专利名称：制备作为蛋白激酶抑制剂的取代的嘧啶和嘧啶衍生物的方法
技术领域：
本发明提供了一种制备取代的嘧啶的简单方法。本方法可以用于制备蛋白激酶的抑制剂，特别是FLT-3和Aurora家族激酶、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的抑制剂。本发明还涉及FLT-3、Aurora-1、Aurora-2和Aurora-3蛋白激酶的抑制剂以及它们的组合物。
背景技术：
最近几年，更好地理解与目标疾病相关的酶和其它生物分子的结构已经很大地辅助了新型治疗药物的研究。一类已经成为广泛研究的对象的重要酶是蛋白激酶。
蛋白激酶介导着细胞间的信号传递。它们通过实现从三磷酸核苷到参与信号通道的蛋白受体的磷酰转移来发挥该作用。细胞外的和其它的刺激通过许多激酶和通道引起在细胞内发生的各种细胞反应。这种刺激的实例包括环境信号和化学压力信号(例如，渗透压波动、热波动、紫外线辐射、细菌内毒素和H2O2)、细胞因子(例如，白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子α(TNF-α))、生长因子(例如，粒细胞巨嗜细胞-集落刺激因子(GM-CSF)和成纤维细胞生长因子(FGF))。细胞外的刺激可能影响一种或多种与细胞生长、迁移、分化、激素分泌、转录因子的活化、肌肉收缩、葡萄糖代谢、蛋白合成的控制和细胞周期的调节相关的细胞反应。
许多疾病与蛋白激酶介导的过程所触发的异常细胞反应相关。这些疾病包括自身免疫病、炎症、骨病、代谢病、神经学疾病和神经退化病、癌症、心血管病、过敏症和哮喘、阿尔茨海默氏病和激素相关疾病。因此，在药物化学领域已经进行了实质性的努力来寻找能够用作有效的治疗药物的蛋白激酶抑制剂。
丝氨酸/苏氨酸激酶的Aurora家族对于细胞增殖是基本的[Bischoff，J.R. & Plowman，G.D.(The Aurora/Ipl1p kinase familyregulators of chromosome segregation and cytokinesis)Trends inCell Biology 9，454-459(1999)；Giet，R.和Prigent，C.(Aurora/Ipl1p-related kinases，a new oncogenic family of mitoticserine-threonine kinases)Journal of Cell Science 112，359-3601(1999)；Nigg，E.A.(mitotic kinases as regulators of celldivision and its checkpoints)Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2，21-32(2001)；Adams，R.R，Carmena，M.，和Earnshaw，W.C.(Chromosomalpassengers and the(aurora)ABCs of mitosis)Trends in CellBiology 11，49-54(2001)]。因此，Aurora激酶家族的抑制剂具有阻止所有的肿瘤类型的生长的潜力。
三种已知的哺乳动物家族成员，Aurora-A(″1″)、B(″2″)和C(″3″)，是负责染色体分离、有丝分裂纺锤体功能和胞质分裂的高度同源的蛋白。Aurora在静止细胞中的表达较低或不可检测，在细胞周期的G2和有丝分裂阶段出现表达和活性高峰。在哺乳动物细胞中，推测Aurora的基质包括组蛋白H3、参与染色体缩合的蛋白和CENP-A、肌球蛋白II调节轻链、蛋白磷酸酶1、TPX2，细胞分裂需要它们。
自1997年发现以来，哺乳动物Aurora激酶家族已经被与肿瘤发生密切地联系起来。这方面最有说服力的证据是，Aurora-A的过量表达会转变啮齿动物的成纤维细胞(Bischoff，J.R.，等人A homologue ofDrosophila aurora kinase is oncogenic and amplified in humancolorectal cancers.EMBO J.17，3052-3065(1998))。有升高的该酶水平的细胞含有多个中心体和多极纺锤体，并且很快地变成非整倍体。Aurora激酶的致癌活性好像与这种遗传不稳定性的产生有关。实际上，已经在乳腺瘤和胃瘤中观察到aurora-A基因座的扩增和染色体不稳定性之间的关联(Miyoshi，Y.，Iwao，K.，Egawa，C.，和Noguchi，S.Association of centrosomal kinase STK15/BTAK mRNA expressionwith chromosomal instability in human breast cancers. Int.J.Cancer 92，370-373(2001).(Sakakura，C.等人Tumor-amplifiedkinase BTAK is amplified and overexpressed in gastric cancerswith possible involyement in aneuploid formation.BritishJournal of Cancer 84，824-831(2001))。已经报道Aurora激酶在广范围的人肿瘤中过量表达。已经在超过50％的结肠直肠(Bischoff，J.R.，等人A homologue of Drosophila aurora kinase is oncogenic andamplified in human colorectal cancers.EMBO J.17，3052-3065(1998))(Takahashi，T.，等人Centrosomal kinases，HsAIRk1 andHsAIRK3，are over expressed in primary colorectal cancers.Jpn.J.Cancer Res.91，1007-1014(2000))、卵巢瘤(Gritsko，T.M.等人Activation and overexpression of centrosome kinaseBTAK/Aurora-A in human ovarian cancer.Clinical Cancer Research9，人1420-1426(2003))、胃瘤(Sakakura，C.等人Tumor-amplifiedkinase BTAK is amplified and overexpressed in gastric cancerswith possible involvement in aneuploid formation.BritishJournal of Cancer 84，824-831(2001))和94％乳房入侵导管状腺癌(Tanaka，T.，等人Centrosomal kinase AIK1 is over expressed ininvasive ductal carcinoma of the breast.Cancer Research.59，2041-2044(1999))中检测到Aurora-A的升高表达。还已经报道了肾癌、子宫颈癌、神经母细胞瘤、黑素瘤、淋巴瘤、胰腺瘤和前列腺瘤细胞系中的高水平的Aurora-A(Bischoff，J.R.，等人A homologue ofDrosophila aurora kinase is oncogenic and amplified in humancolorectal cancers.EMBO J.17，3052-3065(1998)(Kimura，M.，Matsuda，Y.，Yoshioka，T.，和Okano，Y.Cell cycle-dependentexpression and centrosomal localization of a third humanAurora/Ipl1-related protein kinase，AIK3.Journal of BiologicalChemistry 274，7334-7340(1999))(Zhou等人Tumour amplifieckinaseSTK15/BTAK induces centrosome amplification，aneuploidyand transformation Nature Genetics 20189-193(1998))(Li等人Overexpression of oncogenic STK15/BTAK/Aurora-A kinase inhuman pancreatic cancer Clin Cancer Res.9(3)991-7(2003))。在人膀胱癌中发现Aurora-A的扩增/过量表达，而且Aurora-A的扩增与非整倍体的和侵略性的临床行为相关(Sen S.等人Amplification/overexpression of a mitotic kinase gene in human bladder cancerJna t1 Cancer Inst.94(17)1320-9(2002))。而且，aurora-A基因座(20q 13)的扩增与节(node)阴性的乳腺癌患者的难以预测(prognosis)相关(Isola，J.J.，等人Genetic aberrationsdetected by comparative genomic hybridization predict outcome innode-negative breast cancer.American Journal of Pathology 147，905-911(1995))。Aurora-B在多种人肿瘤细胞系中高表达，所述的细胞系包括白血病细胞(Katayama等人HumanAIM-1cDNA cloning andreduced expression during endomitosis in megakaryocyte-lineagecells.Gene 2441-7)。在初始的结直肠癌中，该酶的水平随着杜克阶段(Duke′s stage)而增加(Katayama，H.等人Mitotic kinaseexpression and colorectal cancer progression.Journal of theNational Cancer Institute 91，1160-1162(1999))。Aurora-C一般只在生殖细胞中发现，它也在初始的结直肠癌和多种肿瘤细胞系(包括子宫颈腺癌和乳腺癌细胞)中以高百分比过量表达(Kimura，M.，Matsuda，Y.，Yoshioka，T.，和Okano，Y.Cell cycle-dependentexpression and centrosomal localization of a third humanAurora/Ipl1-related kinase，AIK3.Journal of BiologicalChemistry 274，7334-7340(1999).(Takahashi，T.，等人Centrosomal kinases，HsAIRkI and HsAIRK3，are over expressed inprimary colorectal cancers.Jpn.J.Cancer Res.91，1007-1014(2000))。
基于已知的Aurora激酶的功能，抑制它们的活性会中断导致细胞周期停止的有丝分裂。Aurora抑制剂因此能在体内减速肿瘤的生长和诱导退化。
在多种肿瘤细胞系中观察到升高水平的所有的Aurora家族成员。Aurora激酶在许多人肿瘤中过量表达，据报道这与乳房肿瘤中的染色体不稳定性相关(Miyoshi等人2001 92，370-373)。
