CD44v6特异性的抗体的制作方法

专利名称：：CD44v6特异性的抗体的制作方法
技术领域：
：本发明属于肿瘤学领域。本发明是有关具特示序列的抗体，其与为CD44基因变体外显子v6所编码的表位具特异性，以及有关该抗体的衍生物。本发明也提出编码该抗体蛋白质的核酸分子。本发明进一步是有关制备该抗体蛋白质的方法。本发明也提出含有该抗体蛋白质的药物组合物。本发明再者是有关制成药物以治疗癌症的用法。
背景技术：
：近年已示出，为引起所谓非转移性大鼠胰腺癌细胞株以及非转移性大鼠纤维肉瘤细胞株自主转移行为，表面糖蛋白CD44变体的表达是必要且足够的。(Gunthertetal.，1991)。而最小的CD44同型，标准型CD44s(或CD44std)，广泛表达在包括上皮细胞的不同组织中，某些CD44剪接变体(CD44v，CD44var)仅在某一亚群上皮细胞上表达。CD44变体由另外的剪接而产生，其方式使得10个外显子的序列(v1-v10)在CD44s中完全切除，但可出现在不同组合下较大的变体中(Screationetal.，1992；Tolgetal.，1993；Hofmannetal.，1991)。氨基酸序列有异的变体，在蛋白质细胞外部分的某些位置上嵌入。此变体在各种人类肿瘤细胞以及人类肿瘤组织中可测及。如此，CD44变体的表达近来已在结肠直肠致癌原理的过程中被研究(Heideretal.，1993a)。CD44变体的表达在正常人类结肠上皮中不存在，而在腺窝增殖细胞中仅可测及弱的表达。在肿瘤进展的较晚阶段，如在腺癌，所有的恶性细胞均会表达出CD44变体。变体CD44高水平的组织表达也在来势汹汹的非-霍奇金氏淋巴瘤中出现(Koopmanetal.，1993)。外显子v6尤其在转移散布的过程中似乎扮演特殊角色。(Rudyetal.，1993)。在动物模型中，抗v6特异表位的抗体可预防转移细胞的固定及转移物的长成(Seiteretal.，1993)。在结肠癌中，v6表达和肿瘤进展相互有关(Wielengaetal.，1993)。在胃癌中，v6表达是一个重要的诊断靶标，可将肠型肿瘤与扩散型区分出来(Heideretal.，1993b)。在后二刊物中，v6表达是利用抗v6特异表位的抗体所决定。因CD44v6已示出是一种与肿瘤有关的抗原，在人类肿瘤及正常组织中有利地表达(Herderetal.，1995；Heideretal.，1996)，因此可应用于以抗体-为基础的诊断及治疗方法上(Heideretal.，1996；WO95/33771；WO97/21104)。当利用非人类抗体应用于人体时会有一个严重问题出现，即其会十分快速地生成人类抗-非-人类反应，可减低抗体在病人的效力，及破坏接续的给药。为克服此问题，在技术中已发展出“人源化”非-人类抗体的观念。在第一个途径中，已构筑非-人类/人类嵌合抗体，尝试来人源化非人类抗体，其中非-人类可变区连接至人类恒定区(BoulianneG.L.，HozumiN.andShulman，M.J.(1984)Productionoffunctionalchimericmouse/humanantibodyNature312643)。如此生成的嵌合抗体保有原先非-人类抗体的结合特异性及亲和力。然而，嵌合抗体，虽然显著优于小鼠抗体，仍可在人类中诱生出抗-嵌合的反应(LoBuglioA.F.，WheelerR.H.，TrangJ.，HaynesA.，RogersK.，HarveyE.B.，SunL.，GhrayebJ.andKhazaeliM.B.(1989)Mouse/humanchimericmonoclonalantibodyinmanKineticsandImmuneresponse.Proc.Natl.Acad.Sci.864220)。此途径由进一步减少非-人类序列的量而得到精练，即将来自非-人类可变区的互补性决定区(CDRs)嫁接至人类可变区，再将这些“改造的人类”可变区连接至人类恒定区(RiechmannL.，ClarkM.，WaldmannH.andWinterG.(1988)Reshapinghumanantibodiesfortherapy.Nature332323)。CDR-嫁接的或改造的人类抗体含极少或并无蛋白质序列可被鉴定于衍生自鼠抗体。虽然由CDR-嫁接而人源化的抗体仍可诱生某些免疫反应，如抗-同种异型(anti-allotype)或抗-独特型(anti-idiotypic)反应(即使使用天然的人类抗体也可观察到这些反应)，CDR-嫁接的抗体免疫原性显著低于小鼠抗体，因此对病人可有更为延长的治疗。然而，很快地发觉单独CDR-嫁接时不会生成有足够结合亲和力的抗体。CDR-嫁接抗体和其亲代非-人类抗体比较下，有相当不佳的结合特性，此乃因为除CDR′s内的氨基酸之外还有更多的氨基酸涉及于抗原结合之故。因此，结合亲和力不佳的CDR-嫁接抗体，在治疗上无法视为有用的。因此，尝试生成组合有CDR-嫁接抗体低免疫原性及非-人类亲代抗体良好结合特性的抗体。因此除了CDR-嫁接外，也发展出一种概念，即在人源化框架区中的一至数个氨基酸必须保持像啮齿类供者来源残基一般，以保有结合亲和力(Queenetal.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.8610029-10033)。因为高度潜在利用价值，此抗体可应用于诊断及治疗，因此需有具改进特性的抗体，其适用于人类癌症的治疗。本发明的基本问题是提供与已知CD44v6特异抗体相比有显著更佳特性的抗体。发明概述以上技术问题，可由权利要求书及说明书中鉴定的具体实施方案予以解决。由本发明权利要求书及说明书，可克服技术中上述的缺点。为了解决上述问题，本发明者设计及产生一种CD44v6特异的人源化抗体，称为BIWA8，其有CDR-嫁接及框架突变，且有低免疫原性组合以高亲和力。然而，本发明者可生成具有甚至更超级治疗利用价值的抗体，称为BIWA4。虽然和BIWA8比较下，此者有较差的结合亲和力，当其于活体内给药时可令人惊讶的显示较佳的生物分布及肿瘤吸收。本发明属于肿瘤学领域。本发明是有关具特示序列的抗体，其与由CD44基因变体外显子v6所编码的表位具特异性，以及有关于该抗体的衍生物。本发明也提供编码该抗体蛋白质的核酸分子。本发明进一步是有关制备该抗体蛋白质的方法。本发明也提供含有该抗体蛋白质的药物组合物。本发明进一步是有关制成药物治疗癌症的用法。附图简述(也见实施例1)图1在竞争性细胞ELISA中测试的相对结合亲和力的评估。IC50cMAb及hMAbs的浓度，此时mMAbBIWA1结合至经粘附的A431细胞减少50％。图中也示出相对于BIWA2的IC50值。图2HNX-OE异种移植-小鼠，在3或4天p.i.下，共注射的125I-及131I-标记的CD44v6-特异性MAbs(10微居里，50微克)的生物分布。三组小鼠，或接受(A)131I-U36(黑线)及125I-BIWA1(阴影)(n＝5)，(B)131I-BIWA4(黑线)及125I-BIWA2(阴影)(n＝6)或接受(C)131I-BIWA4(黑线)及125I-BIWA8(阴影)(n＝6)。在注射3(A)或4天(B，C)后，对小鼠采血，处死，解剖且评估肿瘤，血液及许多器官中的放射活性水平(％ID/克±s.e.m.)。(Blk血液，Tum肿瘤，Liv肝，Spl脾，Kid肾，Hrt心，Stm胃，Ilm回肠，Cln结肠，Blr膀胱，Str胸骨，Msc肌肉，Lng肺，Skn皮肤，Tng舌头)。图3HNX-OE异种移植-裸鼠中，186Re-标记的CD44v6-特异MAbs的治疗效力。小鼠接受300微居里186Re-U36(--，图A)，300微居里186Re-BIWA1(--，图A)，300微居里186Re-BIWA4(--，图B)，300微居里186Re-BIWA2(--，图B)，400微居里186Re-BIWA4(--，图C)，400微居里186Re-BIWA8(--，图C)，或盐水(--，图A，B，C)为对照组。于图A及B中对照组是相同的，肿瘤大小以治疗期间的平均肿瘤体积(±s.e.m.)相对于在治疗之初的平均肿瘤体积表示之。图4BIWA4静脉内输液至10个病人，在A部分研究中，在所给药的MAb剂量与所观察的AUC之间的相互关系。图5BIWA4静脉内输液至10个病人，在A部分研究中，在所给药的MAb剂量与所观察的最大血浆BIWA4浓度之间的相互关系。本发明优选实施方案在本发明具体实施方案中，必须注意如此中及所附权利要求书中所示，符号“a”，“an”及“the”包括复数除非内容直接另有所示。因此，如“一种抗体”包括此抗体的复数，而“细胞”是一种以上的细胞，及本领域技术人员已知的其等同物等等。除非另有所定义，此中所用的所有技术及科学术语都具有属于本发明的本领域技术人员一般可了解的相同定义。在实行或测试本发明中，虽然类似或相当于此中所述的任何方法及材料均可使用，目前描述较佳的方法，装置及材料。此中所述的所有刊物基于描述及揭示细胞株，载体及方法之目的已列为本案参考，而以上的细胞株，载体及方法是报告于刊物中，可配合本发明使用。此中无一者可作为许可的限制，即本发明并未授予权利可经由先前发明预期此揭示。所谓“抗体分子”或“抗体蛋白质”或“抗体”如此中所用视为等同。“单克隆抗体的互补性决定区”理解为是涉及抗原特异结合的那些氨基酸序列，如Kabat所述(KabatE.A.，WuT.T.，PerryH.M.，GottesmanK.S.andFoellerC.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest(5thEd.)NIHPublicationNo.91-3242.U.S.DepartmentofHealthandHumanServices，PublicHealthService，NationalInstitutesofHealth，Bethesda，MD.)和Chothia及Lesk所述(ChothiaandLesk(1987)J.Mol.Biol.196901-917)。如此中所用的，“框架修饰”指在各个互补性决定区四周可变区中，单一或多个氨基酸的交换，缺失或添加。框架修饰对于抗体蛋白质的免疫原性，可生产性或结合特异性有影响。本发明提供了含有重链可变区的抗体分子，特征为氨基酸序列如SEQIDNo.1中所定义，或其片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4及BIWA8含有重链可变区，特征为SEQIDNo.1的氨基酸序列。“片段”依据本发明是一种较短的抗体分子，即任何的多肽亚群，特征在于其由此以下公开的核酸分子短的核酸分子所编码，然而仍保有其抗体结合活性。依据本发明的抗体分子“功能性变体”是具有生物活性(或功能上或结构上)的抗体分子，该生物活性实质上类似于本发明的抗体分子，即，实质上类似的底物(substrate)特异性或底物的裂解。所谓“功能性变性”也包括“片段”，“等位基因变体”，“功能性变体”，“依简并核酸密码为基础的变体”或“化学衍生物”。此“功能性变体”如，可携有一或多种点突变，一或多种核酸互换，缺失或嵌入，或一或多种氨基酸互换，缺失或嵌入。该功能性变体仍保有其生物活性，如抗体结合活性，至少部分或甚至伴有该生物活性的改进。抗体分子的“功能性变体”依据本发明是具有生物活性(或功能上或结构上)的抗体分子，该生物活性实质上类似于依据本发明的抗体分子，即，实质上类似的靶标分子的结合活性。所谓“功能性变体”也包括“片段”，“等位基因变体”，“功能性变体”，“以简并核酸密码为基础的变体”或“化学衍生物”。“等位基因变体”是由于等位基因变异所致的变体，如在人类二个等位基因上的差异。该变体仍保有其生物活性，如抗体靶标的结合活性，至少部分或甚至伴有该生物活性的改进。“以遗传密码的简并性为基础的变体”是由于以下事实的变体，即某些氨基酸可为许多不同的核苷酸三联体所编码。该变体仍保有其生物活性，如抗体结合活性，至少部分或甚至伴有该生物活性的改进。“融合分子”依据本发明可为抗体分子并融合至报告分子，如放射性标记物，化学分子如毒素或萤光标记物，或本领域中已知的其他任何分子。如此中所用，“化学衍生物”依据本发明是依据本发明的抗体分子，经化学修饰或含有额外的化学部分，而该化学部分通常并不是该分子的一部分。此部分可改进分子的活性，如靶标的破坏(如杀死肿瘤细胞)或可改进其溶解度，吸收作用，生物半衰期等。若二分子有基本类似的结构或生物活性，则此分子与另一分子是“基本上类似的”。因此，若二分子具有类似活性，其可视为变体，如本发明中所用的术语，甚至若分子之一的结构并不见于另一分子，或若氨基酸残基的序列并不相同。对于本发明抗体的许多用途，希望可有最小可能的抗原-结合，即CD44v6-结合单位。因此在另一较佳具体实施方案中，依据本发明的抗体蛋白质是Fab片段(抗原结合片段＝Fab)。这些CD44v6-特异抗体蛋白质包括二链的可变区，其由相邻恒定区连接一起。这些可由蛋白酶水解形成，如利用胃蛋白酶，水解自传统的抗体，但类似的Fab片段也可利用遗传工程方法制备。在另一较佳具体实施方案中，依据本发明的抗体蛋白质是F(ab′)2片段，其可由胃蛋白酶行蛋白水解而制备。利用遗传工程方法，有可能可产生短化的抗体片段，其仅含有重链的可变区(VH)，及轻链的可变区(VL)。这些称之为Fv片段(可变区片段＝可变部分的片段)。在另一较佳具体实施方案中，依据本发明的CD44v6-特异抗体分子是此Fv片段。由于这些Fv-片段缺少由恒定链的半胱氨酸的二链共价键结，Fv片段常是稳定的。将重链及轻链的可变区以一个短肽片段，在10至30个氨基酸，较好15个氨基酸，连接是有益的。以此方式，可得到由VH及VL组成，由肽连接子连接的单一肽链。此类型的抗体蛋白质已知单链-Fv(scFv)。由先前技术中已知的此类型scFv-抗体蛋白质实例，述于Hustonetal.(1988，PNAS165879-5883)。因此，在另一较佳具体实施方案中，依据本发明的CD44v6-特异抗体蛋白质是单链-Fv蛋白质(scFv)。近年来，将scFv制备成多聚体衍生物已发展出各种策略。此特别是可生成重组抗体，具有改进的药物动力学及生物分布特性，以及有增加的结合亲合性。为了达到scFv的多聚化，将scFv制备成有多聚化功能域的融合蛋白质。多聚化功能域可以是如IgG的CH3区域，或螺旋状旋管结构(螺旋结构)，如亮氨酸-拉链功能域。然而，也有一种策略是将scFv的VH/VL区间的交互作用用于多聚化作用中(如二-，三-及五元抗体(pentabodies))。因此，在另一较佳具体实施方案中，依据本发明的抗体蛋白质是CD44v6-特异二元体抗体(diabody)片段。而二元体，本领域技术人员表示是二价的同二聚scFv衍生物(Huetal.，1996，PNAS165879-5883)。将scFv分子中的连接子缩短至5-10个氨基酸，可导致同二聚体的形成，其中会发生链间的VH/VL-重叠。二元体另外可通过二硫键桥的纳入而稳定。现有技术中的二元体-抗体蛋白质实例可见于Perisicetal.(1994，Structure21217-1226)。而小体(minibody)，熟悉此项技术者表示是二价，同二聚的scFv衍生物。其由融合蛋白质组成，该融合蛋白含有免疫球蛋白，较好是IgG，最好是IgG1的CH3区域，作为二聚化区域，其经由铰链区(如也来自IgG1)及连接子区而连接至scFv。在铰链区中的二硫键桥大多在较高等细胞中形成，而非在原核细胞。在另一较佳具体实施方案中，依据本发明的抗体蛋白质是CD44v6-特异性小体抗体片段。先前技术中的小体-抗体蛋白质实例可见于Huetal.(1996，CancerRes.563055-61)。而三元体(triabody)，本领域技术人员表示是三价三聚的scFv衍生物(Korttetal.1997ProteinEngineering10423-433)。scFv衍生物，其中VH-VL在无连接子序列下直接融合，生成三聚体。本领域技术人员也熟知所谓的小抗体(miniantibody)，其具有二，三，或四价结构，且是衍生自scFv。多聚化作用由二，三，或四元螺旋的旋管结构进行(Packetal.，1993Biotechnology111271-1277；Lovejoyetal.1993Science2591288-1293；Packetal.，1995J.Mol.Biol.24628-34)。因此在较佳的具体实施方案中，依据本发明的抗体蛋白质是以上述抗体片段为基础的CD44v6-特异的多聚分子，且可为如三元体，四价小抗体，或五元体。在一个较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，其中重链的可变区由SEQIDNo.1的氨基酸序列所组成。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关含有轻链可变区的抗体分子，特征为氨基酸序列如SEQIDNo.2所定义，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4如此中所用含有轻链的可变区，如SEQIDNo.2氨基酸序列中所定义。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，其中轻链的可变区由SEQIDNo.2的氨基酸序列所组成。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关含有轻链可变区的抗体分子，特征为氨基酸序列如SEQIDNo.3所定义，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能变体，糖基化作用变体，融合分子或其化学衍生物。抗体BIWA8含有轻链的可变区，特征在于SEQIDNo.3的氨基酸序列。又另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，其中轻链的可变区由SEQIDNo.3的氨基酸序列所组成。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，含有重链的可变区，特征为如SEQIDNo.1中所定义的氨基酸序列，且含有轻链的可变区，特征为如SEQIDNo.2所定义的氨基酸序列，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4含有重链的可变区，特征在于SEQIDNo.1的氨基酸序列，及轻链的可变区如SEQIDNo.2氨基酸序列中所定义的。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据发明的抗体分子，其中重链的可变区由SEQIDNo.1的氨基酸序列所组成，且其中轻链的可变区由SEQIDNo.2的氨基酸序列所组成。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，含有重链的可变区，特征为氨基酸序列如SEQIDNo.1中所定义，且含有轻链的可变区，特征为如SEQIDNo.3中所定义的氨基酸序列，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA8含有重链的可变区，特征在于SEQIDNo.1的氨基酸序列，及轻链的可变区，如SEQIDNo.3氨基酸序列中所定义。在另一最佳具体实施方案中，本发明是有关依据发明的抗体分子，其中重链的可变区含有SEQIDNo.1的氨基酸序列，且其中轻链的可变区含有SEQIDNo.3的氨基酸序列。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，含有由SEQIDNo.4中所定义的核酸序列所编码的重链可变区，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4及BIWA8含有重链的可变区，特征为SEQIDNo.4的核酸序列。在另一较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，其中重链的可变区为SEQIDNo.4所定义的核酸序列所编码。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体含有轻链的可变区，为SEQIDNo.5中所定义的核酸序列所编码，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4用于此包括轻链的可变区，如SEQIDNo.5核酸序列所定义。在另一较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，其中轻链的可变区为SEQIDNo.5所定义的核酸序列所编码。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，含有由SEQIDNo.6所定义的核酸序列所编码的轻链可变区，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA8含有SEQIDNo.6核酸序列的轻链可变区。在另一较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体分子，其中轻链的可变区为SEQIDNo.6所定义的核酸序列所编码。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子(含有为SEQIDNo.4所定义核酸序列所编码的重链可变区，及如SEQIDNo.5所定义核酸序列所编码的轻链可变区)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4含有重链的可变区，特征在于SEQIDNo.4的核酸序列，及如SEQIDNo.5核酸序列中所定义的轻链可变区。又另一最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链的可变区为SEQIDNo.4所定义的核酸序列所编码，且其中轻链的可变区由SEQIDNo.5所定义的核酸序列所编码。在另一个较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子(含有由SEQIDNo.4中所定义的核酸序列所编码的重链可变区，且含有由SEQIDNo.6所定义核酸序列所编码的轻链可变区)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA8含有重链的可变区，特征在于SEQIDNo.4的核酸序列，及如SEQIDNo.6核酸序列中所定义的轻链可变区。在另一最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链的可变区为SEQIDNo.4所定义的核酸序列所编码，且其中轻链的可变区为SEQIDNo.6所定义的核酸序列所编码。为产生人源化的CD44v6-特异抗体蛋白质，所揭示的核酸序列可以本领域中已知的分子生物学方法表达(见下文及实例)。本发明抗体蛋白质的可变区，通常连接至至少部分的免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人类免疫球蛋白的恒定区。人类恒定区DNA序列可依据熟知步骤，自各样人类细胞中分离，但较好是永生化的B细胞(见Kabatetal.，下文，及WO87/02671)。因此，本发明的抗体蛋白质可含有所有的或仅部分的恒定区，只要其可与CD44v6抗原呈现特异的结合。恒定区类型及范围的选择依效应物功能为何而定，如补体固定或抗体依赖性细胞毒性，以及依抗体蛋白质欲求的药理特性而定。本发明的抗体蛋白质通常是一种四聚体，含有二个轻链/重链对，但也可以是二聚体，即含有一个轻链/重链对，如Fab或Fv片段。因此，在本发明进一步具体实施方案中是有关依据本发明的抗体蛋白质，特征在于其具有可变的轻链区及可变的重链区，各自连接至人类恒定区。特言之，轻链的可变区连接至人类κ恒定区，且重链的可变区连接至人类γ-1恒定区。用于嵌合轻及重链的其他人类恒定区也可为专家所应用。本领域中已知方法可达到鼠类抗体可变区的人源化作用。EP0239400揭示将鼠类可变区的CDRs嫁接至人类可变区的框架。WO90/07861揭示改造CDR-嫁接的可变区的方法，是引入额外的架构修饰。WO92/11018揭示制备人源化Ig的方法，是将供者CDRs与供者框架高度同源的受者框架组合。WO92/05274揭示始自鼠类抗体的框架突变的抗体的制备。和鼠类单克隆抗体人源化作用有关的其它现有技术参考有EP0368684；EP0438310；WO92/07075，或WO92/22653。在另一较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其特征在于轻链的可变区及重链区的可变区各自分别连接至人类恒定区。在另一较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中该轻链的人类恒定区是人类κ恒定区。在另一较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体蛋白质，其中该重链人类恒定区是人类IgG1恒定区。较佳者也有含有重链的抗体，特征在于SEQIDNo.7的氨基酸序列和/或轻链特征在于SEQIDNo.8的氨基酸序列，或特征在于SEQIDNo.9的氨基酸序列。因此，另一重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子，含有重链特征在于SEQIDNo.7所定义的氨基酸序列，且含有轻链特征在于SEQIDNo.8所定义的氨基酸序列，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4含有重链，特征在于SEQIDNo.7的氨基酸序列，及轻链的可变区，如SEQIDNo.8氨基酸序列所定义。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中的重链含有SEQIDNo.7氨基酸序列的氨基酸，且其中轻链含有SEQIDNo.8氨基酸序列的氨基酸。抗体BIWA4含有SEQIDNo.7氨基酸序列中所揭示的序列(重链)及SEQIDNo.8的氨基酸序列(轻链)。BIWA4是一种CDR-嫁接的抗体，无框架修饰。令人惊讶地，除了低结合亲和力外，此抗体含有极佳的治疗效力，更佳的生物分布及肿瘤吸收，超过框架-突变的抗体BIWA8(见实例)。此为上述抗体VFF-18(＝BIWA1)的人源化版本，在完全人类框架中具有鼠类单克隆抗体VFF-18的互补性决定区，以及一个人类恒定区。因此其为在人体中具极低免疫原性的抗体，具有有利的特征。然而，因其无使抗原的结合更臻完善的鼠类框架残基，有较其亲代抗体VFF-18显著更低的抗原结合亲和力，且因此并不被视为是好的治疗性药物候选者。令人意外地，已发现BIWA4除了其不佳的结合亲和力之外，具有极有益的体内生物分布及肿瘤吸收，使其更胜于具有较高结合亲和力的VFF-18的其他人源化版本。