用抗il－2受体的抗体治疗呼吸道疾病的制作方法

专利名称：用抗il－2受体的抗体治疗呼吸道疾病的制作方法
技术领域：
本发明总地涉及抗体治疗领域，具体是抗-IL-2受体抗体，也涉及用这些抗体疗法治疗T-细胞介导的呼吸道疾病和过敏性疾病，具体是Th1细胞和Th2细胞介导的过敏性疾病和/或症状，最优选哮喘的方法。
背景技术：
T细胞的活化和细胞因子分泌在许多呼吸道疾病和过敏性疾病，包括最令人注意的哮喘中起着关键作用。哮喘是一种复杂的疾病，其特征是气道炎症伴有间歇性、可逆性气道阻塞和气道超敏反应。虽然其病因未知，包含淋巴细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的气道炎症是慢性持续性哮喘所有患者的共同特征。大部分由活化T细胞合成和释放的细胞因子，引起和维持了气道的炎症过程(Drazen J.M.等，J Exp.Med.1831-5(1996))。CD4+/CD25+T细胞所分泌的各种细胞因子参与了慢性哮喘炎症，包括IL-3、IL-4、IL-5和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Kon O.M.等，Inflamm.Res.48516-23(1999))。在导致气道纤维化的哮喘中，活化的T细胞可能是引起和调节气道修复过程的中心环节。因此，特异性导向抑制活化T细胞的治疗方案对哮喘患者可能有益。
尸体解剖研究以及支气管活检标本资料，证实在哮喘气道中T细胞数量增加。对15例哮喘患者的验尸研究揭示，哮喘患者气道中T细胞数量大约是10例无哮喘年龄相匹配个体的两倍(Azzawi M.等，Am.Rev.Respir.Dis.1451477-82(1992))。这些细胞是活化的，如表达白介素-2(IL-2)受体(CD25)、人白细胞抗原-DR、极晚期抗原-1和IL-5mRNA所表明的那样。严重哮喘患者外周血研究证明CD4+/CD25+T细胞数量增加(Corrigan C.J.等，Lancet 11129-32(1988))。哮喘患者支气管肺泡灌洗液研究也证明活化的CD25+T细胞数量增加，以及IL-2和可溶性IL-2受体的水平升高(Alexander A.G.等，J.Eur.Respir.8574-8(1995)；Park C.S.等，Chest.106400-6(1994)；Walker C.等，J.Allergy Clin.Immunol.88935-42(1991))。
达珠单抗(Daclizumab)是一种免疫抑制剂，它是用重组DNA技术生产的人源化免疫球蛋白IgGl单克隆抗体。达珠单抗能与活化淋巴细胞表面表达的人高亲和力IL-2受体的α亚基(p55α、CD25或Tac亚基)特异性结合。Tac亚基仅在与外源抗原或与IL-2相互作用后才表达。因为达珠单抗由90％人免疫球蛋白序列和仅10％的鼠序列构成，所以它的免疫原性很低。美国专利号5,530,101和5,693,761中公开了达珠单抗的氨基酸和核酸序列，将其各自以全文纳入本文作为参考。
美国食品和药品管理管理局已经批准可将达珠单抗用于接受环孢霉素和类固醇，和或不和咪唑硫嘌呤或霉酚酸酯(ZENEPAX，Package Insert，RocheLaboratories(2000))治疗而伴有免疫抑制的患者中预防肾同种异体移植排斥。与2位在第一次接受尸体肾同种异体移植患者的双盲对照试验中采用安慰剂相比，接受5个剂量(1mg/kg)达珠单抗的患者在移植后6个月内急性排斥发生率降低至40％。采用达珠单抗不伴有其它毒性，发生机会性感染或淋巴瘤也不增加(Vincenti F.等，J.Med.N.Engl.338161-5(1998)；Nashan B.等，Transplantation 67110-5(1999))。
也在接受环孢霉素和/或类固醇而伴有免疫抑制的自身免疫性眼葡萄膜炎患者中评价了达珠单抗。让患者停用全身性免疫抑制剂，最终每4周接受一次达珠单抗输液。看来在治疗12个月期间10位患者中达珠单抗防止了8位没有出现严重的威胁视力的眼内炎症疾病，视力无加重。对该治疗病人的耐受性良好(Nussenblatt R.B.等，Proc.Nat’l.Acad Sci U.S.A.967462-6(1999))。
在19例中度到重度牛皮癣患者中进行的达珠单抗I期多剂量研究，显示该药物耐受性良好，没有伴随其给药的特定副反应。在第2、4、8、12和16周给病人输液达珠单抗(2mg/kg加载剂量，然后是1mg/kg)。该研究显示，在每2周给药的前4周治疗期间，均阻断了外周血和组织中的CD25。经预先治疗的病人PASI评分小于36表明8周时严重性平均降低了30％(P＝0.02)。4周后开始程度不同地使受体去饱和，这与疾病改善逆转相关。在16周治疗期间，IL-2受体α-亚基的表达降低了44.8％。在本研究过程中T细胞绝对计数没有显示明显改变。本研究期间达珠单抗没有产生明显的副反应(Krueger J.G.等，J.Am.Acad.Dermatol.43448-58(2000))。
由于呼吸道疾病，尤其是T细胞介导的疾病如哮喘的流行，以及缺少治疗呼吸道疾病的有效方法，所以非常需要本发明所提供的更有效的治疗方法和制剂。特别需要新的治疗方法和制剂，来治疗对常规非特异性免疫抑制疗法无反应的更严重的顽固性哮喘和其它T细胞介导的呼吸道疾病和过敏性疾病。本发明包括治疗T细胞介导的呼吸道疾病和过敏性疾病，尤其是呼吸道疾病如哮喘的方法，还包括治疗许多Th1细胞和Th2细胞介导的过敏性疾病和/或症状的方法。该方法包括给予抗IL-2受体的抗体，优选人源化抗体，达珠单抗和与达珠单抗相同的能结合IL-2受体表位的抗体。如本文公开的II期临床研究结果所证明的那样，与现有治疗方法相比，达珠单抗为治疗中度到重度哮喘提供了优异的临床效力和长期的有益效果。
发明概述本发明提供了治疗或预防性冶疗T细胞介导的疾病，尤其是由IL-2受体介导的(T细胞)活化而引起或加重的呼吸道疾病和/或过敏性疾病，如Th1细胞或Th2细胞介导的过敏性疾病或症状的方法。治疗或预防性冶疗呼吸道疾病和/或过敏性疾病和/或症状的方法包括将治疗或预防有效量的含有能与IL-2受体特异性结合的抗体的药物制剂给予需要这种治疗的病人。在另一实施方式中，该治疗方法还包括将治疗所述疾病的联用药物给予病人。
在一个优选实施方式中，可用本发明方法来治疗选自以下的疾病哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、鼻息肉病、Churg-Strauss综合征(变应性肉芽肿性脉管炎)、鼻窦炎和慢性阻塞性肺病(COPD)。
在其它优选实施方式中，可用本发明治疗方法治疗的疾病是Th2-细胞介导的过敏性疾病和/或症状，选自哮喘、特应性皮炎、过敏反应、风疹(荨麻疹)、过敏性鼻炎、鼻息肉病、鼻窦炎、变应性结膜炎、皮肤过敏症、湿疹、枯草热、过敏性肠胃炎或Churg-Strauss综合征。
在另一实施方式中，可用本发明治疗方法治疗的疾病是Th1细胞介导的疾病和/或症状，选自间质性肺病(ILD)(如特发性肺纤维症)、超敏性肺病和超敏性肺炎。在优选实施方式中，此治疗方法可用于任何类型的病因或发病机制所引起的轻度、中度或重度哮喘患者。在特别优选的实施方式中，该方法用于慢性持续性哮喘患者或中度到重度哮喘患者。具体说，可将本方法用于皮质类固醇控制不佳的哮喘患者。在其它特定实施方式中，可用本发明方法治疗特应性或非特应性哮喘患者，特应性或非特应性哮喘包括但不限于过敏性哮喘、支气管哮喘、锻炼引起的哮喘、职业性哮喘、细菌感染引起的哮喘和“婴儿气喘(wheezy-infant)综合征”。在一个实施方式中，治疗哮喘的方法还包括将联用的哮喘药物给予患者。在优选实施方式中，所述联用哮喘药物选自吸入或口服类固醇，白三烯改良剂，吸入或口服β2-激动剂和吸入性异丙托铵。在一个优选实施方式中，联用哮喘药物是吸入性类固醇，选自倍氯米松、布地缩松、氟尼缩松、氟替卡松、曲安西龙、莫米松和奈德(acetonide)。
在优选实施方式中，用单克隆抗体，具体是嵌合的人源化抗体或人抗体实施本发明方法。在本发明的一些实施方式中，该抗体能中和IL-2受体的一种或多种生物学活性。
在尤其优选的实施方式中，实施本发明治疗方法中与IL-2受体特异性结合的抗体是达珠单抗，或与达珠单抗结合于相同表位的抗体。在另一实施方式中，可采用含有与达珠单抗的CDR氨基酸序列至少60％相同的抗体来实施该治疗方法。在其它实施方式中，实施该方法所用的抗-IL2受体抗体的CDR中至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或甚至99％氨基酸序列与达珠单抗CDR相同。在优选实施方式中，实施本发明方法所用的抗体与所述人IL-2受体的结合亲和力至少为108M-1，更优选至少109M-1。
在优选实施方式中，实施本发明方法可通过胃肠道外、静脉内、肌肉内或皮下给予含有抗IL2受体抗体的药物制剂。在优选实施方式中，所述制剂含有达珠单抗。在优选实施方式中，实施该方法所用药物制剂是含有约100mg/ml达珠单抗，约20-60mM琥珀酸缓冲液(或20-70mM组氨酸缓冲液)，pH约为5.5-6.5，约含0.01％-0.1％聚山梨醇酯和维持等渗性的张力缓冲剂(例如约75-150mM NaCl或约1-100mM MgCl2)的液体。
在其它实施方式中，实施本发明方法的药物制剂的治疗有效量是0.001mg/kg至10mg/kg，优选约0.5mg/kg至4.0mg/kg。在一些实施方式中，治疗有效量是约100mg和200mg之间的固定剂量。
附图简要说明

图1描述了实施例1所述中度到重度慢性持续性哮喘患者的达珠单抗II期研究的研究方案。
图2描述了实施例1所述中度到重度慢性持续性哮喘患者的达珠单抗II期研究的预备(run-in)期间进行吸入性皮质类固醇滴定的方案。
图3是实施例1所述II期研究对患者评价的时间表。
发明详述定义本文所用“抗体”指与某具体抗原特异性结合，或与某具体抗原产生免疫反应的免疫球蛋白分子，包括多克隆和单克隆抗体。该术语也包括免疫球蛋白的遗传工程改造形式或修饰形式，如嵌合抗体、人源化抗体、异质偶联抗体(如双特异性抗体、二抗体、三抗体和四抗体)和抗体的抗原结合片段，包括例如Fab’、F(ab’)2、Fab、Fv、rIgG和scFv片段。术语“scFv”指单链Fv抗体，此抗体中传统的双链抗体的重链和轻链的可变区连接成一条链。一般地，将接头肽插入两条链之间，使之适当折叠而产生活性结合位点。此外，本文所用术语“抗体”的意思也包括对特异性抗原有反应性的一种以上抗体的混合物(如能与IL-2受体反应的不同类型单克隆抗体的混合物)。
