专利名称：一种从红豆杉叶枝残渣中制备10－去乙酰基巴卡丁iii的方法
技术领域：
本发明是一种从种植红豆杉叶枝用后残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法。
Ramadoss等(USP.6,124,482，2000)先用脂肪醇浸提欧洲杉的干燥树叶，提取液部分浓缩后用脂肪酮萃取，去除不溶物，然后把母液旋转蒸发干燥，得到的固体用水和酮的混合液溶解，除去不溶物，经脱色，再利用有机溶剂进行萃取，有机层结晶得到纯度为93.5-94.1％的10-去乙酰基巴卡丁III。
Margraff等(USP.5,736,366，1998)用水浸提欧洲杉，调节提取液的pH值至4.6-5.4之间，利用固定相萃取分离10-去乙酰基巴卡丁III，结晶得到产品的纯度在75-90％，得率约为75.4-92％之间。
Gaullier等(USP.5,453,521；USP.5,393,895，1995)用脂肪醇浸提欧洲杉树叶，用水稀释溶液，去除不溶物，完全除掉酒精，用有机溶剂萃取水层，结晶得到产品纯度为75.8-93.8％，得率为69.5-93.8％。
Nair等(USP 5,478,736，1995)用含50-95％的甲醇、乙醇或者丙酮的水溶液浸提观赏性红豆杉的组织，得到的浸提液用活性炭过滤，利用真空加压的正相色谱柱分离，再用中压色谱柱分离，搜集相应馏分，得到10-去乙酰基巴卡丁III。
专利WO94/07882中用甲醇浸提红豆杉组织，得到的浸提液用水稀释，去除不溶物，除尽甲醇后得到的溶液用合适的有机溶剂萃取，结晶得到10-去乙酰基巴卡丁III纯度为95.8％，得率为93.6％。
上述专利对红豆杉树叶提取10-去乙酰基巴卡丁III主要涉及结晶，且有一定的得率。但是，我们发现经以上过程处理完树叶后，在树叶中残留部分10-去乙酰基巴卡丁III，一般残留量为10-25％，大大地浪费了资源，另外结晶法一次得率太低，其纯度不易提高，为此本发明得供一种新的方法。
发明内容
本发明的目的在于使用种植的红豆杉的树叶、树枝被提取出紫杉醇后的残渣制备10-去乙酰基巴卡丁III。
本发明的目的可通过下述技术方案实现先脱除废渣中的有机溶剂，再用水浸提后趁热过滤去除废渣，滤液浓缩后得到10-DABIII的粗提物，喷雾干燥，得到的干粉末用1∶1乙酸乙能和环己烷溶解，溶液经高压正相硅胶液相制备色谱分离，用乙酸乙酯和环己烷等梯度淋洗，分段收集淋洗液，得到纯度为99.5％以上的10-去乙酰基巴卡丁III。本发明使废弃资源得到再利用，工艺简单、成本低廉、试剂溶剂可回收使用，有利于环境保护。
本发明高效液相色谱分离所用的乙酸乙酯，环己烷为色谱纯。分析色谱所用的甲醇、乙腈为HPLC级，水为经美国生产的Millipore净水装置制备得到HPLC级水。原料及中间产品分析使用美国惠普公司的Agilent 1100系列液相色谱，包括四元梯度泵、真空脱气箱、标准微量自动进样器、柱温箱、可变波长检测器(VWD)(AgilentChemStation 4.09.01色谱工作站)；色谱柱用的是日本SHISEIDO公司CAPCELL PAK C18分析色谱柱(4.6mm I.D.×250mm，5μm)，进样量为10μm，柱温为32℃，流动相为乙腈＋水＋甲醇(32＋36＋32)，流速为1ml/min；产物鉴定使用Thermo Finnigan公司的LCQ ADVANTAGE MS SYSTERM，包括TSP高效液相色谱系统和LCQADVANTAGE质谱检测仪，Xcalibur 1.0.01，APCI/ESI源，MetaChem公司的Taxsil-3柱(250mm×4.6mm)，流动相为ACN＋H2O(51＋49)，流速为0.8ml/min，柱温箱温度是40℃，检测波长为227nm。APCI源条件全范围扫描150-2000，壳气65单位，辅助气20单位，源电压4.5KV，加热毛细管温度350℃；ESI源条件全范围扫描150-2000，壳气70单位，辅助气15单位，源电压6KV，加热毛细管温度250℃，蒸发器温度465℃。制备型HPLC美国Waters公司PrepLCTM4000高效液相色谱制备系统包括四元梯度泵，标准3725I进样器(10mL样品环)，2487双波长紫外检测器，NEC-586台式计算机(Millennium32色谱工作站)，色谱柱是Merck的Packing standNW 100填料为日本Fuji生产的硅胶，20μm。上海申生公司生产的5L-20L旋转蒸发仪，喷雾干燥器为BCHI Mini Spray Dryer B-191。
在上述技术方案基础上，所述的红豆杉叶枝残渣是以红豆杉提取紫杉醇后的残渣为原料；将残渣烘干成干粉后，干粉的大小为40目以下；该残渣含有0.1-10％的甲醇或乙醇；并对所述残渣在室温至70℃干燥处理后，脱除残渣中的有机溶剂，制成残渣干粉。
