专利名称：作为趋化因子受体调节剂的3－(4－杂芳基环己基氨基)环戊烷羧酰胺的制作方法
技术领域：
本发明涉及调节趋化因子受体(例如CCR2)活性的化合物。在某些实施方案中，本发明化合物对CCR2具有选择性。本发明化合物可用于例如治疗与趋化因子受体表达或活性相关的疾病，例如炎性疾病、伴有炎性特征的代谢疾病、免疫疾病和癌症。
背景技术：
在抵抗疾病的正常炎症反应的引发过程中，涉及白细胞由血管迁移并传送至疾病组织中。上述过程也被称作白细胞补充，其另外还涉及炎症和自体免疫疾病的发作和进展。这些疾病的病理学原因缘于机体免疫系统攻击对似乎正常的组织的防御。因此，在炎性疾病、代谢疾病、自体免疫疾病和癌症中，预防和阻断向靶组织补充白细胞应该是治疗性介入的有效方法。
参与细胞免疫响应的不同白细胞类别包括单核细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞、嗜曙红细胞、天然杀伤细胞、肥大细胞和嗜碱细胞。在大部分情形中，单核细胞和淋巴细胞是引发、配合和维持慢性炎症反应的白细胞类别，因此阻断这些细胞进入发炎部位是适宜的。淋巴细胞将单核细胞吸引至组织部位，所述单核细胞联合淋巴细胞一起构成造成出现在炎性疾病中的大部分实际组织损伤的原因。已知淋巴细胞和/或单核细胞的渗透可导致各种各样的慢性、自体免疫疾病、以及器官移植排斥。这些疾病包括但不限于类风湿性关节炎、慢性接触性皮炎、哮喘、血内盐过多症、炎性肠病、狼疮、系统性红斑狼疮、多发性硬化、动脉粥样硬化、银屑病、结节病、特发性肺纤维化、皮肌炎、类天疱疮及其相关疾病(例如寻常型天疱疮，P.foliacious、P.erythematosis)、肾小球肾炎、血管炎、肝炎、糖尿病、同种异体移植物排斥、以及移植物抗宿主病。
据信，白细胞离开血流、聚集在发炎部位并引发疾病的过程具有至少下述三个步骤(1)滚环(rolling)、(2)激活/固定粘附和(3)穿过内皮的迁移[Springer，T.A.，Nature 346425-433(1990)；Lawrence和Springer，Cell 65859-873(1991)；Butcher，E.C.，Cell 671033-1036(1991)]。其中第二步通过化学引诱物受体在分子水平上进行调节。白细胞表面上的化学引诱物受体与由细胞分泌的化学引诱物细胞因子在明显受到损害或感染的部位上结合。受体的结合可激活白细胞，增强介导穿过内皮迁移的粘着分子的粘附力，同时促进细胞向化学引诱物细胞因子源的直接迁移。
趋化细胞因子(白细胞化学引诱物/激活因子)也被称为趋化因子，也可叫做intercrine和SIS细胞因子，是一类炎性/免疫调节性多肽因子，分子量为6-15kDa，可由各种细胞在发炎部位上释放出来，例如巨噬细胞、单核细胞、嗜曙红细胞、嗜中性粒细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞、上皮细胞、平滑肌细胞、和肥大细胞(在Luster，NewEng.J Med.，338，436-445(1998)和Rollins，Blood，90，909-928(1997)中有综述)。另外，在Oppenheim，J.J.等人，Annu.Rev.Immunol.，9617-648(1991)；Schall和Bacon，Curr.Opin.Immunol.，6865-873(1994)；Baggiolini，M.等人，Adv.Immunol.，5597-179(1994)中也对趋化因子进行了描述。趋化因子具有刺激直接细胞迁移的能力，该步骤被称为趋化性。根据两个末端半胱氨酸残基是否直接相邻(CC族)或者被一个氨基酸隔开(CXC族)，趋化因子可分为两个主要亚族。这些区别与组织两个亚族成为分开的基因族有关。在每个基因族中，趋化因子通常显示出的序列相似性为25-60％。诸如白介素-8(IL-8)、嗜中性粒细胞-激活蛋白-2(NAP-2)和黑素瘤生长刺激活性蛋白(MGSA)的CXC趋化因子主要趋向于嗜中性粒细胞和T淋巴细胞，而在其它细胞类型中，诸如RANTES、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白(MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、和MCP-5)以及嗜酸细胞活化趋化因子(-1和-2)的CC趋化因子则趋向于巨噬细胞、T淋巴细胞、嗜曙红细胞、树状突细胞、和嗜碱细胞。另外还存在趋化因子淋巴细胞趋化因子-1、淋巴细胞趋化因子-2(均是C趋化因子)、和fractalkine(CXXXC趋化因子)，这些均不属于两种主要的趋化因子亚族。
