专利名称：芳香二羧酸衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及芳香二羧酸衍生物，或其药物可接受的盐，其具有抗细胞增殖活性如抗癌活性，并因此可用于人或动物体的治疗方法中。本发明还涉及所述芳香二羧酸衍生物的制备方法，包含它们的药物组合物以及它们在制备药物中的应用，所述药物用于在温血动物如人中产生抗细胞增殖效果。
背景技术：
转录调节是细胞分化，增殖和编程性细胞死亡过程中的一件主要事件。一组基因的转录激活决定了细胞的命运，并且由于这个原因，转录被多种因子严格调节。包含在这个过程中的一个调节机制是DNA三级结构的改变，其通过调节转录因子对它们的靶DNA片段的可接近性来影响转录。核小体的完整性是通过核心组蛋白的乙酰化状况来调节。在低乙酰化状态下，核小体是紧密结合的，因此不能转录。另一方面，核心组蛋白的乙酰化导致核小体松弛，结果可以进行转录。组蛋白的乙酰化状态由组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白脱乙酰酶(HDAC)的活性的平衡来控制。近来，已经发现HDAC抑制剂在几种类型的癌细胞，包括结肠癌、T-细胞淋巴瘤和红白血病细胞中抑制生长和编程性细胞死亡。假如编程性细胞死亡是癌症发展的关键因素，则HDAC抑制剂作为编程性细胞死亡的有效诱导剂，成为是癌症治疗的有前途的药剂(Koyama，Y.，等.，血液(Blood)96(2000)1490-1495)。
已鉴定了几种结构类型的HDAC抑制剂，在Marks，P.M.，J.Natl.Cancer Inst.92(2000)1210-1216中进行了综述。更具体地，WO 98/55449(由The University of Queensland等，“具有抗癌和抗寄生性能的异羟肟酸化合物”)和US 5,369,108报道了具有HDAC抑制活性的烷酰基异羟肟酸酯。
我们现在已经发现某些芳香二羧酸衍生物具有抗细胞增殖性能，其比前述参考文献中的那些作用更强。而且，这些化合物HDAC抑制活性。
发明内容
按照本发明，提供了一种式I的芳香二羧酸衍生物 其中 表示苯环，其可以是未取代的，也可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]-氨基-，(1-4C)烷酰基氨基，(1-3C)亚烷基二氧基-或酰基-的取代基取代，或 表示噻吩环，其可以是未取代的，也可以被1或2独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]-氨基-或(1-4C)烷酰基氨基，(1-3C)亚烷基二氧基-或酰基-的取代基取代，和R1和R2相同或不同，各自为氢原子；直链或支链(1-14C)烷基，其可以是未取代的，也可以被1或几个独立地选自卤素-，羟基-，硝基-，氨基-，碳环基-或杂环基的取代基取代，且其中链长大于2个碳原子时，一个或几个非相邻原子可以被氧，氮或硫原子置换，且其中2个原子可以通过双键或三键连接；碳环基；或杂环基；或者R1和R2与氮原子一起形成3-6元环，其中还可以含有其他的独立地选自氮，氧和硫的杂原子，并且它们可以通过碳环基或杂环基成环，该环可以是未取代的，或可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，芳基-，杂芳基-(hetaryl-)，芳基烷基-，芳基烷氧基-，芳氧基-，(1-3C)亚烷基二氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]氨基-，(1-4C)烷酰基氨基-或酰基的取代基取代。
烷基可以是例如，戊基，己基或3-甲基-丁基。
取代的烷基可以是例如，苄基，苯乙基，四氢呋喃-2-基-甲基或2-环己-1-烯基-乙基。
一或几个非相邻原子可以被氧，氮或硫原子置换的烷基可以是例如，3-异丙氧基-丙基或2-甲基硫烷基(sulfanyl)-乙基。
2个原子通过双键或三键结合的烷基可以是例如，1-己炔基或2-庚烯基。
碳环基可以是具有3-7个碳原子的非-芳香环系统，例如环戊烷，环己烷，环己烯或环丙烷，其可以是未取代的，也可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，芳基-(hetaryl-)，杂芳基-，芳基烷基-，芳基烷氧基-，芳氧基-，(1-3C)亚烷基二氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]氨基-，(1-4C)烷酰基氨基-或酰基的取代基取代，并且它们可以通过芳基或杂芳基成环，形成例如1，2-二氢化茚或1，2，3，4-四氢化萘。
芳基是共轭碳环系统，例如苯基，萘基，优选苯基，其可以是未取代的，也可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，芳基烷氧基-，芳氧基-，(1-3C)亚烷基二氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]氨基-，(1-4C)烷酰基氨基-，羧基-，羧基烷基-或酰基的取代基取代。
杂环基可以是3-7元非芳香环系统，其中一或两个杂原子独立地选自氮，氧，和硫，例如哌啶子基，吗啉代，吡咯烷子基(pyrrolidino)，哌嗪子基(piperazino)，其可以是未取代的，也可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，芳基-，杂芳基-，芳基烷基-，芳基烷氧基-，芳氧基-，(1-3C)亚烷基二氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]氨基-，(1-4C)烷酰基氨基，或酰基的取代基取代，并且其可以通过芳基或杂芳基成环，形成例如，四氢喹啉，四氢异喹啉，或二氢吲哚；或者它也可以是杂芳基。
杂芳基或者是具有一或两个独立地选自氮，氧，和硫的杂原子的5或6元共轭环系统，例如吡啶基，噻吩基(thiophenyl)，呋喃基或吡咯基，或者是成环的双环共轭环系统，例如吲哚基-，喹啉基-或异喹啉基-，其可以是未取代的，也可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，芳基烷氧基-，芳氧基-，(1-3C)亚烷基二氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]氨基-，(1-4C)烷酰基氨基，或酰基的取代基取代。
当R1和R2与氮原子一起形成3-6元环(其还可另外含有独立地选自环氮，氧和硫的杂原子)时，它可以是例如，哌啶，哌嗪或吗啉。
当取代基为卤原子时，适当的取代基为，例如，氟，氯，溴和碘；当取代基为(1-4C)烷基时，例如为甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲-丁基；当取代基为(1-4C)烷氧基时，例如为甲氧基，乙氧基，丙氧基，异丙氧基或丁氧基；当取代基为(1-4C)烷基氨基时，例如为甲基氨基，乙基氨基或丙基氨基；当取代基为二-[(1-4C)烷基]氨基时，例如为二甲基氨基，N-乙基-N-甲基氨基，二乙基氨基，N-甲基-N-丙基氨基或二丙基氨基；当取代基为(1-4C)烷酰基氨基时，例如为甲酰氨基，乙酰氨基，丙酰氨基或丁酰氨基；当取代基为(1-3C)亚烷基二氧基时，例如为亚甲二氧基，亚乙基二氧基或亚丙基二氧基，当取代基为酰基时为，例如，甲酰基，乙酰基，丙酰基，苯甲酰基，或苯乙酰基。
在优选实施方案中，R1为氢，R2为上述定义之一。在一个更为优选的实施方案中，R2为(1-14C)烷基。最优选的是，R2为芳基烷基-基团，例如苄基-基团或取代的苄基-基团。
A代表噻吩环的化合物是优选的。更为优选的是噻吩环未被取代的化合物。最优选的是在进一步未取代的噻吩环的2和5位结合有两个羧基部分的化合物。式I的芳香二羧酸衍生物的对映异构体，非对映异构体，外消旋物，及其混合物和药物可接受的盐也是本发明的一部分。
按照本发明的另一个方面，提供了一种药物组合物，其包含上文所定义的式I的芳香二羧酸衍生物或它的药物可接受的盐，以及药用稀释剂或载体。组合物可以是适于口服给药的形式，如片剂或胶囊，适于胃肠外注射(包括静脉内，皮下，肌肉，血管内或输注)的形式，如无菌溶液、混悬液或乳剂，适于局部给药的形式如油膏或乳膏，或适于直肠给药的形式，如栓剂。通常，上述组合物可利用常规的赋形剂来制备。通常以5-5000mg/平方米动物的体表面积，即约0.1-100mg/kg的单位剂量将芳香二羧酸衍生物对温血动物给药，这通常提供了治疗有效的剂量。单位剂量形式如片剂或胶囊通常包含例如1-250mg的活性成分。优选地，使用1-100mg/kg的日剂量。然而，需要依据所治疗的宿主、具体的给药途径和所治疗的疾病的严重程度改变日剂量。因此，最佳剂量由治疗具体患者的医师来决定。
