嘧啶酮类化合物、组合物及方法

专利名称：嘧啶酮类化合物、组合物及方法
技术领域：
本发明涉及作为有丝分裂驱动蛋白KSP之抑制剂的化合物，其可用于治疗细胞增殖性疾病，如癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病、真菌性疾病以及炎症。
背景技术：
用于治疗癌症的治疗剂包括作用在微管上的紫杉烷和长春花生物碱。微管是有丝分裂纺锤体的初级结构成分。有丝分裂纺锤体负责基因组的复制模板向细胞分裂所产生的两个子细胞之一中的分布。假设这些药物对有丝分裂纺锤体的破坏导致对癌细胞分裂的抑制，并诱发癌细胞死亡。然而，微管形成其他类型的细胞结构，包括用于神经过程的细胞内输送的轨道。因为这些药物不会特异性地靶向有丝分裂纺锤体，所以也产生一些副作用，限制了它们的应用。
提高癌症治疗药物的特异性是相当令人感兴趣的，这是因为如果能够降低与给药这些药物相关的副作用，可实现更高的治疗益处。传统上，癌症治疗中的巨大提高是与鉴别出通过新机理作用的治疗剂有关的。这其中的例子不仅包括紫杉烷，而且还包括作为拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类药物。由这两类药物来看，有丝分裂驱动蛋白对于新的抗癌药物是非常有吸引力的。
有丝分裂驱动蛋白是有丝分裂纺锤体形成及功能所必需的酶，但通常并不是其他微管结构的一部分，例如在神经过程中。有丝分裂驱动蛋白在有丝分裂的所有阶段都起到基本的作用。这些酶是将ATP水解所释放的能量转化为驱动细胞货位沿微管方向移动的机械力的“分子发动机”。足以完成该任务的催化域是一个约340个氨基酸的紧密结构。在有丝分裂期间，驱动蛋白将微管组装成有丝分裂纺锤体的双极结构。驱动蛋白介导染色体沿纺锤体微管的移动，以及有丝分裂纺锤体中与有丝分裂特殊阶段相关的结构变化。有丝分裂驱动蛋白功能的实验干扰导致有丝分裂纺锤体的畸形或者功能障碍，经常使细胞周期休止和细胞死亡。
KSP是已鉴别出的有丝分裂驱动蛋白中的一种。KSP属于进化保守型驱动蛋白亚族的正端方向(plus end-directed)的微管运动原，其组装成由反平行同型二聚体组成的双极同型四聚体。在有丝分裂期间，KSP与有丝分裂纺锤体的微管结合。在人细胞中微量注射针对KSP的抗体，可在细胞分裂的前中期期间防止纺锤极分开，产生单极纺锤体，而且导致有丝分裂停止，并诱发程序细胞死亡。KSP以及相关的驱动蛋白在其他非人类的生物中使反平行的微管成束，并使它们相互之间滑动，由此迫使两个纺锤极分开。KSP也可介导分裂后期B纺锤体的拉长以及纺锤极处微管的聚焦。
已有人描述了人KSP(也称为HsEg5)[Blangy等人，Cell，831159-69(1995)；Whitehead等人，Arthritis Rheum.，391635-42(1996)；Galgio等人，J.Cell Biol.，135339-414(1996)；Blangy等人，J.Biol.Chem.，27219418-24(1997)；Blangy等人，Cell Motil Cytoskeleton，40174-82(1998)；Whitehead和Rattner，J.Cell Sci.，1112551-61(1998)；Kaiser等人，JBC 27418925-31(1999)；GenBank accession numbersX85137，NM004523和U37426]，以及KSP基因的片段(TRIP5)[Lee等人，Mol Endocrinol.，9243-54(1995)；GenBank accession number L40372]。已有人描述了非洲爪蟾属KSP同系物(Eg5)、以及果蝇属KLP61 F/KRP1 30。
包括KSP的有丝分裂驱动蛋白是发现和研制新型有丝分裂化学治疗剂的有用目标。因此，本发明的目的是提供用于抑制有丝分裂驱动蛋白KSP的化合物、组合物及方法。

发明内容
根据如上所述的目的，本发明提供可用于治疗细胞增殖性疾病的化合物。该化合物是KSP抑制剂、特别是人KSP抑制剂。本发明还提供包含所述化合物的组合物、以及使用此等化合物或组合物的方法，它们可用于治疗细胞增殖性疾病。
在一个方面中，本发明涉及用于治疗细胞增殖性疾病、以及通过抑制KSP的活性可治疗的疾病的方法。该方法使用式I所示的化合物 其中R1选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R2和R2′独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；或者R2和R2′一起形成任选取代的3-7元环；
R3选自任选取代的咪唑基、任选取代的咪唑啉基、-NHR6、-N(R6)(COR7)、-N(R6)(SO2R7a)、以及-N(R6)(CH2R7b)；R4和R5独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺酰基、烷基氨磺酰基、烷基硫烷基(alkylsulfanyl)、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、和任选取代的杂芳基；或者R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的5、6或7元脂族碳环；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基；R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、R8O-以及R14-NH-；R7a选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、以及R14-NH-；R7b选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R8选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R14选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；(式I包括单个立体异构体以及立体异构体的混合物)；式I化合物的药物学上可接受的盐；式I化合物的药物学上可接受的溶剂化物；或者式I化合物的药物学上可接受的盐的药物学上可接受的溶剂化物。
在一个方面中，本发明涉及用于治疗细胞增殖性疾病或者其他可通过抑制KSP来治疗的病症的方法，该方法包括给药治疗有效量的式I化合物、式I化合物的药物学上可接受的盐、式I化合物的药物学上可接受的溶剂化物、或者式I化合物的药物学上可接受的盐的药物学上可接受的溶剂化物。此等疾病和病症包括癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病、真菌性疾病和炎症。
在另一个方面中，本发明涉及用于抑制KSP驱动蛋白的化合物。该化合物具有如上所示的结构，或者是式I化合物的药物学上可接受的盐、式I化合物的药物学上可接受的溶剂化物、或者式I化合物的药物学上可接受的盐的药物学上可接受的溶剂化物。本发明还涉及药物组合物，其包含治疗有效量的式I化合物、式I化合物的药物学上可接受的盐、式I化合物的药物学上可接受的溶剂化物、或者式I化合物的药物学上可接受的盐的药物学上可接受的溶剂化物，以及一种或多种药物赋形剂。在另一个方面中，该组合物还包括除本发明化合物之外的化学治疗剂。
另外，本发明还提供用于筛选结合KSP驱动蛋白的化合物的方法，例如替换本发明化合物的结合或者与本发明的化合物的结合进行竞争的化合物。该方法包括混合经标记的本发明化合物、KSP驱动蛋白、以及至少一种候选药物，然后测定候选生物活性药物对KSP驱动蛋白的结合。
在又一个方面中，本发明提供用于筛选KSP驱动蛋白活性调节剂的方法。该方法包括混合本发明的化合物、KSP驱动蛋白、以及至少一种候选药物，然后测定候选生物活性药物对KSP驱动蛋白活性的作用。
具体实施例方式
定义在用于本发明的说明书中时，以下单词和缩写通常具有如下所定义的含义，除非它们所使用的环境表明具有其他含义。以下缩写及术语的含意如下所示
Ac ＝乙酰基BNB＝4-溴甲基-3-硝基苯甲酸Boc＝t-丁氧基羰基Bu ＝丁基c- ＝环CBZ＝苄氧基羰基DBU＝二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯DCM＝二氯甲烷CH2Cl2DCE＝二氯乙烯DEAD ＝二乙基偶氮二羧酸酯DIC＝二异丙基碳化二亚胺DIEA ＝N，N-二异丙基乙基胺DMAP ＝4-N，N-二甲基氨基吡啶DMF＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO ＝二甲基亚砜DVB＝1，4-二乙烯基苯EEDQ ＝2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氢喹啉Et ＝乙基ETOH ＝乙醇Fmoc ＝9-芴基甲氧基羰基GC ＝气相色谱HATU ＝O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸尿HMDS ＝六甲基二硅氮烷HOAc ＝乙酸HOBt ＝羟基苯并三唑Me ＝甲基mesyl ＝甲磺酰基MTBE ＝甲基叔丁基醚NMO N-甲基氧化吗啉PEG ＝＝ 聚乙二醇Ph ＝苯基PhoH ＝苯酚PfP＝五氟苯酚
PPTS＝对甲苯磺酸吡啶盐Py ＝吡啶PyBroP ＝溴-三吡咯烷六氟磷酸尿rt ＝室温Sat’d ＝饱和s- ＝二级t- ＝三级TBDMS ＝叔丁基二甲基甲硅烷基TES ＝三乙基硅烷TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氢呋喃TMOF＝原甲酸三甲基酯TMS ＝三甲基甲硅烷基tosyl ＝对甲苯磺酰基TrT ＝三苯基甲基烷基包括线性、分枝或者环状脂族烃结构以及它们的组合，其结构可以是饱和或不饱和的。低级烷基是指具有1-5个、优选1-4个碳原子的烷基。低级烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基和叔丁基等。优选的烷基是C20或者更低级的烷基。更优选的烷基是C13或者更低级的烷基。环烷基是烷基以下的概念，并包括3-13个碳原子的环状脂族烃基。环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、降冰片基、金刚烷基等。环烷基烷基是烷基以下的另一个概念，是指通过非环烷基连接在母体结构上的环烷基。环烷基烷基的例子包括环己基甲基、环丙基甲基、环己基丙基等。在本发明中，烷基包括链烷基、链烯基和链炔基，其包括乙烯基、烯丙基、异戊二烯基等。当烷基具有具体数目的碳原子时，也包括具有相同数目碳原子的所有几何异构体；因此，例如“丁基”就包括正丁基、仲丁基、异丁基、和叔丁基；“丙基”包括正丙基、异丙基和环丙基。
亚烷基、亚烯基和亚炔基是指与烷基、烯基和炔基相同但有两个连接点的基团。亚烷基的例子包括亚乙基(-CH2CH2-)、1，3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、二甲基-1，3-亚丙基(-CH2C(CH3)2CH2-)、以及环己基-1，3-亚丙基(-CH2CH2CH(C6H13)-)。同样，亚烯基的例子包括亚乙烯基(-CH＝CH-)、亚丙烯基(-CH＝CH-CH2-)、和环己基亚丙烯基(-CH＝CHCH(C6H13)-)。亚炔基的例子包括亚乙炔基(-C≡C-)和亚丙炔基(-CH≡CH-CH2-)。
环烯基是烷基的下属概念，并包括具有3-13该碳原子的不饱和环状烃基。环烯基的例子包括环己烯基、环戊烯基等。
烷氧基是指通过氧原子连接在母体结构上并具有1-8个碳原子的直链、支链、或者环状构型以及它们的组合的烷基(即、烷基-O-基团)。其例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙基氧基、环己基氧基等。低级烷氧基是指包含1-4个碳原子的烷氧基基团。
酰基是指通过羰基官能团连接在母体结构上并具有1-8个碳原子的直链、支链、或者环状构型以及它们的组合基团。该基团可以是饱和、不饱和及芳香性的。酰基中的一个或者多个碳原子可被氮(如酰胺基)、氧或硫置换，只要与母体结构的连接点是羰基即可。其例子包括乙酰基、苯甲酰基、丙酰基、异丁酰基、草酰基、叔丁氧基羰基、苄基氧基羰基、吗啉基羰基等。低级酰基是指包含1-4个碳原子的酰基。
氨基是指基团-NH2。术语“取代氨基”是指基团-NHR或-NRR，其中各R独立的选自于以下组中任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的氨基羰基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂环基、酰基、烷氧基羰基、烷硫基、亚硫酰基和磺酰基，如二乙基氨基、甲基磺酰基氨基、呋喃基氧基-磺酰氨基。
氨基羰基是指基团-NRcCORb、-NRcCOZRa或-NRcCONRbRc，其中Ra是任选取代的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-C4烷基、或者杂芳基C1-C4烷基；
Rb是H或任选取代的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-C4烷基、或者杂芳基C1-C4烷基；以及Rc是氢或C1-C4烷基；而且各任选取代的Rb基团独立地是未取代的或者被一个或者多个选自于以下组中的取代基取代C1-C4烷基、芳基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基、杂芳基-C1-C4烷基、-C1-C4卤代烷基、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4卤代烷基、卤素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作为杂芳基的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4卤代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4卤代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)、-NHSO2(C1-C4卤代烷基)。
抗有丝分裂剂是指用于例如通过使中期细胞分裂停止而抑制或防止有丝分裂的药物。一些抗肿瘤药物阻断增殖作用，并且被认为是抗有丝分裂剂。
芳基和杂芳基是指分别包含0或者1-4个选自于O、N或S的杂原子的5-6元芳香环或者杂芳香环；分别包含0或者1-4(或更多)个选自于O、N或S的杂原子的9-10元二环芳香环系或者杂芳香环系；或者分别包含0或者1-4(或更多)个选自于O、N或S的13-14元三环芳香环系或者杂芳香环系。6-14元芳香碳环环系包括苯基、萘基、茚满基、1，2，3，4-四氢化萘基、以及芴基等。5-10元芳香杂环包括例如咪唑基、吡啶基、吲哚基、噻吩基、苯并吡喃酮基、噻唑基、呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基和吡唑基。
芳烷基是指其中芳基通过烷基连接在母体结构上的基团。其例子包括苄基、苯乙基、苯基乙烯基、苯基烯丙基等。杂芳烷基是指其中杂芳基通过烷基连接在母体结构上的基团。其例子包括呋喃基甲基、吡啶基甲基、嘧啶基甲基等。
芳烷氧基是指基团-O-芳烷基。类似地，杂芳烷氧基是指基团-O-杂芳烷基；芳基氧基是指基团-O-芳基；酰基氧基是指基团-O-酰基；杂芳基氧基是指基团-O-杂芳基，而杂环基氧基是指基团-O-杂环基(即、芳烷基、杂芳烷基、芳基、酰基、杂环基或杂芳基通过氧连接在母体结构上)。
羧基烷基是指基团-烷基-COOH。
酰胺基是指基团-CONRbRc，其中Rb是H或任选取代的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、芳基C1-C4烷基、或者杂芳基C1-C4烷基；以及Rc是氢或C1-C4烷基；而且各任选取代的Rb基团独立地是未取代的或者被一个或者多个选自于以下组中的取代基取代C1-C4烷基、芳基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基、杂芳基-C1-C4烷基、-C1-C4卤代烷基、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4卤代烷基、卤素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作为杂芳基的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-MHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4卤代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4卤代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)、-NHSO2(C1-C4卤代烷基)。氨基酰基例如包括氨甲酰基、低级烷基氨甲酰基、苄基氨甲酰基、苯基氨甲酰基、甲氧基甲基-氨甲酰基等。
卤素是指氟、氯、溴或碘。氟、氯和溴是优选的。二卤代芳基、二卤代烷基、三卤代芳基等是指被多个但不一定是相同的卤素(在此分别是2、3和4个)取代的芳基和烷基，因此，4-氯-3-氟苯基也在二卤代芳基的范围中。
杂环是指其中1-4个碳原子被诸如氧、氮或硫的杂原子置换的环烷基或者芳基。本发明范围中包括的杂环的例子是咪唑啉基、吡咯烷基、吡唑基、吡咯基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、苯并呋喃基、苯并二噁烷基、苯并间二氧杂环戊烯基(当作为取代基时，通常称为亚甲二氧基苯基)、四唑基、吗啉基、噻唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基、噁唑基、噁唑啉基、异噁唑基、二噁烷基、四氢呋喃基等。“N-杂环基”是指包含氮原子的杂环取代基。术语杂环基包括杂芳基，其是杂环基的下位概念。N-杂环基的例子包括4-吗啉基、4-硫代吗啉基、1-哌啶基、1-吡咯烷基、3-噻唑烷基、哌嗪基、和4-(3，4-二氢苯并噁嗪基)。取代杂环基的例子包括4-甲基-1-哌嗪基和4-苄基-1-哌啶基。
离去基团或原子是在反应条件下可由起始物脱除并由此在特定的部位处促进反应的任意基团或原子。除非另有说明，此等基团的合适例子是卤原子、甲磺酰氧基、对硝基苯磺酰氧基或甲苯磺酰氧基。
任选是指随后所述的事件或环境可能发生或也可能不发生，且该表述包括所述事件或环境发生的情况和它不发生的情况。例如，“任选取代的烷基”包括本文定义的“烷基”和“取代的烷基”。关于含有一个或多个取代基的任何基团，本领域技术人员可以理解的是，这种基团不意在引入立体上不实际的和/或合成上不实际的和/或本身不稳定的任何取代或者取代方式。
取代的烷氧基是指其中烷基组分被取代的烷氧基(即-O-(取代的烷基))。一种优选的取代的烷氧基是“多烷氧基”或-O-(任选取代的亚烷基)-(任选取代的烷氧基)，并包括诸如-OCH2CH2OCH3的基团和二醇醚如聚乙二醇的残基和-O(CH2CH2O)x-CH3，其中x为约2-20，优选约为2-10，更优选约为2-5的整数。另一种合适的取代的烷氧基是羟基烷氧基或-OCH2(CH2)yOH，其中y是约1-10，优选约1-4的整数。
取代的烷基、芳基和杂芳基分别指其中一个或多个(至多约5个，优选至多约3个)氢原子被独立地选自以下组中的取代基替代的烷基、芳基和杂芳基-Ra、ORb、-O(C1-C2烷基)O-(作为芳基取代基)、-SRb、胍、其中一个或者多个胍氢被低级烷基替代的胍、-NRbRc、卤素、氰基、硝基、-CORb、-CO2Rb、-CONRbRc、-OCORb、-OCO2Rb、-OCONRbRc、-NRcCORb、-NRcCO2Rb、NRcCONRbRc、-CO2Rb、CONRbRc、NRcCORb、-SORa、-SO2Ra、-SO2NRbRc和-NRcSO2Ra，其中Ra是任选取代的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基-或杂芳基-C1-C4烷基，Rb为H或任选取代的C1-C6烷基、芳基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基-或杂芳基-C1-C4烷基-基团；Rc为氢或C1-C4烷基；其中各任选取代的Ra基团和Rb基团独立地是未被取代的或被一个或多个独立地选自以下组中的取代基取代C1-C4烷基、芳基、杂芳基、芳基-C1-C4烷基-、杂芳基-C1-C4烷基-、C1-C4卤代烷基、-OC1-C4烷基、-OC1-C4烷基苯基、-C1-C4烷基-OH、-OC1-C4卤代烷基、卤素、-OH、-NH2、-C1-C4烷基-NH2、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)(C1-C4烷基苯基)、-NH(C1-C4烷基苯基)、氰基、硝基、氧代(作为杂芳基的取代基)、-CO2H、-C(O)OC1-C4烷基、-CON(C1-C4烷基)(C1-C4烷基)、-CONH(C1-C4烷基)、-CONH2、-NHC(O)(C1-C4烷基)、-NHC(O)(苯基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)C(O)(苯基)、-C(O)C1-C4烷基、-C(O)C1-C4苯基、-C(O)C1-C4卤代烷基、-OC(O)C1-C4烷基、-SO2(C1-C4烷基)、-SO2(苯基)、-SO2(C1-C4卤代烷基)、-SO2NH2、-SO2NH(C1-C4烷基)、-SO2NH(苯基)、-NHSO2(C1-C4烷基)、-NHSO2(苯基)和-NHSO2(C1-C4卤代烷基)。
硫烷基是指基团-S-(任选取代的烷基)、-S-(任选取代的芳基)、-S-(任选取代的杂芳基)和-S-(任选取代的杂环基)。
亚硫酰基是指基团-S(O)-H、-S(O)-(任选取代的烷基)、-S(O)-任选取代的芳基)、-S(O)-(任选取代的杂芳基)、-S(O)-(任选取代的杂环基)和-S(O)-(任选取代的氨基)。
磺酰基是指基团-S(O2)-H、S(O2)-(任选取代的烷基)、-S(O2)-(任选取代的芳基)、-S(O2)-(任选取代的杂芳基)、-S(O2)-(任选取代的杂环基)、-S(O2)-(任选取代的烷氧基)、-S(O2)-任选取代的芳氧基)、-S(O2)-(任选取代的杂芳氧基)、-S(O2)-(任选取代的杂环氧基)和-S(O2)-(任选取代的氨基)。
药物学上可接受的盐是指那些保持游离化合物的生物有效性但不是生物学上不期望的、与适宜的酸或碱形成的盐，其包括药物学上可接受的酸加成盐和碱加成盐。药物学上可接受的酸加成盐包括那些由无机酸衍生的盐，如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，以及那些由有机酸衍生的盐，如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。
药物学上可接受的碱加成盐包括由无机碱衍生的盐，如钠、钾、锂、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰、铝盐等。特别优选铵、钾、钠、钙和镁盐。碱加成盐还包括由药物学上可接受的有机无毒碱衍生的盐，包括伯、仲和叔胺、取代的胺(包括天然存在的取代的胺)、环胺和碱性离子交换树脂的盐，如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。
保护基具有与其通常在有机合成中有关的含义，即选择性阻断多官能化合物的一个或多个反应部位，从而使化学反应可以在另一个未受保护的反应部位进行并可以在选择性反应完成之后容易地除去的基团。许多保护基已在诸如以下的文献中公开T.H.Greene和P.G.M.Wuts，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，Third Edition，John Wiley & Sons，New York(1999)，该文献的全部内容在此引入作为参考。例如，在羟基保护形式中，化合物中存在的至少一个羟基被羟基保护基保护。同样，胺和其它反应基团可以类似地保护。
溶剂化物是指通过溶剂和式I化合物或其盐的相互作用而形成的化合物。式I化合物的适宜的溶剂化物是药物学上可接受的溶剂化物，包括水合物。
在此描述的许多化合物含有一个或多个不对称中心(例如R2和R2’连接其上的碳，其中R2不同于R2’)，并因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其它可以根据绝对立体化学定义为(R)-或(S)-的立体异构形式。本发明意在包括所有这些可能的异构体，包括外消旋混合物、光学纯形式和中间体混合物。光学活性(R)-和(S)-异构体可以使用手性合成子或手性试剂制备，或者使用常规技术拆分。当本文所述的化合物含有烯属双键或其它几何不对称中心时，除非特别指出，它意指该化合物包括E和Z几何异构体。同样地，也意在包括所有的互变异构形式和旋转异构体。
当需要时，R-和S-异构体可通过本领域技术人员已知的方法来拆分，例如形成可例如通过结晶分离的非对映异构体盐或者可络合物；形成可例如通过结晶、气-液或者液相色谱法分离的非对映异构体衍生物；一种对映体与对映体特异性试剂的选择性反应，例如酶氧化或者还原反应，然后分离改性或者未改性的对映体；在手性环境如在手性载体(如与手性配体结合的硅胶)上或者在手性溶剂存在下用气-液或者液相色谱法。可以理解的是，当通过如上所述的分离方法之一将所需要的对映体转化为其他化学物质时，有可能需要其他的步骤以释放所希望的对映体形式。或者，通过使用旋光试剂、底物、催化剂或者溶剂的非对称性合成，或者通过非对称转化将一种对映体转化为另一种对映体，可合成特异性对映体。