MCP-1(也被称作MCAF(巨噬细胞趋化和激活因子的缩写)或JE)是由单核细胞/巨噬细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、和血管内皮细胞产生的CC趋化因子，可引起单核细胞(参见例如Valente，A.J.等人，Biochemistry，1988，27，4162；Matsushima，K.等人，J.Exp.Med.，1989，169，1485；Yoshimura，T.等人，J.Immunol.，1989，142，1956；Rollins，B.J.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1988，85，3738；Rollins，B.J.等人，Blood，1991，78，1112；Jiang，Y.等人，J.Immunol.，1992，148，2423；Vaddi，K.等人，J.Immunol.，1994，153，4721)、记忆T淋巴细胞(参见例如Carr，M.W.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，3652)、T淋巴细胞(参见例如Loetscher，P.等人，FASEB J.，1994，8，1055)和天然杀伤细胞(参见例如Loetscher，P.等人，J.Immunol.，1996，156，322；Allavena，P.等人，Eur.J.Immunol.，1994，24，3233)的细胞迁移和细胞粘附，以及通过嗜碱细胞调节组胺的释放(参见例如Alam，R.等人，J.Clin.Invest.，1992，89，723；Bischoff，S.C.等人，J.Exp.Med.，1992，175，1271；Kuna，P.等人，J.Exp.Med.，1992，175，489)。此外，在其中单核细胞/巨噬细胞和/或T细胞的聚集被认为对于该疾病的发作或进展很重要的疾病中对MCP-1的高度表达已经进行了报道，前述疾病例如动脉粥样硬化(参见例如Hayes，I.M.等人，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，1998，18，397；Takeya，M..等人，Hum.Pathol.，1993，24，534；Yla-Herttuala，S.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1991，88，5252；Nelken，N.A.，J.Clin.Invest.，1991，88，1121)、类风湿性关节炎(参见例如Koch，A.E.等人，J.Clin.Invest.，1992，90，772；Akahoshi，T.等人，Arthritis Rheum.，1993，36，762；Robinson，E.等人，Clin.Exp.Immunol.，101，398)、肾炎(参见例如Noris，M.等人，Lab.Invest.，1995，73，804；Wada，T.等人，Kidney Int.，1996，49，761；Gesualdo，L.等人，KidneyInt.，1997，51，155)、肾病(参见例如Saitoh，A.等人，J.Clin.Lab.Anal.，1998，12，1；Yokoyama，H.等人，J.Leukoc.Biol.，1998，63，493)、肺纤维化、肺结节病(参见例如Sugiyama，Y.等人，InternalMedicine，1997，36，856)、哮喘(参见例如Karina，M.等人，J.Invest.Allergol.Clin.Immunol.，1997，7，254；Stephene，T.H.，Am.J.Respir.Crit.Care Med.，1997，156，1377；Sousa，A.R.等人，Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.，1994，10，142)、多发性硬化(参见例如McManus，C.等人，J.Neuroimmunol.，1998，86，20)、银屑病(参见例如Gillitzer，R.等人，J.Invest.Dermatol.，1993，101，127)、炎性肠病(参见例如Grimm，M.C.等人，J.Leukoc.Biol.，1996，59，804；Reinecker，H.C.等人，Gastroenterology，1995，106，40)、心肌炎(参见例如Seino，Y.