专利名称：β－细辛醚的精制方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，特别涉及一种从中药材中萃取挥发油，然后从挥发油中提纯有效成分的工艺方法，尤其涉及从石菖蒲挥发油中提纯β-细辛醚的方法。
背景技术：
β-细辛醚是石菖蒲(Acorus tatarinowii Schott)挥发油中含量最大的成分，经实验研究表明石菖蒲挥发油中β-细辛醚相对含量为48.64％～82.24％，平均含量达66.15％。同时经药理筛选研究证明，β-细辛醚是石菖蒲最主要的有效成分，因此必须测定石菖蒲药材及其制剂中β-细辛醚的含量作为质量控制标准。然而到目前为止，检索各种文献未见有药材、制剂中β-细辛醚含量测定的报道，查证中国药品生物制品检定所也未有β-细辛醚的对照品。
在《成都中医药大学学报》1999年第22卷第4期第26页，由郭玫，郭力，董晓萍执笔的《石菖蒲中α、β-细辛醚含量的测定》一文揭示，以α-细辛醚为对照计算出石菖蒲药材中β-细辛醚的相对含量，且认为β-细辛醚“其稳定性较差，无法制成对照品，故以α-细辛醚为对照品计算出α-细辛醚、β-细辛醚相对含量”。
2000年9月在谢秀琼主编的《中药新制剂开发与应用》(人民卫生出版社，2000，第2版)的360-365页刊出了由成都中医药大学药学院中药化学教研室完成的国家“九五”攻关课题《中药材质量标准规范化研究-石菖蒲研究部分》对β-细辛醚进行的分离，采用二次过硅胶柱，溶剂梯度洗脱，由50ml石菖蒲挥发油得到7ml黄色油状β-细辛醚；置密闭容器内，避光、低温、干燥处贮藏，在一年半内稳定性良好；但从目前，我们所使用和看到β-细辛醚样品均为白色晶体，因此，上述黄色油状β-细辛醚能否成为对照品，还值得商榷；且黄色油状物提示其中可能含有的杂质数目较多，因挥发油本身就是棕黄色液体。其次成都中医药大学药学院提出的分离精制方法，步骤繁琐，操作复杂，成本较高，收率过低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种步骤简单、操作简便、收率高的β-细辛醚的精制方法。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的，一种β-细辛醚的精制方法，其包括如下步骤第一步取石菖蒲挥发油，加入无水乙醇溶解，放置于-30℃以下的低温冰箱内8～24h，待有白色针状结晶析出，迅速倒除溶剂，得β-细辛醚粗提物；第二步取β-细辛醚粗提物再加入无水乙醇溶解，放置于-30℃以下的低温冰箱内2～3h以上，待β-细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，得β-细辛醚纯化物；第三步取β-细辛醚纯化物加入无水乙醇溶解，放置于-30℃以下的低温冰箱内2～3h以上，待β-细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，即得β-细辛醚纯品，白色晶体。
上述方法还包括，将第三步所获晶体在室温下静置使完全溶化后，再置于-30℃以下的低温冰箱内8～24h，待结晶析出，上层有少量溶剂，完全倒除，得白色晶体低温保存。
上述方法还包括，精制过程中若发现结晶析出时间长，可加入极少量石菖蒲细粉以促进结晶析出。
在第一、二、三步骤中，均加入一倍量的无水乙醇。
在上述步骤中，低温冰箱的温度设置为-30℃。
本发明通过采用上述传统、简单的步骤冷冻精制处理后，得到的β-细辛醚纯度达97.89％～99.45％，完全可供药效及药材、制剂含量测定所用。另外该方法获得的β-细辛醚收率高，按油体积计算平均收率为42.53％以上，按β-细辛醚含量计算平均收率为57.26％以上；收率远高于化学分离法(成都中医药大学化学分离法14％的收率，近3倍)，且技术、设备及操作非常简单，特别有利于推广到大生产。
图1β-细辛醚晶体纯度检测GC-MS总离子流图。
具体实施例方式
实施例一1、挥发油的准备准备用于精制β-细辛醚的5种β-细辛醚的相对含量分别为86.19、78.76、64.21、64.78、42.19石菖蒲挥发油。