按照本发明的另一个方面，提供了如上文所定义的式I的芳香二羧酸衍生物，在治疗人或动物体的方法中的用途。我们已经发现，本发明的化合物具有抗细胞增殖性能，认为该性能是由于它们的组蛋白脱乙酰酶抑制活性而产生的。因此，本发明的化合物提供了一种治疗恶性细胞增殖的方法。因此，本发明的化合物可通过提供抗增殖作用来治疗癌症，特别是治疗乳腺癌，肺癌，结肠癌，直肠癌，胃癌，前列腺癌，膀胱癌，胰腺癌和卵巢癌。另外，预计本发明的衍生物将具有抗一系列白血病、淋巴系统恶性肿瘤和实体瘤例如肝、肾、前列腺和胰腺组织中的癌和肉瘤的活性。
因此，依照本发明的这个方面，提供了如上文所定义的式I的芳香二羧酸衍生物或它的药物可接受的盐在制备药物中的应用，所述药物用于在温血动物例如人中产生抗细胞增殖作用。
依照本发明这个方面的另一个特征，提供了一种在需要这种治疗的温血动物例如人中产生抗细胞增殖作用的方法，包含对所述动物给药有效量的如上文所定义的芳香二羧酸衍生物。
上文定义的抗细胞增殖治疗可作为一种单独的治疗来应用，或除了本发明的芳香二羧酸衍生物以外，还可包括一种或多种其它抗肿瘤物质，例如那些选自例如有丝分裂抑制剂如长春碱；烷基化剂如顺铂，卡铂和环磷酰胺；微管组装抑制剂，如紫杉醇或其它紫杉烷类；抗代谢物类，如5-氟尿嘧啶，卡培他滨，阿糖胞苷和羟基脲；或，例如，插入抗生素，例如阿霉素和博来霉素；免疫刺激剂，如曲妥单抗；DNA合成抑制剂，如吉西他滨；酶，如天冬酰胺酶；拓扑异构酶抑制剂，如依托伯苷；生物反应调节物，如干扰素；和抗激素类，如抗雌激素类如他莫昔芬，或例如抗雄激素药类如(4’-氰基-3-(4-氟苯基磺酰基)-2-羟基-2-甲基-3’-(三氟甲基)-N-丙酰苯胺，或描述于例如癌症肿瘤学原理和实践(CancerPrinciples & Practice of Oncology)Vincent T.DeVita，Jr.，Samuel Hellmann，Steven A.Rosenberg；第五版.，Lippincott-Raven Publishers(1997)的其它治疗剂和原则。这种联合治疗可通过同时、顺次或单独给药治疗用的单独组分得以实现。依照本发明的这个方面，提供了一种用于联合治疗癌症的药品，其包含如上文所定义的式I的芳香二羧酸衍生物和如上文所定义的另外的抗肿瘤物质。
本发明的另一个目的在于提供一种药物组合物，其含有药理学有效量的一种或多种式I的化合物，以及药用赋形剂和/或稀释剂。
式I化合物的生理可接受的盐的例子有与生理可接受的碱形成的盐。这些盐可以是，例如，碱金属盐、碱土金属盐、铵盐和烷基铵盐，例如钠盐、钾盐、钙盐、四-甲基-铵盐。
可以通过分析型、半制备型、或制备型规模的色谱用适当的旋光固定相和适当的洗脱液，将外消旋化合物拆分成它们的对映异构体。适当的光学活性固定相包括，但不限于，silica(例如ChiraSper，Merck；ChiralpakOT/OP，Baker)，纤维素酯或氨基甲酸酯(例如Chiracel OB/OY，Baker)或其他(例如Crownpak，Daicel或ChiracelOJ-R，Baker)。还可以应用拆分对映异构体的其他方法，例如将式I的化合物与其他旋光化合物，例如樟脑磺酸或brucin一起形成非对映异构体，分离这些非对映异构体化合物，然后从旋光物质中释放所述化合物。应用旋光起始材料也可以得到式I化合物的富集或纯对映异构体。
本发明化合物的制备方法可以通过任何已知可以应用于制备化学相关化合物的方法制备式I的芳香二羧酸衍生物或其药物可接受的盐。当用于制备式I的芳香二羧酸衍生物或其药物可接受的盐时，该方法是作为本发明的另一个特征提供并且通过下列代表性的实例举例说明，其中A，R1和R2除非另外说明具有上述定义的任何含义。原材料可以通过有机化学的标准方法获得。该原材料的制备在后附的非限制性的实施例中描述。备选地，必要的原材料可以通过与所举例说明相似的方法获得，这些方法在有机化学家的普通技能范围内。
(a)制备式I化合物的一个优选方法包括使式II的化合物 其中A，R1和R2与上文所定义的含义相同，R3为(1-4C)烷基，优选甲基或乙基，与羟胺在适当碱的存在下反应。反应在惰性溶剂或稀释剂例如甲醇或乙醇中，在0-100℃之间的温度下，方便地在或接近环境温度下，以及在10-12之间的pH值下进行。适当的碱是，例如，醇化物，例如甲醇钠。
式II的化合物由式III的化合物制备而来，其中A和R3与上文的定义相同。
该反应典型地包括两步-一罐程序。在第一步中，活化式III的羧酸酯。该反应是在惰性溶剂或稀释剂中，例如在二氯甲烷，二噁烷或四氢呋喃中，在活化剂的存在下进行的。酸的适当的活性衍生物是例如酰卤，例如通过无机酰氯与酸反应形成的酰氯，例如亚硫酰氯；混合酐，例如通过氯甲酸酯如异丁基氯甲酸酯与酸反应形成的酸酐；活性酯，例如酸和苯酚如五氟酚反应形成的酯；酸和N-羟基苯并三唑反应形成的活性酯；酰叠氮，例如通过酸和叠氮化物如二苯磷酰叠氮反应形成的叠氮化物；酰腈，例如通过酸和氰化物如二乙基磷酰腈反应形成的氰化物；或酸和碳二亚胺如二环己基碳二亚胺反应的产物，或酸和二-(2-氧-3-噁唑烷基)-磷酰氯反应的产物。反应在-30℃至60℃之间，方便地在0℃或0℃以下进行。在第二步中，在用于活化的温度下将式HNR1R2(其中R1和R2如上文所定义)的胺加入到溶液中，并将温度缓慢调至室温。可以向反应混合液中加入一种适当的清除剂碱，例如三乙胺、或二异丙基乙胺。这些方法对于本领域技术人员是熟知的。原则上，在肽化学中使用的所有合成酰胺的方法，例如″Methoden der organischen Chemie(Houben-Weyl)″Vol.XV/1和XW2中所述的方法都可以应用。
已有文献报道了式III的相当一部分化合物。例如，Holba，V，等，Z.Phys.Chem.(Leipzig)262(3)(1981)445-448描述的原型(prototypic)对苯二酸单甲酯。而且它也可从商业上获得。噻吩-2，5-二羧酸单甲酯在例如US 2,680,731中已有描述。上述单酯通过对二酯的选择性皂化反应制备，但是也可以使用其他方法，这些方法对于本领域技术人员是熟知的。
(b)另一种制备式I化合物的优选方法是使式IV的化合物去保护，式IV化合物为 其中Y为适当的保护基团，A，R1和R2与上文的定义相同。
式IV的化合物是新的，也包括在本发明范围内。
适当的保护基团是苄基，对甲氧基苄基，叔丁氧基羰基，三苯甲基或甲硅烷基基团如三甲基甲硅烷基或二甲基叔丁基甲硅烷基基团。进行的反应取决于保护基团的类型。当保护基团是苄基或对甲氧基苄基基团时，进行的反应是在环境温度和压力下，在适当的载体如碳，硫酸钡或碳酸钡上的贵金属催化剂如钯存在下，在惰性溶剂如甲醇或乙醇的醇类之中的氢解反应。当保护基团是叔丁氧基羰基，三苯甲基或甲硅烷基基团如三甲基甲硅烷基或二甲基叔丁基甲硅烷基基团时，反应是在-20℃至60℃，优选0℃至室温的温度下，在酸的存在下进行的。该酸可以是在惰性溶剂如二乙醚或二噁烷中的盐酸溶液，或在二氯甲烷中的三氟乙酸。当保护基团是甲硅烷基基团如三甲基甲硅烷基或二甲基叔丁基甲硅烷基基团时，反应是在惰性溶剂如二氯甲烷之中，在氟化物来源如氟化钠或四丁基氟化铵的存在下进行的。不一定所有的保护基团Y都与R1和R2基团相容。当这些基团的性质不允许使用某些保护基团时，有必要使用其他的保护基团Y和其他制备方法。
式IV化合物由式V化合物 与式VI化合物 其中Y是上述的适当保护基团，反应得到。该反应典型地包括两步—一罐程序。在第一步中，使式V的羧酸酯活化。该反应是在惰性溶剂或稀释剂中，例如在二氯甲烷，二噁烷或四氢呋喃中，在活化剂的存在下进行的。酸的适当的活性衍生物是例如酰卤，例如通过无机酰氯与酸反应形成的酰氯，例如亚硫酰氯；混合酐，例如通过氯甲酸酯如异丁基氯甲酸酯与酸反应形成的酸酐；活性酯，例如酸和酚如五氟酚反应形成的酯；酸和N-羟基苯并三唑反应形成的活性酯；酰叠氮，例如通过酸和叠氮化物如二苯磷酰叠氮反应形成的叠氮化物；酰腈，例如通过酸和氰化物如二乙基磷酰腈反应形成的氰化物；或酸和碳二亚胺如二环己基碳二亚胺反应的产物，或酸和二-(2-氧-3-噁唑烷基)-磷酰氯反应的产物。反应在-30℃至60℃之间，方便地在0℃或0℃以下进行。在第二步中，在用于活化的温度下将式VI的化合物加入到溶液中，并将温度缓慢调至室温。这些方法对于本领域技术人员是熟知的。原则上，在肽化学中使用的所有合成酰胺的方法，例如″Methoden der organischen Chemie(Houben-Weyl)″Vol.XV/1和XV/2中所述的方法都可以应用。
