专利名称：新型咪唑衍生物及其作为药剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型咪唑衍生物和它们的可药用盐。这些化合物是蛋白-酪氨酸激酶抑制剂，特别是c-met和src激酶的抑制剂，因此是治疗癌症的优异的治疗剂。本发明还涉及含有这些新型化合物作为治疗癌症和癌症相关疾病的活性剂的药物组合物。
WO 96/18626公开了酪氨酸激酶和c-met激酶的抑制剂，这些抑制剂是2-(2，6-二氯苯基)-4-苯基-5-(吡啶-4基)-1H-咪唑的衍生物(实施例5、6和55)。但是它们具有不利的与细胞色素P450的相互作用。
已经发现本发明的化合物避免了这个缺点，并且是具有良好溶解度的c-met激酶和src家族酪氨酸激酶的有效抑制剂。
因此，本发明涉及通式(I)的新型化合物， 式(I)其中K，L独立地表示氢；卤素；烷基；-OH；或-O-烷基；X是氢；-OR1；-SR2；-S(O)R2；-S(O)2R2；-CH2-S-CH2-C(O)2-CH2-CH3；-CH2-S-(CH2)2-OH或基团A1-Q；其中A1表示C1-C3-亚烷基；并且
Q是-OR1；-SR2；-S(O)R2；-S(O)2R2；-NR3R4；-NH-(CH2)2-NR3R4或卤素；R1是氢；烷基；烯丙基；二甲基膦酰基甲基；2，3-环氧基-1-丙基；(R)-2，3-二羟基-1-丙基；(S)-2，3-二羟基-1-丙基；1，3-二羟基-2-丙基；3-羟基-2-羟甲基-1-丙基；2-甲氧基乙氧基甲基；2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基甲基或基团A1-Q1；并且Q1表示-O-烷基；-CN；-C(O)2H；-C(O)2-烷基；-C(O)-NR3R4；-S-烷基；-S(O)-烷基；-S(O)2-烷基，并且在A1表示1，2-亚乙基-或1，3-亚丙基的情况下，Q1是-OH或-NR3R4；R3，R4独立地表示氢或烷基；或者R3和R4与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；R2是烷基；二甲基膦酰基甲基；2，3-环氧基-1-丙基；2，3-二羟基-1-丙基；2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基甲基或A1-Q1；Y是芳基或杂芳基，其是未取代的或者被以下基团取代一、二或三次卤素；-CH2OR5；-R5；-OR5；-NR6R7；-SR5；-S(O)R5；-S(O)2R5；-S(O)NHR5；-S(O)2NHR5；-S(O)NR6R7；-S(O)2NR6R7；-C(O)NHR5；-C(O)NR6R7；或CN；R5是氢；或烷基，该烷基是未取代的或者被OH、-O-烷基或-NR6R7取代；条件是没有两个杂原子连接在同一个碳原子上；R6，R7独立地表示氢或烷基；或R6和R7与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；Z是卤素；-OH；-O-烯丙基；烷基；甲氧甲氧基；(2-甲氧乙氧基)甲基氧基；甲硫基；乙氧甲氧基；亚甲基二氧基；乙炔基；三甲代甲硅烷基乙炔基；或
-O-烷基，其中烷基是未取代的或者被吡啶基取代；或者苄氧基，所述苄氧基是未取代的或者被卤素、甲氧基、乙氧基、亚甲基二氧基、-CN、-NO2或-C(O)2H取代；并且n是1或2；和它们的可药用盐。
本发明的化合物显示出作为蛋白激酶抑制剂的活性，特别是c-met激酶和src家族酪氨酸激酶抑制剂活性，因而可用于治疗所述酪氨酸激酶介导的疾病。酪氨酸激酶家族通过磷酸化肽和蛋白质的酪氨酸残基在细胞信号和细胞增殖调节中起重要作用。已知酪氨酸激酶的不当活化和多种病态有关，包括炎性的、免疫的、CNS紊乱，或者肿瘤病症，或者骨病。例如，参见Susva，M.等，Trends Pharmacol.Sci.，21(2000)489-495；Biscardi，J.S.等，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119。
C-met突变体已经在遗传和散发性人乳突状肾癌中进行了充分描述，并且已经在卵巢癌、幼年肝细胞癌、转移性头和颈鳞状细胞癌和胃癌中有报道。C-met还在非小细胞肺癌和小细胞肺癌细胞中，在胸、结肠和前列腺瘤中过表达。由于c-met看来似乎在各种肿瘤的肿瘤发生中起重要作用，已经采用了各种抑制策略来治疗性地靶向这种受体酪氨酸激酶。
在许多经过证明的临床前实验中已经显示了抑制蛋白-酪氨酸激酶c-met对于抑制肿瘤生长的有效性(例如Abounader，R.等，J.Natl.Cancer Inst.91(1999)1548-1556；Laterra，J.等，Lab.Invest.76(1997)565-577；Tomioka，D.，Cancer Res.61(2001)7518-7524；Wang，R.等，J.Cell Biol.153(2001)1023-1033)。
本发明的化合物是蛋白酪氨酸激酶抑制剂，特别是c-met和src家族激酶抑制剂，因而可用作预防和治疗由所述激酶介导的疾病的活性剂；例如，移植排斥、炎性肠综合症、类风湿性关节炎、牛皮癣、再狭窄、变应性哮喘、阿尔茨海默氏病、帕金森症、中风、骨质疏松、癌症以及良性增生。
本发明的目的是式(I)化合物和它们的可药用盐和对映体形式，上述化合物的制剂，含有它们的药物和它们的制造方法，以及上述化合物在控制或预防疾病，特别是上述的疾病，或者在制造相应的药物中的用途。
此处使用的术语″烷基″是指直链或支链饱和烃，该饱和烃含有1～6个、优选1～4个、更优选1～3个碳原子，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，2-丁基，叔丁基，正戊基，正己基，以及它们的异构体。
此处使用的“C1-C3-亚烷基”表示含有1、2或3个碳原子的二价饱和线性或支链烃。优选所述的C1-C3-亚烷基是线性的，其实例为亚甲基，亚乙基，亚丙基或亚异丙基。
此处使用的术语“芳基”表示6～10元的单环或双环芳烃环。其实例为苯基，萘基或茚基。优选所述的“芳基”是苯基。
此处使用的术语“杂芳基”表示5～10元的单环或双环芳烃环，其中1、2或3个碳原子，优选1或2个碳原子可以被氮、氧或硫取代。其实例为呋喃基，噻吩基，吡咯基，异噁唑基，咪唑基，吡啶基，嘧啶基，苯并呋喃基，吲哚基。优选所述的“杂芳基”是吡啶基。
“卤素”是指氟、氯、溴或碘。
本发明的一个实施方案是式(I)化合物，其中K，L都是氯；X是氢；烷基或-O-烷基，所述烷基被-OH取代；Y、Z和n如上定义；和它们的生理上可接受的盐。
本发明的另一实施方案是式(I)化合物，其中K，L都是氯；X是氢；烷基或-O-烷基，所述烷基被-OH取代；Z是卤素或乙炔基；Y是苯基，其是未取代的或者被以下基团取代一次卤素；-CH2OR5；-R5；-OR5；-NR6R7；-SR5；-S(O)R5；-S(O)2R5；-S(O)NHR5；-S(O)2NHR5；-S(O)NR6R7；-S(O)2NR6R7；-C(O)NHR5；-C(O)NR6R7；或CN；R5是氢；或烷基，其是未取代的或者被OH取代；
-O-烷基或-NR6R7；条件是没有两个杂原子连接在同一个碳原子上；R6，R7独立地表示氢或烷基；n是1；和它们的可药用盐。
这样的化合物例如为2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-溴苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-二甲基氨基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(N-(2-羟基乙基)-氨磺酰基)苯基氨基]-嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-甲基亚磺酰基-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(N-(2-羟基乙基)-氨磺酰基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-羟基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，
