸盐)的分步结晶。
本发明还可以这样拆分，使本发明化合物与旋光活性的活化羧酸(例如从(+)或(-)苯丙氨酸、(+)或(-)苯基甘氨酸、(+)或(-)莰烷酸衍生)反应生成非对映异构酰胺，或者使本发明化合物与旋光活性的氯甲酸酯反应生成非对映异构氨基甲酸酯等。
其他拆分旋光异构体的方法是本领域已知的。这类方法包括Jaques J，Collet A，& Wilen S在″Enantiomers，Racemates，andResolutions″，John Wiley and Sons，New York(1981)中所述的那些。旋光活性化合物还可以从旋光活性原料制备。
药学上可接受的盐本发明化合物可以是适合于预期给药的任意形式。适合的形式包括本发明化合物的药学上(也就是生理学上)可接受的盐和前体药物形式。
药学上可接受的加成盐实例非限制性地包括无毒的无机和 有机酸加成盐，例如从盐酸衍生的盐酸盐、从氢溴酸衍生的氢溴酸盐、从硝酸衍生的硝酸盐、从高氯酸衍生的高氯酸盐、从磷酸衍生的磷酸盐、从硫酸衍生的硫酸盐、从甲酸衍生的甲酸盐、从乙酸衍生的乙酸盐、从乌头酸衍生的乌头酸盐、从抗坏血酸衍生的抗坏血酸盐、从苯磺酸衍生的苯磺酸盐、从苯甲酸衍生的苯甲酸盐、从肉桂酸衍生的肉桂酸盐、从柠檬酸衍生的柠檬酸盐、从扑酸衍生的扑酸盐、从庚酸衍生的庚酸盐、从富马酸衍生的富马酸盐、从谷氨酸衍生的谷氨酸盐、从乙醇酸衍生的乙醇酸盐、从乳酸衍生的乳酸盐、从马来酸衍生的马来酸盐、从丙二酸衍生的丙二酸盐、从扁桃酸衍生的扁桃酸盐、从甲磺酸衍生的甲磺酸盐、从萘-2-磺酸衍生的萘-2-磺酸盐、从邻苯二甲酸衍生的邻苯二甲酸盐、从水杨酸衍生的水杨酸盐、从山梨酸衍生的山梨酸盐、从硬脂酸衍生的硬脂酸盐、从琥珀酸衍生的琥珀酸盐、从酒石酸衍生的酒石酸盐、从对-甲苯磺酸衍生的甲苯-对-磺酸盐等。通过本领域熟知和所述的程序可以生成这类盐。
其他酸、例如草酸可能不被认为是药学上可接受的，可用于制备在获得本发明化合物及其药学上可接受的酸加成盐中用作中间体的盐。
本发明化合物的金属盐包括碱金属盐，例如含有羧基的本发明化合物的钠盐。
在本发明的上下文中，含N化合物的“鎓盐”也被认为是药学上可接受的盐。优选的“鎓盐”包括烷基-鎓盐、环烷基-鎓盐和环烷基烷基-鎓盐。
本发明化合物可以是可溶解或不可溶解的形式，药学上可接受的溶剂例如水、乙醇等。可溶形式还可以包括水合形式，例如一水合物、二水合物、半水合物、三水合物、四水合物等。一般来说，可溶形式出于本发明的目的被认为等价于不可溶形式。
标记的化合物本发明化合物可以使用它们的标记或未标记形式。在本发明的上下文中，“标记”代表标记物与有关化合物的结合，有利于所述化合物的定量检测。
本发明的标记化合物可以在各种诊断方法中用作诊断工具、放射示踪剂或监测剂，用于体内受体造影。
在标记的化合物中，一个或多个原子变为天然存在原子的同位素。标记的化合物包括但不限于2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、131I、125I、123I和18F。
在优选的实施方式中，物理检测方法选自PET、SPECT、MRS、MRI、CAT或其组合。
制备方法本发明的靛红衍生物可以按照常规的化学合成方法加以制备，例如工作例中所述的那些。用于本申请所述方法的原料是已知的，或者可以按照常规方法容易从商业上可得到的化学品加以制备。
这里所述反应的终产物可以按照常规工艺分离，例如萃取、结晶、蒸馏、色谱等。
药物组合物本发明在另一方面提供新的药物组合物，包含治疗学上有效量的本发明化合物。
尽管用于治疗的本发明化合物可以以原料药化合物的形式给药，不过优选的是在药物组合物中引入可选为生理学上可接受的盐形式的活性成分以及一种或多种助剂、赋形剂、载体、缓冲剂、稀释剂和/或其他惯用药物辅助成分。
在优选的实施方式中，本发明提供药物组合物，包含本发明的化合物或其药学上可接受的盐或衍生物以及一种或多种药学上可接受的载体和可选的其他治疗和/或预防成分。载体在与制剂其他成分相容并且对其接受者无害的意义上必须是“可接受的”。
本发明的药物组合物可以是适合于口服、直肠、支气管、鼻、局部(包括颊和舌下)、透皮、阴道或肠胃外(包括皮肤、皮下、肌内、腹膜内、静脉内、动脉内、脑内、眼内注射或输注)给药的剂型，或者是适合通过吸入或吹入给药(包括散剂和液体气雾剂给药)或者通过持续释放系统给药的剂型。适合的持续释放系统实例包括含有本发明化合物的固体疏水性聚合物的半透过性基质，该基质可以是成型物品的形式，例如膜或微囊。
本发明化合物以及常规助剂、载体或稀释剂因而可以置入药物组合物及其单位剂型内。这类剂型包括固体剂型，具体为片剂、填充胶囊剂、散剂和颗粒剂，和液体剂型，具体为水性或非水性溶液、悬液、乳剂、酏剂和灌装这些的胶囊剂，均用于口服，以及用于直肠给药的栓剂和肠胃外使用的无菌可注射溶液。这类药物组合物及其单位剂型可以按常规比例包含常规成分，含有或没有另外的活性化合物或成分，并且这类单位剂型可以含有任意适合的有效量的活性成分，与所要采用的预期每日剂量范围是相称的。
本发明化合物可以以多种口服与肠胃外剂型给药。对本领域技术人员来说将显而易见的是下列剂型可以包含本发明化合物或本发明化合物的药学上可接受的盐作为活性组分。
关于从本发明化合物制备药物组合物，药学上可接受的载体既可以是固体，也可以是液体。固体制剂包括散剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂和可分散的颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，也可以充当稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。
在散剂中，载体是微细粉碎的固体，与微细粉碎的活性组分形成混合物。
在片剂中，将活性组分与具有必要粘合能力的载体按适当比例混和，压制成所需形状和大小。
散剂和片剂优选地含有百分之五或十至约七十的活性化合物。适合的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”打算包括活性化合物与作为载体的胶囊包封材料的制剂，其中活性组分(有或没有载体)被载体包围，因而与之缔合。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、散剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂和锭剂可以用作适合口服给药的固体剂型。
关于制备栓剂，首先使低熔点蜡熔化，例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物，然后通过搅拌使活性组分均匀分散其中。然后将熔化了的均匀混合物倒在适宜大小的模具内，冷却，由此固化。
适合阴道给药的组合物可以是阴道栓、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂，除了活性成分以外还含有本领域已知合适的载体。
液体制剂包括溶液、悬液和乳剂，例如水或水-丙二醇溶液。例如，肠胃外注射液体制剂可以被配制成在水性聚乙二醇溶液中的溶液。
