专利名称：一种从结香花中提取分离银椴苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种提取分离银椴苷的方法。
背景技术：
银椴苷(tiliroside)是一个重要生理活性化合物，具有多种药理活性作用，在医药、食品、化妆品等领域具有广阔的应用前景。文献(European Journalof Pharmacology，2003，461(1)53-61)报道银椴苷具有强的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，其对酶的和非酶的脂质过氧化物的半数抑制浓度分别为12.6和28μM，对过氧化物自由基和1，1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基的半数抑制浓度分别为21.3和6μM。补体是一种免疫系统，补体激活与许多疾病相关(如成人呼吸窘迫综合症、心梗死、肺脏炎症、烧伤和创伤、多器官功能衰竭等)，在病理状态下适时恰当的抑制补体激活能成为减轻炎性损伤的有效途径。银椴苷(Biological & Pharmaceutical Bulletin，1998，21(10)1077-1078)对补体系统的传统途径显示出非常有潜力的抗补体活性(IC50＝5.4×10-5M)，其活性甚至比公认的补体系统抑制剂迷迭香酸活性还强。另据文献(Pharmacological Research，2000，41(1)85-88；LeukemiaResearch，1999，23(11)1021-1033)报道体外实验表明银椴苷及全乙酰化衍生物均具有一定的对白血病癌细胞的毒性作用。银椴苷还具有强的护肝作用(Bioorganic & Medicinal Chemistry，2002，10707-712)。
研究显示银椴苷在植物中分布较为普遍，但研究其提取分离工艺的报道较少。从文献资料来看，银椴苷的提取分离方法一般都包括溶剂提取，不同极性溶剂分配萃取，柱层析分离纯化等多个步骤。如专利KR2000001978报道了从木兰属植物Magnolia fargesii花中提取分离银椴苷的工艺，Magnolia fargesii花经粉碎，用甲醇提取，提取液减压浓缩，浓缩物悬浮于水，并用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯提取物经多次硅胶柱层析纯化得到银椴苷；张海军等人(天然产物研究与开发，1997，9(1)24-26)通过溶剂提取，分配萃取，凝胶柱层析结合重结晶等多步骤，从结香花蕾中分离纯化得到银椴苷。这些分离纯化工艺都需经过柱层析步骤，而柱层析存在重复性差、操作繁琐、耗时、耗溶剂、不易工业化等缺点。另外，结香是我省浙南地区一重要经济作物，种植面积广，据我们的先前研究发现结香花中富含银椴苷，其含量高达1.56％。至今，未见有关采用简单生产工艺从富含银椴苷的植物中提取分离得到高含量银椴苷的文献报道。
发明内容本发明目的在于提供一种工艺简单、提取率高的从结香花中提取分离银椴苷的方法。
所述的提取分离银椴苷的方法，包括如下步骤(1)将结香花置于提取溶剂中进行1-4次浸提或回流提取，提取液减压浓缩，得浓缩物；所述的提取溶剂为60-100％的亲水性溶剂，每次提取的用量与结香花的体积重量比为4-15∶1；(2)将所述的浓缩物水洗后，再用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取，得滤饼；(3)将滤饼重结晶，制得银椴苷产品。
所述的提取溶剂为亲水性溶剂，如可为各种低级醇、丙酮等，优选为甲醇或乙醇，每次提取的溶剂用量与结香花的体积重量比优选为8-14∶1；步骤(2)中所述的水洗可以为将得到浓缩物添加水，使水溶液与浓缩物干重的体积重量比为6-15∶1，充分搅拌0.1-2h，过滤得到滤饼。
步骤(2)中推荐将水洗得到的滤饼用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取0.1-2h，过滤得滤饼；所述脂溶性溶剂如二氯甲烷、氯仿或乙醚等，脂溶性溶剂的用量优选为滤饼干重重量的5-15倍。
步骤(3)优选为将步骤(2)得到的滤饼加入回流的甲醇或95％乙醇，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至原体积的1/2-1/3，再按体积比0.5-2∶1加水，静止1-24h，过滤，干燥得产品。
步骤(3)滤饼重结晶时如发现溶液颜色很深，可加入活性碳脱色，活性碳用量为滤饼重量的5％-100％。
本发明推荐的提取分离银椴苷的方法，包括如下步骤(1)将结香花置于提取溶剂中进行1-3次浸提或回流提取，提取液减压浓缩，得浓缩物；所述的提取溶剂为60-100％的甲醇或乙醇，每次提取的用量与结香花的体积重量比为8-14∶1；(2)将得到浓缩物加入水，使水溶液与浓缩物干重的体积重量比为6-15∶1，充分搅拌0.1-2h，过滤得到滤饼；将水洗得到的滤饼用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取0.1-2h，过滤得滤饼；所述脂溶性溶剂为二氯甲烷或氯仿，其用量与滤饼干重重量比为5-15∶1。
(3)将步骤(2)得到的滤饼加入回流的甲醇或95％乙醇，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至原体积的1/2-1/3，再按体积比0.5-2∶1加水，静止1-24h，过滤，干燥得产品。
本发明工艺简单，提取分离银椴苷成本低、产率高、产品含量高，易于工业化生产。
图1是银椴苷对照品的液相色谱图。
图2是本发明实施例1中浓缩物的液相色谱图。
图3是本发明实施例1中水洗物的液相色谱图。
图4是本发明实施例1中氯仿萃余物的液相色谱图。