，等人，细胞因子，1995，7，301)、子宫内膜异位(参见例如Jolicoeur，C.等人，Am.J.Pathol.，1998，152，125)、腹膜内粘附(参见例如Zeyneloglu，H.B.等人，Human Reproduction，1998，13，1194)、充血性心力衰竭(参见例如Aurust，P.等人，Circulation，1998，97，1136)、慢性肝病(参见例如Marra，F.等人，Am.J.Pathol.，1998，152，423)、病毒性脑膜炎(参见例如Lahrtz，F.等人，Eur.J.Immunol.，1997，27，2484)、川崎病(参见例如Wong，M.；等人，J.Rheumatol.，1997，24，1179)以及败血症(参见例如Salkowski，C.A.；等人，Infect.Immun.，1998，66，3569)。此外，还报道了抗-MCP-1抗体对于类风湿性关节炎(参见例如Schimmer，R.C.等人，J.Immunol.，1998，160，1466；Schrier，D.J.，J.Leukoc.Biol.，1998，63，359；Ogata，H.等人，J.Pathol.，1997，182，106)、多发性硬化(参见例如Karpus，W.J.等人，J.Leukoc.Biol.，1997，62，681)、肾炎(参见例如Lloyd，C.M.等人，J.Exp.Med.，1997，185，1371；Wada，T.等人，FASEB J.，1996，10，1418)、哮喘(参见例如Gonzalo，J.-A.等人，J.Exp.Med.，1998，188，157；Lukacs，N.W.，J.Immunol.，1997，158，4398)、动脉粥样硬化(参见例如Guzman，L.A.等人，Circulation，1993，88(suppl.)，I-371)、迟发型超敏反应(参见例如Rand，M.L.等人，Am.J.Pathol.，1996，148，855)、肺动脉高压(参见例如Kimura，H.等人，Lab.Invest.，1998，78，571)、和腹膜内粘附(参见例如Zeyneloglu，H.B.等人，Am.J.Obstet.Gynecol.，1998，179，438)的动物模型显示出抑制效果或治疗效果。据报道，MCP-1的肽拮抗剂MCP-1(9-76)在小鼠模型中也可以抑制关节炎(参见Gong，J.-H.，J.Exp.，4ed.，1997，186，131)，同时对于缺乏MCP-1的小鼠的研究也表明，MCP-1对单核细胞的体内补充很重要(参见Lu，B.等人，J.Exp.Med.，1998，187，601；Gu，L.等人，Moll.Cell，1998，2，275)。
在西方国家，慢性阻塞性肺病(COPD)是引起死亡的最常见原因之一。其被定义为肺功能的逐渐下降，且只能通过支气管扩张药部分逆转。COPD其特征在于气道或海马槽(alveoli)慢性发炎不同于哮喘中的情况，包括嗜中性粒细胞、巨噬细胞、CD8+T细胞、和/或肥大细胞在气道壁、肺泡隔室、和血管平滑肌中的数量增加。据信，与COPD相关的细胞因子包括肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-1β、IL-6、IL-8和MCP-1。已知CCR2是MCP-1的受体，并且最新数据认为，MCP-1和CCR2在气道重塑和炎症中的作用是直接借助或者通过巨噬细胞产生的。因此，CCR2拮抗剂是治疗性处理COPD的可行方法(De Boer，W.I.，Chest，2002，121，209S-218S)。
相关文献表明，趋化因子(例如MCP-1和MIP-1α)可将单核细胞和淋巴细胞引诱至疾病部位上并调节其活性，因而它被认为与密切涉及单核细胞和淋巴细胞的疾病的发作、进展和维持密切相关，这类疾病例如动脉粥样硬化、糖尿病、再狭窄、类风湿性关节炎、银屑病、哮喘、溃疡性结肠炎、肾炎(肾病)、多发性硬化、肺纤维化、心肌炎、肝炎、胰腺炎、结节病、克罗恩氏病、子宫内膜异位、充血性心力衰竭、病毒性脑膜炎、脑梗塞、神经病、川崎病、和败血症(参见例如Royin，B.H.等人，Am.J.Kidney.Dis.，1998，31，1065；Lloyd，C.等人，Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.，1998，7，281；Conti，P.等人，Allergy and Asthma Proc.，1998，19，121；Ransohoff，R.M.等人，Trends Neurosci.，1998，21，154；MacDermott，R.P.等人，炎性肠病，1998，4，54)。