本发明的化合物本发明涉及一类新的化合物，它们可以被描述为嘧啶酮衍生物，而且是一种或多种有丝分裂驱动蛋白的抑制剂。通过抑制有丝分裂驱动蛋白但不抑制其它驱动蛋白(例如转运驱动蛋白)，对细胞增殖的特异性抑制得以实现。虽然不意在受任何理论的限制，但本发明利用以下发现干扰有丝分裂驱动蛋白功能导致有丝分裂纺缍体的畸形或者功能障碍，通常导致细胞周期停止和细胞死亡。根据本发明的一个实施方案，本文所述的化合物抑制有丝分裂驱动蛋白KSP，特别是人KSP。在另一个实施方案中，该化合物抑制有丝分裂驱动蛋白KSP，并调节一种或多种选自以下组中的人有丝分裂驱动蛋白HSET(参见美国专利6,361,993，其在此引入作为参考)；MCAK(参见美国专利6,331,424，其在此引入作为参考)；CENP-E(参见PCT公开WO 99/13061，其在此引入作为参考)；Kif4(参见美国专利6,440,684，其在此引入作为参考)；MKLP1(参见美国专利6,448,025，其在此引入作为参考)；Kif15(参见美国专利6,355,466，其在此引入作为参考)；Kid(参见美国专利6,387,644，其在此引入作为参考)；Mppl、CMKrp、KinI-3(参见美国专利6,461,855，其在此引入作为参考)；Kip3a(参见PCT公开WO 01/96593，其在此引入作为参考)；Kip3d(参见美国专利6,492,151，其在此引入作为参考)；和RabK6。
抑制有丝分裂驱动蛋白的方法包括使本发明的抑制剂与驱动蛋白，特别是人驱动蛋白，更特别地是人KSP或其片段和变体接触。该抑制作用可以是KSP驱动蛋白的ATP水解活性和/或有丝分裂纺缍体形成活性的抑制，使得有丝分裂纺缍体被破坏。减数分裂纺缍体也可被破坏。
本发明提供有丝分裂驱动蛋白，特别是KSP，尤其是人KSP的抑制剂，以治疗与细胞增殖有关的疾病。本文所述化合物、组合物以及方法的区别可能在于它们的选择性，而且用于治疗细胞增殖性疾病，包括但不限于癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病、真菌性疾病以及炎症。
因此，本发明涉及使用式I所示的化合物的方法 其中R1选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R2和R2′独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；或者R2和R2′一起形成任选取代的3-7元环；R3选自任选取代的咪唑基、任选取代的咪唑啉基、-NHR6、-N(R6)(COR7)、-N(R6)(SO2R7a)、以及-N(R6)(CH2R7b)；R4和R5独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺酰基、烷基氨磺酰基、烷基硫烷基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、和任选取代的杂芳基；或者或R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的5、6或7元脂族碳环；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基；R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、R8O-以及R14-NH-；R7a选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、以及R14-NH-；R7b选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R8选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R14选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；包括单个立体异构体以及立体异构体的混合物；式I化合物的药物学上可接受的盐；式I化合物的药物学上可接受的溶剂化物；或者式I化合物的药物学上可接受的盐的药物学上可接受的溶剂化物。
在具体的实施方案中，R2和R2′所连接的立体中心是R构型的。
命名法式I的化合物可以下述的方式命名和编号(例如用AutoNom 2.1版或ISIS-DRAW，其各自利用IUPAC命名系统)。例如，化合物
即根据式I的化合物，其中R1为苄基，R2为丙基(或异丙基)，R2’为氢；R3为-N(R6)(COR7)；R4为甲基；R5为氢；R6为氨基丙基；而R7为对甲苯基；可命名为N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-苄基-4-甲基-6-氧-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺。
同样，化合物 即根据式I的化合物，其中R1为苄基，R2为乙基，R2’为氢；R3为取代的咪唑基；而R4和R5为氢；可命名为3-苄基-2-[1-(2-甲基-咪唑-1-基)-丙基]-3H-嘧啶-4-酮。
化合物
即根据式I的化合物，其中R1为苄基，R2为异丙基，R2’为氢；R3为-N(R6)(COR7)；R6为氨基丙基；R7为对甲苯基；而R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成6元碳环；可命名为N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-苄基-4-氧-3，4，5，6，7，8-六氢-喹唑啉-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺。
合成反应参数式I的化合物可以根据参照以下反应方案所述的方法来制备。
除非另外说明，术语“溶剂”、“惰性有机溶剂”或“惰性溶剂”是指在相关描述的反应条件下为惰性的溶剂[例如包括苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(″THF″)、二甲基甲酰胺(″DMF″)、氯仿、二氯甲烷(或甲叉二氯)、乙醚、甲醇、吡啶等]。除非有相反的说明，用于本发明的反应中的溶剂是惰性有机溶剂。
术语“q.s.”是指加入足以实现所述功能，例如使溶液变成目标体积(即100％)的数量。
一般而言，羧酸的酯可以通过常规酯化方法来制备，例如烷基酯可以通过用适宜的链烷醇，通常在酸性条件下处理所需的羧酸来制备。同样，酰胺可以使用常规酰胺化方法来制备，例如酰胺可以通过用适宜的胺处理相关的羧酸来制备。或者，可以任选在三甲基铝存在下，根据TetrahedronLett.48，4171-4173，1977所述的方法，用胺处理诸如酸的甲酯的低级烷基酯，得到所需的酰胺。羧基可以以烷基酯如甲酯的形式得到保护，所述的酯可以用常规的方法制备和除去，一种用于将甲酯基转化成羧基的方便的方法是使用氢氧化锂水溶液。
本文提及的化合物的盐和溶剂化物可以根据需要用本领域中的常规方法生产。例如，如果本发明的化合物为酸，则可以通过用无机或有机碱，如胺(伯、仲或叔)、碱金属或碱土金属氢氧化物等处理游离酸来制备所需的碱加成盐。适宜的盐的例示性实例包括由以下物质衍生的有机盐氨基酸如甘氨酸和精氨酸；氨；伯、仲和叔胺；如乙二胺，和环胺如环己胺、哌啶、吗啉和哌嗪；以及由钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂衍生的无机盐。
如果化合物为碱，则所需的酸加成盐可以通过本领域中已知的任何适宜的方法制备，包括用无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等，或者用有机酸如乙酸、马来酸、琥珀酸、苦杏仁酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水杨酸、吡喃糖苷酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸如柠檬酸或酒石酸、氨基酸如天门冬氨酸或谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸等处理游离碱。
如果需要的话，本文所述的化合物和中间体的分离和纯化可以通过任何适宜的分离或纯化方法来实现，例如过滤、萃取、结晶、柱色谱法、薄层色谱法或厚层色谱法或者这些方法的组合。可以参考本文以下的实施例来具体例示适宜的分离方法。但是，其它等同的分离方法当然也可以使用。
式I化合物的合成式I的化合物可以根据参照以下反应方案所述的方法来制备。
反应方案简述反应方案1显示了式I化合物的合成，其中R3是N(R6)(COR)。
反应方案2显示了式205化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案3显示了式I化合物的合成，其中R3是N(R6)(SO2R7a)。
反应方案4显示了式I化合物的合成，其中R3是-N(R6)(CH2R7b)。
反应方案5显示了式I化合物的合成，其中R3是任选取代的咪唑基。
反应方案6显示了式I化合物的替代合成，其中R3是任选取代的咪唑基。
反应方案7显示了式I化合物的合成，其中R3是任选取代的咪唑啉基。
反应方案8显示了式I化合物的替代合成，其中R3是任选取代的咪唑啉基。
反应方案9显示了式907化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案10显示了式907化合物的替代合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案11显示了式1103化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案12显示了式1203化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案13显示了式I化合物的合成，其中R4是-(CO)NH2或-CN。
反应方案14显示了式1405化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案15显示了式1505化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案16显示了式1605化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案17显示了式I化合物的合成，其中R5是溴或苯基。
反应方案18显示了式I化合物的合成，其中R5是-CN或-(CH2)NH(CO)CH3。
反应方案19显示了式I化合物的合成，其中R3是-N(R6)(COR7)，而R7是-OR9。
反应方案20显示了式I化合物的合成，其中R3是-N(R6)(COR7)，而R7是-NHR14。
反应方案21显示了式2103化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案22显示了式2205化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案23显示了式2305化合物的合成，其可用作合成式I化合物的中间体。
反应方案24显示了式I化合物的合成，其中R3是-N(R6)(COR7)。
反应方案25显示了式I化合物的合成，其中R3是-N(R6)(COR7)。
反应方案26显示了式I化合物的替代合成，其中R3是任选取代的咪唑啉基。
反应方案27显示了式I化合物的替代合成，其中R3是任选取代的咪唑基。
反应方案28显示了式I化合物的合成，其中R4是任选取代的氨基。
起始物式101之任选取代的β-酮基酰胺以及其他的反应物可市售得到，例如由Aldrich Chemical Company(Milwaukee，WI)得到，或者本领域技术人员可通过常规使用的合成法容易地制得。
反应方案1
式103的制备参考反应方案1之步骤1，将任选取代的乙酰乙酰胺(式101的化合物)或者乙酰乙酸酯在惰性有机溶剂(如二甲苯类化合物)中的混合物添加至装配有干冰回流冷凝器的烧瓶中。将所得的混合物加热至回流，并连续地用氨气冲洗约3小时，然后冷却至室温。反应混合物过滤，而滤液进行减压浓缩。分离并纯制任选取代的β-氨基巴豆酰胺(式103的化合物)。
式105的制备参考反应方案1之步骤2，将新制备的乙醇钠添加至式103的化合物与略微过量(优选1.1当量)的经适当保护的α-氨基酸酯(式104的化合物，优选其中保护基PG是Boc)在乙醇中的混合物内。所得的溶液加热回流数小时。分离并纯制产物——式105的嘧啶酮。
式106的制备参考反应方案1之步骤3，向式105的嘧啶酮在极性、非质子性溶剂如二噁烷中的溶液内添加过量(优选约1.2当量)的氢化锂，同时保持室温。所得的悬浮液搅拌15分钟，随后添加略微过量(优选约1.1当量)的具有结构R1-X的化合物，其中X是离去基团，优选是甲苯磺酸酯，而R1与以上定义相同。反应混合物加热回流约20-24小时。分离并纯制产物——式106的嘧啶酮。
式107的制备参考反应方案1之步骤4，脱除式106化合物的氨基保护基。例如，向其中氨基保护基PG是Boc的式106的嘧啶酮在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加三氟乙酸，同时保持约0℃的温度。所得的溶液在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。分离产物——式107的化合物，并且未经纯制即用于下一步反应中。本领域技术人员可认识到，使用本领域已知的条件也可除去其他保护基。例如参见Greene等人，同上。
式109的制备参考反应方案1之步骤5，向式107的嘧啶酮的溶液内顺序地添加略微过量(优选1.2当量)的包含R6′的化合物(如式R6′CHO的化合物，其中R6′CH2-等同于R6，而R6如上所定义或者是经保护的前体，如(3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁基酯的基团)以及还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠。所得的混合物搅拌数小时。分离并纯制产物——式109的嘧啶酮。
式110的制备参考反应方案1之步骤6，向式109的嘧啶酮和胺碱如二异丙基胺在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加R7酰氯(如Cl-C(O)-R7，其中R7如上所定义)。所得的溶液在氮气和室温下搅拌数小时。分离并纯制产物——式110的嘧啶酮。
式111的制备任选地，接着脱除式110化合物上的任意保护基。例如，如果R6包括经保护的胺，其中保护基是Boc基团，则参考反应方案1之步骤7，向式110的嘧啶酮在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加三氟乙酸，同时使反应保持在大约室温的温度。例如通过TLC监控反应。反应完成时，分离并纯制产物——式111的嘧啶酮。
式107之旋光化合物的制备在本发明的某些化合物中，在R2所连接的立体中心处优选特殊的立体构型(如(R)异构体)。旋光化合物可通过本领域已知的方法来制备。例如，将式107的胺溶解在惰性有机溶剂(如IPA)中，然后温热至60℃。在单独的容器中，将拆分剂(如二苯甲酰基-D-酒石酸)溶解在优选相同温热的溶剂中，然后快速添加(同时搅拌)至温热的胺溶液中。在连续搅拌下在16小时的时间中冷却至室温，由此使反应混合物结晶。分离并纯制所希望的异构体，如(R)异构体。
为在式I化合物合成的以下描述中简洁起见，应理解的是，可使用单一异构体或者异构体的混合物来形成相应的产物。
反应方案2 式203的制备参考反应方案2之步骤1，将式201之任选取代的β-酮基酰胺在惰性有机溶剂(如二甲苯)中的混合物添加至装配有干冰回流冷凝器的烧瓶中。所得的混合物加热至回流，并连续地用氨气冲洗约5小时，然后冷却至室温。反应混合物过滤，而滤液进行减压浓缩。分离产物——式203之任选取代的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
式205的制备参考反应方案2之步骤2，将新制备的乙醇钠添加至式203的化合物与略微过量(优选1.1当量)的经适当保护的α-氨基酸酯(式204的化合物，优选其中保护基PG是Boc)在乙醇中的混合物内。所得的溶液加热回流数小时。分离并纯制产物——式205的嘧啶酮。
反应方案3 参考反应方案3，向式109的嘧啶酮和胺碱如二异丙基乙基胺在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加具有式Cl-S(O)2-R7a或者O-(S(O)2-R7a)2的化合物，其中R7a如上所定义。所得的溶液在氮气和室温下搅拌数小时。分离并纯制产物——式302的嘧啶酮。
反应方案4 参考反应方案4，向式109的嘧啶酮和胺碱如二异丙基乙基胺在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加具有式X-CH2-R7的化合物，其中R7如上所定义，而X是离去基团(优选卤化物)。所得的溶液在氮气中于室温或者加热下搅拌数小时。分离并纯制产物——式402的嘧啶酮。
反应方案5 式503的制备参考反应方案5之步骤1，向式107之任选取代的化合物在极性非质子性溶剂(如DMF)中的溶液内，在碱(如碳酸钾)存在下，添加1当量的任选取代并经适当保护的醛，其中该醛进一步保护离去基团，优选为卤化物。该溶液在回流下加热，并监控反应的完成(例如通过TLC)。冷却反应化合物，然后分离并纯制式503之相应的任选取代的嘧啶酮。
式505的制备参考反应方案5之步骤2，向式503之任选取代的化合物在惰性溶剂(如二氯甲烷)中的溶液内，在约1.5摩尔当量的胺碱(如三乙胺)存在下，添加约1.5摩尔当量的R9酰氯，如Cl-C(O)-R9，其中R9如本发明所定义。反应在搅拌和室温下进行4-24小时。例如通过TLC监控反应的完成。分离并纯制式505的相应化合物。
式507的制备参考反应方案5之步骤3，将式505的化合物和过量的乙酸铵在乙酸中的溶液加热回流1-4小时。例如通过TLC监控反应的完成。分离并纯制式507的相应化合物。
反应方案6
式603的制备参考反应方案6之步骤1，在室温下搅拌式107的化合物、式R10(CO)CH2X(其中X是卤化物)的α-卤代酮、以及约1当量的碱如碳酸钾在极性非质子性溶剂如DMF中的悬浮液。反应液用水稀释，所得的固体——式603的化合物未经纯制即用于下一步的反应中。
式605的制备参考反应方案6之步骤2，式603的化合物、约1当量的胺碱如三乙胺、以及约1当量的酰氯(如式R9-COCl的化合物在有机溶剂如二氯甲烷中的溶液在室温下搅拌数小时。例如通过TLC监控反应的完成。分离并纯制式605的相应化合物。
式607的制备参考反应方案6之步骤3，使用Dean-Stark汽水阀和冷凝器使式605的化合物和过量的乙酸铵在乙酸中的溶液加热回流。例如通过TLC监控反应的完成。分离并纯制式607的相应化合物。
式609的制备参考反应方案6之步骤4，如果607被保护为邻苯二甲酰亚胺，则在回流下加热式607的化合物和过量的无水肼在极性质子性溶剂如乙醇中的溶液。将反应溶液冷却至约5℃，过滤出沉淀物。滤液进行真空浓缩和纯制，产生式609的化合物。
反应方案7
式703的制备参考反应方案7之步骤1，用任选取代并包含醛的氨基甲酸酯对式107的胺(如WO 0130768所述进行制备)进行还原胺化(Seki等人Chem.Pharm.Bull.1996，44，2061)，形成氨基甲酸酯中间产物。脱除Boc保护基，形成式705的胺。
更具体而言，向式107的化合物和等量的经适当保护的醛(Seki等人Chem.Pharm.Bull.1996，44，2061)在二氯甲烷中的溶液内添加略微过量的还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠。所得的雾状化合物保持在室温下。例如通过TLC监控反应进程。分离式703的相应化合物，并且未经纯制即用于下一步中。
式705的制备参考反应方案4之步骤2，向式703的化合物在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加强酸如三氟乙酸。所得的溶液保持在室温下过夜，然后减压浓缩。分离残留物，得到式705的化合物，其未经纯制即用于下一步中。
式707的制备参考反应方案4之步骤3，向式705的化合物在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量的、优选约2当量的胺碱如三乙基胺，随后添加约等量或者略微过量的酰氯。所得的溶液在室温下搅拌3小时。例如通过TLC监控反应的完成。分离并纯制式707的相应化合物。
式709的制备参考反应方案7之步骤4，式707的化合物在过量的磷酰氯中的溶液加热回流。8小时后，将反应混合物冷却至室温，并减压浓缩。分离并纯制式709的相应化合物。
反应方案8 式709的制备作为反应方案7之步骤3和4的替代方案，式705的伯胺进行酰化，随后进行乙酸介导的环化，其中无需分离中间体酰胺，形成式709的目标化合物。该途径显示在反应方案8中。
更具体而言，向式705的化合物在极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量、优选2当量的胺碱如三乙胺，随后添加约等量的酰氯。所得的溶液在室温下搅拌2小时，然后减压蒸发。所得的固体用冰乙酸处理，所得的悬浮液加热回流约48小时。将反应液冷却至室温，然后减压蒸发。分离并纯制式709的相应化合物。
反应方案9 式903化合物的制备参考反应方案9之步骤1，向式901的化合物和过量(优选约1.4当量)的N-甲基吗啉在无水、非极性、非质子性溶剂如四氢呋喃中的0℃溶液中添加过量(优选约1.3当量)的氯甲酸异丁基酯。所得的化合物在室温下搅拌约4小时。烧瓶装配干冰回流冷凝器，并用氨气连续清洗约2小时。所得的反应混合物在室温下搅拌过夜。分离产物——式903的化合物，未进一步纯制即用于下一步中。
式905化合物的制备参考反应方案9之步骤2，在室温下向式903的化合物在非极性的非质子性溶剂如二噁烷中的溶液内顺序地添加过量(优选约2.5当量)的吡啶和过量(优选约2当量)的三氟乙酸酐。所得的溶液搅拌约4小时，直至没有起始物存在。分离并纯制产物——式905的化合物。
式907化合物的制备参考反应方案9之步骤3，在室温下向式905的化合物和N-乙酰基半胱氨酸在极性质子性溶剂如乙二醇中的溶液内添加乙酸铵固体。所得的溶液加热至约100℃共约48小时。真空蒸馏出大部分的乙二醇。分离产物——式907的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
反应方案10 式909化合物的制备参考反应方案10之步骤1，将甲醇钠在甲醇中的溶液(优选约2当量的0.5M溶液)添加至式905的化合物中。向所得的反应混合物中添加过量(优选约2当量)的盐酸羟胺。反应混合物加热至50℃过夜。分离产物——式909的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
式907化合物的制备在室温下向式909的化合物在乙酸中的溶液内添加过量(优选约1.5当量)的乙酸酐和Pd/C。反应混合物在氢气氛下搅拌约24小时，然后通过Celite进行过滤。分离产物——式907的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
反应方案11 式1103化合物的制备参考反应方案11，向式1102的化合物和式907的化合物的溶液中添加甲醇钠在甲醇中的溶液(优选约2.4当量的0.5M溶液)。所得溶液加热至约60。C共约30分钟。分离并纯制产物——式l103的化合物。
反应方案12 式1203化合物的制备参考反应方案12，在室温下向式907的化合物以及大约等量的二异丙基乙基胺在无水乙醇中的溶液内添加约等量的式1202化合物。所得混合物加热至约70℃共约16小时。分离并纯制产物——式1203的化合物。
反应方案13 式1303化合物的制备参考反应方案13之步骤1，在室温下向式1301的化合物在极性质子性溶剂如乙醇中的溶液内添加浓氨水。所得的混合物在室温下搅拌约24小时。分离并纯制产物——式1303的化合物。
式1305化合物的制备参考反应方案13之步骤2，在室温下向式1303的化合物在吡啶中的溶液内添加过量的亚硫酰氯。分离并纯制产物——式1305的化合物。
反应方案14 式1403化合物的制备参考反应方案14之步骤1，将式1401的氰基乙酸甲酯和过量(优选1.1当量)的原乙酸三乙基酯在乙酸酐中的溶液加热回流约3小时。分离产物——式1403的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
式1405化合物的制备参考反应方案14之步骤2，向式1403的化合物和过量(约3当量)的式907化合物在极性质子性溶剂如乙醇中的溶液内添加甲醇钠在甲醇中的溶液(优选为0.5M溶液)。所得的溶液在约60℃和氮气氛下搅拌约30分钟。分离并纯制产物——式1405的化合物。
式1405化合物的替代制备参考反应方案14之步骤2，或者，向式907的化合物在极性质子性溶剂如乙醇中的溶液内添加约等量的式1403化合物。反应液回流约18小时，然后冷却至室温。分离并纯制产物——式1405的化合物。
反应方案15 式1503化合物的制备参考反应方案15之步骤1，在室温下向式1502的化合物(如任选取代的丙二酸二烷基酯)和过量(优选约1.5当量)的式907化合物在甲醇中的溶液内添加过量的甲醇钠在甲醇中的溶液(优选为0.5M甲醇溶液)。所得溶液加热至约60℃共约4小时。分离产物——式1503的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
