专利名称：肉芝内酯a、及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及医药技术领域，具体是一个从中国南海软珊瑚中分离得到的具有新型骨架的二聚西松烷型化合物肉芝内酯A和它的制备方法及用途。该化合物对多种肿瘤细胞株具有强烈的抑制作用，可作为一类研制新的抗肿瘤药物的先导化合物，也可能作为治疗各种临床常见多发癌症的药物。
背景技术：
肉芝软珊瑚在软珊瑚家族中，种类多样，分布广泛，且含有丰富的次生代谢产物。在这些次生代谢产物中，主要是西松烷型二萜和甾醇类，还有极少数的结构奇特的四萜化合物。肉芝软珊瑚次生代谢产生的西松烷型二萜，往往带有内酯环或环氧，这类化合物大部分具有生物活性，在肉芝软珊瑚在海洋中的生存和繁衍起着重要的作用。到目前为止，大约有来自不同海域的25个种被研究，分离得到了近150个新化合物，尤其是通过Diels-Alder反应产生的二聚西松烷型四萜仅存在于此属中。
肉芝内酯A(Isosarcolide A)是首次从我国南海软珊瑚Sarcophyton sp.提取分离出来的。目前未见此化合物及其类似物结构和活性的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有新型骨架的二聚西松烷型化合物。
本发明的另一目的是提供该类化合物的提取分离的方法。
本发明的再一目的是提供上述的具有新型骨架的二聚西松烷型化合物在抗肿瘤药物中的应用。
本发明的具有新型骨架的二聚西松烷型化合物具有如下的化学结构
该化合物系首次从我国海南软珊瑚Sarcophyton sp.中提取得到，命名为肉芝内酯A。
本发明还提供了从软珊瑚Sarcophyton sp.中提取分离肉芝内酯A的方法，其步骤如下我国南海软珊瑚用丙酮超声提取，提取液减压浓缩至无有机溶剂，然后用乙醚萃取，浓缩乙醚萃取液得到浸膏，该浸膏经硅胶柱层析，梯度洗脱(石油醚∶丙酮＝95∶5，90∶10，88∶12，85∶15，83∶17，80∶20，75∶25，73∶27)，收集石油醚/丙酮(73∶27)洗脱部分经凝胶LH-20(石油醚/氯仿/甲醇2∶1∶1)，得到化合物肉芝内酯A。
肉芝内酯A的理化性状如下白色粉末，光学活性{[α]D20-15(c 1.06，CHCl3)}；IR谱中出现3465.5(-OH)，1735.6(内酯)，1673.9(α，β-不饱和酮)等的吸收峰；UV谱表明有α，β-不饱和酮{246nm(ε14626)}结构；正离子模式电喷雾质谱给出准分子离子峰m/z 695[M+H]+，高分辨正离子模式电喷雾质谱显示其分子式为C42H63O8(695.4581，calcd.695.4523)；1H-与13C-NMR数据见表1。同时，通过测定二维H-H相关谱(1H-1H COSY)，H-C相关谱和H-C远程相关谱(HMBC)，确定了所有碳原子和氢原子的信号归属及该化合物的化学结构。
表1 肉芝内酯A的波谱数据对照表
aBrucker DRX 400 and 500MHz；Chemical shifts(δin ppm)are expressed relativeto TMS；Assignments were deduced by analysis of 1D and 2D NMR spectra.