2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-甲氧基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-乙氧基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，或2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑。
本发明的另一实施方案是式(I)化合物，其中K，L都是氯；X是氢；Z是卤素；Y是被-NR6R7取代的苯基，其中R6和R7与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；n是1；和它们的可药用盐。
这样的化合物例如为2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-吗啉基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，或2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-吗啉基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑。
本发明的另一实施方案是式(I)化合物，其中K，L都是氯；X是氢；
Z是卤素；Y是杂芳基，其是未取代的或者被以下基团取代1、2或3次卤素；-CH2OR5；-R5；-OR5；-NR6R7；-SR5；-S(O)R5；-S(O)2R5；-S(O)NHR5；-S(O)2NHR5；-S(O)NR6R7；-S(O)2NR6R7；-C(O)NHR5；-C(O)NR6R7；或CN；R5是氢；或烷基，其是未取代的或者被OH取代；-O-烷基或-NR6R7；条件是没有两个杂原子连接在同一个碳原子上；R6，R7独立地表示氢或烷基；或R6和R7与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；n是1；和它们的可药用盐。
本发明的另一实施方案是式(I)化合物，其中K，L都是氯；X是氢；Z是卤素；Y是吡啶基，其是未取代的或者被烷基取代；n是1；和它们的可药用盐。
这样的化合物例如为2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-吡啶基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑。
本发明的再一实施方案是制备根据权利要求1的化合物的方法，其中a)将通式(VI)化合物
与式Y-NH2化合物反应，得到式(I)化合物；取代基K、L、X、Y、Z以及n如上所定义；并且其中式(VI)化合物是通过氧化通式(V)表示的硫醚的硫醚基而获得的， 其中式(V)化合物是通过通式(IV)化合物的N-脱氧获得的， 并且所述的通式(IV)化合物是通过通式(II)化合物
与通式(III)化合物的反应而获得的， b)从反应混合物中分离所述的式(I)化合物，和c)如果需要，通过加入合适的酸或碱，将它们转化成可药用的盐。
通式(I)的化合物可以通过以下方法制备将通式(VI)的化合物与胺Y-NH2，其中K、L、X、Y、Z以及n具有此前定义的含义，在100～250℃范围内的温度下反应，然后分离所述的化合物。优选使用化学计量比量的或者过量的所述胺。反应可以在没有溶剂的情况下，或者在如N-甲基吡咯烷酮、二噁烷、二甲氧基乙烷或甲苯的溶剂中，通过常规的加热或者在微波反应器中加热而进行。
通式(VI)的化合物可以通过氧化由通式(V)表示的硫醚的硫醚基而获得。为了合成通式(VI)的砜，优选使用过硫酸氢钾制剂TM，但是3-氯过苯甲酸也一样能用。
通式(V)的硫醚 可以通过通式(IV)化合物的N-脱氧而获得。这种反应优选在三乙胺存在下使用溴乙酸乙酯进行(Somei，M.和Tsuchiya，M.，Chem.Pharm.Bull.29(1981)3145-3157)。备选地，该还原反应可以通过在二甲基甲酰胺中使用亚磷酸三乙酯而实现。
通式(IV)的化合物可以通过通式(III)化合物与通式(II)化合物的反应而获得，其中取代基K、L、X和Z具有此前定义的含义。该反应是缩合反应，优选在氨存在下使用已知的用于其它醛的方法进行。
本发明的再一实施方案是通式(II)化合物的用途，其中取代基K、L和X具有此前定义的含义，所述用途是按照如上所述的方法制造通式(I)的化合物。
式(I)表示2-苯基-4-苯基-5-(4-嘧啶基)-1H-咪唑，这些化合物是2-苯基-5-苯基-4-(4-嘧啶基)-1H-咪唑的互变异构体。两种互变异构体表示相同的结构，它们的命名可以交换使用，并且两种互变异构体都是本发明的一部分。
通式(I)的化合物可以包含一个或几个手性中心，并且可以以外消旋或光学活性形式存在。可以依照已知的方法将外消旋体分离成对映体。例如，可以通过结晶分离的非对映异构体盐是通过和光学活性酸反应而从外消旋混合物形成的，所述光学活性酸如D-或L-酒石酸，扁桃酸，苹果酸，乳酸或樟脑磺酸。作为选择，可以使用可商购的手性HPLC相的色谱来实现对映体的分离。
根据本发明的化合物可以以它们的可药用盐形式存在。此前使用的术语“可药用的盐”是指保持了式(I)化合物生物效力和性质的常规酸加成盐或碱加成盐，这些盐是从合适的无毒有机或无机酸、或者有机或无机碱形成的。酸加成盐的实例包括那些衍生自无机酸的盐，所述无机酸如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸和硝酸，以及衍生自有机酸的盐，所述有机酸如对甲苯磺酸，水杨酸，甲磺酸，草酸，琥珀酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸等。碱加成盐的实例包括衍生自铵，钾，钠和季铵的氢氧化物的盐，例如衍生自氢氧化四甲基铵的盐。将药物化合物(即，药物)化学改性成盐对药物化学家而言是众所周知的技术，以获得改善的物理和化学稳定性，吸湿性，流动性和溶解度(参见例如Ansel，H.等，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，第6版，(1995)，196和1456-1457页)。
通过如下试验可以评价本发明的化合物作为src-家族酪氨酸激酶抑制剂和c-met激酶抑制剂的活性。
SRC抑制剂试验参数反应混合物ATP5μM
肽(Ro+Ja133-Ro) 10μMJa133-Ro196nMRo 9.8μMPT66230ng/ml试验缓冲液 4mM MgCl22mM TCEP50mM HEPES0.1％吐温20pH 7.3酶 2.5U/ml抑制剂 最大25μM最小0.42nM材料Eu-标记的磷酸酪氨酸抗体-用于Lek Cisbio Mab PT66-K，-用于Src EG&G Wallac PT66 Eu-W1024(均可商购)。