Aurora-2在多种人肿瘤细胞系中高表达，且其水平随着初始结直肠癌的杜克阶段(Duke′s stage)而增加[Katayama，H.等人(Mitotickinase expression and colorectal cancer progression)Journal ofthe National Cancer Institute 91，1160-1162(1999)]。Aurora-2在控制有丝分裂过程中的染色体的精确分离方面起作用。细胞周期的错误调节会导致细胞增殖和其它异常。在人结肠癌组织中，已经发现Aurora-2蛋白过量表达[Bischoff等人，EMBO J.，17，3052-3065(1998)；Schumacher等人，J Cell Biol.，143，1635-1646(1998)；Kimura等人，J.Biol.Chem.，272，13766-13771(1997)]。Aurora-2在大多数转化细胞中过量表达。Bischoff等人发现，在96％的源自肺瘤、结肠肿瘤、肾瘤、黑素瘤和乳腺瘤的细胞系中有高水平的Aurora-2(Bischoff等人EMBO J.1998 17，3052-3065)。两个广泛的研究表明，在54％和68％(Bishoff等人EMBO J.1998 17，3052-3065)(Takahashi等人2000 Jpn J Cancer Res.91，1007-1014)的结直肠肿瘤和94％的乳房入侵导管状腺癌(Tanaka等人1999 59，2041-2044)中有升高的Aurora-2。
Aurora-1在源自结肠肿瘤、乳腺瘤、肺瘤、黑素瘤、肾瘤、卵巢瘤、胰腺瘤、CNS、胃管瘤和白血病瘤的细胞系中的表达有所升高(Tatsuka等人1998 58，4811-4816)。
已经在几种肿瘤细胞系中检测到高水平的Aurora-3，尽管它只限于正常组织的睾丸(testis)中(Kimura等人1999 274，7334-7340)。还已经有记载，在高百分比(c.50％)的结直肠癌中过量表达Aurora-3(Takahashi等人2000 Jpn J Cancer Res.91，1007-1014)。相反，Aurora在大多数正常组织中以低水平表达，例外是含有高比例的分裂细胞的组织，例如胸腺和睾丸(Bischoff等人EMBO J.1998 17，3052-3065)。
要想进一步了解Aurora激酶在增殖性疾病中所起的作用，参见Bischoff，J.R. & Plowman，G.D.(The Aurora/Ipl1p kinase familyregulators of chromosome segregation and cytokinesis)Trends inCell Biology 9，454-459(1999)；Giet，R.和Prigent，C.(Aurora/Ipl1p-related kinases，a new oncogenic family of mitoticserine-threonine kinases)Journal of Cell Science 112，3591-3601(1999)；Nigg，E.A.(mitotic kinases as regulators of celldivision and its checkpoints)Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2，21-32(2001)；Adams，R.R，Carmena，M.，和Earnshaw，W.C.(Chromosomalpassengers and the(aurora)ABCs of mitosis)Trends in CellBiology 11，49-54(2001)；和Dutertre，S.，Descamps，S.，& Prigent，P.(On the role of aurora-A in centrosome function) Oncogene 21，6175-6183(2002)。
III型受体酪氨酸激酶(Flt3)在造血细胞和非造血细胞的维持、生长和发育中起重要作用[Scheijen，B，Griffin JD，Oncogene，2002，21，3314-3333以及Reilly，JT，British Journal ofHaematology，2002，116，744-757]。FLT-3调节干细胞/早期祖细胞群的维持和成熟的淋巴细胞和骨髓细胞的发育[Lyman，S，Jacobsen，S，Blood，1998，91，1101-1134]。FLT-3含有内部激酶域，它能被配体介导的受体二聚化所激活。激活后，激酶域诱导受体的自动磷酸化和各种胞浆蛋白的磷酸化，这有助于导致生长、分化和复活的活化信号的传递。一些FLT-3受体信号的下游调节剂包括PLCγ、PI3-激酶、Grb-2、SHIP和Src相关激酶[Scheijen，B，Griffin JD，Oncogene，2002，21，3314-3333]。FLT-3激酶在各种造血的和非造血的恶性肿瘤中起作用。已经在急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、肥大细胞病和肠胃基质瘤(GIST)中发现导致FLT-3的配体独立性的活化的突变。这些突变包括在激酶域或内部纵向复制(tandem duplication)中的单个氨基酸变化、受体近膜区域的点突变或框内删除。除了激活突变外，过量表达的野生型FLT-3的配体依赖性(自分泌或旁分泌)刺激助长了恶性表型[Scheijen，B，Griffin JD，Oncogene，2002，21，3314-3333]。也参见Sawyer，C.I.(Finding the next GleevecFLT3targeted kinase inhibitor therapy for acute myeloid leukaemia)Cancer Cell.1，413-415(2002)。
本领域已知用作激酶抑制剂的三-或四-取代的嘧啶衍生物。典型地，这些嘧啶衍生物是2，4，6-或2，4，5，6-取代的，如下所示 2，4，6-取代嘧啶 2，4，5，6-取代的嘧啶已知的制备这样的嘧啶衍生物的方法具有许多合成缺陷，例如不能位置特定地在2-、4-或6-位引入取代基达到高产率。参见M.Botta，Nucleosides Nucleotides，13，8，1994，1769-78；M.Ban，Bioorg.Med.Chem.，6，7，1998，1057-68；Y.Fellahi，Eur.J.Med.Chem.Chim.Ther.，31，1，1996，77-82；T.J.Delia，J.Het.Chem.，35，2，1998，269-74；H.Uchel，Tetraheron Lett.，36，52，1995，9457-60；以及Y.Nezu，Pestic.Sci.，47，2，1996，115-24。
需要能够容易地用来大规模地制备三-或四-取代的嘧啶衍生物的合成方法。还需要采用最少的步骤、使用容易获得的原料和简单的反应介质的方法。理想地，这样的方法在需要时容易规模化、而且不贵。还需要不会产生必须分离(通过例如层析方法)的位置异构的中间体混合物的方法。这样的分离会降低总产率。
应该有一种能够生产三-或四-取代的嘧啶衍生物的合成方法，它具有上述的优点，从而对目前可获得的方法加以改进。
发明内容
本发明提供了一种制备式I化合物的方法 其中Q和T中的每一个独立地选自氧、硫或N(R)；每一个R独立地选自氢或任选取代的C1-6脂族基，其中结合到同一个氮原子上的两个R任选地与该氮原子一起形成任选取代的3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的环，该环除了结合的氮原子外还含有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；Rx是U-R5；R5选自卤素、NO2、CN、R或Ar；每一个U独立地选自价键或C1-4亚烷基链，其中U中最多2个亚甲基单元任选地和独立地被替换为-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)-、-C(O)-、-CO2-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)O-、-N(R)CON(R)-、-N(R)SO2N(R)-、-N(R)N(R)-、-C(O)N(R)-、-OC(O)N(R)-、-C(R)＝NN(R) 或-C(R)＝N-O-；每一个Ar独立地选自任选取代的环，该环选自3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫；Ry是-N(R1)2、-OR1或-SR1；每一个R1独立地选自R或3-8元单环的、8-10元双环的或10-12元三环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中每一个R1任选地且独立地被最多4个选自R2的取代基取代；每一个R2独立地选自-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2(R3)；每一个R3独立地选自R或Ar；Rz1选自C1-6脂族基或3-8元单环的、8-10元双环的或10-12元三环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中Rz1被0-4个独立地选自R2基团的取代基取代；Rz2是C1-6脂族基或3-8元单环的、8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中Rz2被0-4个独立地选自氧代或U-R5的取代基取代；所述的方法包括在合适的介质中将式II化合物和式Ry-H化合物组合的步骤 其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L3是合适的离去基团。
发明详述本发明提供了一种制备式I化合物的方法 其中Q和T中的每一个独立地选自氧、硫或N(R)；每一个R独立地选自氢或任选取代的C1-6脂族基，其中结合到同一个氮原子上的两个R任选地与该氮原子一起形成任选取代的3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的环，该环除了结合的氮原子外还含有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；Rx是U-R5；R5选自卤素、NO2、CN、R或Ar；每一个U独立地选自价键或C1-4亚烷基链，其中U中最多2个亚甲基单元任选地和独立地被替换为-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)-、-C(O)-、-CO2-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)O-、-N(R)CON(R)-、-N(R)SO2N(R)-、-N(R)N(R)-、-C(O)N(R)-、-OC(O)N(R)-、-C(R)＝NN(R)或-C(R)＝N-O-；每一个Ar独立地选自任选取代的环，该环选自3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫；Ry是-N(R1)2、-OR1或-SR1；每一个R1独立地选自R或3-8元单环的、8-10元双环的或10-12元三环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中每一个R1任选地且独立地被最多4个选自R2的取代基取代；每一个R2独立地选自-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2(R3)；每一个R3独立地选自R或Ar；Rz1选自C1-6脂族基或3-8元单环的、8-10元双环的或10-12元三环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中Rz1被0-4个独立地选自R2基团的取代基取代；Rz2是C1-6脂族基或3-8元单环的、8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中Rz2被0-4个独立地选自氧代或U-R5的取代基取代；所述的方法包括在合适的介质中将式II化合物和式Ry-H化合物组合的步骤 其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L3是合适的离去基团。
根据另外一个实施方案，通过在合适的介质中将式III化合物与式Rz1-Q-H化合物组合来制备式II化合物
其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L2是合适的离去基团。
根据另外一个实施方案，通过在合适的介质中将式IV化合物与式Rz2-T-H化合物组合来制备式III化合物 其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L1是合适的离去基团。