根据本发明的化合物因而可以被配制成肠胃外给药(例如注射，例如药团注射或连续输注)的剂型，并且可以以单位剂型存在于安瓿、预灌装注射器、小体积输注或多剂容器内，其中加入防腐剂。组合物例如可以采取在油性或水性载体中的悬液、溶液或乳剂的形式，并且可以含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。作为替代选择，活性成分可以是粉末的形式，通过无菌固体的无菌分离或溶液的冷冻干燥而得，使用前与适合的载体再生，例如无菌无热原的水。
适合口服使用的水溶液可以这样制备，将活性组分溶于水，根据需要加入适合的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂。
适合口服使用的水悬液可以这样制备，将微细粉碎的活性组分分散在水中，其中含有粘性材料，例如天然或合成的树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其他熟知的悬浮剂。
还包括这样的固体剂型制剂，在使用前不久转化为用于口服给药的液体剂型制剂。这类液体剂型包括溶液、悬液和乳剂。这些制剂除了活性组分以外还可以含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人工与天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
关于对表皮局部给药，本发明化合物可以被配制成软膏剂、霜剂或洗剂，或者透皮贴剂。软膏剂和霜剂例如可以用水性或油性基质进行配制，并加入适合的增稠剂和/或胶凝剂。洗剂可以用水性或油性基质进行配制，一般也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。
适合口内局部给药的组合物包括锭剂，在经过矫味的基质、通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中包含活性药物；软锭剂，在惰性基质、例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含活性成分；和漱口剂，在适合的液体载体中包含活性成分。
溶液或悬液借助常规手段直接应用于鼻腔，例如滴管、吸移管或喷雾器。组合物可以是单剂或多剂的形式。在后者滴管或吸移管的情况下，这可以通过患者给以适当的预定体积的溶液或悬液来实现。在喷雾器的情况下，这例如可以借助计量雾化喷雾泵来实现。
对呼吸道给药还可以借助气雾剂来实现，其中在加压包装内存在活性成分和适合的推进剂，例如氯氟碳化合物(CFC)，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，二氧化碳或其他适合的气体。气雾剂还可以适宜地含有表面活性剂，例如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀门加以控制。
作为替代选择，活性成分可以是干粉的形式，例如化合物在适合散剂基质中的粉末混合物，基质例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物，例如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。散剂载体适宜在鼻腔内形成凝胶。粉末组合物可以是单位剂型，例如明胶的胶囊剂或药筒，或泡罩包装，从中借助吸入器将散剂给药。
在打算对呼吸道给药的组合物、包括鼻内组合物中，化合物一般将具有很小的粒径，例如5微米或以下的级别。这样一种粒径可以按照本领域已知的手段得到，例如微粉化。
在需要时可以采用实现活性成分持续释放的组合物。
药物制剂优选地是单位剂型。在这类剂型中，制剂被细分为含有适当量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装好的制剂，包装含有不连续量的制剂，例如包装在小瓶或安瓿内的片剂、胶囊剂和散剂。而且，单位剂型可以是胶囊剂、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适量的任意这些包装好的形式。
用于口服给药的片剂或胶囊剂和用于静脉内给药和连续输注的液体是优选的组合物。
关于制剂和给药工艺的进一步细节可以在最新版的Remington’sPharmaceutical Sciences(Maack Publishing Co.，Easton，PA)中找到。
治疗学上的有效剂量指活性成分改善症状或疾患的量。按照标准的药理学程序，可以在细胞培养物或实验动物中测定治疗功效和毒性，例如ED50和LD50。治疗作用与毒性作用之间的剂量比是治疗指数，可以表示为LD50/ED50之比。表现高治疗指数的药物组合物是优选的。
给药剂量当然必须根据所治疗个体的年龄、体重与条件以及给药途径、剂型与制度和所需结果加以谨慎调整，精确的剂量当然应当由医师决定。
实际的剂量取决于所治疗疾病的性质与严重性和给药途径，决定权在医师，可以根据本发明的特定环境通过剂量的滴定加以改变，以产生所需的治疗作用。不过，目前所关注的是每单个剂量含有约0.01至约500mg、优选为约0.1至约100mg、最优选为约1至约10mg活性成分的药物组合物是适合治疗的。
活性成分可以每天给药一次或若干次。在某些场合中，在低达0.01μg/kg i.v.和0.1μg/kg p.o.的剂量下可以获得令人满意的结果。剂量范围的上限目前被认为是约10mg/kg i.v.和100mg/kg p.o.。优选的范围是从约0.1μg/kg至约10mg/kg/天i.v.和从约1μg/kg至约100mg/kg/天p.o.。
生物学活性正如工作例所证明的，本发明化合物显示神经营养活性。神经营养活性尚未归因于NGF与其受体之间的相互作用中或NGF信号转导途径中的特定步骤。
本发明化合物的神经营养活性使它们可用于治疗或预防神经系统的各种变性疾病。
而且，本发明化合物被认为特别可用于治疗神经病，特别是例如由遗传异常导致的外周神经病，和其他疾患，例如糖尿病、脊髓灰质炎、疱疹和AIDS，尤其是大多数癌症患者在化学疗法之后或期间所经历的神经病和外周神经病。
本发明化合物被认为特别可用于治疗外周神经、髓质和/或脊髓的创伤性损害，和脑缺血，例如心博停止、中风或新生儿窒息后脑损伤继发的缺血性神经元损伤或者濒临淹溺继发的缺血性神经元损伤。
最后，本发明化合物被认为特别可用于增加神经元移植物的存活率。
治疗方法本发明在另一方面提供治疗或减轻活体动物、包括人类疾病或障碍或疾患的方法，该疾病、障碍或疾患对神经营养剂的活性有应答，该方法包含在需要时对这样一种活体动物、包括人给以有效量的本发明化合物。
在优选的实施方式中，该疾病或障碍或疾患对神经生长因子的活化或强化有应答。
在另一种优选的实施方式中，本发明提供治疗外周神经、髓质、脊髓的创伤性损害、脑缺血性神经元损伤、神经病(包括外周神经病)的方法。
在第三种优选的实施方式中，该疾病是神经变性疾病。
在更优选的实施方式中，该神经变性疾病是痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化或眼的神经变性疾病，包括黄斑变性、色素性视网膜炎、青光眼和类似疾病患者视网膜的光感受器丧失。