肽RoNH2-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，和Ja133-RoJa133-G-氨基辛酸-A-E-E-E-I-Y-G-E-F-E-A-K-K-K-K-CONH2，其中Ja 133是LightCycler-Red-N-羟基琥珀酰亚胺酯；这两种肽都是在Zinsser SMP350肽合成仪上用优化固相肽合成法合成的(Merrifield，Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412)。简言之，通过重复共轭结合20倍过量的氨基酸，每种氨基酸都根据侧链功能用临时的哌啶不稳定的Fmoc-以及永久的酸不稳定叔丁基-、BOC-和Otert-Bu-基保护，在160mg(22.8μmol尺度)的Rink-Linker改性的聚苯乙烯固相上组装所述肽。将底物序列AEEEIYGEFEAKKKK的N-末端再安装上间隔氨基酸氨基辛酸和甘氨酸。在断开N-末端临时保护基后，用1.5倍量的LightCycler-Red 640-N-羟基琥珀酰亚胺酯(购自Roche Diagnostics GmbH)和三乙胺标记仍然附着和保护着的肽。3小时后，用二甲基甲酰胺和异丙醇冲洗树脂，直至蓝色树脂的洗脱物变无色。将全保护和标记的肽从固相中除去，并且通过用80％三氟乙酸、10％乙二硫醇、5％苯硫基甲烷(Thioanisol)和5％水的混合物进行处理，除去永久保护基。通过制备型反相HPLC纯化最后分离底物。纯化后得到12.2mg RP-HPLC单峰纯的蓝色材料(冻干物)。用MALDI质谱确认[2720.0]。
酶Upstate Lck(p56lck，活性)，Upstate Src(p60c-src，部分纯化)，均购自UBI。
时间分辨的荧光分析读数器Perkin Elmer，Wallac Viktor 1420-040多标记计数器；液体处理系统Beckman Coulter，Biomek 2000。
ATP、吐温20、HEPES购自Roche Molecular Biochemicals，MgCl2和MnCl2购自Merck Eurolab，TCEP购自Pierce，384孔小体积荧光板购自Falcon。
试验描述首先将酶和相应量的根据本发明的抑制剂在水溶液中于15℃预温育15分钟。然后，加入包含ATP、肽和PT66的反应混合物并进行振荡，开始磷酸化反应。立即在合适的孔板读数器中使用时间分辨的荧光光谱监测该反应的进程。
使用非线性曲线拟合(Excelfit)，可以从反应速度获得IC50值。
结果
c-met抑制剂试验试验原理C-met是涉及肿瘤转移、增殖/凋亡和血管生成的典型酪氨酸激酶。该试验是使用磷酸-酪氨酸特异性抗体测量c-met的磷酸化的ELISA型试验。
将已知具有高c-met含量的人结肠腺癌HT29的细胞溶解产物通过抗-hHGF受体抗体(抗-hHGFR)结合到微量滴定板(MTP)的孔中。使用磷酸-酪氨酸小鼠IgG和POD标记的山羊抗-小鼠IgG检测体系，在测试化合物存在或不存在下，检测c-met的ATP-磷酸化。使用传统的POD底物TMB，使用450nm/620nm的吸收来计算酶活性。
材料板96孔聚苯乙烯板(NUNC)链霉抗生物素-涂布的微量滴定板细胞系/溶胞产物HT29(ATCC HTB-38)，将人结肠腺癌(汇合2.5×105细胞/cm2)用PBS洗涤，并且在冰上用溶胞缓冲液温育10分钟。收集上清液，用TBS稀释。溶胞产物在液氮中速冻，在-80℃储存。
试剂(除非另外声明，所有工作溶液都保持在4℃)抗-hHGFR检测储液50μg/ml(R&D Systems，Cat.No.BAF 358)抗体最终浓度1μg/mlp-Tyr(PY99)小鼠储液200μg/ml(Santa Cruz Biotechnology，单克隆IgG2b Cat.No.SC-7020)最终浓度0.2μg/ml山羊-抗-小鼠IgG2ml(BIO RAD，Cat.No.170-6516)，(H+L)-HRP共轭物；最终浓度1∶2000封闭试剂用于ELISA的Roche Diagnostics GmbH，Cat.No.1112589，以1∶10稀释在TBS中ATP腺苷-5’-三磷酸，储液10mM，储液10mM(Roche DiagnosticsGmbH，Cat.No.127531)，最终浓度40μMTBSTris-缓冲的盐水，50mM TRIS pH 7.5(Roche Diagnostics GmbH，Cat.No.708976)，150mM NaCl(SIGMA，Cat.No.S-3014)洗涤缓冲液TBS-TTris-缓冲的盐水，50mM TRIS pH 7.5 150mMNaCl，含0.5％吐温20激酶缓冲液Tris-缓冲的盐水，50mM TRIS pH 7.5，100mM NaCl，60mM MgCl2(SIGMA Chemical Company，Cat.No.M-1028)溶胞缓冲液50mM TRIS pH 7.5，含1％ Nonidet P40(RocheDiagnostics GmbH，Cat.No.1754599)0.5％脱氧胆酸(SIGMA ChemicalCompany，Cat.No.D-6750)，最终浓度1mM 1mM PMSF储液70mM(Roche Diagnostics GmbH，Cat.No.83709 140μl/ml Complete(RocheDiagnostics GmbH，Cat.No.1836145)，最终浓度40μl/mlTMB四甲基联苯胺(Intergen Company，Cat.No.91000)样品10mM DMSO溶液(于-20℃储存)，室温解冻。
程序1.将50μl抗-hHGFR检测抗体的封闭试剂溶液加入至试验板上(最终浓度1μg/ml)，在MTP振荡器上于室温温育试验板60分钟。
2.从试验板上除去抗-hHGFR检测抗体溶液。
3.向试验板每孔加入250μl封闭试剂，在4℃温育试验板20小时。
4.从试验板上除去封闭试剂。
5.加入50μl HT29溶胞产物，在MTP振荡器上于4℃温育试验板180分钟。
6.用每孔2×200μl TBS缓冲液的量洗涤试验板。
7.向试验板加入40μl在激酶缓冲液中的0.2％DMSO。
8.加入40μl样品溶液(溶解在激酶缓冲液中-最终浓度22.5μM)。
9.将样品溶解在MTP中(1∶3比率)。
10.将10μl溶解在激酶缓冲液(200μM)中的ATP加入到样品中(最终浓度40μM ATP)。阳性对照加入40μl激酶缓冲液+10μl 200μMATP。阴性对照加入40μl激酶缓冲液+10μl不含ATP的激酶缓冲液。在MTP振荡器上于室温温育试验板60分钟。
11.用每孔2×200μl TBS缓冲液和2×200μl封闭试剂的量洗涤试验板。
12.将50μl P-Tyr(PY99)小鼠单克隆IgG2b的封闭试剂溶液(最终浓度200ng/ml)加入到试验板，在MTP振荡器上于4℃温育试验板过夜。
13.用每孔2×200μl TBS缓冲液和2×200μl封闭试剂的量洗涤试验板。
14.加入50μl山羊抗-小鼠IgG(H+L)-HRP共轭物的封闭试剂溶液(1∶2000比率)，在MTP振荡器上于室温温育试验板60分钟。
15.用每孔6×200μl TBS-T缓冲液的量洗涤试验板。
16.加入50μl TMB溶液，在MTP振荡器上于室温温育30分钟，加入25μl 1M H2SO4。
17.测量450nm/620nm处的光密度(E)。
18.如下计算％抑制率1-[(E样品-E阴性对照)/(E阳性对照-E阴性对照)×100]。
结果
因此，式(I)化合物和式(I)化合物的可药用盐可用作药物，例如以药物制剂形式用作药物。药物制剂可以口服，例如其形式有片剂、包衣片剂、糖锭剂、硬和软明胶胶囊、溶液剂、乳剂或悬浮剂。但是，还可以进行直肠给药，例如以栓剂形式，或者可以肠胃外给药，例如以注射液形式。
可以用药学惰性的无机或有机载体加工式(I)化合物而制备药物制剂。例如，可以使用乳糖，玉米淀粉或其衍生物，滑石，硬脂酸或其盐等，作为用于片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊的这种载体。软明胶胶囊的合适载体为，例如植物油，蜡，半固体和液体多元醇等。但是，根据活性物质的性质，软明胶胶囊通常不需要载体。制造溶液或糖浆的合适载体为，例如水，多元醇，甘油，植物油等。栓剂的合适载体为，例如天然或硬化油，蜡，脂肪，半液体或液体多元醇等。
此外，药物制剂还可以包含防腐剂，增溶剂，稳定剂，湿润剂，乳化剂，甜味剂，着色剂，食用香料，用于改变渗透压的盐，缓冲剂，掩蔽剂或抗氧化剂。它们还可以包含其他有治疗价值的物质。