式1505化合物的制备参考反应方案15之步骤2，向式1503的化合物在非极性非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加碳酸氢钠和硫酸二甲酯。所得的溶液在约0℃下搅拌约4小时。分离并纯制产物——式1505的化合物。
反应方案16 式1603化合物的制备参考反应方案16之步骤1，在室温下向氰基乙酸甲酯(即式1401的化合物)和过量(优选约约1.5当量)的式907化合物在甲醇中的溶液内添加甲醇钠在甲醇中的溶液(优选约1.8当量的0.5M甲醇溶液)。所得溶液加热至约60℃共约4小时。分离产物——式1603的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
式1605化合物的制备在0℃下向式1603的化合物在非极性非质子性溶剂如四氢呋喃中的溶液内顺序地添加二异丙基乙基胺和过量(优选约2当量)的酰氯(如乙酰氯)。所得的溶液在约0℃下搅拌约6小时。分离并纯制产物——式1605的化合物。
反应方案17 式1703化合物的制备参考反应方案17之步骤1，在室温下向式1701的化合物在四氯化碳中的溶液内添加约等量的N-溴琥珀酰亚胺。所得混合物加热至约85℃共约1小时。分离并纯制产物——式1703的化合物。
式1705化合物的制备参考反应方案17之步骤2，将式1703的化合物、约0.2当量的2-(二环己基膦基)联苯基、约0.1当量的乙酸钯、过量(优选约1.5当量)的苯基硼酸、以及过量(优选约3当量)的氟化钾放置在可重新密封的Schlenk管中。该管排空，并用氮气回填数次。用注射器添加甲苯，而所得混合物加热至约80℃共约72小时。分离并纯制产物——式1705的化合物。
式1705化合物的替代制备再参考反应方案17之步骤2，在10-mL Smith微波反应管中添加式1703的化合物、约等量的3-氯硼酸、Na2CO3、以及PdCl2(PPh3)2，然后添加MeCN-H2O(1∶1)。该混合物用氩气冲洗，密封，然后在150℃下放置在微波反应器中共约5分钟。分离并纯制产物——式1705的化合物。
反应方案18 式1805化合物的制备参考反应方案18之步骤1，在厚壁玻璃管中，向式1703的化合物在无水乙醇中的溶液内添加约0.25当量的1，3-二(二苯基膦基)丙烷、过量的三乙胺和约0.2当量的乙酸钯。将该管排空，并用一氧化碳回填三次，然后用一氧化碳加压(约30psi)。该混合物加热至约70℃共约48小时。分离并纯制产物——式1805的化合物。
式1807化合物的制备参考反应方案18之步骤2，在室温下向式1805的化合物在四氢呋喃和甲醇中的溶液内添加含水氢氧化钾。所得混合物加热至约70℃共约4小时。分离产物——式1807的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
式1809化合物的制备参考反应方案18之步骤3，在室温下向式1807的化合物在无水四氢呋喃中的溶液内顺序地添加过量(优选约3当量)的二异丙基乙基胺和过量(优选约1.2当量)的氯甲酸异丁基酯。所得的混合物在室温和氮气氛下搅拌约3小时。将反应混合物冷却至约0℃，然后用氨气冲洗约45分钟。混合物进一步温热至室温45分钟。分离并纯制产物——式1809的化合物。
式1811化合物的制备参考反应方案18之步骤4，室温下向式1809的化合物在吡啶中的溶液内添加亚硫酰氯。反应混合物在室温下搅拌约16小时。分离并纯制产物——式1811的化合物。
式1813化合物的制备参考反应方案18之步骤5，在搅拌下向式1811的化合物在乙酸中的溶液内小心地添加10％的PDd/C。反应物在氢气球中于室温下氢化约18小时，并分离粗胺。在搅拌下向该粗胺在非极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加碱如三乙胺和乙酸酐。室温下搅拌约2小时后，分离并纯制产物——式1803的化合物。
反应方案19 式1903化合物的制备参考反应方案19，在碱如如三乙胺存在下，于非极性非质子性溶剂如二氯甲烷中使式109的化合物与略微过量的式R7O(CO)Cl的化合物反应。分离并纯制产物——式1903的化合物。
反应方案20
式2003化合物的制备参考反应方案20，在碱如三乙胺存在下，于非极性非质子性溶剂如二氯甲烷中，式109的化合物用略微过量的异氰酸酯R14-N＝C＝O处理。分离并纯制产物——式2003的化合物。
反应方案21 式2103化合物的制备参考反应方案21，在搅拌下向式903的化合物在非极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加过量(优选约1.05当量)的三乙基六氟磷酸氧鎓。反应混合物在室温下搅拌约48小时，倾倒在分离漏斗中，洗涤，干燥，过滤并真空浓缩。向残留的油中添加式R1NH2的化合物和极性质子性溶剂如乙醇。反应混合物在约60℃下搅拌约24小时。分离产物——式2103的化合物，而且未经纯制即用于下一步中。
反应方案22 式2203化合物的制备参考反应方案22之步骤1，向式2103的化合物在极性质子性溶剂如甲醇中添加约等量的式2201的化合物(如亚乙基丙二酸二甲基酯)。反应混合物缓慢加热至约110℃，蒸馏掉溶剂。反应溶液在约110℃下搅拌约5小时，然后冷却至室温。分离并纯制产物——式2203的化合物。
式2205化合物的制备参考反应方案22之步骤2，在搅拌下向式2203的化合物在非极性非质子性溶剂如四氯化碳中的溶液内添加K2CO3、N-溴琥珀酰亚胺、以及过氧化苯甲酰。反应回流约0.5小时，然后冷却至室温。分离并纯制产物——式2205的化合物。
反应方案23 式2303化合物的制备参考反应方案23之步骤1，在搅拌下向式2103的化合物在非极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加碱如Et3N，同时在0℃下冷却，然后在15分钟的时间内滴加过量(优选约1.1当量)的式2301化合物(优选其中R5是甲基)。反应液温热至室温，然后搅拌4小时。分离并纯制产物——式2303的化合物。
式2305化合物的制备参考反应方案23之步骤2，在搅拌下向式2303的化合物的溶液中分批地添加60％氢化钠在矿物油中的分散体。室温下搅拌约15分钟后，添加过量(优选约1.1当量)的N-苯基三氟甲磺酰胺。反应混合物在室温下搅拌约18小时。分离并纯制产物，相应的三氟甲磺酸酯。在搅拌下向粗的三氟甲磺酸酯在非极性非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加Zn(CN)2和(PPh3)4Pd。反应液在惰性气氛下于90℃加热约4小时，然后冷却至RT。分离并纯制产物——式2305的化合物。
反应方案24 向式2401的化合物在非极性非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加1H-吡唑-1-羧酸酰胺盐酸盐和二异丙基乙基胺。反应混合物在室温下搅拌约16小时。分离并纯制产物——式2403的化合物。
反应方案25 式2503化合物的制备参考反应方案25之步骤1，向式107的化合物和碱如三乙胺在非极性非质子性溶剂如二氯甲烷中的溶液内添加式R7-(CO)Cl的化合物。反应在室温下搅拌约48小时。分离并纯制产物——式2503的化合物。
式111化合物的制备参考反应方案25之步骤2，向式2503的化合物在非极性非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加碱如氢化钠。反应在室温下搅拌约15，然后添加式R6-X的化合物，其中X是离去基团(优选卤化物)。反应在RT下搅拌约24小时。分离并纯制产物——式111的化合物。
反应方案26 式2603化合物的制备参考反应方案26之步骤1，将式107的化合物和过量的式PG-N-CH2CHO化合物(优选2H-异吲哚-2-乙醛)溶解在非极性非质子性溶剂如二氯乙烷中。
添加冰乙酸，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠。在氮气氛和室温下搅拌反应约3.5小时。分离并纯制产物——式2603的化合物。
式2605化合物的制备参考反应方案26之步骤2，将略微过量(优选约1.1当量)的式R9-(CO)-Cl化合物溶解在非极性非质子性溶剂如甲苯中，然后顺序地用碱和式2603的化合物处理。反应在110℃下搅拌约3小时。将反应冷却至室温。分离并纯制产物——式2605的化合物。
式709化合物的制备参考反应方案26之步骤3，如果氨基官能团以邻苯二甲酰亚胺的形式被保护，则式2605的经保护的胺用一水合肼在极性质子性溶剂如乙醇中于约70℃下处理约12小时。分离并纯制产物——式709的化合物。
反应方案27 式2703化合物的制备参考反应方案27之步骤1，向式107的化合物在非极性非质子性溶剂如DMF中的溶液内添加式X-CH2-(CO)-R10(其中X是离去基团，优选是卤化物)的化合物和碱如N，N-二异丙基乙基胺。反应在室温下搅拌约16小时。分离产物并添加至非极性非质子性溶剂如三乙胺以及式R9-(CO)-Cl的化合物中。反应在室温下搅拌约16小时。分离并纯制产物——式2703的化合物。
式609化合物的制备参考反应方案27之步骤2，向式2703的化合物在冰乙酸中的溶液内添加乙酸铵，并且反应混合物加热回流约16小时。分离并纯制产物——式609的化合物。
反应方案28 式2803化合物的制备参考反应方案28，向式1703的化合物在非极性非质子性溶剂如甲苯中的溶液内添加式H-NRR′的胺、碱如NaO-tBu、Pd2DBA、以及(S)-BINAP。反应在约90℃的温度下搅拌约72小时。分离并纯制产物——式2803的化合物。
特殊的方法和最后的步骤式I的化合物任选与药物学上可接受的酸或碱接触，形成相应的酸或碱加成盐。
式I化合物之药物学上可接受的酸加成盐任选与碱接触，形成式I之相应的游离碱。
式I化合物之药物学上可接受的碱加成盐任选与酸接触，形成式I之相应的游离酸。
本发明化合物的具体实施方案R1当考虑式I的化合物时，在一个实施方案中，R1选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基-C1-C4烷基、和任选取代的杂芳基-C1-C4烷基(更优选任选取代的芳基和任选取代的芳基-C1-C4烷基)。在更为具体的实施方案中，R1选自于氢、任选取代的C1-C4烷基、任选取代的苯基-C1-C4烷基、任选取代的萘基甲基、任选取代的苯基、和萘基。更具体而言，R1是任选取代的苯基-C1-C4烷基。任选取代的杂芳基-C1-C4烷基、或萘基甲基。
更具体而言，R1是萘基、苯基、溴苯基、氯苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、二甲基苯基、氯氟苯基、甲基氯苯基、乙基苯基、苯乙基、苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、羟基苄基、二氯苄基、二甲氧基苄基、或萘基甲基。更合适地，R1是苄基、氰基苄基、甲氧基苄基、或萘基甲基。R1更特别优选地是苄基。
R2和R2′当考虑式I的化合物时，本领域技术人员将认识到，在此描述的化合物在R2和R2’连接其上的碳上具有可能的手性中心。R2和R2’基团可以相同或不同；如果不同的话，该化合物是手性的(即具有立体中心)。当R2和R2’不同时，在优选的实施方案中R2′为氢，而R2不为氢。本发明包括使用纯对映异构体和对映异构体混合物，包括外消旋混合物，虽然通常优选使用基本上光学纯的对映异构体。术语“基本上光学纯的”或者“对映异构体纯的”意指具有至少约95％的所描述的对映异构体，而没有一种杂质超过约1％，优选至少约97.5％对映异构体过量。在优选的实施方案中，R2和R2’连接其上的立体中心是R构型。
当考虑式I的化合物时，R2和R2′独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、和任选取代的杂芳烷基；或者R2和R2′一起形成任选取代的3-7元环。
在一个实施方案中，R2是任选取代的C1-C4烷基，而R2′是氢或任选取代的C1-C4烷基。更合适地，R2′是氢，而R2是任选取代的C1-C4烷基。在更特别的实施方案中，R2选自于甲基、乙基、丙基(特别是c-丙基或i-丙基)、丁基(特别是t-丁基)、甲硫基乙基、甲硫基甲基、氨基丁基、(CBZ)氨基丁基、环己基甲基、苄基氧基甲基、甲基硫烷基乙基、甲基硫烷基甲基、和羟甲基，而R2′是氢。特别优选的实施方案是，R2′是氢而R2是乙基或丙基(特别是c-丙基或i-丙基)。更特别优选的是，R2为i-丙基。尤其优选的是，R2和R2′连接其上的立体中心是R构型的。
在一个实施方案中，R2或R2′是氢，而另一个不是氢。在另一个实施方案中，R2和R2′都是氢。
R4和R5当考虑式I的化合物时，在一个实施方案中，R4是氢；酰基；烷氧基；氰基；羧基，酰胺基；氨基羰基；低级烷基；被以下一个或者多个取代基取代的低级烷基卤素、低级烷氧基、或羟基；苯基；或被以下一个或者多个取代基取代的苯基卤素、低级烷氧基、或羟基。更特别地，R4是氢、氰基、甲基或被以下一个或者多个取代基取代的甲基卤素、低级烷氧基、或羟基(特别是卤素，如-CF3)。
当考虑式I的化合物时，在一个实施方案中，R5是氢；酰基、羧基；酰胺基，氰基；低级烷基(特别是甲基或乙基)；卤素(特别是溴、氯或氟)；苄基；胡椒基；萘基；呋喃基；噻吩基；吲哚基；吗啉基；苯基；苯并间二氧杂环戊烯基；或被一个或者多个以下取代基取代的苯基任选取代的氨基、二烷基氨基、酰基氨基(如乙酰基氨基)、氰基、卤素、任选取代的低级烷基(包括三氟甲基和羟基烷基如羟甲基)、任选取代的低级烷氧基、任选取代的低级烷基硫烷基(包括甲硫烷基)、羟基或硫基。
更合适地，R5是甲基、乙基、溴、羧基、氰基、苯基、卤代苯基、低级烷基苯基、三氟甲基苯基、低级烷氧基苯基、二(低级烷氧基)苯基、多卤代苯基、卤代低级烷基苯基(如卤代甲基苯基)、呋喃基、噻吩基、低级烷基硫烷基苯基、苯硫基、氨基苯基、氨基羰基苯基、氰基苯基、二(低级烷基)氨基苯基、二(低级烷基)苯基、乙酰基氨基苯基、氨基取代的低级烷基苯基、羟基取代的低级烷基苯基(如甲基羟基苯基)、胡椒基、萘基、氨甲酰基、低级烷基氨甲酰基(如甲基、乙基或丙基氨甲酰基)、苄基氨甲酰基、苯基氨甲酰基、甲氧基甲基氨甲酰基、甲氧基乙基氨甲酰基、羟基甲基氨甲酰基、羟基乙基氨甲酰基、吲哚基、草酰基、吗啉基、氰基、羧基、和吗啉基羰基。
更为合适地，R5是氢、甲基或氰基。
当考虑式I的化合物时，在另一个实施方案中，R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的5、6或7元脂族碳环。该环可被一个或者多个以下取代基取代卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的低级烷氧基、和/或羟基。
其中R3是任选取代的咪唑基的化合物当R3是任选取代的咪唑基时，在一个特别的实施方案中，R3具有以下式 其中R9选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基-C1-C4烷基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷基、任选取代的芳基-C1-C4烷氧基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷氧基、和任选取代的杂芳基；以及R10和R11独立地是氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、或任选取代的芳基-C1-C4烷基。
根据一个实施方案，R9是被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯基，苯基，苄基，苯硫基，或被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯硫基。更合适地，R9是被一个或者多个卤素和/或甲基取代的苯基。
根据另一个实施方案，R11是氢而R10是取代的C1-C4烷基。更合适地，R11是氢而R10是氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、乙酰基氨基-甲基、乙酰基氨基乙基、苄基氧基羰基氨基-甲基或苄基氧基羰基氨基-乙基。
其中R3是任选取代的咪唑啉基的化合物当R3是咪唑啉时，在一个实施方案中，R3具有以下式 其中，R9选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基-C1-C4烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷基；以及R12、R12′、R13、和R13′独立地选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、和任选取代的芳基-C1-C4烷基。
在一个实施方案中，R9是亚甲二氧基苯基；苯基；被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯基；苄基；被C1-C4烷基取代的噻吩基；苄基；苯硫基；或被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯硫基。更合适地，R9是亚甲二氧基苯基、苯基、甲苯基、甲氧基苯基、或卤代甲基苯基。
在一个实施方案中，R12、R12′、R13、和R13′独立地是氢或任选取代的C1-C4烷基。更合适地，R13′和R13都是氢。
其中R3是-NHR6、-NR6(COR7)或-NR6(CH2R7b)的化合物在一个实施方案中，R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基。更合适地，R6是R16-亚烷基而R16选自于烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、胍、羟基、和N-杂环基。
在更为优选的实施方案中，R6选自于任选取代的低级烷基、任选取代的环己基；被羟基、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基；苄基；杂芳基甲基；杂芳基乙基；和杂芳基丙基。
在最优选的实施方案中，R6选自于甲基、乙基、丙基、丁基、环己基、羧基乙基、羧基甲基、甲氧基乙基、羟基乙基、羟基丙基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基丙基、二乙基氨基乙基、二乙基氨基丙基、氨基丙基、甲基氨基丙基、2，2二甲基-3-(二甲基氨基)丙基、1-环己基-4-(二乙基氨基)丁基、氨基乙基、氨基丁基、氨基戊基、氨基己基、氨基乙氧基乙基、异丙基氨基丙基、二异丙基氨基乙基、1-甲基-4-(二乙基氨基)丁基、(t-Boc)氨基丙基、羟基苯基、苄基、甲氧基苯基、甲基甲氧基苯基、二甲基苯基、甲苯基、乙基苯基、(氧代吡咯烷基)丙基、(甲氧基羰基)乙基、苄基哌啶基、吡啶基乙基、吡啶基甲基、吗啉基乙基吗啉基丙基、哌啶基、氮杂环丁烷基甲基、氮杂环丁烷基乙基、氮杂环丁烷基丙基、吡咯烷基甲基、吡咯烷基乙基、吡咯烷基丙基、哌啶基甲基、哌啶基乙基、咪唑基丙基、咪唑基乙基、(乙基吡咯烷基)甲基、(甲基吡咯烷基)乙基、(甲基哌啶基)丙基、(甲基哌嗪基)丙基、胍基-乙基、胍基-丙基、呋喃基甲基和吲哚基乙基。
当考虑式I的化合物时，在一个具体的实施方案中，R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、R8O-和R14-NH-，其中R8选自于任选取代的烷基和任选取代的芳基，而R14选自于氢、任选取代的烷基和任选取代的芳基。
在一个更为优选的实施方案中，如果R7不是R14NH-或R8O-，则R7选自于任选取代的烷基；芳基(包括苯基、联苯基、和萘基)；取代的芳基(包括被一个或者多个选自于以下组中的取代基取代的苯基氰基、卤素、低级烷基、低级烷氧基、羟基-低级烷基、硝基、羧基、亚甲二氧基、三氟甲氧基或三氟甲基)；苄基-；以及任选取代的杂芳基。
在最优选的实施方案中，如果R7不是R14NH-或R8O-，则R7选自于乙基、丙基、氯丙基、丁氧基、庚基、丁基、辛基、十三烷基、(乙氧基羰基)乙基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基甲基、苯基、萘基、卤代苯基、多卤代苯基、氰基苯基、羟基甲基苯基、卤代(三氟甲基)苯基、氯苯氧基甲基、甲氧基苯基、羧基苯基、乙基苯基、甲苯基、羟基甲基苯基、乙基苯基、联苯基、亚甲二氧基苯基、甲基磺酰基苯基、甲氧基氯苯基、氯萘基、乙酰基苯基、甲基卤代苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、丁基苯基、戊基苯基、甲基硝基苯基、苯氧基甲基、二甲氧基苯基、苯基乙烯基、硝基氯苯基、硝基苯基、二硝基苯基、二(三氟甲基)苯基、苄基氧基甲基、苄基、呋喃基、苯并呋喃基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、吲哚基、甲基吡啶基(methylpyridinyl)、甲基吡啶基(methylpyridyl)、(3-氨甲酰基)吡啶基-[烟酰胺]、3-氨甲酰基-6-甲基吡啶基、喹啉基、皮考啉基、吡唑基、吡嗪基、甲基吡嗪基、吗啉子基甲基、甲硫基甲基、甲氧基甲基、咪唑基、异噁唑基、甲基-异噁唑基、苯并噻二唑基、亚甲二氧基苯基、噻吩基、甲基噻吩基、甲基-烟酰胺基、甲基-吡嗪基、苯并间二氧杂环戊烯基、以及甲基-苯硫基。
更合适地，R7是甲苯基、卤代苯基、卤代甲基苯基、羟基甲基苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基或氰基苯基。
在另一个优选的实施方案中，如果R7是R14NH-，则R14选自于低级烷基；环己基；苯基；以及被卤素、低级烷基、低级烷氧基、或低级烷基硫烷基取代的苯基。
在另一个优选的实施方案中，如果R7是R14NH-，则R14是异丙基、丁基、环己基；苯基、溴苯基、二氯苯基、甲氧基苯基、乙基苯基、甲苯基、三氟甲基苯基或甲硫基苯基。
在一个优选实施方案中，如果R7是R8O-，则R8选自于低级烷基；环己基；苯基；以及被卤素、低级烷基、低级烷氧基、或低级烷基硫烷基取代的苯基。
在最优选的实施方案中，如果R7是R8O-，则R8是异丙基、丁基、环己基、苯基、溴苯基、二氯苯基、甲氧基苯基、乙基苯基、甲苯基、三氟甲基苯基或甲硫基苯基。
合适地，R7b选自于C1-C13烷基；取代的低级烷基；苯基；萘基；被以下基团取代的苯基氰基、卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、亚甲二氧基、或三氟甲基；联苯基、苄基和杂环基。更合适地，R7b选自于被一个或者多个以下基团取代的苯基卤素、甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或甲氧基羰基；哌啶基；和萘基。更合适地，R7b是卤代苯基、甲基卤代苯基、多卤代苯基、甲苯基、二甲基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、氰基苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、二(三氟甲基)苯基、羧基苯基、t-丁基苯基、甲氧基羰基苯基、哌啶基、和萘基。
其中R3是-NR6(SO2R7a)的化合物如果R3是-NR6(SO2R7a)，则R6如上所定义，而R7a选自于C1-C13烷基；苯基；萘基；被以下基团取代的苯基氰基、卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、亚甲二氧基、或三氟甲基；联苯基和杂芳基。更合适地，R7a选自于被以下基团取代的苯基卤素、低级烷基、低级烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基；和萘基。
优选的亚属在式I化合物的优选亚属中，R1是任选取代的芳基-C1-C4烷基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷基、或萘基甲基；R2是任选取代的C1-C4-烷基；R2′是氢；R4是氢、氰基、或被一个或者多个以下取代基取代的甲基卤素、低级烷氧基、或羟基；R5是氢、甲基或氰基；以及R3是任选取代的咪唑基、任选取代的咪唑啉基、-NHR6、-N(R6)(COR7)、-N(R6)(SO2R7a)、以及-N(R6)(CH2R7b)。
在式I化合物的优选亚属中，R3是任选取代的咪唑基；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R9是被一个或者多个卤素和/或甲基取代的苯基；以及R11是氢而R10是取代的C1-C4烷基(特别是氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、乙酰基氨基-甲基、乙酰基氨基乙基、苄基氧基羰基氨基-甲基-或苄基氧基羰基氨基-乙基)。
在式I化合物的优选亚属中，
R3是任选取代的咪唑啉基；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R9是亚甲二氧基苯基、苯基、甲苯基、甲氧基苯基、或卤代甲基苯基；以及R12、R12′、R13′、R13独立地是氢或任选取代的C1-C4烷基。更优选地，R13′和R13都是氢。
在式I化合物的优选亚属中，R3是-NHR6；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基。
在式I化合物的优选亚属中，R3是-NR6(COR7)；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、和任选取代的杂环基；以及R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、R8O-和R14-NH-，其中R8选自于任选取代的烷基和任选取代的芳基，而R14选自于氢、任选取代的烷基和任选取代的芳基。