另一重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子(含有重链特征在于如SEQIDNo.7中所定义的氨基酸序列，且含有轻链，特征为SEQIDNo.9中所定义的氨基酸序列)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA8含有重链，特征在于SEQIDNo.7的氨基酸序列，及轻链的可变区，如SEQIDNo.9氨基酸序列所定义。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链含有SEQIDNo.7氨基酸序列的氨基酸，且其中轻链含有SEQIDNo.9氨基酸序列的氨基酸。抗体BIWA8含有SEQIDNo.7氨基酸序列中所揭示的序列(重链)，及SEQIDNo.9的氨基酸序列(轻链)。BIWA8是一种CDR-嫁接的抗体，有框架突变。此抗体有较BIWA4显著较高的结合亲和力(见实例)。较佳的也是这样的抗体，其含有由SEQIDNo.10核酸序列所编码的重链和/或由SEQIDNo.11核酸序列所编码的轻链，或特征在于SEQIDNo.12的核酸序列。该序列包括非翻译序列，及前导序列如克隆在载体pAD-CMV1/pAD-CMV19中。因此，另一个重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子，含有为SEQIDNo.10所定义核酸序列所编码的重链，且含有如SEQIDNo.11所定义核酸序列所编码的轻链，或该抗体分子的片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4含有如SEQIDNo.10核酸序列所编码的重链，及如SEQIDNo.11核酸序列所编码的轻链可变区。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链为SEQIDNo.10核酸序列所编码，且其中轻链为SEQIDNo.12核酸序列所编码。另一个重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子(含有如SEQIDNo.10所定义的核酸序列所编码的重链，且含有如SEQIDNo.12所定义核酸序列的轻链)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA8含有如SEQIDNo.10核酸序列所编码的重链，及SEQIDNo.12核酸序列所编码的轻链可变区。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链为SEQIDNo.10核酸序列所编码，且其中轻链由SEQIDNo.12核酸序列所编码。较佳的是这样的抗体，其含有SEQIDNo.13核酸序列所编码的重链和/或由SEQIDNo.14核酸序列的轻链，或特征在于SEQIDNo.15的核酸序列。该序列包括克隆在载体N5KG1val中的前导序列。因此，另一个重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子(含有为SEQIDNo.13所定义核酸序列所编码的重链，且含有如SEQIDNo.14所定义核酸序列的轻链)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4含有如SEQIDNo.13核酸序列所编码的重链，及SEQIDNo.14核酸序列所编码的轻链可变区。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链为SEQIDNo.13核酸序列所编码，且其中轻链为SEQIDNo.14核酸序列所编码。另一个重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子(含有如SEQIDNo.13所定义的核酸序列所编码的重链，且含有轻链特征在于SEQIDNo.15所定义的核酸序列)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA8含有如SEQIDNo.13核酸序列所编码的重链，及为SEQIDNo.15核酸序列所编码的轻链可变区。在一个最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重链为SEQIDNo.13核酸序列所编码，且其中轻链为SEQIDNo.15核酸序列所编码。最佳的是这样的抗体蛋白质，含有为SEQIDNo.16核酸序列所编码的重及轻链。该序列包括有前导序列，克隆在载体N5KG1val内。因此，另一高度重要的具体实施方案是依据本发明的抗体分子(含有重及轻链为SEQIDNo.16所定义的核酸序列所编码)，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并性核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物。抗体BIWA4含有为SEQIDNo.16核酸序列所编码的重及轻链。在最佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体分子，其中重及轻链为SEQIDNo.16核酸序列所编码。此序列编码整个抗体BIWA4。本发明的抗体蛋白质治疗剂靶向CD44v6抗原以提供高度特异的工具。因此，在另一方面，本发明是有关依据本发明的抗体蛋白质，其中该抗体蛋白质可连接至治疗剂。在本领域已知的许多治疗剂中，治疗剂选自下列包括放射性同位素，毒素，类毒素，致炎剂，酶，反义分子，肽类，细胞因子，且化学治疗剂为较佳者。在放射性同位素中，以γ，β及α-射线放射性同位素可充作治疗剂。β-射线放射性同位素为较佳的治疗性放射线同位素。186铼，188铼，131碘及90钇已证明是实现局部照射及破坏恶性肿瘤细胞方面特别有用的β-射线同位素。因此，选自包括186铼，188铼，131碘及90钇的放射性同位素为连接至本发明抗体蛋白质的尤其优选的治疗剂。例如，本发明抗体的放射性碘化作用，有一方法揭示于WO93/05804可供应用。因此，本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该治疗剂是选自包括放射性同位素，毒素，类毒素，前药及化学治疗剂的治疗剂。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该治疗剂经由选自下列的连接子可连接至抗体蛋白质，包括MAG-3(US5082930A，EP0247866B1(p255-56列-p31-23列))；MAG-2GABA(US5681927A，EP0284071B1(p69-29))；及N2S2((＝酚硫酸酯)US4897255A，US5242679A，EP0188256B1(p2，38列-p3，18列))，以上均列为本案参考。所述连接子为下式本发明的较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中的治疗剂经由MAG-2GABA连接至抗体蛋白质。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该放射性同位素是β-射线放射性同位素。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该放射性同位素选自下列包括186铼，188铼，131碘及90钇。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该放射性同位素是186铼。本发明进一步方面是有关依据本发明的抗体蛋白质，特征在于其是经标记的。此标记的CD44v6-特异的抗体使CD44v6抗原可于试管内和/或体内被定位和/或检测。标记物的定义为一种标记，可直接或间接地被检测。间接标记可定义为无法本身被检测的标记，但需要与间接标记特异的可直接检测的标记。实现本发明的较佳标记物是可检测的标记。从各样可检测的标记中，可检测标记选自下列包括酶，染料，放射性同位素，洋地黄毒苷(digoxygenin)，且以生物素为最佳。因此，本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，特征在于其是经标记的。较佳的是依据本发明的抗体蛋白质，其中该标记物是可检测的标记。同时较佳的是依据本发明的抗体蛋白质，其中可检测的标记是选自下列包括酶，染料，放射性同位素，洋地黄毒苷，或生物素。本发明另一方面是有关依据本发明的抗体蛋白质，特征在于其是连接至可显影剂。各样的可显影剂，尤其是放射性同位素，是本领域可获得的。为实施本发明，以γ-射线同位素为较佳。最佳者是125碘。因此，本发明较佳方面是本发明的抗体蛋白质，其是连接至可显像剂。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中可显像剂是一种放射性同位素。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该放射性同位素是γ-射线放射性同位素。本发明较佳方面是依据本发明的抗体蛋白质，其中该放射性同位素是125I。因此，本发明的较佳方面是连接至如上述放射性同位素的抗体蛋白质，其中的抗体蛋白质具有由约0.5至约15毫居里/毫克的比活性，或具有由约0.5至约14毫居里/毫克，较好约1至约10毫居里/毫克，较好约1至约5毫居里/毫克，且最好2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克的比活性。本发明另一较佳具体实施方案是药物组合物，含有依据本发明的抗体，及药学上可接受的载体或赋形剂。药学上可接受的载体可含有生理上可接受的化合物，其作用如可稳定或增加AMPA谷氨酸受体激动剂，拮剂或调控剂的吸收作用。此生理上可接受的化合物包括如碳水化合物，如萄萄糖，蔗糖或右旋糖，抗氧化剂如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白质或其他稳定剂或赋形剂(也见如Remington′sPharmaceuticalSciences(1990)，18thed.MackPubl.，Easton)。本领域技术人员可知道药学上可接受载体的选用，包括生理上可接受的化合物，可依据如组合物的给药路径而定。在动物或人体中，已证知利用上述的药物组合物是有益的，可经由静脉内或其他路径，如全身性，区域地或局部地施加至重点组织或器官，依欲处理的疾病或问题的型式及来源而定，如肿瘤。例如，当不同的器官或器官系统是需要治疗时，全身性作用模式是欲求的，如在全身性自身免疫疾病，或过敏，或外来器官或组织的移植，或肿瘤扩散或难以定位时。当仅预期有局部的肿瘤或免疫作用时，如区域性肿瘤时，可考虑局部的作用模式。含有本发明抗体蛋白质的药物组合物可以本领域技术人员已知的不同应用路径施用，值得注意的是静脉内注射或直接注入靶组织内。于全身性应用时，以静脉内，管腔内，肌肉内，动脉内，腹膜内，口服或鞘内路径为较佳。较区域性的应用可经皮下，皮内，心内，叶间(intralobally)，髓内，肺内，直接达到或接近欲处理组织(结缔-，骨-，肌肉-，神经-，上皮-组织)。依欲求的疗程及治疗效力而定，药物抗体组合物可给药一或数次，也可间歇地，例如在每天的基础上给药数天，数周或数月，且以不同的剂量。于制备含有抗体制剂的适合的药物组合物以供上述应用时，本领域技术人员可使用已知的可注射，生理上可接受的无菌溶液。于制备供肠外注射或输液用的即可用溶液时，水性等渗溶液，如盐水或相当的血浆蛋白质溶液可容易地取得。药物组合物可呈冷冻干燥型式或无水制剂，其可在使用前直接于无菌条件下以已知的可注射溶液重组之，如组配试剂盒那样。本发明抗体组合物的最终制剂可制成供注射，输液或灌注用，是将依据本发明的经纯化抗体混合以无菌生理上可接受的溶液，其中可添加以已知的载体物质和/或添加剂(如血清白蛋白，右旋糖，亚硫酸氢钠，EDTA)。抗体应用的剂量依疾病的本质而定。在某些病人中，含于药物组合物中的“裸露”抗体用量，可在0.1及100毫克/米2间，较好5及50毫克/米2，每次施用，较好10毫克/米2至约40毫克/米2，较好10毫克/米2至约30毫克/米2，也较好是20毫克/米2至约30毫克/米2，且最好约25毫克/米2体表面积。同时最佳者是抗体蛋白质剂量为约50毫克/米2体表面积。每次给药应用至病人的放射活性剂量要足够高才有效，但必须低于毒性限制剂量(doselimitingtoxicity)(DLT)。对于含有经放射标记抗体的药物组合物，如有186铼的组合物，必需要决定最大耐受剂量(MTD)，其不可超过治疗设定。放射标记抗体应用至癌症病人可经过低于MTD的剂量的重复(每月或每周)静脉内输注而进行(见Weltetal.(1994)J.Clin.Oncol.121193-1203)。以多次给药为较佳，通常以周为间隔；然而，经放射标记的物质应以较长间隙给药，即隔4-24周，较好隔12-20周。然而本领域技术人员可选择，将给药分成二次或二次以上施用，可彼此间隔很短时间应用，或在某些其他预定间隙范围内，如从1天至1周应用。再者，所应用的放射活性剂量可依下列的准则。一般而言，每次给药的放射活性剂量应在30及75毫居里/米2体表面积(BSA)之间。因此，在本发明药物组合物中放射标记抗体的量，优选以186铼，188铼，99m锝，131碘及90钇，最好是以186铼标记的抗体的量，应用至病人是10，20，30，40，50或60毫居里/米2，较好是50毫居里/米2。在较佳具体实施方案中，本发明是有关药物组合物，其中该放射标记抗体的剂量依本发明是MTD，较好是50毫居里/米2。此在实例3至6的临床研究中有详尽示范。同时较佳的也有依据本发明的药物组合物，其中含有抗体蛋白质并连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素，其中抗体蛋白质的比活性为由约0.5至约15毫居里/毫克，或由约0.5至约14毫居里/毫克，较好约1至约10毫居里/毫克，较好约1至约5毫居里/毫克，且最好2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克。较佳的也包括依据本发明的药物组合物，含有抗体蛋白质连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素，其中该抗体或抗体衍生物是在水溶液中pH由约7至约8，且浓度由约0.5至约2.0毫克/毫升。较佳的具体实施方案是依据本发明的药物组合物，进一步含有一种或一种以上的辐射防护剂，选自包括抗坏血酸，龙胆酸，还原酸，赤藓酸(erythrorbicacid)，对-氨基苯甲酸，4-羟基苯甲酸，尼克酸，尼克酰胺，2，5-二羟基-1，4-苯二磺酸，普维酮(povidone)，肌醇，和/或柠檬酸盐。较佳的是依据本发明的药物组合物，其中的辐射防护剂是抗坏血酸。另一较佳具体实施方案是依据本发明的药物组合物，其中该抗体蛋白质含有抗体分子，选自抗体分子BIWA4或BIWA8，如上文所述，并连接至186铼(经由MAG-2GABA)，并进一步含有辐射防护剂抗坏血酸。本发明另一较佳具体实施方案是依据本发明抗体蛋白质的用法，可制成药物以治疗癌症。在较佳具体实施方案中，本发明是有关依据本发明的抗体蛋白质的用法，可连接至如上述的治疗剂，以治疗癌症。癌症包括与恶性生长有关的任何疾病，如固体肿瘤，肉瘤及白血病。此疾病必要的先决条件是CD44v6的表达。依据本发明的癌症包括下列，但不限于此1)上皮癌的治疗包括乳房，肺，结肠直肠，头及颈部，胰脏，卵巢，膀胱，胃，皮肤，内膜，卵巢，睾丸，食道，前列腺以及肾源的癌症；2)骨骼及软组织肉瘤骨肉瘤，软骨肉瘤，纤维肉瘤，恶性纤维组织细胞瘤(MFH)，平滑肌肉瘤；3)造血系恶变霍金氏及非霍金氏淋巴瘤，白血病；4)神经外胚层肿瘤外周神经肿瘤，星状细胞瘤，黑色素瘤；5)间皮瘤。与固体肿瘤有关的癌性疾病状态的实例包括下列，但不限于此结肠直肠癌，非小细胞肺癌，乳腺癌，头及颈部癌，卵巢癌，肺癌，膀胱癌，胰脏癌及脑的转移性癌。因此，较佳具体实施方案是依据本发明抗体蛋白质的用法，其中该癌症选自下列包括结肠直肠癌，非小细胞肺癌，乳腺癌，头及颈部癌，卵巢癌，肺癌，膀胱癌，胰脏癌及脑的转移性癌。较好也包括依据本发明的抗体蛋白质，如上文所定义，可制成药物以治疗癌症，其中抗体蛋白质的量每次应用为0.1及100毫克/米2之间，较好是5及50毫克/米2，较好是10毫克/米2至约40毫克/米2，较好10毫克/米2至约30毫克/米2，也较好是20毫克/米2至约30毫克/米2，且最好约25毫克/米2体表面积。同时最好是约50毫克/米2体表面积的抗体蛋白质剂量。较佳的也有抗体蛋白质连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素的用法，可制成药物以治疗癌症，其中每次给药的放射活性剂量为30及75毫居里/米2体表面积(BSA)之间。较佳的是抗体蛋白质连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素的用法，可制成药物以治疗癌症，其中依据本发明的抗体蛋白质放射标记以186铼，188铼，99m锝，131碘或90钇，且最好是标记以186铼。又另一较佳具体实施方案中，本发明是有关抗体蛋白质连接至依据本发明的放射性同位素的用法，以制成药物治疗癌症，其中连接至抗体的同位素的剂量是10，20，30，40，50或60毫居里/米2，最好是50毫居里/米2。此在实例3至6的临床研究中有充分示范。较佳的也有抗体蛋白质连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素的用法，可制成药物以治疗癌症，其中该抗体蛋白质的比活性为由约0.5至约15毫居里/毫克，或由约0.5至约14毫居里/毫克，较好约1至约10毫居里/毫克，较好约1至约5毫居里/毫克，且最好2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克。较佳的也有抗体蛋白质连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素的用法，可制成药物以治疗癌症，其中该抗体或抗体衍生物是在pH由约7至约8的水溶液中，且浓度由约0.5至约2.0毫克/毫升。本发明进一步是有关癌症治疗的方法，其中依据本发明的抗体蛋白质给药一至数次至有所需的受试者内，该抗体蛋白质可选择性地结合至CD44v6，经由连接至抗体蛋白质的治疗剂破坏肿瘤细胞，并监测治疗是否成功。该抗体蛋白质可以呈裸露的/未经修饰抗体蛋白质，经修饰的抗体蛋白质，如融合蛋白质，或抗体蛋白质连接至治疗剂，其中包括将肿瘤与有效剂量的该抗体接触。如上述的治疗癌症的方法，于体内或体外均是有效的。癌症为上述的任何癌症。抗体应用的剂量依疾病的本质而定。在癌症病人，“裸露的”抗体的施用量可在0.1及100毫克/米2间，较好是5至50毫克/米2每次应用，较好10毫克/米2至约40毫克/米2，较好10毫克/米2至约30毫克/米2，也较好20毫克/米2至约30毫克/米2，且最好约25毫克/米2体表面积。同时最佳的是抗体蛋白质剂量为约50毫克/米2体表面积。每次给药应用至病人的放射活性剂量要足够高才有效，但必须低于毒性限制剂量(DLT)。对于经放射标记的抗体，如以186铼标记的抗体，最大耐受剂量(MTD)必需予以决定，其不可超过治疗设定。经放射标记的抗体至癌症病人的应用可经由重复的(每月或每周)静脉内输注而进行，其剂量是低于MTD(如见Weltetal.(1994)J.Clin.Oncol.121193-1203)。以多次给药为较佳，通常以周为间隔；然而经放射标记的物质应以较长间隔来给药，即隔4-24周，较好隔12-20周。然而，本领域技术人员应选用分二次或二次以上给药，各自间隔极短时间应用，或在某些其他预定间隔范围，如由1天至1周应用。再者，应用的放射活性剂量应依下列的准则而定。一般而言，每次给药的放射活性应在30及75毫居里/米2体表面积(BSA)之间。因此，经放射标记的抗体，较好是标以186铼，188铼，99m锝，131碘或90钇，最好是标以186铼的抗体的剂量，应用至病人是10，20，30，40，50或60毫居里/米2，较好50毫居里/米2。在较佳具体实施方案中，本发明是有关治疗方法，其中如上述的放射标记的抗体给药至受癌症之苦的病人，其中该放射标记的抗体的剂量是MTD，较好是50毫居里/米2，由此该癌症可预防或治疗。此在实例3至6的临床研究中有充分示范。较佳的也有依据本发明的癌症治疗方法(见上)，其中抗体蛋白质连接至依据本发明如上文定义的放射性同位素，其具有比活性由约0.5至约15毫居里/毫克，或由约0.5至约14毫居里/毫克，较好约1至约10毫居里/毫克，较好约1至约5毫居里/毫克，且最好2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克。较佳的也有依据本发明癌症治疗的方法(如上)，其中抗体蛋白质连接至依据本发明的放射性同位素，其是在pH值由约7至约8的水溶液中，且浓度由约0.5至约2.0毫克/毫升。较好，本发明是有关依据本发明的方法，其中肿瘤是选自下列包括结肠直肠癌，非小细胞肺癌，乳癌，头及颈部癌，卵巢癌，肺癌，膀胱癌，胰脏癌及脑的转移癌。本发明进一步方面是核酸，其特征在于是可编码依据本发明的抗体蛋白质。该核酸可为RNA，或较好是DNA。该DNA分子可化学合成。首先，可以本领域已知的方法合成适合的寡核苷酸(如Gait，M.J.，1984，OligonucleotideSynthesis.APracticalApproach.IRLPress，Oxford，UK)，其可用来产生合成的基因。产生合成的基因的方法是本领域已知的(如Stemmeretal.1995，Single-stepassemblyofageneandentireplasmidfromlargenumbersofoligodeoxyribonucleotides，Gene164(1)49-53；Yeetal.1992，GenesynthesisandexpressioninE.coliforpump，ahumanmatrixmetalloproteinase，BiochemBiophysResCommun186(1)143-9；HaydenetMandecki1988，Genesynthesisbyserialchoningofoligonucleotides，DNA7(8)571-7)。这些方法可用来合成本案中所揭示的任何DNA分子，例如编码BIWA4的DNA。也较好，依据本发明的核酸特征在于其含有5′或3′或5′和3′非翻译区。依据本发明的核酸可含有其他非翻译区上游和/或下游。非翻译区可含有调控元件，如转录启始单位(启动子)或加强子。该启动子可为组成型的，可诱导型的，或发育控制型的启动子。较好，不要排除其他已知启动子，有人类巨细胞病毒(CMV)及劳氏肉瘤病毒(RSV)的组成型启动子，以及猴病毒40(SV40)及单纯疱疹启动子。依据本发明的可诱导启动子包括对抗生素具抗性的启动子，热-休克启动子，激素-可诱导型的“乳腺肿瘤病毒启动子”及金属硫蛋白启动子。也较好，依据本发明的核酸特征在于其可指导合成依据本发明的抗体蛋白质片段。此指依据本发明多肽的部分。较好，依据本发明的核酸是如SEQIDNo.4，5，6，10，11，12，13，14，15和/或16所揭示的核酸。最好，该核酸是SEQIDNo.16的核酸。本发明另一个重要方面是一种重组DNA载体，其特征在于其含有依据本发明的核酸。较好，该载体含有核酸特征在于SEQIDNo.4，5，6，10，11，12，13，14，15和/或16所揭示的核酸。最好，该载体含有特征在于SEQIDNo.16的核酸。病毒载体的实例有，例如痘苗病毒，Semliki-Forest-病毒及腺病毒。可用于COS-细胞的载体具有SV40的复制起点。可使质粒获得高拷贝数，可用于昆虫细胞的载体，如大肠杆菌转移载体，且含有例如可指导合成多角体的DNA作为启动子。本发明另一较佳方面是依据本发明的重组DNA载体，特征在于其是载体pAD-CMV或其功能性衍生物。此衍生物如pAD-CMV1，pAD-CMV19或pAD-CMV25。本发明另一较佳方面是依据本发明的重组DNA载体，其特征在于其是SEQIDNo.17，或其功能性衍生物。本发明另一较佳方面是依据本发明的重组DNA载体，其特征在于其是SEQIDNo.18或其功能性衍生物。同时也较好，该载体含有一或多种核酸分子，特征如SEQIDNo.4，5，6，10，11，12，13，14，15和/或16。较好也有如US5648267A或USUS5733779A所揭示的载体，含有依据本发明的核苷酸序列。较好，该载体含有一或数种核酸分子，特征如SEQIDNo.4，5，6，10，11，12，13，14，15和/或16。本发明另一较佳方面是依据本发明的重组DNA载体，特征在于其是载体N5KG1Val或其衍生物。另一重要方面是宿主，特征在于其含有依据本发明的载体。另一重要方面是依据本发明的宿主，特征在于其是真核宿主细胞。依据本发明的真核宿主细胞包括真菌，如巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)，裂殖酵母(Schizosaccharomyces)，木霉(Trichoderma)，昆虫细胞(如来自草地粘虫(Spodopterafrugiperda)Sf-9，有杆状病毒表达系统)，植物细胞，如来自烟草(Nicotianatabacum)，哺乳动物细胞，如COS细胞，BHK，CHO或骨髓瘤细胞。在免疫系统细胞的子代中，其中抗体蛋白质也在吾等体内形成，依据本发明的抗体蛋白质是特别充分折叠及糖基化的。哺乳动物宿主细胞，较好是CHO或COS细胞为较佳。如CHODG44(UrlaubandChasin，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.77(7)4216-20(1980))，或CHO-K1(ATCCCCL-61)细胞。因此，另一较佳方面是依据本发明的宿主，特征在于其是BHK，HCO或COS细胞，最好CHODG44或CHO-K1(ATCCCCL-61)细胞。另一较佳方面是依据本发明的宿主，其特征在于其是噬菌体。另一较佳方面是依据本发明的宿主，其特征在于其是原核宿主细胞。原核宿主细胞的实例有大肠杆菌，枯草杆菌，链霉素或奇异变形菌(proteummirabilis)。本发明进一步是有关制备依据本发明抗体蛋白质的方法，其特征在于其含有以下步骤依据本发明的宿主在该抗体蛋白质可为该宿主细胞表达的条件下培养，且分离出该抗体蛋白质。依据本发明的抗体可如下制备。编码轻链及重链的核酸分子可以标准方法化学及酶法合成。首先，适合的寡核苷酸以本领域已知的方法合成(上文详述)。自寡核苷酸产生合成基因的方法是本领域已知的(详述上文中)。编码抗体重及轻链的这些核酸分子，可克隆至表达载体内(或二链均在一个载体分子内，或各链至分别的载体分子内)，其再引入宿主细胞。宿主细胞较好是哺乳动物缩主细胞(上文详述)，如COS，CHO或BHK细胞，较好是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，宿主细胞再培养于适合的培养基，所在的条件可产生抗体，且抗体再自培养基中依标准步骤分离。