专利名称：一种纯化长春瑞宾的方法
技术领域：
本发明涉及一种长春瑞宾纯化工艺。特别涉及一种利用负压上行层析方式纯化长春瑞宾的方法。
背景技术：
长春瑞宾是美国食品药品监督管理局(FDA)批准的治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的药物，将单制剂的长春瑞宾与顺铂合用成为不可切除的晚期的非小细胞性肺癌患者的一线治疗药物，在治疗乳腺癌、淋巴癌、卵巢癌方面也是首选药物，其市场价格昂贵。目前市场来源主要通过化学合成途径来获得，纯度都不是很高，本发明针对这一问题，寻找出了一种可进行大规模生产的纯化方法，因此具有很好的开发前景。
1974年，长春瑞宾由法国学者Potier合成，于1985年试用于临床治疗。据文献报道，Mangeney P，Andriamialisoa RZ等用不同方法合成长春瑞宾及其盐，而其分离纯化方面的研究未见报道。目前，我国长春瑞宾的合成研究也有了很大的突破，林永江等将国外报道的合成工艺进行了改进，使操作更加适合于生产；中国药科大学的尤启冬教授等承担的“长春瑞宾合成新工艺及工业化研究”项目获得江苏省科学技术进步三等奖。分离纯化方面，林永江等将合成的长春瑞宾粗品进行两次正压柱层析分离，得产物HPLC归一化纯度达98％以上，但其存在纯化量少，效率低，周期长等缺点，无法进行工业化生产。
本发明采用快速、简单、易操作的负压上行柱层析方法来纯化长春瑞宾粗品，对纯度较高部分进行切割后洗脱得到纯度较高的长春瑞宾。该纯化方法可大大缩短纯化周期，节省溶剂用量，可以弥补传统的正压下行柱层析周期长、溶剂用量大等不足。
发明内容
本发明目的在于提供一种工艺流程简单、生产周期短、成本低、纯度高的长春瑞宾纯化新工艺。
为了达到上述目的，本发明采用的技术方案是长春瑞宾粗品经干硅胶柱进行负压上行展开后，进行分段切割、洗脱，洗脱液经过滤、浓缩得浓缩液，将浓缩液滴入水中析晶，离心，干燥后得高纯度的长春瑞宾。
本发明的优点1、具有工艺流程简单，生产周期短，溶剂用量少，可进行工业化生产等优点；2、长春瑞宾纯度在95％以上；3、取代了传统的常压下行、减压下行、加压下行柱层析等纯化方法，应用负压震荡灌柱装置干法制备硅胶柱和负压上行柱层析方法对长春瑞宾粗品进行纯化。
具体实施方案下面对本发明的实施方案作进一步详细描述用负压震荡灌柱装置干法制备硅胶柱，柱长为45cm～55cm，直径为3cm～5cm，柱材为空心PVC柱，上下或水平负压震荡灌注硅胶，震荡频率为50～100次/min，负压为0.06～0.1MPa，硅胶为400～800目已活化硅胶，活化方法为烘箱105℃活化1～5h或微波炉高火活化3次，每次3min；将此硅胶柱进行负压上行展开，底部进液，用高度差或自吸方式上行展开，负压为0.06～0.1MPa，展开剂为三氯甲烷∶甲醇＝250∶18～325∶18或四氯化碳∶甲醇＝100∶15～50∶15；将纯度为50～80％的长春瑞宾粗品溶于0.3～0.7ml的展开剂中，用自动进样阀或注射器从柱底部注射进样；当展到柱顶后，距柱底4～8cm处部向上切割8～15cm；将硅胶段用无水丙酮、无水甲醇或无水乙醇超声或搅拌洗脱2～5次，洗脱剂用量为150～500ml/次，洗脱时间为5～30min/次；洗脱液用0.22μm的中空纤维或微孔滤膜进行负压抽滤，采用负压为0.06～0.1MPa；将洗脱液进行低温负压浓缩，温度为30～50℃，负压为0.06～0.1MPa；然后将浓缩液滴入其3～15倍的蒸馏水或双蒸水中，析出白色絮状结晶，离心后得白色沉淀；将此白色沉淀进行冷冻干燥或真空干燥，得白色絮状长春瑞宾。
实施例1取长50cm、直径为3cm的空心PVC柱用负压震荡灌柱装置干法灌入活化硅胶，上下震荡，频率为70次/min，硅胶活化方式为烘箱105℃活化1.5h；将硅胶柱上端连接负压层析装置，下端连接展开剂装置，将展开剂容器吊在柱上端，产生高度差，进行负压上行展开，展开剂为三氯甲烷∶甲醇＝300∶18，底部用注射器注射进样，样品为0.4g70％的长春瑞宾粗品溶于0.4ml的展开剂中的溶液；展到柱顶后，切割距柱底端8cm处向上10cm部分，用250ml无水乙醇超声洗脱3次，每次10min，合并洗脱液；洗脱液用0.22μm的中空纤维进行负压抽滤后，在40℃下进行负压浓缩，得浓缩液3ml滴入30ml双蒸水中，析出白色絮状沉淀，离心后冷冻干燥，得纯度为98％的长春瑞宾112mg。