本文所用术语“特异性结合”、“选择性结合”、“特异性反应”或“特异性免疫反应”指可用于在异源性蛋白和其它生物分子群体中确定抗体存在的结合反应。换句话说，是指抗体基本上不与特定抗原以外的任何抗原发生交叉反应的结合反应。因此，例如，当抗体与所需抗原结合的亲和力至少比背景(即非特异性/交叉反应结合水平)高两倍，更通常比背景高10-100倍以上时发生特异性结合。抗体与所需抗原的特异性结合通常需要为具体抗原选择抗体。例如，可选择产生能与某具体蛋白或其多态性变体、等位基因、直向同源物、保守性修饰变体、剪接变体特异性结合的多克隆抗体，来获得仅与所选蛋白质(如IL-2受体)而不与其它蛋白质发生特异性免疫反应的抗体。可通过去掉与其它分子发生交叉反应的抗体来实现此种选择。可采用各种形式的免疫测定来选择与某具体蛋白发生特异性反应的抗体。例如，常采用固相ELISA免疫测定来选择与某蛋白起特异性反应的抗体(参见例如，Harlow和Lane，《抗体，实验室手册》(Antibodies，A Laboratory Manual)(1988)中对可用于确定特异性免疫反应的免疫测定形式和条件的描述)。
本文所用的“IgG类抗体”指IgGl、IgG2、IgG3和IgG4抗体。重链和轻链中的氨基酸残基编号是EU指数编号(Kabat等，“免疫学感兴趣蛋白质的序列”(序列of Proteins of Immunological Interest)，第5版，国立卫生研究院，Bethesda，MD(1991)；本文采用了EU编号)。
“表位”或“抗原决定簇”指抗原上的抗体结合位点。蛋白质的毗连氨基酸或非毗连氨基酸可通过三维折叠并列形成表位。通常毗连氨基酸形成的表位在接触变性溶剂时可保存下来，而由三维折叠形成的表位用变性溶剂处理时常丢失。一个表位一般包含具有独特空间构象的至少三个，更常至少5个或6-10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括，例如，X射线晶体学和二维核磁共振。参见例如分子生物学方法中的表位制图方案(Epitope Mapping Protocols in Methods in MolecularBiology，第66卷，Glenn E.Morris编，(1996)。如果某蛋白中的氨基酸突变降低或消除了一种抗体的结合也可降低或消除另一种抗体的结合，和/或如果两种抗体竞争性结合该蛋白，即一种抗体与该蛋白的结合能降低或消除另一种抗体的结合，则称这两种抗体能与该蛋白的同一表位结合。
本文所用“VH”或“VH”指抗体免疫球蛋白的重链可变区，包括抗体重链的抗原结合片段，例如Fv、scFv或Fab。提到“VL”或“VL”指免疫球蛋白的轻链可变区，包括抗体轻链的抗原结合片段，例如Fv、scFv、dsFv或Fab。
抗体的轻链和重链可变区含有被三个超变区隔开的四个“构架”区，三个超变区也称为“互补决定区”或“CDR”。构架区和CDR的含义是本领域普通技术人员熟知的(参见例如Kabat等，“免疫学感兴趣的蛋白质序列”(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)，第5版，国立卫生研究院，Bethesda，MD(1991))。不同轻链或重链的构架区序列在一种动物中相对保守。抗体的构架区，即组成轻链和重链的联合构架区作用是以三维空间定位和排列CDR。CDR主要负责结合抗原表位。各链的CDR一般称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始依次编号，一般也用具体CDR所在的链标识。因此，VHCDR3位于抗体重链可变结构域中，而VLCDR1是抗体轻链可变结构域的CDR1。
本文所用术语“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体，还指由单克隆，包括真核、原核或噬菌体克隆衍生的抗体，而不是生产它的方法。可用本领域已知的各种技术，包括杂交瘤、重组和噬菌体呈现技术或其组合来制备用于本发明的单克隆抗体。例如，可用杂交瘤技术，包括本领域已知技术和，例如，Harlow和Lane，《抗体实验室手册》(AntibodiesA Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York(1988)；Hammerling等，《单克隆抗体和T细胞杂交瘤》(Monoclonal Antibodies and T-cell Hybridomas)，Elsevier，New York(1981)，第563-681页(将其全文纳入本文作为参考)中所述的技术来生产单克隆抗体。可通过选择重组抗体的噬菌体或类似载体文库，参见例如，Huse等，Science 2461275-1281(1989)；Ward等，Nature 341544-546(1989)和Vaughan等，NatureBiotech.14309-314(1996)或通过用抗原或用编码该抗原的DNA免疫动物来生产抗体。
术语“遗传方法改变的抗体”指其氨基酸序列不同于亲代(即未改变)抗体的抗体。因此，本发明方法所用的抗IL2受体的抗体的氨基酸序列不只限于天然抗体中发现的序列；可用熟知的重组DNA技术重新设计抗体，使其获得所需特性。可能的变化是从仅改变一个或数个氨基酸到完全重新设计，例如可变区或恒定区。可通过定位突变在恒定区中引入改变，以提高或改变治疗性抗体的功能特性，如免疫原性、药代动力学特性(如血清半衰期)、补体结合、与膜的相互作用和其它效应器功能。通常，可对抗体可变区进行改变以提高抗原结合特性。
“基本相同的恒定区”指抗体恒定区中至少约85-90％，优选至少95％的氨基酸序列与天然或未改变抗体恒定区相同。
本文所用术语“嵌合抗体”指一种免疫球蛋白分子(a)它的恒定区或其一部分被改变、替换或交换，使其抗原结合位点(可变区)连接于不同类型或类型、效应功能改变的和/或另一种动物的恒定区，或连接于能赋予该嵌合抗体新特性的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等；或(b)它的可变区或其一部分被抗原特异性不同或改变的可变区所改变、替换或交换。本领域普通技术人员熟知产生嵌合抗体的方法。参见例如Morrison等，Science 2291202-1207(1985)；Oi等，BioTechniques 4214-221(1986)；Gillies等，J.Immunol.Methods 125191-202(1989)；和美国专利号5,807,715；4,816,567和4,816,397，各自以全文纳入本文作为参考。
术语“人源化抗体”指包含人构架、和非人抗体的至少一个CDR优选所有CDR的免疫球蛋白，其恒定区与人免疫球蛋白恒定区基本相同，即至少约85-90％，优选至少95％相同。因此，可能除CDR外，人源化免疫球蛋白的所有部分均与一种或多种天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本相同。因此，这种人源化抗体是嵌合抗体，这种抗体中基本上整个人可变区几乎都被非人动物的相应序列取代。人构架区中的构架残基可被CDR供体抗体的相应残基所取代，以改变，优选提高其抗原结合性能。可用本领域熟知方法，例如，可通过模拟CDR和构架残基的相互作用，鉴定出对抗原结合很重要的构架残基，和通过序列比较鉴定具体位置上不寻常的构架残基来鉴定这些构架的取代。参见例如，Queen等，美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；6,180,370(各自全文纳入本文作为参考)。可用本领域已知的各种技术，包括例如，CDR-移植(EP 239，400；PCT公告WO 91/09967；美国专利号5,225,539；5,530,101和5,585,089)、表面镶饰或更新表面(EP 592,106；EP519,596；Padlan，Mol.Immunol.，28489-498(1991)；Studnicka等，Prot.Eng.7805-814(1994)；Roguska等，Proc.Natl.Acad.Sci.91969-973(1994)和链改组(美国专利号5,565,332)使抗体人源化，将它们以全文纳入本文作为参考。
术语“人抗体”指含有人可变区和恒定区的抗体。在用本发明方法治疗人类患者时，可能需要人抗体。可用本领域已知的各种方法，包括上述噬菌体呈现法，用衍生自人免疫球蛋白序列的抗体文库产生或获得人抗体。参见美国专利号4,444,887和4,716,111；和PCT公告WO 98/46645；WO 98/50433；WO 98/24893；WO 98/16654；WO 96/34096；WO 96/33735和WO 91/10741，各自以全文纳入本文作为参考。也可用不能表达功能性内源性免疫球蛋白，但可表达人免疫球蛋白基因的转基因小鼠生产人抗体。生产人抗体技术的综述参见Lonberg和Huszar，Int.Rev.Immunol.1365-93(1995)。生产人抗体和人单克隆抗体的技术和生产这种抗体的方法详细讨论参见例如，PCT公告WO 98/24893；WO 92/01047；WO 96/34096；WO 96/33735；欧洲专利号0 598 877；美国专利号5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771和5,939,598，将其全文纳入本文作为参考。此外，一些公司如Abgenix，Inc.(Fremont，CA)和Medarex(Princeton，NJ)从事于用上述技术相类似技术来提供针对所选抗原的抗体。也可用称为“导向选择”的技术产生能识别所选表位的完全人抗体。在此方法中，利用所选的非人单克隆抗体，如小鼠抗体来指导识别相同表位的完全人抗体的选择(Jespers等，Biotechnology 12899-903(1988)。
术语“灵长类化抗体”指含有猴可变区和人恒定区的抗体。生产灵长类化抗体的方法是本领域已知的。参见例如，美国专利号5,658,570；5,681,722和5,693,780，将其全文纳入本文作为参考。
术语“氨基酸”指天然产生的氨基酸和合成的氨基酸，以及与天然产生的氨基酸功能类似的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。本文中用通常所知的三字母符号或IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号代表氨基酸。同样，可用通常所接受的单字母代码代表核苷酸。
