专利名称：有效成份苦杏仁苷的提取、分离及精制方法
技术领域：
本发明涉及一种有效成份苦杏仁苷的提取、分离及精制方法。
背景技术：
苦杏仁为中国药典历版收藏的品种，具降气止咳、平喘、润肠通便之功效，用于咳嗽、气喘、胸满、痰多、血痰津枯、肠燥便秘，是临床上常用的药物。据文献报道，苦杏仁的止咳有效成份主要是苦杏仁苷在体内慢慢分解，逐渐产生微量氢氰酸而抑制呼吸中枢，使呼吸运动趋于安静而呈现镇咳平喘功效。另外苦杏仁及其分解产物还具有镇静作用等。
但以苦杏仁原药材加入的制剂，往往由于酶解作用，难以检出苦杏仁苷。而在提取加工的制剂中，目前的苦杏仁苷提取工艺多为水煮提总提取物或水蒸汽蒸馏，由于苦杏仁苷在水中长时间地被加热而极易被破坏，其含量均比较低，难以测定含量，甚至难以定性检出。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种提取率高、定量对照品纯度高、方法简便的有效成份苦杏仁苷的提取、分离及精制方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为取苦杏仁，压榨去油后，加3～6倍量的乙醇提取3次，减压过滤，合并滤液，减压回收乙醇至适量，放置、析出苦杏仁苷，过滤得苦杏仁苷粗品。
其精制过程为将苦杏仁苷粗品加乙醇溶解、过滤、冷藏，放置、析出苦杏仁苷白色的蔟状结晶，减压过滤，用少量乙醚与乙醇洗涤结晶，得纯度为99％以上的苦杏仁苷定量对照品。
本发明的原理如下根据苦杏仁苷易水解和被苦杏仁酶酶解破坏的性质，选用了将苦杏仁压榨去油后，用乙醇回流提取的方法，减少了破坏，快速、简单地提制苦杏仁苷粗品及定量对照品。
本发明的有益效果如下(1)本发明提供了一种不经柱层析，直接用乙醇提取苦杏仁苷定量对照品的提取、分离、精制法。提取的苦杏仁苷粗品对压榨去油后的苦杏仁饼而言，提取率可达8％以上，苦杏仁苷的含量可达50％以上。苦杏仁苷定量对照品含量可达99％以上。
(2)本发明所提制的苦杏仁苷，可直接加入制剂中，解决了长期以来由于苦杏仁苷易被苦杏仁酶酶解或水解，使有效成份被破坏、疗效降低的难题。使苦杏仁的有效成份得到了充分利用，确保了疗效，减少了服用剂量。
(3)本发明提制的苦杏仁苷定时对照品的纯度达99.2％，可供医药研究、生产单位作对照品使用，具广泛地应用价值及推动中药现代化的作用。
(4)具文献报道，苦杏仁苷具抗癌作用，本发明所提制的苦杏仁苷为抗癌药物的研制提供了物质基础。
(5)本发明不经柱层析，直接用溶剂提取苦杏仁苷，生产量不受限制，可大量提制苦杏仁苷单体，供生产应用。
图1为中国药品生物制品检定所提供的鉴别用苦杏仁苷纯度检查(HPLC归一化法)色谱图。
图2为本发明所制取的定量用苦杏仁苷对照品纯度检查(NPLC归一化法)色谱图。
具体实施例方式
实施例1取压榨去油后的苦杏仁饼1.5kg，粗碎，加乙醇4.5～9kg，回流提取3次，趁热抽滤，合并滤液，减压回收乙醇至适量，冷藏、放置、析出苦杏仁苷，抽滤、干燥得苦杏仁苷粗品120g，收率为8％，测出苦杏仁苷粗品中苦杏仁苷含量为60％。
再取苦杏仁苷粗品5g，加乙醇溶解、过滤、冷藏放置、析出苦杏仁白色的簇状结晶，减压过滤，用少量乙醚及乙醇洗涤结晶，反复上述操作1～2次，得苦杏仁苷定量对照品1.5～2.5g。熔点为214.8～216.5℃，用高效液相规一化法测其纯度为99.2％。
本发明所精制的苦杏仁苷定量对照品的确认及其纯度和含量的检测一、苦杏仁苷定量对照品的确认1、晶形本发明提制的苦杏仁苷定量对照品，为白色簇片状结晶。
2、熔点取本发明提制的苦杏仁苷定量对照品，干燥、研细，装毛细管，用YRT-3熔点仪测定其熔点，测定三次，分别为①215.4～216.5℃；②214.8～216℃；③215～216℃其熔点为214.8～216.5℃。
据文献报道苦杏仁苷三水合物熔点为200℃，无水物熔点为220℃。