与特异性细胞表面受体结合的趋化因子属于G-蛋白偶联七跨膜域蛋白家族(在Horuk，Trends Pharm.Sci.，15，159-165(1994)中进行了综述)，上述受体被称为“趋化因子受体”。当与其同源配体结合时，趋化因子受体通过相关的三聚G蛋白转换细胞内信号，导致除其它响应之外，还导致细胞内钙浓度迅速增加、细胞形状改变、细胞粘附分子表达增加、细胞脱粒、以及细胞迁移的促进。
已经克隆了针对特异性趋化因子的基因编码受体，并且已知这些受体是出现在各种白细胞种群上的G蛋白-偶联七-跨膜受体。迄今为止，至少已经鉴定出六种CXC趋化因子受体(CXCR1-CXCR6)和九种CC趋化因子受体(CCR1-CCR8和CCR10)。例如，IL-8是CXCR1和CXCR2的配体，MIP-1α是CCR1和CCR5的配体，MCP-1是CCR2A和CCR2B的配体(参考文献参见例如Holmes，W.E.等人，Science 1991，253，1278-1280；Murphy P.M.等人，Science，253，1280-1283；Neote，K.等人，Cell，1993，72，415-425；Charo，I.F.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，2752-2756；Yamagami，S.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1994，202，1156-1162；Combadier，C.等人，The Journal of Biological Chemistry，1995，270，16491-16494，Power，C.A.等人，J.Biol.Chem.，1995，270，19495-19500；Samson，M.等人，Biochemistry，1996，35，3362-3367；Murphy，P.M.，Annual Review of Immunology，1994，12，592-633)。据报道，在缺乏CCR1的小鼠中可抑制肺炎和granuroma形成(参见Gao，J.-L.等人，J.Exp.Med.，1997，185，1959；Gerard，C.等人，J.Clin.Invest.，1997，100，2022)，在缺乏CCR2的小鼠中可减少巨噬细胞的补充和动脉粥样硬化损伤的形成(参见Boring，L.等人，Nature，1998，394，894；Kuziel，W.A.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，USA，1997，94，12053；Kurihara，T.等人，J.Exp.Med.，1997，186，1757；Boring，L.等人，J.Clin.Invest.，1997，100，2552)。
趋化因子受体也被称作病毒进入导致病毒感染(例如HIV感染)的复合受体。逆转录和蛋白质加工是病毒生命周期的经典步骤，后者可以通过设计抗逆转录病毒的治疗剂加以阻断。尽管据信很多新药都可以阻断病毒进入，但是目前没有任何一种药剂能够抵抗HIV-1。病毒复制的多个循环均要求产生形成耐药性基础的遗传差异。在其中复制被最大程度受到抑制的联合治疗中，可以使用进入抑制剂和其它药剂为基础进行治疗。据信病毒进入步骤中的多步骤的目的在于产生可能的协同作用(Starr-Spires等人，Clin.Lab.Med.，2002，22(3)，681)。
HIV-1进入CD4(+)细胞要求病毒包装糖蛋白与CD4和诸如趋化因子受体CCR5和CXCR4的复合受体之间连续相互作用。阻断上述步骤的一种似为合理的方法是使用复合受体功能的小分子拮抗剂。TAK-779分子就是这样一种CCR5拮抗剂，它可用于预防HIV-1感染。通过阻断病毒表面糖蛋白gp120与CCR5之间的相互作用，TAK-779抑制了处于膜融合阶段的HIV-1复制。TAK-779在CCR5上的结合位点位于该受体的细胞外表面附近，跨膜螺旋1、2、3、和7之间所形成的空穴内部(Dragic等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2000，97(10)，5639)。