“天然产生的氨基酸”指由遗传密码编码的氨基酸，以及后来被修饰的氨基酸，如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和邻-磷酸丝氨酸。
“氨基酸类似物”指与天然产生的氨基酸的基本化学结构相同的化合物，例如，其α碳结合于氢、羧基、氨基和R基团的氨基酸，如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。这些类似物可具有修饰的R基团(如正亮氨酸)或修饰的酰胺基，但保留了与天然产生的氨基酸相同的基本化学结构。“氨基酸模拟物”指其结构与氨基酸的通常化学结构不同的化合物，但其功能与天然产生的氨基酸类似。
本文中术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换地使用，指通过肽键连接的氨基酸残基聚合物。该术语应用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然产生氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，也用于天然产生的含有修饰残基的氨基酸聚合物和非天然产生的氨基酸聚合物。
在两种或多种氨基酸或核苷酸序列中，术语“相同”或“相同性”百分数指两种或多种序列或亚序列相同或一定百分数的氨基酸残基或核苷酸相同(即在比较和比对的比较窗口区域或指定区域最大程度相对应时，在指定区域上约有60％相同，优选70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的相同性)，如用BLAST或BLAST 2.0序列比较算法以下述默认参数测量，或通过手工排列比对和目测观察(参见例如，位于www.ncbi.nlm.nih.govNCBI网站上的BLAST说明)。然后称这些序列“基本相同”。此定义也指，或可应用于，测试序列的互补物。该定义也包括含有缺失和/或加入的序列，以及含有取代的序列，以及天然产生的序列，例如，多肽性变体或等位基因变体和人造变体。测定序列相同性的熟知算法可算出空格等。优选地，在长至少约25个氨基酸或核苷酸的区域上，或更优选在长50-100个氨基酸或核苷酸的区域上存在相同性。
本文所用“保守性修饰的变体”可应用于氨基酸或核酸序列变体。对氨基酸序列而言，保守性修饰的变体序列包括含有加入或缺失一个或小百分数的氨基酸，或用化学上相似的氨基酸取代一个或小百分数的氨基酸的取代、缺失或加入的序列。保守取代表提供了功能上类似的氨基酸，它是本领域熟知的。一般来说，一种氨基酸与另一种氨基酸的保守性取代包括1)丙氨酸(A)，甘氨酸(G)；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)，谷胺酰胺(Q)；4)精氨酸(R)，赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，缬氨酸(V)；6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；7)丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)，甲硫氨酸(M)(参见例如，ThomasE。Creighton，“蛋白质结构和分子特性”(ProteinsStructures and MolecularProperties)(ISBN 071677030X，W.H.Freeman，1992))。此外这些氨基酸序列的保守性修饰变体不包括本发明的多肽性变体、种间同源物和等位基因。
对核酸序列而言，保守性修饰的变体指编码相同或基本相同的氨基酸序列的序列(如编码保守性修饰变体氨基酸序列的核酸序列)。当核酸序列不编码氨基酸序列时，基本相同或相关的，例如，天然毗连的序列。由于遗传密码的简并性，许多保守性修饰的变体核酸序列可编码大部分蛋白质。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU都编码氨基酸丙氨酸。因此，在一个密码子所确定的每个位置丙氨酸，可将该密码子改变为另一个所述的相应密码子，而不会改变编码的多肽。这种核酸变异是“沉默变异”，它是保守性修饰变异的一种。本文中对每个编码多肽的核酸序列也描述了该核酸的沉默变异。本领域技术人员知道，在某些内容中，可修饰核酸中各密码子(除了AUG和TGG，前者通常是甲硫氨酸唯一的密码子，后者通常是色氨酸唯一的密码子)，而产生功能相同的分子。因此，编码某多肽的核酸中常有沉默变异隐含在表达产物的所述序列中，但在实际探针序列方面不能隐含。
术语“分离”、“纯化”或“生物纯”指基本或实质上不含通常见于其天然状态时相伴随成分的材料。一般用分析化学技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱来测定纯度和均一性。基本上纯化是制品中存在的主要物质为蛋白质或核酸。具体说，从一些开放阅读框中分离核酸，这些开放阅读框天然侧接有基因，该基因编码的蛋白不同于阅读框所编码的蛋白。在一些实施方式中，术语“纯化的”核酸或蛋白指其在凝胶电泳中基本上只产生一条条带。优选地，指核酸或蛋白至少为85％纯，更优选至少95％纯，最优选至少99％纯。在其它实施方式中，“纯化”指去除待纯化组合物中的至少一种污染物。在这种情况下，纯化不需要纯化的化合物是均一的，例如100％纯。
本文所用“运载体”包括药学上可接受的运载体、赋形剂或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度时对接触的细胞或哺乳动物无毒。生理上可接受的运载体常常是pH缓冲水溶液。生理上可接受的运载体的例子包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸，抗氧化剂包括抗坏血酸；低分子量(约少于10个残基)多肽；蛋白，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸如甘氨酸、谷胺酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或右旋糖苷；螯合剂如EDTA；糖醇如甘露醇或山梨醇；成盐反离子如钠；和/或非离子表面活性剂如吐温、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
本文所用“治疗有效量”指足以治愈、缓解、减弱或至少部分抑制疾病和/或其症状和/或并发症的药物、药物活性物质、药物制剂或组合物的量。
“治疗”指治疗性处理和预防性措施。需要治疗的对象包括已患有该疾病的对象以及需要预防该疾病的对象。
本文中可互换地使用“对象”或“患者”，它们指脊椎动物，优选哺乳动物，更优选人。
本文所用术语“衍生自”指“获自”或“由...产生”或“从...传下来”。
发明描述疾病指征本发明提供了在需要治疗或预防的对象中治疗或预防呼吸道疾病的方法。该治疗方法包括给予治疗有效量的抗体，该抗体能够特异性抑制IL-2与IL-2受体的结合和/或抑制IL-2介导的淋巴细胞活化。在一个优选实施方式中，靶向的呼吸道疾病是哮喘。本方法可用于治疗任何类型、病因或发病机制的轻度、中度或重度哮喘。如本文公开的数据所证明，本方法对慢性持续性哮喘特别有效，尤其是对皮质类固醇控制不佳的哮喘患者。而且，可采用本发明方法治疗特应性或非特应性哮喘，包括过敏性哮喘、支气管哮喘、锻炼引起的哮喘、职业性哮喘、细菌感染引起的哮喘、“婴儿气喘综合征”(即也可鉴定为初期或早期4岁或5岁以下哮喘患儿观察到的夜间气喘症状)，和其它非过敏性哮喘。
可用本领域熟知方法衡量哮喘的疗效。已发现本发明的哮喘治疗方法可产生表明其疗效的以下一种或多种结果肺功能提高(肺活量测定法)，哮喘加重减缓，早晨峰值呼气流速提高，救援药物使用减少，白天和夜间哮喘症状减少，无哮喘天数增加，发展至哮喘加重的时间延长和一秒内用力呼气量(FEV1)增加。
本治疗方法还可包括将联用的哮喘药物(如吸入性类固醇)给予患者。优选地，在类固醇治疗呼吸道疾病，如哮喘中采用的一种药物。更优选地，该类固醇选自倍氯米松，布地缩松，氟尼缩松，氟替卡松和曲安西龙的一种或多种。在一个实施方式中，类固醇可以配制在抗IL-2受体的抗体同一剂型中。在另一实施方式中，分别给予病人类固醇和给予抗IL-2受体的抗体。在一个实施方式中，当没有抗IL-2受体的抗体时，给予类固醇的量不足以治疗或预防呼吸道疾病，如哮喘。
在一个实施方式中，给予类固醇的量不足以使患者发生任何副反应或潮红。优选给予类固醇的最高可能剂量是不足以使患者发生任何副反应或潮红的剂量。
根据抗IL2受体的抗体所证明的疗效，达珠单抗能降低严重哮喘患者的嗜酸性粒细胞水平，可合理地预计本发明方法能够用于治疗其它呼吸道或过敏性疾病和/或症状。嗜酸性粒细胞水平提高是许多T细胞介导的过敏性疾病的特征。也知道达珠单抗能够降低T细胞相关细胞因子的产生。因此，根据本发明方法，可用达珠单抗(或其它抗IL2受体的抗体)治疗T细胞介导的炎症反应相关的疾病或症状。
可治疗的T细胞介导的呼吸道和/或过敏性疾病和/或症状包括Th1细胞和Th2细胞介导的疾病。例如，可根据本发明方法用达珠单抗治疗的特异性Th2细胞介导的过敏性疾病和/或症状包括但不限于哮喘、特应性皮炎、过敏反应、风疹(荨麻疹)、过敏性鼻炎、鼻息肉病、鼻窦炎、变应性结膜炎、皮肤过敏症、湿疹、枯草热、过敏性肠胃炎、Churg-Strauss综合征。可用本发明达珠单抗疗法治疗的Th1细胞介导的呼吸道疾病和/或症状包括但不限于间质性肺病(ILD)(例如，特应性肺纤维症)，超敏性肺病和超敏性肺炎。
此外，间质性肺病(ILD)常伴有各种全身性自身免疫疾病，包括但不限于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、系统性硬化、舍格伦综合征、花粉病、硬皮病、结节病、多肌炎或皮肌炎。结果，本发明的抗IL2受体的抗体疗法可单独或与其它治疗相结合地用于治疗这些全身性自身免疫疾病伴有的疾病和/或症状。
嗜酸性粒细胞介导的疾病和/或症状包括但不限于肺嗜酸性粒细胞增多、嗜酸性粒细胞性肌痛综合征、热带嗜酸性粒细胞增多、高嗜酸性粒细胞综合征和寄生虫感染，包括但不限于血吸虫病。目前，采用IL-5疗法治疗许多这些嗜酸性粒细胞介导的疾病。根据其降低T细胞介导疾病(如哮喘)中嗜酸性粒细胞水平的效果，本发明的抗IL2受体的抗体疗法也可单独或与其它治疗相结合地用于治疗这些嗜酸性粒细胞介导的疾病。