使用以下程序获得优选的药物制剂1、在定制管GL 25，4cm中称取4.0g玻璃珠(珠子装满半管)。
2、加入50mg化合物，用刮勺(spatulum)分散并涡流。
3、加入2ml明胶溶液(珠子∶明胶溶液重量比＝2∶1)并涡流。
4、加盖并用铝箔裹上以避光。
5、制备磨粉机的平衡物。
6、在Retsch磨粉机中以20/s碾磨4小时(有些物质以30/s碾磨24小时)。
7、在400g下离心2min，用固定在过滤器支架上并接上接收瓶的两层过滤器(100μm)过滤，从珠子中提取出悬浮液。
8、将提取物移动到量筒中。
9、用少量(此处为1ml每步)重复洗涤，直至达到最终体积或者提取物变澄清。
10、用明胶填充至最终体积并匀质化。
上述制备方法得到式(I)化合物的微悬浮液，其中粒子大小在1到10μm之间。这种悬浮液适合口服。
还优选的本发明化合物的药物制剂是通过湿法造粒的片剂，方法如下材料项目 成分mg/片1.式(I)化合物 525100500
2.乳糖无水DTG125105301503.Sta-R×1500 6 6 6 304.微晶纤维素 30 30 30 1505.硬脂酸镁 1 1 1 1合计 167167167 831制造方法1、混合1、2、3和4项，并用纯水造粒。
2、在50℃下干燥颗粒。
3、让颗粒通过合适的磨粉设备。
4、加入第5项并混合3分钟；在合适的压力机上压缩。
另一优选的药物制剂是用以下方法制造含有本发明化合物的胶囊材料项目 成分 mg/胶囊1.式(I)化合物 5 25 100 5002.含水乳糖 159123 148 ---3.玉米淀粉 25 35 40 704.滑石 10 15 10 255.硬脂酸镁 1 2 25合计 200200 300 600制造方法1、在合适的混合器中混合1、2、和3项30分钟。
2、加入4和5项并混合3分钟。
3、填充到合适的胶囊中。
向患者给药的本发明化合物的剂量可以在宽限度内变化，并且还必须在每个具体病例中根据个体需要调整。日剂量可以以单剂量或者分剂量形式给药，另外，当发现有必须治疗的迹象时，可以超过上限。
因此，本发明的一个目的是一种药物组合物，其含有一种或多种式(I)化合物以及可药用赋形剂。
本发明的另一目的是用于抑制肿瘤生长的如上所述的药物组合物。
本发明的再一目的是式(I)化合物用于治疗癌症的用途。
本发明的再一目的是式(I)化合物用于制造药物的用途，所述的药物用于治疗由c-met或src酪氨酸激酶介导的疾病。
本发明的再一目的是式(I)化合物用于制造用于抑制肿瘤生长的药物的用途。
以下实施例和制备例举例说明了本发明，但是无限制其范围的含义。
实施例A取代的2，6-二氯苯甲醛的合成实施例A12，6-二氯-4-羟基苯甲醛(A1)制备3，5-二氯三异丙基甲硅烷氧基苯(A1.1)于0℃在1小时内向200g 3，5-二氯苯酚和330ml 2，6-二甲基吡啶的3.0升无水CH2Cl2溶液中加入400g三异丙基甲硅烷基三氟甲磺酸酯，并且将混合物在此温度再搅拌3小时。在用1.0升水水解后，将有机层用饱和NaCl洗涤，MgSO4干燥，并且蒸发至干(70℃/80毫巴)。残余物置于石油醚中，并且通过硅胶过滤，得到360g(92％)A1.1无色油状物。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ＝1.03-1.15(m，18H，CH3)；1.16-1.35(m，3H，CH)；6.73-6.80(m，2H，CH芳族)；6.92-6.98(m，1H，CH芳族)13C-NMR(62.9MHz，CDCl3)δ＝12.7(CH)；18.0(CH3)；119.0，121.6(CH芳族)；135.2，157.4(C芳族)。
2，6-二氯-4-羟基苯甲醛(A1)和2，6-二氯-4-三异丙基甲硅烷氧基-苯甲醛(A1.2)的制备在氮气下保持低于-65℃的温度，向360g A1.1的2.6升无水四氢呋喃溶液中加入440ml正丁基锂(2.7M己烷溶液)。在-70℃搅拌2小时后，在保持温度低于-65℃的情况下加入120ml无水二甲基甲酰胺。将混合物温热至室温过夜。在加入700ml 4M HCl后，将混合物在室温剧烈搅拌1小时。然后进行相分离(加入固体NaCl也许是必要的)，并且将有机层用硫酸钠干燥并真空缩减。沉淀物用甲苯/四氢呋喃重结晶，得到154g(70％)A1，m.p.229-230℃。
1H-NMR(250MHz，DMSO-D6)δ＝6.94(s，2H，CH芳族)；10.25(s，1H，CH＝O)，11.46(s(宽)，1H，OH)13C-NMR(62.9MHz，DMSO-D6)δ＝117.0(CH芳族)；120.7，137.8，162.1(C芳族)；187.2(CH＝O)。
实施例A22，6-二氯-4-羟甲基苯甲醛(A2)3，5-二氯(三异丙基甲硅烷氧基甲基)苯(A2.1)的制备进行类似于实施例A1.1中所述的反应，但是开始于3，5-二氯苄醇，以类似的产率得到无色油状的标题化合物。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ＝0.96-1.25(m，21H，异丙基)；4.78(s，2H，OCH2)；7.23(s，2H，CH芳族)13C-NMR(62.9MHz，CDCl3)δ＝12.1(CH)；18.1(CH3)；64.0(OCH2)；124.2，127.0(C芳族H)；134.9，145.3(C芳族)。
2，6-二氯-4-(三异丙基甲硅烷氧基甲基)苯甲醛(A2.2)的制备在保持低于-70℃的温度的情况下，在氮气下向70g A2.1的220ml无水四氢呋喃溶液中加入131ml正丁基锂(1.6M己烷溶液)。在-75℃搅拌45分钟后，在保持温度低于-65℃的情况下加入28ml无水二甲基甲酰胺。在-75℃再搅拌混合物30分钟后，使其在3小时内升温到0℃。在0℃2小时后，加入150ml冰水和150ml乙醚。进行相分离，用100ml乙醚萃取水层。合并的有机层用NaCl水溶液洗涤，硫酸钠干燥，并且蒸发至干。产量73g(95％)A3.2，为浅棕色油状物，在冰上静置时凝固。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ＝1.03-1.28(m，21H，异丙基)；4.82(s，2H，OCH2)；7.37(s，2H，CH芳族)；10.48(s，1H，CH＝O)13C-NMR(62.9MHz，CDCl3)δ＝12.0(CH)；18.1(CH3)；63.6(OCH2)；126.8(C芳族H)；128.6，137.2，149.0(C芳族)；188.8(CH＝O)。
2，6-二氯-4-羟甲基苯甲醛(A2)的制备向50℃的65g(0.18mol)A2.2的1100ml乙醇溶液中加入180ml 0.25N HCl，并且将混合物在85℃搅拌6小时。真空下除去乙醇，从而使产物沉淀。加入700ml乙酸乙酯/石油醚(2∶1)，并且将有机层用水和NaCl水溶液洗涤，硫酸钠干燥。将溶液减少到约100g，加入200ml温热石油醚，并且短暂温热到50℃。在室温静置过夜后，滤出沉淀的A2，并用石油醚/乙酸乙酯(15∶1)洗涤。产量24.3g(66％)。母液用柱色谱纯化后得至另外的4g A2，m.p.109-110℃。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ＝1.99(t，4.4Hz，1H，OH)；4.74(d，4.4Hz，2H，OCH2)；7.40(s，2H，CH芳族)；10.48(s，1H，CH＝O)13C-NMR(62.9MHz，CDCl3)δ＝63.4(OCH2)；127.5(C芳族H)；129.2，137.4，147.9(C芳族)；188.7(CH＝O)。