据信，趋化因子受体CXCR4和CCR5可用作T细胞-向性(X4)和巨噬细胞-向性(R5)HIV-1菌珠分别进入其宿主细胞中的复合受体。HIV-1的R5菌珠在CD4淋巴细胞和巨噬细胞上的传播要求CCR5复合细胞表达在细胞表面上。缺乏CCR5(CCR5 δ 32同型结合基因型)的个体在表型上是正常的，并且可以抵抗HIV-1的感染。可以通过CXCR4(CXC趋化因子SDF-1)和CCR5的天然配体(CC趋化因子RANTES、MIP-1α和MIP-1β)来抑制病毒进入。与CCR5而不是与CXCR4相互作用的第一个非肽化合物是被称作TAK-779的季铵衍生物，它还具有强烈但不稳定的抗-HIV活性(De Clercq等人，Antivir.Chem.Chemother.2001，12 Suppl.1，19)。
SCH-C(SCH 351125)是另一种通过CCR5复合受体抑制HIV-1进入的小分子抑制剂。SCH-C这种肟-哌啶化合物在多受体结合和信号转导测定中被测定为特异性CCR5拮抗剂。该化合物可以特异性地抑制通过U-87星形神经胶质瘤细胞中的CCR5介导的HIV-1感染，但是对于表达CXCR4的细胞感染没有效果(Strizki等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，2001，98(22)，12718或Tremblay等人，Antimicrobial Agentsand Chemotherapy，2002，46(5)，1336)。
在化学上与SCH-C相关的AD101也可以通过人CCR5抑制人免疫缺陷病毒1(HIV-1)的进入。已发现AD101可以通过猕猴CCR5抑制HIV-1进入，而SCH-C却不能。在其复合受体的人和猕猴版本之间存在差异的八个残基中，只有一个甲硫氨酸-198可用于解释猕猴CCR5对于SCH-C的抑制作用不具有敏感性。位置198位于CCR5跨膜(TM)螺旋5中，而不是位于先前所描述的AD101与SCH-C的结合位点中，后者涉及TM螺旋1、2、3、和7中的残基。根据对CCR5中氨基酸取代基的研究，认为残基198附近的CCR5区域可影响该受体的构象状态(Billick等人，2004，J.Virol.，78(8)，4134)。
鉴定出可以调节趋化因子受体活性的化合物代表了开发用于治疗与趋化因子受体活性相关的疾病的药剂所需要的理想药物设计途径。本发明的化合物有助于实现上述以及其它需要。
发明内容
本发明提供了式I化合物 或其可药用盐或前药，其中各组成部分如本文所述。
本发明进一步提供了含有式I化合物和可药用载体的组合物。
本发明进一步提供了调节趋化因子受体活性的方法，所述方法包括将所述受体与式I化合物接触。
本发明进一步提供了治疗患者与趋化因子受体表达或活性有关的疾病的方法，所述方法包括向该患者施用治疗有效量的式I化合物。
本发明进一步提供了式I化合物在治疗中的用途。
本发明进一步提供了式I化合物在制备用于治疗的药物中的用途。
发明详述化合物本发明提供了式I化合物 或其可药用盐或前药，其中虚线表示任选键；X是N、NO或CR3；R1是C1-6烷基、(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)、(C0-6烷基)-S-(C1-6烷基)、(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基)、OH、CO2R10、杂环基、CN、NR10R12、NSO2R10、NCOR10、NCO2R10、NCOR10、CR11CO2R10、CR11OCOR10、或者苯基；R2是H、OH、卤素、C1-3烷基、NR10R12、CO2R10、CONR10R12、NR10COR11、OCONR10R12、NR10CONR10R12、杂环基、CN、NR10-SO2-NR10R12、NR10-SO2-R12、SO2-NR10R12、或者氧代；其中所述C1-3烷基任选被1-6个选自F和OH中的取代基取代；R3是H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR10R11、NR10CO2R11、NR10CONR10R11、NR10SO2NR10R11、NR10-SO2-R11、杂环基、CN、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10、或者SO2-NR10R11；R4是H、C1-6烷基、CF3、OCF3、Cl、F、Br或者苯基；R5是C1-6烷基、C1-6烷氧基、CO-(C1-6烷基)、C1-6硫代烷氧基、吡啶基、F、Cl、Br、C4-6环烷基、C4-6环烷基氧基、苯基、苯氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基氧基、杂环基、CN、或者CO2R10；其中