合适的溶剂是与要组合的化合物相组合以后有利于它们之间的反应进程的溶剂或溶剂混合物。该合适的溶剂能溶解一种或多种反应组分，或者可替换地，该合适的溶剂有利于一种或多种反应组分的悬浮液的搅拌。在本发明中可以使用的合适的溶剂的实例是质子溶剂、卤代烃、醚、芳香烃、极性的或非极性的非质子溶剂、或其它的任意混合物。这些以及其它这样合适的溶剂是本领域熟知的，例如，参见″AdvancedOrganic Chemistry″、Jerry March、4thedition、John Wiley and Sons、N.Y.(1992)。
合适的溶剂优选地是C1-7直链或支链的烷基醇、醚、或极性的或非极性的非质子溶剂。
为了进行式II化合物和式Ry-H化合物之间的反应，更优选的合适的溶剂是选自乙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇或四氢呋喃。
为了进行式III化合物与式Rz1-Q-H化合物之间的反应，更优选的合适的溶剂是选自乙醇、异丙醇、叔丁醇、正丁醇、N、N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或四氢呋喃。
为了进行式IV化合物与式Rz2-T-H化合物之间的反应，更优选的合适的溶剂是选自N、N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或四氢呋喃。
根据一个另外的实施方案，合适的溶剂是Ry-H。这样，在该实施方案中，试剂Ry-H部分地作为与式II化合物组合的合适溶剂，还部分地作为与式II化合物反应生成式I化合物的试剂。
根据另外一个实施方案，合适的溶剂是Rz1-Q-H。这样，在该实施方案中，试剂Rz1-Q-H部分地作为与式III化合物组合的合适溶剂，还部分地作为与式III化合物反应生成式II化合物的试剂。
根据另外一个实施方案，合适的溶剂是Rz2-T-H。这样，在该实施方案中，试剂Rz2-T-H部分地作为与式IV化合物组合的合适溶剂，还部分地作为与式IV化合物反应生成式III化合物的试剂。
合适的碱是能够作为质子接收者的化学物质。其实例包括有机胺、碱土金属碳酸盐、碱土金属氢化物和碱土金属氢氧化物。这些以及其它这样合适的碱是本领域熟知的，例如，参见″Advanced OrganicChemistry″、Jerry March、4thedition、pp.248-253、John Wiley andSons、N.Y.(1992)。优选的合适的碱包括三烷基胺、碳酸钠、碳酸钾、氢化钠、氢化钾、氢氧化钠或氢氧化钾。更优选地，合适的碱是二异丙基乙基胺或三乙基胺。
合适的离去基团是能被理想的引入的化学基团容易地替换的化学基团。这样，根据能被引入的化学基团Ry-H中的Ry、Rz1-Q-H中的Rz1-Q或Rz2-T-H中的Rz2-T容易地替换的性能，可以选择特定的合适的离去基团。合适的离去基团是本领域熟知的，例如，参见″Advanced OrganicChemistry″、Jerry March、4thedition、pp.351-357、John Wiley andSons、N.Y.(1992)。这样的离去基团包括但不限于卤素、烷氧基、磺酰基氧基、任选取代的烷基磺酰基、任选取代的链烯基磺酰基、任选取代的芳基磺酰基和重氮基。合适的离去基团的实例包括氯、碘、溴、氟、甲烷磺酰基(甲磺酰基)、甲苯磺酰基、三氟甲磺酸基、硝基-苯基磺酰基(对硝基苯磺酰基)和溴-苯基磺酰基(对溴苯磺酰基)。
例如，在制备式I化合物的方法中，L3被引入的Ry-H中的Ry替换。这样，如果Ry-H是例如哌嗪，那么L3是能被哌嗪中的-NH-基团容易地替换掉的离去基团。
优选的L3离去基团是选自卤素、任选取代的芳基磺酰基或任选取代的烷基磺酰基。更优选地，L3是氯、碘、甲烷磺酰基。最优选地，L3是氯。
例如，在制备式II化合物的方法中，L2被引入的Rz1-Q-H中的Rz1-Q替换。这样，如果Rz1-Q-H是例如3-氨基吡唑，那么L2是能被3-氨基吡唑容易地替换掉的离去基团。
优选的L2离去基团是选自卤素、任选取代的芳基磺酰基或任选取代的烷基磺酰基。更优选地，L2是氯、碘或氟。最优选地，L2是氯。
例如，在制备式III化合物的方法中，L1被引入的Rz2-T-H中的Rz2-T替换。这样，如果Rz2-T是例如任选取代的芳基硫基，那么L1是能被任选取代的芳基硫基中的硫基容易地替换掉的离去基团。
优选的L1离去基团是选自卤素、任选取代的芳基磺酰基或任选取代的烷基磺酰基。更优选地，L1是氯、碘或甲烷磺酰基。最优选地，L1是甲烷磺酰基。
根据一个替换实施方案，合适的离去基团可以在反应介质中原位产生。例如，式II化合物中的L3可以在原位从式II化合物的前体产生，其中所述的前体含有能够在原位容易地替换为L3的基团。在这种替换的特别解释中，所述的式II化合物的前体含有在原位替换为L3(例如碘基)的基团(例如，氯基或羟基)。碘基的来源可以是例如碘化钠。因此，L2和L1也可以通过类似的方式在原位形成。这种在原位产生合适的离去基团是本领域熟知的，例如，参见″Advanced Organic Chemistry、″Jerry March、pp.430-431、4thEd.、John Wiley and Sons、N.Y.(1992)。
根据另外一个替换实施方案，Ry-H的Ry、Rz1-Q-H的Rz1-Q或Rz2-T-H的Rz2-T中的任何一个的阴离子都可以在加入到反应介质中之前就形成。所述的阴离子的制备是本领域的技术人员所熟知的。例如，当T是氧时，通过用碱(例如氢化钠)处理Rz2-T-H会容易地生成Rz2-T-H的阴离子。该氧阴离子然后可以与式IV化合物组合来生成式III化合物。
根据另外一个实施方案，这里描述的反应是在低于或等于反应介质的回流温度的温度下进行的。根据另外一个实施方案，所述的反应介质的温度低于所述的合适溶剂的沸点，或者处于通过在所述的反应介质中回流所述的合适溶剂所得到的温度。在另外一个实施方案中，所述的反应介质的温度为约0℃～约190℃。在另外一个实施方案中，所述的反应介质的温度为约40℃～约120℃。在另外一个实施方案中，所述的反应介质的温度为约7℃～约115℃。
如这里所使用的，除另有说明外将采用下述的定义。
术语“Aurora”是指Aurora家族的蛋白激酶的任何异构体，包括Aurora-1、Aurora-2和Aurora-3。术语“Aurora”还指Aurora家族的蛋白激酶的异构体，已知是Aurora-A、Aurora-B和Aurora-C。
术语“任选取代的”与术语“取代的或未取代的”可以互换使用。除非另有说明，任选取代的基团可以在该基团的任何可取代的位置上有取代基，且各取代是相互独立的。
如这里使用的术语“脂族的”或“脂族基”是指直链的或支链的C1-C8烃链，该烃链是完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元，或者是单环的C3-C8烃或双环的C8-C12烃，该烃是完全饱和的或含有一个或多个不饱和单元，但不是芳香族的(在这里也称作“碳环”或“环烷基”)，它具有单一的与其它分子结合的位点，其中所述双环系统中的任何一个环都是3-7元。例如，合适的脂族基包括但不限于线性的或分支的烷基、链烯基、炔基和它们的杂合物，例如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
单独使用的或者用作更大基团的一部分的术语“烷基”、“烷氧基”、“羟基烷基”、“烷氧基烷基”和“烷氧基羰基”包括含有1～12个碳原子的直链和支链。单独使用的或者用作更大基团的一部分的术语“链烯基”和“炔基”应当包括含有2～12个碳原子的直链和支链。
术语“杂原子”是指氮、氧或硫，且包括氮和硫的任何氧化形式和基础氮的季铵化形式。术语“氮”也包括杂环中可取代的氮。作为实例，在饱和的或部分不饱和的含有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的环中，氮可以是N(象在3，4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(象在吡咯烷基中)或NR+(象在N-取代的吡咯烷基中)。
术语“芳基”或“芳香环”是指单环的、双环的或三环的含有共计5～14个环碳原子的环系统，其中至少一个环是芳香环，并且其中系统中的每个环都含有3～7个环原子。术语“芳基”可以与术语“芳香环”互换地使用。其实例包括苯基、茚满基、1-萘基、2-萘基、1-蒽基、2-蒽基和双环[2.2.2]辛-3-基。
在式I化合物的不同优选实施方案中，更优选的的芳香环的环大小如下所述。
单独使用的或者用作如“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”等更大基团的一部分的术语“芳基”是指单环的、双环的或三环的含有共计5～14个环原子的环系统，其中系统中的至少一个环是芳香环，并且其中系统中的每个环都含有3～7个环原子。术语“芳基”可以与术语“芳香环”互换地使用。术语“芳基”也指在下文中定义的杂芳环系统。
这里使用的术语“杂环”、“杂环基”或“杂环的”是指非芳香的单环的、双环的或三环的含有5～14个环原子的环系统，其中一个或几个环原子是杂原子，其中系统中的每个环都含有3～7个环原子。
单独使用的或者用作如“杂芳烷基”或“杂芳基烷氧基”等更大基团的一部分的术语“杂芳基”是指单环的、双环的或三环的含有共计5～14个环原子的环系统，其中系统中的至少一个环是芳香环，系统中的至少一个环含有一个或多个杂原子，并且其中系统中的每个环都含有3～7个环原子。术语“杂芳基”可以与术语“杂芳环”或术语“杂芳的”互换地使用。
芳基(包括芳烷基、芳烷氧基、芳氧基烷基等)或杂芳基(包括杂芳烷基和杂芳基烷氧基等)可以含有一个或多个取代基。芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基的不饱和碳原子上的合适的取代基是选自卤素、-Ro、-ORo、-SRo、1，2-亚甲基-二氧、1，2-亚乙基二氧、以Ro任选取代的苯基(Ph)、以Ro任选取代的-O(Ph)、以Ro任选取代的-CH2(Ph)、以Ro任选取代的-CH2CH2(Ph)、-NO2、-CN、-N(Ro)2、-NRoC(O)Ro、-NRoC(O)N(Ro)2、-NRoCO2Ro、-NRoNRoC(O)Ro、-NRoNRoC(O)N(Ro)2、-NRoNRoCO2Ro、-C(O)C(O)Ro、-C(O)CH2C(O)Ro、-CO2Ro、-C(O)Ro、-C(O)N(Ro)2、-OC(O)N(Ro)2、-S(O)2Ro、-SO2N(Ro)2、-S(O)Ro、-NRoSO2N(Ro)2、-NRoSO2Ro、-C(＝S)N(Ro)2、-C(＝NH)-N(Ro)2或-(CH2)yNHC(O)Ro，其中每一个Ro独立地选自氧代、卤素、任选取代的C1-6脂肪的、不饱和的5-6元杂芳基或杂环的环、苯基、-O(Ph)或-CH2(Ph)。Ro脂族基上的任选的取代基选自NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、卤素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(卤代C1-4脂族基)或卤代C1-4脂族基。
脂族基或非芳香族的杂环可以含有一个或多个取代基。脂族基或非芳香族的杂环的饱和碳上的合适的取代基选自在上面为芳基或杂芳基的不饱和碳列出的那些和下面的这些＝O、＝S、＝NNHR*、＝NN(R*)2、＝NNHC(O)R*、＝NNHCO2(烷基)、＝NNHSO2(烷基)或＝NR*，其中每一个R*独立地选自氢或任选取代的C1-6脂族基。R*脂族基上的任选的取代基选自NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、卤素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(卤代C1-4脂族基)或卤代(C1-4脂族基)。
非芳香族杂环的氮上的任选的取代基选自R+、-N(R+)2、-C(O)R+、-CO2R+、-C(O)C(O)R+、-C(O)CH2C(O)R+、-SO2R+、-SO2N(R+)2、-C(＝S)N(R+)2、-C(＝NH)-N(R+)2或-NR+SO2R+；其中R+是氢、任选取代的C1-6脂族基、任选取代的苯基、任选取代的-O(Ph)、任选取代的-CH2(Ph)、任选取代的-CH2CH2(Ph)或未取代的5-6元杂芳基或杂环。脂族基或R+苯环上的任选的取代基选自NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、卤素、C1-4脂族基、OH、O(C1-4脂族基)、NO2、CN、CO2H、CO2(C1-4脂族基)、O(卤代C1-4脂族基)或卤代(C1-4脂族基)。