在第四种优选的实施方式中，本发明提供预防与神经变性疾病有联系的变性改变的方法。
在更优选的实施方式中，该神经变性疾病是脑缺血性神经元损伤、神经病(尤其是外周神经病)、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病、帕金森氏病或肌萎缩性侧索硬化。
按照本发明所关注的具体疾病包括兴奋性氨基酸依赖性、特别是谷氨酸盐和/或天冬氨酸盐依赖性疾病、障碍和疾患，象牛皮癣、缺氧、缺血、帕金森氏综合征、惊厥、偏头痛和肌萎缩性侧索硬化(ALS)。
目前所关注的是适合的剂量范围是0.1至1000毫克每日，10-500毫克每日，尤其是30-100毫克每日，通常取决于精确的给药模式、给药剂型、给药所针对的适应症、所涉及的受治疗者与所涉及受治疗者的体重和进一步的主管医师或兽医的偏爱与经验。
附图的简要说明参照附图进一步阐述本发明，其中
图1阐述在有或没有化合物G-1和NGF的存在下保温两天后对PC12细胞的平均轴突长度±SEM(总轴突长度/每孔总细胞数)的作用；图2阐述化合物G-1对在培养基中生长7天后E14大鼠VM培养物中TH-ir数的作用。在本实验中，发现TH-免疫反应性细胞在用1μM化合物G-1处理的培养物中比未处理的对照培养物多81％(Mann-Whitney检验p＜0.016)，说明该化合物对大鼠这种神经元群具有存活作用；图3阐述化合物G-1对体外生长21天后的切片培养物中TH-IR数的作用。在本实验中，发现TH-免疫反应性细胞在用1μM化合物G-1处理的培养物中比未处理的对照培养物多37％(Mann-Whitney检验p＜0.038)，说明该化合物对猪的这种神经元群具有存活作用；图4(A和B)阐述1-3μM化合物G-1对NGF-诱导的ERK与Akt激酶磷酸化的作用。在这些实验中，见到μM浓度化合物G-1强化NGF-诱导的激酶(ERK与Akt激酶)磷酸化的能力，这种磷酸化对信号转导来说具有重要意义；图5阐述化合物G-2对沙土鼠模型瞬间普遍缺血4分钟后海马损伤的作用。根据海马损伤的程度分为四组第1组CA1-层没有损伤；第2组CA1-层部分损伤；第3组CA1-层完全损伤；第4组不仅CA1-层损伤。左右半球得分之和为总的缺血得分。使用Kendallτ检验进行统计学评价。大多数(≈80％)未处理动物显示海马CA1-层有总体损伤。相反，见到多数(≈50％)在缺血发作后接受化合物G-2(2×30mg/kg ip.)的动物海马神经元没有或仅有部分损伤；图6阐述用3mM化合物G-1刺激20分钟对未分化PC12细胞CREB磷酸化的作用，单用或者加入次优浓度(0.1nM)的NGF。加入弗司扣林作为阳性对照，因为已知它经由细胞内cAMP的升高和PKA的活化刺激CREB磷酸化。在5至20分钟时间点与未刺激的细胞以及用0.1nM NGF刺激的细胞相比，显示化合物G-1刺激CREB磷酸化。
实施例参照下列实施例进一步阐述发明，它们无论如何也不打算限制所要求保护的发明范围。
实施例1制备例一般说明所有涉及对空气敏感的试剂或中间体的反应均在氮下和无水溶剂中进行。在加工程序中使用硫酸镁作为干燥剂，在减压下蒸发溶剂。
方法A5-溴-8-硝基异喹啉在1.5小时内，在10℃以下，将硝酸钾(120g，1.2mol)的浓硫酸(500ml)溶液加入到5-溴异喹啉(219.4g，1.05mol)与浓硫酸(400ml)的混合物中。将反应液倒在冰(4l)上，加入浓氢氧化铵(2l)和冰(4l)中和。过滤晶体，风干。收率216.9g(82％)。Mp 129-130℃。
方法B5-溴-N-甲基-8-硝基-1，2，3，4-四氢异喹啉将5-溴-8-硝基异喹啉(216.9g，0.86mol)在10分钟内分批加入到硫酸二甲酯溶液(750ml)中。放出一定的热。将混合物在100℃下加热10分钟。沉淀出5-溴-2-甲基-8-硝基喹啉鎓甲基硫酸盐。在冰上冷却混合物，加入二乙醚(1l)。过滤粗混合物，分离晶体。将盐溶于乙酸(1.5l)。历经4小时向冰冷却的混合物中加入硼氢化钠(47g，1.24mol)。使温度保持在30℃以下。蒸发粗混合物，加入氢氧化钠(2l，1M)。过滤晶体。收率205.2g(88％)。Mp 85-87℃。
方法C5-(4-氯苯基)-N-甲基-8-硝基-1，2，3，4-四氢异喹啉将5-溴-N-甲基-8-硝基-1，2，3，4-四氢异喹啉(4.07g，15mmol)、4-氯苯基代硼酸(3.5g，22.5mmol)、碳酸钠(8.0g，75.5mmol)、1，2-二甲氧基乙烷(60ml)、水(30ml)与四(三苯膦)钯(O)(0.20g，0.17mmol)的混合物在回流下搅拌3.5小时。加入水(50ml)，混合物用乙酸乙酯(100ml)萃取。使粗混合物从乙醇(96％)中重结晶。收率3.62g(80％)。Mp 162-163℃。
8-乙酰氨基-5-(4-氯苯基)-四氢-1，2，3，4-萘按照方法C从1-乙酰氨基-4-溴-5，6，7，8-四氢萘制备。收率62％。Mp 217-220℃。
4-(4-氯苯基)-硝基苯按照方法C从4-溴硝基苯和4-氯苯基代硼酸制备。收率86％。Mp141.6-145.2℃。
方法D8-氨基-5-(4-氯苯基)-N-甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐将5-(4-氯苯基)-N-甲基-8-硝基-1，2，3，4-四氢异喹啉(3.47g，11.5mmol)、硫酸(1ml，12mmol)、阮内镍(1ml，50％水浆液)与甲醇(150ml)的混合物在氢下搅拌1.5小时。将粗混合物通过C盐过滤，蒸发。收率3.2g(90％)。Mp 213-215℃。
4-氯苯基)苯胺按照方法D从4-(4-氯苯基)硝基苯制备。所分离的产物是一种油。收率72％。
方法F5-(4-氯苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮将8-氨基-5-(4-氯苯基)-N-甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉盐酸盐(3.1g，10mmol)、氯醛(1.5ml，15mmol)、硫酸钠(14g，98.6mmol)、盐酸羟胺(2.4g，15mmol)与水(70ml)的混合物在回流下加热0.5小时。使混合物达到室温。将晶体过滤，用水洗涤，然后从乙醇(96％)中重结晶。将结晶性中间体(2.0g)与甲磺酸(20ml)合并，在100℃下加热15分钟。将粗混合物倒在冰上，加入氢氧化钠(25ml，10M)。使结晶性产物从乙醇(96％)中重结晶。收率0.54g(29％)。Mp分解225℃。
5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮按照方法F从8-氨基-5-(4-氯苯基)-N-甲基-1，2，3，4-萘制备。收率52％。Mp 286.9-290.1℃。
5-(4-氯苯基)靛红按照方法F从4-氯苯基)苯胺制备。收率26％。Mp 246.3-251.5℃。
方法G5-(4-氯苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-1)将5-(4-氯苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮(0.50g，1.53mmol)、盐酸羟胺(0.5g，7.2mmol)与乙醇(5ml，96％)的混合物在室温下搅拌15分钟。颜色从黄色变为红色，沉淀出产物。过滤产物，分离到0.44g(76％)。Mp分解300-305℃。