慢性阻塞性肺部(或呼吸道)疾病(COPD)是生理学上定义为气道阻塞的疾病，这通常由肺气肿和慢性支气管炎引起的外周气道阻塞相混合而造成。COPD是世界上第五位的主要死亡原因，极需要有效的药物和疗法。COPD是慢性肺病的一个亚群，也包括哮喘，其特征是气道组织慢性炎症和/或纤维化。这些疾病具有许多共同的病理学特征，因此，可合理地预计本发明的抗IL2受体的抗体疗法可用于治疗COPD。
抗IL-2受体的抗体用于本发明的抗IL-2受体的抗体包括能结合IL-2受体任何表位的抗体。优选该表位发现于IL-2受体的α亚基(p55α、CD25或Tac亚基)上。这些抗体包括天然抗IL-2受体的抗体(由宿主动物产生的抗体)和重组的抗IL-2受体的抗体。包括所有动物来源的抗IL-2受体的抗体。非限制性示范性天然抗IL-2受体的抗体包括人、鸡、山羊和啮齿动物(例如大鼠、小鼠、仓鼠和兔)产生的，包括经遗传工程改造的转基因啮齿动物所产生的(参见例如，美国专利号6,300,129 B1(Lonberg等)，和美国专利号6,114,598(Kucherlapati等)，各自以全文纳入本文作为参考)抗IL-2受体的人抗体。也可用噬菌体呈现方法制造用于本发明的抗体(参见例如，美国专利号5,427,908(Dower等)和美国专利号5,969,108(Bonnert等)，各自以全文纳入本文作为参考)。为了用于人类患者，该抗体必须能特异性结合人IL-2受体。该抗体与IL-2受体的结合亲和力应该至少为107M-1，但优选至少108M-1，更优选至少108M-1，最优选109M-1，理想是1010M-1或更高。用噬菌体呈现法或其它方法体外诱变可提高抗体的亲和力(参见例如，Co等，美国专利号5,714,350，将其全文纳入本文作为参考)。
优选该抗体能特异性结合IL-2受体的α亚基(p55α、CD25或Tac亚基)。更优选IL-2受体是在活化淋巴细胞表面上表达的IL-2受体。淋巴细胞优选T细胞。
优选该抗体能中和IL-2受体的至少一种生物学特性，但最优选能中和所有生物学特性，例如IL-2介导的淋巴细胞活化。该抗体通常会抑制或阻断IL-2受体与IL-2的结合。该抗体应能抑制活化T细胞的增殖和活化，或诱导活化的T细胞调亡。
优选该抗体不能特异性结合Fcγ受体，因此在大多数或所有患者中，该抗体基本上不激活T细胞的促有丝分裂反应。优选该抗体作为免疫抑制剂具有以下优良特性至少能抑制大多数(例如至少67％、75％、90％或95％)患者的T细胞的免疫应答反应，而不诱导可引起释放有害细胞因子的促有丝分裂活性。
可通过用人IL-2受体免疫非人宿主动物而产生抗IL-2受体的多克隆抗体。可用本领域熟知的免疫和杂交瘤方法产生该单克隆抗体(参见例如，Harlow和Lane，“抗体实验室手册”(AntibodiesA Laboratory Manual)，Cold Spring HarborLaboratory Press，New York(1988)；Hammering等，“单克隆抗体和T细胞杂交瘤”(Monoclonal Antibodies And T-Cell Hybridomas)，Elsevier，New York(1981)，第563-681页)。例如，可如Uchiyama等，J.Immunol.126(4)，1393(1981)所述方法产生和初步筛选单克隆抗体，以获得IL-2受体的特异性抗体。另一种适合的单克隆抗体是M7/20单克隆抗体，如Gaulton等(Clin.Immunol.和Immunopath(1985))所述，它是L-2受体的特异性单克隆大鼠抗小鼠κ、u、Ig抗体见美国专利号5,916,559，将其全文纳入本文作为参考)。另一合适的单克隆抗体是杂交瘤ATCCHB-8555产生的2A3单克隆抗体，公开于美国专利号4,845,198，将其全文纳入本文作为参考。美国专利号4,411,993和4,473,493中描述了其它合适的抗IL-2抗体，各自以全文纳入本文作为参考。
也可采用重组DNA技术产生重组的抗IL-2受体的抗体，用于本发明。这种重组抗体的可变区和/或恒定区氨基酸序列不需要经遗传改变，但可与天然抗体的序列相同。用于本发明的重组抗IL-2受体的抗体包括任何表达系统包括原核和真核表达系统产生的抗体。
示范性原核系统一般是能够表达外部引入的核酸序列的细菌系统。示范性真核表达系统包括真菌表达系统，病毒表达系统包括真核细胞如昆虫细胞、植物细胞、尤其是哺乳动物细胞(如CHO细胞和骨髓瘤细胞如NSO和SP2/0)，这些是本领域普通技术人员所熟知的。参见例如，Morrison等，Science 2291202-1207(1985)；Oi等，BioTechniques 4214-221(1986)；Gillies等，J.Immunol.Methods 125191-202(1989)和美国专利号5,807,715；4,816,567和4,816,397，各自以全文纳入本文作为参考。也可通过化学合成生产该抗体。无论如何生产抗体，可用本领域熟知方法，如过滤、层析(如亲和层析，如通过蛋白A、阳离子交换层析、阴离子交换层析和凝胶过滤)纯化抗IL-2受体的抗体。通常，用于药物制剂的抗体的最小可接受纯度是90％，优选95％，更优选98％，最优选99％或更高。
或者，可通过遗传方法改变该重组构建物的可变区和/或恒定区序列。优选用于本发明的遗传方法改变的抗IL-2受体的抗体包括能结合并中和IL-2受体的嵌合性或人源化抗体。示范性优选的人源化抗IL-2受体的抗体是达珠单抗。达珠单抗的氨基酸和核苷酸序列公开于美国专利号5,530,101和5,693,761中，各自以全文纳入本文作为参考。达珠单抗的成熟轻链和重链的氨基酸序列显示如下达珠单抗成熟的κ轻链(SEQ ID NO1)DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCSASSSISYMHWYQQKPGKAPKLLIYTTSNLASGVPARFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCHQRSTYPLTFGQGTKVEVKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC成熟的γ-1重链(SEQ ID NO2)QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYRMHWVRQAPGQGLEWIGYINPSTGYTEYNQKFKDKATITADESTNTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGGVFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVKGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK达珠单抗(商标ZENAPAX)是能特异性结合人高亲和力IL-2受体α亚基(p55α、CD25或Tac亚基)的人源化单克隆抗体，该受体表达在活化的淋巴细胞表面。ZENAPAX由Protein Design Labs，Inc.(以下称为“PDL”；Fremont，CA)创立，并由RocheLaboratories(Hoffmann-La Roche Inc.，Nutley，NJ)开发和出售。在当前临床实施方式中，达珠单抗是IgGl同种型抗体，然而也可产生具有类似治疗特征的达珠单抗的IgG2M3同种型。
其它优选抗体包括与达珠单抗相同能结合IL-2受体表位的抗体。优选地，与达珠单抗相同能结合IL-2受体表位的该抗体的氨基酸序列与达珠单抗的氨基酸序列至少60％相同。在其它优选实施方式中，其氨基酸序列与达珠单抗的序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同。
在其它优选实施方式中，与达珠单抗相同能结合IL-2受体表位的抗体的CDR氨基酸序列与达珠单抗CDR的氨基酸序列至少60％相同。在其它优选实施方式中，其CDR氨基酸序列与达珠单抗的CDR序列至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％相同。抗IL-2受体的抗体可以是任何一种已知的同种型，但四种IgG同种型中特别优选IgG2。
也可采用遗传方法改变的抗IL-2受体的抗体，包括结合和中和IL-2受体，或防止IL-2受体与IL-2结合的嵌合抗体来实施本发明方法。优选该嵌合抗体含有衍生自小鼠或大鼠的可变区和衍生自人的恒定区，以使当给予人类对象时，该嵌合抗体具有更长的半衰期，且免疫原性更小。制作嵌合抗体的方法是本领域已知的。
本发明也包括采用能保持上述完整的抗IL-2受体的抗体的结合特异性的抗IL-2受体的抗体片段。例子包括但不限于重链、轻链和可变区，以及本文所述抗体的Fab和(Fab’)2。
也可采用抗IL2受体的抗体经过修饰(如通过定位诱变)但功能相同(如具有相当的IL-2受体结合亲和力)的抗体实施本发明方法。例如，可修饰抗体，使其稳定性(如血清半衰期)和/或疗效提高。修饰抗体的例子包括具有氨基酸残基的保守取代，和一个或多个氨基酸缺失或加入的抗体，这些修饰不会明显有害地改变其抗原结合用途。
取代包括在能维持疗效(如特异性结合能力)的前提下改变或修饰一个或多个氨基酸残基至完全重新设计该区域。在一个优选实施方式中，可利用在FcRn结合区中定位突变来产生血清半衰期显著延长的达珠单抗(或任何其它IL2受体的结合抗体)，如2003年10月15日提交的美国专利申请序列号10/687,118所述，将其纳入本文作为参考。也可通过翻译后修饰(如乙酰化和磷酸化)或合成(如连接标记基团)本发明抗体。也可采用保持该结合特异性的这些修饰抗体的片段。
药物制剂或组合物可将本发明抗体制成药学组合物。因此，本发明也提供给予治疗有效剂量的抗IL2受体的抗体的方法和组合物。确切的剂量将取决于治疗目的，本领域普通技术人员可利用熟知技术(参见例如Ansel等，《药物剂型和药物递送》(PharmaceuticalDosage Forms and Drug Delivery)(第6版，Media，Pa.Williams和Wilkins，1995)；《药物剂型》(Pharmaceutical Dosage Forms)(第1-3卷，ISBN号0824785762，082476918X，0824712692，0824716981)，Lieberman等编(New YorkMarcel Dekker，Inc.，1992)；Loyd V.Allen，Jr.，《药物组合的艺术、科学和技术》(The Art，Science and Technology of Pharmaceutical Compounding)，(AmericanPharmaceutical Association，1999)和Gloria Pickar，“剂量计算”(DosageCalculations)(Delmar Learning，1999))确定此剂量。如本领域所熟知的那样，需要根据生理性降解，全身与定位递送，和新蛋白酶合成速率，以及年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药时间、药物相互作用和症状的严重程度调整，这些因素是本领域普通技术人员用常规实验可确定的。