所述红豆杉残渣为被甲醇或乙醇提取完紫杉醇的种植的南方红豆杉的树叶和直径在0.5cm以下的树枝残渣。
将残渣干粉放入提取罐，加入水，在40-80℃下浸泡2-8小时；加入的水与残渣的重量比在2-5之间。
在上述技术方案基础上，对所述的10-去乙酰基巴卡丁III的粗提物喷雾干燥，得到干粉末。对所述的干粉末用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，然后旋转蒸发干燥得到粉末。对所述的所用乙酸乙酯与干粉末重量比在0.5-2之间；加入的硅胶和干粉末重量比在1-2之间。对所述的干粉末用高压正相制备色谱分离，填充硅胶的色谱柱长度为20-35cm，填充柱直径10cm，硅胶粒径为20μm，表面积为450m2/g。所述的干粉末重量与填充的硅胶重量比在1∶8-1∶20之间，根据填充柱填充硅胶的重量来决定加入干粉末重量，从而决定加入用于溶解干粉末的乙酸乙酯的体积，以及干法上样所用的硅胶的量。
所述填充硅胶的色谱柱及加入用于干法上样的粉末，用淋洗液等梯度淋洗，淋洗液流出色谱柱分段收集馏分，得到的纯度为99.5％以上的10-去乙酰基巴卡丁III，馏分经蒸发、浓缩、干燥，制得产品；对含量低于99.5％、高于35％的10-去乙酰基巴卡III馏分集中收集，经蒸发、浓缩、干燥，干粉末用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，然后旋转蒸发干燥成粉末，重新分离；对含量在35％以下的10-去乙酰基巴卡丁III馏分集中收集，经蒸发、浓缩、干燥，干粉末用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，然后旋转蒸发干燥成粉末，用1∶1乙酸乙酯和环己烷溶液等梯度淋洗，分段收集淋洗液，重新分离。
其中，使用过的硅胶经处理后可多次使用，处理条件为280-380℃下焙烧24-36小时，反复使用次数至少可达12次；淋洗液经过蒸发、浓缩后集中，精馏后得到的环己烷和乙酸乙酯可反复使用。
本发明的优越性在于能使废弃资源再利用，工艺简单、成本低廉、试剂溶剂可回收使用，有利于环境保护。
图2，红豆杉枝叶残渣经水煮后得到的物质的高效液相色谱。
图3，10-去乙酰基巴卡丁III的质谱图。
实施例2取种植的红豆杉的树叶、树枝被提取出紫杉醇后的残渣1kg，放在干燥箱加热至70℃真空干燥36小时，得到911g干燥的固体，碾磨成100目的粉末，放入5升广口瓶，加入4升水，在80℃水浴中浸泡2小时，多次提取，合并提取液过滤浓缩，喷雾干燥得到213g粉末，用300ml乙酸乙酯溶解，干法上样，用1∶1的乙酸乙酯和环己烷淋洗30L，分段收集淋洗液，得到纯度为99.6％的10-去乙酰基巴卡丁III晶体0.25g。
实施例3取种植的红豆杉的树叶、树枝被提取出紫杉醇后的残渣10kg，放在干燥箱加热至70℃真空干燥36小时，得到9217g干燥的固体，碾磨成100目的粉末，放入提取罐，加入45升水，在80℃水浴中浸泡3小时，多次提取，合并提取液过滤浓缩，喷雾干燥得到3215g粉末，用3L乙酸乙酯溶解，多次干法上样，用1∶1的乙酸乙酯和环己烷淋洗，分段收集淋洗液，得到纯度为99.7％的10-去乙酰基巴卡丁III晶体2.98g。
实施例4取种植的红豆杉的树叶、树枝被提取出紫杉醇后的残渣100kg，放在干燥房加热至70℃真空干燥30小时，得到93456g干燥的固体，碾磨成100目的粉末，放入提取罐，加入450升水，在80℃水浴中浸泡3小时，多次提取，合并提取液过滤浓缩，喷雾干燥得到34562g粉末，用30L乙酸乙酯溶解，多次干法上样，用1∶1的乙酸乙酯和环己烷淋洗，分段收集淋洗液，得到纯度为99.6％的10-去乙酰基巴卡丁III晶体27.89g。
权利要求
1.一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，以红豆杉叶枝用后残渣为原料，其特征在于先脱除废渣中的有机溶剂，再用水浸提后趁热过滤去除废渣，滤液浓缩后得到10-去乙酰基巴卡丁III的粗提物，喷雾干燥，得到的干粉末用1∶1乙酸乙能和环己烷溶解，溶液经高压正相硅胶液相制备色谱分离，用乙酸乙酯和环己烷等梯度淋洗，分段收集淋洗液，得到纯度为99.5％以上的10-去乙酰基巴卡丁III。
2.根据权利要求1所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于以红豆杉提取紫杉醇后的残渣为原料；将残渣烘干成干粉后，干粉的大小为40目以下；该残渣含有0.1-10％的甲醇或乙醇；对所述残渣在室温至70℃干燥处理后，脱除残渣中的有机溶剂，制成残渣干粉。