5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-2)按照方法G从5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮制备。收率79％。Mp分解250℃。
5-(4-氯苯基)靛红-3-肟(化合物G-3)按照方法G从5-(4-氯苯基)靛红制备。收率41％。Mp 236-237℃。
5-(4-三氟甲基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-4)按照方法G制备。Mp 295-300℃分解。
5-[5-苯基-2-噻吩基]-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-5)按照方法G制备。Mp 267-268℃。
5-(4-甲苯甲酰基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟甲磺酸盐(化合物G-6)按照方法G制备。Mp 225-230 C分解5-(4-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟甲磺酸盐(化合物G-7)按照方法G制备。Mp 228℃。
5-(4-溴苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-8)按照方法G制备。Mp＞300℃分解。
5-(4-三氟甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-9)按照方法G制备。Mp＞250℃分解。
5-(4-氯苯基)-7-甲基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-10)按照方法G制备。Mp＞250℃分解。
5-苯基-7-甲基-6，7，8，9-四氢-1-甲基-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-11)按照方法G制备。Mp 292-294℃。
8-乙酰基-5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟(化合物G-12)按照方法G制备。Mp 250℃分解。
7-乙基-5-(4-氯苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-13)按照方法G制备。Mp 220℃分解。
5-(4-氯苯基)-8-甲磺酰基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟(化合物G-14)按照方法G制备。Mp 205℃分解。
5-(4-氯苯基)-4，5-二甲基靛红-3-肟(化合物G-15)按照方法G从5-(4-氯苯基)-4，5-二甲基靛红制备。Mp 250℃分解。
7-甲基-5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3，2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-16)按照方法G制备。Mp 250℃分解。
7-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3，2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟盐酸盐(化合物G-17)按照方法G制备。Mp 310℃。
5-(4-硝基苯基)-1，4，7，8，9，10-六氢-8-乙基[4，3-f]喹喔啉-2，3-二酮盐酸盐(化合物G-18)按照方法G制备。Mp 300℃。
下列化合物可以按照方法G制备5-(5-氯吡啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-19)5-(6-氯吡啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-20)5-(5-氯嘧啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-21)5-(2-氯嘧啶-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-22)5-(6-氯哒嗪-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-23)5-(5-氯吡嗪-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-24)5-(5-氯噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-25)5-(5-氯-1，1-二氧基噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-26)5-(5-氯噻唑-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-27)5-(2-氯噻唑-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟(化合物G-28)方法H1-氨基-4-(4-氯苯基)-四氢-5，6，7，8-萘将1-乙酰氨基-4-(4-氯苯基)-四氢-5，6，7，8-萘(1.65g，5.5mmol)、氢氧化钠水溶液(20ml，4M)与乙醇(96％)的混合物在回流下搅拌3天。加入水(50ml)，混合物用乙酸乙酯(50ml)萃取。所分离的产物是一种油。收率1.31g(93％)。
方法I1-乙酰氨基-4-溴-5，6，7，8-四氢萘向1-乙酰氨基-5，6，7，8-四氢萘(1.9g，10mmol)在三氟乙酸(20ml)中的混合物中加入溴(0.55ml，10mmol)的乙酸(5ml)溶液。将混合物在室温下搅拌15分钟。加入水(50ml)，过滤晶体。收率2.6g(97％)。Mp＝185.2-188.6℃。
方法J1-乙酰氨基-5，6，7，8-四氢萘在5℃下，将乙酸酐(20ml)加入到1-氨基-5，6，7，8-四氢萘(10g，68mmol)、乙酸钠(20g，245mmol)与水(100ml)的混合物中。将混合物在室温下搅拌15分钟。在冰上冷却混合物达1小时，然后过滤。晶体用水洗涤。收率13.0g(100％)。
方法K5-(4-氯苯基)-1，4，7，8，9，10-六氢吡啶并-8-甲基[4，3-f]喹喔啉-2，3-二酮盐酸盐(化合物K-1)将4-氯苯基)-7，8-二氨基-1-甲基-1，2，3，4-四氢异喹啉(1.44g，5.0mmol)、草酸二水合物(2.0g，15.8mmol)与盐酸(30ml，4M)的混合物在回流下搅拌2小时。过滤结晶性沉淀。收率1.27g，67％。Mp＞250℃。