在宿主细胞和各自的表达载体中从重组DNA产生抗体的步骤是本领域熟知的(如见WO94/11523，WO97/9351，EP0481790)。本发明较好的有关依据本发明的方法，其特征在于该宿主是哺乳动物细胞，较好是CHO或COS细胞。本发明较好是有关依据本发明的方法，其特征在于该宿主细胞由二种质粒共转染，该质粒携有轻或重链的表达单位。以下实施例用以进一步说明本发明；但不欲构成本发明此中所揭示范围的限制。实施例实施例1放射免疫治疗材料及方法单克隆抗体。mMAbBIWA1＝VFF18(其为杂交瘤细胞株分泌，于1994年6月7日以保藏号DSMACC2174保藏在DSM-DeutscheSammlungfurMikroorganismenundZellkulturenGmbH，MascheroderWeg1b，D-38124Braunschweig，Deutschland；也见WO95/33771)是以含有人类CD44功能域v3-v10的谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白质免疫接种BALB/c小鼠而产生的(Heideretal.，1996)。可由BIWA1识别的表位，已定在CD44功能域Vb中氨基酸360-370(依Kugelmanetal.的编号(1992))。用于本研究的批次经过在蛋白质-GSepharose纯化及对PBS透析后可得。MAbU36(IgG1)在以HNSCC细胞株UM-SCC-22B免疫接种小鼠后衍生而来，并可识别CD44v6内与BIWA1所识别不同的表位。U36以在蛋白质A-Sepharose上行亲和层析而自浓缩的组织培养上清液中纯化，并进一步在Q-Sepharose上纯化。嵌合MAbs及人源化MAbs的产生。mRNA分离自BIWA1杂交瘤细胞株，利用QuickPrepmRNA纯化试剂盒(Pharmacia，Uppsala，Sweden)。cDNA来自可变重链(VH)及可变轻(VL)链，并由RT-PCR产生。上述片段克隆至TA克隆载体pCRII(Invitrogen，Groningen，TheNetherlands)并测序之。衍生自质粒pADCMV1的二个表达载体(Himmleretal.，1990)予以构成，其中分别携有人类γ-1的恒定区及人类κ轻链的恒定区。接下来，BIWA1的VH及VL片段克隆至相应的表达载体内，于恒定区之前。嵌合抗体命名为cMAbBIWA2。BIWA1重及轻链可变区的人源化版本(由CDR嫁接产生)克隆至上述表达载体的免疫球蛋白恒定区之前。为构筑人源化抗体，所用的人类可变区，于重链是衍生自资料库GenPept登录号为S31669的人类免疫球蛋白片段，而于轻链是衍自人类免疫球蛋白HUMIGKAX(重排的抗-骨髓磷脂(anti-myelin)κ链)，Genbank登录号为M29469。生成的MAbs分别命名为hMAbBIWA4及BIWA8。BIWA8在轻链框架2内含有二个小鼠类亲代抗体的氨基酸，而BIWA4在框架中不含有小鼠类残基。重组MAbs可在二氢叶酸还原酶缺失的中国仓鼠卵巢细胞中稳定地表达，是以重及轻链表达质粒通过电穿孔而进行的。细胞以500及100个细胞/孔洞的密度种植入96孔洞微量滴定板内，在选择性培养基中(α-MEM加有10％经透析的胎牛血清)。当集落变得可见时(在～14天后)，以ELISA测定培养基上清液中的IgG含量，并扩增产生IgG量最多的集落。在氨甲喋呤渐增浓度(20-500nM)存在下培养，以进行基因的扩增。在含有1％胎牛血清的标准培养基中进行嵌合的MAbs及人源化MAbs的实验室规模制备。IgG级分在蛋白质Asepharose上行亲和层析可自组织培养上清液中纯化。纯度以SDS-PAGE及高性能大小排阻层析法测试。抗体亲和力的评估。在BIAcore2000系统上用重组抗原进行动力学及亲和力常数的检测(BIAcoreAB，Uppsala，Sweden)。含有人类CD44v3-v10功能域的谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白质(GST/CD44v3-v10；20微克/毫升)以氨基偶合方法固化在CM5感受片上，依操作指示，利用10mM醋酸钠，pH5.0为偶合缓冲溶液。35微升在各浓度(8-67nM)下的MAb于HBS(10mMHEPES，pH7.4，150mMNaCl，3.4mNEDTA，0.05％BIAcore表面活性剂P20)注入涂布有抗原的表面，流速为5微升/分。在缓冲溶液流动中(HBS)评估MAb的解离作用5分钟。在二次分析之间，所述片的表面以15微升30mMHCl的单一脉冲再生。以BIAcore的BIA评估软体，2.1版进行数据分析及动力学常数的估算。并对所有抗体评估结合速率(ka)，解离速率(kd)，及解离常数(Kd)。经由竞争性细胞ELISA也评估相对结合亲和力。人类A431细胞，源自外阴的上皮样癌，且已知可表达高水平的CD44v6，种入96孔的组织培养板，每孔内有200微升含有10％胎牛血清的RPMI1640，密度为2.5-5×105细胞/毫升。该培养板于37℃，5％CO2的空气的潮湿温育箱中温育一夜。而在移去培养基后，细胞以PBS洗一次，以96％乙醇固定1分钟，再以PBS洗涤。cMAbBIWA2，hMAbBIWA4及hMAbBIWA8(预行稀释至10微克/毫升)以1∶2连续稀释液(8次稀释步骤)，以100微升/孔，稀释于PBS/0.5％BSA/0.05％吐温20(分析缓冲溶液)中，应用并在室温下温育30分钟。加入100微升预先稀释的mMAbBIWA1(20纳克/毫升)，该培养板再于回旋震荡槽中以室温温育2小时。对照组样品仅含预先稀释的样品，无BIWA1(0％对照组)或仅有BIWA1无任何竞争性抗体(100％对照组)。在以PBS/0.05％吐温20洗涤三次后(洗涤缓冲溶液)，加入100微升第二抗体(过氧化物酶-连接的山羊抗-小鼠Fc，以1∶15,000稀释于分析缓冲溶液中，DAKOCopenhagen，Denmark)以检测mMAbBIWA1，且该培养板在回旋振荡槽内于室温下温育1小时。在以洗涤缓冲溶液洗涤三次后，该培养板以100微升/孔四甲基联苯胺底物溶液显色(KierkegaadandPerryLaboratories，Gaithersbure，USA)。反应在15分钟后以50微升/孔的1M磷酸停止的。在ELISA培养板计读器中于450纳米下检测吸光度。(参考波长为610-690纳米)。抗体的放射性碘化作用。进行MAbs的碘化作用，基本上如Haismaetal.(1986)所述，利用125I(100毫居里/毫升)或131I(200毫居里/毫升)，二者均购自Amersham，Aylesbury，England。1毫克MAbIgG溶于500微升PBS，pH＝7.4，并混合1毫居里125I或131I，于涂布有75微克Iodogen的小瓶内(Pierce，OudBijerland，TheNetherlands)。在室温下温育5分钟后，自由态碘在PD10-柱上凝胶过滤而移去(Pharmacia-LKB，Woerden，TheNetherlands)。移去未结合的125I或131I后，以TLC及HPLC方法确定放射化学纯度始终超过97％，所述方法上文已述(VanGogetal.，1997)。以HPLC分析评估，并无聚集物或片段形成。铼186-标记的MAbs的制备。186Re-标记的MAbs依多步骤法制备，其中使用螯合剂S-苄酰基巯基酰基三甘氨酸(S-苄酰基-MAG3)如先前所述(VanGogetal.，1997a)。在此步骤中，186Re-MAG3的制备的固相合成后，继以2，3，5，6-四氟酚(TFP)的酯化作用，并将反应性186Re-MAG3-TFP酯连接至MAb。连接作用后，186Re-标记的MAb在PD10-柱上纯化。移去未结合的186Re后，放射化学纯度始终超过98％。放射标记抗体的结合分析。用于生物分布及治疗研究的经标记的MAbs于体外的结合特性，在免疫反应性分析中确定，基本上如先前所述(VanGogetal.，1997a)。为测试碘化的或186Re-标记的MAbs的结合，使用UM-SCC-11B细胞固定在0.1％戊二醛上。UM-SCC-11B细胞慷慨得自Dr.T.E.Carey，UniversityofMichigan，AnnArbor，MI。以1％BSA于PBS中制备5次连续稀释液(范围由每管5×106细胞至每管3.1×105个细胞)。过量的未标记MAbIgG加至第二管内，并加有最低浓度的细胞以测定非特异的结合。将标记以10,000cpm的125I，131I或186Re的IgG加至各管，且样品在4℃下温育一夜。细胞离心，对团块及上清液中的放射活性于γ计数器中检测(LKB-Wallace1282CompuGamma，KabiPharmacia，Woerden，TheNetherlands)，且计算出结合型的及自由态的放射活性的百分率。数据在经修饰的LineweaverBurk图上图解分析，再通过线性外延至代表无限抗原过量的条件下确定出免疫反应性。在带有HNSCC的裸鼠中进行生物分布研究。于生物分布实验中，以携有皮下植入人类HNSCC异种移植物(HNX-OE)的裸鼠进行，如先前所述(VanGogetal.，1997a)。雌性小鼠(Hsd无胸腺nu/nu，25-32克，HarlanCPB，Zeist，TheNetherlands)在实验时是8-10周大。进行三个生物分布实验，以携有1或2个范围由30至470毫米3的肿瘤株小鼠来进行。在第一个实验中，10微居里(50微克)131I-标记的mMAbU36与10微居里(50微克)125I标记的mMAbBIWA1同时注入有133±28毫米3肿瘤的小鼠体内(n＝20只小鼠，37个肿瘤)。在第二个实验中，10微居里(50微克)131I标记的hMAbBIWA4及10微居里(50微克)125I-标记的cMAbBIWA2共同注入有167±31毫米3肿瘤的小鼠体内(n＝21只小鼠，32个肿瘤)。在第三个实验中，10微居里(50微克)131I标记的hMAbBIWA4及10微居里(50微克)125I-标记的hMAbBIWA8共同注入有130±21毫米3肿瘤的小鼠中(n＝23只小鼠，40个肿瘤)。偶联物在稀释于0.9％NaCl后，以100微升的体积静脉内注射。为了得到共注射的MAbs的可比较的血液/机体清除率，仅混合有相同小鼠或人类同型(isotype)的MAbs。抗体剂量(每只小鼠共100微克)的选用应足够高以避免MAb从血液中快速的同型-相关(isotype-related)的消除作用(Sharkeyetal.，1991，VanGogetal.，1997b)，也要足够低才可避免肿瘤中抗原的饱和。在注射后所示的时间点时，将小鼠麻醉，采血，杀死并解剖。除了肿瘤，也移出以下器官肝，脾，肾，心，胃，回肠，结肠，膀胱，胸骨，肌肉，肺，皮肤及舌头。称重后，于双重-同位素γ计数器中(LKB-Wallace1282CompuGamma)计数在肿瘤，血液及器官内的放射活性，在125I窗设定中自动校正131I-康普顿(131I-comptons)。在这些组织中的放射活性摄取，以每克组织注入剂量的百分率计算(％ID/克)。一直到MAb给药日，小鼠常规关在无特异病原体的条件下，在无菌栏内置湿度及温度均受控的干净小室，依据FederalStandard209d为第2000等级。在注射当日，小鼠移至RadioNuclideCenter，并在无菌条件下于通风橱中给药无菌的放射免疫偶联物。在裸鼠中放射免疫治疗的研究。进行动物RIT研究，以比较标记以186Re的不同MAbs的治疗效力。偶联物的免疫反应性部分始终超过75％。以携有1或2个HNX-OE肿瘤，且范围在45至195毫米3的小鼠进行三个治疗实验。选用的186Re剂量在最大耐受剂量(MTD)水平(即400微居里)或较低(300微居里)。MTD水平的定义为造成体重5-15％丧失的剂量。在第一个实验中，小鼠给予或300微居里(100微克)186Re-标记的mMAbU36或300微居里(100微克)186Re-标记的mMAbBIWA1单一静脉注射。在第二个实验中，给药或300微居里(100微克)186Re-标记的hMAbBIWA4及300微居里(100微克)186Re-标记的cMAbBIWA2，而在第三个实验中，或400微居里(100微克)186Re-标记的hMAbBIWA4或400微居里(100微克)186Re-标记的hMAbBIWA8。所有实验组别中的平均肿瘤体积均类似。实验195毫米3±34毫米3(n＝7只小鼠，12个肿瘤)于以186Re-mMAbU36处理组中，91毫米3±15毫米3(n＝7只小鼠，12个肿瘤)于以186Re-mMAbBIWA1处理组中，及99毫米3±54毫米3(n＝6只小鼠，11个肿瘤)于对照组中。实验2101毫米3±35毫米3(n＝7只小鼠，12个肿瘤)于186Re-hMAbBIWA4处理组，92毫米3±43毫米3(n＝7只小鼠，12个肿瘤)于186Re-cMAbBIWA2处理组，而对照组和实验1相同。实验3105毫米3±43毫米3(n＝8只小鼠，13个肿瘤)于186Re-hMAbBIWA4处理组，100毫米3±42毫米3(n＝8只小鼠，13个肿瘤)于以186Re-hMAbBIWA8处理组，及110毫米3±46毫米3(n＝7只小鼠，11个肿瘤)于对照组。于处理过程中，肿瘤每周测二次，且估计出相对于处理之初的肿瘤体积。每周检测体重二次以监测毒性。当肿瘤之一超过1000毫米3时可处死小鼠。统计学。在各时间点上，统计分析共注射的MAbs间组织摄入的差异，成对的数据利用Student′st-试验。于各时间点时，统计分析各RIT处理组间平均肿瘤体积的差异，对独立样品采用Student′st-试验。结果CD44v6-特异MAbs的体外结合特性。利用重组抗原以及人类肿瘤细胞株，分析5种MAbs的结合亲和力。利用表面质粒基因组共振(surfaceplasmonresonance)，以GST/CD44v3-v10为固化抗原，可评估动力学及亲和力常数。表1示出结合速率(ka)，解离速率(kd)及解离常数(Kd)。mMAbBIWA1及cMAbBIWA2，含有相同的可变区，具有类似的ka，kd和Kd，且显示出最高的亲和力。相反的，mMAbU36及hMAbBIWA4有较低的ka及较高的Kd，造成显著较低的解离常数(分别为常数(factor)35.0及10.5)。hMAbBIWA8，含有鼠类残基在轻链框架区2中，显示出显著减低的kd，造成亲和力的增加。表1直接拮抗CD44v6的MAbs的动力学及亲和力常数也在竞争性细胞ELISA中评估cMAb及hMAb的相对结合亲和力，利用人类A431肿瘤细胞(图1)。依据在重组抗原上的亲和力检测，cMAbBIWA2是最有效的竞争者，继之为hMAbBIWA8及hMAbBIWA4。以其他二种人类HNSCC细胞株(FaDu及LICR-LON-NH5)可得到类似的结果(未示出)。在携有HNSCC的裸鼠中的生物分布。在携有HNX-OE异种移植物的裸鼠中进行生物分布研究。二个有相同小鼠或人类同型的MAbs，标记以125I或131I，并同时注射(各50微克，10微居里)。选择各MAbs对，以在亲和力的差异上提供逐步的减低mMAbU36的亲和力较mMAbBIWA1低35.0倍(实验1)，hMAbBIWA4有较cMAbBIWA2低14.0倍的亲和力(实验2)且hMAbBIWA有较hMAbBIWA8低4.0倍的亲和力(实验3)。所有碘化MAbs的免疫反应性部分(fraction)，在外推后至少74％(表2)。表2碘化MAbs的免疫反应性部分，由结合至UM-SCC-11R细胞而决定实验抗体标记物结合至外推的编号5×106细胞(％)结合a(％)1小鼠U36131I59.787.4小鼠BIWA1125I91.191.12人源化BIWA4131I77.482.3嵌合的BIWA2125I80.579.93人源化BIWA4131I77.374.5人源化BIWA8125I91.892.1a通过线性外推至代表无限抗原过量的条件可测定免疫反应性见材料及方法在实验1的生物分布，在注射后1，2，3及7天时测定；在实验2及3的生物分布，在注射后1，2，4及7天时测定。所有三个实验的肿瘤及血液的经估计的平均％ID/克，示于表3中。表3共注射至携有HNX-OE小鼠后，有不同亲和力的经碘化的CD44v6-特异MAbs的肿瘤及血液水平于各对共注射MAbs，示出肿瘤及血液的吸收比例。肿瘤，血液及各器官在第3(实验1)或4天p.i.(实验2及3)的平均％ID/克及s.e.m.示于图2。在二个小鼠MAbs的直接比较中，低亲和力U36的肿瘤吸收在所有的时间点时，均显著高于高亲和力BIWA1的吸收p＜0.001(表3)。相反的，这些MAbs在1，2及3天p.i.时血液及正常组织中吸收数值间并未见显著的差异。在第7天p.i.时，BIWA1水平在血液及大多数器官中显著低于(p＜0.05)U36水平，显示BIWA1自血液/体内的清除率较快些。在第3天p.i.时，与BIWA1比较，U36高50％的肿瘤摄入于图2A中说明。在评估其他二对MAb时可见类似的相互关系。hMAbBIWA4，虽有较低的亲和力，但在所有时间点时均显示出较cMAbBIWA2及hMAbBIWA8显著较高的肿瘤摄入(P＜0.001)(表3)。相反的，对这些MAbs对在1，2及4天p.i.，于血液及正常组织中的MAb水平是类似的。在第7天p.i.，BIWA2及BIWA8水平在血液及大多数器官中是显著低于(P＜0.05)BIWA4水平，提示这些MAb自血液/体内有较快的清除率。与BIWA2比较时，BIWA4有高出45％的肿瘤摄入，于图2B中说明，而与BIWA8比较时，BIWA4有高出20％的肿瘤摄入，于图2C中说明，此为注射后时间点4天而言。由额外的实验中可得到一致的结果(数据未示出)，其中交换放射标记125I-BIWA4对131I-BIWA8换上131I-BIWA4对125I-BIWA8。由此后面实验的数据中可排除一个可能性，即放射标记的型式会影响经标记MAb的药物动力学行为。在携有HNSCC的裸鼠中的放射免疫治疗。由三个生物分布实验中，似乎低亲和力的MAbs可显出比高亲和力的MAbs更高且更具选择性的肿瘤摄入，且因此可能较适合RIT。为测试此可能性，在RIT研究中，比较以下处理组，利用携有HNX-OE的异种移植小鼠来进行实验1以300微居里186Re-U36或300微居里186Re-BIWA1或盐水为对照。实验2300微居里186Re-BIWA4或300微居里186Re-BIWA2或盐水为对照。实验3400微居里186Re-BIWA4或400微居里186Re-BIWA8或盐水为对照。于图3，对照组及处理组的平均相对肿瘤体积(以在第0天的肿瘤体积百分率表示)对时间作图。在所有三个实验中，于对照组中小鼠的肿瘤显示出对数生长，且肿瘤体积加倍的时间为约7天。在以186Re-标记的MAbs处理组中，肿瘤停止生长，在某些例子中伴有肿瘤的消退，此在注入偶联物后立即出现。然而，所有的肿瘤最终均再生长。于实验1，给药300微居里186Re-BIWA1造成肿瘤生长速率减缓，但平均肿瘤大小并未减少。给药300微居里186Re-U36，可造成平均肿瘤体积减少，在注射后第7天及第17天间由185毫米3减少至120毫米3，之后肿瘤开始再生长。在186Re-U36处理组中，于第14天开始，平均相对肿瘤体积显著小于(P＜0.001)，186Re-BIWA1处理组。于实验2，给药300微居里186Re-BIWA4或300微居里186Re-BIWA2，在第7天造成肿瘤生长的遏止，而在第17天p.i.再开始生长。从第14天开始，在RIT方面，BIWA4较BIWA2有效，但平均相对肿瘤体积间的显著差异，仅见于第14天p.i.(P＜0.05)。于实验3，小鼠以400微居里186Re-BIWA4或BIWA8处理，其造成在19天时相对肿瘤体积减至最小，分别为80±62％及98±81％。之后，肿瘤开始再生长。这些数据显示，在RIT上，低亲和力MAbBIWA4较高亲和力MAbscBIWA2及BIWA8更有效。参考文献Gunthert，U.，Hofmann，M.，Rudy，W.，Reber，S.，Zoller，M.，Hauβmann，I.，Matzku，S.，Wenzel，A.，Ponta，H.，andHerrlich，P.AnewvariantofglycoproteinCD44confersmeta-staticpotentialtoratcarcinomacells.Cell6513-24(1991).Haisma，H.J.，Hilgers，J.，andZurawski，V.R.Jr.Iodinationofmonoclonalantibodiesfordiagnosisandtherapyusingaconvenientonevialmethod.J.Nucl.Med.，271890-1895，1986.Heider，K.-H.，Hofmann，M.，Horst，E.，vandenBerg，F.，Ponta，H.，Herrlich，P.，andPals，S.T.A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LYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKSEQIDNo.8轻链(可变+固定)BIWA4aaEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSINYIYWYQQKPGQAPRLLIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCLQWSSNPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQIDNo.9轻链(可变+固定)BIWA8aaEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSINYIYWLQQKPGQAPRILIYLTSNLASGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCLQWSSNPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECSEQIDNo.10重链(可变+固定)BIWA4/8nt；在pAD-CMV1/pAD-CMV19中的插入子，含有内含子(小字盘)在CH1-铰链区，铰链区-CH2，CH2-CH3间，前导序列以下划线表示，非翻译序列为斜体字，克隆位点加粗aagctttgacagacgcacaaccctggactcccaagtctttctcttcagtgacaaacacagacataggatatcacatttgcttctgacacaactgtgttcactagcagcctcaaacagacaccATGAACTTTGGGCTCAGCTTGATTTTCCTTGTCCTAATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTAAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGACATGTCTTGGGTTCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTTACACCTACTATCTAGACAGTATAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAAATGAACAGTCTGAGGGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAGACAGGGGTTGGACTACTGGGGTCGAGGAACCTTAGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTggtgagaggccagcacagggagggagggtgtctgctggaagcaggctcagcgctcctgcctggacgcatcccggctatgcagccccagtccagggcagcaaggcaggccccgtctgcctcttcacccggagcctctgcccgccccactcatgctcagggagagggtcttctggctttttcccaggctctgggcaggcacaggctaggtgcccctaacccaggccctgcacacaaaggggcaggtgctgggctcagacctgccaagagccatatccgggaggaccctgcccctgacctaagcccaccccaaaggccaaactctccactccctcagctcggacaccttctctcctcccagattccagtaactcccaatcttctctctgcaGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAggtaagccagcccaggcctcgccctccagctcaaggcgggacaggtgccctagagtagcctgcatccagggacaggccccagccgggtgctgacacgtccacctccatctcttcctcaGCAcCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGGGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACGATCTCCAAAGCCAAAggtgggacccgtggggtgcgagggccacatggacagaggccggctcggcccaccctctgccctgagagtgaccgctgtaccaacctctgtcctacaGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGAgtgcgacggccgcgaattcSEQIDNo.11轻链(可变+固定)BIWA4nt；在pAD-CMV1/pAD-CMV19中的序列，前导序列底下划线，非翻译序列为斜体字，克隆位点加粗aagcttgatcttcaggatatcacatttgcttctgacacaactgtgttcactagcaacctcaaacagacaccATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATGAGTGCCTCAGTCATAATGTCCAGGGGAGAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAACCCTGTCTCTGTCTCCAGGGGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAATTACATATACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGACTCTTGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCGCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACCGACTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCCGTTTATTACTGCCTGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGGTGGAGATTAAACGGACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCTAGCGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAGgaattcSEQIDNo.12轻链(可变+固定)BIWA8nt；序列在pAD-CMV1/pAD-CMV19中，前导序列底下划线，非翻译序列为斜体字，克隆位点加粗aagcttgatcttcaggatatcacatttgcttctgacacaactgtgttcactagcaacctcaaacagacaccATGGATTTTCAGGTGCAGATTTTCAGCTTCCTGCTAATGAGTGCCTCAGTCATAATGTCCAGGGGAGAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAACCCTGTCTCTGTCTCCAGGGGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAATTACATATACTGGCTCCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGAATCTTGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCGCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACCGACTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCCGTTTATTACTGCCTGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGGTGGAGATTAAACGGACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCTAGCGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAGgaattcSEQIDNo.13重链(可变+固定)BIWA4/8nt；序列在N5KG1Val中，不含内含子，前导序列底下划线ATGGAGTTTGGGCTGAGCTGGCTTTTTCTTGTGGCTATTTTAAAAGGTGTCCAGTGTGAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTAGTGAAGCCTGGAGGGTCCCTAAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGACATGTCTTGGGTTCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACCATTAGTAGTGGTGGTAGTTACACCTACTATCTAGACAGTATAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACTCCCTGTACCTGCAAATGAACAGTCTGAGGGCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCAAGACAGGGGTTGGACTACTGGGGTCGAGGAACCTTAGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGASEQIDNo.14轻链(可变+固定)BIWA4nt；序列在N5KG1Val中，前导序列底下划线ATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAACCCTGTCTCTGTCTCCAGGGGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAATTACATATACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGACTCTTGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCGCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACCGACTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCCGTTTATTACTGCCTGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGGTGGAGATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGASEQIDNo.15轻链(可变+固定)BIWA8nt；序列在N5KG1Val中，前导序列底下划线ATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAACCCTGTCTCTGTCTCCAGGGGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAATTACATATACTGGCTCCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGAATCTTGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCGCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACCGACTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCCGTTTATTACTGCCTGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGGTGGAGATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGASEQIDNo.16BIWA4于N5KG1Val中CTGACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGGCTCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGGGTCGCGACGTACCGGGCCCCCCCTCGATTAATTAATCGAGCTACTAGCTTTGCTTCTCAATTTCTTATTTGCATAATGAGAAAAAAAGGAAAATTAATTTTAACACCAATTCAGTAGTTGATTGAGCAAATGCGTTGCCAAAAAGGATGCTTTAGAGACAGTGTTCTCTGCACAGATAAGGACAAACATTATTCAGAGGGAGTACCCAGAGCTGAGACTCCTAAGCCAGTGAGTGGCACAGCATTCTAGGGAGAAATATGCTTGTCATCACCGAAGCCTGATTCCGTAGAGCCACACCTTGGTAAGGGCCAATCTGCTCACACAGGATAGAGAGGGCAGGAGCCAGGGCAGAGCATATAAGGTGAGGTAGGATCAGTTGCTCCTCACATTTGCTTCTGACATAGTTGTGCCAGCATGGAGGAATCGATCCTCCATGCTTGAACAAGATGGATTGCACGCAGGTTCTCCGGCCGCTTGGGTGGAGAGGCTATTCGGCTATGACTGGGCACAACAGACAATCGGCTGCTCTGATGCCGCCGTGTTCCGGCTGTCAGCGCAGGGGCGCCCGGTTCTTTTTGTCAAGACCGACCTGTCCGGTGCCCTGAATGAACTGCAGGTAAGTGCGGCCGCTCTAGGCCTCCAAAAAAGCCTCCTCACTACTTCTGGAATAGCTCAGAGGCCGAGGCGGCCTCGGCCTCTGCATAAATAAAAAAAATTAGTCAGCCATGCATGGGGCGGAGAATGGGCGGAACTGGGCGGAGTTAGGGGCGGGATGGGCGGAGTTAGGGGCGGGACTATGGTTGCTGACTAATTGAGATGCATGCTTTGCATACTTCTGCCTGCTGGGGAGCCTGGGGACTTTCCACACCTGGTTGCTGACTAATTGAGATGCATGCTTTGCATACTTCTGCCTGCTGGGGAGCCTGGGGACTTTCCACACCCTAACTGACACACATTCCACAGAATTAATTCCCCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGGTACGTGAACCGTCAGATCGCCTGGAGACGCCATCACAGATCTCTCACCATGGAAGCCCCAGCTCAGCTTCTCTTCCTCCTGCTGCTCTGGCTCCCAGATACCACCGGAGAAATTGTTCTCACCCAGTCTCCAGCAACCCTGTCTCTGTCTCCAGGGGAGAGGGCCACCCTGTCCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAATTACATATACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGACAGGCTCCTAGACTCTTGATTTATCTCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCGCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGAACCGACTTCACTCTCACAATCAGCAGCCTGGAGCCTGAAGATTTTGCCGTTTATTACTGCCTGCAGTGGAGTAGTAACCCGCTCACATTCGGTGGTGGGACCAAGGTGGAGATTAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTGAA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CGGACGGGTAGACGCTGGGGGCGCTGAGGAGTCGTCCTCTACCTTCTCTGCTGGCTCGGTGGGGGACGCGGTGGATCTCAGGCTTCCGGAAGACTGGAAGAACCGGCTCAGAACCGCTTGTCTCCGCGGGGCTTGGGCGGCGGAAGAATGGCCGCTAGACGCGGACTTGGTGCGAGGCATCGCAGGATGCAGAAGAGCAAGCCCGCCGGGAGCGCGCGGCTGTACTACCCCGCGCCTGGAGCGGCCACGCCGGACTGGGCGGGGCCGGCCTGGTGGAGGCGGAGTCTGACCTCGTGGAGGCGGGGCCTCTGATGTTCAAATAGGATGCTAGGCTTGTTGAGGCGTGGCCTCCGATTCACAAGTGGGAAGCAGCGCCGGGCGACTGCAATTTCGCGCCAAACTTGGGGGAAGCACAGCGTACAGGCTGCCTAGGTGATCGCTGCTGCTGTCATGGTTCGACCGCTGAACTGCATCGTCGCCGTGTCCCAGAATATGGGCATCGGCAAGAACGGAGACCTTCCCTGGCCAATGCTCAGGTACTGGCTGGATTGGGTTAGGGAAACCGAGGCGGTTCGCTGAATCGGGTCGAGCACTTGGCGGAGACGCGCGGGCCAACTACTTAGGGACAGTCATGAGGGGTAGGCCCGCCGGCTGCTGCCCTTGCCCATGCCCGCGGTGATCCCCATGCTGTGCCAGCCTTTGCCCAGAGGCGCTCTAGCTGGGAGCAAAGTCCGGTCACTGGGCAGCACCACCCCCCGGACTTGCATGGGTAGCCGCTGAGATGGAGCCTGAGCACACGTGACAGGGTCCCTGTTAACGCAGTGTTTCTCTAACTTTCAGGAACGAGTTCAAGTACTTCCAAAGAATGACCACCACCTCCTCAGTGGAAGGTAAACAGAACCTGGTGATTATGGGCCGGAAAACCTGGTTCTCCATTCCTGAGAAGAATCGACCTTTAAAGGACAGAATTAATATAGTTCTCAGTAGAGAGCTCAAGGAACCACCACAAGGAGCTCATTTTCTTGCCAAAAGTCTGGACCATGCCTTAAAACTTATTGAACAACCAGAGTTAGCAGATAAAGTGGACATGGTTTGGATAGTTGGAGGCAGTTCCGTTTACAAGGAAGCCATGAATCAGCCAGGCCATCTCAGACTCTTTGTGACAAGGATCATGCAGGAATTTGAAAGTGACACGTTCTTCCCAGAAATTGATTTGGAGAAATATAAACTTCTCCCAGAGTACCCAGGGGTCCTTTCTGAAGTCCAGGAGGAAAAAGGCATCAAGTATAAATTTGAAGTCTATGAGAAGAAAGGCTAACAGAAAGATACTTGCTGATTGACTTCAAGTTCTACTGCTTTCCTCCTAAAATTATGCATTTTTACAAGACCATGGGACTTGTGTTGGCTTTAGATCCTGTGCATCCTGGGCAACTGTTGTACTCTAAGCCACTCCCCAAAGTCATGCCCCAGCCCCTGTATAATTCTAAACAATTAGAATTATTTTCATTTTCATTAGTCTAACCAGGTTATATTAAATATACTTTAAGAAACACCATTTGCCATAAAGTTCTCAATGCCCCTCCCATGCAGCCTCAAGTGGCTCCCCAGCAGATGCATAGGGTAGTGTGTGTACAAGAGACCCCAAAGACATAGAGCCCCTGAGAGCATGAGCTGATATGGGGGCTCATAGAGATAGGAGCTAGATGAATAAGTACAAAGGGCAGAAATGGGTTTTAACCAGCAGAGCTAGAACTCAGACTTTAAAGAAAATTAGATCAAAGTAGAGACTGAATTATTCTGCACATCAGACTCTGAGCAGAGTTCTGTTCACTCAGACAGAAAATGGGTAAATTGAGAGCTGGCTCCATTGTGCTCCTTAGAGATGGGAGCAGGTGGAGGATTATATAAGGTCTGGAACATTTAACTTCTCCGTTTCTCATCTTCAGTGAGATTCCAAGGGATACTACAATTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAAGCTAATTCAGCCTGAATGGCGAATGGGAAATTGTAAACGTTAATATTTTGTTAAAATTCGCGTTAAATTTTTGTTAAATCAGCTCATTTTTTAACCAATAGGCCGAAATCGGCAAAATCCCTTATAAATCAAAAGAATAGACCGAGATAGGGTTGAGTGTTGTTCCAGTTTGGAACAAGAGTCCACTATTAAAGAACGTGGACTCCAACGTCAAAGGGCGAAAAACCGTCTATCAGGGCGATGGCCCACTACGTGAACCATCACCCTAATCAAGTTTTTGGGGTCGAGGTGCCGTAAAGCACTAAATCGGAACCCTAAAGGGAGCCCCCGATTTAGAGCTTGACGGGGAAAGCCGGCGAACGTGGCGAGAAAGGAAGGGAAGAAAGCGAAAGGAGCGGGCGCTAGGGCGCTGGCAAGTGTAGCGGTCACGCTGCGCGTAACCACCACACCCGCCGCGCTTAATGCGCCGCTACAGGGCGCGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCAGCTGC实例3临床研究1170.11.术语缩写及定义列表ADCC抗体依赖的细胞-介导的胞毒作用AE不良作用ALT丙氨酸氨基转移酶a.p.在前在后AP碱性磷酸酶AST天冬氨酸氨基转移酶AUC在浓度-时间曲线下的面积Bq克瑞尔(Becquerel)，放射活性克瑞尔的SI单位(1Bq＝一次衰变/秒)BSA牛血清白蛋白CD44v6CD44变体同型(isoform)v6CDS共同药物安全性(CorporateDrugSafty)cGy对放射性活性的厘戈瑞(CentiGray)检测CHO中国仓鼠卵巢细胞Ci居里；放射活性单位；1居里＝37×109衰变/秒＝37GBqCL总的机体清除率cMAb嵌合型单克隆抗体cm厘米Cmax所观察到的最大药物浓度cpm每分钟的计数CRF病例报告/记录表CT(scan)电脑断层照相术CTC一般毒性标准CV变异系数DLT毒性限制(DoseLimitingToxicity)剂量ECG心电图ELISA酶联免疫吸附试验ENT耳鼻喉f雌性FDA食品及药物检验局g克GBq放射活性拾亿克瑞尔(GigaBecquerel)的SI单位(1GBq＝109衰变/秒)GCP良好临床实践GGTγ谷氨酰基转肽酶GMP良利制造实践Gy戈瑞(Gray)HAHA人类抗-人类抗体Hb血红蛋白HER2人类上皮生长因子受体2hMAb人源化的单克隆抗体HNSCC头及颈部鳞状细胞癌HPLC高性能液相层析hr/h小时hrs小时Ht血细胞比容131I碘-131(半衰期8.05天)ICH协调国际委员会(InternationalCommitteeonharmonisation)ID注射剂量IEC独立道德委员会IgG免疫球蛋白GINN国际非专读名称(internationalNonproprietaryName)IRB研究院总览版ITT意图治疗(Intent-To-Treat)i.v.静脉内KeV仟电子伏特l/L升m雄性m2平方米MAb单克隆抗体MAG2GABA-TFP巯基乙酰基甘氨酰基甘氨酰基-γ-氨基丁酸-四氟酚酯(MAG2GABA-TFP)，螯合剂用于将186Re偶联至单克隆抗体(进一步的方法)MAG3巯基乙酰基三甘氨酸，螯合剂用于将99mTc及186Re偶联至单克隆抗体MBq放射活性的SI单位；百万(Mega)克瑞尔(1MBq＝106衰变/秒)mCi毫居里；放射活性单位；1毫居里＝37百万衰变/秒＝37MBqMCV平均红细胞容积mGy毫戈瑞μg微克mg毫克min分钟ml/mL毫升mMAb小鼠单克隆抗体mmHg毫米汞柱μmol微摩尔mmol毫摩尔MRI磁共振显影MRT平均滞留时间mSv毫西弗特(Sievert)MTD最大耐受剂量NA/n.a.未应用NCIUS国家癌症研究所ND未做ng纳克No/N编号nos未特示NSCLC非小细胞肺癌n.y.r.还未回收p.a.在后在前PBS磷酸盐缓冲的盐溶液p.i.输注后p.o.经口PP每个策略Pt./Pat病人Pts.病人186Re铼-186，放射核种；半衰期为3.7天(β-粒子的组织穿透约1.2毫米)Recov.回收的RES网状内皮系统RIS放射免疫闪烁照相术RIT放射免疫疗法ROI目的区域SAE严重的不良作用SCC鳞状细胞癌sCD44v6可溶性CD44v6SD稳定的疾病sGOT血清谷氨酸草酰乙酸转氨酶sGPT血清谷氨酸丙酮酸转氨酶SOC系统器官类别SOP标准操作步骤SPECT单一光子发射计算机断层照相法t1/2消除半衰期99mTc锝99m(半衰期6小时)TLC薄层层析Tmax可观察到最大药物浓度的时间点TNM将肿瘤分阶段的肿瘤淋巴结转移系统TSH甲状腺刺激激素UICC抗癌的国际联盟unk未知Vss在稳态条件下分布的表观体积Vz在末期分布的表达体积WBC白细胞计数WHO世界卫生组织2.研究目的2.1一般目标/临床目的本研究的一般目标是评估静脉内给药99mTc及186Re-标记的hMAbBIWA4的安全性及耐受力，以证实99mTc-标记的hMAbBIWA4在肿瘤中的优先累积，以确定186Re-标记的hMAbBIWA4的最大耐受放射剂量，以及对第II期的发展提出安全剂量。为了到达此目标，研究分成二部分A部分目的·为确定99mTc-标记的hMAbBIWA4静脉内给药的单一输注，在有头及颈进展的鳞状细胞癌病人中的安全性及耐受力。·为确定99mTc-标记的hMAbBIWA4四种BIWA4剂量水平单一输注在有头及颈进展的鳞状细胞癌病人中的生物分布。·为研究99mTc-标记的hMAbBIWA4单一输注的药物动力学。B部分目的·为确定186Re-标记的hMAbBIWA4的定性及定量毒性作用，以及研究毒性副作用的可预见性，作用开始，作用期，强度，可逆性及与剂量的相互关系。·为确定186Re-标记的hMAbBIWA4在头及颈癌病人的最大耐受放射剂量。·为了研究静脉内给药186Re-标记的hMAbBIWA4在头及颈鳞状细胞癌病人的药物代谢动力学。·第二目的是确定186Re-标记的hMAbBIWA4的初步治疗作用。在该策略中所列的下列目的，在试验进行中无法达到。连接子螯合物巯基乙酰基三甘氨酸(MAG3)用来将99mTc及186Re偶联至单克隆抗体，此程序的发展被中断，因此试验结束。以BIWA4的进一步发展可继续，利用连接子巯基乙酰基甘氨酰基甘氨酰基-γ-氨基丁酸四氟酚酯(MAG2GABA-TFP)。·首先鉴定单一剂量治疗的MTD，再加入更多病人以定义出MTD，供186Re-标记的hMAbBIWA4的第二次治疗参考。·为186Re-标记的hMAbBIWA4的第一次及继续输注提出安全剂量，以为进一步研究。·为了对剂量预定表得出最初结果以供重复给药。2.2初步参数·安全性临床实验室试验，人类-抗人类-抗体(HAHA)评估，生命体征检测及不良作用。·效力活检得到生物分布数据(仅A部分)及放射免疫闪烁断层照相法(A及B部分包括试验B部分的剂量法)。·药物动力学结果。2.3二次参数研究中的二次参数是肿瘤应答(仅B部分)。3.研究计划3.1整体研究设计及计划-说明此试验分二部分进行。A部分评估冷的BIWA4最佳剂量，及定量出肿瘤的吸收，而B部分研究186Re-BIWA4的最大耐受剂量。3.1.1A部分此临床试验部分是不受控的，提高剂量的连续组别研究。其经设计可在99mTc-hMAbBIWA4单一输注的安全性及耐受力上提供最初数据，以研究生物分布的型式及水平，并确定hMAbBIWA4在有头及颈部癌症病人中的药物动力学概况。在此研究的A部分中采用三种hMAbBIWA蛋白质剂量，每剂量水平有三位病人计划经受处理。病人由耳鼻喉科常规检查，以确定肿瘤程度。此包括身体检查，电脑断层照相法(CT)或头及颈部的MRI扫描，及广视野膀胱镜检(视所需地)。在这些步骤中，组织样品，疑似肿瘤，取出并检查有否鳞状细胞癌的出现。依据这些检查结果，病人决定是否进行手术，包括颈部解剖。注入经放射标记的抗体，观察病人有否发生不良反应。手术前，而输注后(p.i.)21小时进行放射免疫闪烁照相扫描。在输注入具放射性标记的hMAbBIWA448小时后进行手术。病理医师检查颈部解剖样品以确定确实的肿瘤负荷。再者，也检测在手术待检品中，来自肿瘤位置及正常组织的活组织待检品中99mTc的量。以免疫组织化学技术检查肿瘤位置及肿瘤浸润结节是否有CD44v6抗原的存在。前三位病人给药2毫克hMAbBIWA4，其标记有20毫居里99mTc，并混合以23毫克未标记的hMAbBIWA4。第二组三个可评估的病人给药2毫克hMAbBIWA4，标记以20毫居里99mTc并混合以48毫克未标记的hMAbBIWA4，而第三组给药2毫克标记的抗体，混合以98毫克未标记的抗体。在特示的时间点上进行药物动力学评估。3.1.2.B部分此临床试验部分是一个开放式未受控的剂量阶梯式扩大研究。其经设计可评估186Re-标记的hMAbBIWA4的安全性及耐受力，以决定静脉内给药186Re-标记的hMAbBIWA4的最大耐受剂量(MTD)，并可决定186Re-标记的hMAbBIWA4在头及颈部癌病人中的初步治疗作用，而此病人无治愈选择可采用。此外，也评估186Re-标记的hMAbBIWA4的药物动力学概况。进入此试验部分的所有病人均接受hMAbBIWA4，其剂量的选用以A部分的结果为依据。hMAbBIWA4标记以阶梯式扩大剂量的186Re。在较低剂量水平下(所观察到的毒性不超过第1级)二位病人进入过剂量组(perdosegroup)，而在较高水平时(≥2级毒性)最少三位病人进入过剂量组。所有病人均评估以决定所给药的hMAbBIWA4的安全性。病人由耳鼻喉科医师例常地检查，以决定肿瘤程度。此包括身体检查及肿瘤位置处的CT或MRI扫描。186Re-标记的抗体以阶梯扩大方式的放射剂量注入在第一剂量组的病人接受20毫居里/米2的照射剂量，而后在接下来的剂量组病人，以10毫居里/米2的放大比例扩大，直到达到MTD为止。观察病人是否发生不良作用。进行放射免疫闪烁照相扫描。3.1.3在各次访视时的研究步骤3.1.3.1.访视程序a)筛选式访视在进入研究前，各病人依适任而筛选。记录人口统计学及医学相关病史，也记录伴随的治疗，并进行一般身体检查，也测量体重。决定出Karnofsky性能分数。必需取得书面通知同意书。对有可能怀孕妇女需作怀孕测试。进行12-导联心电图(ECG)，也进行血液及尿液安全性实验室评估。也采取HAHA-测试的血样。进行胸部X-射线照射，及完全疾病评估(CT/MRI，耳鼻喉[ENT]检查)。在此访视结束时，评估所需检查的结果，进行纳入及排除标准的证实及手术的安排(仅A部分)。b)访视2研究天数1-7A部分及B部分在第一天研究时，此不超过筛选访视后3周，病人要住院。在筛选访视时未做的所有必要的基础实验室评估均要做，并在输注前予以评估，且要符合适任条件。测量体重。所有伴随的治疗必需记录。在书面通知同意书签名后，每一个不良作用必需记录在病人档案及病例病历报告表(CRF)中。在治疗当日，给药抗体前先采血样以记录药物动力学(包括可溶性CD44v6的评估)及生命体征。在第一个24小时间，收集0-4小时，4-8小时，8-12小时及12-24小时的尿液，再以24小时为间隔直到输注后48及96小时收集尿液，分别用于A及B部分。抗体在核子医学部或医院的指定病房中给药。抗体的给药尽可能接近周边上肢末稍静脉。在所有例子中，输注历5分钟，在10毫升盐水的冲洗后，经由自由流通的管线。为了取得可再现的药物动力学结果，必需使用注射泵。因此以0.9％NaCl稀释体积至20毫升是必要的。此抗体输注后继以10毫升盐水的冲洗。任何疑似的溢出均记录在CRT中，且病人要照相。