3.根据权利要求1、2所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于所述红豆杉残渣为被甲醇或乙醇提取完紫杉醇的种植的南方红豆杉的树叶和直径在0.5cm以下的树枝残渣。
4.根据权利要求1、2所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于残渣干粉放入提取罐，加入水，在40-80℃下浸泡2-8小时。
5.根据权利要求4所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于所述的加入的水与残渣的重量比在2-5之间。
6.根据权利要求1所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于对所述的10一去乙酰基巴卡丁III的粗提物喷雾干燥，得到干粉末；
7.根据权利要求6所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于对所述的干粉末用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，然后旋转蒸发干燥得到粉末。
8.根据权利要求7所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于对所述的所用乙酸乙酯与干粉末重量比在0.5-2之间；加入的硅胶和干粉末重量比在1-2之间。
9.根据权利要求7所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于对所述的干粉末用高压正相制备色谱分离，填充硅胶的色谱柱长度为20-3Scm，填充柱直径10cm，硅胶粒径为20μm，表面积为450m2/g。
10.根据权利要求9所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于所述的干粉末重量与填充的硅胶重量比在1∶8-1∶20之间，根据填充柱填充硅胶的重量来决定加入干粉末重量，从而决定加入用于溶解干粉末的乙酸乙酯的体积，以及干法上样所用的硅胶的量。
11.根据权利要求1所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于所述填充硅胶的色谱柱及加入用于干法上样的粉末，用淋洗液等梯度淋洗，淋洗液流出色谱柱分段收集馏分，得到的纯度为99.5％以上的10-去乙酰基巴卡丁III馏分经蒸发、浓缩、干燥，制得产品；对含量低于99.5％、高于35％的10-去乙酰基巴卡III馏分集中收集，经蒸发、浓缩、干燥，干粉末用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，然后旋转蒸发干燥成粉末，重新分离；对含量在35％以下的10-去乙酰基巴卡丁III馏分集中收集，经蒸发、浓缩、干燥，干粉末用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，然后旋转蒸发干燥成粉末，用1∶1乙酸乙酯和环已烷溶液等梯度淋洗，分段收集淋洗液，重新分离。
12.根据权利要求1所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于使用过的硅胶经处理后可多次使用，处理条件为280-380℃下焙烧24-36小时，反复使用次数至少可达12次。
13.根据权利要求1或12所述的一种从红豆杉叶枝残渣中制备10-去乙酰基巴卡丁III的方法，其特征在于淋洗液经过蒸发、浓缩后集中，精馏后得到的环己烷和乙酸乙酯可反复使用。
全文摘要
本发明是一种从种植红豆杉叶枝用后残渣中制备10－去乙酰基巴卡丁III的方法。使用种植的红豆杉的树叶、树枝被提取出紫杉醇后的残渣，经过常温至70℃干燥脱除废渣中的有机溶剂，将残渣放入提取罐，加入水后，在40－80℃下浸泡2－8小时；水与废渣的重量比在2－5之间；残渣浸泡后趁热过滤去除废渣，滤液浓缩后得到10－去乙酰基巴卡丁III的粗提物；用喷雾干燥仪将10－去乙酰基巴卡丁III粗提物喷雾干燥，得到的干粉末用乙酸乙酯溶解，干法上样，高压正相制备色谱分离，用1∶1乙酸乙酯和环己烷等梯度淋洗，分段收集淋洗液，得到纯度为99.5％以上的10－去乙酰基巴卡丁III。本发明能使废弃资源再利用，工艺简单、成本低廉、试剂溶剂可回收使用，有利于环境保护。
文档编号C07D305/14GK1398859SQ02136678
公开日2003年2月26日 申请日期2002年8月27日 优先权日2002年8月27日
发明者陈建民, 李明, 李华, 周海燕 申请人:上海万古生物科技发展有限公司