专利名称：表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallocatechin-3-gallate(EGCG)]单体制备方法。
表没食子儿茶素没食子酸酯具有清除自由基、抗氧化、抗突变、延缓衰老、防辐射、防癌抗癌、降血脂和胆固醇、抗动脉粥样硬化及抗菌等多种保健和药理作用。因此研究开发表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化的新工艺对创制新药具有重要意义。
表没食子儿茶素没食子酸酯单体的制备方法主要有柱分离制备法、膜分离制备法、液滴逆流分配法等，这些方法虽然可以获得高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯的产品但由于其投资大，得率低，吸附剂再生困难及操作复杂等缺点使其仅停留在实验室阶段而不易于工业化生产。
本发明的目的是提供一种工艺简单、成本低、易于工业化控制与大生产、且可获得表没食子儿茶素没食子酸酯纯度大于97％的产品的表没食子儿茶素没食子酸酯制备方法。
为实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案表没食子儿茶素没食子酸酯单体制备方法，包括绿茶提取物加入5倍重量的水使之溶解，过滤，滤液分别以等体积乙酸乙酯萃取，活性炭脱色，减压回收乙酸乙酯至干，加入90％乙醇水溶液溶解后，上sephadex LH-20层析柱(绿茶提取物重与吸附剂重量比为1∶15)，用90％乙醇水溶液作为洗脱剂洗脱，根据紫外检测结果，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份，其特征在于a)上述绿茶提取物用水溶解后，加入氯化钠；b)收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份经过减压回收乙醇后，再加适量的水在温度为10℃以下结晶得到目的产物。加入氯化钠起盐析作用，使部分杂质析出，通过过滤除去，其量最好使其浓度达到5％(W/V)，并静置30min以上，通过过滤除杂后的滤液经乙酸乙酯萃取3次后，合并乙酸乙酯层，加入原料重量的50％活性炭脱色120min以上，过滤，进一步除去色素杂质，过滤得滤液，在40～45℃条件下减压浓缩是为了减少有效成分的破坏，并回收乙酸乙酯，干固物加入90％乙醇水溶液溶解后，上sephadex LH-20柱层析(绿茶提取物重与吸附剂重量比为1∶15)，用90％乙醇水溶液洗脱，根据紫外检测收集的表没食子儿茶素没食子酸酯流份，已具有较高纯度的EGCG，本发明另一个关键是在水中结晶，它与已有技术中采用的均是冷冻干燥方法不同，能除去存在于提取液中的少量杂质，得到更高纯度的EGCG。
为了更好地理解本发明，以下将举实例说明，但这并不意味是对本发明的限制。
实施例一称取茶多酚含量大于95％的绿茶提取物184.5g，加入920mL去离子水使之溶解，再加入46g氯化钠，搅拌溶解完全后静置30min，滤去绿色浮沫，滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，加入92g活性炭脱色120min以上，过滤，滤液在40～45℃条件下减压回收乙酸乙酯至干，得干预处理物178g。称取此预处理物60g，加300mL 90％乙醇水溶液溶解，过滤，滤液上sephadex LH-20层析柱(绿茶提取物重与吸附剂重量比为1∶15)，用90％乙醇水溶液洗脱，根据紫外检测结果，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份，在40～45℃条件下减压回收乙醇至尽干，加去离子水至300mL，4℃静置3天，过滤，滤渣在40～45℃条件下真空干燥，得表没食子儿茶素没食子酸酯12.9g，为白色粉末，经HPLC分析纯度为98.16％。
实施例二称取茶多酚含量大于95％的绿茶提取物1000g，加入5000mL去离子水使之溶解，再加入250g氯化钠，搅拌溶解完全后静置30min，滤去绿色浮沫，滤液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，加入500g活性炭脱色120min以上，过滤，滤液在40～45℃条件下减压回收乙酸乙酯至干，加4000mL 90％乙醇水溶液溶解，过滤，滤液上sephadex LH-20层析柱(绿茶提取物重与吸附剂重量比为1∶15)，用90％乙醇水溶液洗脱，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份(根据紫外检测结果)，在40～45℃条件下减压回收乙醇至尽干，加去离子水至2000mL，4℃静置3天，过滤，滤渣在40～45℃条件下真空干燥，得表没食子儿茶素没食子酸酯181.1g，为白色粉末，经HPLC分析纯度为97.36％。
权利要求
1.一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体制备方法，包括绿茶提取物加入5倍重量的水使之溶解，过滤，滤液分别以等体积乙酸乙酯萃取，活性炭脱色，减压回收乙酸乙酯至干，加入90％乙醇水溶液溶解后，上sephadex LH-20层析柱(绿茶提取物重与吸附剂重量比为1∶15)，用90％乙醇水溶液作为洗脱剂洗脱，根据紫外检测结果，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份，其特征在于a)上述绿茶提取物用水溶解后，加入氯化钠；b)收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份经过减压回收乙醇至干，再加适量水溶解，于10℃以下结晶。
2.根据权利要求1所述的工艺，其特征是氯化钠加入量是使其水溶液中氯化钠浓度达到5％(W/V)。
3.根据权利要求1所述的工艺，其特征是结晶过程放置温度为4～10℃。
全文摘要
本发明公开了一种表没食子儿茶素没食子酸酯[(－)－epigallocatechin－3－gallate(EGCG)]单体制备方法。它包括绿茶提取物加水使之溶解，加入氯化钠，盐析，过滤除杂，滤液用等体积乙酸乙酯萃取，活性炭脱色，减压回收乙酸乙酯至干，加入90％乙醇水溶液溶解后，上sephadex LH－20柱层析(绿茶提取物重与吸附剂重量比为1∶15)，用90％乙醇水溶液作为洗脱剂洗脱，根据紫外检测结果，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流份，减压回收乙醇至干，再加适量水溶解，于10℃以下结晶。
文档编号C07D311/00GK1470510SQ0212665
公开日2004年1月28日 申请日期2002年7月23日 优先权日2002年7月23日
发明者马宁, 马 宁 申请人:浙江海正药业股份有限公司