更优选地，R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R6是R16-亚烷基，而R16选自于烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、羟基、和N-杂环基(特别地，R6选自于任选取代的低级烷基、任选取代的环己基；被羟基、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基；苄基；杂芳基甲基；杂芳基乙基；杂芳基丙基)；以及R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、、R8O-和R14-NH-，其中R8选自于任选取代的烷基和任选取代的芳基，而R14选自于氢、任选取代的烷基和任选取代的芳基。
在式I化合物的优选亚属中，R3是-NR6(COR7)；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、和任选取代的杂环基；以及R7选自于任选取代的烷基、芳基、取代的芳基、苄基、和任选取代的杂芳基。
在式I化合物的优选亚属中，R3是-N(R6)(COR7)；R1、R2、R2′、R4、R5和R6如上所定义；以及R7是甲苯基、卤代苯基、卤代甲基苯基、羟基甲基苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基或氰基苯基。
在式I化合物的优选亚属中，R3是-N(R6)(CH2R7b)；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、和任选取代的杂环基；以及
R7b选自于被一个或者多个以下基团取代的苯基卤素、甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或甲氧基羰基；哌啶基；和萘基。
在式I化合物的优选亚属中，R3是-NR6(SO2R7a)；R1、R2、R2′、R4和R5如上所定义；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基；以及R7a选自于被卤素、低级烷基、低级烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基取代的苯基；以及萘基。
优选的化合物包括N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-乙基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氯-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-溴-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺；
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-三氟甲氧基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氯-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氰基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氟-3-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氯-4-氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氟-3-三氟甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氰基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3，4-二甲氧基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-N-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-苯甲酰胺；N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-N-吡咯烷-3-基甲基-苯甲酰胺；
-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-N-吡咯烷-2-基甲基-苯甲酰胺；N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-N-哌啶-4-基甲基-苯甲酰胺；N-氮杂环丁烷-3-基甲基-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(2-氨基-乙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-(2-胍基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-(3-甲氧基-苄基)-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；3-苄基-5，6-二甲基-2-[2-甲基-1-(2-p-甲苯基-4，5-二氢-咪唑-1-基)丙基]-3H-嘧啶-4-酮；1-苄基-5-甲基-2-[2-甲基-1-(2-p-甲苯基-4，5-二氢-咪唑-1-基)丙基]-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-4-甲腈；N-[1-(5-乙酰基-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸甲基酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酰胺；
2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸苄基酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸苯基酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸(乙酰基氨基-甲基)-酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸甲氧基甲基-酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸羟甲基酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-4-甲基-5-(吗啉-4-羰基)-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；(2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-基)-氧代-乙酸；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-氯-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-m-甲苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-甲氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-(3-三氟甲基-苯基)-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-p-甲苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-氯-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-甲氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-呋喃-2-基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-呋喃-3-基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-噻吩-3-基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-4-甲基-5-(4-甲基硫烷基-苯基)-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-氰基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-乙氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-乙氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
N-{1-[5-(3-氨基-苯基)-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-o-甲苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-{1-[5-(3-乙酰基氨基-苯基)-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基-2]-甲基-丙基}-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-氰基-苯基)-4-甲基-6-氧代--1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-二甲基氨基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2-甲氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2-乙氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2-氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3，4-二氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2，3-二氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2，4-二氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2，5-二氟-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(2，5-二甲基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；
-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3，4-二甲基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3，4-二甲氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-氟-3-甲基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-{1-[5-(3-氨基-4-甲基-苯基)-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(4-羟甲基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(3-甲氧基-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-{1-[1-苄基-5-(胡椒基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-5-萘-1-基甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-乙基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-三氟甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-三氟甲氧基-苯甲酰胺；
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氯-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氰基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-三氟甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3，4-二氟-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3，4-二甲氧基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-6-氧代-4-苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-6-氧代-4-丙基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-异丙基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲氧基甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-羟甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-6-氧代-4-三氟甲基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲氧基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-苄基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-4-羧酸乙基酯；2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-4-羧酸酰胺；N-[1-(4-乙酰基氨基-1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-异丙基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺，N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-氟-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-5-溴-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1，5-二苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-苯基-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；
2-{1-[(3-氨基-丙基)-(4-甲基-苯甲酰基)-氨基]-2-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲氧基-苯甲酰胺；苯并[1，2，3]噻二唑-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氰基-苯甲酰胺；苯并[1，3]间二氧杂环戊烯-5-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；N-(2-氨基-乙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-3-氟-4-甲基-苯甲酰胺；N-(2-氨基-乙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-氰基-苯甲酰胺；5-甲基-噻吩-2-羧酸(2-氨基-乙基)-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-异噁唑-3-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺；5-甲基-吡嗪-2-羧酸(3-氨基-丙基)-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-酰胺，
N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-2-甲氧基-乙酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(4，5-二甲基-1-萘-1-基甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-2-甲氧基-乙酰胺；2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-p-甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-苄基-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；3-苄基-5，6-二甲基-2-[2-甲基-1-(2-p-甲苯基-4，5-二氢-咪唑-1-基)丙基]-3H-嘧啶-4-酮；3-苄基-5，6-二甲基-2-{2-甲基-1-[2-(5-甲基-噻吩-2-基)-4，5-二氢-咪唑-1-基]-丙基}-3H-嘧啶-4-酮；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯磺酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-苄基-4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-喹唑啉-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；N-(3-氨基-丙基)-N-[1-(3-苄基-4-氧代-4，5，6，7-四氢-3H-环戊嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺；以及2-(1-氨基-2-甲基-丙基)-3-苄基-3，5，6，7-四氢-环戊嘧啶-4-酮。
用途、测试和给药总用途制备后，本发明的化合物可用于各种涉及改变有丝分裂的应用中。本领域技术人员可以理解的是，有丝分裂可通过多种方法来改变；也就是说，可通过增加或者降低有丝分裂途径中的组分的活性来改变。不同的是，有丝分裂可通过抑制或者活化某些组分干扰其平衡来影响(如被破坏)。类似的方法也可用于改变减数分裂。
在优选的实施方案中，本发明的化合物用于抑制有丝分裂纺锤体的形成，由此导致延长有丝分裂中细胞周期休止。在此所用术语“抑制”是指降低或者干扰有丝分裂纺锤体的形成或者使有丝分裂纺锤体发生功能障碍。在此所用术语“有丝分裂纺锤体的形成”是指通过有丝分裂驱动蛋白将微管组合成双极结构。在此所用术语“有丝分裂纺锤体功能障碍”是指有丝分裂停止或者形成单极纺锤体。
本发明的化合物可用于与有丝分裂驱动蛋白——KSP结合和/或抑制其活性。在一个实施方案中，KSP是人KSP，但也可使化合物结合或者抑制来源于其他生物体的KSP驱动蛋白。在本发明中，“抑制”是指增加或者降低纺锤极分离，导致有丝分裂纺锤极的畸形(如张开)，或者对有丝分裂纺锤体产生形态干扰。为此目的，KSP的定义中还包括KSP的变体和/或片段。参见美国专利6,437,115，其内容在此并入作为参考。已显示本发明的化合物对KSP具有特异性。然而，本发明也包括使用化合物结合会调节其他的有丝分裂驱动蛋白。
本发明的化合物用于治疗细胞增殖性疾病。可用本发明的化合物、组合物及方法治疗的疾病状态包括但不限于癌症(进一步如下所述)、自体免疫性疾病、真菌性疾病、关节炎、移植物排斥反应、炎性肠疾病、医疗过程(包括但不限于手术、血管成形术等)诱发的增殖作用。治疗包括抑制细胞增殖作用。可以理解的是，在某些情况下，细胞有可能处于异常状态，而且仍需要治疗。因此，在一个实施方案中，本发明包括应用于罹患这些疾病之一的细胞或者个体或者防止其罹患这些疾病之一。
本发明的化合物、组合物和方法对于治疗癌症被认为是特别有用的，包括实体瘤，如皮肤、乳腺、脑、子宫颈癌、睾丸癌等。更具体而言，可用本发明的化合物、组合物及方法治疗的癌症包括但不限于心肉瘤(血管肉瘤、纤维肉瘤、横纹肌肉瘤、脂肉瘤)、粘液瘤、横纹肌瘤、纤维瘤、脂瘤和畸胎瘤；肺支气管癌(鳞状细胞、未分化小细胞、未分化大细胞、腺癌)、肺泡(细支气管)癌、支气管腺瘤、肉瘤、淋巴瘤、软骨错构瘤、间皮瘤；胃肠道食管(鳞状细胞癌、腺癌、平滑肌肉瘤、淋巴瘤)，胃(癌、淋巴瘤、平滑肌肉瘤)，胰(胰管腺癌、胰岛瘤、高血糖素瘤、胃泌素瘤、类癌瘤、胰腺瘤)，小肠(腺癌、淋巴瘤、类癌瘤、卡波济肉瘤、平滑肌瘤、血管瘤、脂瘤、神经纤维瘤、纤维瘤)，大肠(腺癌、管腺瘤、绒毛腺瘤、错构瘤、平滑肌瘤)；生殖泌尿道肾(腺癌、维尔姆斯肿瘤[肾胚细胞瘤]、淋巴瘤、白血病)，膀胱和尿道(鳞状细胞癌、过渡细胞癌、腺癌)，前列腺(腺癌、肉瘤)，睾丸(精原细胞瘤、畸胎瘤、胚胎癌、畸胎癌、绒膜癌、肉瘤、间质细胞癌、纤维瘤、纤维腺瘤、腺瘤样肿瘤、脂瘤)；肝脏肝细胞瘤(肝细胞癌)、胆管癌、肝胚细胞瘤、血管肉瘤、肝细胞腺瘤、血管瘤；骨成骨肉瘤(骨肉瘤)、纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、软骨肉瘤、尤因肉瘤、恶性淋巴瘤(网状细胞肉瘤)、多发性脊髓瘤、恶性巨细胞肿瘤脊索瘤、软骨骨瘤(骨软骨外生骨疣)、良性软骨瘤、成软骨细胞瘤、软骨粘液纤维瘤、骨样骨瘤和巨细胞肿瘤；神经系统颅骨(骨瘤、血管瘤、肉芽瘤、黄瘤、畸形性骨炎)，脑膜(脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经胶质瘤病)，脑(星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、神经胶质瘤、室管瘤、胚组织瘤(松果体瘤)、多形性成胶质细胞瘤、少突神经胶质细胞瘤、神经鞘瘤、成视网膜细胞瘤、先天性肿瘤)，脊索(神经纤维瘤、脑膜瘤、神经胶质瘤、肉瘤)；妇科子宫(子宫脑膜癌)，子宫颈(子宫颈癌、肿瘤前子宫颈发育异常)，卵巢(卵巢癌[浆液囊腺癌、假粘液性囊腺癌、未分类的癌]、粒层-膜细胞肿瘤、塞尔托利-莱迪希细胞肿瘤、无性细胞瘤、恶性畸胎瘤)，外阴(鳞状细胞癌、上皮内癌、腺癌、纤维肉瘤、黑素瘤)，阴道(透明细胞癌、鳞状细胞癌、葡萄簇状肉瘤[胚胎横纹肌肉瘤])，输卵管(癌)；血液血液(髓细胞样白血病[急性和慢性]、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓及外骨髓增殖性疾病、多发性骨髓瘤、脊髓发育不良综合症)，何杰金病、非何杰金淋巴瘤(恶性淋巴瘤)；皮肤恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌、卡波济肉瘤、痣发育不良痣、脂瘤、血管瘤、皮肤纤维瘤、瘢痕瘤、牛皮癣；以及腺体成神经细胞瘤。因此，在此所用术语“癌细胞”包括受到任何一种如上所述的病症影响的细胞。
测试对于KSP调节活性的分析，KSP或者本发明的化合物通常非可扩散地结合在不溶性载体上，该载体具有分开的样品接受区域(如微量滴定板、阵列(array)等)。不溶性载体可由任何本发明的化合物可结合于其上的材料制成，易于与可溶性材料分离，或者与总的筛选方法相配适。此等载体的表面可以是固体或者多孔性的，而且可以是任何形状的。合适的不溶性载体的例子包括微量滴定板、阵列、膜和珠。这些材料通常是由玻璃、塑料(如聚苯乙烯)、多糖、尼龙或者硝基纤维素、TeflonTM等制成。微量滴定板和阵列是特别方便的，因为使用少量的试剂和样品可同时进行大量的测试。本发明化合物的具体结合方式不是关键性的，只要其与试剂以及本发明的总方法相匹配，保持化合物的活性而且不可扩散即可。优选的结合方法包括使用抗体(当蛋白质结合于载体上时，其不会立体地阻断配体结合位点或者活化序列)，直接结合在“粘性”或者离子载体上，化学交联，在表面上合成蛋白质或药物等。在结合蛋白质或者药物后，通过洗涤除去过量的未结合材料。样品接受区域然后可通过与牛血清白蛋白(BSA)、酪蛋白、或者其他接种蛋白或者其他物质保温而被阻断。
本发明的化合物可单独使用以抑制有丝分裂驱动蛋白、特别是KSP的活性。在一个实施方案中，本发明的化合物与KSP混合，然后分析KSP的活性。驱动蛋白(包括KSP)活性在本领域中是已知的，而且包括一种或者多种驱动蛋白活性。驱动蛋白活性包括影响ATP水解的能力；微管结合；滑行以及聚合/解聚(对微管动力学的影响)；与纺锤体其他蛋白质的结合；与细胞周期控制中涉及的蛋白质结合；作为其他酶的底物；如激酶或者蛋白酶；以及特异性的驱动蛋白细胞活性如纺锤极分离。