所述C1-6烷基任选被一个或多个OH或F取代；其中所述C1-6烷氧基、CO-(C1-6烷基)、或C1-6硫代烷氧基任选被-个或多个F取代；其中所述吡啶基、苯基或苯氧基任选被-个或多个选自卤素、CF3、C1-4烷基和CO2R10中的取代基取代；其中所述C3-6环烷基或C3-6环烷基氧基任选被一个或多个F取代；R6是H、CF3、C1-6烷基、F、Cl、或者Br；R7是H或者任选被1-3个选自卤素、OH、CO2H、CO2-(C1-6烷基)、或C1-3烷氧基中的取代基取代的C1-6烷基；R8是H、C1-6烷基、F、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基氧基、OH、CO2R10、OCOR10；其中所述C1-6烷基任选被一个或多个选自F、C1-3烷氧基、OH或CO2R10中的取代基取代；或者R7和R8一起形成桥连C2-4亚烷基或-(C0-2烷基)-O-(C1-3烷基)-基团，从而形成5-7元环；R9是任选被1-4个选自下述的取代基取代的杂环基C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16；R10是H、C1-6烷基、苄基、苯基、或者C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基、苄基、苯基、或C3-6环烷基任选被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3中的取代基取代；R11是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、或者C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基、苄基、苯基、或C3-6环烷基任选被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3中的取代基取代；R12是H、C1-6烷基、苄基、苯基、或者C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基、苄基、苯基、或C3-6环烷基任选被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3中的取代基取代；
R13和R14各自独立地是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、芳基、环烷基、芳烷基、或者环烷基烷基；R15和R16各自独立地是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、芳基、环烷基、芳烷基、或者环烷基烷基；或者R15和R16和与其相连的N原子一起形成4-6元杂环基。
在某些实施方案中，X是N或NO。
在某些实施方案中，X是CR3。
在某些实施方案中，R1是C1-6烷基。
在某些实施方案中，R1是甲基、乙基或丙基。
在某些实施方案中，R1是丙-2-基。
在某些实施方案中，R2是H、OH、卤素、或C1-3烷基。
在某些实施方案中，R2是H。
在某些实施方案中，R3是H、OH、卤素或C1-6烷基。
在某些实施方案中，R3是H。
在某些实施方案中，R4是H。
在某些实施方案中，R5是被1-4个F取代的C1-6烷基。
在某些实施方案中，R5是CF3。
在某些实施方案中，R6是H。
在某些实施方案中，R7是H。
在某些实施方案中，R8是H。
在某些实施方案中，R9是任选被1-4个选自下述的取代基取代的杂芳基C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
在某些实施方案中，R9是杂芳基，其中该杂芳基是任选被1-4个选自下述的取代基取代的5-或6-元杂芳基C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
在某些实施方案中，R9是杂芳基，其中该杂芳基是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基或三嗪基，各自任选被1-4个选自下述的取代基取代C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
在某些实施方案中，R9是杂芳基，其中该杂芳基是噻吩基、呋喃基、噻唑基、_唑基、或咪唑基，各自任选被1-4个选自下述的取代基取代C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