方法L8-甲基-5-(4-(N，N-二甲基氨磺酰基)苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3，2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-O-((3-甲氧基-5-甲基-异噁唑-4-基)甲基)肟甲磺酸盐(化合物L-1)将8-甲基-5-(4-(N，N-二甲基氨磺酰基)苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3，2-h]异喹啉-2，3-二酮(0.79g，2.0mmol)、4-(氨基-氧基-甲基)-3-甲氧基-5-甲基异噁唑(0.63g，2.67mmol)与乙醇(40ml)的混合物在回流下搅拌2小时。加入氨水，混合物用二氯甲烷萃取。
混合物经过硅胶柱色谱纯化，使用二氯甲烷∶甲醇∶浓氨(89∶10∶1)的混合物作为洗脱剂。将粗碱与甲磺酸的异丙醇溶液(5ml，0.1M)合并。过滤分离产物，为黄色晶体。收率0.25g(20％)。Mp 104℃。
方法M7-乙基-5-(苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-甲基肟盐酸盐(化合物M-1)将7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮(110mg，0.38mmol)、盐酸甲氧基胺(90mg，1.1mmol)与乙醇(10ml，99％)的混合物在室温下搅拌15分钟。蒸发混合物至5ml。过滤分离所沉淀的产物。收率50mg，37％。Mp＞300℃。
7-乙基-5-(4-氯苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-甲基肟盐酸盐(化合物M-2)按照方法M制备。Mp 245℃分解。
方法Nα-邻苯二甲酰亚氨基氧基-γ-丁内酯盐酸盐向α-溴-γ-丁内酯(3.0ml，36mmol)的二甲基甲酰胺(50ml)溶液中加入N-羟基邻苯二甲酰胺(4.6g，28mmol)，然后加入三乙胺(7.7ml，56mmol)。在室温下搅拌4小时后，将反应液过滤，用油泵蒸发至干。加入盐酸(1M，28ml)和水(20ml)。滤出沉淀，用水洗涤。在空气中干燥，得到7.1g米色晶体。
α-氨基氧基-γ-丁内酯盐酸盐在回流下，将α-邻苯二甲酰亚氨基氧基-γ-丁内酯(1.0g，4mmol)加入到盐酸(1M，10ml)中。在回流下5分钟后，将反应液在冰浴上冷却，过滤。将滤液蒸发至于。加入甲苯，共沸蒸馏除去残余的水。得到0.75g所需物质。
5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(3-(2-氧代)四氢呋喃基)肟(化合物N-1)向加热至回流的5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮(1.06g，2.7mmol)的甲醇(30ml)溶液中加入α-氨基氧基-γ-丁内酯(0.75g，4mmol)的热甲醇(10ml)溶液。沉淀出黄色晶体。将反应液在回流下加热另外15分钟，冷却至室温。滤出产物，用冷甲醇洗涤，得到5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(3-(2-氧代)四氢呋喃基)肟。Mp280-282℃。
方法O5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-1)将5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(3-(2-氧代)四氢呋喃基)肟(0.75g)在水(25ml)、乙醇(5ml，96％)和1N NaOH(含水)中、在80℃下搅拌30分钟，NaOH的量使pH在12左右。反应混合物用盐酸酸化，沉淀出产物。Mp 154.5℃。
下列化合物可以按照方法O制备5-(5-氯吡啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-2)5-(6-氯吡啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-3)5-(5-氯嘧啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-4)5-(2-氯嘧啶-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3，2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-5)5-(6-氯哒嗪-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-6)5-(5-氯吡嗪-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-7)5-(5-氯噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-8)5-(5-氯-1，1-二氧基-噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-9)5-(5-氯噻唑-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-10)5-(2-氯噻唑-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟(化合物O-11)实施例2分化PC12细胞在无血清培养基中的存活在本实验中，在分化为神经元样表型之后评估化合物对丧失其他存活因素的嗜铬细胞瘤细胞系PC12存活的保护作用。
方法将细胞接种在涂有胶原的96孔平皿内的DMEM中，细胞密度为8,000/cm2，DMEM含有7.5％胎牛血清(FCS)、7.5％供体马血清(DHS)和2nM NGF，培养6天。然后将培养基变为不含血清的DMEM，其中补充有所示浓度的化合物。作为阳性对照，平行的孔接受无血清DMEM，不加入载体或3nM NGF。
保温4天后，用MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺酰基)-2H-四唑鎓)评价细胞活力，它被有代谢活性的细胞所还原。数据以用3nM NGF所见到的应答的％表示，关于平行无血清培养物中残余的MTS还原活性(NGF对照的％)进行校正。
本实验结果列在下表1中。
表1对分化PC12细胞在无血清培养基中存活的作用(3nM NGF的％)
表1显示化合物G-1、化合物G-2和化合物G-3对PC12细胞在无血清培养基中存活的作用，测量活力作为MTS的还原作用。所有三种化合物对无血清培养基中的PC12细胞显示剂量依赖性解救作用。在5-10μM浓度下见到化合物的最大存活作用，相当于3nM NGF作用的70-75％。
实施例3对PC12细胞轴突长出的刺激作用在本实验中，评估化合物强化NGF-诱导PC12细胞轴突长出的能力。