术语“亚烷基链”是指直链或分支的碳链，它可以是完全饱和的或具有一个或多个不饱和单元，并且具有两个与其它分子结合的位点。
取代基或变量的组合只有在该组合会产生稳定的或化学上可行的化合物时才是允许的。稳定的或化学上可行的化合物是在处于40℃或更低的温度、没有湿气或其它的化学反应条件中至少一周仍然基本上不发生变化的化合物。
本领域的技术人员能够明白，本发明的某些化合物存在互变异构体，化合物的所有的这样的互变异构体都在本发明的范围内。
除非特别说明，这里提到的结构也旨在包括该结构的所有立体化学形式；即，每一个不对称中心的R和S构型。因此，本发明化合物的单一的立体化学异构体和对映异构体及非对映异构体混合物都在本发明的范围内。除非特别说明，这里提到的结构也旨在包括差别只在于存在一个或多个同位素上富集的原子的化合物。例如，除了只是将氢替换为氘或氚、或者将碳替换为13C-或14C-富集的碳外，具有本结构的化合物也在本发明的范围内。这样的化合物可以用作，例如，生物实验中的实验工具或探针。
根据另外一个实施方案，式I的Q是NH、氧或硫。
根据一个优选的实施方案，式I的Q是NR。更优选地，式I的Q是NH。
根据另外一个优选的实施方案，式I的T是氧或硫。更优选地，式I的T是硫。
根据另外一个实施方案，式I的T是氧，且R22-T-H的阴离子在与式IV化合物组合生产式III化合物之前就已经形成。
根据另外一个实施方案，式I的Rx是U-R5，其中U是价键、-O-或-NR-，且R5是R或Ar。
根据另外一个优选的实施方案，式I的Rx是选自R、Ar或-N(R)2。更优选地，式I的Rx是氢。
根据另外一个优选的实施方案，式I的Ry是选自-OR1或-N(R1)2。
根据另外一个优选的实施方案，式I的Ry是选自-N(R1)2，其中每一个R1独立地选自R或3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。优选的取代基R1选自-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3或3-6元的含有0-2个杂原子的芳香环或非芳香环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。更优选的R1上的取代基是5-6元的含有1-2个杂原子的非芳香环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。最优选的R1C1-4脂族基上的取代基是NH(CH3)、NH2、OH、OCH3、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基和硫代吗啉基。
根据另外一个优选的实施方案，式I的Ry是选自-N(R1)2，其中每一个R1都是R，这样两个R基团一起形成任选取代的4-7元非芳香环，它含有至多2个另外的独立地选自氮、氧或硫的杂原子。所述环上的优选的取代基选自R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-CO2R3、-SO2R3或3-6元的含有0-2个杂原子的芳香环或非芳香环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。所述环上的更优选的取代基选自任选取代的C1-4脂族基、NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、任选取代的苯基、CO2(C1-4脂族基)或SO2(C1-4脂族基)。所述环上最优选的取代基选自甲基、乙基、甲磺酰基、(CH2)2SO2CH3、环丙基、CH2环丙基、(CH2)2OH、CO2叔丁基、CH2苯基、苯基、NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、(CH2)2NH2、(CH2)2吗啉-4-基、(CH2)2N(CH3)2、异丙基、丙基、叔丁基、(CH2)2CN或(CH2)2C(O)吗啉-4-基。
最优选地，式I的Ry是吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、吗啉-4-基、硫代吗啉-4-基、哌嗪-1-基、二氮杂环庚基或四氢异异喹啉基，其中每一个环任选地被一个或多个独立地选自下述基团的取代基取代甲基、乙基、甲磺酰基、(CH2)2SO2CH3、环丙基、CH2环丙基、(CH2)2OH、CO2叔丁基、CH2苯基、苯基、NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、(CH2)2NH2、(CH2)2吗啉-4-基、(CH2)2N(CH3)2、异丙基、丙基、叔丁基、(CH2)2CN或(CH2)2C(O)吗啉-4-基。
根据另外一个实施方案，式I的Rz1是3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环任选地和独立地被至多3个选自下述基团的取代基取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
根据另外一个实施方案，式I的Rz1是5-6元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有1-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环任选地和独立地被至多3个选自下述基团的取代基取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
根据一个更优选的实施方案，式I的Rz1是5或6元的完全不饱和的含有1-3个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环任选地和独立地被至多3个选自下述基团的取代基取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
优选的式I的Rz1环是任选取代的环，它选自吡唑或下述5-6元环中的任何一个 最优选地，式I的Rz1环是含有最多3个上面定义的取代基的吡唑环。
根据另一个优选的实施方案，式I的Rz1含有至多2个取代基，其中所述的取代基如上所述。更优选地，式I的Rz1含有1个取代基，其中所述的取代基如上所述。
优选的式I的Rz1基团上的取代基是-N(R3)2、-OR3、Ar或任选取代的C1-C4脂族基，其中Ar是任选取代的5-6元的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。更优选的式I的Rz1基团上的取代基是C1-C4脂族基。最优选的式I的Rz1基团上的取代基是选自甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、环丙基或苯基。
根据另一个实施方案，式I的Rz1是被0-4个R2基团取代的C1-6脂族基。优选地，Rz1被0-3个R2基团取代，其中每一个R2独立地选自R3、氧代、卤素、N(R3)2、CN或CO2R3。
根据一个优选的实施方案，式I的Rz2是5-6元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环被至多3个独立地选自下述基团的取代基任选地取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
更优选地，式I的Rz2选自任选取代的环，该环选自5-6元单环的或9-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫；其中所述的环任选地被至多3个独立地选自上述基团的取代基取代。最优选地，式I的Rz2选自苯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、萘基、四氢萘基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、喹唑啉基、苯并二氧杂芑基、异苯并呋喃、茚满基、吲哚基、二氢吲哚、吲唑基或异喹啉基，其中式I的Rz2基团被至多3个上述的取代基任选地和独立地取代。
在存在时，优选的式I的Rz2取代基独立地选自卤素、-CN、-NO2、-C(O)R3、-CO2R3、-C(O)NR(R3)、-NR3C(O)R3、-N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。更优选的式I的Rz2上的取代基独立地选自-Cl、-Br、-F、-CN、-CF3、-COOH、-CONHMe、-CONHEt、-NH2、-NHAc、-NHSO2Me、-NHSO2Et、-NHSO2(正丙基)、-NHSO2(异丙基)、-NHCOEt、-NHCOCH2NHCH3、-NHCOCH2N(CO2t-Bu)CH3、-NHCOCH2N(CH3)2、-NHCOCH2CH2N(CH3)2、-NHCOCH2CH2CH2N(CH3)2、-NHCO(环丙基)、-NHCO(异丙基)、-NHCO(异丁基)、-NHCOCH2(吗啉-4-基)、-NHCOCH2CH2(吗啉-4-基)、-NHCOCH2CH2CH2(吗啉-4-基)、-NHCO2(叔丁基)、-NH(环己基)、-NHMe、-NMe2、-OH、-OMe、甲基、乙基、环丙基、异丙基或叔丁基。
根据另外一个优选的实施方案，式I的Rz2含有至多2个取代基，其中所述的取代基如上所述。更优选地，式I的Rz2含有1个取代基，其中所述的取代基如上所述。最优选地，式I的Rz2含有1个选自-NR3C(O)R3的取代基，其中每一个R3独立地选自R或Ar，且其中R是氢或任选取代的C1-4脂族基。
根据另外一个实施方案，式I的Rz2是被0-3个独立地选自下述基团的取代基取代的C1-6脂族基卤素、氧代、-CN、-NO2、-C(O)R3、-CO2R3、-C(O)NR(R3)、-NR3C(O)R3、-N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。更优选地，式I的Rz2是被0-3个独立地选自下述基团的取代基取代的C1-4脂族基卤素、-CN、-NO2、-C(O)R3、-CO2R3、-N(R3)2或-NR3CO2R3。
式II中的Rx、T、Q、Rz1和Rz2的优选实施方案与在式I中对这些基团的说明一样。
Ry-H中的Ry基团的优选实施方案与在式I中对Ry的说明一样。
式III中的Rx、L3、T和Rz2的优选实施方案与在式I中对这些基团的说明一样。
Rz1-Q-H中的Q和z1基团的优选实施方案与在式I中对这些基团的说明一样。
式IV中的Rx、L3、L2和Q的优选实施方案与在式I中对这些基团的说明一样。
Rz2-T-H中的T和Rz2的优选实施方案与在式I中对这些基团的说明一样。
优选地，本发明的的方法中的Rx是合适的离去基团以外的基团。
通过本发明的方法制备出的优选的式I化合物具有通式I′ 或其药学上可接受的衍生物或盐，其中R1和R3定义如上。
优选的式I′的R1基团独立地选自R，其中R是氢或任选取代的C1-4脂族基。式I′的R1基团的C1-4脂族基上的取代基选自-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3或3-6元的含有0-2个杂原子的芳香环或非芳香环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。更优选的式I′的R1基团的C1-4脂族基上的取代基是5-6元的含有1-2个杂原子的非芳香环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。最优选的式I′的R1基团的C1-4脂族基上的取代基是NH(CH3)、NH2、OH、OCH3、吗啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基和硫代吗啉基。