式V的化合物是从式II的化合物通过水解制备而来。进行水解的条件取决于基团R3的性质。当R3是甲基或乙基时，反应是在一种碱例如氢氧化锂，氢氧化钠或氢氧化钾的存在下，在惰性溶剂或稀释剂中，例如在甲醇或乙醇中进行的。当R3是叔丁基基团时，反应是在一种酸存在下，例如在惰性溶剂如二乙醚或二噁烷中的盐酸溶液，或在二氯甲烷中的三氟乙酸之中进行的。当R3是苄基基团时，反应是在一种适当的载体如碳上的贵金属催化剂如钯或铂存在下通过氢解进行。不一定所有的水解法都与R1和R2基团相适应。当这些基团的性质不允许使用某些水解法时，有必要使用其他的水解法。
(c)再一种制备式I化合物的优选方法是使式V化合物与羟胺反应。该反应典型地包括两步—一罐程序。在第一步中，使式V的羧酸酯活化。该反应是在惰性溶剂或稀释剂中，例如在二氯甲烷，二噁烷或四氢呋喃中，在活化剂的存在下进行的。酸的适当的活性衍生物是例如酰卤，例如通过无机酰氯与酸反应形成的酰氯，例如亚硫酰氯；混合酐，例如通过氯甲酸酯如异丁基氯甲酸酯与酸反应形成的酸酐；活性酯，例如酸和酚如五氟酚反应形成的酯；酸和N-羟基苯并三唑反应形成的活性酯；酰叠氮，例如通过酸和叠氮化物如二苯磷酰叠氮反应形成的叠氮化物；酰腈，例如通过酸和氰化物如二乙基磷酰腈反应形成的氰化物；或酸和碳二亚胺如二环己基碳二亚胺反应的产物，或酸和二-(2-氧-3-噁唑烷基)-磷酰氯反应的产物。反应在-30℃至60℃之间，方便地在0℃或0℃以下进行。在第二步中，在用于活化的温度下将羟胺加入到溶液中，并将温度缓慢调至室温。这些方法对于本领域技术人员是熟知的。原则上，在肽化学中使用的所有合成酰胺的方法，例如″Methoden der organischenChemie(Houben-Weyl)″Vol.XV/1和XV/2中所述的方法都可以应用。
(d)式I化合物也可以通过固相支持合成法制备。将对苯二酸或2，5-噻吩二羧酸与结合于树脂的羟胺基部分(-O-NH2)，例如Wang树脂(EMCmicrocollections提供的Wang-O-NH2树脂，Tubingen)反应，形成结合树脂的羟胺酸。第二个碳酸基团按照例如″Methoden der organischen Chemie(Houben-Weyl)″Vol.XV/1和XV/2中所述的形成酰胺的标准方法，将第二个碳酸基团与胺反应。之后，从固相载体上释放羟胺酸。这可以用，例如TFA进行。如果必要，粗产物可以通过LC-MC纯化。
在下述非限制性的实施例中将举例说明本发明，在所述实施例中，如果未另外声明(i)通过在真空中旋转蒸发来进行蒸发，并且在通过过滤去除残余的固体如干燥剂后进行加工(work-up)程序；(ii)在环境温度即18-25℃，在惰性气体如氩气和氮气气氛下进行操作；(iii)在购自E.Merck，Darmstadt，德国的Merck Kieselgel silica或MerckLichroprep RP-18反相silica上进行柱层析(通过快速程序)和高效液相色谱(HPLC)；(iv)提供的产率仅是为了举例说明的目的而不必是所达到的最大值；(v)使用Mettler SP62自动熔点仪一油浴仪或Kofler热板仪测量熔点；(vi)通过核(通常是质子)磁共振(NMR)和质谱技术(利用APCI的Micromass台式II仪或利用电雾化的Micromass台式ZMD)确认式I的终产物的结构；(vii)中间体通常不完全表征，并且通过薄层层析评价纯度。
(viii)使用下述简称DMF，N，N-二甲基甲酰胺；DMSO，二甲亚砜；THF，四氢呋喃；MeOH，甲醇；HCI，盐酸；
NaH，氢化钠；CH2Cl2，二氯甲烷；H2SO4，硫酸；sat.，饱和的；sol.，溶液；rt，室温；eq，当量实施例1噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(萘-1-基甲基)-酰胺](1a)在-10℃下，将1.9g噻吩-2，5-二羧酸单甲酯和1.2mL N-甲基吗啉溶解于20mL CH2Cl2。向该溶液中加入1.5mL氯甲酸异丁酯。搅拌10min后，加入1.7mL 1-(氨基甲基)-萘在5mL CH2Cl2中。撤去冰浴，使反应混合液的温度达到室温。90min后，加入10mL水和10mL 2N HCl。进行相分离，用水洗涤有机相。蒸发溶剂后，得到4.4g粗5-[(萘-1-基甲基)-氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯(1b)，将其从乙酸乙酯，石油醚中重结晶纯化，产率58％，mp125℃。
向550mg羟胺盐酸盐在8mL MeOH中的溶液中加入2/3 275mg钠在8mL MeOH中的溶液。向该溶液中加入1.30g[(萘-1-基甲基)-氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯(1b)在30mL MeOH中的溶液，然后加入剩余的甲醇钠溶液。在室温下搅拌4h后，蒸发溶剂。加入20mL水，加入4mL 50％乙酸酸化，过滤收集沉淀。用THF研制后，得到0.76g白色粉末状噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(萘-1-基甲基)-酰胺](1a)，mp170℃。
实施例2噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-三氟甲基-苄基酰胺)(2a)按照实施例1制备1a所述的类似方法，从噻吩-2，5-二羧酸单甲酯制备2a。最后产生噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-三氟甲基-苄基酰胺)(2a)的产率为40％，mp.172-174℃。
实施例3N-羟基-N′-萘-1-基甲基-对苯二甲酰胺(3a)在25℃下，将leq Wang-O-NH2与11eq对苯二酸，5.5eq N，N′-二异丙基碳化二亚胺，5.5eq 1-羟基苯并三唑和25eq二异丙基乙基胺在DMF中一起振摇4h。之后，用DMF洗涤树脂5次，用MeOH洗涤3次，THF 3次，CH2Cl23次和二乙基醚3次。然后将树脂与5eq三氟乙酸五氟苯基酯和10eq吡啶一起再次振摇。之后，用DMF洗涤树脂2次，然后用CH2Cl2洗涤2次，再用二乙基醚洗涤2次。然后将树脂与5eq萘甲基胺，10eq二异丙基乙基胺和1eq 1-羟基苯并三唑一起振摇。然后将其与5eq三氟乙酸五氟苯基酯和10eq吡啶一起振摇。之后，用DMF洗涤树脂2次，然后用CH2Cl2洗涤2次。为了从固体载体上释放产物，在室温下将树脂与50％TFA在无水CH2Cl2中，并加入5％三异丙基硅烷一起振摇1h。过滤液相，用CH2Cl2洗涤树脂3次，蒸发合并的滤液。将粗产物溶解于叔-丁醇/H2O(80∶20)，冷冻干燥。为了中和残留的TFA，加入100μL 25％NH4OH-sol，再次冷冻干燥。残留的固体通过制备型LC-MS纯化，得到N-羟基-N′-萘-1-基甲基-对苯二甲酰胺，MS(APCI)321.1(M+1)。
实施例4噻吩-2，5-二羧酸2-(3-氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺(4a)将9.0g噻吩-2，5-二羧酸单甲酯在30mL亚硫酰氯中回流，直到停止产生气体。蒸发混合液，在0℃下，将残留物缓慢加入10.3g 3-氯苄基胺和20g三乙基胺在180mL CH2Cl2的溶液中。15min后，撤去冰浴，使反应混合液达到室温。2h后，用水停止反应，进行相分离，用CH2Cl2萃取水相。用Na2SO4干燥合并的有机相，蒸发，产生粗产物。粗产物从二乙醚/庚烷中重结晶纯化，产生13.9g(93％)粗5-[(3-氯苄基)-氨基甲酰基]-噻吩-2-羧酸甲酯(4b)，mp 91-93℃。向2.9g羟胺盐酸盐在45mL MeOH的溶液中加入25mL 1.4g钠在40mL MeOH中的溶液。向其中加入6.4g 4b的酯在30mL MeOH中的溶液，然后加入剩余的15mL甲醇钠溶液。在室温下搅拌3h后，加入1N HCl酸化溶液，并加入一些乙酸乙酯。得到白色固体状的噻吩-2，5-二羧酸2-(3-氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺(4a)沉淀；4.7g，73％，mp.183℃。