实施例A4(3，5-二氯-4-甲酰基苯氧基)乙酸甲酯(A4)的制备将382mg(2.0mmol)A1、337mg(2.2mmol)溴乙酸甲酯和387mg(2.8mmol)碳酸钾在6ml无水丙酮中的混合物在60℃搅拌2小时。在过滤和除去溶剂后，残余物用硅胶柱色谱纯化(己烷/乙酸乙酯4∶1)。产量508mg(97％)A4，无色固体。
1H-NMR(250MHz，DMSO-D6)δ＝3.72(s，3H，CH3)；5.04(s，2H，CH2)；7.28(s，2H，CH芳族)；10.29(s，1H，CH＝O)。
13C-NMR(62.9MHz，DMSO-D6)δ＝52.1(CH3)，65.2(CH2)；116.5(CH芳族)；123.1，137.5，161.1(C芳族)；168.3(C＝O)；187.8(CH＝O)。
R“Weinreh”-型酰胺的合成实施例B13-溴-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(B1)向冰冷却的48.9g(0.491mol)N，O-二甲基羟胺盐酸盐和140.0ml(1.00mol)三乙胺的650ml无水二氯甲烷溶液中，加入100.0g(0.447mol)3-溴苯甲酰氯，历时30分钟。在另外搅拌30分钟后，加入370ml水，并且用硫酸钠干燥有机层。真空分馏得到101.4g(93％)B1，b.p.114-129℃/0.07毫巴，为无色油状物。
MS246(API+)1H-NMR(250MHz，CDCl3)δ＝3.35(s，3H，NCH3)，3.56(s，3H，OCH3)，7.27(t，1H，5-H)，7.58(m，1H，4-H)，7.60(m，1H，6-H)，7.82(t，1H，2-H)。
实施例B23-氯-N-甲氢基-N-甲基苯甲酰胺(B2)进行类似于实施例B1中所述的反应，但是开始于3-氯苯甲酰氯，得到B2。
MS200(API+)。
实施例B34-氯-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(B3)进行类似于实施例B2中所述的反应，但是开始于4-氯苯甲酰氯，得到B3。
MS200(API+)。
实施例B43-碘-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(B4)进行类似于实施例B1中所述的反应，但是开始于3-碘苯甲酰氯，得到B4。
MS292(API+)。
C“乙酮”的合成实施例C11-(3-溴苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙酮(C1)将19.8ml(140mmol)二异丙基胺溶解在250ml无水四氢呋喃中并且冷却至-75℃，加入87.6ml的正丁基锂溶液(1.6M己烷溶液，140mmol)，历时20分钟。在-75℃搅拌15分钟后，于-75℃在30分钟内加入13.1g(93mmol)2-甲硫基-4-甲基嘧啶的80ml无水四氢呋喃溶液，再将混合物搅拌15分钟。然后于-75℃在30分钟内加入25.1g(103mmol)B1。让混合物温热到室温，并且倾倒在600ml乙酸乙酯/水(1∶1)上。水层用50ml乙酸乙酯萃取，并且将合并的有机层用硫酸钠干燥。真空下除去溶剂，得到23.3g(77％)C1，m.p.98-101℃。
MSM＝325(ESI+)，M＝323(ESI-).
1H-NMR(250MHz，CDCl3)“烯醇(enole)”(75％)δ＝2.62(s，3H，SCH3)，5.97(s，1H，CH＝C)，6.66(s，1H，5-H-嘧啶)，8.34(d，1H，6-H-密啶)，14.7(s，1H，OH)。
“酮”(25％)δ＝2.52(s，3H，SCH3)，4.35(s，2H，CH2)，6.97(d，1H，5-H-嘧啶)，8.46(d，1H，6-H-嘧啶)。
实施例C21-(3-氯苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙酮(C2)进行类似于实施例C1中所述的反应，但是开始于B2，得到C2。
MS279(API+)。
实施例C31-(4-氯苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙酮(C3)进行类似于实施例C1中所述的反应，但是开始于B3，得到C3。
MS279(API+)。
实施例C41-(3-碘苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙酮(C4)进行类似于实施例C1中所述的反应，但是开始于B4，得到C4。
MS371(API+)。
实施例C51-(3-三甲代甲硅烷基-乙炔基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-乙酮(C5)在氮气下向10℃的16.3g(44.0mmol)C4的260ml无水THF溶液中加入1.5g(2.2mmol)双-(三苯膦)钯-II-氯化物、900mg(4.7mmol)铜-I-碘化物、12ml(85mmol)三甲代甲硅烷基乙炔和30ml二异丙胺，搅拌混合物，并且继续让其升温温热到室温。在室温搅拌过夜后，加入260ml水，并且用乙醚萃取混合物两次。分离有机层，干燥并且蒸发至干。残余物的硅胶柱色谱(异己烷/乙酸乙酯3∶1)得到12.5g(83％)C5。
MS341(API+)。
D“酮肟”的合成实施例D11-(3-溴苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-2-羟基亚氨基-乙酮(D1)将12.75g(39.5mmol)C1溶解在173ml冰醋酸(glacial acid)、136ml四氢呋喃和17ml水的混合物中。在冷却至5℃后，在保持温度在5℃～10℃之间的情况下加入3.24g(47.0mmol)亚硝酸钠的25ml水溶液。撤去冷却，在室温下搅拌混合物6小时。在真空除去溶剂后，加入320ml水和320ml乙酸乙酯。用3N NaOH将pH调节到8。进行相分离，水层用50ml乙酸乙酯萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，并且真空除去溶剂。残余物用乙醚处理，滤出并且干燥。产量8.33g(60％)D1，m.p.156-158℃。
MSM＝352(ESI+)，M＝340(ESI-)。
1H-NMR(250MHz，D6-DMSO)δ＝2.20(s，3H，SCH3)，7.54(t，1H，5-H-BrPh)，7.66(d，1H，5-H-嘧啶)，7.81(m，1H)，7.92(m，2H)，8.70(d，1H，6-H-嘧啶)，12.9(s，1H，OH)。
实施例D21-(3-氯苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-2-羟基亚氨基-乙酮(D2)进行类似于实施例D1中所述的反应，但是开始于C2，以88％的产率得到D2。
MS308(API+)。
实施例D31-(4-氯苯基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-2-羟基亚氨基-乙酮(D3)进行类似于实施例D1中所述的反应，但是开始于C3，以76％的产率得到D3。
MS308(API+)。
实施例D41-(3-三甲代甲硅烷基乙炔基)-2-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-2-羟基亚氨基-乙酮(D4)进行类似于实施例D1中所述的反应，但是开始于C5，得到D4，产率54％，m.p.140-145℃。
MS370(API+)，368(API-)。