根据另一个优选的实施方案，式I′的每一个R1都是R，这样两个R一起形成任选取代的4-7元非芳香环，该环还含有至多2个另外的独立地选自氮、氧或硫的杂原子。所述环上的优选的取代基选自-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-CO2R3、-SO2R3或3-6元的含有0-2个杂原子的芳香环或非芳香环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫。所述环上的更优选的取代基选自任选取代的C1-4脂族基、NH2、NH(C1-4脂族基)、N(C1-4脂族基)2、任选取代的苯基、CO2(C1-4脂族基)或SO2(C1-4脂族基)。所述环上的最优选的取代基选自甲基、乙基、甲磺酰基、(CH2)2SO2CH3、环丙基、CH2环丙基、(CH2)2OH、CO2叔丁基、CH2苯基、苯基、NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、(H2)2NH2、(CH2)2吗啉-4-基、(CH2)2N(CH3)2、异丙基、丙基、叔丁基、(CH2)2CN或(CH2)2C(O)吗啉-4-基。
更优选地，式I′的N(R1)2形成的环是吡咯烷基、哌啶基、吗啉-4-基、硫代吗啉-4-基、哌嗪-1-基、二氮杂环庚基或四氢异喹啉基，每一个环都任选地被一个或两个独立地选自下述基团的取代基取代甲基、乙基、甲磺酰基、(CH2)2SO2CH3、环丙基、CH2环丙基、(CH2)2OH、CO2叔丁基、CH2苯基、苯基、NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、(CH2)2NH2、(CH2)2吗啉-4-基、(CH2)2N(CH3)2、异丙基、丙基、叔丁基、(CH2)2CN或(CH2)2C(O)吗啉-4-基。
使用本发明的方法制备的式I化合物中的更优选的化合物具有通式V 或其药学上可接受的衍生物或盐，其中R5选自氢或C1-4脂族基；R6选自C1-3脂族基；且R7选自C1-4脂族基。
式V的优选的R5基团选自氢、甲基、乙基、叔丁基、丙基、环丙基、环丙基甲基或异丙基。式V的更优选的R5基团选自氢或甲基。式V的最优选的R5基团是甲基。
式V的优选的R6基团选自甲基、乙基或环丙基。式V的更优选的R6基团是甲基或环丙基。式V的最优选的R6基团是甲基。
式V的优选的R7基团选自甲基、乙基、叔丁基或环丙基。式V的更优选的R7基团选自乙基或环丙基。式V的最优选的R7基团是环丙基。
根据另一个实施方案，本发明涉及式V化合物 或其药学上可接受的衍生物或盐，其中R5选自氢或C1-4脂族基；R6选自C1-3脂族基；且R7选自C1-4脂族基；其条件是所述的化合物不是N-{4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}-丙酰胺。
式V的优选的R5基团选自氢、甲基、乙基、叔丁基或异丙基。式V的更优选的R5基团选自氢或甲基。式V的最优选的R5基团是甲基。
式V的优选的R6基团选自甲基、乙基或环丙基。式V的更优选的R6基团是甲基或环丙基。式V的最优选的R6基团是甲基。
式V的优选的R7基团选自甲基、乙基、叔丁基或环丙基。式V的更优选的R7基团选自乙基或环丙基。式V的最优选的R7基团是环丙基。
式V化合物属于PCT公开WO 02/057259中记载的化合物。但是，申请人已经发现本发明的化合物具有惊人的和意料不到的增加的作为Aurora蛋白激酶和/或FLT-3蛋白激酶抑制剂的潜力。
式V化合物的示范性结构在下面的表1中说明。
表1
根据本发明的方法制备的其它的式I示范性化合物在下面的表2中说明。
表2式I示范性化合物
本发明的方法优选地用于制备从表1和2中选出的化合物。本发明的方法更优选地用于制备从表1中选出的化合物。
根据另一个实施方案，本发明提供了式II、式III或式IV的化合物
或其药学上可接受的盐，其中Rx、Ry、L1、L2、L3、T、Rz2和Q以及它们的优选实施方案定义如上。
根据一个优选的实施方案，本发明提供了式II中间体。
根据另一个优选的实施方案，本发明提供了式III中间体。
根据另一个优选的实施方案，本发明提供了式IV中间体。
根据另一个实施方案，本发明提供了一种组合物，它含有本发明的化合物或药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、辅剂或赋形剂。化合物在本发明的组合物中的量应该达到有效地可检测地抑制生物样品或患者中的蛋白酶、特别是Aurora和/或FLT-3激酶。优选地，本发明的组合物制成方便地给需要该组合物的患者施用的制剂。更优选地，本发明的组合物制成给患者经口施用的制剂。
如这里所使用的，术语“患者”是指动物，优选哺乳动物，最优选人。
术语“药学上可接受的载体、辅剂或赋形剂”指无毒的载体、辅剂或赋形剂，它不会破坏与它配制的化合物的药理学活性。可以在本发明的组合物中使用的药学上可接受的载体、辅剂或赋形剂包括但不限于离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，例如人血清白蛋白，缓冲剂，例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾，部分的饱和植物脂肪酸的甘油酯混合物，水，盐或电解质，例如精蛋白硫酸酯、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅胶、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段共聚物、聚乙二醇和羊毛酯。
如这里使用的术语“可检测地抑制”指含有所述的组合物和蛋白激酶的样品与含有蛋白激酶但是不含所述的组合物的等同样品之间的蛋白激酶活性的可测量的改变。
“药学上可接受的衍生物或盐”指本发明的化合物的任何无毒的盐、酯、酯的盐或其它衍生物，在给受者施用后，它能直接地或间接地提供本发明的化合物或其具有抑制活性的代谢产物或残余物。如这里所使用的，术语“其具有抑制活性的代谢产物或残余物”指其代谢产物或残余物也是Aurora和/或FLT-3蛋白激酶的抑制剂。
根据另一个实施方案，本发明提供了制备式I、I’或V化合物的药学上可接受的盐的方法，它包括将根据本方法的方法制备的式I、I’或V化合物转变成理想的药学上可接受的盐的步骤。这种转变是本领域熟知的。参见，通常，″Advanced Organic Chemistry，″Jerry March，4thEd.，John Wiley and Sons，N.Y.(1992)。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括从药学上可接受的无机的或有机的酸和碱衍生出的盐。合适的酸盐的实例包括醋酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、羟乙酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟乙基磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、果胶酯酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫代氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一酸盐。其它的酸例如草酸，虽然其自身是不可药用的，但是可以在制备盐的过程中用作获取本发明的化合物和它们的药学上可接受的酸加成盐的中间体。
从适当的碱衍生出的盐包括碱金属(例如钠和钾)盐、碱土金属(例如镁)盐、铵盐和N+(C1-4烷基)4盐。本发明还预见这里公开的化合物的任何碱性含氮基团的季铵化反应。通过这样的季铵化反应可以得到在水或油中可溶解的或可分散的产物。
下面的表3阐明了本发明的式V化合物的代表性的盐。
表3式V化合物的代表性的盐
本发明的组合物可以经口地、胃肠外地、吸入喷雾法、局部地、直肠地、经鼻地、颊部、阴道地或通过植入的容器施用。这里使用的术语“胃肠外的”包括皮下的、静脉内的、肌肉内的、关节内的、滑囊内的、胸骨内的、鞘内的、肝内的、病灶内的和颅内的注射或灌输技术。优选地，组合物经口地、腹膜内的或静脉内地施用。本发明的组合物的无菌注射形式可以是水性的或油性的悬浮液。可以根据本领域已知的技术、使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制这些悬浮液。无菌注射制剂还可以是在无毒的注射可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的介质和溶剂是水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油类常规地用作溶剂或悬浮介质。
为此目的，任何温和的不挥发性油都可以使用，包括合成的单-或二-甘油酯。脂肪酸，例如油酸和其甘油酯衍生物，可以作为天然的药学上可接受的油用于注射剂的制备，例如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙基化形式。这些油性的溶液或悬浮液还可以含有长链的醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的通常在制备药学上可接受的剂型(包括乳状液和悬浮液)时使用的分散剂。为了配制的目的，还可以使用其它常用的表面活性剂，例如在生产药学上可接受的固体、液体或其它剂型时常用的吐温、Span和其它的乳化剂或生物利用度增强剂。
本发明的药学上可接受的组合物可以以任何经口地可接受的剂型给药，这包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。对于经口使用的片剂，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。还典型地加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于口服的胶囊形式，可用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要把水性悬浮液经口使用时，活性成分与乳化剂和悬浮剂相组合。如果需要，还可以加入某些增甜剂、矫味剂或调色剂。
或者，本发明的药学上可接受的组合物可以以直肠给药的栓剂形式施用。它们可以通过将药物与合适的无刺激的赋形剂相混合来制备，所述的赋形剂在室温下为固态但在直肠温度下为液态，因此将在直肠中融化并释放药物。这样的材料包括可可油、蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药学上可接受的组合物还可以局部施用，特别当治疗靶位包括通过局部应用容易接近的区域或器官时，包括眼病、皮肤病或下肠道病。可以容易地制备针对这些区域或器官的中的合适的局部制剂。
下肠道的局部应用可以用直肠栓剂(见上)或合适的灌肠制剂来实现。还可以使用局部的透皮膏药。
为了局部应用，药学上可接受的组合物可以制成合适的膏剂，它含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。用于局部施用本发明的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，药学上可接受的组合物可以制成合适的洗剂或乳剂，它含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。合适的载体包括但不限于矿物油、山梨糖醇酐单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸酯蜡、鲸蜡醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
对于眼用，药学上可接受的组合物可以制成微化的悬浮液，它在等渗的、调过pH的无菌盐水中，或优选地制成在等渗的、调过pH的无菌盐水中的溶液，可以有或者没有防腐剂例如氯苄烷铵。或者，对于眼用，药学上可接受的组合物可以制成膏剂，例如凡士林。
本发明的药学上可接受的组合物还可以通过鼻气雾剂或吸入来施用。这样的组合物可以根据药物制剂领域熟知的技术来制备，且可以制成盐水溶液，采用苄醇或其它合适的防腐剂、能增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其它常规增溶剂或分散剂。
更优选地，本发明的药学上可接受的组合物是制成口服制剂。
可以与载体组合来制成单个剂量形式的组合物的本发明化合物的量随治疗的宿主、特定的给药模式而变。优选地，组合物应当制成使剂量为0.01-100mg/kg体重/天的抑制剂能施用给接受这些组合物的患者。
还应当理解，针对任何特殊患者的特定剂量和治疗方案要取决于多种因素，这包括采用的特定化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食状况、给药时间、排泄速率、药物组合、治疗医生的判断和要治疗的特定疾病的严重程度。本发明的化合物在组合物中的量也取决于组合物中的特定化合物。
根据要治疗或预防的特定不适症、疾病，本发明的组合物中还可以含有通常用来治疗或预防这些疾病的其它治疗剂。如这里所使用的，通常用来治疗或预防特定疾病或不适症的其它治疗剂被称作“适用于要治疗的疾病或不适症”。
例如，化疗药或其它的抗增殖药可以与本发明的化合物相组合来治疗增殖性疾病和癌症。已知的化疗药的实例包括但不限于GleevecTM、阿霉素、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、氟尿嘧啶、拓朴替康、紫杉醇、干扰素和铂衍生物。
本发明的抑制剂还可以组合的药物的其它实例包括但不限于治疗阿尔茨海默氏病的药物，例如Aricepe和Excelon；治疗帕金森病的药物，例如L-DOPA/卡比多巴、恩他卡朋、罗吡尼洛、普拉克索、溴隐亭、硫内麦角林、苯海索和金刚烷胺；治疗多硬化症(MS)的药物，例如β-干扰素(例如Avonex和Rebif)、Copaxone和米托蒽醌；治疗哮喘的药物，例如沙丁胺醇和Singulair；治疗精神分裂症的药物，例如再普乐、维思通、恩瑞康和氟哌啶醇；抗炎药，例如皮质类固醇、TNF阻断剂、IL-1RA、硫唑嘌呤、环磷酰胺和柳氮磺吡啶；免疫调节和免疫抑制剂，例如环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、吗乙基麦考酚酯、干扰素、皮质类固醇、环磷酰胺、硫唑嘌呤和柳氮磺吡啶；神经营养因子，例如乙酰胆碱酯酶抑制剂、MAO抑制剂、干扰素、抗惊厥药、离子通道阻断剂、利鲁唑和抗帕金森病药；治疗心血管病的药物，例如β--阻断剂、ACE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙通道阻断剂和抑制素；治疗肝病的药物，例如皮质类固醇、考来烯胺、干扰素和抗病毒药；治疗血液病的药物，例如皮质类固醇、抗白血病药和生长因子；和治疗的药物，治疗免疫缺陷病的药物，例如γ-球蛋白。
可以与本发明的化合物组合来治疗增殖病和癌症的化疗药或其它抗增殖药的其它实例包括但不限于，例如，可以与本发明的创造性的抗癌剂组合的治疗或抗癌剂包括手术、放射疗法(但是在少数实例中，γ-辐射、中子束放疗、电子束放疗、质子疗法、短距离放疗和全身的放射性同位素，仅举几个例子)、内分泌疗法、生物反应改善剂(干扰素、白介素和肿瘤坏死因子(TNF)仅举几个例子)、高温症和寒冷疗法，减轻任何副作用的药(例如止吐药)和其它许可的化疗药，包括但不限于烷基化药(氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、异环磷酰胺)、抗代谢物(氨甲蝶呤)、嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(6-巯嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、吉西他滨)、纺锤体毒素(长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素(依托泊苷、伊立替康、拓朴替康)、抗生素(阿霉素、博来霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀)、无机离子(顺氯氨铂、卡铂)、酶(天冬酰胺酶)和激素(三苯氧胺、醋酸亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)、GleevecTM、阿霉素、地塞米松和环磷酰胺。为了要更全面的说明最新的癌症疗法，参见http//www.nci.nih.gov/，在http//www.fda.gov/cder/cancer/druglistframe.htm上的FDA批准的肿瘤药物列表和The Merck Manual，Seventeenth Ed.1999。它们的全部内在特此引作参考。
在本发明的组合物中的其它治疗剂的量不应超过在含有该治疗剂作为单独的活性成分的组合物中通常施用的量。优选地，在现在公开的组合物中的其它治疗剂的量是含有该药作为单独的治疗活性成分的组合物中通常用量的约50％～100％。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种抑制生物样品中的Aurora-1、Aurora-2、Aurora-3和/或FLT-3激酶活性的方法，它包括将所述的生物样品与式V化合物或含有所述化合物的组合物接触的步骤。
这里使用的术语“生物样品”包括但不限于细胞培养物或其提取物；从哺乳动物获取的活组织切片材料或其提取物；和血液、唾液、尿、粪便、精液、眼泪或其它的体液或其提取物。
抑制生物样品中的Aurora-1、Aurora-2、Aurora-3和/或FLT-3激酶活性可以用于本领域技术人员已知的各种目的。这些目的的实例包括但不限于输血、器官移植、生物标本保藏和生物实验。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种抑制患者的Aurora-1激酶活性的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或含有所述化合物的组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种抑制患者的Aurora-2激酶活性的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或含有所述化合物的组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种抑制患者的Aurora-3激酶活性的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或含有所述化合物的组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种抑制患者的FLT-3激酶活性的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或含有所述化合物的组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种抑制患者的Aurora-1、Aurora-2、Aurora-3和FLT-3激酶活性的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或含有所述化合物的组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明提供了一种治疗或减轻患者的Aurora介导的疾病或不适症的严重程度的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或含有所述化合物的组合物的步骤。
这里使用的术语“Aurora介导的疾病”指已知Aurora家族蛋白激酶在其中起作用的的任何疾病或其它有害的不适症或疾病。这样的疾病或不适症包括但不限于黑色素瘤、白血病或结肠癌、乳房癌、胃癌、卵巢癌、子宫颈癌、黑色素瘤、肾癌、前列腺癌、淋巴瘤、神经母细胞瘤、胰腺癌、白血病和膀胱癌。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种治疗患者癌症的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或其组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种治疗患者的黑色素瘤、淋巴瘤、神经母细胞瘤、白血病或结肠癌、乳房癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、CNS、子宫颈癌、前列腺癌或胃管癌的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或其组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种治疗患者的急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、肥大细胞病或胃肠基质瘤(GIST)的方法，它包括给所述的患者施用式V化合物或其组合物的步骤。
本发明的另一方面涉及对患者癌细胞的有丝分裂的中断，它包括给所述的患者施用式V化合物或其组合物的步骤。
根据另外一个实施方案，本发明涉及一种治疗或减轻患者的癌症严重程度的方法，它包括用式V化合物或其组合物抑制Aurora-1、Aurora-2和/或Aurora-3来中断癌细胞的有丝分裂的步骤。
在一个替代方案中，本发明的方法利用不含有其它治疗剂的组合物，它还包括另外的一个步骤给所述的患者单独施用其它的治疗剂。在单独施用这些其它的治疗剂时，它们可以在施用本发明的化合物之前、按顺序或之后施用。
具体实施例方式
为了更充分地理解这里描述的本发明，阐述了下面的实施例。应当理解，这些实施例只是用于解释目的，而不应当理解为以任何方式限制本发明。
实施例总流程图
实施例14，6-二氯嘧啶-2-甲基砜(A)按照下述的基本上与Koppell等人，JOG，26，1961，792所述的方法相似的方法制备。
在20分钟的时间内，向在0℃搅拌的4，6-二氯-2-(甲基硫代)嘧啶(50g，0.26mol)于二氯甲烷(1L)的溶液中加入间氯过氧苯甲酸(143.6g，0.64mol)。让溶液温度升至室温，搅拌4小时。混合物用二氯甲烷(1.5L)稀释，然后依次用50％Na2S2O3/NaHCO3溶液(2×200ml)、sat.NaHCO3溶液(4×300ml)和盐水(200ml)处理，然后干燥(MgSO4)。真空除去溶剂，得到灰白色的固体，将其重新溶解到EtOAc(1L)中，依次用饱和NaHCO3溶液(3×300ml)和盐水(100ml)处理，然后干燥(MgSO4)。真空除去溶剂，得到白色固体状的标题化合物(A)(55.6g，96％产率)。1H NMR CDCl3δ3.40(3H，s，CH3)、7.75(1H.s.ArH)。
实施例2环丙烷甲酸[4-(4，6-二氯-嘧啶-2-基硫烷基)-苯基]-酰胺(C)将化合物A(10g，44.04mmol)和环丙烷甲酸(4-巯基-苯基)-酰胺(B，8.51g，44.04mmol)于叔丁醇(300ml)中的悬浮液真空脱气，然后用氮气冲洗。混合物于90℃在氮气气氛中搅拌1小时，然后真空除去溶剂。将残余物溶解到醋酸乙酯中(600ml)，用碳酸钾和氯化钠的水溶液洗涤。有机提取物经硫酸镁干燥，浓缩成小体积并结晶。收集无色晶体状的产物C(11.15g，74％)。1H-NMR DMSO-d6，δ0.82-0.89(4H，m)，1.80-1.88(1H，m)，7.55(2H，d)，7.70-7.76(3H，m)，10.49(1H，s)；M+H，340。
实施例3环丙烷甲酸{4-[4-氯-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}酰胺(D)用二异丙基乙基胺(0.614ml、3.53mmol)和碘化钠(530mg，3.53mmol)处理化合物C(1.0g，2.94mmol)和3-氨基-5-甲基吡唑(314mg，3.23mmol)于二甲基甲酰胺(6ml)中的混合物。混合物于85℃在氮气下搅拌4小时，冷却至室温，以醋酸乙酯稀释。溶液用水(x4)洗涤，经硫酸镁干燥，浓缩至5ml，经结晶后收集无色晶体，得到标题化合物D(920mg，78％)。1H-NMR DMSO-d6，δ0.80-0.87(4H，m)，1.77-1.85(1H，m)，1.92(1H，s)，5.24(1H，br s)，6.47(1H，br s)，7.55(2H，d)，7.70-7.80(2H，m)，10.24(1H，s)，10.47(1H，s)，11.92(1H，s)。
实施例4环丙烷甲酸{4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}-酰胺(V-1)用N-甲基哌嗪(10ml)处理化合物D(2.373g，5.92mmol)，混合物在110℃搅拌2小时。真空除去多余的N-甲基哌嗪，残余物溶解到醋酸乙酯中，用碳酸氢钠水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，浓缩。残余物在甲醇中结晶得到目的产物V-1的无色晶体(1.82g，66％)，1H-NMR DMSO-d6，(30.81(4H，d)，1.79(1H，m)，2.01(3H，s)，2.18(3H，s)，2.30(4H，m)，3.35(屏蔽信号)，5.42(1H，s)，6.02(1H，br s)，7.47(2H，d)，7.69(2H，d)，9.22(1H，s)，10.39(1H，s)，11.69(1H，s)。