实施例5噻吩-2，5-二羧酸2-(3，5-二甲基-苄基酰胺)5-羟基酰胺(5a)按照实施例4所述制备4a的类似方法，从噻吩-2，5-二羧酸单甲酯制备5a。MS(APCI)305.3(M+1)实施例6噻吩-2，5-二羧酸2-己基酰胺5-羟基酰胺(6a)按照实施例4所述制备4a的类似方法，从噻吩-2，5-二羧酸单甲酯制备6a，mp171-173℃。
实施例7噻吩-2，4-二羧酸2-(3，5-二甲基-苄基酰胺)4-羟基酰胺(7a)将0.5g 2-羧基-噻吩-4-羧酸乙酯(Janda，M.，et al.，Org.Prep.和Proced.Int.3(6)(1971)295-297)和0.67g N′-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺xHCl置于50mL DCM中搅拌15min。然后，加入0.338g 3，5-二甲基苄基胺，将混合液搅拌过夜。用2N HCl和水萃取溶液，然后蒸发。用异己烷研制残留物，过滤得到的结晶，空气干燥，产生0.58g(73％)粗5-(3，5-二甲基-苄基氨基甲酰基)-噻吩-3-羧酸乙酯(7b)。按照实施例4中所述将4b转化为4a的类似方法，将7b的酯与羟胺盐酸盐反应，转化为题述化合物。色谱(二氧化硅，乙酸乙酯)纯化后，得到结晶状噻吩-2，4二羧酸2-(3，5-二甲基-苄基酰胺)4-羟基酰胺(7a)；44mg，9％，mp181℃(decomp.)。
实施例8噻吩-2，4-二羧酸2-(3-氯-苄基酰胺)4-羟基酰胺(8a)按照实施例7所述制备7a的类似方法，从2-羧基-噻吩-4-羧酸乙酯制备8a；163mg，34％，mp90℃(decomp.)。
实施例9噻吩-2，4-二羧酸4-羟基酰胺2-(4-三氟甲基-苄基酰胺)(9a)按照实施例7所述制备7a的类似方法，从2-羧基-噻吩-4-羧酸乙酯制备9a；56mg，10％，mp174-177℃。
实施例10噻吩-2，4-二羧酸2-[(苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基)-酰胺]4-羟基酰胺(10a)按照实施例7所述制备7a的类似方法，从2-羧基-噻吩-4-羧酸乙酯制备10a；16mg，3％，mp182℃(decomp.)。
实施例11噻吩-2，4-二羧酸2-己基酰胺4-羟基酰胺(11a)按照实施例7所述制备7a的类似方法，从2-羧基-噻吩-4-羧酸乙酯制备11a；92mg，20％，mp150℃(decomp.)。
实施例12噻吩-2，4-二羧酸4-(3，5-二甲基-苄基酰胺)2-羟基酰胺(12a)将5.0g 2-羧基-噻吩-4-羧酸乙酯(Org.Prep.and Proced.Int.3(6)(1971)295)溶解于50mL THF，加入4.5g亚硫酰氯。回流4h后，蒸发混合液。将粗酰基氯加入3.1g O-苄基羟胺和3.06g三乙胺在80mL DCM中的溶液。搅拌4h后，用2N HCl和水洗涤溶液，干燥，蒸发。用异己烷/二乙醚研制残留物后，经过滤，空气干燥得到明亮结晶5-苄氧基氨基甲酰基-噻吩-3-羧酸乙酯(12b)；3.5g，46％。将0.46g NaOH溶解于45mL乙醇和5mL水。加入12b的酯，将溶液回流2h。冷却后，蒸发乙醇，用二乙醚萃取水相。加入2N HCl酸化水相，通过过滤收集得到的沉淀，产生2.8g(88％)5-苄氧基氨基甲酰基-噻吩-3-羧酸(12c)固体。
将0.4g 5-苄氧基氨基甲酰基-噻吩-3-羧酸(12c)溶解于50mL DCM，加入0.387g N′-(3-二甲基氨基丙基)-N-乙基碳二亚胺xHCl。搅拌15min后，加入0.195g 3，5-二甲基苄基胺，搅拌混合液过夜。
用2N HCl和水萃取溶液，然后蒸发。用乙醚/异己烷研制残留物，过滤得到的结晶，空气干燥，产生0.44g(77％)噻吩-2，4-二羧酸2-(苄氧基-酰胺)4-(3，5-二甲基-苄基酰胺)(12d)。将其在THF和MeOH 1∶1的混合液中，用Pd/CaSO4/C氢化，然后通过制备型HPLC/MS纯化，产生12aMS(APCI)303.1(M-1)。
实施例13按照实施例12中所述的类似方法，制备下列化合物1.噻吩-2，4-二羧酸4-(3-氯-苄基酰胺)2-羟基酰胺2.噻吩-2，4-二羧酸4-己基酰胺2-羟基酰胺实施例144-{[(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-羰基)-氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯按照实施例12中所述的类似方法，除了使用2-羧基-噻吩-5-羧酸甲酯和4-(氨基甲基)-苯甲酸甲酯作为原料，制备4-{[(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-羰基)-氨基]-甲基}-苯甲酸甲酯，mp.156-166℃。
实施例15按照实施例1中所述的类似方法，以及文献中报道的已知方法(例如标准操作例如Houben-Weyl，″Methoden der Organischen Chemie，GeorgThieme Verlag″，Stuttgart；Organic Reactions，John Wiley & Sons，Inc.，NewYork)，制备下列化合物，并用MS(APCI)鉴定1.5-(4-二苯甲基-哌嗪-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺2.噻吩-2，5-二羧酸2-苄基酰胺5-羟基酰胺3.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲基-丁基)-酰胺)4.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(苯乙基-酰胺)5.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}6.噻吩-2，5-二羧酸2-(4-氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺7.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1，2，3，4-四氢化萘-1-基)-酰胺]8.噻吩-2，5-二羧酸2-(2-乙氧基-苄基酰胺)5-羟基酰胺
9.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，4-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺10.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-1，2-二氢化茚-1-基酰胺11.噻吩-2，5-二羧酸2-[(苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基)-酰胺]-5-羟基酰胺12.5-(4-苯基-哌嗪-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺13.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-异丙氧基-丙基)-酰胺]14.5-(4-乙酰基-哌嗪-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺15.噻吩-2，5-二羧酸2-二丁基酰胺5-羟基酰胺16.5-(4-苄基-哌啶-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺17.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(吡啶-3-基甲基)-酰胺]18.噻吩-2，5-二羧酸2-环己基酰胺5-羟基酰胺19.噻吩-2，5-二羧酸2-环丙基酰胺5-羟基酰胺20.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-酰胺}21.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(2-甲氧基-苄基酰胺)22.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-环己-1-烯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺23.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吗啉-4-基-乙基)-酰胺]24.