E“N-羟基咪唑”的合成实施例E1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-溴苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E1.1)将27.9g(79.3mmol)D1、14.6g(83.2mmol)2，6-二氯苯甲醛和61.0g(793mmol)乙酸铵溶解在550ml冰醋酸中，在100℃搅拌150分钟。真空蒸馏除去冰醋酸，残余物用乙酸乙酯/水处理，并且用浓氨水调节到pH8。滤出沉淀，用乙酸乙酯洗涤并且干燥，得到24.8g(62％)E1，m.p.251-253℃。水层用乙酸乙酯萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥。真空除去溶剂，并且用乙醚处理，得到另外的8.9g(22％)E1.1。
MSM＝509(API+)，507(API-)。
实施例E2.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E2.1)进行类似于实施例E1.1中所述的反应，但是开始于D2，以85％的产率得到E2.1。
MSM＝465(API+)，463(API-)。
实施例E2.22-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E2.2)进行类似于实施例E1.1中所述的反应，但是开始于D2和A2，以67％的产率得到E2.2。
MSM＝495(API+)，493(API-)。
实施例E2.32-(2，6-二氯-4-[甲氧羰基甲氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E2.3)进行类似于实施例E1.1中所述的反应，但是开始于D2和A4，以98％的产率得到E2.3。
MSM＝553(ESI+)，551(ESI-)。
实施例E3.12-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E3.1)进行类似于实施例E1.1中所述的反应，但是开始于D3，以96％的产率得到E3.1。
MSM＝465(API+)，463(API-)。
实施例E4.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-三甲代甲硅烷基乙炔基苯基)-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E4.1)进行类似于实施例E1.1中所述的反应，但是开始于D4，以61％的产率得到E4.1。
MSM＝525(API+)，523(API-)。
实施例E4.22-(2，6-二氯-4-[甲氧羰基甲氧基]苯基)-4-(3-三甲代甲硅烷基乙炔基-苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-羟基-咪唑(E4.2)进行类似于实施例E1.1中所述的反应，但是开始于D4和A4，以80％的产率得到E4.2。
MSM＝541(ESI+)，539(ESI-)。
F“N-H咪唑”的合成实施例F1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-溴苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F1.1)将78.1g(130mmol)E1.1、59.8g(391mmol)溴乙酸甲酯和181.6ml(1.3mol)三乙胺溶解在3.351甲醇中，在60℃搅拌过夜。在真空除去溶剂后，将残余物在乙酸乙酯/水之间分配。有机层用硫酸钠干燥，并且蒸发至干。残余物用二异丙基醚处理，滤出并且干燥。产量44.1g(69％)F1，m.p.183-186℃。
MSM＝493(ESI+)，M＝491(ESI-)1H-NMR(250MHz，D6-DMSO)δ＝2.18(s，3H，SCH3)，7.43(t，1H，Ar-H)，7.5-7.8(m，5H，Ar-H)，7.87(s，1H，2-H-BrPh)，8.56(d，1H，6-H-嘧啶)，13.4(s，1H，OH)。
实施例F2.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F2.1)进行类似于实施例F1.1中所述的反应，但是开始于E2.1，以64％的产率得到F2.1。
MSM＝449(API+)，447(API-)。
实施例F2.22-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F2.2)进行类似于实施例F1.1中所述的反应，但是开始于E2.2，以98％的产率得到F2.2。
MSM＝479(API+)，477(API-)。
实施例F2.32-(2，6-2氯-4-[甲氧羰基甲氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F2.3)进行类似于实施例F1.1中所述的反应，但是开始于E2.3，以定量的产率得到F2.3。
MSM＝535(ESI+)。
实施例F2.42-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲硫基-嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F2.4)于0℃向在氮气下的2.30g(4.3mmol)F2.3的50ml无水THF溶液中加入LiAlH4(1M THF溶液)，直至用HPLC检测不到F2.3。在用0.4ml水进行水解并除去溶剂后，将残余物用碱性ALOX柱色谱(乙酸乙酯)纯化，得到52％的F2.4。
MSM＝507(API+)。
实施例F3.12-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F3.1)进行类似于实施例F1.1中所述的反应，但是开始于E3.1，以80％的产率得到F3.1。
MSM＝449(API+)，447(API-)。
实施例F4.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F4.1)进行类似于实施例F1.1中所述的反应，但是开始于E4.1，以99％的产率得到F4.1。
MSM＝437(API+)，435(API-)。
实施例F4.22-(2，6-二氯-4-[甲氧羰基甲氧基]苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F4.1)进行类似于实施例F1.1中所述的反应，但是开始于E4.2，以定量的产率得到F4.2。
MSM＝523(ESI-)。
实施例F4.32-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-甲硫基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(F4.3)进行类似于实施例F2.4中所述的反应，但是开始于F4.2，以55％的产率得到F4.3。
MSM＝495(ESI-)。
G“N-H-咪唑砜”的合成实施例G1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-溴苯基)-5-(2-甲磺酰基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G1.1)向44.3g(90.0mmol)F1.1的2.151甲醇溶液中加入116.2g(189mmol)过硫酸氢钾制剂TM的1.71水溶液。室温搅拌5小时后，蒸馏除去甲醇，残余物置于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，硫酸钠干燥并且蒸发至干。残余物经硅胶色谱(正庚烷/乙酸乙酯梯度3∶1～1∶1)，得到34.1g(72％)G1.1，m.p.231-233℃。
MSM＝525(ESI+)，M＝523(ESI-)。
1H-NMR(250MHz，CDCl3)主要互变异构体(57％)δ＝3.35(s，3H，CH3)，7.3-7.7(m，6H，Ar-H)，7.84(t，1H，2-H-Br-Ph)，8.64(d，1H，6-H-嘧啶)，11.2(s，1H，NH).