2、冷冻法精制第一步取石菖蒲挥发油，加入一倍量无水乙醇溶解，放置于-30℃低温冰箱内8～24h，有白色针状结晶(β-细辛醚)析出，迅速倒除溶剂，得β-细辛醚粗提物；第二步取β-细辛醚粗提物再加入一倍量无水乙醇溶解，放置于-30℃低温冰箱内2～3h以上，当然放置的时间越长越好，优选8-24h；待β-细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，得β-细辛醚纯化物；第三步取β-细辛醚纯化物加入一倍量乙醇，放置于-30℃低温冰箱内2～3h以上，当然放置的时间越长越好，优选8-24h；待β-细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，即得β-细辛醚纯品，白色晶体。
第四步将第三步获得的晶体在室温下静置使完全溶化后，再置于-30℃低温冰箱内2～3h以上，当然放置的时间越长越好，优选8-24h；待β-细辛醚结晶析出，上层有少量溶剂，完全倒除，得白色晶体低温(-30℃)保存。
精制过程中若发现结晶析出时间长，可加入极少量石菖蒲细粉(作用类似晶核)以促进结晶析出。最后一次结晶溶化后重新冷冻结晶(第四步)，以排尽剩余的溶剂，GCMS检测结果证实排除溶剂后，溶剂残余量已不能检出，不影响β-细辛醚的相对含量计算。
3、纯度检测与收率计算3.1纯度检测GC-MS色谱条件GCDB-1石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm)；样口温度250℃，接口温度230℃；载气为氦气，流速为1.3mL/min；柱前压为80kPa；分流比30∶1，进样量为1.0μL。
升温程序柱温60℃，保持1分钟，以8℃/min的速率升到120℃，再以2℃/min的速率升到150℃，最后以10℃/min的速率升到280℃，保持3分钟。
MSEI源(70ev)，双灯丝；质量范围m/z 40-450全程扫描，扫描间歇1.0s；检测电子倍增器电压1.2KV。
谱库NIST62系列、WILEY139。
3.2纯度分析取每一步骤收取物适量，10倍量乙醚溶解供分析用，晶体检测结果见图1、表1。结果表明经前三步冷冻处理，β-细辛醚平均纯度可达98.94％，且每组结果均在该平均纯度附近，说明实验的结果可重复。杂质中主要为α-细辛醚(约0.9％)，其次含有极少量的γ-细辛醚；这两种成分与β-细辛醚为同分异构体，在结晶时比较难除去。
表1β-细辛醚纯度检测结果
另外，实验结果表明当石菖蒲挥发油中β-细辛醚含量较低(42.19％)时，无法制备；可以建议用于精制的石菖蒲挥发油，含β-细辛醚的相对含量不宜低于60％。对提取挥发油的石菖蒲的选取也有相对的条件一般选取石菖蒲的干燥根茎，且含挥发油不得少于1.0％(ml/g)。
3.3收率计算结果见表2。按油体积计算，平均收率为42.53％，按β-细辛醚含量计算，平均收率为57.26％。
表2β-细辛醚收率计算
注收率1按油的体积算出；收率2按β-细辛醚含量算出。
4、稳定性观察取β-细辛醚置冰箱(-4℃)保存3个月，经检测结果表明β-细辛醚纯度几无变化；提示低温贮藏稳定性良好。
5、小结经冷冻法精制，β-细辛醚纯度达98.39％～99.32％，可供药效及药材、制剂含量测定所用；收率高，按油体积计算平均收率为42.53％，按β-细辛醚含量计算平均收率为57.26％(远高于成都中医药大学化学分离法14％的收率)。
目前本申请人已采用HPLC法对石菖蒲药材中β-细辛醚、α-细辛醚含量进行测定，同时建立了制剂中β-细辛醚的含量测定方法，结果令人满意。
实施例二本实施例与第一实施例唯一的区别在于，实验温度的变化。本实施例是在-45℃的低温下进行的。结果见表3和表4。
表3β-细辛醚纯度检测结果
表4β-细辛醚收率计算
注收率1按油的体积算出；收率2按β-细辛醚含量算出。
结果提示表3表明经前三步冷冻处理，β-细辛醚平均纯度可达98.64％，且每组结果均在该平均纯度附近，说明实验的结果可重复。表4表明按油体积计算，平均收率为43.39％，按β-细辛醚含量计算，平均收率为58.41％。
实施例三本实施例与第一实施例唯一的区别在于，实验温度的变化。本实施例是在-60℃的低温下进行的。结果见表5和表6。
结果提示表5表明经前三步冷冻处理，β-细辛醚平均纯度可达98.69％，且每组结果均在该平均纯度附近，说明实验的结果可重复。表6表明按油体积计算，平均收率为43.19％，按β-细辛醚含量计算，平均收率为58.09％。
表5β-细辛醚纯度检测结果
表6β-细辛醚收率计算
注收率1按油的体积算出；收率2按β-细辛醚含量算出。