进行分析的方法对于本领域技术人员而言是众所周知的(例如参见Hall等人(1996)，Biophys.J.，713467-3476；Turner等人，1996，AnalBiochem.242(1)20-5；Gittes等人，1996，Biophys.J.70(1)418-29；Shirakawa等人，1995，J.Exp.Biol 1981809-15；Winkelmann等人，1995，Biophys.J.682444-53；Winkelmann等人，1995，Biophys.J.6872S)。
也可使用本领域中已知的测定ATP酶水解活性的方法。优选地，使用以溶液为基础的实验。美国专利6,410,254(其内容在此并入作为参考)描述了此等实验。或者，使用常规的方法。例如，可对驱动蛋白中的Pi释放进行定量。在一个优选的实施方案中，ATP酶水解活性实验使用0.3M的PCA(高氯酸)和孔雀绿试剂(8.27mM钼(II)酸钠、0.33mM的孔雀绿草酸盐、以及0.8mM的Triton X-100)。在进行该实验时，10μl的反应物在90μl的冷0.3M PCA中淬灭。使用磷酸盐标准物，所以可将数据转化为mM所释放的无机磷酸盐。当所有的反应物和标准物都已在PCA中淬灭时，在例如微量滴定板的相关孔中添加100μl的孔雀绿试剂。使混合物显色10-15分钟，然后读取板在650nm处的吸光度。如果使用磷酸盐标准物，则可将吸光度读数转化为mM Pi，并相对时间作图。另外，本领域中已知的ATP酶实验包括荧光素酶实验。
驱动蛋白运动域的ATP酶活性也可用于监测药剂的作用。在一个实施方案中，在没有微管存在下进行驱动蛋白ATP酶实验。在另一个实施方案中，在有微管存在时进行ATP酶实验。在上述实验中可检测不同类型的药剂。在一个实施方案中药剂的作用不依赖于微管和ATP的浓度。在另一个实施方案中，通过增加ATP、微管或者这两者的浓度，可降低调节剂对驱动蛋白ATP酶的作用。在又一个实施方案中，通过增加ATP、微管或者这两者的浓度，可增加药剂的作用。
体外抑制KSP的生化活性的化合物可接着在体内进行筛选。体内的筛选方法包括有关细胞周期分布、细胞存活率、或者有丝分裂纺锤体之存在、形态、活性、分布或者量的实验。例如通过流动细胞计监测细胞数量在细胞周期中的分布的方法对于本领域技术人员是已知的，测量细胞存活率的方法也是如此。例如参见美国专利6,437,115，其内容在此并入作为参考。监测纺锤体的形成和畸形的显微镜法对于本领域技术人员也是己知的(例如参见Whitehead和Rattner(1998)，J.Cell Sci.1112551-61；Galgio等人，(1996)J.Cell Biol.，135399-414)，该文献中的全部内容在此并入作为参考。
本发明的化合物抑制KSP驱动蛋白。抑制作用的一个量度是IC50，其定义为KSP的活性相对于对照被降低50％时的化合物浓度。化合物的IC50优选低于约1mM，在优选实施方案中，IC50低于约100μM，在更优选的实施方案中，IC50低于约10μM，在特别优选的实施方案中，IC50低于约1μM，在尤为优选的实施方案中，IC50低于约100nM，而在最优选的实施方案中，IC50低于约10nM。IC50的测量是用例如在此描述的ATP酶实验进行的。
抑制作用的另一个量度是Ki。对于IC50低于1μM的化合物，Ki或者Kd定义为嘧啶酮与KSP相互作用的解离常数。优选的化合物具有低于约100μM的Ki，在优选实施方案中，Ki低于约10μM，在更优选的实施方案中，Ki低于约1μM，在特别优选的实施方案中，Ki低于约100nM，而在最优选的实施方案中，Ki低于约10nM。
化合物的Ki是根据三个假设和Michaelis-Menten等式由IC50测定的。第一，仅一个化合物分子结合在酶上，而且没有合作性。第二，活性酶的浓度和测试化合物是已知的(例如，在制剂中没有显著量的杂质或者失活形式)。第三，酶-抑制剂复合物的酶促速率是零。速率(即化合物浓度)的数据拟合于以下等式中
V=VmaxE0[1-(E0+I0+Kd)-(E0+I0+Kd)2-4E0I02E0]]]>其中V是观察速率，Vmax是游离酶的速率，I0是抑制剂浓度，E0是酶浓度，而Kd是酶-抑制剂复合物的解离常数。
抑制作用的再一个量度是GI50，其定义为细胞生长速率降低50％时的化合物浓度。优选的化合物具有低于约1mM的GI50；GI50低于约20μM的化合物是更优选的，GI50为约10μM的化合物是更优选的，GI50低于约1μM的化合物是更优选的，GI50为约100nM的化合物是更优选的，GI50低于约10nM的化合物是更优选的。GI50是通过使用例如在此描述的细胞增殖实验来测定的。发现该类化合物抑制细胞增殖。
小分子抑制剂的体外效力是例如通过分析人卵巢癌细胞(SKOV3)在接触一系列9个点稀释的化合物72小时后的存活率来测定的。细胞存活率是通过测量生物还原市售试剂MTS/PMS时形成的产物formazon的吸光度来测定的。剂量-应答曲线上所计算的每个点是未经处理的对照细胞在72小时时的百分数减去背景吸收(完全细胞杀死)。
已成功地在临床中用于治疗癌症的抗增殖化合物(癌症化疗剂)具有变化较大的GI50。例如，在A549细胞中，紫杉醇GI50是4nM，多柔比星是63nM，5-氟尿嘧啶是1μM，而羟基脲是500μM(数据是由NationalCancer Institute，Developmental Therapeutic Program提供的，http//dtp.nci.nih.gov/)。因此，抑制细胞增殖的化合物，无论该浓度是否表现出抑制作用，都具有潜在的临床应用。
在用于筛选结合KSP驱动蛋白的化合物的方法中使用本发明的化合物时，将KSP结合在载体上，然后在实验中添加本发明的化合物(其是有丝分裂剂)。或者，将本发明的化合物结合在载体上，然后添加KSP。可在其中寻求新的结合剂的化合物包括特异性抗体、在化学文库的筛选中已鉴别的非天然结合剂、肽类似物等。筛选出对于人细胞具有低毒性的候选药物是筛选实验特别有用的一个方面。为此目的可使用多种实验，包括体外标记的蛋白-蛋白结合实验，电泳移动性位移实验，用于蛋白结合的免疫实验，官能团实验(磷酸化实验等)，等等。
可以多种方法测定本发明化合物与KSP的结合。在优选的实施方案中，本发明的化合物例如用荧光或者放射活性基团标记，然后直接测量结合。例如，这可如下进行将所用或者部分的KSP连接在固体载体上，添加经标记的测试化合物(例如其中至少一个原子被可检测的同位素替换的本发明化合物)，洗涤掉过量的试剂，然后测定固体载体上存在的标记物的量。
本发明所用术语“标记”是指化合物直接或者间接地用可提供检测信号的标记物标记，所述标记物例如是放射同位素、荧光标记、酶、抗体、颗粒(如磁性颗粒)、化学发光标记、或者特异性结合分子等。特异性结合分子包括一对物质，如生物素和抗生蛋白链菌素，地高辛和抗地高辛等。对于特异性结合物，根据如上所述的已知方法，互补一方通常与待检测的分子结合。标记物可直接或者间接提供可检测的信号。
在某些实施方案中，仅标记其中一个化合物。例如，可用125I或者荧光团在酪氨酸位置处标记驱动蛋白。或者，用不同的标记物标记一个以上的组分，例如蛋白质用125I，而抗有丝分裂剂用荧光团。
本发明的化合物也可用作筛选其他候选药物时的竞争剂。在此所用的术语“候选药物”或者“药物候选者”或者语法上等同的词是指待检测其生物活性的任何分子，如蛋白质、寡肽、小的有机分子、多糖、多核苷酸等。它们可直接或者间接改变细胞增殖表型或者细胞增殖序列的表达，所述细胞增殖序列包括核酸序列和蛋白序列。在其他情况下，筛选改变细胞增殖蛋白结合和/或活性。该类型的筛选可在有或者没有微管存在时进行。在筛选蛋白结合或活性时，优选的实施方案不包括任何已知可以结合具体的蛋白的分子，例如聚合物结构(如微管)以及能量源(如ATP)。实验的优选实施方案包括在其内源天然状态下不结合分子增殖蛋白的候选药物(在此称为“外源性”药物)。在其他实施方案中，外源性药物进一步排除KSP的抗体。
候选药物可包括多种类别的化学物质，但通常是有机分子，优选分子量为100-2500道尔顿的小有机分子。候选药物包括与蛋白的结构相互作用所必需的官能团，特别是氢键和亲脂性结合的官能团，其通常至少包括胺、羰基、羟基、醚、或者羧基，优选官能团中至少有两个。候选药物经常包括环状碳或者杂环结构和/或芳香或者多芳香结构，它们被一个或者多个上述官能团取代。候选药物还可在生物分子中选择，所述生物分子包括肽、糖、脂肪酸、甾体化合物、嘌呤、嘧啶、以及它们的衍生物、结构类似物或者组合。
候选药物是由包括合成或者天然化合物的文库的多种来源得到的。例如，随机可有多种方式，而且涉及多种有机化合物及生物分子的合成，包括随机寡核苷酸的表达。或者，细菌、真菌、植物和动物提取物形式的天然化合物文库也是可以利用或者容易产生的。另外，天然或者合成的文库及化合物可容易地通过常规的化学、物理和生物化学方法进行改性。已知的药物可进行针对性或者随机的化学改性，如酰基化、烷基化、酯化、酰胺化，以产生结构类似物。
竞争性筛选实验可通过在第一个样品中混合KSP以及候选药物来进行。第二个样品包括本发明的化合物、KSP以及候选药物。这可在有或者没有微管存在时进行。测定这两个样品中的候选药物结合，而两个样品之间的结合变化或者不同表明存在能够结合KSP并潜在抑制其活性的药物。也就是说，如果第二个样品中候选药物的结合不同于第一个样品中的，则表明候选药物能够结合KSP。
在优选的实施方案中，候选药物与KSP的结合是通过使用竞争性结合实验来测定。在该实施方案中，竞争剂是已知与KSP结合的结合物质，如抗体、肽、结合配偶体、配体等。在某些情况下，例如在候选药物和结合物质之间，用结合物质置换候选药物，可存在竞争性结合。
在一个实施方案中，候选药物是经过标记的。该候选药物或者竞争剂或者它们两个，首先添加至KSP中，其时间足以进行结合。可在任何有利于最佳活性的温度下进行保温，通常在4-40℃之间。
保温的时间根据最佳活性来选择，但也可进行最佳化，以有利于快速高输出筛选。通常0.1-1小时是足够的。过量的试剂通常被除去或者洗掉。接着添加第二组分，然后是有或者没有经过标记的组分，以表明结合。
在另一个实施方案中，首先添加竞争剂，然后添加候选药物。竞争剂的替换是候选药物与KSP结合并由此能够结合以及潜在抑制KSP活性的指标。在该实施方案中，组分可进行标记。因此，例如，如果竞争剂是经过标记的，则在洗涤溶液中存在标记物表明被药物替换。或者，如果候选药物被标记，在载体上存在标记物表明进行了替换。
在可替代的实施方案中，候选药物首先添加，并进行保温和洗涤，然后是竞争剂。不存在竞争剂的结合表明候选药物以更高的亲和性与KSP结合。因此，如果候选药物是标记的，在载体上存在标记物，没有竞争剂的结合，有可能表明候选药物能够与KSP结合。
抑制作用是通过筛选能够抑制KSP活性的候选药物来测试的，其包括以下步骤如上所述混合候选药物和KSP，然后测定KSP生物活性的变化。因此，在该实施方案中，候选药物应与KSP结合(虽然这不是必须的)，并改变其在此定义的生物或者生化活性。该方法包括细胞的体外筛选法和体内筛选法，其中包括细胞周期分布、细胞存活率、有丝分裂纺锤体是否存在、形态、活性、分布或者量的变化。
或者，可使用不同的筛选，以鉴别出与天然KSP结合但不与改性KSP结合的候选药物。
可在实验中使用阳性对照和阴性对照。合适地，所有的对照和测试样品都进行至少三次，以得到统计学显著的结果。所有样品的保温时间应足以使药物与蛋白质结合。在保温后，洗涤所有的样品，使得没有非特异性结合的材料，然后测定结合而且通常被标记的药物的量。例如，当使用放射性标记物时，样品可在闪烁计数器中计数，以测定结合化合物的量。
在筛选实验中可包括多种其他试剂。这些试剂包括例如盐、中性蛋白质(如白蛋白)、洗涤剂等，它们可有利于最佳的蛋白-蛋白结合和/或降低非特异性或者背景相互作用。还可使用可提高使用效率的试剂，如蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、杀微生物剂等。可以任何顺序添加组分的混合物，以提高所需的结合。
给药因此，本发明的组合物可给药于细胞。术语“给药”是指向细胞培养基以及患者中的细胞给药治疗有效量的本发明化合物。术语“治疗有效量”是指可对给药个体产生作用的剂量。精确的剂量取决于治疗目的，而且可由本领域技术人员通过已知的方法来确定。本领域众所周知的是，必需根据全身与局部给药、年龄、体重、总的健康状况、性别、饮食、给药时间、药物的相互作用以及疾病的严重程度，对给药剂量进行调整，而且可由本领域技术人员用常规的实验来确定。在此所用术语“细胞”是指可改变其中有丝分裂或者减数分裂的几乎大多数的任何细胞。
在本发明中，“患者”包括人和其他动物(特别是哺乳动物)以及其他生物体。因此，本发明的方法可应用于人的治疗和兽医领域中。在优选的实施方案中，患者是哺乳动物，而在最优选的实施方案中，患者是人。
具有所希望的药理活性的本发明化合物可以包含药物学上可接受的载体的药物组合物的形式给药于患者。根据引入的方式，本发明的化合物可以如下所述多种方法进行配制。治疗活性化合物在制剂中的浓度可为0.1-100重量％。
药物可单独或者与其他治疗(如放射疗法)或者其他化学治疗剂(如似乎作用于微管形成的紫杉烷类药物或作为拓扑异构酶I抑制剂的喜树碱类药物)组合进行。如果使用，其他化学治疗剂的给药可在本发明化合物给药之前、同时或者之后进行。在本发明的一个方面中，本发明的化合物与一种或者多种其他化学治疗剂共同给药。术语“共同给药”是指本发明的化合物给药于患者，使得本发明的化合物以及共同给药的化合物可同时存在于患者的血液中，无论这些化合物实际上是合适给药的，包括同时给药。
本发明的化合物或组合物可通过多种途径进行给药，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、透皮、腹膜内、肌肉内、肺内、阴道、直肠、或者眼内。在某些情况下，例如在治疗伤口和炎症时，本发明的抗有丝分裂剂可直接以溶液或者喷雾剂给药。
药物剂型包括式I的化合物或其药学可接受的盐或溶剂化物以及一种或多种药用赋形剂。如本领域中已知，药用赋形剂是辅助成分，其功能是促使或促进各种剂型(例如口服剂型如片剂、胶囊剂和液体；局部剂型如皮肤、眼睛和耳用剂型；栓剂；注射剂；呼吸用剂型等)的药剂或药物的递送。药用赋形剂包括惰性或非活性成分、增效剂或实质上有助于活性成分的医疗效果的化学物质。例如，药用赋形剂可以用于改善流动特征、产品均匀性、稳定性、味道或外观，以使剂量操作和给药容易，从而方便使用，或者控制生物利用度。虽然药用赋形剂常被描述为惰性或无活性，但在本领域中可以认识到在药用赋形剂的性质和含有它们的剂型之间存在一定的关系。
适用作载体或稀释剂的药用赋形剂在本领域中是已知的，并且用于多种配方。例如参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro编辑，Mack Publishing Company(1990)；RemingtonThe Scienceand Practice of Pharmacy，第20版，A.R.Gennaro，编辑，Lippincott Williams& Wilkins(2000)；Handbook of Pharmaceutical Excipients，第3版，A.H.Kibbe编辑，American Pharmaceutical Association，and Pharmaceutical Press(2000)；和Handbook of Pharmaceutical Additives，compiled by Michael andIrene Ash，Gower(1995)，以上各文献均在此引入作为参考。
口服固体剂型如片剂通常包含一种或多种药用赋形剂，它们例如可以有助于赋予令人满意的加工和压缩特征，或者给片剂提供附加的所需物理特征。这些药用赋形剂可以选自稀释剂、粘合剂、助流剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、甜味剂、聚合物、蜡或其它延迟溶解的物质。
用于静脉内给药的组合物一般包含静脉内液体，即简单化学物质如糖、氨基酸或电解质的无菌溶液，它们可以容易地被循环系统递送和消化。这些液体可以用注射USP用水制备。
常用于静脉内(IV)的液体公开在Remington，the Science and Practiceof Pharmacy[前面提供的完整引文]中，并包括醇(例如在右旋糖和水(″D/W″)中[例如5％右旋糖]或在生理盐水溶液(″NSS″)中的右旋糖和水[例如5％右旋糖]中；例如5％醇)；合成氨基酸如Aminosyn、FreAmine、Travasol，例如分别为3.5或7；8.5；3.5、5.5或8.5％；氯化铵，例如2.14％；葡聚糖40，在NSS中，例如10％，或者在D5/W中，例如10％；葡聚糖70，在NSS中，例如6％，或者在D5/W中，例如6％；右旋糖(葡萄糖，D5/W)，例如2.5-50％；右旋糖和氯化钠，例如5-20％右旋糖和0.22-0.9％NaCl；乳酸化Ringer′s(Hartmann′s)，例如NaCl 0.6％、KCl 0.03％、CaCl20.02％；乳酸盐0.3％；甘露糖醇，例如5％，任选与右旋糖，例如10％，或者NaCl，例如15或20％组合；多种含有电解质、右旋糖、果糖、转化糖Ringer′s的不同组合的电解质溶液，例如NaCl 0.86％、KCl 0.03％、CaCl20.033％；碳酸氢钠，例如5％；氯化钠，例如0.45、0.9、3或5％；乳酸钠，例如1/6M；和无菌注射用水。
这些液体的pH可变化，而且如本领域已知的，通常在3.5-8之间变化。
以下实施例用于更详细地描述实施本发明的方式，以及市售本发明各方面的最佳方式。应理解的是，这些实施例绝不是对本发明真实范围的限制，而仅是用于说明目的。在此引用的所有参考文献都全文引入作为参考。
实施例所有的无水溶剂都购自于Aldrich Chemical Company，在SureSeal容器内。
实施例1方法A 将乙酰乙酰胺2(12.0g，0.119mol)和二甲苯(200mL)添加至一个3口500mL圆底烧瓶中，该烧瓶装配有干冰回流冷凝器。所得的混合物加热至115℃，并用氨气连续换气3小时，然后冷却至室温。反应混合物过滤，而滤液进行减压浓缩。残留的白色固体由1H NMR分析测定为纯的所希望的产物3(1.491g，14.9mmol)。向由过滤产生的剩余的固体残留物中添加200mL的蒸馏水。水溶液用乙酸乙酯(3×100mL)和热氯仿(3×100mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥，然后减压浓缩，产生额外的所希望的产物3(3.628g，36.2mmol)。反应的总产率为47.4％。
在室温下向无水乙醇(50mL)中小心地添加金属钠(1.0g)，由此新制备乙醇钠。在室温下向β-氨基巴豆酰胺3(1.389g，13.87mmol)和酯4(3.744g，15.26mmol)在250mL烧瓶中的混合物内添加该乙醇钠在无水乙醇(50mL)中的溶液。所得溶液加热至80℃，并在氮气氛下搅拌2小时。将该混合物冷却至室温，然后真空浓缩。残留物与50mL的蒸馏水混和，然后用1M HCl水溶液中和。接着用乙酸乙酯(3×40mL)和热氯仿(3×40mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并减压浓缩，黄色残留物通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。所希望的产物5(1.261g，32.3％)用1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 282.2)表征。
于室温下向嘧啶酮5(506mg，1.80mmol)在二噁烷(30mL)中的溶液内添加氢化锂(17mg，2.16mmol)。所得的悬浮液在室温下搅拌15分钟，接着添加甲苯磺酸苄基酯(519mg，1.98mmol)。反应混合物在氮气氛和65℃下搅拌20小时。真空除去二噁烷，而残留物用乙酸乙酯(50mL)和蒸馏水(50mL)稀释。分离有机层，而含水层用额外的乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留的无定形固体通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。分离出纯的所希望的产物6(388mg，58.1％)，其为白色固体，并用1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 372.2)进行完全表征。
在0℃下向嘧啶酮6(388mg 1.04mmol)在二氯甲烷(15mL)中的溶液内添加三氟乙酸(15mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时，然后真空浓缩。残留物溶解在乙酸乙酯(25mL)中，并用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)中和。分离有机层，而含水层用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并浓缩，得到所希望的产物7(245mg，88.0％)，其为油状物，并用LC/MS分析(LRMS(MH)m/z 272.2)表征，而且未经进一步纯制即用于下一步中。
于室温下向嘧啶酮7(245mg，0.903mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液内顺序地添加醛8(188mg，1.084mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(230mg，1.084mmol)。所得的混合物在氮气氛下搅拌3小时，然后添加水(40mL)。分离有机层，而含水层用二氯甲烷(3×40mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留物通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，形成所希望的产物9(250mg，64.5％)，其为白色固体，并用1H NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 429.6)进行完全表征。
在0℃下向嘧啶酮9(250mg，0.583mmol)和二异丙基乙基胺(90mg，0.700mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液内添加对甲苯酰氯(108mg，0.700mmol)。所得溶液在氮气氛和室温下搅拌4小时，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)淬灭。分离有机层，而含水层用二氯甲烷(3×25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留物通过快速柱色谱进行纯制，其中使用有乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂，分离出纯产物10(191mg，60.0％)，其为无定形固体，并用1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 547.7)进行表征。
于室温下向嘧啶酮10(67mg，0.12mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液内添加三氟乙酸(10mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时，然后减压浓缩。残留物在高真空下搅拌，然后溶解在乙酸乙酯(25mL)中。用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)中和，而含水层用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留物通过快速柱色谱进行纯制(NH40H/MeOH/DCM 0.1∶1∶10作为洗脱剂)。分离出所希望的产物1(52mg，90.0％)，其为玻璃态固体，并用1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z 447.3)进行完全表征。
方法B 向装配有干冰回流冷凝器的3口500mL圆底烧瓶中添加β-酮基酰胺11(13.0g，68.0mmol)和二甲苯(200mL)。将该混合物加热至115℃，用氨气连续换气5小时，然后冷却至室温。浓缩所得的混合物，而残留的浅白色残留物在高真空下干燥12小时。1H-NMR表明该残留物包含88％所希望的产物12(11.4g)。该粗产物未经进一步纯制即用于下一步中。
在室温下向无水乙醇(50mL)中小心地添加金属钠(1.0g)，由此新制备乙醇钠。在250mL烧瓶中，于室温下向β-氨基酰胺12(813mg，4.27mmol)和酯4(1.258g，5.12mmol)的混合物内添加该乙醇钠在无水乙醇(50mL)中的溶液。将所得溶液加热至80℃，并在氮气氛下搅拌3小时。将该混合物冷却至室温，然后真空浓缩。残留物与蒸馏水(50mL)混和，用1M HCl水溶液中和，然后用乙酸乙酯(3×40mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并减压浓缩，而黄色的残留物通过快速柱色谱进行纯制，其中使用乙酸乙酯和己烷的混合物作为洗脱剂。分离所希望的产物6(10mg，1.0％)，并用1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 372.2)进行表征，而且发现与方法A得到的产物是相同的。