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-甲基硫烷基-乙基)-酰胺]25.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(四氢呋喃-2-基甲基)-酰胺]26.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-苯基酰胺27.5-(吗啉-4-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺28.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-甲氧基-苯基)-酰胺]29.5-(吡咯烷-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺30.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-苄氧基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺31.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-氯-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺32.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-碘-苯基)-酰胺]33.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3-乙基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺34.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-乙基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺35.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3-氯-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺36.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-碘-苯基)-酰胺]
37.5-(1，4-二氧杂-8-氮杂-螺[4.5]癸烷-8-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺38.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-吗啉-4-基-丙基)-酰胺]39.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-戊基酰胺40.噻吩-2，5-二羧酸24(2-二乙基氨基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺41.噻吩-2，5-二羧酸2-庚基酰胺5-羟基酰胺42.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(异丁基-酰胺)43.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-壬基酰胺44.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]45.噻吩-2，5-二羧酸2-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-酰胺5-羟基酰胺46.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[2-(5-硝基-吡啶-2-基氨基)-乙基]-酰胺47.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-甲基-苄基酰胺)48.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-p-甲苯基-乙基)-酰胺]49.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[3-(2-氧代-吡咯烷-1-基)-丙基]-酰胺50.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-哌啶-1-基-乙基)-酰胺]51.噻吩-2，5-二羧酸2-环丁基酰胺5-羟基酰胺52.噻吩-2，5-二羧酸2-(2-氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺53.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-苯基-丙基)-酰胺]54.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，3-二甲氧基-苄基酰胺)5-羟基酰胺55.噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-苄基-哌啶-4-基)-酰胺]5-羟基酰胺56.4-[(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-羰基)-氨基]-哌啶-1-羧酸乙酯57.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3-二甲基氨基-2，2-二甲基-1-丙基)-酰胺]5-羟基酰胺58.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3-乙氧基-丙基)-酰胺]5-羟基酰胺59.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3-二甲基氨基-丙基)-酰胺]5-羟基酰胺60.噻吩-2，5-二羧酸2-[2-(2-氯-苯基)-乙基]-酰胺5-羟基酰胺61.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(2-三氟甲基-苄基酰胺)62.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-三氟甲基-苄基酰胺)63.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，5-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺
64.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，6-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺65.噻吩-2，5-二羧酸2-(3，4-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺66.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-咪唑-1-基-丙基)-酰胺]67.噻吩-2，5-二羧酸2-[(1-环己基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺68.噻吩-2，5-二羧酸2-[2-(3-氯-苯基)-乙基]-酰胺5-羟基酰胺69.噻吩-2，5-二羧酸2-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-酰胺5-羟基酰胺70.噻吩-2，5-二羧酸2-[2-(2，4-二氯-苯基)-乙基]-酰胺5-羟基酰胺71.噻吩-2，5-二羧酸2-环丙基甲基-酰胺5-羟基酰胺72.噻吩-2，5-二羧酸2-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-酰胺5-羟基酰胺73.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-二乙基氨基-1-甲基-丁基)-酰胺]5-羟基酰胺74.