本发明的药物制剂或组合物包含的本发明抗体可以适合剂型给予病人。在优选实施方式中，该药物制剂是水溶性形式，如药学上可接受的盐，即包括酸加成盐和碱加成盐提供。“药学上可接受的酸加成盐”指保留了游离碱的有利生物学作用但没有生物学其它不良作用的盐，它们是由无机酸如盐酸、氢溴酸、硫磺酸、硝酸、磷酸等，和有机酸如乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、苦杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等形成的盐。“药学上可接受的碱加成盐”包括衍生自无机碱的盐，如钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。尤其优选的是铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺盐以及取代的胺盐，取代胺包括天然产生的取代胺、环胺和碱性离子交换树脂，如异丙基胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺和乙醇胺。
该药物制剂或组合物也可包括以下物质的一种或多种运载体蛋白如血清白蛋白；缓冲液；填料如微晶纤维素、乳糖、玉米和其它淀粉；粘合剂；甜味剂和其它调味剂；着色剂和聚乙二醇。
可根据给药方法以各种单位剂量形式给予该药物制剂。例如，适合于口服给药的单位剂量形式包括但不限于粉剂、片剂、丸剂、胶囊和锭剂。认识到，当口服给予抗体时，应该保护其不被消化。一般可通过以下方式实现此种保护使该分子与某化合物复合以使其能抵抗酸水解和酶水解，或将该分子包装到合适的耐受性运载体，如脂质体或保护屏障中。保护药物不被消化的方法是本领域熟知的。
给予的该药剂通常包含溶解于药学上可接受运载体或赋形剂，优选水性运载体中的本发明抗体。可采用各种水性运载体，例如，缓冲盐水等。这些溶液应灭菌，通常不含不良物质。可通过常规的熟知灭菌技术使这些组合物无菌。这些组合物可含有药学上可接受的辅助物质，这些物质是接近生理条件所需要的，如pH调节和缓冲剂、毒性调节剂等，如醋酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。在这些制剂中活性物质的浓度可以有很大不同，主要根据液体的体积、粘度、体重等，所选的具体给药方式和患者需要来选择(参见例如，《雷明顿药物科学》(Remington’sPharmaceutical Science)(第15版，Mack Publ.Co.，Easton PA，1980)；和Goodman和Gillman，《治疗的药理基础》(The Pharmacologial Basis ofTherapeutics)(Hardman等编，TheMcGraw-Hill Companies，Inc.，1996))。
本文提供的制剂也可按照待治疗的具体疾病所需含有一种以上的活性成分，优选含有互相之间不会发生不良影响的具有互补活性的成分。合适地包括能有效达到预期目的量的这种分子。
可将上述药物制剂的活性成分包裹在微胶囊、胶体药物递送系统(如脂质体、清蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊)、粗乳液或缓释制剂中。这些技术是本领域技术人员熟知的(参见例如，《雷明顿药物科学》(Remington’s PharmaceuticalScience)(第15版，Mack Publ.Co.，Easton PA，1980))。
可给予含有本发明抗IL2受体的抗体的药物制剂或组合物，用于治疗或预防性冶疗。在治疗应用中，将该组合物给予患有疾病(如哮喘)的患者，给予量足以治愈或至少部分抑制疾病，或缓解其症状和/或并发症。将足以完成此目的的量定义为“治疗有效剂量”。所用的治疗有效量取决于具体的呼吸道疾病指征、药物制剂的类型、疾病的严重程度和患者的总体健康状态。可根据病人所需和所耐受的剂量和频率给予单剂或多剂药物制剂。在任何情况下，该制剂应提供足量的活性成分，以有效治疗患者。
能够预防或缓解哺乳动物疾病发展的药物制剂的量称为“预防有效剂量”。预防性冶疗所需的具体剂量取决于医疗条件和哺乳动物病史、所预防的具体疾病、以及其它因素如年龄、体重、性别、给药途径、药效等。例如，可对先前曾患过疾病的哺乳动物实施这种预防性冶疗以预防疾病复发，或对怀疑很可能发生疾病的哺乳动物实施这种预防性冶疗。
剂量和给予制剂通常可通过将具有所需纯度的抗体与任选的生理上可接受的运载体、赋形剂或稳定剂相混合制备冻干或水溶液形式的可储存的抗体药物制剂。可接受的运载体、赋形剂或稳定剂在所用剂量和浓度下应对接受者无毒，包括缓冲液如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂、防腐剂、低分子量多肽、蛋白、亲水聚合物、氨基酸、碳水化合物、螯合剂、糖和本领域技术人员已知的其它标准成分(上述《雷明顿药物科学》)。
本文所述用于体内给药的达珠单抗制剂通常储存于2-8℃。该制剂常常不含防腐剂，应该在从小瓶中取出并稀释成盐水后4、12或24小时内使用。优选静脉内或皮下给予经过滤或未经过滤的该制剂。在一个实施方式中，根据2002年7月25日提交的美国专利申请序列号10/206，469中所述可将抗IL2受体的抗体制剂以稳定的冻干形式储存，将其全文纳入本文作为参考。
优选将人源化抗IL-2受体的抗体达珠单抗储存在一次性使用的小瓶中，该瓶中装有5.0mL达珠单抗的无菌盐水缓冲液溶液，浓度为5.0mg/mL。然而，本发明也包括1-10mg/mL(如1、2、5或10)，20-50mg/mL(如20、30、40或50)或60-100mg/mL(如60、70、80、90或100)的浓度。在用于储存的优选制剂中，该制剂含有5mg/mL的抗体，3.6mg/mL一水合磷酸二氢钠，11mg/mL七水合磷酸氢二钠，4.6mg/mL氯化钠，0.2mg/mL聚山梨醇酯。该制剂还可包含盐酸或氢氧化钠，以将该制剂的pH调整到约6.9。
在一个优选实施方式中，可将达珠单抗制作成稳定的液体制剂。如2002年9月8日提交的美国专利申请序列号10/291,528(美国出版的申请号2003/0138417Al，2003年7月24日出版)所述，将其全文纳入本文作为参考。这种稳定的液体制剂尤其适用于皮下给予达珠单抗，可用于治疗本发明呼吸道疾病的方法中。在优选实施方式中，这种达珠单抗的稳定液体制剂含有约100mg/ml达珠单抗，约20-60mM pH为5.5-6.5的琥珀酸盐缓冲液(或约20-70mM组氨酸缓冲液)，约0.01％-0.1％聚山梨醇酯，和维持制剂等渗性的张力缓冲剂(如约75-150mM NaCl，或约1-100mM MgCl2)。
可通过任何合适途径，包括口服、直肠、鼻腔、局部(包括透皮、气雾剂、含服和舌下)、胃肠道外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)或通过吸入疗法给予制备在药物制剂中的治疗性抗体。在一个实施方式中，可用无针头气压注射给予该制剂。也可理解，优选途径可因接受者的症状和年龄而不同。优选经胃肠道外，如静脉内药团注射递送该药物制剂，以便通过全身吸收和循环系统递送治疗有效量的所述制剂。
该制剂的治疗有效量取决于具体的呼吸道疾病的严重程度(如重度慢性哮喘)、患者的临床病史和反应，以及主治医师的判断力。可一次或经一系列治疗将该制剂给予患者。起初，可给予患者候选剂量，通过用本领域普通技术人员熟知的常规技术监测此患者病情的发展来确定合适的剂量和治疗方案。
与运载体材料混合产生单一剂型的活性成分的量，取决于治疗对象和具体的给药方式。然而应理解，对某具体患者的特定剂量水平取决于各种因素，包括所用具体制剂的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速率、药物组合和正在治疗的具体疾病的严重程度，本领域技术人员可确定这些因素。
具体说，治疗哮喘的示范性有效剂量约为0.001mg/kg(即毫克每千克体重)-100mg/kg，优选约0.001mg/kg-10mg/kg，更优选约0.005mg/kg-0.100mg/kg。优选的剂量水平包括约0.001mg/kg、约0.005mg/kg、约0.0075mg/kg、约0.010mg/kg、约0.015mg/kg、约0.020mg/kg、约0.030mg/kg、约0.045mg/kg、约0.050mg/kg、约0.060mg/kg、约0.070mg/kg、约0.080mg/kg和约0.1mg/kg。优选的剂量可等于或小于约0.5mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg或5mg/kg。优选剂量可位于上述任意两个剂量水平之间。
也可制备和给予病人抗IL2受体的抗体的“固定剂量”剂型。例如，可将预先装满100或200mg/ml达珠单抗制剂的1ml注射器给予所有哮喘患者，无论患者体重多少。假设典型的成年患者人群体重在50和100kg之间，以100mg固定剂量递送1mg/kg-2mg/kg。固定剂量剂型在给药中可使可能发生的剂量误差最小，尤其优选用于患者自己给药的哮喘治疗。
通常，可采用较高剂量(如每个患者每日0.1mg-高达约100mg)的治疗性抗体，尤其当给药于隐蔽部位而不进入血流时，如进入体腔或进入器官内腔时。局部给药可采用相当高的剂量。本领域技术人员了解或明白制备经胃肠道外给药的组合物的实际方法，参见例如《雷明顿药物科学》(Remington’s Pharmaceutical Science)和Goodman和Gillman，《治疗的药理基础》(The Pharmacologial Basis ofTherapeutics)，见上。
