专利名称：一种庆大霉素Cla的制备方法
技术领域：
本发明涉及药品原料的制备方法，具体地说是属于庆大霉素C1a的提取精制方法。
庆大霉素是由绛红小单孢菌(Micromonospora purpurea NRRL 2953)产生的一族多组分的氨基糖甙类抗生素。《中华人民共和国药典》2000年版规定庆大霉素C组分包括C1、C1a、C2a、C2，其中庆大霉素C1a可作为合成抗菌药物依替米星的前体药物。庆大霉素C1a最常采用的制备方法是从小诺霉素的发酵液中分离得到。该方法通常包括有发酵、过滤、脱色浓缩、树脂吸附、洗脱、解吸、浓缩、喷雾干燥工序，即将所得的小诺霉素发酵液经过滤得到滤液，滤液再经脱色浓缩，所得小诺霉素浓缩液用大孔树脂吸附，用三种不同比例的乙醇-氨水进行洗脱、解析，解析液经浓缩、喷雾干燥得庆大霉素C1a。
这种方法存在许多不足之处，例如，生产工艺周期长(480小时/批)；生产工艺复杂，树脂吸附后需用混合溶剂经过三次洗脱、解析才能得到庆大霉素C1a；混合洗脱剂和解析剂中的乙醇采用蒸馏塔回收，设备复杂，需耗费大量蒸汽；所用大孔树脂吸附量小；产品含量低(一般为85％-90％)；原材料消耗大，生产成本高。
本发明的目的在于提供一种制备庆大霉素C1a的新方法，该方法生产效率高、成本低、产品质量好。
本发明的目的是这样实现的本发明的制备方法包括以下步骤a、将庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩；b、将庆大霉素浓缩液加水稀释，调PH值到6.0-7.5，经弱酸性阳离子交换树脂吸附后，水洗；c、将吸附后的饱和树脂用0.2-0.9M铵盐溶液洗脱，铵盐溶液PH值为7.0-9.5，洗脱液纳滤回收；d、用1.5-3.5M氨水对洗脱后的饱和树脂进行解析；e、对解析液进行浓缩、脱色、喷雾干燥。
其具体方法为将庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩制备成庆大霉素浓缩液，其过滤、脱色、浓缩的具体方法与现有技术中制备庆大霉素时的过滤、脱色、浓缩方法相同；庆大霉素浓缩液用水稀释，以既可保证上样速度不至于过慢，又避免了因浓度过高在上样过程中有结晶析出，造成树脂吸附不均。稀释后的庆大霉素液，调pH值到6.0-7.5；庆大霉素稀释液经弱酸性阳离子树脂吸附后，用水洗，除去部分杂质。弱酸性阳离子树脂可选用HD-2弱酸性阳离子交换树脂(上海华东理工大学华震科技贸易有限公司)，也可选用D151、D152、110等弱酸性阳离子交换树脂(南开大学化工厂)。但最好选用HD-2弱酸性阳离子交换树脂。
树脂吸附的流速可依据庆大霉素稀释液的浓度大小来控制，当庆大霉素稀释液浓度高时，选用低流速，反之，选用高流速。这样既可使树脂充分吸附庆大霉素单位，又可提高庆大霉素C1a的品质。当庆大霉素稀释液的浓度在3-5.5万单位/毫升时，树脂吸附的流速可控制在1/80/分-1/150/分。
将吸附后的饱和树脂用0.2-0.9M铵盐溶液洗脱。铵盐溶液PH值为7.0-9.5，当铵盐溶液PH值过低时，可用氨水调整，当铵盐溶液PH值过高时，可用稀盐酸调整。铵盐浓度优选范围为0.4M-0.7M。铵盐溶液可选用氯化铵溶液(为市售产品)，也可选用硫酸铵(为市售产品)溶液。但最好选用氯化铵。洗脱液采用纳滤处理，纳滤处理得到的浓缩液可用于提取庆大霉素，纳滤处理得到的透过液可直接套用下批洗脱工序。
对洗脱后的饱和树脂用1.5-3.5M氨水进行解析；氨水优选浓度为2.0-3.0M。解析液经过浓缩、脱色、喷雾干燥，制成半成品，再经检验、包装即为庆大霉素C1a成品。该步骤中的脱色、浓缩、喷雾干燥方法与现有技术中制备庆大霉素时的方法相同，如解析液可用薄膜浓缩至25万单位/毫升以上，所得浓缩液用活性炭脱色(按0.5公斤/百亿单位加入活性炭)，脱色液喷雾干燥，得庆大霉素C1a。
该方法是按照庆大霉素各组分与树脂的吸附力不同，先用铵盐洗脱剂将部分杂质及C1、C2a、C2和约50％的C1a组分洗脱下来，树脂上剩余的C1a组分，用与C1a竟合力较强的氨水将庆大霉素C1a组分解析下来。
本发明方法的重要创新之处在于采用庆大霉素发酵液为原料，并将脱色后的庆大霉素浓缩液在进行树脂吸附、洗脱和解析时，所采用的树脂为弱酸性阳离子交换树脂，提高了树脂吸附选择性；本发明方法中采用单一铵盐进行洗脱，单一氨水进行解析使洗脱解析经过一道工序即可完成，大大缩短了提取时间，并使洗脱剂、解析剂的回收更简单、更容易，同时节省了大量回收用蒸汽。同时采用纳滤回收洗脱液，又可大大降低原材料成本。
本发明方法可有效提高庆大霉素C1a的品质，其产品含量可达90％以上。其工作效率比现有技术提高了4倍，降低了原材料及能源的消耗；其方法中的洗脱液经过纳滤处理后可循环套用，又大大降低了生产制造成本。