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺]75.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-吡咯烷-1-基-乙基)-酰胺]76.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-甲基-己基)-酰胺]77.噻吩-2，5-二羧酸2-环庚基酰胺5-羟基酰胺78.噻吩-2，5-二羧酸2-环戊基酰胺5-羟基酰胺79.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，4-二氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺80.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3-二乙基氨基-丙基)-酰胺]5-羟基酰胺81.噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，5-二甲基-己基)-酰胺]5-羟基酰胺82.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2，2-二苯基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺83.3-[(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-羰基)-氨基]-丁酸乙酯84.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-乙基-己基)-酰胺]5-羟基酰胺85.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-甲氧基-苄基酰胺)86.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-甲基-苄基酰胺)87.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-苯基-丙基)-酰胺]88.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-二异丙基氨基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺89.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[2-(4-硝基-苯基)-乙基]-酰胺90.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3，3-二苯基-丙基)-酰胺]-5-羟基酰胺91.噻吩-2，5-二羧酸2-(2-氨基-苄基酰胺)5-羟基酰胺92.噻吩-2，5-二羧酸2-(4-溴-苄基酰胺)5-羟基酰胺
93.噻吩-2，5-二羧酸2-(3，5-二-三氟甲基-苄基酰胺)5-羟基酰胺94.噻吩-2，5-二羧酸2-(3-溴-苄基酰胺)5-羟基酰胺95.噻吩-2，5-二羧酸2-(3-氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺96.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-甲氧基-苄基酰胺)97.噻吩-2，5-二羧酸2-(2-氯-6-氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺98.噻吩-2，5-二羧酸2-(4-叔-丁基-苄基酰胺)5-羟基酰胺99.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[2-(4-氨磺酰-苯基)-乙基]-酰胺}100.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-苄基硫烷基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺101.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[2-(4-羟基-苯基)-乙基]-酰胺}102.噻吩-2，5-二羧酸2-{[2-(4-氯-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺103.噻吩-2，5-二羧酸2-{[2-(3，4-二甲氧基-苯基)-乙基]-酰胺}5-羟基酰胺104.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-苯氧基-乙基)-酰胺]105.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-苯基-丁基)-酰胺]106.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3，4-二甲基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺107.5-(4-嘧啶-2-基-哌嗪-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺108.噻吩-2，5-二羧酸2-[(3，4-二甲氧基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺109.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-叔-丁基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺110.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-甲氧基-2-甲基-苯基)-酰胺]111.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-二甲基氨基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺112.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-苯氧基-苯基)-酰胺]113.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-p-甲苯基酰胺114.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-哌啶-1-基-苯基)-酰胺]115.1-(5-羟基氨基甲酰基-噻吩-2-羰基)-哌啶-4-羧酸甲酯116.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[甲基-(1-甲基-哌啶-4-基)-酰胺]117.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{甲基-[2-(4-硝基-苯基)-乙基]-酰胺}118.噻吩-2，5-二羧酸2-(丁基-甲基-酰胺)5-羟基酰胺119.噻吩-2，5-二羧酸2-二乙基酰胺5-羟基酰胺120.噻吩-2，5-二羧酸2-[(4-环己基-苯基)-酰胺]5-羟基酰胺