方法将PC12细胞接种在涂有胶原的组织培养平皿内的DMEM中，细胞密度为15,000/cm2，DMEM含有7.5％FCS和7.5％DHS。第二天，将培养基变为补充有NS化合物的培养基，含有或者不含NGF。
改变培养基两天后，将细胞固定在4％低聚甲醛中，对神经丝染色。在含4％低聚甲醛的PBS中保温，然后在10％DHS的存在下渗透在0.05％Triton-X100中，以阻滞非特异性结合部位，使细胞固定在组织培养平皿内。洗涤后，将平皿与按1∶200稀释在0.05％Triton-X100/10％DHS中的、来自Boehringer的抗神经丝(NF)抗体(RT97克隆体)保温，然后与按1∶200稀释的、生物素基化抗小鼠免疫球蛋白RPN1001(Amersham)保温。使用ABC-配合物/HRP试剂盒K0355(DAKO)和3，3-二氨基联苯胺四盐酸盐(DAB)作为底物对NF-免疫反应性细胞进行染色。
利用公平的2D立体学(与Olympus BH-2显微镜连接的CAST-栅格系统)进行每孔总细胞数以及总轴突长度估计。
本实验结果列在图1中。从该图可以明显看出，单独的化合物G-1(1和3μM)对PC12细胞轴突长出显示一定作用，并且显著强化NGF-诱导的轴突长出。
实施例4胚胎大鼠多巴胺能神经元的存活在本实验中，评估化合物G-1对大鼠E14腹侧中脑(VM)离体培养物多巴胺能神经元存活的作用。
方法在无菌条件下分离胚胎大鼠脑(Wistar；E14)，置于含有葡萄糖(6.5mg/ml)的冷Gey氏平衡盐溶液(GIBCO)中。
切取腹侧中脑，切成小的组织切片，置于补充有B27的Neurobasal培养基中，小心地通过80gm Nitex滤器。利用血细胞计数器统计细胞，置于6孔多皿内，密度大约为2.0×106细胞/孔。培养皿预先涂有聚-D-赖氨酸。
1小时后，除去培养基，加入新鲜培养基(1.5ml/孔)。使一组培养物长期受到1μM浓度化合物G-1的处理。未处理的培养物充当对照。每隔一天改变培养基，在任何阶段都不使用抗有丝分裂剂和抗生素。
培养7天后，对培养物的酪氨酸羟化酶(TH)进行免疫染色。简而言之，将细胞在含有1％Triton X-100的0.05M Tris-缓冲盐水(TBS，pH 7.4)中洗涤3×15分钟，与10％胎牛血清(FBS，Life Technologies)在TBS中保温30分钟。然后将细胞与按1∶600稀释在含10％FBS的TBS中的单克隆小鼠抗-TH抗体(Boehringer Mannheim)在4℃下保温24小时。在含1％Triton-X100的TBS中清洗后，将细胞与按1∶200稀释在含10％FBS的TBS中的生物素基化抗小鼠IgG抗体(Amersham)保温60分钟。然后将细胞在含1％Triton-X100的TBS中洗涤(3×15分钟)后，与按1∶200稀释在含10％FBS的TBS中的抗生蛋白链菌素-过氧化物酶(Dako)保温60分钟。在TBS中洗涤(3×15分钟)后，用含有0.05％3，3-二氨基联苯胺(Sigma)和0.01％H2O2的TBS处理，使所结合的抗体可见。手工统计TH-免疫反应性(ir)细胞。
本实验的结果列在图2中。从该图可以看出TH-免疫反应性细胞在用1μM化合物G-1处理的培养物中比未处理的对照培养物多81％(Mann-Whitney检验p＜0.016)，说明该化合物对大鼠这种神经元群具有存活作用。
实施例5E28猪腹侧中脑多巴胺能神经元的存活在本实验中，评估化合物G-1对猪E28腹侧中脑器官型切片培养物多巴胺能神经元存活的作用。
方法在无菌条件下从猪胚胎(E28)中分离腹侧中脑(VM)，切成400μm切片，置于含有葡萄糖(6.5mg/ml)的冷Gey氏平衡盐溶液(GIBCO)中。按照界面培养法培养组织切片，该方法最初是由Stoppini等开发的[L.Stoppini，P.A.Buchs，D.Muller A simple method fororganotypic cultures of nervous tissue；J.Neurosci Methods(神经科学方法杂志)1991 37 173-182]。
简而言之，将切片放置在半多孔膜上(Millipore，0.3μm；4切片/膜)，插入到6孔平皿(Costar)内的含有血清的培养基(Gibco BRL)中。每孔含有1ml培养基(50％Optimem，25％马血清，25％Hank氏平衡盐溶液(均来自GIBCO))，培养基补充有D-葡萄糖，终浓度为25mM。
3天后，将培养基用所限定的无血清培养基(Neurobasal培养基，补充有B27，来自Life Technologies)代替。使培养物在5％CO236℃恒温箱内生长21天，然后如实施例4所述对切片的TH进行免疫染色。使一组切片培养物长期受到1μM浓度化合物G-1的处理。未处理的培养物充当对照。每周改变两次培养基，在任何阶段都不使用抗有丝分裂剂和抗生素。
利用Olympus C.A.S.T.栅格系统(1.10版；Olympus，Albertslund，Denmark)对编号的切片(以便实验分析对样本标记是“盲的”)进行TH-ir神经元的量化，该系统由Olympus BX50显微镜和由计算机运行的x-y-z跨距马达载物台组成。描绘培养物切片的区域，随机放置统计框架，以标记所要取样的第一个区域。然后使框架有序移动经过切片，统计TH-ir细胞。
本实验的结果列在图3中。从该图可以看出TH-免疫反应性细胞在用1μM化合物G-1处理的培养物中比未处理的对照培养物多37％(Mann-Whitney检验p＜0.038)，说明该化合物对猪的这种神经元群具有存活作用。
实施例6PC12细胞中的NGF信号转导在本实验中，评估化合物G-1对NGF-诱导ERK与Akt激酶磷酸化的作用。
方法将大约200,000个PC12细胞平板接种在24孔平皿内的DMEM中，DMEM含有7.5％FCS和7.5％DHS，ON保温。第二天，向细胞加入NGF和化合物G-1，保温24小时，然后在2×Laemmli样本缓冲液中收获细胞。
在8-18％梯度SDS凝胶上电泳全部细胞溶解产物，使凝胶在PVDF膜上形成电印迹。使用小鼠抗-磷酸-p44/p42 MAP激酶E10 mAb(NewEngland Biolabs#9106)和HRP-联的抗-小鼠抗体免疫检测磷酸化的ERK1与ERK2。使用兔磷酸-特异性Akt(Ser473)抗体(New EnglandBiolabs#9271)和HRP-联的抗-兔抗体免疫检测磷酸化的Akt激酶。利用ECL系统(Amersham)通过化学发光检测谱带。
本实验的结果列在图4A和4B中。从这些图可以见到μM浓度化合物G-1强化NGF-诱导的激酶(ERK与Akt激酶)磷酸化的能力，这种磷酸化对信号转导来说具有重要意义。
实施例7沙土鼠瞬间普遍缺血在本实验中，评估化合物G-2对瞬间普遍缺血动物模型的神经保护作用。
方法将沙土鼠用氟烷麻醉，找出左右颈动脉，闭合4分钟。使用加热灯使动物体温在手术前后保持正常。在手术期间，将沙土鼠放置在加热垫上，控制体温在37±0.5℃。在缺血发作后15分钟和第二天，动物接受30mg/kg化合物G-2腹膜内给药。
四天后，将动物处死，取出脑，冷却至-70℃。此后，将脑切成20μm厚的切片，选择5-7片具有海马组织的切片，用苏木精-曙红染色。
本实验的结果列在图5中。