第二互变异构体(43％)δ＝2.92(s，3H，CH3)，7.3-7.7(m，5H，Ar-H)，7.74(t，1H，2-H-Br-Ph)，8.23(d，1H，5-H-嘧啶)，8.81(d，1H，6-H-嘧啶)，10.4(s，1H，NH)。
实施例G2.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲磺酰基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G2.1)进行类似于实施例G1.1中所述的反应，但是开始于F2.1，以89％的产率得到G2.1。
MSM＝481(API+)，479(API-)。
实施例G2.22-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲烷-磺酰基-嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G2.2)进行类似于实施例G1.1中所述的反应，但是开始于F2.2，以62％的产率得到G2.2。
MSM＝511(API+)，509(API-)。
实施例G2.32-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-甲烷-磺酰基-嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G2.3)进行类似于实施例G1.1中所述的反应，但是开始于F2.4，以78％的产率得到G2.3。
MSM＝539(ESI-)。
实施例G3.12-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-甲磺酰基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G3.1)进行类似于实施例G1.1中所述的反应，但是开始于F3.1，以87％的产率得到G3.1。
MSM＝481(API+)，479(API-)。
实施例G4.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-甲磺酰基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G4.1)进行类似于实施例G1.1中所述的反应，但是开始于F4.1，以98％的产率得到G4.1。
MSM＝469(API+)。
实施例G4.22-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-甲烷-磺酰基嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(G4.2)进行类似于实施例G1.1中所述的反应，但是开始于F4.3，以65％的产率得到G4.2。
MSM＝529(ESI+)，527(ESI-)。
H“N-H-咪唑苯基氨基嘧啶”的合成实施例H1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-溴苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氧基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H1.1)将117mg(0.22mmol)G1.1、140mg(0.67mmol)4-(2-二乙基氨基乙氧基)苯胺和60μl(0.78mmol)三氟乙酸的1.0ml无水N-甲基吡咯烷酮溶液加热到140℃18小时。采用制备型HPLC/MS，在RP18(甲醇-水-梯度)上纯化，得到39mg(27％)纯的H1.1。
MSM＝653(API+)，651(API-)。
实施例H2.1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.1.1)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G2.1，以51％的产率得到H2.1.1。
MSM＝609(API+)，607(API-)。
实施例H2.1.22-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.1.2)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G2.1和4-(2-羟基-乙氧基)苯胺，以26％的产率得到H2.1.2。
MSM＝554(API+)，552(API-)。
实施例H2.1.32-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-二甲基氨基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.1.3)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G2.1和4-二甲基氨基-苯胺，以14％的产率得到H2.1.3。
MSM＝537(API+)，535(API-)。
实施例H2.1.42-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-吗啉基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.1.4)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G2.1和4-吗啉基-苯胺，以22％的产率得到H2.1.4。
MSM＝579(API+)，577(API-)。
实施例H2.1.52-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(N-(2-羟基乙基)-氨磺酰基)苯基氨基]-嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.1.5)将150mg(0.31mmol)G2.1、135mg(0.62mmol)4-氨基-N-(2-羟基乙基)苯-磺酰胺和156μl(0.62mmol)HCl的二噁烷溶液(4M)在0.2ml N-甲基吡咯烷酮中的溶液在氮气下于100℃加热17小时。反应混合物用水和Na2CO3处理，并且用乙酸乙酯萃取。柱色谱纯化(二氧化硅，氯仿/甲醇95∶5)得到6％H2.1.5。
MSM＝617(ESI+)，615(ESI-)。
实施例H2.2.12-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.2.1)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G2.2，以30％的产率得到H2.2.1。
MSM＝637(API+)，635(API-)。
实施例H2.2.22-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.2.2)将50mg(0.1mmol)G2.2和23mg(0.15mmol)4-(2-羟基乙氧基)苯胺的0.1ml无水N-甲基-吡咯烷酮溶液在氮气下于140℃加热1天。反应混合物用水处理，并且用乙酸乙酯萃取。采用制备型HPLC/MS，在RP18(甲醇-水-梯度)上纯化，得到5％的H2.2.2。
MSM＝580(API-)。
实施例H2.3.12-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.3.1)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G2.3，以62％的产率得到H2.3.1。
MSM＝669(ESI+)。
实施例H2.3.22-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-甲基亚磺酰基-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.3.2)将80mg(0.15mmol)G2.3、47mg(0.3mmol)4-(甲基亚磺酰基)苯胺和152μl(0.3mmol)HCl的乙醚溶液(2M)在0.1ml无水N-甲基-吡咯烷酮中的溶液在氮气下于140℃加热过夜。将反应混合物用水、饱和Na2CO3水溶液处理，并且用乙酸乙酯萃取。柱色谱纯化(二氧化硅，正庚烷/乙酸乙酯梯度)，得到6％的H2.3.2。
MSM＝618(ESI+)。
实施例H2.3.32-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(N-(2-羟基乙基)-氨磺酰基(ulfamoyl)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H2.3.3)进行类似于实施例H2.1.5中所述的反应，但是开始于G2.3，以4％的产率得到H2.3.3。
MSM＝677(ESI+)，675(ESI-)。
实施例H3.1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H3.1.1)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G3.1，以45％的产率得到H3.1.1。
MSM＝609(API+)，607(API-)。
实施例H3.1.22-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-吗啉基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H3.1.2)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G3.1和4-吗啉基苯胺，以31％的产率得到H3.1.2。
MSM＝579(API+)，577(API-)。
实施例H3.1.32-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-羟基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H3.1.3)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G3.1和4-羟基苯胺，以59％的产率得到H3.1.3。
MSM＝510(API+)，508(API-)。
实施例H3.1.42-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-甲氧基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H3.1.4)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G3.1和4-甲氧基苯胺，以7％的产率得到H3.1.4。
MSM＝524(API+)，522(API-)。
实施例H3.1.52-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-乙氧基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H3.1.5)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G3.1和4-乙氧基苯胺，以34％的产率得到H3.1.5。
MSM＝538(API+)，536(API-)。