3、薄层色谱取中国药品生物制品检定所(简称为中检所)提供的苦杏仁苷鉴别对照品(批号820-9401)加50％甲醇配制成1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。再取本发明提制的苦杏仁苷，加50％甲醇配制成每1ml含2mg的溶液，作为供试品溶液。分别吸取上述二种溶液各10ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅酸GF254薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(6∶1∶3)的上层溶液为展开剂，展开、取出、晾干，置紫外光灯(UV254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。喷5％磷钼酸无水乙醇液后，再喷10％硫酸乙醇液，100℃烘烤约10分钟，斑点显色清晰，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
4、HPLC色谱色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙晴-0.25％的磷酸溶液(1∶67)为流动相；检测波长为210nm；流速0.91ml/min，理论塔板数按苦杏仁苷计算应不低于5000。
取中检所提供的苦杏仁苷鉴别对照品，加50％甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液，作为对照品溶液。再取本发明制得苦杏仁苷定量对照品加50％甲醇制成每1ml含0.04mg溶液，作为供试品溶液。
按中国药典2000年版附录高效液相法，分别注入20ul，对照品与供试品(鉴别苦杏仁苷与本发明的苦杏仁苷)的液相色谱图保留时间一致。
以上4项实验确证，本发明提制的苦杏仁苷与中检所提供的鉴别苦杏仁苷对照品为同一化合物。
二、纯度和含量仍以中检所提供的苦杏仁苷鉴别对照品为对照，采用高效液相法的归一化法进行了纯度与含量检查。中检所提供的对照品在苦杏仁苷的主峰前还有一小峰出现，本发明提制的苦杏仁苷对照品则无杂质峰出现。规一化法测得中检所鉴别对照品含量为97.2％，而本发明提制的苦杏仁苷定量对照品为99.2％(见图1-2)。
权利要求
1.一种有效成份苦杏仁苷的提取、分离及精制方法，其特征在于取苦杏仁，压榨去油后，加3～6倍量的乙醇提取3次，减压过滤，合并滤液，减压回收乙醇至适量，放置、析出苦杏仁苷，过滤得苦杏仁苷粗品。
2.根据权利要求1所述的有效成份苦杏仁苷的提取、分离及精制方法，其特征在于将苦杏仁苷粗品加乙醇溶解、过滤、冷藏，放置、析出苦杏仁苷白色的蔟状结晶，减压过滤，用少量乙醚与乙醇洗涤结晶，得纯度为99％以上的苦杏仁苷定量对照品。
全文摘要
本发明涉及一种有效成份苦杏仁苷的提取、分离及精制方法。取苦杏仁,压榨去油后,加3～6倍量的乙醇提取3次,减压过滤,合并滤液,减压回收乙醇至适量,放置、析出苦杏仁苷,过滤得苦杏仁苷粗品。将苦杏仁苷粗品加乙醇溶解、过滤、冷藏,放置、析出苦杏仁苷白色的蔟状结晶,减压过滤,用少量乙醚与乙醇洗涤结晶,得纯度为99%以上的苦杏仁苷定量对照品。本发明的有益效果是不经柱层析,直接用乙醇可提得纯度为50%以上的苦杏仁苷粗品及99%以上的苦杏仁苷定量对照品,方法简便,提取率高。本发明解决了长期以来由于苦杏仁苷易被苦杏仁酶酶解或水解而使有效成分被破坏、疗效降低的难题。对照品的纯度高,具广泛地应用价值。
文档编号C07H1/00GK1365979SQ02100460
公开日2002年8月28日 申请日期2002年2月1日 优先权日2002年2月1日
发明者韩桂茹, 赵志军, 徐韧柳 申请人:河北药都制药集团有限责任公司