图5是本发明实施例1得到银椴苷产品的液相色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1(1)取100.0g结香花，用10倍量95％工业乙醇回流提取1.5h，过滤，滤渣继续用8倍量的95％工业乙醇回流提取1h，过滤，合并滤液，回收乙醇至干，得浓缩物9.6g。浓缩物的液相色谱见图2(色谱条件色谱柱为Shim-Pack CLC ODS(M)C18(4.6mm×250mm，5μm)；流动相甲醇-水(7∶3，V/V)；流速0.8ml/min；检测波长254nm。图1、2、3、4、5色谱条件均相同)。
(2)浓缩物加100ml水，于室温下，充分搅拌半小时，过滤，用少量的水洗涤滤饼多次，至洗涤液无色。滤饼干燥得2.180g，含量为58.1％。水洗物的液相色谱见图3。水洗物加20ml氯仿，回流萃取30min左右，过滤，滤饼用少量的氯仿洗涤，干燥得1.299g，含量为90.1％。氯仿萃余物的液相色谱见图4。
(3)氯仿萃余物加70ml 95％工业乙醇，升温至回流，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至35ml，补加35ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.909g银椴苷，含量为97.6％，银椴苷产品的液相色谱见图5，银椴苷对照品的液相色谱见图1。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计(通过液相色谱外标定量方法，测得银椴苷在结香花中的总含量为1.56％，色谱条件同上)，银椴苷的总提取率为56.9％。
实施例2
(1)取500.0g结香花，用78％工业乙醇3800ml，室温浸提4天，过滤，滤渣继续用3000ml 78％工业乙醇室温浸提3天，过滤，合并滤液，回收溶剂，得50.0g浓缩物。
(2)取其中10.0g浓缩物，加130ml水，于60℃水浴中，充分搅拌30min左右，过滤，用少量的水洗涤滤饼，得2.634g水洗涤物，不经干燥，直接用于下一步。水洗物加25ml氯仿，回流萃取约30min，过滤，并用少量的氯仿洗涤多次，至洗涤液无色，滤饼干燥得1.002g，含量为91.3％。
(3)氯仿萃余物加70ml 95％工业乙醇，升温至回流，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至35ml，补加40ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.815g银椴苷，含量为97.3％。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计，银椴苷的总提取率为50.8％。
实施例3(1)同实施例2步骤(1)。
(2)取其中8.5g浓缩物，加60ml水，于室温下，充分搅拌30min，过滤，并用少量的水洗涤滤饼多次，干燥得1.859g。水洗物加22ml二氯甲烷，回流萃取约30min，过滤，并用少量的二氯甲烷洗涤多次，至洗涤液无色，滤饼湿重1.023g。
(3)二氯甲烷萃余物加25ml甲醇，升温至回流，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至10ml，补加10ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.695g银椴苷，含量为97.7％。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计，银椴苷的总提取率为51.2％。
实施例4(1)取100.0g结香花，用10倍量甲醇回流提取2.5h，过滤，滤渣继续用6倍量的甲醇回流提取2h，过滤，合并滤液，回收甲醇至干。
(2)浓缩物加60ml水，于50℃水浴中，充分搅拌半小时，过滤，用少量的水洗涤滤饼多次，至洗涤液无色。滤饼干燥得2.637g。水洗物加26ml氯仿，回流萃取约30min，过滤，滤饼用少量的氯仿洗涤，滤饼干燥得1.339g。
(3)氯仿萃余物加60ml 95％工业乙醇，升温至回流，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至25ml，补加30ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.987g银椴苷，含量为97.5％。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计，银椴苷的总提取率为61.7％。
实施例5(1)取100.0g结香花，用9倍量85％工业乙醇回流提取4h，过滤，滤渣继续用6倍量的85％工业乙醇回流提取2h，过滤，合并滤液，回收乙醇，得含水浓缩物约70ml。
(2)浓缩物补加40ml水，于室温下，充分搅拌半小时，过滤，用少量的水洗涤滤饼多次，至洗涤液无色。滤饼干燥得2.623g。水洗物加28ml氯仿，回流萃取约30min，过滤，滤饼用少量的氯仿洗涤多次，滤饼干燥得1.369g。
(3)氯仿萃余物加35ml甲醇，升温至回流，搅拌溶解，加0.684g活性碳，回流脱色约30min，过滤，滤液浓缩至12ml，补加15ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.901g银椴苷，含量为97.8％。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计，银椴苷的总提取率为56.5％。
实施例6(1)取100.0g结香花，用9倍量80％甲醇回流提取2h，过滤，滤渣继续用7倍量的80％甲醇回流提取2h，过滤，合并滤液，回收溶剂，得浓缩物。