备好有复苏设备，抗组织胺，皮质类固醇及肾上腺素的急救物品以对抗可能的过敏性反应。每天要记录不良作用及伴随治疗的变化。A部分在p.i.10，60及120分钟时记录生命体征。输注后21，48及144小时，收集血样以分析安全性及可溶性CD44v6。在输注结束时及在输注结束后5，10，30分钟，及1，2，4，16，21，48，72小时，及第7天(144小时p.i.，包括血清样品用于HAHA及可溶性CD44v6的评估)采血以行药物动力学评估。行药物动力学研究的尿液，在第一个24小时中的0-4小时，4-8小时，8-12小时及12-24小时，及24小时直到48小时p.i.时收集。在输注后直接及在之后21小时，进行全身闪烁照相显影。输注后21小时，除了全身显影，也做头及颈部区域的单一光子发射计算机断层照相(SPECT)及全面显影。病人在p.i.48小时时手术，并留院做术后照料。在第7天(144小时p.i.)收集安全性尿液样品。每天记录不良反应及伴随治疗的改变。B部分在输注后10，60，120及240分钟记录生命体征。在输注后21，48及144小时收集血样以行安全性及可溶性CD44v6分析。收集输注后144小时的血样进行HAHA评估。在144小时p.i.也收集尿液以用于安全性分析。在输注结束及输注结束后5及30分钟及1，2，4，16，21，48及72小时，及第7天(144小时p.i.)采血以行药物动力学分析。原先在10分钟时计划的样品省略为修正案1。在第一个24小时的0-4小时，4-8小时，8-12小时及12-24小时及在24小时直到96小时p.i.，收集尿液行药物动力学分析。在21、48、72及144小时p.i.直接进行全身闪烁照相显影，可任选在输注后二周进行，此若考虑统计学许可时而言。在21、48(视所需地)、72及144小时p.i.，及视所需二周p.i.进行头及颈部区域的平面显影，此若考虑统计学许可时而言。只在输注后72小时进行SPECT显影。每天记录不良反应及伴随治疗的改变。三天后允许病人离院。c)访视3追踪访视A部分输注后六周，病人看门诊。进行身体检查，收集安全性血液及尿液样品，测量体重及生命体征，并记录不良作用。也得进行药物动力学，HAHA评估及可溶性CD44v6分析的血样。对可能怀孕妇女需做怀孕测试。记录不良作用的随防结果。也记录伴随治疗的任何变化。B部分病人到门诊每周一次至少六周，以记录不良作用并收集安全性血样。在输注后240小时及336小时采血分析药物动力学。原先计划在p.i.六周的血样省略为修正案1。也记录在伴随治疗中的任何变化。输注后基础的疾病评估要重复进行六周，之后若有指示才进行。(评估在六周后进行而非策略中曾提及的四周)。输注后六周采血分析安全性，HAHA评估及可溶性CD44v6，记录生命体征并测量体重。在此访视中进行身体检查。收集安全性尿液。对有怀孕可能妇女进行验孕。d)访视4及5第二次处理(B部分)如先前策略中所列的第二次处理并不进行，因试验提前结束之故，因联系变化之故。反之，对第一剂186Re-BIWA4有反应的病人适合第二次给药。其如同第一次给药般进行相同的访视程序。3.2研究设计的讨论，包括对照组的选用本研究的目的是评估99mTc-经标记BIWA4在肿瘤中差别累积(A部分)，以及评估186Re-BIWA4的最大耐受剂量(B部分)，以及在有进展的头及颈部癌症病人中BIWA4的药物动力学研究(A及B部分)。如同在肿瘤学这些类型的I期试验型式中的一般实践般，使用开放式设计。在较低放射剂量效价至少有二位病人，而在较高放射剂量效价有三位病人纳入试验的B部分。而发生与药物有关的一般毒性标准(CTC)4级血液学及3级非血液学毒性例子中，此三位病人进一步以个别剂量效价处理(至于进一步给药详情见3.4.4.及3.4.5.段落)。所给药的BIWA4剂量依mMAbBIWA1的先前结果为据，显示出50毫克的剂量在肿瘤组织有高且具选择性的摄取，而非肿瘤组织是低的摄取，及来自试验A部分的结果(也见3.4.4.1.段落)。所选用的放射活性开始剂量水平，以先前数据为准，可推知20毫居里/米2的剂量是个安全剂量(也见3.4.4.2.)。所反应的效力标准以及评估耐受力的标准，已针对此病人群体充分建立，且也可在开放设计中评估。3.3研究群体的选择3.3.1纳入准则-组织学证实有头及颈部鳞状细胞癌的病人。-计划以颈部解剖方法手术的病人(A部分)或-有局部和/或区域复发疾病的病人，且无可运用的治疗选择，或远端的转移。肿瘤沉积物必需以临床方式检测，或利用一种或一种以上的放射科技术(CT，MRI，骨骼闪烁照相法)。在较小的肿瘤沉积中已预测RIT更有效，以在最大尺寸中测得的伤处＜3公分的病人为较佳(B部分)。-病人超过18岁。-病人小于80岁。-病人有书面通知同意书。-病人寿命至少3个月。-有良好状况的病人Karnofsky＞60。3.3.2排除准则-致命性感染，过敏性体质，器官衰竭(胆红素＞30微摩尔/升和/或肌酸酐＞150微摩尔/升)或根据ECG有近来心肌梗塞的证据或不稳定心绞痛。-停经前妇女(最后一次月经≤1年，指开始研究前)·无手术绝育(子宫切除术，结扎输卵管)及·无实行生育控制可接受方法(或在研究中未计划要继续者)。生育控制的可接受方法包括口服，植入或注射避孕药。-在基线上有血清怀孕检测阳性的妇女。-在纳入研究前4周内进行化学治疗或放射治疗。-白细胞数目＜3000/毫米3，粒细胞数目＜1500/毫米3或血小板数目＜100,000/毫米3。-血液学失调症，充血性心力衰竭，支气管哮喘，食物性或接触性过敏，严重的特应性或过敏。3.3.3从治疗或评估中受试者的排除3.3.3.1停止受试者处理的准则若病人发生心博过速(脉博每分钟大于120次)，低血压(血压的收缩压低于100毫米汞柱)，呼吸窘迫，胸痛，或病人无法忍受的任何症状，均要立即停止输注。3.3.3.2中途退出及取消受试者在此研究的任何时间时，均可自由地中止其参与。若病人因为自动消取而自研究中提早离开，则放射性标记的hMAbBIWA4的评估不被视为是可行的。若无法取得适当的追踪资料，此病例被视为非可评估的。任何无法取得适当的追踪资料，此病例被视为非可评估的。任何无法评估的病人均计划要被取代。若病人自研究早期即中止，则理由应记录在CRF中。若病人无法回来进行输注后采血以决定HAHA或药物动力学，理由也要记录。若病人发生严重的不良反应，则依严重的不良作用(SAE)而定，尽可能接近地追踪研究程序。3.4处理3.4.1给药处理在A部分的病人给药放射活性剂量为20毫居里的99mTc-BIWA4。对三位病人，各自给药的BIWA4剂量为25毫克，50毫克或100毫克。药物以单一剂量静脉内给药。在B部分的病人接受50毫克标记以铼186的BIWA4。最低放射活性剂量为20毫居里/米2，以10毫居里/米2的剂量效价增加。试验药物以单一剂量于静脉内给药。3.4.2研究产品的本质A部分物质(INN)BIWA4(bivatuzumab)药学型式注射用溶液Chiffre号码BIWA4LOI991D1A批号B981101来源BoehringerIngelheimPharmaKG单位强度5毫克/毫升每天剂量25毫克使用期单一剂给药路径静脉内剂量学输注历5分钟物质(INN)BIWA4(bivatuzumab)药学型式注射用溶液剂Chiffre号码BIWA4LOI991D1A批号B981101来源BoehringerIngelheimPharmaKG单位强度5毫克/毫升每天剂量50毫克使用期单一剂给药路径静脉内剂量学输注历5分钟物质(INN)BIWA4(bivatuzumab)药学型式注射用溶液剂Chiffre号码BIWA4LOI991D1A批号B981101来源BoehringerIngelheimPharmaKG单位强度5毫克/毫升每天剂量100毫克使用期单一剂给药路径静脉内剂量学输注历5分钟BIWA4以与99mTc连接的放射性偶联物型式给药。连接分子是MAG3。MAG3购自Mallinckrodt，Petten，TheNetherlands。99mTc经由实验室地方性订货，在此制备放射免疫偶联物(Prof.Dr.vanDongen的实验室，SectionTumorBiology，DepartmentofOtorhinolaryngology/HeadandNeckSurgery，VrijeUniversiteitUniversityMedicalCenter，DeBoelelaan1117，1081HVAmsterdam，TheNetherlands)。B部分物质(INN)BIWA4(bivatuzumab)药学型式注射用溶液剂Chiffre号码BIWA4LOI991D1A批号B981101来源BoehringerIngelheimPharmaKG单位强度5毫克/毫升每天剂量50毫克使用期单一剂给药路径静脉内剂量学输注历5分钟BIWA4以与186Re连接的放射性偶联物型式给药。连接分子是MAG3。MAG3购自Mallinckrodt，Petten，TheNetherlands。186Re经由实验室地方性订货，在此制备放射免疫偶联物(Prof.Dr.vanDongen的实验室，SectionTumorBiology，DepartmentofOtorhinolaryngology/HeadandNeckSurgery，VrijeUniversiteitUniversityMedicalCenter，DeBoelelaan1117，1081HVAmsterdam，TheNetherlands)。3.4.2.1试验药物的特性及质量抗体特性由hMAbBIWA4所确认的抗体是一种位于细胞外表面的穿膜糖蛋白，且仅少部分是内化的(＜20％)。进一步分析显示，hMAbBIWA4可识别由CD44变体外显子v6所编码的表位。已显示该抗原为所有原发性头及颈部肿瘤(n＝54)及为这些肿瘤内的大部分细胞所表达。由颈部解剖待检品来的68个肿瘤浸润的淋巴结中可观察到可比较的表达(R97-2054)。hMAbBIWA4在人类正常组织中的反应性类型，示于策略的附录III中。发现hMAbBIWA4的反应性基本上限于鳞状上皮。如先前以小鼠单克隆抗体(mMAb)BIWA1的RIS研究中所证明的，与正常鳞状上皮的反应性并非在肿瘤靶向利用上的一个限制因素，此就肿瘤的摄入而言。经99mTc或186Re-标记的hMAbBIWA4的质量控制抗体依Fritzbergetal.所述的方法(R96-2106见策略附录IV)标记以99mTc或186Re，其并依Visseretal.(R96-2094)及VanGogetal.(R96-2111)而修饰之。以99mTc及186Re放射标记hMAbBIWA4的步骤，已就所制成偶联物的最终质量而进行了保证。在五个独立的标记实验中，依策略附录IV所述步骤进行，发现与抗体结合的标记物的百分率为96-99％。在此临床研究中，以薄层层析(TLC)或高性能液相层析(HPLC)评估所制备的各经99mTc或186Re-标记的抗体批次的放射化学纯度，并通过PD-10凝胶管柱，且必须在90％以上才可给药至病人。在给药后利用有公信的方法检查各经99mTc/186Re标记的抗体批次的免疫反应性部分，且必需在60％以上。简言之，分析基本上依Lindmoetal.(R96-2104)所述的步骤进行。含有CD44v6抗原的UM-SCC11B细胞(人类喉癌)固定在0.1％戊二醛。六个稀释度，由每管5×106细胞至每管3.1×105细胞，以1％牛血清白蛋白(BSA)在磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)中制成。在管中加入80,000cpm的99mTc-或10,000的186Re-标记的hMAbBIWA4，并在室温下温育一夜。在最后的样品中，加入过量的未标记的hMAbBIWA4以测定非特异的结合。细胞离心，利用γ计数器测定在团块及在上清液中的放射活性，并计算出结合的及游离态放射标记MAb的百分率(LKB-Wallac1218CompuGamma)。数据在经修饰的LineweaverBurk图中图解分析，再以线性外推至代表无限抗原过量的条件下而确定免疫反应性部分。若在此结合分析中未达到60％的排除水平，则供输注的制剂应在第二结合分析中再行评估。针对此目的，抗体制剂标以131I。在第二分析中至少一者的免疫反应性部分必须大于60％，使可供评估及可供研究并以下一位病人继续进行。抗体安全性在此研究中，以99mTc及186Re放射标记的BIWA4是一种已十分确定特性的单克隆抗体产品，其由中国仓鼠卵巢(CHO)-细胞培养发酵而产生。并在GoodManufacturingPractice(GMP)条件下确立主细胞图，并针对微生物状况(细菌，真菌，霉浆菌)以及病毒状况(腺病毒，反转录病毒)充分检查。除了内源性反转录病毒为例外(已知其存在于大多数CHO细胞中)，未测及污染物。依据FDA1994年“PointstoConsider”文件，关于在癌症病人临床I期研究所用的MAb，一种标准化的下游纯化过程，被公认可有效地移去病毒，可应用至BIWA4的纯化上。在此公认中包括有四种典型病毒(MuLV，PsRV，REO-3，SV40)。检查浓缩的大团回收物中的反转录病毒效价，以确保接下来的下游纯化过程可适度地移除反转录病毒。移去内毒素的数据是在可接受限度内(≤0.01EU/毫克)且可运用于大团产物。再者，依据欧洲药典准则的热原性试验已成功地进行。更详尽地分析用于进一步放射标记的最终hMAbBIWA4，且证明有高纯度(SDSPage，等电焦距法)，为含最低内毒素水平的无菌溶液(≤0.01EU/毫克)。对于热原性的试验结果应顺应欧洲药典标准。用于临床前及临床上供应的由制造商来的BIWA4产品质量，由分析结果证明。以99mTc或186Re放射标记hMAbBIWA4是由以下部门进行OtolaryngologyandHead&NeckSurgeryoftheVrijeUniversiteitUniversityMedicalCenter，依据标准操作步骤(SOPs)进行。可保证最终产品的无菌性。在保证流程中测试内毒素的不存在。在UniversityHospitalNijmegen，对病人给药药物时经放射标记的hMAbBIWA4以适量在制备后直接于特殊容器中运送至在Nijmegen的研究中心。在化合物标记及给药至病人之间，24小时是许可的。也见附录16.1.6关于分派各批次至病人。3.4.2.2包装，标记及供应BIWA4由BoehringerIngelheimTheNetherlands供应。其由BoehringerIngelheim，Germany利用GMP制造法制备，纯化过程，且以无菌，无热原溶液(其中含有25毫克hMAbBIWA4于5毫升等张的PBS，pH7.2中)型式充填在小瓶内。天然的小瓶标记物的实例以及经标记的抗体均包括在临床试验手册中。制备一批次共27克hMAbBIWA4，并充填至小瓶内。在B级证明的VrijeUniversiteitUniversityMedicalCenter，Amsterdam的核子实验室中进行99mTc或186Re的hMAbBIWA4标记。3.4.2.3贮存条件未标记的hMAbBIWA4必须贮于医院药局的有限接近区内以供研究，且在监视温度+2℃和+8℃之间。3.4.3分配受试者至处理组别的方法使用非任意方式。病人是依据纳入序列分配至不同的剂量组别。3.4.4研究中剂量的选择3.4.4.1BIWA4剂量的选择A部分由于hMAbBIWA4之前未曾给药至病人，因此在开始RIT试验前基本上要告知有关其安全性及生物分布。其生物分布可能与用于靶向肿瘤的MAb的剂量非常有关，因此需小心地考虑。在以低亲和力抗-CD44v6mMAbU36及高亲和力抗CD44v6mMAbBIWA1进行的MAb蛋白质剂量阶梯式扩大研究基础上，可预期到最适宜剂量是在25-100毫克范围内，以50毫克对mMAbU36而言是最适宜的。为了证实此剂量对于hMAbBIWA4的中等亲和力也是适当的，以及为了在肿瘤摄入的差异性上获得最初资讯，在25，50及100毫克总hMAbBIWA4时评估生物分布，并在这些剂量水平各自处理三位可评估病人。所有可评估病人接受2毫克hMAbBIWA4标以20毫居里99mTc的单一静脉内输注，在给药前以放射校正系统检测。计划接受25毫克，50毫克或100毫克的病人，分别接受23毫克，48毫克或98毫克未标记的hMAbBIWA4，加上此2毫克hMAbBIWA4，其标以20毫居里99mTc。B部分中BIWA4剂量的选择在理论基础上50毫克的hMAbBIWA4经估计是最适于发展的。进行此研究的A部分，以证实在三个受试的试量水平下(25毫克，50毫克及100毫克)肿瘤对hMAbBIWA4的差别性摄入。可预期，肿瘤的摄入(以每公斤注入剂量的百分率表示，％ID/公斤)，且对这三个剂量而言，肿瘤对非肿瘤的摄入比率不会有大的差异。若是如此，用于研究B部分中的hMAbBIWA4剂量为50毫克。然而，若在这些剂量水平间有临床上相关的差异，即其较偏爱这一水平甚于其它水平，则应选择有最佳生物分布型式的这一剂量水平。在此例中，临床上相关的差异可定义为肿瘤(肿瘤摄入的平均值)对骨髓摄入比例(骨髓摄入平均值＝细胞部分及上清液)超过50％的差异。最后依据A部分的结果，所选择的剂量为50毫克hMAbBIWA4。3.4.4.2照射起始剂量的选择B部分在研究A部分中的选择的hMAbBIWA4剂量，标记以阶梯式扩大的186Re剂量。有报告指出186Re-经标记的小鼠类MAbNR-LU-10的最大耐受剂量为90毫居里/米2，此对厉害地预处理病人而言，而剂量-限制的骨髓遏止作用可在120毫居里/米2观察到。对嵌合型MAbNR-LU-13而言，而识别相同的抗原为NR-LU-10，可逆的骨髓遏止作用发生在60毫居里/米2。在以cMAbU36进行的研究中，在VrijeUniversiteitUniversityMedicalCenter中进行，剂量-限制的骨髓遏止作用可在41毫居里/米2时观察到。基于上述结果，以186Re-标记的hMAbBIWA4型式给药20毫居里/米2的放射剂量，可视为是安全的起始剂量。剂量以10毫居里/米2的增加幅度阶梯式扩大。在较低剂量水平时纳入二个可评估病人。当依CTC可观察到2级以上的药物相关毒性时，每个剂量水平处理最少三位病人。在使病人进入下一个较高剂量水平前必需要确定的是在进行的剂量水平时不会经历到剂量限制毒性(DLT)，定义为药物-相关的CTC3级非血液学毒性，或药物-相关的CTC4级血液学毒性，排除无适度止吐剂治疗的恶心及呕吐。就此目的而言，在此进行的剂量水平时对所有病人应有足够长时间的观察，以确定有可能诱生的毒性是可逆的。当在进行的剂量水平有一位病人经历到DLT时，则在该剂量水平时治疗的病人数目要增加至总数最多共6位病人。当6人中有1人经历到DLT时，则剂量阶梯式扩大至下一水平。当二位或二位以上病人经历到DLT时，则下一较低的剂量水平扩大(若先前未做)至所有6位病人以确立MTD，及用于II期的安全建议剂量。原先已有计划，即在该剂量水平有可接受毒性时(不到二位病人有DLT)，可加入额外的病人不但接受此剂量，还有阶梯式的较低的第二剂量。因为连接子的改变，此计划没有继续进行。MAG3将由MAG2GABA-TFP替代，此为可比得上的连接子，但有更方便的连接步骤。以MAG3进行的本发展计划已完成。另外对186Re-BIWA4第一次给药有反应且可耐受的病人，是适合50毫居里/米2186Re-BIWA4的第二剂给药的。3.4.5各受试者剂量的选择及时机3.4.5.1剂量及处理程序研究者被许可可在任何时间给药试验药物。然而，放射标记及给药间的经过时间应不超过24小时。3.4.6盲试验(blinding)此为一种开放式不受控的试验。未进行盲试验。3.4.7先前及伴随的治疗或步骤3.4.7.1救援药物及额外的处理过敏性反应被视为是最严重的潜在副作用，且可要求抗体输注立即停止，且开始适合的救援检测。应注意的是在触及处应有救援设备；抗组织胺，皮质类固醇及肾上腺素。经历到此型不良反应的任何病人均不可接受额外的单克隆抗体。许可病人接受其他的处理，或为研究指示或为不相关的疾病，只要符合纳入及排除准则。所有伴随的治疗均必需记录在CRF中。在严重的血液学毒性情况下(CTC4级)，为缓解骨髓毒性细胞因子的介入或其他方法是许可的。3.4.7.2限制额外的化疗或放射治疗是不许可的，且在纳入研究前4周以上，最后的化疗或放射治疗应已停止。所有先前的化疗及放射治疗要记录在CRF上。3.4.8治疗顺应性研究药物以单一静脉内输注型式给予。以药物动力学评估及放射免疫闪烁照相显影确认顺应性。3.5效力/临床药理学及安全性参数3.5.1效力/药效学以及安全性检测评估及流程图流程图A部分此研究在A部分时进行，且个别的时间详述于下示的流程中。研究说明示于下段落表3.5.11流程图A部分以99mTc-标记的hMAbBIWA4进行生物分布研究*预输注的评估应在确实输注前不超过3周进行。x1血样是测试下列葡萄糖，钠，钾，钙，氯化物，肌酸酐，总蛋白质，白蛋白，血清谷草转氨酶(sGOT)，血清谷丙转氨酶(sGPT)，碱性磷酸酶，γ谷胺酰基转肽酶(GGT)，胆红素，尿素，尿酸，甲状腺刺激激素(TSH)，血红素(Hb)，血细胞比容(Ht)，平均红细胞体积(MCV)，网织红血球，白细胞，嗜中性粒细胞，谱带(bands)，淋巴细胞，嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞，单核细胞及血小板，在筛选访视或在输注前1天，于21，48及144hrsp.i.及输注后六周。x2HAHA在血清样品中评估，所述血清样品得自筛选访视，于1周(144hrs)及六周p.i.后。x3生命体征的评估，在筛选访视，输注前，输注后10，60及120分钟及6周后。x4全身扫描在输注后及21hrsp.i.立即进行。x5SPECT扫描及平面扫描在21hrsp.i.时进行一次。x6进行药物代谢动力学的血样得自输注前，输注结束时，在5，10，30分钟1，2，4，16，21，48，72及144hrs输注结束后及六周p.i.，抽出血样进行酶联免疫吸附分析(ELISA)及检测放射活性(详情见9.5.4.1)。尿液收集在第一个24小时中的0-4小时，4-8小时，8-12小时及12-24小时，及在24小时中的血样，而余下时间宜到48小时p.i.。x7可溶性CD44v6测自血清样品，其得自输注前，在21，48及144hrsp.i.，及六周p.i.。6六周。B部分进行研究且个别时间示于下流程图中。个别的检查在以下段落有更详述。表3.5.12流程图B部分以186Re-标记的hMAbBIWA4进行剂量阶梯式扩大研究*输注前评估在确实输注前不超过3周进行。x1血样用于测试葡萄糖，钠，钾，钙，氯化物，肌酸酐，总蛋白质，白蛋白，sGOT，sGPT，碱性磷酸酶，GGT，胆红素，尿素，尿酸，TSH，Hb，Ht，MCV，网织红细胞，白细胞，嗜中性粒细胞，谱带(bands)，淋巴细胞，嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞，单核细胞及血小板，在筛选访视时或在输注前1天，于21hrsp.i，48hrsp.i.，及144hrsp.i.，于2-6周p.i.，至少每周获取安全性血样样品。x3评估血清样品中的HAHA，所述血样品得自筛选访视时，在输注后144hrs及六周。x3生命体征评估在筛选访视时一次，输注前，在输注后10，60，120及240分钟及6周后。x4全身扫描在p.i.立即进行，于21，48，72，144hrsp.i.，及视所需在二周p.i.进行。x5平面扫描在21、48(视所需)、72、144hrsp.i.进行及视所需在二周p.i.进行。SPECT扫描在72小时p.i.进行。x6行药物代谢动力学的血液样品得自输注前，在输注结束时，在输注结束后5，30分钟；1，2，4，16，21，48，72，144，240及336hrs。抽出血样以行ELISA，并可检测放射活性。尿液收集于前24小时期间自0-4小时，4-8小时，8-12小时及12-24小时收集，而其余时间直到96hrsp.i.收集24小时的样品。x7检测自血清样品的可溶性CD44v6，所述血清样品得自输注前，在21，48及144hrsp.i.及六周p.i.。x8疾病评估每6周重复直到疾病进展(progression)或无法追踪。做基线水平的胸CT，且在追踪时若有异常时可重复之。3.5.1.1放射免疫闪烁照相法及剂量学得自放射免疫闪烁照相(RIS)的数据，于A及B部分定性呈现(即在肿瘤，骨髓，肝，肺，肠，肾及另外的器官中的摄入，以低、中或高表示)及于B部分定量表示。于定性评估时，评定的等级转成数字(0为无摄入，1为低摄入，2为中度且3为高度摄入)。平均数值计算出来并示出。于B部分，RIS结果的定量表示是采用剂量学估算，如策略5.1.4段落中所列，并包括有以下参数·在特定时间点时的确实器官活性，以MBq表示。·在器官中放射活性的滞留时间，以小时表示。·吸收的(放射)剂量，以mGy/MBq表示。·有效(放射)剂量，以mSv表示。关于剂量学分析的详述可见于剂量学报告(2001年11月21日)。e)放射免疫闪烁照相步骤用于A及B部分的方法说明，且时间点示于下段中A部分利用大视野，双头γ照相机，其配备有低能量视准仪，可在输注后立刻，以及在21hrsp.i.取得数据化的全身影像(前后(s.p.)及后前(p.a.))。取得头及颈部于21hrsp.i.的平面及SPECT影像。也取得校准源。贮存以上数据以供定量分析。B部分以大视野，配备有低能量视准仪的双头γ照相机，于给药于放射性免疫偶联物后立刻，以及在21，48，72及144小时后取得数据化全身影像(a.p.及p.a.)。另外头及颈部的平面影像可在21，48(视所需)，72及144hrsp.i.取得。视所需另外的影像(全身及平面)可在p.i.二周后进行。校准源(即一份有注射剂量已知部分的溶液，并置于10毫升小瓶内)嵌入一个Adams幻象内，其在全身扫描时需置于病人双下肢下方之间。校准源的最初活性必须是100-200Mbq186Re，且此源头在所有全身显像研究中均要采用。也要报告能量-窗及高峰设定，扫描速度，扫描长度，扫描日期，扫描开始的时间及期间。也要测量出颈及腹的前至后厚度，而病人在扫描台上呈仰卧位置。在各显像期间，必须取得前方及平面静态影像，且就在此影像之前或之后，必须在Adams-幻象中的校准源取选一个静态影像。在72hrsp.i.必须进行颈部的SPECT研究。也必须报告用于重构的方法，以及有切断频率的滤镜功能。单一光子发射电脑化断层法(SPECT)利用配备有低能量视准仪的双头旋转式γ照相机，可取得SPCET影像。探测需至少30分钟。20％的对称窗集中在137keV光子峰处。平面及SPECT数据探测参数平面显像包括以下的最低要求矩阵128×128(详细的)或256×256(全身)及最少400000计数，最大的探测时间为10分钟以求详细，及60分钟应用于全身。SPECT显像包括以下的最低要求64个影像，矩阵尺寸64×64，360度环绕轨道，每个角度60秒探测。数据的分析在21hrp.i.前方全身影像，重点的直角区域(ROI′s)必须围绕着全身描出，并围绕着校准源。同样的不规则的ROI′s围绕着累积着186Re的器官(如肝，脾及左肾)，且围绕着肿瘤也必须描出来。必须描出一个或一个以上具代表性的背景区域。这些区域要反映出后方影像。原先是要描出在后方影像中围绕着骶骨的ROI。