实施例H3.1.62-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-吡啶基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H3.1.6)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G3.1和4-氨基吡啶，并且在微波反应器中加热到240℃10分钟，得到H3.1.6，产率33％。
MSM＝493(API+)。
实施例H4.1.12-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H4.1.1)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G4.1，以37％的产率得到H4.1.1。
MSM＝597(API+)，595(API-)。
实施例H4.1.22-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑(H4.1.2)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G4.1和4-(2-羟基-乙氧基)苯胺，以29％的产率得到H4.1.2。
MSM＝542(API+)，540(API-)。
实施例H4.22-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基))-N-H-咪唑(H4.2)进行类似于实施例H1.1中所述的反应，但是开始于G4.2，以23％的产率得到H4.2。
MSM＝657(ESI+)。
参考文献目录Abounader，R.，et al.，J.Natl.Cancer Inst.91(1999)1548-1556Ansel，H.，et.al.，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，6th ed.，(1995)，pp.196 and 1456-1457Biscardi，J.S.，et al.，Adv.Cancer Res.76(2000)61-119Laterra，J.，et al.，Lab.Invest.76(1997)565-577Merrifield，Fed.Proc.Fed.Amer.Soc.Exp.Biol.21(1962)412Somei，M.，and Tsuchiya，M.，Chem.Pharm.Bull.29(1981)3145-3157Susva，M.，et al.，Trends Pharmacol.Sci.21(2000)489-495Tomioka，D.，Cancer Res.61(2001)7518-7524Wang，R.，et al.，J.Cell Biol.153(2001)1023-1033WO 96/1862权利要求
1.通式(I)的化合物， 其中K，L独立地表示氢；卤素；烷基；-OH；或-O-烷基；X是氢；-OR1；-SR2；-S(O)R2；-S(O)2R2；-CH2-S-CH2-C(O)2-CH2-CH3；-CH2-S-(CH2)2-OH或基团A1-Q；其中A1表示C1-C3-亚烷基；并且Q是-OR1；-SR2；-S(O)R2；-S(O)2R2；-NR3R4；-NH-(CH2)2-NR3R4或卤素；R1是氢；烷基；烯丙基；二甲基膦酰基甲基；2，3-环氧基-1-丙基；(R)-2，3-二羟基-1-丙基；(S)-2，3-二羟基-1-丙基；1，3-二羟基-2-丙基；3-羟基-2-羟甲基-1-丙基；2-甲氧基乙氧基甲基；2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基甲基或基团A1-Q1；并且Q1表示-O-烷基；-CN；-C(O)2H；-C(O)2-烷基；-C(O)-NR3R4；-S-烷基；-S(O)-烷基；-S(O)2-烷基，并且在A1表示1，2-亚乙基-或1，3-亚丙基的情况下，Q1是-OH或-NR3R4；R3，R4独立地表示氢或烷基；或者R3和R4与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；R2是烷基；二甲基膦酰基甲基；2，3-环氧基-1-丙基；2，3-二羟基-1-丙基；2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基甲基或A1-Q1；Y是芳基或杂芳基，其是未取代的或者被以下基团取代一、二或三次卤素；-CH2OR5；-R5；-OR5；-NR6R7；-SR5；-S(O)R5；-S(O)2R5；-S(O)NHR5；-S(O)2NHR5；-S(O)NR6R7；-S(O)2NR6R7；-C(O)NHR5；-C(O)NR6R7；或CN；R5是氢；或烷基，该烷基是未取代的或者被OH、-O-烷基或-NR6R7取代；条件是没有两个杂原子连接在同一个碳原子上；R6，R7独立地表示氢或烷基；或R6和R7与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；Z是卤素；-OH；-O-烯丙基；烷基；甲氧甲氧基；(2-甲氧乙氧基)甲基氧基；甲硫基；乙氧甲氧基；亚甲基二氧基；乙炔基；三甲代甲硅烷基乙炔基；或-O-烷基，其中烷基是未取代的或者被吡啶基取代；或者苄氧基，所述苄氧基是未取代的或者被卤素、甲氧基、乙氧基、亚甲基二氧基、-CN、-NO2或-C(O)2H取代；并且n是1或2；和它们的可药用盐。
2.根据权利要求1的化合物，其中K，L都是氯；X是氢；烷基或-O-烷基，所述烷基被-OH取代；Y、Z和n如权利要求1所定义；和它们的生理上可接受的盐。
3.根据权利要求1或2的化合物，其中K，L都是氯；X是氢；烷基或-O-烷基，所述烷基被-OH取代；Z是卤素或乙炔基；Y是苯基，其是未取代的或者被以下基团取代一次卤素；-CH2OR5；-R5；-OR5；-NR6R7；-SR5；-S(O)R5；-S(O)2R5；-S(O)NHR5；-S(O)2NHR5；-S(O)NR6R7；-S(O)2NR6R7；-C(O)NHR5；-C(O)NR6R7；或CN；R5是氢；或烷基，其是未取代的或者被OH取代；-O-烷基或-NR6R7；条件是没有两个杂原子连接在同一个碳原子上；R6，R7独立地表示氢或烷基；n是1；和它们的可药用盐。
4.根据权利要求3的化合物，其是2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-溴苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-二甲基氨基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(N-(2-羟基乙基)-氨磺酰基)苯基氨基]-嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-羟甲基苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-甲基亚磺酰基-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-(N-(2-羟基乙基)-氨磺酰基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-羟基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-甲氧基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-乙氧基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-羟基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，或2-(2，6-二氯-4-[2-羟基乙氧基]苯基)-4-(3-乙炔基苯基)-5-(2-[4-(2-二乙基氨基乙氧基)-苯基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑。
5.根据权利要求1或2的化合物，其中K，L都是氯；X是氢；Z是卤素；Y是被-NR6R7取代的苯基，其中R6和R7与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；n是1；和它们的可药用盐。
6.根据权利要求5的化合物，其是2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-吗啉基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑，或2-(2，6-二氯苯基)-4-(3-氯苯基)-5-(2-[4-吗啉基苯基-氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑。
7.根据权利要求1的化合物，其中K，L都是氯；X是氢；Z是卤素；Y是杂芳基，其是未取代的或者被以下基团取代1、2或3次卤素；-CH2OR5；-R5；-OR5；-NR6R7；-SR5；-S(O)R5；-S(O)2R5；-S(O)NHR5；-S(O)2NHR5；-S(O)NR6R7；-S(O)2NR6R7；-C(O)NHR5；-C(O)NR6R7；或CN；R5是氢；或烷基，其是未取代的或者被OH取代；-O-烷基或-NR6R7；条件是没有两个杂原子连接在同一个碳原子上；R6，R7独立地表示氢或烷基；或R6和R7与它们所连的氮原子一起形成5～7元饱和或不饱和环，该环是未取代的或者被甲基取代，并且其中存在一个另外的氮或氧原子，其余原子是碳原子；n是1；和它们的可药用盐。
8.根据权利要求1的化合物，其中K，L都是氯；X是氢；Z是卤素；Y是吡啶基，其是未取代的或者被烷基取代；n是1；和它们的可药用盐。
9.根据权利要求8的化合物，其是2-(2，6-二氯苯基)-4-(4-氯苯基)-5-(2-[4-吡啶基氨基]嘧啶-4-基)-N-H-咪唑。
10.一种制备根据权利要求1的化合物的方法，其中a)将通式(VI)化合物 与式Y-NH2化合物反应，得到式(I)化合物；取代基K、L、X、Y、Z以及n具有如权利要求1所给的含义；并且其中式(VI)化合物是通过氧化通式(V)表示的硫醚的硫醚基而获得的， 其中式(V)化合物是通过通式(IV)化合物的N-脱氧获得的， 并且所述的通式(IV)化合物是通过通式(II)化合物 与通式(III)化合物的反应而获得的， 和b)从反应混合物中分离所述的式(I)化合物，以及c)如果需要，通过加入合适的酸或碱，将它们转化成可药用的盐。
11.一种药物组合物，含有权利要求1～9中任何一项所述的一种或多种化合物以及可药用赋形剂。
12.用于抑制肿瘤生长的根据权利要求11的药物组合物。
13.权利要求1～9中任何一项的化合物用于治疗癌症的用途。
14.权利要求1～9中任何一项的化合物用于制造药物的用途，所述的药物用于治疗由c-met或src酪氨酸激酶介导的疾病。
15.权利要求1～9中任何一项的化合物用于制造用于抑制肿瘤生长的药物的用途。
全文摘要
通式(I)的化合物是治疗癌症和癌症相关疾病的有效治疗剂。
文档编号C07D213/00GK1867563SQ200480030583
公开日2006年11月22日 申请日期2004年10月15日 优先权日2003年10月17日
发明者K·霍诺尔德, S·沙伊布利克, T·冯希施海特, E·福斯 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司