实施例2制备N-Boc-Val-脒 在0℃下向N-Boc-DL-Val-OH(化合物13，11.0g，50.0mmol)和N-甲基吗啉(7.5mL，70.0mmol)在无水四氢呋喃(300mL)中的溶液内添加氯甲酸异丁基酯(8.5mL，66.0mmol)。所得的混合物在室温下搅拌4小时。该烧瓶装配有干冰回流冷凝器，并用氨气连续换气2小时。所得的反应混合物在室温下搅拌过夜。蒸发掉大部分的溶剂后，残留物用饱和碳酸氢钠水溶液稀释，然后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并蒸发。残留物(10.8g)被证实是所希望的酰胺14，其中用1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 216.28)进行判断。对于随后的转化，酰胺14未进行纯制。
在室温下向酰胺14(1.2g，5.0mmol)在二噁烷(20mL)中的溶液内顺序地添加吡啶(1.0mL，12.5mmol)和三氟乙酸酐(1.41mL，10.0mmol)。所得溶液搅拌4小时，直至不存在起始物。反应用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，并用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。残留物通过快速色谱进行纯制(硅胶，己烷/乙酸乙酯)，得到化合物15(1.0g)，其通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 198.26)进行表征。
在室温下向腈15(14.0g，71.0mmol)和N-乙酰基半胱氨酸(230mg，1.4mmol)在乙二醇(200mL)中的溶液内添加固体乙酸铵(17.8g，231.0mmol)。所得溶液加热至l00℃48小时。真空蒸馏掉大部分的乙二醇。所得残留物溶解在饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中并用乙醚和己烷(3×50mL)的混合物萃取。含水相用氯化钠饱和并用四氢呋喃(4×100mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩，得到残留物16(4.5g)，测定其纯度足以用于随后的转化反应(1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z217.20))。
将腈15(1.0g，5.0mmol)放入100mL烧瓶中。将甲醇钠在甲醇中的溶液(20.0mL，10.0mmol，0.5M)添加至该烧瓶中。向所得的反应混合物中添加盐酸羟胺(690mg，10.0mmol)。反应混合物加热至50℃过夜。真空蒸发掉溶剂，并将残留物溶解在饱和的氯化钠溶液中，然后用四氢呋喃(3×50mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。化合物17(960mg)测定其纯度足以不用纯制即可用于随后的转化反应中(LC/MS(LRMS(MH)m/z 232.29))。
在室温下向中间体17(462mg，2.0mmol)在乙酸(5.0mL)中的溶液内添加乙酸酐(300uL，3.0mmol)和Pd/C(10重量％，65mg)。反应混合物在氢气氛下搅拌24小时，然后通过Celite进行过滤。Celite塞用另外的甲醇洗涤。蒸发溶剂后，残留物溶解在饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)中，然后用乙醚/己烷(3×10mL)的混合物萃取。含水相用氯化饱和并用四氢呋喃(4×50mL)萃取。合并的四氢呋喃层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。脒16(315mg)测定其纯度足以用于随后的转化反应(1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z 217.20))。
实施例3由N-Boc-Val-脒(4)制备嘧啶酮核 乙酸乙酯(1.11mL，11.34mmol)与甲醇钠混和(416mg；7.70mmol)，并且所得的悬浮液搅拌5分钟，然后冷却至10℃。随后滴加甲酸甲酯(250μL，4.05mmol)。所得的黄色糊状物在氮气氛和室温下搅拌16小时。所得的醛18未经进一步纯制即用于下一步中。
向醛18(523mg，4.05mmol)和未经纯制的脒16(872mg，4.05mmol)中添加甲醇钠在甲醇中的溶液(20mL，10.00mmol，0.5M)。所得溶液加热至60℃共30分钟。真空除去大部分的甲醇，而残留物用乙酸乙酯(20mL)和蒸馏水(20mL)稀释。各层分离，而含水层用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在硫酸钠上干燥并真空浓缩，得到棕色无定形固体。通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯和己烷)，形成所希望的嘧啶酮19，其为泡沫状白色固体(477mg)，通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MR)m/z267.32)进行表征。
向β-酮基酯20(238mg，1.65mmol)和粗脒16(355mg，1.65mmol)在甲醇中的溶液内添加甲醇钠在甲醇中的溶液(10mL，5.00mmol，0.5M)。所得溶液加热至60℃共30分钟。真空除去大部分的甲醇，而残留物用乙酸乙酯(20mL)和蒸馏水(20mL)稀释。各层分离，而含水层用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤，在硫酸钠上干燥并浓缩，得到棕色无定形固体。通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯和己烷)，形成所希望的嘧啶酮21，其为泡沫状白色固体(98mg)，并通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MR)m/z295.38)进行表征。
在室温下向脒16(3.17g，14.7mmol)和二异丙基乙基胺(2.56mL，14.7mmol)在无水乙醇(75mL)中的溶液内添加酯22(2.98g，14.7mmol)。所得的混合物加热至70℃共16小时。真空除去大部分的乙醇，而残留物用乙酸乙酯(50mL)和蒸馏水(50mL)稀释。各层分离，而含水层用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥并浓缩。真空蒸发溶剂后，残留的无定形黄色固体通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯和己烷)，产生所希望的嘧啶酮23(936mg)，其为白色固体，并通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z353.41)进行表征。
将氰基乙酸甲酯24(1.673g，16.88mmol)和原乙酸三乙基酯(3.424mL，18.57mmol)在乙酸酐(30mL)中的溶液加热至回流共3小时。所得溶液冷却至室温，然后真空除去大部分法乙酸酐。残留物放置3天，直至形成晶体。过滤分离晶体25，并直接用于接下来的转化反应中。
向酯25(51mg，0.28mmol)和脒16(20mg，0.90mmol)在甲醇中的溶液内添加甲醇钠在甲醇中的溶液(3mL，1.5mmol，0.5M)。所得溶液在60℃和氮气氛下搅拌30分钟。减压除去大部分的甲醇，而残留物用乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)稀释。各层分离，而含水层用萃取乙酸乙酯(3×50mL)。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留物通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯和己烷)，得到所希望的嘧啶酮26(27mg)，其通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z.306.36)进行表征。
在室温下向丙二酸二乙基酯(27，1.6mL，10.0mmol)和未纯制的脒16(2.5g，15mmol)在甲醇中的溶液内添加甲醇钠在甲醇中的溶液(35.0mL，17.5mmol，0.5M甲醇溶液)。所得溶液加热至60℃共4小时。反应混合物冷却至室温，并真空除去溶剂。所得的残留物溶解在蒸馏水(15mL)中，然后用氯化钠饱和。水溶液用四氢呋喃(3×100mL)萃取，而合并的有机层在硫酸钠上干燥。真空浓缩后，残留物28未经进一步纯制即用于下一步中。化合物28用LC/MS(LRMS(MH)m/z283.32)表征。
在0℃下向未经纯制的28(2.0g)在二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液内添加碳酸氢钠(4.0g)和硫酸二甲酯(0.8mL)。所得溶液在0℃下搅拌4小时，直至LC/MS分析表明单甲基化的29是主要产物。用水(100mL)淬灭反应，用二氯甲烷(3×60mL)和乙酸乙酯(3×60mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥。真空浓缩后，残留物通过快速色谱进行纯制(硅胶，二氯甲烷/甲醇)，得到所希望的嘧啶酮29(855mg)，其通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z297.35)进行表征。
在室温下向氰基乙酸甲酯(24，0.8mL，8.0mmol)和未纯制的脒16(2.0g，12mmol)在甲醇中的溶液内添加甲醇钠在甲醇中的溶液(30.0mL，15.0mmol，0.5M甲醇溶液)。所得溶液加热至60℃共4小时。使反应冷却至室温后，真空除去溶剂，并将残留物溶解在蒸馏水(15mL)中，然后用氯化钠饱和。水溶液用四氢呋喃(3×100mL)萃取，而合并的有机层在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，化合物30(1.4g)未经进一步纯制即用于下一步中。化合物30用LC/MS(LRMS(MH)m/z282.34)进行表征。
向未经纯制的胺30(400mg，1.42mmol)在四氢呋喃(60mL)中的0℃溶液内顺序地添加二异丙基乙基胺(1.0mL)和乙酰氯(0.24mL，2.82mmol)。所得溶液在0℃下搅拌6小时。反应用碳酸氢钠水溶液淬灭，然后用二氯甲烷(3×60mL)和乙酸乙酯(3×60mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留物通过快速色谱进行纯制(硅胶，二氯甲烷/甲醇)，得到所希望的嘧啶酮31(265mg)，其通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z324.38)进行表征。
实施例4 向嘧啶酮32(4.66g，16.6mmol)在四氯化碳(75mL)中的室温溶液内添加N-溴琥珀酰亚胺(2.95g，16.6mmol)。所得的混合物加热至85℃共1。反应混合物用水(50mL)淬灭，然后用二氯甲烷(3×25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，粗产物通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯和己烷)，得到溴化物33，其为白色固体(3.24g)，并通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z360.25)进行表征。
实施例5制备所希望的嘧啶酮化合物的总方法 向嘧啶酮21(670mg，2.27mmol)在二噁烷(30mL)中的室温溶液内添加氢化锂(23mg，2.27mmol)。所得的悬浮液放置15分钟。接着添加甲苯磺酸苄基酯(774mg，2.95mmol)，并在氮气氛下将反应混合物加热至60℃共16小时。减压除去大部分的二噁烷，而残留物用乙酸乙酯(50mL)和蒸馏水(50mL)稀释。分离各层，而含水层用乙酸乙酯(3×25mL)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，粗产物通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙醚和二氯甲烷)，产生所希望的产物34(686mg)，其为白色固体，并通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z385.50)进行表征。
向嘧啶酮34(99mg 0.26mmol)在二氯甲烷(5mL)中的0℃溶液内添加三氟乙酸(5mL)。所得溶液在室温下搅拌1小时。真空除去大部分的溶剂，残留物在高真空下干燥1小时。所得的物质用乙酸乙酯(50mL)稀释，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(25mL)洗涤。含水相用乙酸乙酯(3×25mL)萃取，而合并的有机层在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，胺35(65mg)未经进一步纯制即用于下一步中。化合物35通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z285.38)进行表征。
向胺35(744mg，2.61mmol)在二氯甲烷(25mL)中的室温溶液内顺序地添加三乙酰氧基硼氢化钠(718mg，3.39mmol)和醛36(587mg，3.39mmol)。所得的混合物在室温和氮气氛下搅拌3小时，直至不存在起始物。反应用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，而含水层用二氯甲烷(3×60mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。所得的残留物通过快速色谱进行纯制(硅胶，二氯甲烷/甲醇)，得到希望的产物37(1.038g)，其通过LC/MS(LRMS(MH)m/z442.59)进行表征。
向嘧啶酮37(1.038g，2.35mmol)在二氯甲烷(25mL)中的0℃溶液内顺序地添加二异丙基乙基胺(1.0mL)和对甲苯酰氯(434mg，2.81mmol)。所得溶液在室温和氮气氛下搅拌过夜。反应用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭，而所得的含水相用二氯甲烷(4×50mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，残留物通过快速柱色谱纯制(硅胶，二氯甲烷和甲醇)，得到产物38(943mg)，其通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z560.73)进行表征。
向嘧啶酮38(72mg，0.13mmol)在二氯甲烷(10mL)中的0℃溶液内添加三氟乙酸(10mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后真空浓缩。残留物在高真空下干燥1小时，然后溶解在乙酸乙酯(25mL)中。该混合物用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，而含水层用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩，残留物通过快速柱色谱纯制(硅胶，甲醇/二氯甲烷)，得到所希望的产物39(57mg)，其用1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z460.61)表征。
使用如上所述的方法制备以下化合物



实施例6 向嘧啶酮40(238mg.0.385mmol)在乙醇(3mL)中的室温溶液内添加浓氨水(5mL)。所得的混合物在室温下搅拌24小时。真空除去乙醇，而所剩的含水层用乙酸乙酯(3×10ml)萃取。合并的有机层用盐水洗涤并在硫酸钠上干燥。蒸发溶剂后，所得的无定形固体通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到41(135mg)，其为白色固体，并通过1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z589.73)进行表征。
向嘧啶酮41(76mg，0.128mmol)在吡啶(5mL)中的室温溶液内添加亚硫酰氯(200μL，1.03mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。真空除去溶剂，而残留物通过快速色谱纯制(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到腈42(46mg)，其为白色固体，并通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z571.71)进行表征。
向嘧啶酮42(46mg，0.08mmol)在二氯甲烷(5mL)中的0℃溶液内添加三氟乙酸(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后真空浓缩。残留物在高真空下干燥1小时，然后溶解在乙酸乙酯(25mL)中。所得溶液用饱和碳酸氢钠水溶液稀释，而含水层用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。通过快速柱色谱纯制(硅胶，甲醇/二氯甲烷)，形成所希望的产物43(27mg)，其通过1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z471.59)进行表征。
使用如上所述的方法制备以下化合物

实施例7 将嘧啶酮44(375mg，0.599mmol)、2-(二环己基膦基)联苯(4.0mg，0.012mmol)、乙酸钯(1.3mg，0.006mmol)、苯基硼酸(110mg，0.899mmol)、和氟化钾(104mg，1.798mmol)放入可重复密封的Schlenk管中。该管排空，并用氮气回填3次。通过注射器添加甲苯(3mL)，所得的混合物加热至80℃共72小时。反应混合物用乙醚(15ml)稀释，然后用氢氧化钾水溶液(20mL，1M)洗涤。含水层用乙醚(2×15mL)萃取，而合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。通过快速柱色谱纯制(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到所希望的产物45(160mg)，其用1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z622.80)进行完全表征。
在厚壁玻璃管中，向嘧啶酮44(750mg，1.20mmol)在无水乙醇(5mL)中的溶液内添加1，3-二(二苯基膦基)丙烷(124mg，0.30mmol)、三乙胺(1.673mL，12.0mmol)和乙酸钯(51mg，0.23mmol)。该管排空，并用氮气回填3次，然后用一氧化碳加压(30psi)。将混合物加热至70℃共48小时。蒸发除去乙醇，而残留物用乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)稀释。分离各层，而含水层用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。通过快速色谱纯制(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到46(357mg)，其通过1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z618.76)进行表征。
向酯46(382mg，0.617mmol)在四氢呋喃(10mL)和甲醇(5mL)中的室温溶液内添加氢氧化钾水溶液(2.5mL，1.0M)。所得的混合物加热至70℃共4小时。反应冷却至室温，然后真空除去溶剂。残留物用乙酸乙酯稀释，然后用盐酸水溶液(1.0M)进行酸化。含水层用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并浓缩。酸47(320mg)未经进一步纯制即用于下一步中。化合物47通过1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z590.71)进行表征。
向酸47(310mg，0.53mmol)在无水四氢呋喃(5mL)中的室温溶液内顺序地添加二异丙基乙基胺(274μL，1.58mmol)和氯甲酸异丁基酯(83μL，0.63mmol)。所得的混合物在室温和氮气氛下搅拌3小时。反应接着冷却至0℃，并用氨气换气45分钟。接着使混合物冷却至室温另外45分钟。真空除去溶剂，而残留物用乙酸乙酯(15mL)和水(15mL)稀释。分离各层，而含水层用萃取乙酸乙酯(2×15mL)。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。通过快速柱色谱纯制(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到产物48(156mg)，其通过1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z589.73)进行表征。
向嘧啶酮48(105mg，0.178mmol)在吡啶(10mL)中的室温溶液内添加亚硫酰氯(250μL，1.25mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时。真空除去溶剂，而残留物通过快速色谱进行纯制(硅胶，乙酸乙酯/己烷)，得到49(65mg)，其为玻璃态固体，并通过1H-NMR和LC/MS(LRMS(MH)m/z571.71)进行表征。
向嘧啶酮49(65mg，0.08mmol)在二氯甲烷(5mL)中的0℃溶液内添加三氟乙酸(5mL)。所得溶液在室温下搅拌2小时，然后真空浓缩。残留物在高真空下干燥1小时，然后溶解在乙酸乙酯(25mL)中。所得溶液用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，而含水层用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。合并的有机层在硫酸钠上干燥并真空浓缩。通过快速柱色谱纯制(硅胶，甲醇/二氯甲烷)，得到所希望的产物50(37mg)，其用1H-NMR和LC/MS分析(LRMS(MH)m/z471.59)进行完全表征。
使用如上所述的方法制备以下化合物


实施例8

条件a)iBuOCOCl，Et3N，THF；NH4OH；b)Et3O·PF6，CH2Cl2；R1PhCH2NH2，EtOH，60℃，24小时。
-氨基甲酸t-丁基酯a)Boc-D-缬氨酸酰胺在0℃和搅拌下向Boc-D-缬氨酸(25g，115mMol)在THF(300mL)中的溶液内添加N-甲基吗啉(15mL，136mMol)，然后在5分钟的时间内滴加氯甲酸异丁基酯(18mL，139mMol)。反应液在0℃下搅拌30分钟，然后在该反应中快速倾倒30重量％NH4OH溶液(50mL，385mMol)。(可看见剧烈的气泡形成，几分钟后停止)。使反应温热至室温，并搅拌4小时。在旋转转发器中真空浓缩反应液至沉淀出大部分产物的体积。稠的白色浆液用等体积的水稀释，过滤，用水洗涤，压缩干燥，然后真空干燥，得到标题化合物(22.56g，91％)，其为白色固体1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.17(br s，1H)，5.75(br s，1H)，5.12(d，1H).4.00(app.t，1H)，2.13(m，1H)，1.44(s，9H)，0.99(d，3H)，0.94(d，3H).
b)[(R)-1-(N-苄基-carbamimidoyl)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸t-丁基酯在搅拌下向Boc-D-缬氨酸酰胺(10g，46mMol)在CH2Cl2(200mL)中的溶液内添加三乙基硫氟磷酸氧鎓(13.0g，48mMol)。(反应由悬浮液开始，逐渐澄清)。反应液在室温下搅拌48小时，倾倒在分离漏斗中，用1N Na2CO3洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，然后真空浓缩。向残留的油中添加苄基胺(5.0mL，23mMol)和EtOH(20mL)。反应在60℃下搅拌24小时。冷却至室温后，反应真空蒸发。得到标题化合物(14.16g，＞95％纯，通过LCMS测定)，其为淡黄色油状物，并逐渐固化为蜡状固体MS(ES)m/e 306.4(M+H)+。
实施例9 条件a)原乙酸三乙基酯，HOAc，蒸馏；b)EtOH，回流，18小时。
-氨基甲酸-t-丁基酯a)乙基2-乙氧基亚乙基-氰基乙酸酯在装配有短径蒸馏头的250mL圆底烧瓶中，在搅拌下向氰基乙酸乙酯(46.8g，414mMol)和原乙酸三乙酯(84.4g，520mMol)中添加HOAc(1.2mL，21mMol)。反应缓慢加热至135℃，并维持在该温度以蒸馏掉所产生的乙醇(在约106℃时开始蒸馏)。以15分钟的间隔向反应中另外添加3次HOAc(1.2mL，21mMol)。反应缓慢加热至150℃，然后冷却至约80℃。在高真空(bp 128℃.，HV)下通过短径蒸馏得到标题产物(62.64g，82％)，其为淡黄色固体。(注意关闭向冷凝器的冷却，以避免堵塞)1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.27(q，2H)，4.22(q，2H)，2.61(s，3H)，1.43(t，3H)，1.31(t，3H).