但在此试验中并未进行此计划。所有区域必须保存在电脑内，以在其他时间点上于影像上投影出这些ROI′s。也要报告像素数目，以及在各区域中每个像素的计数，所有影像时间点时，各区的计数量，必须以数据化方式报告在试算表(spreadsheet)中。器官中吸收剂量的计算由前及后影像ROI′s中的几何平均计数中，估算出器官，肿瘤及整体的活性量。当有指示时，要应用背景及衰减校正。如原先所计划的，在尿液中的活性并不用来估计在膀胱中的吸收剂量。反之，要使用动态膀胱模型。在器官内及在体内其他部位的滞留时间均要估算，且输入在MIRDOSE3程序中。必要的品质控制试验平面显像每周在核子医学部门进行例常的品质控制1)100M冷光表(floodtable)。2)外来的57Co灌满低能量视准仪，每周要进行。SPECT显像SPECT显像系的品质控制需包括旋转决定中心。断层照相处理针对断层照相重构，使用斜波滤镜于滤过的反向投影演算中。数据贮存所有的平面影像及断层照相数据必须永久保存在磁片或光碟内。于断层照相研究中，原先投影的影像及重构的研究均要记在一个后援录影带内。影像及报告的拷贝对所有病人，均需所有相关影像，病理学及手术报告的备份。也需要MRI及CT报告的拷贝备份。3.5.1.299mTc-标记的hMAbBIWA4的活组织检查生物分布(A部分)进入研究A部分的病人，在输注入经放射标记的hMAbBIWA4后48小时进行手术。取出手术待检品中来自肿瘤位置及来自正常组织的活检样品。之后进行全身麻醉并取出骨骼活组织待检品及骨髓吸出物。离心骨髓吸出物以评估在上清液(血浆)及沉积物(细胞部分)的放射活性。所有的活组织待检品均称重，再测出99mTc的量。将％ID/公斤肿瘤与％ID/公斤正常组织比较，以评估出放射活性至肿瘤的特异摄入。CD44v6抗原表达以免疫组织化学评估，利用恒冷箱的切片，其先与mMAbBIWA1共温育，再与抗-小鼠免疫球蛋白G(IgG)第二试剂温育。手术待检品及活组织检品再以组织学/细胞病理学方式检查。手术待检品及生物分布的评估在接到手术待检品后，以下列次序处理1.对待检品照相。Polaroid由前方而幻灯片由前及后。2.评估手术待检品的大小。3.取出原发性肿瘤，疑似淋巴结的进行活组织检查，且若有可能取出手术待检品中的正常组织，如正常粘膜，正常淋巴结，脂质及肌肉。所有的活组织均称重，且测出99mTc的量。所有数据转化成注射剂量百分率/公斤组织。将％ID/公斤肿瘤与％ID/公斤正常组织比较，以评估放射活性至肿瘤的特异摄入。4.接下来待检品移至一块板上，并以甲醛4％固定至少36小时。5.在切下胸锁乳突肌(有高放射密度的结构)后，制作待检品放射图以示出所涉及的淋巴结的实际大小及所在。此放射图在制作同时，将待检品浸入96％乙醇中，其有如同脂质的相同X-光吸收作用。6.以X-射线观察到的所有结节，均示出在Polaroid上及待检品放射图上。7.由手术待检品的检查及由X-光所见的所有结节均自待检品中切下。8.所有在肉眼下呈阴性的结节完全处理以进行显微镜检，并评估单一切片。而所有肉眼下呈阳性结节，则制作二个以上的薄片。记录肿瘤坏死存在或不存在的肉眼下证据。9.再者，记录所包围的结节数，及含有肿瘤结节的数目，位置及淋巴结水平(依MemorialSloanDettering癌症中心的分类)。3.5.1.3肿瘤反应(B部分)对于放射免疫治疗的效力参数是肿瘤反应。肿瘤反应以肿瘤检测评估，如临床上所评估和/或可利用CT，MRI或骨骼闪烁照相检查。评估依据WHO的反应标准而行。见策略中附录VI(R96-0941)。3.5.1.4身体检查在进行研究之前，各病人的疾病状态以ENT检查评估(包括触诊)且肿瘤位置利用CT或MRI检查。每个颈部侧均描述所有头及颈部的损伤。触诊所有病人在基础时由耳鼻喉科医师/头及颈部外科医师检查。此临床检查可评估在头及颈部区域所有触及淋巴结的数目，大小，位置及移动性。淋巴结的特性描述如下未被怀疑的，被怀疑的或有肿瘤浸润。颈部淋巴结的状态，在诊断时依UnionIntemationaleContreleCancer(UICC)对分阶段肿瘤(TNM)的肿瘤结节转移系统来分类。放射学检查依肿瘤位置之所有，需下列一种以上的检查CT、MRI、骨骼闪烁照相术。肿瘤侵入头和颈部区域时MRI通常是优选的。在有骨骼伤害的例子中，以CT为较佳。于B部分，在基础时所得的所有放射学疾病评估参数，在输注后六周重复，且每六周重复直到进展或失去追踪为止。对于进入研究B部分的病人，在基线取得胸部CT，且若在胸部有肿瘤损伤时则在追踪时重复。超声波也可作为肿瘤显影的另一技术。对检查而设的准则如下原发肿瘤/局部-区域性复发对于加入研究A部分的病人，以及有局部-区域性复发的病人(B部分)，必须进行头及颈部区域的CT扫描和/或MRI。电脑断层照相法头及颈部区域的电脑断层照相法动态式CT优于涡状CT。然而，对于无法合作的病人，涡状CT可能有助。病人必须以仰卧位置检查，颈部略过度伸展，头固定且肩膀放松并向下推。病人要安静地呼吸，使用腹部而非胸部肌肉。欲扫描的区域由侧面投影所做的最初概观决定。扫描平面需要与声带平行。例常使用连续的三个毫米切片。显影必须由颅骨基部(skullbase)至上纵隔。磁共振影像待检测的病患仰卧，将头部轻微地过延展并固定头部，在检测期间需轻声呼吸并运用腹肌而非胸肌。得至适当显现颈部剖面并评估主要损害程度及扩张的淋巴结的影像。需得到自颅骨基部至上纵隔的影像。远处转移对于参加研究B部分的所有病人，进行基线胸部的CT扫描。视所需进行额外的检查以观察转移，如骨骼闪烁照相法或腹部CT。胸部CT可得涡状CT-扫描。病人以仰卧位置检查，且手臂抬高过头。要安静地呼吸，使用腹部而非胸部肌肉。病人扫描由肺正上方至肾上腺平面。必须在纵隔及肺定位中照相显影。腹部CT可得涡状扫描。病人以仰卧位置检查，且手臂抬高过头。病人必需安静地呼吸。所有病人使用口服造影剂。欲扫描区域由横隔膜上方至耻骨联合。影像必须在腹部及肝定位中照相。骨骼闪烁照相法在静脉内输注最大600MBq的99mTc标记的HDP/MDP后，要求病人消耗足够的流体及频繁的排泄。输注后3小时可得静态概况一个全身的概况，且若必要时3个以上的详细概况。可疑的损伤处需以CT和/或MRI进行更近的分析。计划依据分别的反应准则，进行骨转移反应报告。并未提供数据。3.5.1.5可溶性CD44v6必须在血清中检测可溶性CD44v6(sCD44v6)。利用可信的酶连接的免疫吸附分析法(ELISA)测定浓度，其以商品化试验套组为基础，并依BoehringerIngelheimDepartmentofPharmacokineticsandDrugMetabolism，Biberach，Germany目前的国际化准则进行。在输注前，21，48及144小时p.i.及输注后六周各取5毫升血样(必须处理成血清)。令血样凝固，并离心制备血清。贮存及运送条件用于ELISA检测的样品置于低温管内，小心地标记使能够唯一地被鉴定，贮存在-20℃下直到放射活性减低(186Re4周，99mTc3天)并送至BIDepartmentofPharmacokineticsandDrugMetabolism，Biberach，Germany，每四周以批次方式运送。血清样品在干冰中运送。3.5.1.6安全性受试者的保护在给药放射标记的单克隆抗体期间及之后，小心地监测所有病人。基于此目的，至少一位检查者在场。实验室评估在以下时间点收集血样以分析葡萄糖，钠，钾，钙，氯化物，肌酸酐，总蛋白质，白蛋白，血清谷草转氨酶(sGOT)，血清谷丙转氨酶(sGPT)，碱性磷酸酶(AP)，γ谷氨酰基转肽酶(GGT)，胆红素，尿素，尿酸，甲状腺刺激激素(TSH)，红血素(Hb)，血细胞比容(Ht)，平均红细胞容积(MCV)，网织红细胞，白细胞，嗜中性粒细胞，谱带，淋巴细胞，嗜碱性粒细胞，嗜酸性粒细胞，单核细胞及血小板。所述时间点为·在筛选访视或在输注前1天，及·在输注后21，48及144小时，·于A部分，在输注后6周，于B部分在研究的2，3，4，5及6周中，至少每周一次(若在毒性情况下则较频繁)。在筛选访视或研究的第1天取得输注前基线实验室评估，限制条件为取得的样品是在经放射标记的hMAbBIWA4输注前不到21天取得，且进行所有必要的评估。所有必要的实验室试验结果必须再总览一下，并在抗体输注前由负责医师检查是否适任。该做法同样可应用至B部分研究的第二次hMAbBIWA4给药。在以下时间点时收集尿液样品，以进行标准的医院筛选(蛋白质，血液及葡萄糖)·筛选访视·输注后一周(144hrsp.i.)·输注后六周在筛选访视及在研究结束时，对有怀孕可能的妇女进行验孕。人类-抗-人类-抗体评估在血清样品中评估HAHA的存在和/或进展。因此在筛选访视时，抗体输注后一周(144hrsp.i.)及六周，采取5毫升血样(要处理成血样)。对于在B部分接受二次BIWA4给药的病人，在第二次给药前要收集额外的HAHA待检品。血清水平以可靠的ELISA方法评估。令样品凝固然后再离心制备血清。贮存及运送条件用于ELISA检测的样品置冷温管内，小心地标记使能够有唯一的鉴定，贮于-20℃直到测及放射活性降低为止(186Re4周，99mTc3天)且每四周以批次方式送至BIDepartmentofPharmacokineticsandDrugMetabolism，Biberach，Germany。血清样品必须以干冰方式运送。人类抗人类抗体水平的任何提高，均逐病历小心地与病人可能的副作用相对比。收集此数据，并在研究过程中进行追溯性分析。不良作用所有的不良作用均报告在CRF中。所述作用依据USNationalCancerInstituteCTC(NCI-CTC)2.0版本分级(此文件版品下载自以下网址http//ctep.info.nih.gov/CTC3/ctc.htm.)所有的SAEs均需报告。免疫原性及毒性在进行此试验前，关于hMAbBIMA4安全性及免疫原性方面并无人体方面的数据资料。在先前以亲代小鼠抗体BIWA1进行的研究中，并未遇到临床上显著的毒性。而裸hMAbBIWA4抗体单独地并未预期有毒性(于体外无抗体依赖的细胞-介导的胞毒性(ADCC)效应物功能；并未干扰预期的抗原-表达细胞的增殖作用)。有证明指出，hMAbBIWA4可安全地给药至小鼠(异种移植研究)及猴子(毒性研究)。在三个局部毒性研究中可证明良好的局部耐受性。小鼠及嵌合性MAbU36(抗-CD44v6-表位，有明确的重叠表位特异性)在HNSCC病人中目前十分安全；在以cMAbU36进行的I期剂量-阶梯式扩大RIT研究中可见除了骨髓毒性外(由186Re-标记所引起的)并无毒性。对放射标记的hMAbBIWA4的过敏反应可能发生，此在理论上是可能的。单克隆抗体已给药至数百位病人中以供诊断应用。虽然似乎不可能，对静脉内给药BIWA4的可能反应可包括低血压，暂时的发热及发冷，皮疹，呼吸困难，搔痒，恶心及过敏反应。生命体征(血压，体温，脉博及呼吸速率)因此在筛选访视及下列时间点记录输注前及输注后10，60，120分钟及6周后。对于仅参加B部分的病人，在输注后240分钟要记录额外的生命体征。在此研究中使用放射性核素。与γ射线放射核素99mTc有关的放射作用负担(在目前的研究中为20毫居里)和许多例常的核子医学步骤所遇到的类似，且已知是小的。为了将对膀胱及肾的放射曝露减至最少，病人在前48小时内要充分喝水并被要求要经常排泄(在以186Re-标记的抗体输注后96小时)。关于β-及γ-射线放射核素186Re，Breitzetal.(R98-2459)发现186Re-标记的MAbIgG在高度预处理病人中的最大耐受剂量为90毫居里/米2。此研究的目标之一是研究病人中186Re-经标记hMAbBIWA4的毒性，所述病人有局部和/或区域性再复发疾病，且对此无可应用的治疗处理选择，所述病人或者有远处的转移。因为骨髓，甲状腺，肾及肝毒性可能会发生，所以要依3.5.1.6段落所述采血以进行器官功能测试。为了监视体重减少或增加的发生，在输注前第1天及6周后及在筛选访视时记录体重。监视病人局部毒性的发生。任何局部毒性迹象均记录成不良作用。3.5.2检测的适宜性所使用的测定对此类型试验是可充分接受的。3.5.3主要的效力/药效学参数3.5.3.1试验的A部分在试验A部分中所测定的主要效力参数是活组织分布及放射免疫闪烁照相法。如何取得数据的方法描述，示于3.5.1.1及3.5.1.2中。在正常组织及肿瘤中的摄入，于手术待检品的活组织中检测，且摄入以每公斤注射剂量的百分率(％ID/公斤)表示。评估在肿瘤及其他组织中摄入的时程，并与不同剂量的BIWA4比较。3.5.3.2试验的B部分效力的主要参数是放射免疫闪烁照相法及剂量学的分析。3.5.4药物浓度检测/药物代谢动力学在试验的A部分及B部分中，均要测定经放射标记的BIWA4的血液浓度。3.5.4.1样品收集的方法及时机收集病人血样并如下处理在指定的时间点下，于输注位置相反的手臂周边静脉中抽取7毫升血液(3.5毫升于含有EDTA钾盐的管中，另3.5毫升在凝血管内；所要求的毫升量如修正案1所示)(即在给药抗体之前，及输注结束之时，及5，10，30分钟；1，2，4，16，21，48，72小时p.i.及7天p.i.(144小时)及6周p.i.)。输注结束视为t＝0。于试验B部分省去在10分钟及6周p.i.时的血样。反之在240及366小时p.i.收集，如修正案1所示。尿液的收集在48小时期间是在99mTc-标记的hMAbBIWA4输注后，而在96小时期间是在186Re-标记的hMAbBIWA4输注后。尿液收集在前24小时期间是由0-4小时，4-8小时，8-12小时及12-24小时，而其余时间是24小时的样品。计数尿液样品中的放射活性，以测定放射活性的排泄。血样离心以制成血清。在处理前，测出全血中的放射活性。也测出血清中的放射活性。血样的冷藏贮存是必须的，然而样品勿需冷冻。利用由偶联制剂中保留的等份，将注入病人剂量的经称重稀释液制成标准品。依据局部SOPs进行病人样品及标准品的计数。结果记录在CRF适当的段落中。放射核素含量以注入剂量的百分率报告(以每斤血液或血清的％ID表示)。除了计数放射活性外，所有样品均利用HPLC分析来分析免疫复合物的存在。所有样品试管均标记以下资料试验编号，病人编号，样品本质(即血清，血浆或血液)，相对于输注的时间，实际时间，实际的日期及同位素(即99mTc或186Re)。检测各尿液样品的量，并记录且所有的尿液样品标记以下资料试验编号，病人编号，总样品体积，收集间隔，实际的时间，日期及同位素(即99mTc或186Re)所有药物代谢动力学样品的日期，次数及放射活性检测均记录在CRF中。供ELISA检测的血浆样品转移至低温管内，小心地标记以便能唯一地鉴定，贮于-20℃下直到放射活性减低为止(186Re4周，99mTc3天)，并送至BoehringerIngelheimDepartmentofPharmacolineticsandDrugMetabolism，Biberach，Germany每四周一批。血浆样品在干冰上运送。3.5.4.2分析性测定血浆样品以可靠的ELISA方法，在BoehringerIngelheimDepartmentofPharmacokineticsandDrugMetabolism，Biberach，Germany检测。样品的放射活性计数在全血，血清及尿液中由研究者进行。3.5.4.3参数及评估以下的药物代谢动力学参数，利用WinNonlin3.1Professional(PharsightCorporation，MountainView，CA)测定自全血，血浆，血清水平，影像资料如下述主要的药物代谢动力学参数为可观察到最大药物浓度的时间点(Tmax)，所观察到的最大药物浓度(Cmax)，在浓度-时间曲线下的面积(AUC)0→∞，最终消除半衰期(t1/2)，分布体积(末期及预测的稳态)，总体清除率(CL)，及平均滞留时间(MRT)0→∞。药物代谢动力学分析的主要目的为在给药单一剂99mTc-标记的(A部分)及186Re-标记的hMAb(B部分)BIWA4后，比较及测定总放射活性及免疫反应性的hMAbBIWA4的特质。从显像资料及血液处置(disposition)资料中，可估算出在研究中到达肝及脾的所注射放射活性的比例。为达到此目的，使用WinNonlin套装软件，在静脉内给药后，对免疫反应性hMAbBIWA4及总血液放射活性水平的血浆浓度vs.时间图进行非-空间区分的药物代谢动力学分析，其为时间函数关系。结果以总结性统计数值报告之。3.5.5药物代谢动力学/药效学相互关系最初意欲以空间区分的药物代谢动力学模式来说明人体内186Re-经标记BIWA4的分布及代谢。意欲组合来自下列的数据资料BIWA4血浆水平，全血及血清放射活性检测，来自全身影像及重点特殊区域的放射活性，所给药的186Re-经标记BIWA4剂量，未经标记的BIWA4的剂量，可溶性CD44v6水平，及在输注前经放射标记抗体的评估。结果以总结性统计数值报告之。然而，因变异性太高以致无法成为合理的模式。3.5.6主要的安全性参数最大可耐受剂量的决定及安全性评估，是试验的B部分主要终点。所做的测定述于3.5.1.6。3.5.6.1毒性限制剂量及最大耐受剂量将DLT定义为与药物有关的CTC3级非血液学毒性，或与药物有关的CCT4级血液学毒性，排除在无适度止吐剂处理下的恶心及呕吐。MTD定义为六位病人中不到二人发展成药物-相关DLT的剂量水平。3.6数据品质保证此试验大体上依据良好临床实务原则进行，如在适合的调控及在公司标准操作步骤(反映这些调控)中所特示的。在整个研究过程中，来自BoehringerIngelheimTheNetherlands的代表接触和/或访问研究地点以追踪研究的进展。就数据审核目的，研究者与访视者有频繁的接触，包括来源文件与病例报告的比较，及药物计量查核。研究者或其设计者在这些访视期间必须是对BoehringerIngelheimTheNetherlands代表而言是可接触到的。充分填写的CRFs有规律地来收集。数据以重复-数据方式输入内部。进行数据的总览，且难以采用的可对研究者执疑。严重的不良作用，依据在策略中及CRF中的准则，以及依据BoehringerIngelheimSOPs进行报告。3.7在策略中所计划的统计方法及样品大小的确定3.7.1统计及分析计划3.7.1.1统计设计/模式用于此试验的设计是常用于I期肿瘤学试验的。A部分此I期试验的A部分是一个未受控制，依序提高测量的团体研究，可在有头及颈部进展的鳞状细胞癌病人中测定单一输注99mTc-标记的hMAbBIWA4后的安全性，耐受性，生物分布及药物代谢动力学。在此研究部分，使用三个hMAbBIWA4剂量水平，且计划在各剂量水平采用三位病人。所有病人有已证实的头及颈部肿瘤，且预定要手术。B部分此I期试验的B部分为一个开放式未受控的剂量阶梯式放大研究，以在有头及颈部进展的鳞状细胞癌病人中测定186Re-标记的hMabBIWA4单一输注后的安全性，耐受力，MTD，药物代谢动力学及初步治疗作用，且此病是无可采用的可治愈的处理选择。在此研究部分，放射剂量是阶梯式扩大的。二位病人以剂量水平处理，其中所见的毒性＜2级CTC毒性。若可见≥2级毒性，则每个剂量组处理的病人至少有三位。安全性及耐受力评估(A+B部分)就实验室参数，生命体征，HAHA的发展及不良经历的发生率，来评估此研究的安全性及耐受力。结果就个别的各剂量水平，以及就整体平均值报告之。生命分布评估(A部分)在固体组织中的99mTc-标记的hMAbBIWA4分布，以放射免疫闪烁照相法(见3.5.1.1)及经由活组织待检品放射活性的检测(见3.5.1.1及3.5.1.2)可评估。由于每个剂量水平最多仅3位病人加入，因此仅可能有说明式统计。免疫闪烁照相显影评估(A+B部分)在给药经放射标记的抗体后，于特定时间点时可取得免疫闪烁照相显影(见9.5.1.1)。同样的仅有说明式统计学可被应用。药物代谢动力学评估(A+B部分)以下的药物代谢动力学参数，自血浆或血清，尿液水平及影像资料中决定，如下文所述主要的参数(非-空间区分的)Tmax，Cmax，AUC(0-无限大时间)，最终消除的半衰期，分布体积(末期Vz及预测的稳态Vss)，CL及MRT(0-无限大时间)。放射活性随时间的累积尿液排泄率可由总尿液排出量决定。次要的参数(空间区分的)计划发展空间区分的药物代谢动力学模式，以定义出人体人186Re-标记的hMAbBIWA4的分布及代谢。此模式可比较来自血清及尿液放射活性检测而来的数据，来自全身影像及重点特异区域的放射活性，所给药的186Re-标记的hMAbBIWA4的剂量，hMAbBIWA4的稳定一负荷(cold-loading)剂量，可溶性CD44v6水平，及输注前经放射标记的抗体的评估。结果经计划定在各剂量水平下分别报告，且利用总结性统计学。治疗效力评估(B部分)肿瘤反应是治疗效力的参数。肿瘤反应依据WHO准则来评估。所有测及肿瘤损伤最大垂直直径的产物的总和，是肿瘤反应的主要参数。对于骨胳损伤反应的评估，此中有不同的准则。3.7.1.2无束缚力的及不同的假说在此试验中所有的分析本质上均是描述及探究性的。任何统计上的试验，其进行只为提供一个统计框架，由此可观察结果并对计划进一步的研究提供帮助。并不预知任何正式的统计推论，且因此并未进行统计学检验。3.7.1.3计划中的分析区别二个群体·意欲治疗的亚群(subset)包括所有病人，这些病人接受了经放射标记的hMAbBIWA4的输注，且在基线后的数据可供使用。·完全策略(per-protocol)的亚群包括可评估的病人。若以下准则符合时，则此病人可谓可评估的A部分1.符合意欲治疗亚群的准则。2.就不良作用，生命体征及安全性血液及尿液样品而言，其追踪是适当的。3.在二种所进行的分析中，有至少一者的免疫反应性部分大于60％。4.适当的活组织检测及闪烁照相影像可运用以评估生物分布。B部分1.符合意欲治疗亚群的准则。2.就不良作用，生命体征及安全性血液及尿液样品而言，其追踪是适当的。3.在二种所进行的分析中，有至少一者的免疫反应性部分大于60％。4.反应若在基线上可得适当的肿瘤测定值，及若病人被追踪达至少六周，则对反应而言病人是可评估的。若在此六周期间内可观察到疾病的进行，则病人对反应而言也是可评估的。主要的分析就完全策略亚群进行主要的分析。无一可评估病人被替代。对A部分而言，因此计划可评估的亚群含有9位病人，且意图治疗的亚群由至少9位病人组成。对B部分而言，病人数目依所遇到的毒性而定。对于毒性可被评估但对反应则不能被评估的病人并不被替换。药物代谢动力学数据药物代谢动力学数据的分析由Dr.ThomasRMacGregor，BoehringerIngelheimPharmaceuticalsInc.RidgefieldCT，USA进行。药物代谢动力学分析的主要目的有1.为了测定及比较在给药单一剂99mTc-标记的hMAbBIWA4及186Re-标记的hMAbBIWA4后，总放射活性及免疫反应性hMAbBIWA4的特性。2.为了鉴定hMAbBIWA4适合的稳定-负荷(cold-loading)剂量。3.为了评估186Re-标记的hMAbBIWA4第二剂的性质。4.自影像资料及血液所得资料中，可估计出在研究中间到达肝及脾的注入放射活性的比例。为达成此目的，使用WinNonLin套装软件，在静脉内给药后，在血浆浓度对免疫反应性hMAbBIWA4及总血液放射活性水平的时间概况(呈时间的函数关系)中，进行非空间区分的药物代谢动力学分析。涉及放射活性的所有测定均校正至放射标记部分，其在输注前是与蛋白质结合的且具免疫反应性。所产生的特异药物代谢动力学参数包括Tmax，Cmax，AUC(0-无限大时间)，最终消除半衰期，分布体积(最终期及预定的稳态)，总体清除率，及平均滞留时间(0-无限大时间)。也自总尿液输出量中测定出随时间的放射活性累积的尿排泄率。药物代谢动力学分析的第二个目的是发展出可描述人体内186Re-标记的hMAbBIWA4的分布及代谢的药物代谢动力学模式，但其之所以未达成乃因数据的高变异性之故(尤其是放射闪烁照相资料)。其次的分析其次的分析仅对参与研究B部分的病人意图治疗亚群而进行。次要分析限于关键性终点如反应速率，反应作用期，进展时间。暂时分析并未进行暂时性分析。3.7.1.4遗漏资料的处理在此I期研究中可预期到大多数的资料均可用于分析。若有遗漏数据，最有可能是遗漏原因不与结果有关。并无遗漏资料可归罪。3.7.2样品大小的确定在A部分中，每个剂量水平的三位病人，对于hMAbBIWA4的安全性及对50毫克未标记hMAbBIWA4预期的正确剂量上都可提供某些资讯。在B部分中，六位病人被视为足以决定DLT。表3.7.21，在所有病人群体中，针对DLT某些推测的基础速率，此表呈现出6位病人中有2位或2位以上有PLT被察知的可能性。表3.7.21DLT推测的群体比例来源可能性估算自二项分布的累积分布函数，n＝6且有变化的p′s。由本试验中阶梯式扩大计划，二位或二位以上病人呈现DLT的可能性为至少80％，此若对病人达到DLT的潜在个别可能性为42％或42％以上时而言。3.8研究进行中或计划分析中的变化以下策略中的变化，经由修正案来实施。经由1999年9月1日的No1修正案的实施，可调整血样收集的时间点。在试验中的B部分，输注后10分钟及6周的样品被漏掉，但在输注结束后240及336小时再收集额外的样品。结果是原先的采血程式无法充分适当地涵盖在试验A部分中所观察到的50小时的推测半衰期。共3.5毫升的血液收集在EDTA钾盐管中，另3.5毫升在凝固管中。策略中提及病人在已测定MTD之后，可再给药第二剂的186Re-BIWA4。此步骤由修正案2修饰。当病人对186Re-BIWA4的第一次给药产生反应，在此其并无副作用或已从副作用中恢复且无HAHA抗体，则病人可视为适于第二处理循环。反应定义为疾病稳定(即无变化)，部分缓解或完全缓解。所给药的第二剂始终是50毫居里/米2。由于连接子的改变，试验可在以策略中所述的剂量疗程下于进行第二剂检视前先得出结论。为使有反应的病人无论如何均可被治疗，于是公布修正案2。在达到MTD后，由于连接子的改变，试验已完成及终止。在BIWA4计划的进一步发展中，MAG3可以MAG2GABA-TFP取代。对于非原先所计划的更多时间点，样品可用于sCD44v6的测定。在评估资料及已与试验团队讨论后，可进行以下的改变。由于结果的变异性，仅对骨髓进行％ID/公斤肿瘤对％ID/公斤非肿瘤组织的比例分析。对肿瘤大小的评估亦然。测定是不完全的，因此危害到合理的评估。因此未进行正式分析。4研究主题4.1受试者的特性(disposition)在33位受筛选病人中，三位病人因为给药试验药物前的不良作用而中止试验(表6.11)。此三位病人并不包括在分析中。共有30位病人进入并在此试验中接受治疗。A部分30位病人中有10位包括在A部分中，分别接受25毫克及100毫克99mTc-BIWA4的各有3人，而4人接受50毫克99mTc-BIWA4。在A部分中的所有病人均完成了试验。B部分在B部分中接受治疗的20位病人中有2位因不良作用而中止(二位病人死亡)。三位病人给药第二剂的50毫居里/米2。表6.11病人的特性A部分B部分总和99mTc-BIWA499mTc-BIWA4[毫居里/米2]2.5毫克50毫克100克2030405060BIWA4BIWA4BIWA4受筛选的33进入的3432436530治疗的3432436530完成的3432326528中断的000011002由于AE000011002由于无效000000000由于其他理由000000000来源附录16.1.9.2表1.14.2方法误差大部分的策略违反状况是偏离策略中所提出的血液和/或尿液取样的时间窗(＞±10％)。