121.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[甲基-(2-甲基氨基-乙基)-酰胺]122.噻吩-2，5-二羧酸2-[乙基-(3-乙基氨基-丙基)-酰胺]5-羟基酰胺123.5-[4-(2-吗啉-4-基-2-氧-乙基)-哌嗪-1-羰基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺124.5-(4-二甲基氨基甲酰基甲基-哌嗪-1-羰基)-噻吩-2-羧酸羟基酰胺125.5-[4-(2-氧-2-哌啶-1-基-乙基)-哌嗪-1-羰基]-噻吩-2-羧酸羟基酰胺126.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-三氟甲氧基-苄基酰胺)127.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-苯氧基-苄基酰胺)128.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-甲基-3-苯基-丙基)-酰胺]129.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-甲氧基-丙基)-酰胺]130.噻吩-2，5-二羧酸2-(4-氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺131.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-乙酰基氨基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺132.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-甲基-庚基)-酰胺]133.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-甲基-丁基)-酰胺]134.噻吩-2，5-二羧酸2-烯丙基酰胺5-羟基酰胺135.噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，3-二甲基-丁基)-酰胺]-5-羟基酰胺136.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-丙基酰胺137.噻吩-2，5-二羧酸2-仲-丁基酰胺5-羟基酰胺138.噻吩-2，5-二羧酸2-丁基酰胺5-羟基酰胺139.噻吩-2，5-二羧酸2-(3，4-二氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺140.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，3-二氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺141.噻吩-2，5-二羧酸2-(2，3-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺142.噻吩-2，5-二羧酸2-(2-氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺143.噻吩-2，5-二羧酸2-(3，4-二甲氧基-苄基酰胺)5-羟基酰胺144.噻吩-2，5-二羧酸2-(3，5-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺145.噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-氨基-苯基)-酰胺)5-羟基酰胺146.噻吩-2，5-二羧酸2-([4-(2-氨基-苯基氨基甲酰基)-苄基酰胺]5-(苄氧基-酰胺)147.噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[甲基-(4-三氟甲基-苄基)-酰胺]
实施例16按照实施例3中所述的类似方法，以及文献中报道的已知方法(例如标准操作例如Houben-Weyl，″Methoden der Organischen Chemie，GeorgThieme Verlag″，Stuttgart；Organic Reactions，John Wiley & Sons，Inc.，NewYork)，制备下列化合物，并用MS(APCI)鉴定148.4-(4-二苯甲基-哌嗪-1-羰基)-N-羟基-苯甲酰胺149.N-羟基-N′-吡啶-3-基甲基-对苯二甲酰胺150.N-苄基-N′-羟基-对苯二甲酰胺151.N-环己基N′-羟基-对苯二甲酰胺152.N-环丙基-N′-羟基-对苯二甲酰胺153.N-己基-N′-羟基-对苯二甲酰胺154.N-羟基-N′-(3-甲基-丁基)-对苯二甲酰胺155.N-羟基-N′-苯乙基-对苯二甲酰胺156.N-羟基-N′-[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-对苯二甲酰胺157.N-(3-氯-苄基)-N′-羟基-对苯二甲酰胺158.N-羟基-N′-(2-甲氧基-苄基)-对苯二甲酰胺159.N-(4-氟-苄基)-N′-羟基-对苯二甲酰胺160.N-羟基-N′-(1，2，3，4-四氢化萘-1-基)-对苯二甲酰胺161.N-羟基-N′-(4-三氟甲基-苄基)-对苯二甲酰胺162.N-(2，4-二氟-苄基)-N′-羟基-对苯二甲酰胺163.N-羟基-N′-1，2-二氢化茚-1-基-对苯二甲酰胺164.N-苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-基甲基-N′-羟基-对苯二甲酰胺165.N-羟基-4-(4-苯基-哌嗪-1-羰基)-苯甲酰胺166.N-(3，5-二甲基-苄基)-N′-羟基-对苯二甲酰胺167.N-羟基-N′-(3-异丙氧基-丙基)-对苯二甲酰胺168.4-(4-乙酰基-哌嗪-1-羰基)-N-羟基-苯甲酰胺169.N，N-二丁基-N′-羟基-对苯二甲酰胺170.4-(4-苄基-哌啶-1-羰基)-N-羟基-苯甲酰胺171.N-羟基-N′-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]-对苯二甲酰胺172.N-(2-乙氧基-苄基)-N′-羟基-对苯二甲酰胺
173.N-(2-环己-1-烯基-乙基)-N′-羟基-对苯二甲酰胺174.N-羟基-N′-(2-吗啉-4-基-乙基)-对苯二甲酰胺175.N-羟基-N′-(2-甲基硫烷基-乙基)-对苯二甲酰胺176.N-羟基-N′-(四氢呋喃-2-基甲基)-对苯二甲酰胺实施例17本发明化合物对人结肠癌细胞系的效果评价MTT被广泛用于细胞毒性效果或者体外肿瘤细胞的化学敏感性的定量测定。该检测基于代谢活性细胞可将黄色四唑盐MTT酶切为紫色甲结晶。详细方法，参见，Rubinstein，L.V.，等，J.Natl.Cancer Inst.82(1990)1113-1118。
按照下列方法进行操作将HT-29 cells(人结肠癌细胞系)在RPMI1640，2.5％FCS，2mM谷氨酰胺，100u/ml青霉素，100ug/ml链霉素中培养。进行检测时，将细胞接种于384孔平板的相同培养基中，每孔900个细胞。第二天，加入从30uM至1.5nM浓度不等的化合物(溶解于10mMDMSO)。5天后，主要按照生产商(细胞增殖试剂盒I，MTT，来自RocheMolecular Biochemicals)的说明，进行MTT检测。简单地说加入MTT标记试剂至终浓度为0.5mg/ml，在37℃，5％CO2下孵育4小时。孵育过程中，紫色甲结晶形成。加入增溶溶液(20％SDS在0.02M HCl中)后，将平板在37℃，5％CO2下孵育过夜。小心混合后，将平板置于Victor 2(扫描多孔分光光度计(scanning multiwell spectrophotometer)，Wallac)在550nm下测量。
样品中总代谢活性的降低是由于活细胞数目的减少。这种降低与紫色甲结晶溶解产生的紫色量直接相关。用XL-fit测定IC50。
该实验结果在下表1中提供。
表1
实施例18片剂配方项目 成分mg/片1 化合物2a25 1002 无水乳糖73 353 交联羧甲基纤维素钠 684 聚乙烯吡咯烷酮K30 565 硬脂酸镁11总量110 150化合物2a在实施例2中有描述。
方法1.在适当的混合器中混合第1，2和3项成分15分钟。
2.用20％聚乙烯吡咯烷酮K30溶液(第4项)对步骤1的粉末混合物制粒。
3.在50℃下干燥步骤2的颗粒。
4.使步骤3的颗粒通过适当的研磨设备。
5.将第5项成分加入步骤4的研磨后的颗粒，混合3分钟。
6.在适当的压片机上压制步骤5的颗粒。
参考文献目录癌症肿瘤学原理和实践(CancerPrinciples & Practice of Oncology)，Vincent T.DeVita，Jr.，Samuel Hellmann，Steven A.Rosenberg；第5版，Lippincott-Raven Publishers，1997Houben-Weyl，″Methoden der 0rganischen Chemie，Georg ThiemeVerlag″，Stuttgart；Organic Reactions，John Wiley & Sons，Inc.，New YorkHouben-Weyl，Methoden der organischen Chemie，Vol.XV/1和XV/2Koyama，Y.，等，Blood 96(2000)1490-1495Marks，P.M.，等，J.Natl.Cancer Inst.92(2000)1210-1216Janda，M.，等，Org.Prep.and Proced.Int.3(6)(1971)295-297Rubinstein，L.V.，等，J.Natl.Cancer Inst.82(1990)1113-1118US 2,680,731US 5,369,108WO98/55449Holba，V.，等，Z.Phys.Chem.(Leipzig)262(3)(1981)445-448