治疗方案根据治疗进程和患者的身体状况，哮喘的治疗方案可明显不同。一般地，至少将含有本文所述抗体的任何一种的单剂药物制剂给予患者，如果后面有任何附加剂量(“维持剂量”)则将其称为“起始剂量”或“起始给药”或“加载剂量”。可以，例如每日、每周、每两周、每6周或每月，或者每2、3或6个月给予次抗体药物1、2、3或4次或多次。一个疗程的治疗时间应持续至少一天或两天，如一至数(2、3、4、5或6)天、数周、数月或数年，或无限时间，这取决于疾病的性质和严重性。治疗时间计算为第一次给予该抗体到最后一次给予该抗体的时间。患者可接受2、3、4或更多个疗程。可根据患者的改善进程调整给药频率。优选的加载剂量约是2mg/kg。在加载剂量后，优选的维持剂量约是1mg/kg。在优选的剂量方案中，在30分钟时间内给予加载剂量，在15分钟时间内给予各维持剂量。
为降低输液相关症状，含有抗IL-2受体的抗体药物制剂也可与联用的其它药物分别给予。这些药物通常包括甲泼尼龙、氢化可的松、昂丹司琼、对乙酰氨基酚和具有相似功能的许多其它试剂，这是本领域技术人员熟知的。可通过任何合适途径包括口服、直肠、鼻腔、局部、胃肠道外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)，或通过吸入疗法给予这些其它药物。
这些药物的剂量水平也是本领域已知的，例如，每个患者1mg-100g。示范性剂量包括10-50mg、60-200mg或200-500mg的甲泼尼龙、氢化可的松和昂丹司琼；和100-500mg、600-1000mg、1-5g的对乙酰氨基酚。例如，在初始或/和各次给予抗IL-2受体的抗体的药物制剂之前或/和之后至少约1、2、3、4、5、6、7、8、10、12、14、20、24、36小时或2、3、4、5、7、10、20、40或60天，可单次或多次额外地给予患者免疫调节剂。
在一个实施方式中，本发明治疗方法还包括给予目标疾病的联用药物。例如，可用于本发明方法的联用哮喘药物(用于慢性和急性)包括但不限于吸入和口服类固醇(如倍氯米松、布地缩松、氟尼缩松、氟替卡松、曲安西龙、莫米松和奈德)；系统性皮质类固醇(如甲泼尼龙、泼尼松龙、泼尼松、地塞米松和地夫可特)；吸入或口服的β2激动剂(如沙美特罗、福莫特罗、比托特罗、吡布特罗、特布他林、班布特罗和沙丁胺醇)；色甘酸和奈多罗米；抗过敏眼科用药物(如地塞米松)；甲基黄嘌呤(如茶碱和美吡拉敏-乙酸茶碱)；白三烯修饰性药物(如扎鲁司特，齐留通，孟鲁司特(montekulast)和普仑司特)；抗胆碱能药物(如异丙托溴铵)；其它治疗性抗体(如抗胞内粘着分子或IgE的抗体)；凝血噁烷A2合酶抑制剂；凝血噁烷前列腺素受体拮抗剂；其它类二十烷醇修饰剂(如前列地尔与PGE1、地诺前列酮与PGE2、依前列醇与环前列腺素和PGI2类似物(如PG12贝前列素)，塞曲司特，奥扎格雷，磷酸二酯酶4同工酶抑制剂，凝血噁烷A2合酶抑制剂(如氮斯汀)；ditec(低剂量色甘酸二钠和非诺特罗)；血小板活化因子受体拮抗剂；抗组胺剂；抗凝血噁烷A2药；抗缓激肽药(如艾替班特)；抑制活化的嗜酸性粒细胞和T细胞聚集的药物(如酮替芬)，IL-13阻断剂(如可溶性IL-13受体片段)，IL-4阻断剂(如可溶性IL-4受体片段)；结合和阻断IL-13或IL-4的活性的配体，以及黄嘌呤衍生物(如己酮可可碱(pentoxifyolline))。
以说明方式而非限制方式提供以下实施例。特别将说明书中所有引用文献的公开内容纳入本文作为参考，用于所有目的。
实施例实施例1慢性持续性哮喘患者的达珠单抗II期、随机、双盲、安慰剂对照、平行组研究本实施例描述了II期、剂量逐步提高的前导性研究的设计、实施和结果，证明了用达珠单抗治疗慢性持续性哮喘患者方法的有效性。
A.研究概述1.目的该研究的主要目的是评价达珠单抗在吸入性皮质类固醇治疗控制不佳的慢性持续性哮喘成年患者中的安全性、耐受性和初步活性。
2.总的研究设计该研究是用达珠单抗治疗吸入性皮质类固醇控制不佳的(相当于每日＞1200微克吸入性曲安西龙)慢性持续性哮喘患者中的随机化、多中心、双盲、安慰剂对照、平行组研究。图1中显示了该研究的总设计示意图。
长达5周的预备期间后，进行筛选访问，在基线上对活性药物或安慰剂(3∶1)进行随机化分组。研究访问发生在筛选(访问1)，预备期间(多达4次访问)，治疗期1每2周一次(第0-84天，6次访问)，治疗期2每2周一次(第85-140天，类固醇逐渐减少，4次访问)，然后在随访期每2-4周一次(第141-239天，5次访问)。在指定研究日的前后3日进行所有研究访问、剂量和评价。
3.病人群体的选择该研究中登记的合格人员是年龄18-70岁不吸烟男性和女性哮喘患者，其1秒内的用力呼气容量(FEV1)是预计值的50％-80％，用β2激动剂治疗的可逆性为12％，尽管登记前需要每日吸入剂量＞1200微克的曲安西龙奈德(曲安西龙)或其等效物3个月以上。为了随机化分组，在预备期间，患者必须证明需要吸入皮质类固醇治疗，筛查时(绝对值)FEV1＞90％，和FEV1＞预计值大于50％。尤其是，绝对FEV1值提高≥12％和200mL，然后吸入舒喘宁MDI 2-4次，证明在筛选或预备期间，需要对患者进行资格判定以进行随机化分组。所用的样本大小为120名随机患者(活性药物90名，安慰剂30名)。
符合所有表1所列标准且不符合其中所列任何排除标准的患者认为可登记进入该研究。
表1包括标准和排除标准
表2包括标准要求的每日类固醇等价吸入剂量
认为具有以下特征的患者可予以登记a.登记前30天内曾用稳定剂量的鼻腔皮质类固醇、鼻腔色甘酸、局部抗过敏性眼科用药或皮质类固醇乳膏或软膏治疗的患者b.曾用茶碱、沙美特罗、口服舒喘宁、Advair(氟替卡松和沙美特罗口服吸入剂)、色甘酸、奈多罗米或白三烯修饰剂治疗的患者(在登记时必须停用这些药物)。
c.根据需要用短效吸入性或喷雾性β2激动剂治疗的患者。
筛选出签署了知情同意书的患者。将符合这些标准的患者随机分配到两个研究之一(达珠单抗或安慰剂)。NRS中心将患者的随机化编号传送给指定的研究中心药剂师。将盲法治疗(达珠单抗或安慰剂)的第一天指定为第0天。
4.药物制备、剂量和递送用于此研究的达珠单抗是从市场上购得的FDA批准的达珠单抗制剂ZENEPAX。安慰剂是对比药物。以小瓶装提供达珠单抗，瓶中装有25毫克达珠单抗的5ml溶液。每毫升溶液含有5mg达珠单抗和3.6mg一水合磷酸二氢钠，11mg七水合磷酸氢二钠e，4.6mg氯化钠，0.2mg聚山梨醇酯，并可含有盐酸或氢氧化钠将pH调整到6.9。不加入任何防腐剂。
安慰剂包括该活性剂型中所提供的所有成分，减去该活性成分(达珠单抗)。安慰剂小瓶的充填体积是5mL。
所用剂量是加载剂量2mg/kg，和后续剂量1mg/kg。在小袋中用50ml生理盐水(0.9％)稀释该剂量后，静脉内给予此研究药物。在30分钟的时间中输入2mg/kg的加载剂量。在15分钟的时间中输入所有后续1mg/kg剂量。用输液泵进行所有输液。达珠单抗不用于直接注射，用前必须稀释。
第一次研究药物输液完成后(第0天)留下患者观察至少2小时，所有后续输液后观察至少1小时。
将达珠单抗和安慰剂储存于受控制的冰箱条件下，2-8℃。该制剂不含防腐剂，从小瓶中取出后24小时内使用。当制备好输液时，应该在4小时内静脉内给药。如果不立即使用该制剂，应将其置于2-8℃的冰箱中至多24小时，或在室温下维持4小时。这段时间过后，应丢弃该制备溶液。
5.研究剂量间隔时间、剂量逐步提高和随访期下表3中小结了本研究治疗剂量方案。
表3治疗剂量方案
1.除盲法治疗外，所有患者还将接受预先随机化剂量的吸入性曲安西龙(第0-83天)。
2.除接受盲法治疗外，从第84天开始，所有患者每隔2周降低预先随机化的曲安西龙剂量25％。
3.第0天在30分钟中输注2mg/kg加载剂量，然后在所有其它剂量日，在15分钟中输注1mg/kg剂量。N/A＝没有应用-没有输注研究药物该研究包括-28--1天的预备期。预备期的目的是验证所研究的患者需要吸入皮质类固醇。该预备期间，对患者进行吸入性皮质类固醇滴定，如图2示意图所小结。将患者转换到吸入等量的曲安西龙，预备期开始时停用所有其它联用的哮喘控制药物。停用白三烯修饰剂的患者等待2周后进入此预备期，回到访问2A。所有其他患者在停用所有其它哮喘控制药物后仅等待一周回到访问2A。为了进行随机化分组，要求患者证明他们在预备期间需要吸入皮质类固醇、筛选(绝对值)的FEV1＞90％，FEV1＞预计值的50％。需要皮质类固醇全身给药的哮喘加重患者不随机分组，而是停止此研究。
图3所示表中小结了剂量间隔和递增的时间表以及相关的患者评价。该时间表分为两个治疗时期(1)治疗期1(盲法治疗，第0-84天)第0天给予达珠单抗或安慰剂的加载剂量2mg/kg，在30分钟时间中输入，然后在第14、28、42、56和70天给予后续剂量1mg/kg，在15分钟时间中输入；(2)治疗期2(盲法治疗加类固醇递减，第85-140天)第84、98、112和126天给予1mg/kg达珠单抗或安慰剂，在15分钟时间中输入。
治疗期1期间，使合格的患者随机化(3∶1，活性药物∶安慰剂)，在第0、14、28、42、56和70天接受达珠单抗或安慰剂输液，同时维持吸入性曲安西龙的随机化前基线剂量。对接受达珠单抗的患者而言，第0天给予达珠单抗的加载剂量2mg/kg，在30分钟时间中输入，然后在随后的治疗日给予1mg/kg的剂量，在15分钟时间中输入。不晚于最后一次预备期访问后7天让患者接受盲法研究药物的第一个剂量。随机化后，每2周观察一次患者，以评价和调整剂量。
治疗期2(即后续治疗期1)期间，使患者的吸入性曲安西龙(TAA)剂量每隔两周(第84、98和112天)将患者完成治疗期1时的剂量降低25％，直到他们完全取消了吸入类固醇(第126天)，同时接受达珠单抗1mg/kg或安慰剂(第84、98、112和126天)输液，在15分钟中输入。每2周观察一次患者，以评价和调整剂量。
将符合以下标准、在研究的指定时间点停止治疗的的患者从进一步调整研究药物剂量中撤出，让他们进入随访期(1)在治疗期1期间经历一次以上哮喘加重，需要全身性类固醇治疗；(2)在治疗期2期间经历过一次哮喘加重，需要全身性类固醇治疗；(3)在任何哮喘加重期间需要每日＞60mg泼尼松；(4)哮喘加重期间需要用泼尼松治疗＞14天；或(5)哮喘加重需要住院过夜(即需要＞24小时留院治疗)。
在随访期(第140-238天)中，监测患者取消研究药物后16周的情况，在第140、154、168、182、210和238天进行评价。
在研究位置上的所有个体都不了解此治疗方案。这些个体包括研究者、研究协调者、患者和其它研究人员。PDL医学监测员和CRA也不了解治疗方案。不参与此研究进行的指定的PDL安全性监测员每月检查所有2级或更高级(即中度、重度或威胁生命的)症状，无论其是否与所研究药物的给药相关。该个体是了解治疗方案的。