受影响的病人并不排除在分析之外，但于测定血液、血浆、血清及尿清及尿液浓度时仍采用收集血液或尿液的确实时间。5.效力/临床药理学评估由A部分的结果可证实，50毫克BIWA4的剂量是用于治疗的最适当剂量。由B部分的数据显示，在使用比可观察到DLT的剂量还低的放射剂量时，病人在临床上可由186Re-BIWA4治疗中受益。所测及的BIWA4浓度是与剂量成比例的，而所给药剂量的适度量由肾脏排泄。5.1数据组分析至少接受一剂试验药物的所有病人，均包括在意欲治疗分析中。来自A部分的7位病人包括在完全策略分析中。而B部分中未进行完全策略分析。5.2人口统计学和其他基础特性所有纳入的病人平均龄为56岁(由37至78)。有19位男性及11位女性(表5.21)。A部分中受治疗的三位病人不曾吸烟，而7位为现行吸烟者(19-47)。在8位病人中有报告指出爱喝酒，而2位不饮酒。(表5.21)。B部分中所有病人或为以前吸烟者或现行吸烟者(表5.21)平均35(由10至86)。六位不饮酒，而其余病人爱喝酒(表5.21)。A部分中包括的所有病人，其疾病阶段是可局部手术的，而来自B部分的病人有复发疾病(15位病人)和/或已转移(3位病人)。1位病人有局部无法手术的疾病。有1位病人的资料被遗失。在28位病人中有伴随的疾病或相关的病史报告。(表5.21)。所有病人均需要伴随的治疗。最常用的药物有镇痛剂、镇静剂、乳果糖、H2-阻断剂、止吐剂及抗微生物剂。表5.21人口统计学及基础特性。示出的是年龄平均值。其他数字均表示病人数目A部分B部分总和99mTc-BIWA4186Re-BIWA4[毫居里/米2]2.5毫克50毫克100毫克2030405060BIWA4BIWA4BIWA4n3432436530年龄[平均]45.758.558.757.061.053.057.060.456.4男性/女性2/12/21/21/13/12/15/13/219/11伴随疾病3322436528伴随治疗3432436530吸烟者2410103112以前-吸烟者0002333415饮酒者3320336222纳入A部分的病人在纳入前约1个月即已知疾病的最初诊断，而包括于B部分的病人平均2年前即生病(由0.1至17.5年；表5.22)。A部分病人的Karnofsky分数由70至100。而B部分的病人有70-90的Karnofsky分数(表5.22)。试验B部分中有1位病人据报告诊断出转移。B部分中所有病人均进行先前的放射-和/或化学治疗，而在A部分的病人据报告既无先前的化学-也无放射治疗(表5.22)。顺铂、氨甲喋呤及氟尿嘧啶为最常用的全身性抗癌药)。在自先前手术的13位B部分病人中。有11位先前的手术是根治性的。而A部分中仅一位病人已经历过先前的手术(表5.22)。肿瘤的损伤大小(包括转移)为14毫米2至10304毫米2。原发的肿瘤位置在大多数病人中可被适度地区分出来。在13位病人中，其淋巴结已受感染(表5.22)。表5.22人口统计学及基础特性。示出已知疾病的平均年限及Karnofsky分数。所有其他数字表示病人的数目A部分B部分99mTc-BIWA4186Re-BIWA4[毫居里/米2]2.5毫克50毫克100毫克2030405060BIWA4BIWA4BIWA4n34324365已知疾病年限0.110.080.079.302.131.170.801.16Kamofsky分数9090100807576.78580根治性的手术00022124受感染的淋巴结22023211先前的化疗00013141先前的放射治疗000243655.3治疗顺应性的测定所有药物的给予均在研究者或代表的监督下。收集血液以测定BIWA4的药物代谢动力学。所有病人均有可测及的BIWA4血中水平。5.4效力/临床药理学结果六位病人中有三位在50毫居里/米2的最大耐受剂量下疾病稳定。在试验A部分中已证实50毫克BIWA4剂量，就血液浓度及选择性肿瘤摄入而言是最适宜的剂量。BIWA4的血浆浓度在A部分中，于25毫克至100毫克BIWA4范围中是与剂量成比例的，且高峰在0.9小时，最终消除半衰期是54-74小时于A部分，94小时于B部分。5.4.1效力的分析/药效学5.4.1.1主要的终点(endpoint)效力的主要终点是99mTc-BIWA4于A部分的生物分布。进一步的主要终点于试验的A部分及B部分，分别是放射免疫闪烁照相显影及药物代谢动力学(述于5.4.2)。剂量学仅在B部分进行。A部分中99mTc-BIWA4的生物分布在手术中可得到组织样品，99mTc-BIWA4的摄入以％注射剂量(ID)/公斤组织表示。意欲治疗(ITT)亚群在所有三个剂量组中，于瘤中99mTc-BIWA4的相对生物分析最高，除了病人1(25毫克BIWA4)，病人5(50毫克BIWA4，无肿瘤细胞)及病人9(100毫克BIWA4)。肿瘤中的摄入，于25毫克，50毫克及100毫克剂量组中分别范围由6至17％ID/公斤，5至28％ID/公斤及13至17％ID/公斤。肿瘤摄入的经估算平均比率对骨髓中的摄入，于25毫克，50毫克及100毫克剂量组分别为1.7，2.6及2。(表7.21及7.22)。完全一策略(per-protocol)(PP)亚群在所有三个剂量组中，99mTc-BIWA4的相对生物分布在肿瘤中最高，除了病人1(25毫克BIWA4)外。肿瘤中的摄入，于25毫克，50毫克及100毫克剂量组分别为6至17％ID/公斤，23至28％ID/公斤及16％ID/公斤。肿瘤摄入的经估计平均比率对在骨髓中的摄入，于25毫克，50毫克及100毫克剂量组中分别为1.7，3.2及2.5(表7.21及7.23)。较小的肿瘤大小有更大的摄入倾向，似乎存在于25毫克BIWA4剂量组。而在50毫克及100毫克BIWA4剂量组因为有限的病人数目因此类似的评估似乎不可能(表7.24)。在骨髓上清液(高达17％ID/公斤)及血浆或血液(高达13％ID/公斤)中可观察到高的％ID/公斤摄入，其始终低于完全策略群体中肿瘤的摄入，除了病人1(25毫克BIWA4)外。在皮肤及粘膜中的摄入在完全策略亚群中，始终低于在原发性肿瘤中的摄入。A部分中99mTc-BIWA4的放射免疫闪烁照相显像虽然输注是在肿瘤中直接地并未见放射活性的摄入，在21小时后可记录1.9的中度摄入。放射免疫偶联物的摄入，于输注后立即及于21小时后，在骨髓及肾中似乎都低。在肺中的摄入为低度至中度，而肝则有较高的摄入。于完全策略群体中可观察到类似的型式。唯一的差异似乎是在肾中有较高的摄入，而在肺中为较低，此乃与意欲治疗群体比较而言。B部分中186Re-BIWA4的放射免疫闪烁照相显影在输注后立即，及21，48，72，144及336小时后进行放射免疫闪烁照相检查。在输注后立即几乎观察不到肿瘤中有任何摄入。在肿瘤中的相对摄入似乎是和剂量有关的，且随时间增加于72至144小时后到达中度及高度摄入，但在336小时后下降。于放射活性的生物分布，在骨髓、肺、肝、肾及肠中是类似的，且未显示出相同的剂量依赖作用(除了肠)。再者，放射活性的相对摄入似乎是恒定的或随时间适度下降，且在所有放射活性剂量下是类似的。对大多数治疗组而言，骨髓中的摄入是最低的。5.4.1.2第二次终点效力的第二次终点分别为对B部分治疗的肿瘤反应，及A部分中CD44v6在肿瘤中的表达水平。试验的A及B部分中均测定可溶性CD44v6的表达。A部分中肿瘤的CD44v6表达CD44v6抗原表达的测定数据可应用于七位病人。CD44v6抗原表达，在5及2位病人中分别在超过90％及80％肿瘤细胞中可观察到，而CD44v6抗原表达在4位病人中于超过90％淋巴结转移的细胞中可测及，其中淋巴结可供评估。在所有病人的粘膜中可观察到均质的CD44v6抗原表达。B部分中的肿瘤反应以高达40毫居里/米2186Re-BIWA4剂量治疗的病人，并未经历到临床的肿瘤反应。所有病人经历到进行性的(progressive)疾病。有一位病人由于并发的死亡致使无法评估。六位以50毫居里/米2186Re-BIWA4治疗的病人中有三位发展为稳定的疾病，或在第一次循环后无变化。此三位病人中有二人以50毫居里/米2186Re-BIWA4另一循环治疗，而在第二循环后有进行性的疾病。在试验药物第一次给药后，分别在148天(病人109)及127天(病人116)后可观察到进行性的疾病。有一位以60毫居里/米2186Re-BIWA4治疗的病人在第一次循环后经历了稳定的疾病。此病人在50毫居里/米2186Re-BIWA4的第二循环后进入进行性疾病(在受试药物的第一次给药后173天)。对于对治疗无反应的病人，其进行的整体时间范围由0至55天，平均为约5至6周，和治疗组无关。在A及B部分中可溶性CD44v6在本试验中测定以BIWA4治疗的所有病人的可溶性CD44v6。对于以186Re-BIWA4治疗的病人，在B部分的试验中可溶性CD44v6检测量趋向增加(表7.26)，而对于A部分以99mTc治疗的病人，则并未观察到此种倾向。5.4.2药物剂量，药物浓度，及与反应的相互关系BIWA4的药物代谢动力学，于A及B部分中将分别地呈现，因为放射标记不同之故(A部分99mTc；B部分；186Re)。5.4.2.1关于BIWA4，HAHAs及CD44v6的分析性能利用可靠的分析法分析血浆样品。品质控制样品的分析可产生有高度正确性及精确度的样品。关于样品γ计数的分析性能闪烁晶体在γ计数器中的讯号线性并未测试。其可依据仪器类型来推测，至少在目前研究中所用的能量范围。校正样品显示出每分钟典型的40000-200000计数，相对于背景样品中每分钟少于50-100的计数。每一校正标准品七次测定的精确性完全在2％内。在该精确度下测定血液，血清及尿液，各平行三份检测。血液及血清样品可显示每分钟2000及100000计数间的典型活性。对于放射活性计数，在此并无品质控制样品。校正标准品及由本研究中衍生的样品，其经重复测定的精确性显示出三次测定的精确性至少优于2％。5.4.2.1药物代谢动力学A部分A部分包括有10位病人，其接受由25至100毫克的单一剂BIWA4，并有20毫居里99mTc的固定放射标记剂量。经过短期静脉内输注后，以ELISA检测的BIWA4的血浆内药物代谢动力参数示于表5.4.2.21。表5.4.2.21研究A部分中，BIWA4血浆中的药物代谢动力学参数病人BIWA4tmaxCmax半衰期AUCinfVzCLMRT剂(分)(ng(小时)(微克·小(升)(毫升/分)(小时)(毫克)/ml)时/毫升)1250663444.1387.44.11.07658.022530664067.0534.74.50.77994.832510959053.3542.93.50.76871.0450291490064.91112.34.20.74984.855012115500102.81580.24.70.527135.285051390053.0831.04.61.00371.71050411670083.81461.64.10.570110.0610043050085.02548.94.80.654112.07100173060076.02709.64.00.615110.49100302450044.61708.13.80.97661.1几何平均值25毫克750354.0482.74.00.86373.150毫克291521673.81208.84.40.68997.5100毫克132838366.02276.44.20.73291.1可观察到CmaxBIWA4血浆浓度的增加，且曲线下的面积与给药的剂量成比例(图4及5)。也测定放射标记物(99mTc)的血清浓度，且药物代谢动力学参数示于表5.4.2.2.2。表5.4.2.22研究A部分中血清的99mTc-BIWA4的药物代谢动力学参数病人99mTc-TmaxCmax半衰期AUCinfVzCLMRTBIWA4(分)(％ID/(小时)(％ID·小(公斤)(公斤/分)(小时)剂量公斤)时/公斤)(毫居里)119.0毫居里11752.6644.63376.91.90.03063.8220.0毫居里1028.0855.62151.73.70.04879.1321.4毫居里1039.1127.51445.32.70.07241.5419.5毫居里2931.8431.31432.83.20.07243.8519.1毫居里12132.2939.61934.83.00.05456.3818.8毫居里11428.4142.81620.13.80.06060.81019.3毫居里4140.3143.12247.12.80.04262.3619.3毫居里12030.4545.31946.53.40.05465.2719.8毫居里7735.7936.01628.63.20.06051.1918.3毫居里23831.9435.51805.62.80.05450.6调和平均值38.7几何平均值57.934.539.41898.03.00.05356.5在A部分研究的三个治疗组中，于静脉内输注后以ELIS测血浆中BIWA4的几何平均半衰期，范围由54至73.8小时。相同样品，99mTc-放射标记的BIWA4几何平均半衰期，于血清中为较短的39.4小时，而于血液中为46.4小时。在二个平均估计值间的差异可归因于因放射活性分析限制所致的BIWA4可能的较长取样时间。放射活性排泄至尿液中，其所收集的量示于表5.4.2.23。由于在48小时期间不完全的收集(即因为不同的收集时段，所累积的数据将无法始终是可比较的)，所以对此尿液排泄数据并无进一步的评估。对于有完全的48小时收集的六位病人而言，所收集的放射活性平均量为最初剂量的10％。5.4.2.23A部分中排泄至尿液(以最初剂量的百分率表示)的放射活性量(99mTc)收集间隔(小时)病人0-44-88-1212-2424-48累积量(％ID)12.8010.135.08n.a.n.a.18.0121.940.970.523.093.239.7530.291.441.19n.a.n.a.2.9241.681.421.951.142.218.4052.201.601.023.963.9812.7681.292.450.883.673.0011.2910n.a.n.a.n.a.n.a.n.a.62.551.591.801.892.009.837n.a.3.14n.a.1.793.138.0691.543.340.001.052.318.24n.a.＝无可应用的，无数据可采用B部分B部分包括有20位病人，接受50毫克BIWA4，具有不同的186Re-BIWA4放射标记剂量，由20-60毫居里/米2。三位病人接受二次静脉内输注，而另17位病人只接受单一治疗疗程。用图表说明，各位病人及在二次接受186Re-BIWA4的三位病人中，血浆BIWA4浓度及血清放射活性浓度间是一致的。此由图解观察到的一致性，当数据作图时(非空间区分地评估)与放射活性较长半衰期的理解相反。186Re-BIWA4放射活性部分122小时的几何平均半衰期，较由ELISA所测定的BIWA血浆半衰期-94小时还长。通过将所给药的放射活性合计而对药物代谢动力学参数进行的分类(表5.4.2.26及5.4.2.27)显示，在给药放射活性增加时有曝露时间延长的某些倾向，但由于各剂量组的受试者数目太小以致无法有任何一致的结论。表5.4.2.26将所给的放射活性合计而进行分类，求血浆BIWA4药物代谢动力学参数的几何平均值186Re剂量nCmax半衰期AUCinfVzCLMRT(毫居里/米2)(ng(小时)(微克·小时(升)(毫升(小时)/ml)/毫升)/小时)20212160106.512176.341.1130.33041523986.213994.435.7116.24031112190.612015.441.7125.1509*1298292.410556.347.4117.46051192799.89397.753.2115.9*包括接受二剂50毫居里/米2的病人表5.4.2.27将所给的放射活性合计而进行分类，求血清186Re-BIWA4药物代谢动力学参数的几何平均值186Re剂量nCmax半衰期AUCinfVzCLMRT(毫居里/米2)(％ID/(小时)(％ID·小(公斤)(公斤/(小时)公斤)时/公斤)小时)20230.88114.432965.010.030154.630440.0998.843653.270.023134.540328.82126.438564.730.026172.4509*40.22123.341824.250.024162.560432.10145.234936.000.029185.5*包括接受二剂50毫居里/米2的病人5.4.2.2药物代谢动力学/药效学分析并未进行药物代谢动力学/药效学分析。5.4.3统计/分析如原先所计划的进行分析。详情述于3.7.1.3。5.4.3.1初次终点(primaryendpoint)无可应用的。5.4.3.2二次终点(secondaryendpoint)无可应用的。5.4.4药物-药物及药物-疾病之间的相互作用并未进行关于药物-药物或药物-疾病交互作用的试验。5.4.5副主题的呈现详见6.4.2.2及6.4.2.3段落。5.5效力/临床药理学结论A部分由A部分的结果，以血液浓度及组织摄入水平为基础，可证实50毫克BIWA4的剂量是治疗最适宜剂量。由放射闪烁照相法及活组织检测所评估的分布，可知在几乎所有的例子中，和其他组织比较下肿瘤中是最高分布的。在肿瘤中放射活性的摄入随时间而增加。CD44v6分别在原发性肿瘤及淋巴结转移肿瘤的超过80％及90％的细胞表达，且在所有获得的粘膜待检品中表达。在99mTc-BIWA4给药前及之后，可溶性CD44v6的量似乎是恒定的。所测得的BIWA4浓度，在25毫克至100毫克BIWA4范围中是与剂量成比例的。所给药剂量的中等量经由肾脏排泄。对所有给药组而言，在尿中排泄的％ID是类似的。B部分由B部分得来的数据显示，在MTD时病人可由186Re-BIWA4的治疗中受益。五位以60毫居里/米2治疗的病人中有一位有稳定的疾病。六位病人中三位在50毫居里/米2的最大耐受剂量时疾病稳定。而接受第二剂50毫居里/米2的这些病人中直到127至173天之间才有进展(progression)。放射免疫闪烁照相可显示出肿瘤组织内放射活性的摄入。在不考虑剂量的情况下，生物分布在其他组织中是相当的。在肿瘤以外的组织中，剂量学分析未显示出令人意外的高吸收剂量，但睾丸除外。然而，所观察到的睾丸剂量对于破坏生育力的相关性目前是未知的。对于以186Re-BIWA4治疗的病人，所测及的可溶性CD44v6含量有增加的倾向。BIWA4的血浆浓度在0.92小时时为高峰，且由ELIS测定得知，对BIWA4而言，抗体以94小时的几何平均半衰期消去。对于50毫克BIWA4剂量组而言，Cmax及AUC数值(ELISA测定)和在试验A部分中所得的类似。6安全性评估剂量限制毒性发生在60毫居里/米2的剂量时，而50毫居里/米2186Re-BIWA4的剂量转变成本试验中的最大的耐受剂量。剂量限制毒性为来自骨髓的不良作用，即血小板减少症及白细胞减少症。6.1曝露程度在A部分治疗的十位病人，均给药单一剂99mTc-BIWA4。BIWA4的剂量为25毫克，50毫克或100毫克，而99mTc为20毫居里。在B部分，病人共20位给药单一剂的186Re-BIWA4。三位接受第二剂的50毫居里/米2，因疾病稳定之故(无变化)。BIWA4的剂量保持稳定在50毫克，而186Re的放射活性以10毫居里/米2体表面积的比例增加。依据体表面积估计剂量(表6.11)表6.11所给药的放射活性平均剂量n.a.＝无可应用的。表中显示平均值及标准差药物的放射化学纯度超过95％，且免疫反应性部分高于80％。观察期为给药试验药物后至少6周。6.2不良作用(AEs)在所有接受治疗的病人中均要报告不良作用。二位病人在B部分中因为AE而中止观察期。并不因试验药物而采取行动，因为治疗已完成。6.2.1不良作用的简要要点A部分在A部分的大多数病人经验到不良作用，由身体为一整体(50％)，其也可能是由于基础手术及相关的疼痛之故。并无特殊的不良作用型式被报告，且病人中无一者发展成CTC准则3或4级，此被判断为是与药物有关的(表6.2.21及2)。三位病人经历严重的副作用，其在6.3.1.章节描述。B部分全身器官类型(SOC)的不良作用，身体为一整体，在病人中有65％有报告，继之为来自全身器官类型的不良作用，血小板，流血及凝血失调，(病人中占60％)，及白细胞和网状内皮系统失调症，(病人中占50％)。药物-相关的血小板减少症及白细胞减少症发生在11位(55％)及10位(50％)病人身上，在开始放射免疫治疗后平均21天时发生，且通常在6周后是可逆的。在这些事件中均可观察到剂量-反应(表6.2.23)。将血液学剂量-限制的毒性定义为与药物有关的CTC第4级，在三位病人中有报告。非血液学剂量-限制的毒性定义为与药物有关的CTC第3或4级非血液学毒性，发生在4位病人(在30毫居里/米2时有一病人经历皮疹及Quincke′s水肿，二位病人在60毫居里/米2时经历发热，而一位病人以60毫居里/米2治疗时感觉到疲劳。九位经历严重不良作用的病人中有六位死亡。死亡及严重的不良作用述于12.3.1章节中。6.2.2不良作用的呈现A部分以下不良作用由SOC，优选术语来分类，且在A部分中超过一位病人有三种BIWA4剂量组的报告(表6.2.21)。详情及优选术语可见于7.3.1中。表6.2.21在A部分中有不良作用的病人(以单一剂20毫居里99mTc-BIWA4在手术前处理)99mTc-BIWA425毫克50毫克100毫克总和BIWA4BIWA4BIWA4病人数目(受治疗病人％)3(100)4(100)3(100)10(100)有任何不良作用的病人数目3(100)4(100)3(100)10(100)应用部位的失调症2(66.7)0(0)0(0)2(20.0)全身为一整体2(66.7)2(50.0)1(33.3)5(50.0)疼痛1(33.3)1(25.0)1(33.3)3(30.0)中枢及周边神经失调症1(33.3)1(25.0)0(0)2(20.0)代谢及营养失调症1(33.3)2(50.0)1(33.3)4(40.0)体重减轻1(33.3)1(25.0)0(0)2(20.0)低抗(resistance)机制失调症0(0)4(100)0(0)4(40.0)感染0(0)3(75.0)0(0)3(30.0)血管失调症1(33.3)1(25.0)1(33.3)3(30.0)出血(未特示)1(33.3)1(25.0)0(0)2(20.0)若其在一位病人以上中报告，则以SOCs及优选术语来表示；括号内的数字表示接受治疗病人的百分率。由研究者依据CTC准则分级而视为与药物有关的作用，列于表6.2.22中。依据CTC，这些作用定为1级。表6.2.22在A部分中所报告的依据CTC准则，与药物-有关(由研究者判定)的不良作用的严重程度(在手术前以单一剂的20毫居里99mTc-BIWA4治疗)99mTc-BIWA425毫克50毫克100毫克总和BIWA4BIWA4BIWA4病人数目34310被视为与药物相关0202的不良作用次数肝胆系统的失调症0202sGOT增加0101sGPT增加0101sGOT＝血清谷草转氨酶；sGPT＝血清谷丙转氨酶B部分表6.2.23示出由SOC，优选术语所分类的不良作用病人数目，及186Re-BIWA4的放射剂量组。表6.2.23发生在B部分的不良作用的病人(先以186Re-BIWA4处理，再考虑第二剂)186Re-BIWA4[毫居里/米2]2030405060总和接受治疗的病人数目2(100)4(100)3(100)6(100)5(100)20(100)有不良作用的病人数目2(100)4(100)3(100)6(100)5(100)20(100)全身为一整体2(100)3(75.0)2(66.7)2(33.3)4(80.0)13(65.0)过敏反应0(0)1(25.0)0(0)0(0)1(20.0)2(10.0)疲劳0(0)0(0)0(0)1(16.7)1(20.0)2(10.0)发烧0(0)0(0)2(66.7)0(0)2(40.0)4(20.0)嘴部水肿1(50.0)0(0)0(0)1(16.7)0(0)2(10.0)疼痛0(0)2(50.0)0(0)1(16.7)1(20.0)4(20.0)中枢及周边神经学失调症0(0)1(25.0)2(66.7)1(16.7)0(0)4(20.0)胃肠道系统失调症0(0)1(25.0)1(33.3)2(33.3)3(60.0)7(35.0)粘膜炎0(0)0(0)0(0)1(16.7)3(60.0)4(20.0)胃炎0(0)0(0)0(0)1(16.7)1(20.0)2(10.0)肝胆系统失调症1(50.0)0(0)0(0)0(0)1(20.0)2(10.0)sGPT增加1(50.0)0(0)0(0)0(0)1(20.0)2(10.0)代谢及营养失调症1(50.0)0(0)1(33.3)1(16.7)1(20.0)4(20.0)肿瘤0(0)0(0)2(66.7)0(0)2(40.0)4(20.0)恶性肿瘤加重0(0)0(0)1(33.3)0(0)2(40.0)3(15.0)血小板，出血及凝血失调症0(0)1(25.0)1(33.3)5(83.3)5(100)12(60.0)血小板减少症0(0)1(25.0)1(33.3)4(66.7)5(100)11(55.0)红细胞失调症0(0)0(0)0(0)2(33.3)3(60.0)5(25.0)贫血0(0)0(0)0(0)2(33.3)3(60.0)5(25.0)呼吸系统失调症0(0)1(25.0)1(33.3)0(0)2(40.0)4(20.0)支气管炎0(0)1(25.0)0(0)0(0)1(20.0)2(10.0)呼吸困难0(0)0(0)0(0)0(0)2(40.0)2(10.0)鼻炎0(0)0(0)1(33.3)0(0)1(20.0)2(10.0)皮肤及附属器失调症1(50.0)1(25.0)1(33.3)0(0)1(20.0)4(20.0)皮疹0(0)1(25.0)0(0)0(0)1(20.0)2(10.0)白细胞及RES失调症0(0)0(0)1(33.3)4(66.7)5(100)10(50.0)粒细胞减少症0(0)0(0)0(0)1(16.7)2(40.0)3(15.0)白细胞减少症0(0)0(0)1(33.3)4(66.7)5(100)10(50.0)若其在一位病人以上中被报告，以SOCs及优选术语示出；sGPT＝血清谷丙转氨酶；RES＝网状内皮系统，在括号内的数字表示接受治疗病人的百分率。在75％病人中有药物-相关的不良作用被告。药物相关的白细胞减少症及血小板减少症在病人中分别有50％及55％.视为与药物相关的不良作用示于表6.2.24中，依CTC而分级。