权利要求
1.式I的化合物 其中 表示苯环，其可以是未取代的，也可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]-氨基-，(1-4C)烷酰基氨基，(1-3C)亚烷基二氧基-或酰基的取代基取代，或 表示噻吩环，其可以是未取代的，也可以被1或2独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]-氨基-或(1-4C)烷酰基氨基，(1-3C)亚烷基二氧基-或酰基的取代基取代，和R1和R2相同或不同，各自为氢原子；直链或支链(1-14C)烷基，其可以是未取代的，也可以被1或几个独立地选自卤原子，羟基-，硝基-，氨基，或碳环基或杂环基的取代基取代，且其中链长大于2个碳原子时，一个或几个非相邻原子可以被氧，氮或硫原子置换，且其中2个原子可以通过双键或三键连接；碳环基；或杂环基；或者R1和R2与氮原子一起形成3-6元环，其中还可以含有其他的独立地选自氮，氧和硫的杂原子，它们可以通过碳环基或杂环基成环，而且它们可以是未取代的，或可以被1、2或3个独立地选自卤原子，(1-4C)烷基-，三氟甲基-，羟基-，(1-4C)烷氧基-，芳基-，杂芳基-，芳基烷基-，芳基烷氧基-，芳氧基-，(1-3C)亚烷基二氧基-，硝基-，氨基-，(1-4C)烷基氨基-，二[(1-4C)烷基]氨基-，(1-4C)烷酰基氨基-或酰基的取代基取代；它们的对映异构体，非对映异构体，外消旋物和生理可接受的盐。
2.按照权利要求1的式I化合物，其中 为噻吩，R1为氢，R2为上述给出的定义。
3.按照权利要求1或2的式I化合物，其中R2为苄基或取代的苄基。
4.按照权利要求1的式I化合物，其中 为噻吩，R1和R2与氮原子一起形成哌嗪或哌啶环，该环可以被乙酰基，二苯甲基或苯基取代，同时苯基也可以被取代。
5.按照权利要求1的式I化合物，它们选自下列化合物噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(萘-1-基甲基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-三氟甲基-苄基酰胺)N-羟基-N′-萘-1-基甲基-对苯二甲酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(3-氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(3，5-二甲基-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-己基酰胺5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-[(1，5-二甲基-己基)-酰胺]5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(2-苯氧基-乙基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-(3，5-二甲基-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(3，5-二-三氟甲基-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(3-溴-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(4-叔-丁基-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-三氟甲基-苄基酰胺)噻吩-2，5-二羧酸2-(3-氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-[(3，3-二苯基-丙基)-酰胺]5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(3，4-二氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-苯基-乙基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-三氟甲基-苄基酰胺)噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(1-甲基-己基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-庚基酰胺5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(4-苯基-丁基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-苄基酰胺5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-己基酰胺5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(3-氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(2，4-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-[(2-苄基硫烷基-乙基)-酰胺]5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(4-溴-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-{[2-(4-羟基-苯基)-乙基]-酰胺}噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(4-甲氧基-苄基酰胺)噻吩-2，5-二羧酸2-(2，3-二氯-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(3-苯基-丙基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-(2，5-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-(2-氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-[(萘-1-基甲基)-酰胺]噻吩-2，5-二羧酸2-羟基酰胺5-(3-甲基-苄基酰胺)噻吩-2，5-二羧酸2-(2，6-二氟-苄基酰胺)5-羟基酰胺。
6.权利要求1-5之一的化合物的制备方法，将式III的化合物 其中A的含义与上文相同，R3为(1-4C)烷基，与式HNR1R2的胺，在活化剂的存在下反应，其中R1和R2的定义与上文相同，得到式II的化合物 将其在适当碱的存在下与羟胺反应，然后将得到的式I化合物转化成其对映异构体、非对映异构体、外消旋体或生理可接受的盐。
7.含有权利要求1-5的式I化合物作为活性成分，以及药用赋形剂或稀释剂的药物。
8.权利要求1-5的化合物在制备具有组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制剂活性的药物中的用途。
9.按照权利要求8的化合物的用途，其中所述药物作为细胞增殖抑制剂。
全文摘要
式(I)的化合物，其中A，R
文档编号C07D295/18GK1516697SQ02812010
公开日2004年7月28日 申请日期2002年6月13日 优先权日2001年6月15日
发明者U·莱塞－赖夫, T·萨特尔考, G·齐默尔曼, U 莱塞-赖夫, 囟 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司