6.顺从性、安全性和药效学测量在研究工作人员的监督下给予研究药物。通过让研究者或合格的被指派者进行各次盲法研究药物输液来确保顺从性。给每个病人指定研究人员并记录分配给患者的所有曲安西龙MDI药罐来评价吸入性曲安西龙的使用。
研究期间进行的安全性测量包括生命指征、护士/医生观察、副反应评价和实验室安全性情况。
通过测量全血嗜酸性粒细胞来测量所有研究患者的药效学特征。
通过该研究获得了达珠单抗血清浓度，将其作为达珠单抗随时间推移的有限的药代动力学特征。从每个患者的所选部位收集血清样品，然后进行立即和给药后各时间点(参见表3)所研究药物的给药剂量。
通过分析各患者血清样品中抗达珠单抗抗体(抗Ab)来评价免疫原性。
7.疗效测定用于评价达珠单抗的主要疗效参数是肺功能(肺活量)，通过治疗期1(第0-84天)期间FEV1距离基线的百分数改变来评价。
第二种疗效参数包括(1)治疗期1(第0-84天)期间经历哮喘加重的患者比例；(2)治疗期1(第0-84天)和2(第85-140天)期间AM PEFR和PM PEFR变化的百分数；(3)治疗期1和2期间拯救药物(β2激动剂MDI)的使用情况、白天和夜间的哮喘症状以及IVRS中记录的无哮喘天数的变化；(4)治疗期1和2期间从此研究中撤出的患者的比例；(5)治疗期1和2期间至哮喘加重的时间；和(6)治疗期2和随访期期间FEV1变化的百分数。
肺活量测定根据图3的时间表记录肺活量的测定。根据美国胸科学会指南进行所有肺活量测定。在整个研究中所用的预计值是一致的。不因人种而调整肺活量值。记录三次努力中最佳的FEV1。肺活量包括用力呼吸时的肺活量(FVC)、FEV1和FEV1/FVC，FVC(FEF25-75)中点期间的用力呼气流。在肺活量测定前6小时不给予短效吸入性β2-激动剂。将每次访问的肺活量测定结果记录在患者的病案报告表格中。
治疗哮喘加重哮喘加重定义为咳嗽加重、胸部压迫感或喘鸣，伴有以下1项或多项(1)在48小时中，基线要使用拯救舒喘宁每24小时≥8次吹气(吸入)；(2)在48小时中，使用拯救舒喘宁每24小时≥16次吹气(吸入)；(3)峰值呼气流(PEF)不到参比水平的65％，即使拯救治疗了60分钟；(4)即使拯救治疗(定义为每20分钟吹气吸入舒喘宁2-4次，多至1小时)60分钟仍有症状；和/或(5)需要全身给予(口服或注射)皮质类固醇。
研究者评价了对全身给予类固醇拯救的需要。除了上述标准以外，研究者也可根据他的或她的判断，处方给予全身类固醇来治疗哮喘加重。将全身使用皮质类固醇的原因记录在患者的病案报告表格(CRF)上。如果患者经历哮喘加重(根据上述标准)，建议患者呼叫研究中心。允许需要用口服皮质类固醇治疗的哮喘加重的患者使用泼尼松突击治疗，每日至多60毫克，至多14天。停止对符合中止治疗标准的任何患者的进一步剂量调整，也不进入随访期。访问13作为终末访问。只对需要全身使用类固醇拯救的加重患者确定中止治疗。
在治疗期1期间经历过第一次哮喘加重的患者需要全身给予皮质类固醇拯救，也让其吸入性曲安西龙的剂量从随机化前基线提高25％，并维持此剂量，直到治疗期1结束。
哮喘症状/每日药物记录在研究期间利用各患者每日的日记记录(通过交互式声音反应系统)评价哮喘症状、药物使用情况和峰值气流记录。认为IVRS是一种源文件；已验证这类日记可用于哮喘临床试验。
白天平均症状范围为各种问题提供了0-6分范围的反应分类，表示最轻微至最严重的哮喘症状。夜间日记采用范围从0分(表示没有因哮喘症状而觉醒)至3分(表示整夜未眠)的反应分类。根据白天症状范围中的4个问题的平均值计算每日白天范围评分。计算出该周总日记评分是7天每日白天范围评分的至少4天的平均值。以类似方式计算出夜间日记范围的每周平均评分。白天每周评分和夜间评分的降低表示哮喘有所改善。从治疗前预备期间(第-7--1天)最后一周的平均评分与治疗期1(第77-84天)最后一周和治疗期2(第134-140天)最后一周的差异计算哮喘评分范围距基线的变化。
无哮喘天数定义为白天和夜间日记都显示没有症状的天数。分析该变量的方法取决于丢失的日记记录的分布。如果丢失数据很少，将分析平均无哮喘天数的变化。如果患者报告的哮喘症状不一致，可比较治疗组中经历无哮喘天数的患者比例。
在白天和夜间症状日记中记录了拯救采用β2激动剂MDI。指导患者在白天日记中记录所用β2激动剂MDI的量和睡着后在夜间日记中记录所用β2激动剂MDI的量。利用每周的日记记录计算白天和夜间平均每天使用β2激动剂MDI的量。由治疗前预备期间(第-7--1天)那周与治疗期1(第77-84天)的最后一周和治疗期2(第134-140天)的最后一周的平均每天评分之差计算出所用β2激动剂拯救药物距基线的变化。
峰值呼气流的监测在筛选访问期间，指导患者使用小型Wright峰值流计量器。患者在晚上睡觉前测量并在白天日记中记录最好的3个PEFR，早晨起床后服用任何药物之前记录夜间日记记录。计算出每周的总平均每日夜间和早晨峰值气流。通过治疗前预备期间的最后一周和治疗期1(第77-84天)和治疗期2(第134-140天)的最后一周的平均每日PEFR之差计算夜间和早晨峰值气流距基线的变化。
8.统计学方法对各治疗组进行描述性统计分析，计算出人口统计变量和基线变量。通过t检验或相当的非参数检验来评价连续变量，如年龄、疾病持续时间和症状评分。按需用卡方或Fisher精确度检验来评价分类变量。
对于安慰剂与达珠单抗描述性提供了初步疗效(初步疗效FEV1距基线的变化，第二疗效症状评分、β2激动剂拯救药物的使用、哮喘加重次数和平均每日AM峰值呼气流速)的证据。通过配对t检验或Wilcoxon设计的秩次检验来评价组内改变。通过t检验或Wilcoxon-Mann-Whitney检验确定组间统计显著性。用Kaplan-Meier法和对数秩次法评价时间-事件变量。
B.详细的研究方法用于此II期研究的方法和方案的更详细说明公开于2004年3月12日提交的美国临时申请60/552,974中，将其纳入本文作为参考，用于所有目的。
II期方法的完整描述见于蛋白设计实验室方案编号DAC-1003(“慢性持续性哮喘患者的达珠单抗II期、随机化、双盲、安慰剂对照、平行分组研究”(A Phase II，Randomized，Double-Blind，Placebo-Controlled，parallel-Group Study ofDaclizumab in Patient with Chronic，Persistent Asthma))，达珠单抗，日期为2001年3月27日；修改A2001年7月16日；修改B2001年8月24日；修改C2002年4月15日；修改D2002年7月8日；修改E2002年8月28日(将其全文纳入本文作为参考)。
表4用于II期方案的缩写
C.详细的研究结果1.患者分布和基线特征表5-8列出了用达珠单抗治疗之前的患者分布、人口统计状况和基线特征。
表5随机化之前的患者分布
表6随机化后的患者分布
表7患者人口统计学特征
表8基线特征(1)
2.方法的特异性分析表9-17列出了对治疗期1(第0-84天)期间所获患者数据进行方法特异性分析。
表9FEV1(第0-84天)
表10预计的FEV1％(第0-84天)
表11FEV1/FVC(第0-84天)
表12FEF(25-75％)(第0-84天)
对表9-12中所列的患者肺活量数据(FEV1、预计FEV1％、FEV1/FVC和FEF(25-75％))的四种不同方法特异性分析各自表明有显著性差异，这有利于该研究第84天时达珠单抗距离基线的平均改变。
而且，观察到该研究的第14天和第112天之间，达珠单抗治疗患者的基线FEV1百分数测量值一致地保持在安慰剂相应值之上(约2-5％)。
表13症状评分(Sx)(第0-84天)
表14采用β2激动剂MDI(第0-84天)
虽然没有获得其它连续变量的统计学显著性数据，但是对这些变量各自的AM_PEFR、无Sx％天数和％FEV1，到第84天距基线的平均变化相对于安慰剂来说有利于达珠单抗治疗的患者。这种有利于达珠单抗的总趋势进一步支持其在哮喘治疗中的疗效。
表17加重
如表17的结果所示，测定的达珠单抗治疗患者组哮喘加重情况明显较低(8％对15％)。而且，发现达珠单抗治疗患者发展至加重的时间的Kaplan-Meier曲线明显高于(根据存活分布函数)安慰剂治疗患者的相应曲线。在达珠单抗治疗患者中观察到的存活分布函数值提高将发展至加重的时间从约14天延长到225天。
类似地，发现达珠单抗治疗患者发展至需要使用全身皮质类固醇的时间的Kaplan-Meier曲线明显高于(根据存活分布函数)安慰剂治疗患者的相应曲线。在这种情况下，在达珠单抗治疗患者中观察到的存活分布函数值提高将发展至加重的时间从约42天延长到250天。
3.药效学终点表18列出了根据药效学数据和终点获得的结果。此外，观察到达珠单抗治疗患者的外周嗜酸性粒细胞基线水平的百分数在0-84天内所有时间点(第28、56和84天)上基本上维持在低于安慰剂治疗患者的水平。
表18外周嗜酸性粒细胞(第0天-第84天)
4.因果分析也根据对数的奇数比获得二歧变量的结果％加重、Sx降低＞＝25％、FEV1提高＞＝10％。所有三个变量的对数奇数比约为1，这有利于达珠单抗治疗患者。虽然各数据没有统计学显著性，这种有利于达珠单抗的总趋势进一步支持其治疗哮喘的疗效。
5.药代动力学特征(PK)表19中列出了II期研究中测定的主要PK参数。
表19主要PK参数小结
评价了32名患者的PK模式。结果表明清除率低、分布体积低和消除半衰期长达约20天。起初接近血浆体积的低分布体积表明起初没有药物分布在循环系统以外。给予加载剂量后没有观察到药物累积。
在一个临床地点(包括6名患者)从给药的同一部位取血样。这导致在剂量样品值后5分钟发生偏差性高浓度，显著影响Cmax、V1和Vss值的计算。把该地点的所有6名患者排除在V1、Vss和第一剂量Cmax值的统计结果之外。
表明组平均值的模型曲线(即模拟组平均PK模式的半对数级曲线)与所观察到的平均PK值紧密相关。第126天最后一次剂量给药后，到第210天所观察的PK值降低到大约1.5μg/mL达珠单抗的血清浓度。这种降低与该模型曲线紧密相关，此模型曲线大约在第214天降低到1μg/mL血清浓度。
6.免疫原性用桥连ELISA筛选血清样品中的抗达珠单抗抗体。然后，在验证实验中进一步评价筛选到的阳性样品。在测试抗达珠单抗抗体的113名患者中，筛选试验筛选出10名阳性患者。这些患者中，在达珠单抗特异性验证实验中确认了6名为阳性。接受达珠单抗的患者中4.7％(4/86)确认有可检测的抗体。