b)[1-(3-苄基-5-氰基-6-甲基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸-t-丁基酯在搅拌下向[(R)-1-(N-苄基-carbamimidoyl)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸t-丁基酯(14.16g，46mMol)在EtOH(50mL)中的溶液内添加2-乙氧基亚乙基-氰基乙酸乙酯(8.4g，46mMol)。反应回流18小时，冷却至RT，然后真空浓缩。在硅胶上进行快速色谱纯制(5％EtOAc，CH2Cl2)，然后由乙酸乙酯、己烷和Et2O、石油醚中结晶，得到白色固体的标题化合物(8.03g，44％)MS(ES)m/e 397.2(M+H)+。
实施例10 条件a)亚乙基丙二酸二甲基酯，MeOH；b)NBS，cat.过氧化苯甲酰，K2CO3，CCl4回流1-苄基-2-(1-t-丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸甲基酯a)1-苄基-2-(1-t-丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙基)-4-甲基-6-氧代-1，4，5，6-四氢-嘧啶-5-羧酸甲基酯向[(R)-1-(N-苄基-carbamimidoyl)-2-甲基-丙基]-羧酸t-丁基酯(7.08g，23mMol)在MeOH(15mL)中的溶液内添加亚乙基丙二酸二甲基酯(3.64g，23mMol)。反应缓慢加热至110℃，以蒸馏掉甲醇。反应在110℃下搅拌5小时，然后冷却至RT。通过快速色谱纯制(25％ EtOAc，己烷)得到油状的标题化合物(6.37g，64％)非对映异构体的约(3∶1)混合物，用LCMS测定；MS(ES)m/e 432.2和432.4(M+H)+。
b)1-苄基-2-(1-t-丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸甲基酯在搅拌下向1-苄基-2-(1-t-丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙基)-4-甲基-6-氧代-1，4，5，6-四氢-嘧啶-5-羧酸甲基酯(6.37g，14.8mMol)在CCl4(150mL)中的溶液内添加K2CO3(4.0g，29mMol)、N-溴琥珀酰亚胺(2.63g，14.8mMol)和过氧化苯甲酰(0.18g，0.74mMol)。反应回流0.5h，冷却至RT，通过Celite垫过滤，并用CH2Cl2洗涤。真空浓缩滤液，并通过快速色谱纯制(梯度0-5％EtOAc，在CH2Cl2中)。由此得到的半纯制的产物放置在20％EtOAc的己烷(10mL)溶液中，此时产物开始结晶。混合物用10％Et2O在石油Et2O(50mL)中的溶液稀释，研磨，过滤，然后真空浓缩，得到白色固体的标题化合物(2.56g，40％MS(ES)m/e 432.2和430.2(M+H)+。
实施例11 条件a)2-氯羰基丙酸乙酯，Et3N，CH2Cl2；DMF 100℃ 18小时；b)NaH，DMF；PhN(Tf)2；Zn(CN)2，(PPh3)4Pd，DMF，90℃，4小时。
-氨基甲酸-t-丁基酯a)[1-(3-苄基-5-甲基-6-羟基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基-)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸-t-丁基酯在搅拌和0℃的冷却下向[(R)-1-(N-苄基-carbamimidoyl)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸t-丁基酯(16.37g，53.6mMol)在CH2Cl2(150mL)中的溶液内添加Et3N(9mL，64.3mMol)，然后在15分钟的时间内滴加2-氯羰基-丙酸乙基酯(10g，60.8mMol)。反应温热至室温并搅拌4小时，倾倒在分离漏斗中，用水、盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后真空蒸发至干。未经纯制的酰基脒(约90％纯度，由LCMS测定，MS(ES)m/e(M+H)+434.4)放入DMF(150mL)中，然后在搅拌下加热至100℃共18小时。反应真空浓缩并通过快速色谱纯制(90∶10∶1，CH2Cl2∶EtOAc∶HOAc)、然后(30∶70∶1，EtOAc∶己烷∶HOAc)，得到浅白色固体的标题化合物(8.42g，41％)MS(ES)m/e 388.2(M+H)+。
b)[1-(3-苄基-5-甲基-6-氰基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸-t-丁基酯在搅拌下向1-(3-苄基-5-甲基-6-羟基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸-t-丁基酯(8.42g，21.7mMol)在DMF(150mL)中的溶液内滴加60％的NaH矿物油分散体(0.95g，24mMol)。室温下搅拌15分钟后，添加N-苯基三氟甲烷磺酰亚胺(8.6g，24mMol)。反应在室温下搅拌18小时，真空浓缩，放入EtOAc中，用饱和氯化铵水溶液洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，然后真空蒸发。通过快速色谱纯制(梯度0-5％EtOAc在CH2Cl2中的溶液)、然后(10％EtOAc/己烷)，形成半纯制的三氟甲磺酸酯(11.70g)(MS(ES)m/e 520.2(M+H)+，由LCM测定包含23％的PhNHSO2CF3)，为白色固体。
在搅拌下向该粗的三氟甲磺酸酯在DMF(150mL)中的溶液内添加Zn(CN)2(2.6g，22.2mMol)和(PPh3)4Pd(2.6g，2.3mMol)。反应在氩气氛和90℃下加热4小时，冷却至RT，然后真空蒸发。通过快速色谱纯制(梯度0-5％EtOAc在CH2Cl2中的溶液)，得到白色固体的标题化合物(7.11g，82％)MS(ES)m/e 520.2(M+H)+。
实施例12 条件a)1N KOH，THF，MeOH，60℃；b)RR′NH，EDC，HOBt，TEA，CH2Cl2，室温，然后TFA。
2-{(R)-[(3-氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基-}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酰胺a)1-苄基-2-{(R)-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基}-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸向1-苄基-2-{(R)-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基}-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸甲基酯(2.75g，4.55mmol)在THF(60mL)中的溶液内添加MeOH(30mL)，然后再添加1N KOH(18.2mL，18.2mmol)。所得溶液加热至60℃共3小时，然后减压浓缩。残留物用H2O(75mL)稀释，用1N HCl调节至pH约为7，然后用EtOAc(3×75mL)萃取。萃取液在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩，得到2.69g(100％)的1-苄基-2-{(R)-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基-)-氨基]-甲基-丙基}-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸，其为油状物，而且未经纯制即用于随后的步骤中MS(ES)m/e 591.4(M+H)+。
b)2-{(R)-[(3-氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酰胺向1-苄基-2-{(R)-[(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基}-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸(100mg，0.169mmol)在CH2Cl2(1.7mL)中的溶液内添加EDC(36mg，0.186mmol)、HOBt(25mg，0.186mmol)、TEA(28uL，0.203mmol)、和乙胺(85uL，2.0M的THF溶液，0.169mmol)。反应混合物在室温下搅拌16小时，然后添加TFA(1mL)。3小时后，反应混合物减压浓缩，而残留物通过逆相HPLC纯制，得到47mg(53％)淡黄色固体的2-{(R)-[(3-氨基-丙基)-(1-p-甲苯酰基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基}-1-苄基-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酰胺MS(ES)m/e 518.4(M+H)+。
实施例13 条件a)乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯，MeOH；b)4M HCl/二噁烷，然后1M氢氧化钠水溶液；OHC(CH2)2NHBoc，NaB(OAc)3H，CH2Cl2；c)R7COCl，DIEA，CH2Cl2；d)4M KOH，EtOH/H2O；e)RR′NH2，EDC/HOBt，DMF；然后4M HCl/二噁烷。
2-{[(3-氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-甲基-丙基}-1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸苯基酰胺盐酸盐a)1-苄基-2-(1-叔丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙基)-6-氧代-1，-6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯根据Veale，J.Org.Chem.，58，4490(1993)中描述的方法，向[1-(N-苄基-carbamimidoyl)-2-甲基-丙基]-氨基甲酸叔丁基酯(10.86g，35.6mmol)在甲醇(160mL)中的溶液内添加乙氧基亚甲基丙二酸二乙酯(7.7g，35.6mmol)。反应器中装配Dean-Stark汽水阀。反应在100℃下加热至除去所有的溶剂。残留物溶解在二氯甲烷中，用1N HCl和水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后浓缩。所得的淡黄色浆液未经进一步纯制即用于下一步中。
b)1-苄基-2-[1-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基氨基)-2-甲基-丙基]-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯向1-苄基-2-(1-叔丁氧基羰基氨基-2-甲基-丙基)-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯(14.22g，由前一步制得)中添加4M HCl在1，4-二噁烷(50mL，200mmol)中的溶液，溶液然后在室温下搅拌2.0小时。真空浓缩反应，并将残留物溶解在水中，然后用乙醚洗涤。含水层用1N NaOH进行酸化，然后萃取至醚中。醚层用水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到晶体状的橙色固体。该固体(7.08g，21.5mmol)溶解在无水CH2Cl2(100mL)中，然后向其中添加(3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁基酯(3.076g，17.76mmol)无水CH2Cl2(50mL)中的溶液，然后分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(5.65g，26.64mmol)。反应在室温和氮气氛下搅拌72小时，此时反应用饱和碳酸氢钠调节为碱性。分离各层，含水层用二氯甲烷萃取，合并的有机相用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发至干。残留物在硅胶上通过快速色谱进行纯制(1∶1己烷∶EtOAc)，得到淡黄色泡沫状的标题化合物(5.59g 32％，3步).MS(ES+)m/e 487[M+H]+。
c)1-苄基-2-{[3-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基}-甲基丙基}-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯使1-苄基-2-[1-(3-叔丁氧基羰基氨基-丙基氨基)-2-甲基-丙基]-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯(1.45g，2.98mmol)、N，N-二异丙基乙基胺(1.93g，14.91mmol)、p-甲苯酰氯(1.38g，8.95mmol)在CH2Cl2(30mL)中于室温下搅拌24小时。反应用1N HCl和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发至干。残留物通过快速色谱进行纯制(2∶1己烷∶EtOAc)，得到白色固体的标题化合物(1.22g，68％)。MS(ES+)m/e 605[M+H]+。
d)1-苄基-2-{[3-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基}-甲基丙基}-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸向1-苄基-2-{[3-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基}-甲酰基}-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙基酯(1.22g，2.02mmol)在EtOH(18mL)中的溶液内添加氢氧化钾(0.453g，8.068mmol)在水(2mL)中的溶液，反应在室温下搅拌24小时。真空浓缩反应，而残留物溶解在水中，并用1N HCl酸化至pH＝2。将所得的沉淀物溶解在EtOAc中，用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到白色固体的标题化合物(1.124g，96％)。MS(ES+)m/e 577[M+H]+。
e)2-{[(3-氨基-丙基)-(1-p-甲苯基-甲酰基)-甲基-丙基]-1-苄基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸苯基酰胺盐酸盐向1-苄基-2-{[3-叔丁氧基羰基氨基-丙基]-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基}-甲基丙基}-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-5-羧酸(0.171g，0.297mmol)在DMF(3mL)中的溶液内添加EDCI(0.0568g，0.297mmol)、HOBt单水合物(0.04g，0.297mmol)、和苯胺(0.0276g，0.297mmol)，反应然后在室温下搅拌24小时。反应用水淬灭，萃取至CH2Cl2中，干燥(Na2SO4)并浓缩。所得的残留物与过滤的4M HCl在二噁烷中于室温下一起搅拌2小时。反应真空浓缩，用乙醚研磨，然后过滤，得到棕色固体的标题化合物(0.086g，50％，2步)。MS(ES+)m/e 552[M+H]+。
实施例14 条件a)H2，10％Pd/C，HOAc；Ac2O，Et3N，CH2Cl2；b)4N HCl，二噁烷N-{1-[5-(乙酰基氨基-甲基)-3-苄基-6-甲基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺HCl盐a){1-[{1-[5-(乙酰基氨基-甲基)-3-苄基-6-甲基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-丙基}-羧酸叔丁基酯在搅拌下向{1-[{1-[5-氰基-3-苄基-6-甲基-4-氧代-3，-4-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-丙基}-氨基甲酸叔丁基酯(350mg，0.6mMol)在HOAc(10mL)中的溶液内小心地添加10％Pd/C(150mg)。反应在氢气球中于室温下氢化18小时，由Celite垫上过滤，用HOAc洗涤，然后真空蒸发。在搅拌下向粗胺(约34％纯，通过LCMS测定，MS(ES)m/e 576.4(M+H)+)在CH2Cl2(10mL)中的溶液内添加Et3N(280uL，2mMol)和Ac2O(114uL，1.2mMol)。在室温下搅拌2小时后，反应真空浓缩，放入EtOAc中，用1N Na2CO3、1N HCl、盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发。通过快速色谱纯制(80％EtOAc/己烷)，得到浅白色固体的标题化合物(0.10g，27％)MS(ES)m/e 618.4(M+H)+。
b)N-{1-[5-(乙酰基氨基-甲基)-3-苄基-6-甲基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-N-(3-氨基-丙基)-4-甲基-苯甲酰胺HCl盐向{1-[{1-[5-(乙酰基氨基-甲基)-3-苄基-6-甲基-4-氧代-3，4-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-(1-p-甲苯基-甲酰基)-氨基]-丙基}-羧酸叔丁基酯(0.10g，0.16mMol)中添加4N HCl在二噁烷(20mL)中的溶液。反应在室温下搅拌1小时，然后真空蒸发。用Et2O研磨，过滤并真空干燥，得到浅白色固体的标题化合物(54mg，61％)MS(ES)m/e 518.6(M+H)+。
实施例15 条件a)Na2CO3，PdCl2(PPh3)2，MeCN-H2O，微波，5min。
N-(3-氨基-丙基)-N-{(R)-1-[1-苄基-5-(3-氯-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺a)N-(3-氨基-丙基)-N-{(R)-1-[1-苄基-5-(3-氯-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺在10-mL Smith微波反应瓶中放入N-(3-氨基-丙基)-N-[(R)-1-(1-苄基-5-溴-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺(50mg，0.095mmol)、3-氯硼酸(14.9mg，0.095mmol)、Na2CO3(20.1mg，0.190mmol)、PdCl2(PPh3)2(3.3mg，0.005mmol)、然后MeCN-H2O(1∶1，0.4mL)。该混合物用氩气换气，密封，然后在150℃下用微波反应器处理5分钟。残留物通过反相HPLC纯制，得到27.5mg(51％)黄色固体的N-(3-氨基-丙基)-N-{(R)-1-[1-苄基-5-(3-氯-苯基)-4-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基-苯甲酰胺MS(ES)m/e 557.4(M+H)+。
实施例16 条件a)1H-吡唑-1-酰胺脒盐酸盐，DIEPA，DMF，rt。
N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2--甲基-丙基]-N-(2-胍基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺向N-[1-(1-苄基-4-氰基-5-甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-(2-氨基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺(75mg，0.16mMol)在DMF(1.5mL)中的溶液内添加1H-吡唑-1-酰胺脒盐酸盐(25mg，0.17mMol)和二异丙基乙基胺(57μL，0.33mMol)。反应在室温下搅拌16小时，用水(2mL)淬灭，然后用二氯甲烷(2mL)稀释。含水层调节至pH7，然后用二氯甲烷(2×5mL)萃取。合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。用反相HPLC纯制残留物，得到白色粉末状的标题化合物(38mg，37％)MS(ES)m/e500.4(M+H)+。
实施例17 条件a)R7COCl，三乙胺，二氯甲烷，室温；b)C4H8NCH2CH2Cl，氢化钠，N，N-二甲基甲酰胺，室温。
N-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2--甲基-丙基]-4-甲基-N-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-苯甲酰胺a)N-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基-)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺向2-((R)-1-氨基-2-甲基-丙基)-3-苄基-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮(50mg，0.175mMol)和三乙胺(49μL，0.350mMol)在CH2Cl2中的溶液内添加4-甲基-苯甲酰氯(21μL，0.157mMol)。反应在室温下搅拌48小时，用水淬灭，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发，得到无色油状的标题化合物(50mg，72％)。MS(ES)m/e 404.2(M+H)+。
b)N-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基-)-2-甲基-丙基]-4-甲基-N-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-苯甲酰胺向N-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-4-甲基-苯甲酰胺(50mg，0.123Mmol)在DMF中的溶液内添加氢化钠(5mg，0.147Mmol)。反应在室温下搅拌15小时，然后添加1-(2-氯-乙基)-吡咯烷(20mg，0.135mmol)(Tilford等人；J.Am.Chem.Soc.；70；1948；4001)。反应在室温下搅拌24小时，用水淬灭，然后用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。合并的有机层用水(1×20ml)、盐水(1×20mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发，产生无色油状的标题化合物(30mg，49％)MS(ES)m/e 501.4(M+H)+。
实施例18 条件a)NaBH(AcO)3，AcOH，DCE，rt；b)R9COCl，DIEPA，甲苯，100℃；c)肼，EtOH，70℃3-苄基-5，6-二甲基-2-[(R)-2-甲基-1-(2-p-甲苯基-4，5-二氢-咪唑-1-基)-丙基]-3H-嘧啶-4-酮a)2-{2-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-乙基}-异吲哚-1，3-二酮将2-((R)-1-氨基-2-甲基-丙基)-3-苄基-5，6-二甲基-3-H-嘧啶-4-酮(0.500g，1.75mMol)和2H-异吲哚-2-乙醛[2913-97-5](0.661g 3.50mMol)溶解在二氯乙烷(20mL)中。添加冰乙酸(0.400mL，0.70mMol)，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.942g，4.40mMol)。在室温和氮气氛下搅拌反应3.5小时。反应用NaHCO3(饱和水溶液)淬灭，然后用EtOAc(3×)萃取。有机层在减压下蒸发，并通过快速色谱纯制(EtOAc/己烷50-95％梯度)，得到标题化合物420mg(0.92mMol)MS(ES)m/e 459(M+H)+。
b)N-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-[2-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基-乙基)-4-甲基-苯甲酰胺将p-甲苯酰氯(0.033mL，0.25mMol)溶解在甲苯(2mL)中，然后用DIPEA(0.093mL，0.53mMol)、接着2-{2-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-乙基}-异吲哚-1，3-二酮(0.100g，0.22mMol)处理。反应在110℃下搅拌3小时。将反应冷却至室温，减压蒸发，然后通过快速色谱纯制(EtOAc/己烷0-55％梯度)，得到标题化合物0.075g(0.13mMol)MS(ES)m/e 577(M+H)+。
c)3-苄基-5，6-二甲基-2-[(R)-2-甲基-1-(2-p-甲苯基-4，5-二氢-咪唑-1-基)-丙基]-3H-嘧啶-4-酮邻苯酰亚胺保护的胺，N-[(R)-1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-[2-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-乙基]-4-甲基-苯甲酰胺(0.075g，0.13mMol)用单水合肼(0.013mL，0.26mMol)在乙醇(1mL)中于70℃下处理12小时。反应过滤，减压浓缩，然后溶解在甲苯(1mL)中，并加热至120℃共20小时。真空浓缩反应，放入CH3CN中，并通过反相HPLC(YMC，ODS-A，20min，5-90％梯度，CH3CN∶H2O，0.1％TFA)纯制。收集各部分并蒸发，得到澄清油状的标题化合物(0.016g)MS(ES)m/e 429.4(M+H)+。
实施例19 条件a)DIPEA，DMF，rt；b)R9COCl，Et3N，CH2Cl2，rt；c)NH4OAc，AcOH，回流；d)肼，EtOH，rt。
2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-p-甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-苄基-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮a)2-{4-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)--2-甲基-丙基氨基]-3-氧代-丁基}-异吲哚-1，3-二酮向2-(1-氨基-2-甲基-丙基)-3-苄基-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮(0.66g，2.33mmol)在DMF(15mL)中的溶液内添加2-(4-溴-3-氧代-丁基)-异吲哚-1，3-二酮(0.69g，2.33mmol，如WO 89/10360中所述进行制备)和N，N-二异丙基乙基胺(0.301g，2.33mmol)。反应在室温下搅拌16小时，真空浓缩，溶解在EtOAc/H2O中，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后蒸发，得到白色泡沫状的标题化合物(1.04g，89％)。MS(ES+)m/e 501[M+H]+。