实施例5 N-{4-[4-(5-甲基-2H-吡唑-3-基甲基)-6-(4-丙基-哌嗪-1-基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}-丙酰胺(V-5)先后用N-丙基哌嗪二氢溴化物(887mg，3.06mmol)和二异丙基乙基胺(1.066mL，6.12mmol)处理在n-BuOH(5mL)中的乙烷甲酸{4-[4-氯-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}酰胺(119mg，0.306mmol，通过与实施例1、2和3类似的方法制备)。得到混合物在110℃搅拌20小时。减压除去溶剂，用制备HPLC纯化残余物，得到标题化合物。1H NMR(DMSO)δ1.10(3H，t)，2.05(3H，s)，2.35(2H，d)，3.30(4H，s)，3.70(4H，s)，5.45(1H，s)，6.05(1H，br s)，7.45(2H，d)，7.70(2H，d)，9.20(1H，s)，10.05(1H，s)，11.70(1H，br s)。
实施例6 N-[4-(4，6-二氯-嘧啶-2-基氧)-苯基]-乙酰胺用60％的氢化钠于矿物油(176mg，4.40mmol)中的分散系处理在环境温度搅拌的4-乙酰胺基苯酚(666mg，4.40mmol)于无水THF(40ml)中的溶液。将反应混合物在环境温度下搅拌30分钟，然后加入4，6-二氯-2-甲烷磺酰基-嘧啶(1.0g，4.40mmol)。反应继续搅拌3小时，再用NH4Cl和EtOAc的饱和水溶液稀释。分离有机层，用NaCl的饱和水溶液洗涤，经硫酸镁干燥，然后真空浓缩。通过柱层析(硅胶，MeOH∶CH2Cl2，5∶95)纯化残余物得到固体状的标题化合物1.25g，(95％)1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ2.06(3H，s)，7.18(2H，d，J＝8.5Hz)，7.62(2H，d，J＝8.5Hz)，10.05(1H，s)，LC-MSES+＝298.16，ES-＝296.18)。
实施例7环丙烷羧酸{4-[4-(4-甲基-4-氧-哌嗪-1-基)-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}-酰胺(V-19)将化合物V-1(1g，2.1mmol)悬浮到二氯甲烷(20mL)中，冷却到0℃，用10等份mCPBA的二氯甲烷溶液以10分钟的间隔处理(每一等份由100mg，0.44mmol在1ml DCM中组成)。每加入一份时，溶液变为褐色，并随着mCPBA的消耗而逐渐恢复成黄色。一旦所有的原料全部耗尽，就真空去除溶剂，通过制备HPLC纯化得到黄色油，得到灰白色固体状的标题化合物(69mg，7％)；1H NMR(DMSO-d6)0.85-0.91(4H，m)，1.90(1H，m)，2.10(3H，s)，3.10-3.17(2H，m)，3.25(3H，s)，3.50-3.66(4H，m)，3.98(2H，d)，5.50(1H，s)，6.11(1H，br s)，7.56(2H，d)，7.80(2H，d)，9.42(1H，s)，10.50(1H，s)，11.82(1H，br s)。
实施例8环丙烷甲酸{4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-(5-甲基-2H-吡唑-3-基氨基)-嘧啶-2-基硫烷基]-苯基}-酰胺甲烷磺酸酯(V-1ii)将化合物V-1(515mg，1.11mmol)悬浮在乙醇(80mL)中，回流加热。向清液中加入甲烷磺酸(106mg，1.11mmol)，反应混合物继续回流10分钟。让混合物冷却至室温，蒸发溶剂直至开始形成沉淀。然后把混合物冷至0℃，通过过滤收集得到的沉淀，真空干燥，得到白色固体状的标题化合物(290mg，47％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)0.81-0.82(4H，d)，1.82(1H，m)，2.36(6H，s)，2.83(3H，d)，3.03-3.12(4H，m)，3.40-3.47(2H，m)，3.79(br s，OH)，4.14-4.18(2H，m)，5.50(1H，s)，6.05(1H，s)，7.49(2H，d)，7.72(2H，d)，9.61(1H，s)，10.41(1H，brs)，10.80(1H，s)。
实施例9在下面的表4中所列出的下述化合物是根据本发明的方法和基本上与上面的实施例1-8所述的类似的方法制备的。这些化合物的特征数据总结在下面的表4中，这包括1H NMR、熔点(m.p.)和质谱(MS)数据。
除非另有说明，表4中所述的注解1H NMR是于400MHz从氘化的二甲基亚砜(dmso-d6)得到的。
表4代表性化合物的特征数据
生物实验本发明的化合物作为激酶抑制剂的活性可以通过体外、体内或细胞系实验。体外实验包括测定对激活的Aurora和/或FLT-3酶的激酶活性或ATP酶活性的抑制。替换性的体内实验是对抑制剂结合Aurora和/或FLT-3的能力进行量化，这可以通过在结合前放射标记抑制剂、分离抑制剂/Aurora和/或抑制剂/FLT-3复合物并测定结合的放射标记物的量来完成，或者通过将新化合物与结合到已知的放射配体上的Aurora和/或FLT-3一起温育的竞争实验来完成。可以使用Aurora的任何类型或Aurora的异构体，这取决于要抑制的Aurora类型或异构体。在下面的实施例中阐述在酶实验中使用的详细条件。
实施例10抑制Aurora时的Ki测定使用标准偶联酶实验(Fox等人(1998)Protein Sci 7，2249)按照下述方式筛选化合物抑制Aurora的能力。向含有0.1M HEPES 7.5、10mMMgCl2、1mM DTT、25mM NaCl、2.5mM磷酸烯醇丙酮酸酯、300mM NADH、30mg/ml丙酮酸激酶、10mg/ml乳酸脱氢酶、40mM ATP和800μM肽(LRRASLG，American Peptide，Sunnyvale，CA)的实验原料缓冲液中加入本发明化合物的DMSO溶液至终浓度为30μM。得到的混合物在30℃温育10分钟。在实验中通过加入10μL Aurora原料溶液达到终浓度70nM来启动反应。使用BioRad Ultramark平板读数器(Hercules，CA)，在5分钟读数时间内，在30℃检测340nm吸收值，得到反应速率。从反应速率数据随抑制剂浓度的变化来确定Ki值。
发现本发明的式V化合物是Aurora-1、Aurora-2和Aurora-3的抑制剂。
实施例11抑制FLT-3时的Ki测定使用辐射测量过滤器结合实验(radiometric filter-bindingassay)筛选化合物抑制FLT-3活性的能力。该实验监视33P向底物聚(Glu，Tyr)4∶1(pE4Y)中的整合。反应在含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、1mM DTT、0.01％BSA和2.5％DMSO的溶液中进行。实验中最终的底物浓度为90μM ATP和0.5mg/ml pE4Y(均来自Sigma Chemicals，St Louis，MO)。本发明的化合物的终浓度通常是0.01和5μM之间。典型地，通过从实验化合物的10mM DMSO原料制备系列稀释度，进行12点滴定。反应在室温下进行。
制备了两种实验溶液。溶液1含有100mM HEPES(pH7.5)、10mMMgCl2、25mM NaCl、1mg/ml pE4Y和180μM ATP(每个反应含有0.3μCi的[γ-33P]ATP)。溶液2含有100mM HEPES(pH7.5)、10mM MgCl2、25mM NaCl、2mM DTT、0.02％BSA和3nM FLT-3。通过混合每50μl溶液1和2.5ml本发明的化合物在96孔平板上进行实验。反应用溶液2启动。在室温温育20分钟后，用50μl含有0.4mM ATP的20％TCA终止反应。然后将所有的反应体积转移到过滤平板上，通过来自TOMTEC(Hamden，CT)的Harvester 9600用5％TCA洗涤。通过PackardTop Count微板闪烁计数器(Packard Top Count MicroplateScintillation Counter)(Meriden，CT)分析整合进pE4y的33P的量。使用Prism软件处理数据得到IC50或Ki。
发现本发明的式V化合物是FLT-3的抑制剂。
实施例12在Colo205细胞实验中抑制Aurora的IC50测定还实验了化合物对细胞增殖的抑制。在该实验中，通过将10％牛胎儿血清、L-谷氨酰胺和青霉素/链霉素溶液加入到RPMI 1640培养基(Sigma)中制备出完全培养基。将结肠癌细胞(COLO-205细胞系)以1.25×104细胞/孔/1500μL的接种密度加入到96孔平板。通过系列稀释，在完全培养基中制备出实验化合物的溶液，向每个孔加入实验化合物溶液(50μL)。
为了测量最大增殖，用含有一系列只加有完全培养基(200μL)的孔的每个平板作为对照组。还向每个平板中加入介质对照组。平板在37℃温育2天。3H-胸腺嘧啶核苷(1mCi/mL、Amersham Phamacia UK)的原料溶液在RPMI培养基中稀释至20μCi/mL，然后将25μL这样的溶液加入到每个孔中。平板继续在37℃温育3小时，然后收获，用液体闪烁计数器测量3H-胸腺嘧啶核苷的摄入。
发现本发明的式V化合物是Colo205癌细胞的抑制剂。
实施例13在肿瘤和正常细胞类型的面板中测量细胞增殖3H胸腺嘧啶核苷掺入实验选择3H胸腺嘧啶核苷掺入实验作为较好地表征测定细胞增殖的方法。选择来自正常组织核广范围的不同肿瘤类型的细胞用于实验。许多肿瘤细胞会被选中的原因是它们表达高水平的Aurora蛋白(例如，MCF-7、PC3、A375、A549)(参见section 5.3.5 and Bischoff等人EMBOJ.1998 17，3052-3065)和/或能在裸小鼠或裸大鼠中形成肿瘤(例如，HCT116、MCF-7和MDA-MB-231)。
将对数生长的细胞与化合物一起温育96小时。为了测量细胞增殖，在实验结束之前3小时向每个孔中加入0.5μCi3H胸腺嘧啶核苷。然后收获细胞，洗涤，在Wallac微板β-计数器上计算掺入的放射活性。为了测定对增殖的抑制，绘制cpm与化合物浓度的关系图，从图中确定IC50。
下面的表5阐明了在上述的细胞增殖实验中使用的细胞系。对于每一个细胞系，测定了细胞增殖的抑制和3H胸腺嘧啶核苷的掺入(96小时时间点)
表5细胞系
尽管已经描述了本发明的一些实施方案，显然，改变这些基本实施例可以得到利用本发明的化合物和方法的其它上述方案。因此，应当认识到本发明的范围是由权利要求限定，而不是由已经通过实施例代表的特定实施方案限定。
权利要求
1.一种制备式I化合物的方法 其中Q和T中的每一个独立地选自氧、硫或N(R)；每一个R独立地选自氢或任选取代的C1-6脂族基，其中结合到同一个氮原子上的两个R任选地与该氮原子一起形成任选取代的3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的环，该环除了结合的氮原子外还含有0-3个独立地选自氮、氧或硫的杂原子；Rx是U-R5；R5选自卤素、NO2、CN、R或Ar；每一个U独立地选自价键或C1-4亚烷基链，其中U中最多2个亚甲基单元任选地和独立地被替换为-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(R)SO2-、-SO2N(R)-、-N(R)-、-C(O)-、-CO2-、-N(R)C(O)-、-N(R)C(O)O-、-N(R)CON(R)-、-N(R)SO2N(R)-、-N(R)N(R)-、-C(O)N(R)-、-OC(O)N(R)-、-C(R)＝NN(R) 或-C(R)＝N-O-；每一个Ar独立地选自任选取代的环，该环选自3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫；Ry是-N(R1)2、-OR1或-SR1；每一个R1独立地选自R或3-8元单环的、8-10元双环的或10-12元三环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中每一个R1任选地且独立地被最多4个选自R2的取代基取代；每一个R2独立地选自-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2(R3)；每一个R3独立地选自R或Ar；Rz1选自C1-6脂族基或3-8元单环的、8-10元双环的或10-12元三环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中Rz1被0-4个独立地选自R2基团的取代基取代；Rz2是C1-6脂族基或3-8元单环的、8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中Rz2被0-4个独立地选自氧代或U-R5的取代基取代；所述的方法包括在合适的介质中将式II化合物和式Ry-H化合物组合的步骤 Ry-H其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L3是合适的离去基团。