7.结论上述II期研究结果证明达珠单抗能有效治疗吸入皮质类固醇控制不佳的慢性持续性哮喘成年患者。具体说，患者显示出肺功能(肺活量)提高，如治疗期1(第0天-第84天)期间通过FEV1的基线变化百分数所评价的那样。其它肺活量测定与这些结果一致。日记症状评分、β2激动剂拯救使用和夜间峰值呼气流速揭示了组内和组间距离基线的变化具有统计学显著性。在安慰剂组中未观察到明显的组内变化。
另外，接受达珠单抗的患者显示出发展至需要口服皮质类固醇拯救哮喘加重的时间延长具有统计学显著性。而且，达珠单抗治疗组的外周嗜酸性粒细胞计数明显降低，在所有临床药效学终点中存在一个清晰和一致的信号。
此外，用达珠单抗治疗的耐受性通常良好。在达珠单抗和安慰剂组之间，发生副反应的总频率和严重性没什么不同。
实施例2包括治疗期2期间吸入性类固醇逐渐减少的II期研究数据结果。
本实施例根据到第140天获得的实施例1所述II期研究(蛋白设计实验室方案编号DAC-1003)数据描述了疗效结果。简言之，在第85天(即治疗期2的开始日)开始，患者服用吸入性曲安西龙(TAA)的剂量，每隔两周(第84、98和112天)降低患者完成治疗期1时剂量的25％，直到他们完全取消了吸入的类固醇(第126天)，同时接受达珠单抗1mg/kg或安慰剂输液(第84、98、112和126天)，在15分钟中输入。如实施例1所述(也参见图3的摘要)，每两周观察一次患者的给药剂量、评估和测量药效。
结果证明与安慰剂组患者相比，达珠单抗治疗的患者发展至需要全身给予类固醇拯救的哮喘加重的时间延长(p＝0.024)。而且，相比安慰剂组，达珠单抗组在20周类固醇稳定和类固醇逐渐减少期(11.6％与28.6％，p＝0.09)中病情加重的速率降低。达珠单抗治疗患者显示外周嗜酸性粒细胞计数从基线降低到第20周(-30±20/mm3而安慰剂为+60±30/mm3，p＝0.004)。在前56天期间，与安慰剂相比，血清嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(sECP)基线升高的达珠单抗治疗患者的sECP从基线明显降低(p＜0.01)。与至少有一次加重的达珠单抗治疗患者的基线提高相比，没有哮喘加重的达珠单抗患者的外周嗜酸性粒细胞明显降低(p＝0.032)。
实施例3严重哮喘患者亚组的分析特别分析了实施例1中所述达珠单抗治疗哮喘疗效II期研究在严重哮喘患者亚组中的疗效。其数据用于此分析的患者是在“顽固性哮喘的ATS讨论会论文集目前可理解的推荐和未回答问题”(Proceedings of the ATS workshop on refractoryasthmacurrent understanding，recommendations，and unanswered questions)，American Thoracic Society，Am J Respir Crit Care Med.162(6)2341-51(2000)中所定义的“顽固性哮喘”患者。确定的参数是TAA剂量＞200mcg/天，需要每天或几乎每天使用短效β激动剂的哮喘症状，和FEV1预计值＜80％。II期研究的三十三名患者符合该顽固性哮喘的定义。下表20中列出了第12周时此顽固性哮喘亚组的疗效结果。与实施例1中所列的总哮喘患者群体相比，这些结果支持达珠单抗在严重哮喘患者中疗效更好(与安慰剂相比)的结论。
表20严重哮喘患者群体中的疗效分析
也分析了严重哮喘患者群体的哮喘加重数据。表21提供了治疗期1(第0天-第84天)的结果表明达珠单抗治疗的严重哮喘患者中加重的发生率较低(与安慰剂相比)。
表21严重哮喘群体中的哮喘加重
虽然参考本文的优选实施方式描述了本发明，但是应理解，可作出各种修改而不背离本发明精神。将所有刊物、专利、专利申请和网站以整体纳入本文作为参考，其程度与各专利、专利申请或网站被特别和单独地引用以全文纳入本文作为参考时相同。
权利要求
1.一种对需要呼吸道疾病治疗的患者进行治疗的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量药物制剂，所述药物制剂含有能与IL-2受体特异性结合的抗体。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述呼吸道疾病选自哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、鼻息肉病、Churg-Strauss综合征、鼻窦炎和COPD。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述人源化抗体是达珠单抗。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述抗体与达珠单抗结合相同的表位。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列与达珠单抗的氨基酸序列至少80％相同。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，经胃肠道外、静脉内、肌内或皮下给予所述药物制剂。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述药物制剂是液体，其含有约100mg/ml达珠单抗、约20-60mM pH约5.5-6.5的琥珀酸盐缓冲液、约0.01％-0.1％聚山梨醇酯和产生等渗性的张力缓冲剂。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量约为0.001mg/kg-10mg/kg。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量约为0.5mg/kg-4.0mg/kg。
11.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量是约100mg和200mg之间的固定剂量。
12.一种治疗患者哮喘的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的药物制剂，所述药物制剂含有能与IL-2受体特异性结合的抗体。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述哮喘是慢性持续性哮喘。
14.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述哮喘是中度至重度哮喘。
15.如权利要求12所述的方法，还包括给予患者一种或多种选自下组的药物倍氯米松、布地缩松、氟尼缩松、氟替卡松、曲安西龙、莫米松和奈德。
16.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗体与所述人IL-2受体的结合亲和力至少为108M-1。
17.如权利要12所述的方法，其特征在于，所述抗体与所述人IL-2受体的结合亲和力至少为109M-1。
18.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗体是单克隆抗体。
19.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗体是嵌合抗体。
20.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗体是人抗体。
21.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。
22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述人源化抗体是达珠单抗。
23.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述抗体与达珠单抗结合相同的表位。
24.如权利要求23所述的方法，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列与达珠单抗的氨基酸序列至少80％相同。
25.如权利要求24所述的方法，其特征在于，所述抗体CDR区的氨基酸序列与达珠单抗CDR区的氨基酸序列至少95％相同。
26.如权利要求12所述的方法，其特征在于，经胃肠道外、静脉内、肌内或皮下给予所述药物制剂。
27.如权利要求22所述的方法，其特征在于，所述药物制剂是液体，其含有约100mg/ml达珠单抗、约20-60mM pH约5.5-6.5的琥珀酸盐缓冲液、约0.01％-0.1％聚山梨醇酯和维持等渗性的张力缓冲剂。
28.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量约为0.001mg/kg-10mg/kg。
29.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量约为0.5mg/kg-4.0mg/kg。
30.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述治疗有效量约为100mg和200mg之间的固定剂量。
31.一种对需要Th2细胞介导的过敏性疾病治疗的患者进行治疗的方法，所述方法包括给予所述患者治疗有效量的药物制剂，所述药物制剂含有能与IL-2受体特异性结合的抗体。
32.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述疾病选自哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎、鼻息肉病、Churg-Strauss综合征和鼻窦炎。
33.如权利要求31所述的方法，其特征在于，所述抗体是人源化抗体。
34.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述人源化抗体是达珠单抗。
35.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述抗体与达珠单抗结合相同的表位。
36.如权利要求33所述的方法，其特征在于，所述抗体的氨基酸序列与达珠单抗的氨基酸序列至少80％相同。
全文摘要
本发明提供了治疗呼吸道疾病的方法。具体说，本发明提供了治疗哮喘的方法，该方法包括给予对象治疗有效量的含有抗体的药物制剂，所述抗体能与IL－2受体结合。
文档编号C07K16/28GK1856325SQ200480027204
公开日2006年11月1日 申请日期2004年9月21日 优先权日2003年9月23日
发明者R·S·沙梅斯 申请人:Pdl生物制药股份有限公司