表6.2.24在B部分所报告的依CTC准则的与药物-相关(由研究者判定)的不良作用(考虑第一及第二剂)不良作用186Re-BIWA4[毫居里/米2]2030405060总和CTC第1级1026514脸部水肿1n.a0001白细胞减少症0n.a.1203念球菌病0n.a0011粘膜炎0n.a.0011血小板异常0n.a0101紫癜0n.a.0011胃炎0n.a.0101血小板减少症0n.a.1225CTC第2级0107715贫血n.a.0n.a.112痛风n.a.0n.a.101白细胞减少症n.a.0n.a.123粘膜炎n.a.0n.a.235胃炎n.a.0n.a.011味觉丧失n.a.0n.a.101血小板减少症n.a.1n.a.102CTC第3级0202812过敏反应n.a.1n.a.001疲劳n.a.0n.a.011发烧n.a.0n.a.022白细胞减少症na.0n.a.112皮疹n.a.1n.a.001血小板减少症n.a.0n.a.145CTC第4级000358贫n.a.n.a.n.a.011粒细胞减少症n.a.n.a.n.a.123白细胞减少症n.a.n.a.n.a.123血小板减少症n.a.n.a.n.a.101示出的是不良作用的次数；n.a.＝无可应用的。6.2.3不良作用的分析A部分发生在试验A部分的不良作用无一者被视为是与药物有关的，除了有一位病人经历轻微且可逆的CTC1级AST及ALT的升高。当与不同的BIWA4剂量比较时，在AE方面上并未观察到有何差异。B部分血小板减少症及白细胞减少症是与剂量有关的(表6.2.23及6.2.24)且是剂量-限制的。时程示于6.4.2.1中。随着放射剂量的增加常有报告称粘膜炎高达CTC2级，但没引起剂量-限制毒性(表6.2.23及6.2.24)。在二位病人中有过敏反应的报告，一人经历与药物有关的Quincke′s水肿及皮疹(30毫居里/米2)，且有一人(60毫居里/米2)在血小板浓缩液输血后有过敏反应，其亦不认为和药物有关。有一病人(20毫居里/米2)有风疹，其也被认为非药物-相关的，而一病人(20毫居里/米2)经历与药物-有关的脸部水肿。可在二病人中测及HAHAs(见12.4.3)。二病人因不良作用致使研究中断。二病人均死亡。在17位病人中因不良作用需开始伴随的治疗。这些病人旋即描述于6.3.1中。6.3死亡，其他严重的不良作用，及其他重大的不良作用可在12位病人中见到严重不良作用的报告。其中六人在试验或追踪过程中死亡。所有死亡的病人均曾接受试验B部分的治疗。在A部分治疗的病人无一人死亡。所有死亡均因疾病的进展。B部分中有二位病人提早中止试验乃因不良作用之故(病人112及105均死亡)。需要治疗的不良作用最常见的是血小板减少症，白细胞减少症和发热。7.本文参照但不包括的表，数字及图7.1人口统计学数据不包括人口统计学详述。7.2效力/药物代谢动力学数据表7.21肿瘤对骨髓的摄入比例-试验的A部分表7.22肿瘤对骨髓的摄入比例(ITT亚群)-试验的A部分表7.23肿瘤对骨髓的摄入比例(PP亚群)-试验的A部分表7.24肿瘤大小及抗体的摄入％-试验的A部分(完全策略群体)表7.25在肿瘤及其他组织中CD44v6抗原的表达-试验的A部分表7.26血清中的可溶性CD44v6。平均值以ng/ml表示。表7.21肿瘤对骨髓的摄入比例-试验的A部分A部分99mTc-BIWA4病人肿瘤摄入骨髓摄入肿瘤/骨髓比数目(％ID/公斤；估计值)(％ID/公斤；估计值)值(估计值)25毫克BIWA41*6.145.581.102*15.787.492.113*16.788.631.9550毫克BIWA44*28.106.984.038*27.767.573.6710*22.6311.541.96100毫克BIWA46*15.896.472.46716.997.702.21913.3110.111.32No＝数目，*＝包括在完全策略分析中；％ID＝注入剂量％；估计值的运算是将样品不同的重量考虑在内。表7.22肿瘤对骨髓摄入比例(ITT亚群)-试验的A部分A部分99mTc-BIWA4肿瘤/骨髓比例(估计值)25毫克BIWA41.7250毫克BIWA42.57100毫克BIWA41.99表中数据以平均值表示；ITT＝意欲治疗；估计值的运算是将样品不同重量考虑在内。表7.23肿瘤对骨髓摄入比例(PP亚群)-试验A部分A部分99mTc-BIWA4肿瘤/骨髓比例(估计值)25毫克BIWA41.7250毫克BIWA43.22100毫克BIWA42.46表中数据以平均值表示；PP＝完全策略；估计值的运算是将样品不同重量考虑在内。表7.24肿瘤大小及抗体的摄入％-试验的A部分(完全策略群体)A部分99mTc-BIWA4病人数目肿瘤大小[毫米2]肿瘤摄入(％ID/公斤；估计值)25毫克BIWA4113506.14290015.78322516.7850毫克BIWA44n.a.28.108150427.7610140022.63100毫克BIWA4680015.89No＝病人数目，n.a.＝无可应用的，仅给出长或宽，不是长和宽都给出，估计值的运算是将不同样品重量考虑在内。表7.25在肿瘤及其他组织中CD44v6抗原的表达-试验的A部分A部分99mTc-BIWA4病人数目CD44v6抗原CD44v6表达CD44v6表达在表达在肿瘤在粘膜淋巴结转移25毫克BIWA41*n.a.n.a.n.a.2*++/+++；＞80％+++++/+++；＞90％3*+++；＞90％++++++；＞90％50毫克BIWA44*+++；＞90％++++++；＞90％8*n.a.n.a.n.a.10*++；＞90％++++++；＞90％100毫克BIWA46*+++；＞80％+++n.a.7+++；＞90％+++n.a.9+++；＞90％+++n.a.No＝数目，*＝包括在完全策略分析中；n.a.＝无可应用的表7.26在血清中的可溶性CD44v6。以平均值表示(ng/ml)A部分B部分99mTc-BIWA4186Re-BIWA4[毫居里/米2]25毫克50毫克100毫克2030405060BIWA4BIWA4BIWA4N34324365预先给药20333717440826234617116021小时22330117939617740319917048小时20027515738419842319917472小时140386n.a.n.a.n.a.n.a.n.a.n.a.144小时188282182444284516233195240/336小时n.a.n.a.n.a.445337n.a.n.a.n.a.第6周203310210289220487226162n.a.＝无可应用的，数据包括第二次给药实施例4引言。有晚期头及颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的病人，发展成局部区域性复发肿瘤和/或远端转移的危险性增加。对这些病人而言，有效辅助性全身治疗法的发展是有必要的。已知HNSCC确实是放射敏感的，利用单克隆抗体将放射核素选择性的靶向HNSCC的放射免疫治疗型式，将是较有效的治疗法。目的。为了确定以铼-186(186Re)-标记的人源化单克隆抗体BIWA4在HNSCC病人的放射免疫疗法的安全性，最大耐受剂量(MTD)，免疫原性及效力。病人及方法。在HNSCC病人中进行I期剂量阶梯式扩大研究，而这些病人并无治愈的治疗选择可采用。在共20位病人中，经186Re-标记的BIWA4以20，30，40，50或60毫居里/米2的剂量于静脉内给药。有三位病人，在50或60毫居里/米2剂量后至少3个月，接受第二剂50毫居里/米2。结果。所有单一剂以及重复给药均可良好耐受，且并未观察到急性不良作用的迹象。在较高剂量下仅有明显的毒性，表现为口腔粘膜炎和剂量-限制的骨髓毒性包括血小板减少症及白细胞减少症。MTD确定在50毫居里/米2。一病人在给药单一剂后发生人-抗-人应答。在以最高剂量水平治疗的5位病人中可观察到稳定的疾病，持续4至19周。结论。HNSCC病人中经186Re-标记的BIWA4的放射免疫疗法似乎是安全的，且可达到杀灭肿瘤的剂量。再者，由于低的免疫原性，因此重复给药似乎是可能的。此I期研究的结果，鼓励了以铼-186(186Re)-标记的人源化单克隆抗体BIWA4放射免疫治疗朝向对头及颈部癌症病人的辅助性治疗的进一步发展。序列表<110>贝林格尔.英格海姆国际有限公司(BoehringerIngelheimInternationalGmbH)<120>CD44v6特异性的抗体<130>1-1212PCT<140>待定<141>2002-05-16<150>EP01112237.1<151>2001-05-18<150>US60/325147<151>2001-09-26<160>18<170>PatentInVer.2.1<210>1<211>114<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>1GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValLysProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGlyPheThrPheSerSerTyr202530AspMetSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGluTrpVal354045SerThrIleSerSerGlyGlySerTyrThrTyrTyrLeuAspSerIle505560LysGlyArgPheThrIleSerArgAspAsnAlaLysAsnSerLeuTyr65707580LeuGlnMetAsnSerLeuArgAlaGluAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgGlnGlyLeuAspTyrTrpGlyArgGlyThrLeuValThrVal100105110SerSer<210>2<211>106<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>2GluIleValLeuThrGlnSerProAlaThrLeuSerLeuSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysSerAlaSerSerSerIleAsnTyrIle202530TyrTrpTyrGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgLeuLeuIleTyr354045LeuThrSerAsnLeuAlaSerGlyValProAlaArgPheSerGlySer505560GlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGluProGlu65707580AspPheAlaValTyrTyrCysLeuGlnTrpSerSerAsnProLeuThr859095PheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys100105<210>3<211>106<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>3GluIleValLeuThrGlnSerProAlaThrLeuSerLeuSerProGly151015GluArgAlaThrLeuSerCysSerAlaSerSerSerIleAsnTyrIle202530TyrTrpLeuGlnGlnLysProGlyGlnAlaProArgIleLeuIleTyr354045LeuThrSerAsnLeuAlaSerGlyValProAlaArgPheSerGlySer505560GlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleSerSerLeuGluProGlu65707580AspPheAlaValTyrTyrCysLeuGlnTrpSerSerAsnProLeuThr859095PheGlyGlyGlyThrLysValGluIleLys100105<210>4<211>342<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>4gaagtgcagctggtggagtctgggggaggcttagtgaagcctggagggtccctaagactc60tcctgtgcagcctctggattcactttcagtagctatgacatgtcttgggttcgccaggct120ccggggaaggggctggagtgggtctcaaccattagtagtggtggtagttacacctactat180ctagacagtataaagggccgattcaccatctccagagacaatgccaagaactccctgtac240ctgcaaatgaacagtctgagggctgaggacacggccgtgtattactgtgcaagacagggg300ttggactactggggtcgaggaaccttagtcaccgtctcctca342<210>5<211>318<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>5gaaattgttctcacccagtctccagcaaccctgtctctgtctccaggggagagggccacc60ctgtcctgcagtgccagctcaagtataaattacatatactggtaccagcagaagccagga120caggctcctagactcttgatttatctcacatccaacctggcttctggagtccctgcgcgc180ttcagtggcagtgggtctggaaccgacttcactctcacaatcagcagcctggagcctgaa240gattttgccgtttattactgcctgcagtggagtagtaacccgctcacattcggtggtggg300accaaggtggagattaaa318<210>6<211>318<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>6gaaattgttctcacccagtctccagcaaccctgtctctgtctccaggggagagggccacc60ctgtcctgcagtgccagctcaagtataaattacatatactggctccagcagaagccagga120caggctcctagaatcttgatttatctcacatccaacctggcttctggagtccctgcgcgc180ttcagtggcagtgggtctggaaccgacttcactctcacaatcagcagcctggagcctgaa240gattttgccgtttattactgcctgcagtggagtagtaacccgctcacattcggtggtggg300accaaggtggagattaaa318<210>7<211>444<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列的描述人源化抗体序列<400>7GluValGlnLeuValGluSerGlyGlyGlyLeuValLysProGlyGly151015SerLeuArgLeuSerCysAlaAlaSerGl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变区由SEQIDNo.5所定义的核酸序列所编码。15.一种抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或其化学衍生物，该抗体分子含有如SEQIDNo.6所定义的核酸序列编码的轻链可变区。16.一种抗体分子，其中的轻链可变区由SEQIDNo.6所定义的核酸序列所编码。17.根据权利要求11和13的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，该抗体分子含有如SEQIDNo.4所定义的核酸序列编码的重链可变区，且含有如SEQIDNo.5所定义的核酸序列编码的轻链可变区。18.根据权利要求12和14的抗体分子，其中的重链可变区由如SEQIDNo.4所定义的核酸序列编码，且其中的轻链可变区由如SEQIDNo.5所定义的核酸序列编码。19.根据权利要求11和15的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，该抗体分子含有如SEQIDNo.4所定义的核酸序列编码的重链可变区，且含有如SEQIDNo.6所定义的核酸序列编码的轻链可变区。20.根据权利要求12和16的抗体分子，其中的重链可变区由如SEQIDNo.4所定义的核酸序列编码，且其中的轻链可变区由如SEQIDNo.6所定义的核酸序列编码。21.根据权利要求1至20任一项的抗体分子，其特征在于每一所述的轻链可变区及重链可变区分别连接至人类恒定区。22.根据权利要求21的抗体分子，其中该人类轻链恒定区是人类κ恒定区。23.根据权利要求21或22的抗体分子，其中该人类重链恒定区是人类IgG1恒定区。24.根据权利要求1至23任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物，该抗体含有特征在于如SEQIDNo.7所定义的氨基酸序列的重链，且含有特征在于如SEQIDNo.8所定义的氨基酸序列的轻链。25.根据权利要求1至24任一项的抗体分子，其中的重链由以SEQIDNo.7氨基酸序列为特征的氨基酸组成，且其中的轻链由以SEQIDNo.8氨基酸序列为特征的氨基酸组成。26.根据权利要求1至25任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，糖基化作用变体，融合分子或化学衍生物，该抗体含有特征在于如SEQIDNo.7所定义的氨基酸序列的重链，且含有特征在于如SEQIDNo.9所定义的氨基酸序列的轻链。27.根据权利要求1至26任一项的抗体分子，其中的重链由以SEQIDNo.7氨基酸序列为特征的氨基酸组成，且其中的轻链由以SEQIDNo.9氨基酸序列为特征的氨基酸组成。28.根据权利要求1至27任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，该抗体含有如SEQIDNo.10所定义的核酸序列编码的重链，且含有特征在于如SEQIDNo.11所定义的核酸序列的轻链。29.根据权利要求1至28任一项的抗体分子，其中的重链由SEQIDNo.10核酸序列所编码，且其中的轻链由SEQIDNo.11的核酸序列所编码。30.根据权利要求1至29任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，其含有由SEQIDNo.10所定义的核酸序列编码的重链，且含有特征在于如SEQIDNo.12所定义的核酸序列的轻链。31.根据权利要求1至30任一项的抗体分子，其中的重链由SEQIDNo.10的核酸序列编码，且其中的轻链由SEQIDNo.12的核酸序列所编码。32.根据权利要求1至31任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，该抗体分子含有由如SEQIDNo.13所定义的核酸序列编码的重链，且含有特征在于如SEQIDNo.14所定义的核酸序列的轻链。33.根据权利要求1至32任一项的抗体分子，其中重链由SEQIDNo.13的核酸序列所编码，且其中轻链由SEQIDNo.14的核酸序列所编码。34.根据权利要求1至33任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，该抗体分子含有由如SEQIDNo.13所定义的核酸序列所编码的重链，且含有特征在于如SEQIDNo.15所定义的核酸序列的轻链。35.根据权利要求1至34任一项的抗体分子，其中重链由SEQIDNo.13的核酸序列所编码，且其中轻链由SEQIDNo.15的核酸序列所编码。36.根据权利要求1至35任一项的抗体分子，或其片段，等位基因变体，功能性变体，以简并核酸密码为基础的变体，融合分子或化学衍生物，该抗体分子含有由SEQIDNo.16所定义的核酸序列编码的重链及轻链。37.根据权利要求1至36任一项的抗体分子，其中重链及轻链由SEQIDNo.16的核酸序列所编码。38.根据权利要求1至37任一项的抗体蛋白质，其中该抗体蛋白质是连接至一种治疗剂。39.根据权利要求38的抗体蛋白质，其中所述治疗剂是选自下列的治疗剂放射性同位素，毒素，类毒素，炎性剂及化学治疗剂。40.根据权利要求39的抗体蛋白质，其中所述治疗剂是经由连接子而连接至抗体蛋白质，该连接子选自MAG-3GABA，MAG-2GABA或N2S2。41.根据权利要求40的抗体蛋白质，其中所述治疗剂是经由MAG-2GABA连接至抗体蛋白质。42.根据权利要求38-41任一项的抗体蛋白质，其中所述放射性同位素是β-射线放射性同位素。43.根据权利要求42的抗体蛋白质，其中所述放射性同位素选自186铼，188铼，131碘或99钇。44.根据权利要求43的抗体蛋白质，其中所述放射性同位素是186铼。45.根据权利要求39-44任一项的抗体蛋白质，其中所述的抗体蛋白质的比活性由约0.5至约15毫居里/毫克，或由约0.5至约14毫居里/毫克，优选由约1至约10毫居里/毫克，优选约1至约5毫居里/毫克，且最优选是2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克。46.根据权利要求1至37任一项的抗体蛋白质，其特征在于其是经标记的。47.根据权利要求46的抗体蛋白质，其中所述标记是可检测的标记。48.根据权利要求47的抗体蛋白质，其中可检测的标记选自酶，染料，放射性同位素，洋地黄毒苷或生物素。49.根据权利要求1至37任一项的抗体蛋白质，其是连接至一种可显像的制剂。50.根据权利要求49的抗体蛋白质，其中可显像制剂是放射性同位素。51.根据权利要求50的抗体蛋白质，其中所述放射性同位素是γ-射线放射性同位素。52.根据权利要求51的抗体蛋白质，其中所述放射性同位素是125I。53.一种药物组合物，其含有根据权利要求1至45任一项的抗体蛋白质及药学上可接受的载体或赋形剂。54.根据权利要求53的药物组合物，其中所述抗体蛋白质是连接至根据权利要求39-44任一项的放射性同位素，且有比活性由约0.5至约15毫居里/毫克，或由约0.5至约14毫居里/毫克，优选约1至约10毫居里/毫克，优选约1至约5毫居里/毫克，且最优选2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克。55.根据权利要求53或54的药物组合物，其中欲应用至病人的药物组合物中放射标记抗体的量为10，20，30，40，50或60毫居里/米2。56.根据权利要求53-55任一项的药物组合物，其中欲应用至病人的药物组合物中放射标记抗体的量为50毫居里/米2。57.根据权利要求53-56任一项的药物组合物，其中进一步含有一种或多种选自如下的放射线保护剂抗坏血酸，龙胆酸，还原酸，赤藓酸，对-氨基苯甲酸，4-羟基苯甲酸，尼克酸，尼克酰胺，2，5-二羟基-1，4-苯二磺酸，普维酮，肌醇和/或柠檬酸盐。58.根据权利要求53-57任一项的药物组合物，其中的放射线保护剂是抗坏血酸。59.根据权利要求53-58任一项的药物组合物，其中该抗体蛋白质含有选自由权利要求8，10，18，20，24，25，28，29，32，33，36，37中所定义的抗体分子，其经由MAG-2GABA连接至186铼，并进一步含有放射线保护剂抗坏血酸。60.根据权利要求1至45任一项的抗体蛋白质在制备治疗癌症药物中的用途。61.根据权利要求60的抗体蛋白质的用途，其中所述癌症选自结肠直肠癌，非小细胞肺癌，乳腺癌，头及颈部癌，卵巢癌，肺癌，膀胱癌，胰腺癌及脑的转移癌。62.根据权利要求60或61的抗体蛋白质的用途，其中所述抗体蛋白质是连接至根据权利要求39-44任一项所定义的放射性同位素，且具有比活性由约0.5至约15毫居里/毫克，或由约0.5至约14毫居里/毫克，优选约1至约10毫居里/毫克，优选约1至约5毫居里/毫克，最优选2至6毫居里/毫克或1至3毫居里/毫克。63.根据权利要求62的抗体蛋白质的用途，其中欲应用至病人的药物组合物中放射标记抗体的量为10，20，30，40，50或60毫居里/米2。64.根据权利要求62的抗体蛋白质的用途，其中欲应用至病人的药物组合物中放射标记抗体的量为50毫居里/米2。65.一种癌症治疗的方法，其中将权利要求1-45任一项的抗体蛋白给药至有此需要的个体一次至数次，所述抗体蛋白选择性地结合CD44v6，通过与该抗体蛋白连接的治疗剂破坏肿瘤细胞，并且监视这种治疗的成功。66.权利要求65的方法，其中所述肿瘤是选自如下的肿瘤结肠直肠癌，非小细胞肺癌，乳腺癌，头及颈部癌，卵巢癌，肺癌，膀胱癌，胰腺癌及脑的转移癌。67.一种核酸，其特征在于其编码根据权利要求1至37任一项的抗体蛋白质。68.一种重组DNA载体，特征在于其含有根据权利要求67的核酸。69.根据权利要求68的重组DNA载体，特征在于其是一种表达载体。70.根据权利要求68或69的重组DNA载体，特征在于其是载体pAD-CMV或其功能性衍生物。71.根据权利要求68-70的重组DNA载体，特征在于其是载体N5KG1Val或其衍生物。72.一种宿主，特征在于其含有权利要求68至71的载体。73.根据权利要求72的宿主，特征在于其是一种真核宿主细胞。74.根据权利要求72或73的宿主，特征在于其是一种哺乳动物细胞。75.根据权利要求72-74的宿主，特征在于其是BHK，CHO或COS细胞。76.根据权利要求72的宿主，特征在于其是一种噬菌体。77.根据权利要求72的宿主，特征在于其是一种原核宿主细胞。78.一种制备根据权利要求1至37任一项的抗体蛋白质的方法，其特征在于其包括以下步骤在所述抗体蛋白质可被所述宿主细胞表达的条件下培养权利要求72至77任一项所定义的宿主，再分离该抗体蛋白质。79.根据权利要求78的方法，其特征在于所述宿主是一种哺乳动物细胞，优选是CHO或COS细胞。80.根据权利要求78或79的方法，其特征在于所述宿主细胞是以二个携有轻或重链表达单位的质粒所共同-转染。全文摘要本发明属于肿瘤学领域。本发明是有关具有特示序列的抗体，其对CD44基因的变体外显子v6所编码的表位具有特异性，以及有关该抗体的衍生物。本发明也提出编码该抗体蛋白质的核酸分子。本发明进一步是有关制备该抗体蛋白质的方法。本发明也提出含有该抗体蛋白质的药物组合物。本发明进一步是有关制成药物以治疗癌症之用。文档编号C07K16/18GK1541226SQ02810156公开日2004年10月27日申请日期2002年5月17日优先权日2001年5月18日发明者冈瑟·阿道夫,埃林伯格·奥斯特曼,埃里克·帕特泽尔特,马利斯·斯普罗尔,卡尔-海因茨·海德,约翰·J·米格利塔,奥古斯蒂纽斯·A·M·S·范唐根,帕特泽尔特,斯普罗尔,J米格利塔,Ｒ虼摹ず５,冈瑟阿道夫,格奥斯特曼,蒂纽斯AMS范唐根申请人:贝林格尔·英格海姆国际有限公司,贝林格尔·英格海姆药物公司,贝林格尔英格海姆国际有限公司