2.根据权利要求1的方法，其中所述的式II化合物是通过在合适的介质中将式III化合物与式Rz1-Q-H化合物组合来制备 Rz1-Q-H其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L2是合适的离去基团。
3.根据权利要求2的方法，其中所述的式III化合物是通过在合适的介质中将式IV化合物与式Rz2-T-H化合物组合来制备 Rz2-T-H其中所述的合适的介质包括i)合适的溶剂；和ii)任选地，合适的碱；且L1是合适的离去基团。
4.根据权利要求1的方法，其中L3选自卤素、任选取代的芳基磺酰基或任选取代的烷基磺酰基。
5.根据权利要求4的方法，其中L3是氟、氯、溴、碘、对甲苯磺酰基、甲烷磺酰基、对硝基苯基磺酰基、对溴苯基磺酰基或三氟甲烷磺酸酯。
6.根据权利要求5的方法，其中L3是氯或碘。
7.根据权利要求2的方法，其中L2是卤素、任选取代的芳基磺酰基或任选取代的烷基磺酰基。
8.根据权利要求7的方法，其中L2是氟、氯、溴、碘、对甲苯磺酸酯、甲烷磺酸酯、对硝基苯基磺酰基、对溴苯基磺酰基或三氟甲烷磺酸酯。
9.根据权利要求8的方法，其中L2是氯或碘。
10.根据权利要求3的方法，其中L1是卤素、任选取代的芳基磺酰基或任选取代的烷基磺酰基。
11.根据权利要求10的方法，其中L1是任选取代的烷基磺酰基。
12.根据权利要求11的方法，其中L1是甲烷磺酰基。
13.根据权利要求1的方法，其中Q是N(R)。
14.根据权利要求1的方法，其中T是氧或硫。
15.根据权利要求14的方法，其中T是硫。
16.根据权利要求1的方法，其中Ry是-OR1或-N(R1)2。
17.根据权利要求16的方法，其中Ry是-N(R1)2，其中R1选自R或3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，或者每一个R1都是R，这样在同一个氮原子上两个R一起形成任选取代的4-7元饱和环，它含有至多2个另外的独立地选自氮、氧或硫的杂原子，且其中每一个R1任选地和独立地被至多4个选自下述基团的取代基取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
18.根据权利要求17的方法，其中Ry是-N(R1)2，其中每一个R1独立地选自R，其中R是氢或任选取代的C1-4脂族基。
19.根据权利要求17的方法，其中Ry是-N(R1)2，其中每一个R1都是R，这样两个R基团一起形成任选取代的4-7元饱和环，它含有至多2个另外的独立地选自氮、氧或硫的杂原子。
20.根据权利要求19的方法，其中Ry是选自吡咯烷-1-基、哌啶-1-基、吗啉-4-基、硫代吗啉-4-基、哌嗪-1-基、二氮杂环庚基或四氢异异喹啉基，其中每一个环任选地被一个或两个独立地选自下述基团的取代基取代甲基、乙基、甲磺酰基、(CH2)2SO2CH3、环丙基、CH2环丙基、(CH2)2OH、CO2叔丁基、CH2苯基、苯基、NH2、NH(CH3)、N(CH3)2、(CH2)2NH2、(CH2)2吗啉-4-基、(CH2)2N(CH3)2、异丙基、丙基、叔丁基、(CH2)2CN或(CH2)2C(O)吗啉-4-基。
21.根据权利要求1的方法，其中Rz1是3-7元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环任选地和独立地被至多3个选自下述基团的取代基取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
22.根据权利要求21的方法，其中Rz1是5-6元完全不饱和的含有1-3个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环任选地和独立地被至多3个选自下述基团的取代基取代-R3、-OR3、-SR3、-CN、-NO2、氧代、卤素、-N(R3)2、-C(O)R3、-OC(O)R3、-CO2R3、-SO2R3、-SO2N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-C(O)NR(R3)、-C(O)N(R3)2、-OC(O)NR(R3)、-OC(O)N(R3)2、-NR3C(O)R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
23.根据权利要求22的方法，其中Rz1是任选取代的环，它选自吡唑或下述5-6元环中的任何一个
24.根据权利要求23的方法，其中Rz1是含有至多2个独立地选自-N(R3)2、-OR3或C1-C4脂族基的取代基的吡唑环。
25.根据权利要求24的方法，其中Rz1是被选自甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基、环丙基或苯基的一个取代基任选地取代的吡唑环。
26.根据权利要求1的方法，其中Rz2是任选取代的环，所述环选自5-6元单环的或8-10元双环的饱和的、部分不饱和的或完全不饱和的含有0-4个杂原子的环，所述的杂原子独立地选自氮、氧或硫，其中所述的环被至多3个独立地选自下述基团的取代基任选地取代-CN、-NO2、-C(O)R3、-CO2R3、-C(O)NR(R3)、-NR3C(O)R3、-N(R3)2、-N(R3)SO2R3、-NR3C(O)N(R3)2或-NR3CO2R3。
27.根据权利要求26的方法，其中Rz2选自苯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、萘基、四氢萘基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、喹唑啉基、苯并二氧杂芑基、异苯并呋喃、茚满基、吲哚基、二氢吲哚、吲唑基或异喹啉基，其中Rz2被至多3个独立地选自下述基团的取代基任选地取代-Cl、-Br、-F、-CN、-CF3、-COOH、-CONHMe、-CONHEt、-NH2、-NHAc、-NHSO2Me、-NHSO2Et、-NHSO2(正丙基)、-NHSO2(异丙基)、-NHCOEt、-NHCOCH2NHCH3、-NHCOCH2N(CO2t-Bu)CH3、-NHCOCH2N(CH3)2、-NHCOCH2CH2N(CH3)2、-NHCOCH2CH2CH2N(CH3)2、-NHCO(环丙基)、-NHCO(异丙基)、-NHCO(异丁基)、-NHCOCH2(吗啉-4-基)、-NHCOCH2CH2(吗啉-4-基)、-NHCOCH2CH2CH2(吗啉-4-基)、-NHCO2(叔丁基)、-NH(环己基)、-NHMe、-NMe2、-OH、-OMe、甲基、乙基、环丙基、异丙基或叔丁基。
28.根据权利要求27的方法，其中Rz2含有1个选自-NR3C(O)R3的取代基，其中每一个R3独立地选自R或Ar，且其中R是氢或任选取代的C1-4脂族基。
29.根据权利要求1的方法，其中所述的合适的溶剂是质子溶剂、卤代烃、醚、芳香烃、极性的或非极性的非质子溶剂、或其任意混合物。
30.根据权利要求29的方法，其中所述的溶剂是C1-5直链的或支化的烷基醇、醚、或极性的或非极性的非质子溶剂。
31.根据权利要求1的方法，其中所述的合适的碱选自有机胺、碱土金属碳酸盐、碱土金属氢化物或碱土金属氢氧化物。
32.根据权利要求31的方法，其中所述的合适的碱选自三烷基胺、碳酸钠、碳酸钾、氢化钠、氢化钾、氢氧化钠或氢氧化钾。
33.根据权利要求1的方法，其中所述的方法用于制备选自下面表1和表2中化合物的化合物表1 表2.
34.式V化合物 或其药学上可接受的衍生物或盐，其中R5选自氢或C1-4脂族基；R6选自C1-3脂族基；且R7选自C1-4脂族基。
35.根据权利要求34的化合物，其中R5选自氢、甲基、乙基、叔丁基或异丙基。
36.根据权利要求35的化合物，其中R6选自甲基、乙基或环丙基。
37.根据权利要求36的化合物，其中R7选自甲基、乙基、叔丁基或环丙基。
38.选自下面的表1中的化合物的化合物表1
39.选自下面的表3中的化合物的化合物表3.
40.含有权利要求34的化合物和药学上可接受的载体、辅剂或赋形剂的组合物。
41.根据权利要求40的组合物，还含有抗增殖剂或化疗剂。
42.一种抑制生物样品的Aurora-1的方法，它包括使所述的样品接触(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
43.一种抑制生物样品的Aurora-2的方法，它包括使所述的样品接触(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
44.一种抑制生物样品的Aurora-3的方法，它包括使所述的样品接触(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
45.一种抑制生物样品的FLT-3的方法，它包括使所述的样品接触(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
46.一种抑制患者的Aurora-1的方法，它包括给所述的患者施用(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
47.一种抑制患者的Aurora-2的方法，它包括给所述的患者施用(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
48.一种抑制患者的Aurora-3的方法，它包括给所述的患者施用(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
49.一种抑制患者的FLT-3的方法，它包括给所述的患者使用(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
50.一种抑制患者的Aurora-1、Aurora-2、Aurora-3和FLT-3的方法，它包括给所述的患者使用(a)权利要求34的化合物；或(b)权利要求40的组合物。
51.一种治疗患者癌症的方法，它包括给所述的患者施用权利要求40的组合物的步骤。
52.根据权利要求51的方法，它包括给所述的患者施用其它化疗剂或抗增殖剂的步骤。
53.根据权利要求51的方法，其中所述的癌症选自黑色素瘤、淋巴瘤、神经母细胞瘤、白血病或结肠癌、乳房癌、肺癌、肾癌、卵巢癌、胰腺癌、肾癌、CNS、子宫颈癌、前列腺癌或胃管癌。
54.根据权利要求51的方法，其中所述的癌症选自急性髓细胞白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、肥大细胞病或胃肠基质瘤(GIST)。
55.一种治疗或减轻患者的癌症的严重程度的方法，它包括通过用权利要求34的化合物抑制Aurora蛋白激酶来中断癌细胞的有丝分裂的步骤。
56.根据权利要求55的方法，它包括给所述的患者施用权利要求40的组合物的步骤。
全文摘要
本发明提供了一种制备三－或四－取代的嘧啶的简单方法。本方法可以用于制备蛋白激酶、特别是Aurora激酶的抑制剂。这些抑制剂用于治疗或减轻Aurora介导的疾病或不适症的严重程度。
文档编号C07D403/14GK1675199SQ03818888
公开日2005年9月28日 申请日期2003年6月19日 优先权日2002年6月20日
发明者J-D·沙里耶, F·玛泽, D·凯, A·米勒 申请人:沃泰克斯药物股份有限公司