实施例1庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩(即过滤后制得滤液，滤液用732强酸性阳离子交换树脂(南开大学化工厂)吸附，用水洗2-3倍体积，然后用稀盐酸洗10-15倍体积，最后用纯水洗至中性，洗掉一些蛋白类杂质。按照庆大霉素类似物与庆大霉素竟和力的不同，先用稀氨水解析掉庆大霉素类似物，再用氨水将庆大霉素全部解析下来，解析液经过711强碱性阴离子交换树脂(南开大学化工厂)脱色，脱色液经薄膜浓缩得，该浓缩液中庆大霉素的总单位为26-30万单位/毫升)。用纯水将浓缩液稀释成3-5.5万单位/毫升，调pH6.0-7.5，稀释液以1/80/分-1/150/分的吸附流速通过HD-2弱酸性阳离子交换树脂柱，用纯水洗2-3倍体积后，用0.5M的氯化铵进行洗脱(先用氨水调氯化铵溶液pH值为7.5)，洗脱流速为1/80/分-1/150/分，洗40-50倍树脂体积，用硅胶TLC检测至树脂柱上只吸附有庆大霉素C1a，再用1.5M的氨水解析庆大霉素C1a，所得解析液用薄膜浓缩至27万单位/毫升，向浓缩液中按0.5公斤/百亿单位加入活性炭脱色，压滤，得到脱色液于75℃-80℃喷雾干燥，得庆大霉素C1a(含量为96.4％)。将氯化铵洗脱液进行纳滤，透过液氯化铵与下批洗脱剂合并使用，浓缩液转入庆大霉素提取工序用于提取庆大霉素。
实施例2庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩(具体方法同实施例1)。制备成的庆大霉素浓缩液的总单位为30万单位/毫升，用纯水将浓缩液稀释成5.5万单位/毫升，调pH6.0-7.5，稀释液以1/150/分的吸附流速通过D152弱酸性阳离子交换树脂柱，用纯化水洗3倍体积后，用0.70M的硫酸铵洗脱(先用氨水调硫酸铵溶液pH值为9.5)，洗脱流速为1/150/分，洗40-50倍树脂体积，用硅胶TLC检测至树脂柱上只吸附有庆大霉素C1a，再用2M的氨水解析庆大霉素C1a，所得解析液用薄膜浓缩至26万单位/毫升，向浓缩液中按0.5公斤/百亿单位加入活性炭脱色，压滤，得到脱色液于75℃-80℃喷雾干燥，得庆大霉素C1a(含量95％)。将硫酸铵洗脱液进行纳滤，透过液硫酸铵与下批洗脱剂合并使用，浓缩液转入庆大霉素提取工序用于提取庆大霉素。
实施例3庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩(具体方法同实施例1)。制备成的庆大霉素浓缩液的总单位为30万/毫升单位，用纯化水将浓缩液稀释成4.5万单位/毫升，用氨水调pH6.0-7.5，稀释液以1/100/分的吸附流速通过110弱酸性阳离子交换树脂柱，用纯水洗2.5倍体积后，换0.6M的硫酸铵洗脱(先用氨水调硫酸铵溶液pH值为8.5)，洗脱流速为1/100/分，洗40-50倍树脂体积，用硅胶TLC检测至树脂柱上只吸附有庆大霉素C1a，再用3M的氨水解析庆大霉素C1a，所得解析液用薄膜浓缩至28万单位/毫升以上，向浓缩液中按0.5公斤/百亿单位加入活性炭脱色，压滤，得到脱色液于75℃喷雾干燥，得庆大霉素C1a(含量92％)。将硫酸铵洗脱液进行纳滤，透过液硫酸铵与下批洗脱剂合并使用，浓缩液转入庆大霉素提取工序用于提取庆大霉素。
权利要求
1.一种庆大霉素C1a的制备方法，其特征在于它包括以下步骤a、将庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩；b、将庆大霉素浓缩液加水稀释，调PH值到6.0-7.5，经弱酸性阳离子交换，树脂吸附后，水洗；c、将吸附后的饱和树脂用0.2-0.9M铵盐溶液洗脱，铵盐溶液PH值为7.0-9.5，洗脱液纳滤回收；d、用1.5-3.5M氨水对洗脱后的饱和树脂进行解析；e、对解析液进行脱色、浓缩、喷雾干燥。
2.根据权利要求1所述的庆大霉素C1a的制备方法，其特征在于所说的弱酸性阳离子交换树脂为HD-2弱酸性阳离子交换树脂。
3.根据权利要求1所述的庆大霉素C1a的制备方法，其特征在于所说的铵盐为氯化铵。
4.根据权利要求3所述的庆大霉素C1a的制备方法，其特征在于所说的铵盐浓度为0.4M-0.7M。
5.根据权利要求1所述的庆大霉素C1a的制备方法，其特征在于所说的氨水浓度为2.0-3.0M。
全文摘要
本发明公开一种庆大霉素C1a的制备方法，它包括以下步骤a、将庆大霉素发酵液过滤、脱色、浓缩；b、将庆大霉素浓缩液加水稀释，调pH值到6.0－7.5，经弱酸性阳离子交换树脂吸附后，水洗；c、将吸附后的饱和树脂用0.2－0.9M铵盐溶液洗脱，洗脱液纳滤回收；d、用1.5－3.5M氨水对洗脱后的饱和树脂进行解析；e、对解析液进行浓缩、脱色、喷雾干燥。本发明可有效提高庆大霉素C1a的品质，降低了原材料及能源的消耗。
文档编号C07H1/00GK1511839SQ0215902
公开日2004年7月14日 申请日期2002年12月27日 优先权日2002年12月27日
发明者周佩艳, 孙海远, 段修礼, 成青山, 宋义林, 鲁敬肖 申请人:华北制药集团有限责任公司