本发明对化合物肉芝内酯A进行了抗肿瘤活性测试，表明具有明显的抗肿瘤作用。
实验结果的评判与解析
测试原理MTT法，将一定数量处于对数生长期的6×103肿瘤细胞90μl/孔接种于96孔培养板内，培养24小时后加入不同浓度的药液10μl/孔，对每个细胞株，每个浓度均设三个复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO2条件下培养48小时后，加MTT(Sigma)液5mg/ml用生理盐水配制20μl/孔；继续培养4小时后，加入三联液(10％SDS-5％异丁醇-0.01mol/LHCL)50μl/孔，于CO2培养箱中过夜。然后在570nm用酶标仪测定OD值。
观测指标按下列公式计算被测物对癌细胞生长的抑制率，半数抑制量IC50值采用Logit法计算。
具体实施方式
下面结合具体实施实例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。
1H-NMR用Varian Inova 600型仪测定；MS(ESIMS及HRESIMS)用Finnigan-MAT-95型仪测定；所使用的硅胶，为青岛海洋化工厂生产，葡聚糖凝胶为Pharmacia Biotech AB，Uppsala，Sweden产品，洗脱剂为石油醚/氯仿/甲醇(2∶1∶1)。
实施例一肉芝内酯A的制备(1).提取中国南海软珊瑚Sarcophyton sp.(干重68克)用丙酮反复超声提取3次，提取液合并后减压浓缩，浓缩所得的水悬液用乙醚萃取，所得萃取液合并后减压浓缩得到乙醚部分3.2克。
(2).分离乙醚部分3.2克以200-300目硅胶柱层析，石油醚/丙酮(以丙酮量的增加提高流动相的极性)梯度洗脱，石油醚/丙酮73∶27洗脱部分经凝胶LH-20(石油醚/氯仿/甲醇2∶1∶1)纯化，得到肉芝内酯A9.8毫克(0.0144％)。
实例例二肉芝内酯A的抗肿瘤活性测试实验方法MTT法，将6×103处于对数生长期的A-549，HL-60肿瘤细胞90μl/孔分别接种于96孔培养板内，培养24小时后加入不同浓度的药液10μl/孔，对每个细胞株，每个浓度均设三个复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对<p>表1实施例1～8，制备和性能
权利要求
1.具有如下结构肉芝内酯A化合物
2.如权利要求1所述的肉芝内酯A化合物的制备方法，包括a.南海软珊瑚用丙酮超声提取，提取液减压浓缩至无有机溶剂，然后用乙醚萃取，浓缩乙醚萃取液得到浸膏；b.所得乙醚浸膏用(石油醚∶丙酮＝95∶5，90∶10，88∶12，85∶15，83∶17，80∶20，75∶25，73∶27)梯度洗脱；c.收集石油醚/丙酮(73∶27)洗脱部分经凝胶LH-20(石油醚/氯仿/甲醇2∶1∶1)洗脱得到流分，收集合并后得到我们所需要的肉芝内酯A。
3.根据权利要求2所述的肉芝内酯A的提取方法步骤a，其特征在于原料先用丙酮超声提取，提取液减压浓缩至无有机溶剂，然后用乙醚萃取，浓缩乙醚萃取液得到浸膏。
4.根据权利要求2所述的肉芝内酯A的制备方法b，其特征在于所得乙醚浸膏用(石油醚∶丙酮＝95∶5，90∶10，88∶12，85∶15，83∶17，80∶20，75∶25，73∶27)梯度洗脱。
5.根据权利要求2所述的肉芝内酯A的制备方法c，其特征在于收集石油醚/丙酮(73∶27)洗脱部分经凝胶LH-20(石油醚/氯仿/甲醇2∶1∶1)洗脱得到流分，收集合并后得到我们所需要的肉芝内酯A。
6.如权利要求1所述的肉芝内酯A化合物的用途在制备抗肿瘤药物中应用。
全文摘要
本发明提供一种从软珊瑚中提取、分离获得的新型的具有显著抗肿瘤活性的化合物肉芝内酯A，结构如右式，经药理试验证实，该类化合物具有明显的抑制肿瘤细胞活性，可望在制备抗癌症药物中应用。本发明有望为研制新的治疗各种常见多发癌症药物提供先导化合物，对开发利用中国的海洋生物资源具有重要意义。
文档编号C07D311/00GK1861605SQ20051002580
公开日2006年11月15日 申请日期2005年5月13日 优先权日2005年5月13日
发明者郭跃伟, 丁健, 林莉萍, 严小红 申请人:中国科学院上海药物研究所