实施例2取长45cm、直径为3cm的空心PVC柱用负压震荡灌柱装置干法灌入活化硅胶，上下加水平震荡，频率为80次/min，活化方式为烘箱105℃活化3h；将硅胶柱上端连接负压层析装置，下端连接展开剂装置，将展开剂容器吊在柱上端，产生高度差，进行负压上行展开，展开剂为三氯甲烷∶甲醇＝250∶18，底部用自动进样阀进样，样品为0.3g77％的长春瑞宾粗品溶于0.3ml的展开剂中的溶液；展到柱顶后，切割距柱底端4cm处向上10cm部分，用300ml无水甲醇超声洗脱2次，每次20min，合并洗脱液；洗脱液用0.22μm的中空纤维进行负压抽滤后，在35℃下进行负压浓缩，得浓缩液3ml滴入40ml双蒸水中，析出白色絮状沉淀，离心后冷冻干燥，得纯度为96％的长春瑞宾99mg。
实施例3取长55cm、直径为3cm的空心PVC柱用负压震荡灌柱装置于法灌入活化硅胶，上下震荡，频率为90次/min，活化方式为微波炉高火活化3次，每次3min；将硅胶柱上端连接负压层析装置，下端连接展开剂装置，展开剂容器与硅胶柱处在同一水平，通过负压作用自动吸入展开剂，进行负压上行展开，展开剂为四氯化碳∶甲醇＝100∶20，底部用自动进样阀进样，样品为0.5g70％的长春瑞宾粗品溶于0.5ml的展开剂中的溶液；展到柱顶后，切割距柱底端6cm处向上12cm部分，用350ml无水甲醇搅拌洗脱2次，每次15min，得洗脱液；洗脱液用0.22μm的微孔滤膜进行负压抽滤后，在45℃下进行负压浓缩，得浓缩液3ml滴入50ml双蒸水中，析出白色絮状沉淀，离心后真空干燥，温度为40℃，得纯度为95％的长春瑞宾158mg。
权利要求
1.一种将长春瑞宾粗品进行纯化的新方法，其特征在于用负压震荡灌柱装置干法制备硅胶柱，将此硅胶柱进行负压上行展开，从柱底部进液；注射进样，当展到柱顶后，进行分段切割；所得硅胶段用洗脱剂洗脱，洗脱液进行过滤；得滤液进行减压浓缩，浓缩液滴入水中，析出结晶，离心；将沉淀进行干燥得白色粉末。
2.按照权利要求1所述的负压震荡灌柱装置干法制备硅胶柱是指柱长为45cm～55cm、直径为3cm～5cm的空心PVC柱，经上下或水平震荡器进行负压震荡灌注400～800目已活化硅胶，震荡频率为50～100次/min，采用负压为0.06～0.1MPa，硅胶活化方法为烘箱105℃活化1～5h或微波炉高火活化3次，每次3min。
3.按照权利要求1所述的负压上行展开是指硅胶柱上端连接负压层析装置，采用负压为0.06～0.1MPa；下端连接展开剂装置，底部进液，用高度差或自吸方式进行上行展开；展开剂为三氯甲烷∶甲醇＝250∶18～325∶18或四氯化碳∶甲醇＝100∶15～50∶15。
4.按照权利要求1所述的柱底部注射进样是指将0.3～0.6g长春瑞宾粗品溶于0.3～0.7ml的展开剂中，用自动进样阀或注射器注射进样，长春瑞宾粗品纯度为50～80％。
5.按照权利要求1所述的分段切割是指距柱底端4～8cm处向上切割8～15cm。
6.按照权利要求1所述的洗脱剂洗脱是指超声或搅拌洗脱，洗脱剂为无水丙酮、无水甲醇或无水乙醇，洗脱剂用量为150～500ml/次，洗脱时间为5～30min/次，洗脱次数为2～5次。
7.按照权利要求1所述的过滤是指用0.22μm的中空纤维或微孔滤膜进行负压抽滤，采用负压为0.06～0.1MPa。
8.按照权利要求1所述的浓缩条件是温度为30～50℃，负压为0.06～0.1MPa。
9.按照权利要求1所述的析晶是指将浓缩液滴入其3～15倍的蒸馏水或双蒸水中，离心后得白色沉淀。
10.按照权利要求1所述的干燥得白色粉末为用冷冻干燥机或真空干燥箱进行低温干燥。
全文摘要
本发明提供一种将长春瑞宾粗品进行纯化的新方法，用负压震荡灌柱装置干法制备硅胶柱，将此硅胶柱上端连接负压层析装置，从其底部进液；液体进样，进行上行展开；当展到柱顶后，进行分段切割；所得硅胶段用洗脱剂洗脱，得洗脱液进行过滤；滤液进行低温减压浓缩，浓缩液滴入水中，析出结晶，离心；将沉淀进行干燥得白色粉末。本发明方法具有工艺流程简单，生产周期短，溶剂用量少，分离效率高，易于工业化生产等优点，经此方法一次纯化得到的长春瑞宾纯度可达到95％以上。
文档编号C07D519/04GK1696135SQ200510009928
公开日2005年11月16日 申请日期2005年4月26日 优先权日2005年4月26日
发明者祖元刚, 付玉杰, 张琳, 史权, 刘君星, 李庆勇, 祖柏实, 曹玉杰 申请人:东北林业大学, 祖元刚