(2)浓缩物加100ml水，于50℃水浴中，充分搅拌半小时，过滤，用少量的水洗涤滤饼多次，至洗涤液无色。滤饼湿重1.710g。水洗物加20ml二氯甲烷，回流萃取30min，过滤，滤饼用适量的二氯甲烷洗涤，湿重1.270g。
(3)二氯甲烷萃余物加40ml甲醇和0.401g活性碳，升温至回流，回流脱色30min，过滤，滤液浓缩至15ml，补加15ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.650g银椴苷，含量为97.0％。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计，银椴苷的总提取率为40.4％。
实施例7(1)取100.0g结香花，用10倍量75％工业乙醇回流提取1.5h，过滤，滤渣继续用7倍量的75％工业乙醇回流提取1.5h，过滤，合并滤液，回收溶剂，得浓缩物13.0g。
(2)浓缩物加100ml水，于室温下，充分搅拌半小时，过滤，用少量的水洗涤滤饼多次，至洗涤液无色。滤饼干燥得2.811g。水洗物加30ml乙醚，回流萃取30min，过滤，滤饼用适量的乙醚洗涤，干燥得1.473g。
(3)乙醚萃余物加80ml95％工业乙醇和0.890g活性碳，升温至回流，回流脱色30min，过滤，滤液浓缩至38ml，补加40ml水，静止数小时，过滤，干燥得0.959g银椴苷，含量为96.6％。银椴苷在结香花中的含量按1.56％计，银椴苷的总提取率为59.3％。
权利要求
1.一种从结香花中提取分离银椴苷的方法，包括如下步骤(1)将结香花置于提取溶剂中进行1-4次浸提或回流提取，提取液减压浓缩，得浓缩物；所述的提取溶剂为60-100％的亲水性溶剂，每次提取的用量与结香花的体积重量比为4-15∶1；(2)将所述的浓缩物水洗后，再用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取，得滤饼；(3)将滤饼重结晶，制得银椴苷产品。
2.如权利要求1所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于所述的提取溶剂为甲醇或乙醇。
3.如权利要求1或2所述提取分离银椴苷的方法，其特征在于所述的提取溶剂每次的用量与结香花的体积重量比为8-14∶1。
4.如权利要求1所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于步骤(2)中所述的水洗为将得到浓缩物添加水，使水溶液与浓缩物干重的体积重量比为6-15∶1，充分搅拌0.1-2h，过滤得到滤饼。
5.如权利要求1所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于步骤(2)中将水洗得到的滤饼用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取0.1-2h，过滤得滤饼；所述脂溶性溶剂的用量为滤饼干重重量的5-15倍。
6.如权利要求5所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于所述的脂溶性溶剂为二氯甲烷、氯仿或乙醚。
7.如权利要求1所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于步骤(3)为将步骤(2)得到的滤饼加入回流的甲醇或95％乙醇，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至原体积的1/2-1/3，再按体积比0.5-2∶1加水，静止1-24h，过滤，干燥得产品。
8.如权利要求7所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于步骤(3)滤饼重结晶时加入活性碳脱色，活性碳用量为滤饼重量的5％-100％。
9.如权利要求1所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于步骤(3)滤饼重结晶时加入活性碳脱色，活性碳用量为滤饼重量的5％-100％。
10.如权利要求1所述的提取分离银椴苷的方法，其特征在于包括(1)将结香花置于提取溶剂中进行1-3次浸提或回流提取，提取液减压浓缩，得浓缩物；所述的提取溶剂为60-100％的甲醇或乙醇，每次提取的用量与结香花的体积重量比为8-14∶1；(2)将得到浓缩物加入水，使水溶液与浓缩物干重的体积重量比为6-15∶1，充分搅拌0.1-2h，过滤得到滤饼；将水洗得到的滤饼用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取0.1-2h，过滤得滤饼；所述脂溶性溶剂为二氯甲烷或氯仿，其用量与滤饼干重重量比为5-15∶1。(3)将步骤(2)得到的滤饼加入回流的甲醇或95％乙醇，搅拌溶解，过滤，滤液浓缩至原体积的1/2-1/3，再按体积比0.5-2∶1加水，静止1-24h，过滤，干燥得产品。
全文摘要
本发明提供了一种从结香花中提取分离银椴苷的方法，包括如下步骤(1)将结香花置于提取溶剂中进行1－4次浸提或回流提取，提取液减压浓缩，得浓缩物；所述的提取溶剂为60－100％的亲水性溶剂，每次提取的用量与结香花的体积重量比为4－15∶1；(2)将所述的浓缩物水洗后，再用中低极性的脂溶性溶剂回流萃取，得滤饼；(3)将滤饼重结晶，制得银椴苷产品。本发明工艺简单，提取分离银椴苷成本低、产率高、产品含量高，易于工业化生产。
文档编号C07G3/00GK1733788SQ20051005042
公开日2006年2月15日 申请日期2005年6月23日 优先权日2005年6月23日
发明者颜继忠, 陈钢, 饶国武, 毛轶 申请人:浙江工业大学