根据海马损伤的程度分为四组第1组CA1-层没有损伤；第2组CA1-层部分损伤；第3组CA1-层完全损伤；第4组不仅CA1-层损伤。
左右半球得分之和为总的缺血得分。使用Kendallτ检验进行统计学评价。
从该图可以看出，大多数(≈80％)未处理动物显示海马CA1-层有总体损伤。相反，见到多数(≈50％)在缺血发作后接受化合物G-2(2×30mg/kg ip.)的动物海马神经元没有或仅有部分损伤。
实施例8对未分化PC12细胞CREB磷酸化的刺激作用环AMP-应答元件结合蛋白(CREB)是一种转译后活化的转录因子，已经参与大量神经元功能，包括细胞存活、分化和神经传递。在本实验中，评估化合物G-1对CREB磷酸化的作用。
方法将每孔大约7.5×105个PC12细胞平板接种在涂有胶原的6孔平皿内的DMEM中，DMEM含有0.75％FCS和0.75％DHS，保温48小时。然后使细胞在无血清DMEM中进一步饥饿2小时，再用所示化合物刺激5、10或20分钟。在1x加热的样本缓冲液(2％SDS，400mM Tris，pH8.0，10mM DTT和0.25mM Na3VO4)中收获细胞，在8-18％梯度SDS凝胶上电泳全部细胞溶解产物，使凝胶在PVDF膜上形成电印迹。
使用兔抗-磷酸-CREB(UpState Biotechnology#06-519)再用HRP-联的抗-兔抗体(Amersham Life Science#NA 934)免疫检测磷酸化的CREB。利用ECL系统(Amersham)通过化学发光检测谱带。
本实验的结果列在图6中。从该图可以看出，在5至20分钟时间点与未刺激的细胞以及用0.1nM NGF刺激的细胞相比，化合物G-1刺激CREB磷酸化。
5分钟刺激后见到NGF与化合物G-1的加和作用(没有显示)。
权利要求
1.由通式(I)代表的化合物或其药学上可接受的盐， 其中，A代表式-C(NOR2)-或-NR2-CO-基团；R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
2.权利要求1的化合物，它是通式(II)的靛红衍生物或其药学上可接受的盐， 其中，R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-；-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
3.权利要求2的靛红衍生物，具有通式(III) 其中R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基。
4.权利要求3的靛红衍生物，它是7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-甲基肟；5-(4-氯苯基)-7-甲基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3-肟；7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]二吡咯-2，3-二酮-3肟；7-甲基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮3-肟；7-乙基-5-苯基-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮-3-乙酰肟；7-乙基-5-(4-氯苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮-3-肟盐酸盐；7-乙基-5-(4-氯苯基)-1，6，7，8-四氢苯并[2，1-b3，4-c]-二吡咯-2，3-二酮-3-甲基肟；或其药学上可接受的盐。
5.权利要求2的靛红衍生物，具有通式(IV)、(V)或(VI) 其中R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代-四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基。
6.权利要求5的式(IV)靛红衍生物，它是5-[5-苯基-2-噻吩基]-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯吡啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(6-氯吡啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯嘧啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(2-氯嘧啶-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(6-氯哒嗪-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯吡嗪-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯-1，1-二氧基-噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(5-氯噻唑-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(2-氯噻唑-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-肟；5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(3-(2-氧代)四氢呋喃基)肟；5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯吡啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(6-氯吡啶-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯嘧啶-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(2-氯嘧啶-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(6-氯哒嗪-3-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯吡嗪-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)；5-(5-氯噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯-1，1-二氧基-噻吩-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(5-氯噻唑-2-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；5-(2-氯噻唑-5-基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]萘-2，3-二酮-3-O-(4-羟基丁酸-2-基)肟；或其药学上可接受的盐。