本发明通过采用上述传统、简单的几个步骤在三个不同的温度下通过冷冻精制处理后，得到的β-细辛醚纯度达97.89％～99.45％，完全可供药效及药材、制剂含量测定所用。理论上讲，如果想达到更高纯度，当然可以结晶更多次，而收率则会降低。本发明还可以选取其他溶剂如乙醚作为介质。
因此如果本领域的技术人员在本发明的启发之下，作出的显而易见的、非实质性的改进都应当落入本发明权利要求的保护范围之内。
权利要求
1.一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，其包括如下步骤第一步取石菖蒲挥发油，加入无水乙醇溶解，放置于-30℃以下的低温环境下8～24h，待有白色针状结晶析出，迅速倒除溶剂，得β-细辛醚粗提物；第二步取β-细辛醚粗提物再加入无水乙醇溶解，放置于-30℃以下的低温环境下2～3h以上，待β-细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，得β-细辛醚纯化物；第三步取β-细辛醚纯化物加入无水乙醇溶解，放置于-30℃以下的低温环境下2～3h以上，待β-细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，即得β-细辛醚纯品，白色晶体。
2.根据权利要求1所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，该方法还包括，将第三步所获晶体在室温下静置使完全溶化后，再置于-30℃以下的低温环境下8～24h，待结晶析出，上层有少量溶剂，完全倒除，得白色晶体低温保存。
3.根据权利要求1所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，在精制过程中若发现结晶析出时间长，可加入极少量石菖蒲细粉以促进结晶析出。
4.根据权利要求1或2或3所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，所述石菖蒲挥发油中含β-细辛醚的相对含量不低于60％。
5.根据权利要求1或2或3所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，所述无水乙醇可由无水乙醚代替。
6.根据权利要求1或2或3所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，在第一、二、三步骤中，均加入一倍量的无水乙醇。
7.根据权利要求6所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，在上述步骤中，低温环境的温度设置为-30℃或45℃或60℃。
8.根据权利要求7所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，第二、三步中，放置低温环境下的时间为8～24h。
9.根据权利要求1或2所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，在上述步骤中，低温环境的温度设置为-30℃或45℃或60℃。
10.根据权利要求9所述的一种β-细辛醚的精制方法，其特征在于，第二、三步中，放置低温环境下的时间为8～24h。
全文摘要
本发明涉及一种从中药材中萃取挥发油，然后从挥发油中提纯有效成分的工艺方法，尤其涉及从石菖蒲挥发油中提纯β－细辛醚的方法。一种β－细辛醚的精制方法，其包括如下步骤第一步取石菖蒲挥发油，加入无水乙醇溶解，放置于－30℃以下的低温冰箱内8～24h，待有白色针状结晶析出，迅速倒除溶剂，得β－细辛醚粗提物；第二步取β－细辛醚粗提物再加入无水乙醇溶解，放置于－30℃以下的低温冰箱内2～3h以上，待β－细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，得β－细辛醚纯化物；第三步取β－细辛醚纯化物加入无水乙醇溶解，放置于－30℃以下的低温冰箱内2～3h以上，待β－细辛醚结晶析出，迅速倒除溶剂，即得β－细辛醚纯品，白色晶体。
文档编号C07C43/00GK1800130SQ20051010052
公开日2006年7月12日 申请日期2005年10月24日 优先权日2005年10月24日
发明者解荷芝, 魏刚, 曹晖 申请人:丽珠医药集团股份有限公司