b)N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-[4-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-2-氧代-丁基]-4-甲基-苯甲酰胺向2-{4-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基氨基]-3-氧代-丁基}-异吲哚-1，3-二酮(1.024g，2.046mmol)在CH2Cl2(14mL)中的溶液内添加三乙胺(0.31g，3.069mmol)和p-甲苯酰氯(0.474g，3.069mmol)。反应在室温下搅拌16小时，用水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后蒸发至干。残留物在硅胶上通过快速色谱进行纯制(1∶1己烷∶EtOAc)，得到白色泡沫状的标题化合物(0.885g，70％)。MS(ES+)m/e 619[M+H]+。
c)2-(2-{1-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-2-p-甲苯基-1H-咪唑-4-基}-乙基)-异吲哚-1，3-二酮向N-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-N-[4-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-2-氧代-丁基]-4-甲基-苯甲酰胺(0.884g，1.62mmol)在冰乙酸(15mL)中的混合物内添加乙酸铵(6.22g，80.8mmol)，然后反应加热至回流16小时。反应真空浓缩，而残留物用饱和碳酸氢钠水溶液碱化，萃取至EtOAc中，用水和盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，然后蒸发至干。残留物在硅胶上通过快速色谱进行纯制(3∶1EtOAc∶己烷)，得到淡黄色泡沫状的标题化合物(0.371g，38％)。MS(ES+)m/c 600[M+H]+。
d)2-{1-[4-(2-氨基-乙基)-2-p-甲苯基-咪唑-1-基]-2-甲基-丙基}-3-苄基-5，6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮向2-(2-{1-[1-(1-苄基-4，5-二甲基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基)-2-甲基-丙基]-2-p-甲苯基-1H-咪唑-4-基}-乙基)-异吲哚-1，3-二酮(0.371g，0.619mmol)在EtOH(14mL)中的溶液内添加单水合肼(0.138g，2.48mmol)，然后反应在室温下搅拌72小时。反应过滤，而滤液浓缩至干。残留物在硅胶上通过快速色谱进行纯制(90∶9∶1 CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH)，得到白色固体的标题化合物(0.209g，72％)。MS(ES)+m/e 470[M+H]+。
实施例20 条件a)RR′NH，叔丁基钠，Pd2dba3，(S)-BINAP，CH3CN，90℃N-(3-氨基-丙基)-N-{(R)-1-[1-苄基-4-甲基-6-氧代-5-苯基氨基-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基苯甲酰胺向N-(3-氨基-丙基)-N-{(R)-1-[1-苄基-5-Br-4-基-6-氧代-1，6-二氢-嘧啶-2-基]-2-甲基-丙基}-4-甲基苯甲酰胺(0.060g，0.1mMol)在甲苯(0.30mL)中的溶液内添加苯胺(0.011mL，0.12mMol)、NaO-tBu(0.013g，0.14mmol)、Pd2DBA(0.003g，0.0003mmol)、和(S)-BINAP(0.005g，0.0008mmol)。反应在90℃下搅拌72小时，真空浓缩，放入CH3CN中，然后通过反相HPLC(YMC，ODS-A，20min，5-90％梯度，CH3CN∶H2O，0.1％TFA)纯制。收集各部分并蒸发，然后用4N HCl/二噁烷处理1小时，接着通过反相HPLC(YMC，ODS-A，20min，5-90％梯度，CH3CN∶H2O，0.1％TFA)纯制，并蒸发，得到澄清半固体状的标题化合物(0.008g)MS(ES)m/e 538(M+H)+。
实施例21按照上述方法制备以下化合物













实施例22用KSP抑制剂处理的肿瘤细胞系的细胞存活率的抑制原料和溶液·细胞SKOV3，卵巢癌(人)·培养基无酚红RPMI+5％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺·用于测定细胞存活率的比色剂Promega MTS四唑鎓化合物·用于最大细胞杀伤的对照化合物Topotecan，1μM方法第1天-细胞铺板用10mL的PBS洗涤粘附的SKOV3细胞，然后加入2mL 0.25％胰蛋白酶，并在37℃下温育5分钟。用8mL培养基(无酚红RPMI+5％FBS)从烧瓶中冲洗细胞，然后转移至新的烧瓶中。用Coulter计数器测定细胞浓度，并计算获得1000个细胞/100μL的合适细胞体积。将100μL培养基细胞悬浮液(调节至1000细胞/100μL)加入96孔平板的所有孔中，然后在37℃、100％湿度、以及5％CO2下温育18-24小时，使细胞粘附在平板上。
方法第2天-化合物加入向一排孔至经过高压灭菌的测定储备液中以400×最大目标浓度的量加入最初2.5μL的测试化合物。将1.25μL 400×(400μM)Topotecan加入其它孔中(用这些孔的光密度减去死亡细胞和载体的背景吸光度)。将不含DMSO的500μL培养基加入含有测试化合物的孔中，并将250μL加入Topotecan孔中。将250μL培养基+0.5％DMSO加入其余的孔中，对孔中的测试化合物进行系列稀释。将来自测定储备液的含化合物的培养基成行平板复制(平行两份)至对应的细胞平板。将细胞平板于37℃、100％湿度和5％CO2下温育72小时。
方法第4天-MTS加入和OD读数从培养箱中取出平板，并在每个孔中加入40μL的MTS/PMS。平板在37℃、100％湿度、5％CO2的条件下下温育120分钟，然后在5秒的振荡循环之后于96孔分光光度计中读取490nm处的OD值。
数据分析计算对照的归一化的％(吸光度-背景)，并用XLfit作出剂量-应答曲线，由该曲线测定抑制存活率50％时所需的化合物的浓度。在通过上述方法测试时，本发明的化合物表现出活性。
实施例23对映体分离通常情况下，通过选择合适R-或S-构型的起始氨基酸，如上所述的方法可用于制备基本上纯或者富集R-或S-对映体。本发明更优选的化合物是那些在连接R2的立体中心处为R-构型的化合物。R∶S混合物可通过本领域技术人员已知的方法分离为组成的纯的对映体。这些方法包括形成并分离非对映异构体衍生物，如那些通过与任选纯的酸如二苯甲酰基酒石酸而形成的衍生物。或者，例如使用以下条件通过手性色谱法实现分离柱Chiralcel OD 20×250mm样品加样约100mg mL-1，在1∶2乙醇∶己烷中，包含0.01％色谱条件用包含0.01％异丙胺的1∶2乙醇∶己烷进行等度洗脱，流速为15mL min-1；在254nm处进行UV检测。
例如，通过手性色谱法，使用以下条件将富集的3∶1 R∶S对映体混合物分离成其纯的对映体Chiralpak AD，250×4.6mm(Diacel Inc.)。样品-22.5mg/ml，在1∶1 i-PrOH∶己烷中。条件-用在己烷中的恒溶剂50％i-PrOH洗脱40分钟，在18.35分钟时洗脱(S)-对映体，而在26.87分钟时洗脱(R)-对映体。(R)-对映体明显比(S)-对映体更有效。
实施例24应用KSP抑制剂后的单极纺锤体形成将人肿瘤细胞Skov-3(卵巢)以每孔4,000个细胞的密度放入96孔板中，使它们粘附24小时，然后用各种浓度的嘧啶酮衍生物处理24小时。细胞固定在4％甲醛中，并用抗微管蛋白抗体(随后使用荧光标记的辅助抗体识别)和Hoechst染料(其染色DNA)进行染色。
肉眼检查表明化合物使细胞周期停止在有丝分裂的前中期。DNA缩合，并且开始形成纺锤体，但休止的细胞均匀地表现为单极纺锤体，这表明抑制了纺锤极体的分离。微量注射抗KSP抗体也使有丝分裂停止，而且休止的细胞也表现单极纺锤体。
实施例25在用KSP抑制剂处理的肿瘤细胞系中抑制细胞增殖以1000-2500个细胞/孔的密度将细胞放入96孔板的孔中，然后使它们粘附/生长24小时。然后用多种浓度的药物对它们处理48小时。添加化合物时的时间作为T0。使用试剂3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓(MTS)的基于四唑鎓的测定(专利号5,185,450)(参见Promega产品目录#G3580，CellTiter96AQueousOneSolution Cell Proliferation Assay)，被用于测定T0时的细胞存活数量以及接触化合物48小时后存活细胞的数量。48小时后存活的细胞数量与添加药物时的存活细胞数量相比较，以计算生长抑制作用。
在仅用载体(0.25％DMSO)处理的对照孔中细胞在48小时后的生长被认为是100％的生长，而添加化合物的孔中的细胞生长与其进行比较。
GI50是通过化合物的浓度(μM)对处理孔中细胞生长的百分比作图而计算的。对于化合物计算的GI50是与对照组相比50％抑制生长时的估计浓度，即、以下等式表示的时间的浓度100×[(处理48-T0)/(对照48-T0)]＝50其中处理48是48小时时处理细胞的值，而对照48是48小时时对照细胞的值。
所有的化合物浓度测试双份，而对照是12个孔的平均值。NationalCancer Institute使用了非常类似的96孔板方案和GI50计算方法(参见Monks等人，J.Natl.Cancer Inst.83757-766(1991))。但是，National CancerInstitute用于定量细胞数目的方法不是使用MTS，而是使用另外的方法。
以上实施例1-13的化合物都抑制人卵巢肿瘤细胞系(SKOV-3)中的细胞增殖。
实施例26IC50的计算本发明化合物对KSP活性的IC50值是使用ATP酶实验来测定的。使用以下的溶液溶液1由3mM的磷烯酸醇丙酮酸钾盐(Sigma P-7127)、2mM的ATP(Sigma A-3377)、1mM的IDTT(Sigma D-9779)、5μM的紫杉醇(Sigma T-7402)、10ppm的消泡289(Sigma A-8436)、25mM的Pipes/KOH pH6.8(Sigma P6757)、2mM的氯化镁(VWRJT400301)、以及1mM的EGTA(Sigma E3889)组成。溶液2由1mM的NADH(Sigma N8129)、0.2mg/ml的BSA(Sigma A7906)、丙酮酸激酶7U/ml、L-乳酸脱氢酶10U/ml(Sigma P0294)、100nM的KSP运动域、50μg/ml的微管、1mM的DTT(Sigma D9779)、5μM的紫杉醇(Sigma T-7402)、10ppm的消泡289(Sigma A-8436)、25mM的Pipes/KOH pH6.8(Sigma P6757)、2mM的氯化镁(VWR JT4003-01)、以及1mM的EGTA(Sigma E3889)组成。使用溶液1在96孔板(CorningCostar3695)上制备化合物的系列稀释液(8-12个2倍稀释液)。在系列稀释后，每个孔有50μl的溶液1。在每个孔中添加50μl的溶液2，由此使反应开始。这可通过手工使用多通道移液管或者用自动液体处理装置来实现。微量滴定板转移至微板吸光度读数器中，并以动态读取每个孔在340nm处的多个吸光度读数。所观察到的变化速率与ATP酶成正比，并绘制其随化合物浓度变化的图。对于标准IC50测定，所需要的数据是通过以下4个参数的等式使用非线性拟合程序(如Grafit4)进行拟合 其中y是观察到的速率，而x是化合物浓度。
权利要求
1.具有以下结构的化合物 其中R1选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R2和R2′独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；或者R2和R2′一起形成任选取代的3-7元环；R4和R5独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、卤素、羟基、硝基、氰基、二烷基氨基、烷基磺酰基、烷基氨磺酰基、烷基硫烷基、羧基烷基、酰胺基、氨基羰基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、和任选取代的杂芳基；或者R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的5、6或7元脂族碳环；R3选自任选取代的咪唑基、任选取代的咪唑啉基、-NHR6、-N(R6)(COR7)、-N(R6)(SO2R7a)、以及-N(R6)(CH2R7b)；R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、R8O-以及R14-NH-；R7a选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳烷基、以及R14-NH-；R7b选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂环基、以及任选取代的杂芳烷基；R8选自于任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、以及任选取代的杂芳烷基；R14是氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、或任选取代的杂芳烷基，包括单个立体异构体以及立体异构体的混合物；式I化合物的药物学上可接受的盐；式I化合物的药物学上可接受的溶剂化物；或者式I化合物的药物学上可接受的盐的药物学上可接受的溶剂化物。
2.如权利要求1所述的化合物，其中R1选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基-C1-C4烷基、和任选取代的杂芳基-C1-C4烷基。
3.如权利要求2所述的化合物，其中R1选自于氢、任选取代的C1-C4烷基、任选取代的苯基-C1-C4烷基、任选取代的萘基甲基、任选取代的苯基、和萘基。
4.如权利要求3所述的化合物，其中R1是任选取代的苯基-C1-C4烷基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷基、或萘基甲基。
5.如权利要求4所述的化合物，其中R1是萘基、苯基、溴苯基、氯苯基、甲氧基苯基、乙氧基苯基、甲苯基、二甲基苯基、氯氟苯基、甲基氯苯基、乙基苯基、苯乙基、苄基、氯苄基、甲基苄基、甲氧基苄基、氰基苄基、羟基苄基、二氯苄基、二甲氧基苄基、或萘基甲基。
6.如权利要求1所述的化合物，其中R2和R2′独立地选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的烷氧基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、和任选取代的杂芳烷基；或者R2和R2′一起形成任选取代的3-7元环。
7.如权利要求6所述的化合物，其中R2是任选取代的C1-C4烷基，而R2′是氢或任选取代的C1-C4烷基。
8.如权利要求7所述的化合物，其中R2′是氢，而R2是任选取代的C1-C4烷基。
9.如权利要求8所述的化合物，其中R2选自于甲基、乙基、丙基、丁基、甲硫基乙基、甲硫基甲基、氨基丁基、(CBZ)氨基丁基、环己基甲基、苄基氧基甲基、甲基硫烷基乙基、甲基硫烷基甲基、和羟甲基，而R2′是氢。
10.如权利要求9所述的化合物，其中R2′是氢而R2是乙基或丙基。
11.如权利要求10所述的化合物，其中R2为i-丙基。
12.如权利要求1所述的化合物，其中如果R2或R2′是氢，则另一个不是氢。
13.如权利要求1所述的化合物，其中R2和R2′都是氢。
14.如权利要求1所述的化合物，其中R4是氢；酰基；烷氧基；氰基；羧基，酰胺基；氨基羰基；低级烷基；被以下一个或者多个取代基取代的低级烷基卤素、低级烷氧基、或羟基；苯基；或被以下一个或者多个取代基取代的苯基卤素、低级烷氧基、或羟基。
15.如权利要求14所述的化合物，其中R4是氢、氰基、或被以下一个或者多个取代基取代的甲基卤素、低级烷氧基、或羟基。
16.如权利要求1所述的化合物，其中R5是氢；酰基、羧基；酰胺基，氰基；低级烷基；卤素；苄基；胡椒基；萘基；呋喃基；噻吩基；吲哚基；吗啉基；苯基；苯并间二氧杂环戊烯基；或被一个或者多个以下取代基取代的苯基任选取代的氨基、二烷基氨基、酰基氨基、氰基、卤素、任选取代的低级烷基、任选取代的低级烷氧基、任选取代的低级烷基硫烷基、羟基或硫基。
17.如权利要求16所述的化合物，其中R5是甲基、乙基、溴、羧基、氰基、苯基、卤代苯基、低级烷基苯基、三氟甲基苯基、低级烷氧基苯基、二(低级烷氧基)苯基、多卤代苯基、卤代低级烷基苯基、呋喃基、噻吩基、低级烷基硫烷基苯基、苯硫基、氨基苯基、氨基羰基苯基、氰基苯基、二(低级烷基)氨基苯基、二(低级烷基)苯基、乙酰基氨基苯基、氨基取代的低级烷基苯基、羟基取代的低级烷基苯基、胡椒基、萘基、氨甲酰基、低级烷基氨甲酰基、苄基氨甲酰基、苯基氨甲酰基、甲氧基甲基氨甲酰基、甲氧基乙基氨甲酰基、羟基甲基氨甲酰基、羟基乙基氨甲酰基、吲哚基、草酰基、吗啉基、氰基、羧基、和吗啉基羰基。
18.如权利要求17所述的化合物，其中R5是氢、甲基或氰基。
19.如权利要求1所述的化合物，其中R4和R5与它们所连接的碳原子一起形成任选取代的5、6或7元脂族碳环。
20.如权利要求1所述的化合物，其中当R3是任选取代的咪唑基时，R3具有以下式 其中R9选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基-C1-C4烷基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷基、任选取代的芳基-C1-C4烷氧基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷氧基、和任选取代的杂芳基；以及R10和R11独立地是氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、或任选取代的芳基-C1-C4烷基。
21.如权利要求20所述的化合物，其中R9是被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯基，苯基，苄基，苯硫基，或被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯硫基。
22.如权利要求21所述的化合物，其中R9是被一个或者多个卤素和/或甲基取代的苯基。
23.如权利要求20所述的化合物，其中R11是氢而R10是取代的C1-C4烷基。
24.如权利要求23所述的化合物，其中R11是氢而R10是氨基甲基、氨基乙基、氨基丙基、乙酰基氨基-甲基、乙酰基氨基乙基、苄基氧基羰基氨基-甲基或苄基氧基羰基氨基-乙基。
25.如权利要求1所述的化合物，其中R3是咪唑啉并具有以下式 其中，R9选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳基-C1-C4烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的杂芳基-C1-C4烷基；以及R12、R12′、R13、和R13′独立地选自于氢、任选取代的C1-C8烷基、任选取代的芳基、和任选取代的芳基-C1-C4烷基。
26.如权利要求25所述的化合物，其中R9是亚甲二氧基苯基；被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/或卤素取代的苯基；苯基；苄基；苯硫基；或被C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、和/卤素取代的苯硫基。
27.如权利要求26所述的化合物，其中R9是亚甲二氧基苯基、苯基、甲苯基、甲氧基苯基、或卤代甲基苯基。
28.如权利要求25所述的化合物，其中R12、R12′、R13、和R13′独立地是氢或任选取代的C1-C4烷基。
29.如权利要求28所述的化合物，其中R13′和R13都是氢。
30.如权利要求1所述的化合物，其中R3是-NHR6、-NR6(COR7)或-NR6(CH2R7b)，而R6选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、以及任选取代的杂环基。
31.如权利要求30所述的化合物，其中R6是R16-亚烷基，而R16选自于烷氧基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、羟基、和N-杂环基。
32.如权利要求30所述的化合物，其中R6选自于任选取代的低级烷基、任选取代的环己基；被羟基、低级烷氧基或低级烷基取代的苯基；苄基；杂芳基甲基；杂芳基乙基；和杂芳基丙基。
33.如权利要求32所述的化合物，其中R6选自于甲基、乙基、丙基、丁基、环己基、羧基乙基、羧基甲基、甲氧基乙基、羟基乙基、羟基丙基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基丙基、二乙基氨基乙基、二乙基氨基丙基、氨基丙基、甲基氨基丙基、2，2二甲基-3-(二甲基氨基)丙基、1-环己基-4-(二乙基氨基)丁基、氨基乙基、氨基丁基、氨基戊基、氨基己基、氨基乙氧基乙基、异丙基氨基丙基、二异丙基氨基乙基、1-甲基-4-(二乙基氨基)丁基、(t-Boc)氨基丙基、羟基苯基、苄基、甲氧基苯基、甲基甲氧基苯基、二甲基苯基、甲苯基、乙基苯基、(氧代吡咯烷基)丙基、(甲氧基羰基)乙基、苄基哌啶基、吡啶基乙基、吡啶基甲基、吗啉基乙基吗啉基丙基、哌啶基、氮杂环丁烷基甲基、氮杂环丁烷基乙基、氮杂环丁烷基丙基、吡咯烷基甲基、吡咯烷基乙基、吡咯烷基丙基、哌啶基甲基、哌啶基乙基、咪唑基丙基、咪唑基乙基、(乙基吡咯烷基)甲基、(甲基吡咯烷基)乙基、(甲基哌啶基)丙基、(甲基哌嗪基)丙基、胍基-乙基、胍基-丙基、呋喃基甲基和吲哚基乙基。
34.如权利要求1所述的化合物，其中R3是-NR6(COR7)，而R7选自于氢、任选取代的烷基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基、R8O-和R14-NH-，其中R8选自于任选取代的烷基和任选取代的芳基，而R14选自于氢、任选取代的烷基和任选取代的芳基。
35.如权利要求34所述的化合物，其中R7选自于任选取代的烷基；芳基；取代的芳基；苄基；以及任选取代的杂芳基。
36.如权利要求1所述的化合物，其中R7选自于乙基、丙基、氯丙基、丁氧基、庚基、丁基、辛基、十三烷基、(乙氧基羰基)乙基、二甲基氨基乙基、二甲基氨基甲基、苯基、萘基、卤代苯基、多卤代苯基、氰基苯基、羟基甲基苯基、卤代(三氟甲基)苯基、氯苯氧基甲基、甲氧基苯基、羧基苯基、乙基苯基、甲苯基、羟基甲基苯基、乙基苯基、联苯基、亚甲二氧基苯基、甲基磺酰基苯基、甲氧基氯苯基、氯萘基、乙酰基苯基、甲基卤代苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、丁基苯基、戊基苯基、甲基硝基苯基、苯氧基甲基、二甲氧基苯基、苯基乙烯基、硝基氯苯基、硝基苯基、二硝基苯基、二(三氟甲基)苯基、苄基氧基甲基、苄基、呋喃基、苯并呋喃基、吡啶基、吡啶基、吲哚基、甲基吡啶基、甲基吡啶基、(3-氨甲酰基)吡啶基-[烟酰胺]、3-氨甲酰基-6-甲基吡啶基、喹啉基、皮考啉基、吡唑基、吡嗪基、甲基吡嗪基、吗啉子基甲基、甲硫基甲基、甲氧基甲基、咪唑基、异噁唑基、甲基-异噁唑基、苯并噻二唑基、亚甲二氧基苯基、噻吩基、甲基噻吩基、甲基-烟酰胺基、甲基-吡嗪基、苯并间二氧杂环戊烯基、以及甲基-苯硫基。
37.如权利要求36所述的化合物，其中R7是甲苯基、卤代苯基、卤代甲基苯基、羟基甲基苯基、亚甲二氧基苯基、甲酰基苯基或氰基苯基。
38.如权利要求1所述的化合物，其中R3是-NR6(CH2R7b)，而R7b选自于C1-C13烷基；取代的低级烷基；苯基；萘基；被以下基团取代的苯基氰基、卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、亚甲二氧基、或三氟甲基；联苯基、苄基和杂环基。
39.如权利要求38所述的化合物，其中R7b选自于被一个或者多个以下基团取代的苯基卤素、甲基、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、羧基或甲氧基羰基；哌啶基；和萘基。
40.如权利要求39所述的化合物，其中R7b是卤代苯基、甲基卤代苯基、多卤代苯基、甲苯基、二甲基苯基、甲氧基苯基、二甲氧基苯基、氰基苯基、三氟甲基苯基、三氟甲氧基苯基、二(三氟甲基)苯基、羧基苯基、t-丁基苯基、甲氧基羰基苯基、哌啶基、和萘基。
41.如权利要求39所述的化合物，其中R3是-NR6(SO2R7a)，而R7a选自于C1-C13烷基；苯基；萘基；被以下基团取代的苯基氰基、卤素、低级烷基、低级烷氧基、硝基、亚甲二氧基、或三氟甲基；联苯基和杂芳基。
42.如权利要求41所述的化合物，其中R7a选自于被以下基团取代的苯基卤素、低级烷基、低级烷氧基、氰基、硝基、亚甲二氧基或三氟甲基；和萘基。
43.如权利要求1-42之一所述的化合物，其中R2和R2′连接至具有R构型的立体中心上，或其药物学上可接受的盐或溶剂化物。
44.如权利要求1-43之一所述的化合物，其是盐酸盐、磷酸盐或草酸盐。
45.一种组合物，其包含药用赋形剂以及如权利要求1-44之一所述的化合物、其盐或溶剂化物。
46.如权利要求45所述的组合物，其中除了式I的化合物或其药用盐或溶剂化物外，所述组合物还包含化学治疗剂。
47.如权利要求46所述的组合物，其中所述组合物还包含紫杉烷。
48.如权利要求46所述的组合物，其中所述组合物还包含长春花属生物碱。
49.如权利要求46所述的组合物，其中所述组合物还包含拓扑异构酶I抑制剂。
50.一种调节KSP驱动蛋白活性的方法，其包括使所述驱动蛋白与有效量的如权利要求1-44之一所述的化合物或其药物学上可接受的盐或溶剂化物接触。
51.一种抑制KSP的方法，其包括使所述驱动蛋白与有效量的如权利要求1-44之一所述的化合物或其药物学上可接受的盐或溶剂化物接触。
52.一种用于治疗细胞增殖性疾病的方法，其包括向需要的患者给药如权利要求1-44之一所述的化合物或其药物学上可接受的盐或溶剂化物。
53.一种用于治疗细胞增殖性疾病的方法，其包括向需要的患者给药如权利要求45-49之一所述的组合物。
54.如权利要求52或权利要求53所述的方法，其中所述疾病选自以下组中癌症、增生、再狭窄、心肥大、免疫疾病和炎症。
55.如权利要求1-44之一所述的化合物或其药物学上可接受的盐或溶剂化物在制备用于治疗细胞增殖性疾病的药物中的应用。
56.如权利要求55所述的化合物的应用，其是制备用于治疗与KSP驱动蛋白活性有关的疾病的药物。
全文摘要
本发明公开了用于通过调节KSP的活性来治疗细胞增殖性疾病和病症的化合物。
文档编号C07D239/36GK1665788SQ03816177
公开日2005年9月7日 申请日期2003年5月2日 优先权日2002年5月9日
发明者周汉杰, 小戴维·J.·C.·摩根斯, 史蒂文·戴维·奈特, 肯尼思·A.·纽兰德, 达什扬特·达哈纳克, 尼古拉斯·D.·亚当斯, 古斯塔夫·贝格内斯 申请人:赛特凯恩蒂克公司, 史克比彻姆公司