7.权利要求5的式(V)靛红衍生物，它是5-(4-氯苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-溴苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-三氟甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-三氟甲基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-甲苯甲酰基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-甲氧基苯基)-8-甲基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-(4-(N，N-二甲基氨磺酰基)苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-O-((3-甲氧基-5-甲基-异噁唑-4-基)甲基)肟；8-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-(4-硝基苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-(4-氟苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-乙酰基肟；8-甲基-5-(4-乙基苯甲酰基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；8-乙酰基-5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-(4-氯苯基)-8-甲磺酰基-6，7，8，9-四氢-1-H-吡咯并[3.2-h]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；或其药学上可接受的盐。
8.权利要求5的式(VI)靛红衍生物，它是7-甲基-5-(4-氯苯基)-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；5-苯基-7-甲基-6，7，8，9-四氢-1-甲基-吡咯并[3.2-f]异喹啉2，3-二酮-3-肟；7-甲基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；7-乙基-5-苯基-6，7，8，9-四氢-1H-吡咯并[3.2-f]异喹啉-2，3-二酮-3-肟；或其药学上可接受的盐。
9.权利要求1的化合物，它是通式(VII)的喹啉衍生物或其药学上可接受的盐， 其中，R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R6和R7一起构成稠合的5至7元环，由下列桥连的二价原子团之一组成(方向从R6至R7)-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-.-CH2-NR12-CH2-；-NR12-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-；-NR12-CH2-CH2-CH2-；-NR12-CH2-CH2-NR12-；-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-NR12-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-NR12-CH2-；-CH2-NR12-CH2-CH2-CH2-；-CH2-CH2-CH2-CH2-NR12-；或-NR12-CH2-CH2-CH2-CH2-；其中R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基；或者R6和R7彼此独立地代表氢或甲基。
10.权利要求9的喹啉衍生物，具有通式(VIII) 其中R1代表氢或烷基；R2代表氢、烷基、酰基、氧代四氢呋喃基、异噁唑基-烷基或异噁唑基，该烷基可以可选地被一个或多个羟基或羧基取代，该异噁唑基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自由烷基或烷氧基组成的组；R5代表苯基、苄基、或5-或6-元单环杂环基，这些基团可以可选地被卤素、CF3、-OCF3、NO2、氨基、氨基磺酰基、烷基、烷氧基、烷氧羰基或苯基取代一次或多次；R12代表氢、式-CH2CH2OH、-CO-CH3、-SO2-CH3基团或烷基。
12.权利要求10的喹啉衍生物，它是5-(4-氯苯基)-1，4，7，8，9，10-六氢吡啶并-8-甲基[4，3-f]喹喔啉-2，3-二酮；5-(4-硝基苯基)-1，4，7，8，9，10-六氢吡啶并-8-乙基[4，3-f]喹喔啉-2，3-二酮；或其药学上可接受的盐。
12.药物组合物，包含治疗学上有效量的根据权利要求1-11任意一项的化合物或其药学上可接受的盐以及至少一种药学上可接受的载体或稀释剂。
13.治疗或减轻哺乳动物、包括人的疾病或障碍或疾患的方法，该疾病或障碍或疾患对神经营养剂的活性有应答，该方法包含对有此需要的所述哺乳动物给以有效量的根据任意权利要求1-12的化合物或其药学上可接受的盐。
14.根据权利要求1-11任意一项的化合物或其药学上可接受的盐的用途，用于制备治疗或减轻哺乳动物、包括人的疾病或障碍或疾患的药物，该疾病或障碍或疾患对神经营养剂的活性有应答。
15.根据权利要求14的用途，其中该疾病或障碍或疾患对神经生长因子的活化或强化有应答。
16.根据权利要求14的用途，其中该疾病或障碍或疾患是外周神经、髓质、脊髓的创伤性损害、脑缺血性神经元损伤、神经病，包括外周神经病。
17.根据权利要求14的用途，其中该疾病是神经变性疾病。
18.根据权利要求17的用途，其中该神经变性疾病是痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷顿氏病、肌萎缩性侧索硬化或眼的神经变性疾病，包括黄斑变性、色素性视网膜炎、青光眼和类似疾病患者视网膜的光感受器丧失。
19.根据权利要求14的用途，用于预防与神经变性疾病有联系的变性改变。
20.根据权利要求19的用途，其中该神经变性疾病是脑缺血性神经元损伤、神经病，尤其是外周神经病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病、帕金森氏病或肌萎缩性侧索硬化。
全文摘要
本发明涉及新的靛红衍生物、包含本发明靛红衍生物的药物组合物、制备本发明靛红衍生物的方法、它们在神经变性疾病治疗和损害与损伤神经元再生或预防变性中的用途、神经变性疾病的治疗方法和损害与损伤神经元的再生或预防变性方法。
文档编号C07D209/60GK1395563SQ01804032
公开日2003年2月5日 申请日期2001年1月23日 优先权日2000年1月24日
发明者M·戈罗恩伯格, D·彼得斯, A·莫勒 申请人:神经研究公司