在某些实施方案中，R9是杂芳基，其中所述杂芳基是噻唑基、_唑基、嘧啶基、或吡啶基，各自任选被1-3个F、Cl、Br、I、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或者三氟甲基取代。
在某些实施方案中，该化合物具有式II 在某些实施方案中，该化合物具有式IIIa、IIIb或IIIc 在本说明书中的不同位置，本发明化合物上的各个取代基均是以组或范围的形式公开的。这具体意味着本发明包括这些组和范围成员的各种和所有的亚组合。例如，术语“C1-6烷基”具体是指单独公开的甲基、乙基、C3烷基、C4烷基、C5烷基、和C6烷基。
对于其中某变量出现不止一次的本发明化合物而言，每个变量可以是选自定义该变量的马库什基团中的不同基团。例如，当所述结构中具有两个同时出现在同一化合物中的R基团时，这两个R基团可以表示选自定义R的马库什基团中的不同基团。
进一步应该理解的是，本发明的某些特征为了清楚起见，被描述在各独立实施方案的上下文中，它们也可以以单个实施方案的组合形式提供。相反，本发明的某些不同特征为了简洁起见，被描述在单个实施方案的上下文中，它们也可以分别提供或者以任何适宜的亚组合方式提供。
本文中所使用的术语“烷基”是指直链或支链饱和烃基。烷基实例包括甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基和异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)等。烷基可以含有1至大约20个、2至大约20个、1至大约10个、1至大约8个、1至大约6个、1至大约4个、或者1至大约3个碳原子。
本文中所使用的“链烯基”是指具有一个或多个碳-碳双键的烷基。链烯基实例包括乙烯基、丙烯基、环己烯基等。
本文中所使用的“链炔基”是指具有一个或多个碳-碳叁键的烷基。链炔基实例包括乙炔基、丙炔基等。
本文中所使用的“卤代烷基”是指具有一个或多个卤素取代基的烷基。卤代烷基实例包括CF3、C2F5、CHF2、CCl3、CHCl2、C2Cl5等。
本文中所使用的“芳基”是指单环或多环(例如具有2、3或4个稠环)芳香烃，例如苯基、萘基、蒽基、菲基、茚满基、茚基等。在某些实施方案中，芳基具有6至大约20个碳原子。
本文中所使用的“环烷基”是指非芳香性碳环，包括环化烷基、烯基和炔基。环烷基可以包括单或多环(例如具有2、3或4个稠环)环系和螺环系。环烷基实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环戊烯基、环己烯基、环己二烯基、环庚三烯基、降莰烷基、norpinyl、降胆烷基(norcarnyl)、金刚烷基等。环烷基定义中还包括具有一个或多个与环烷基环稠合的芳香环(即具有共同键)，例如戊烷、戊烯、己烷等的苯并衍生物。在某些实施方案中，环烷基可以具有大约3至大约10个、或者大约3至大约7个成环碳原子。
本文中所使用的“杂环基”或“杂环”是指饱和或不饱和烃，其中该环状烃中的一个或多个成环碳原子被杂原子(例如O、S、或N)替代。杂环基可以具有芳香性(例如“杂芳基”)或非芳香性(例如“杂环烷基”)。杂环基还可能相应于氢化或部分氢化的杂芳基。杂环基可以包括单或多环(例如具有2、3或4个稠环)环系。杂环基特征可以在于具有3-14或3-7个成环原子。在某些实施方案中，除了至少一个杂原子之外，杂环基还可以含有大约1至大约13个、大约2至大约10个、或大约2至大约7个碳原子，并且可以通过碳原子或杂原子连接。在其它实施方案中，杂原子可以被氧化(例如具有氧代或硫代取代基)或者氮原子可以被季铵化。杂环基实例包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯、苯并-1，4-二_烷、哌啶基、吡咯烷基、异_唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、_唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基等，以及任何一个下面“杂芳基”和“杂环烷基”中所列举的基团。杂环的其它实例包括嘧啶基、菲啶基、邻二氮杂菲基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩_嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、3，6-二氢吡啶基、1，2，3，6-四氢吡啶基、1，2，5，6-四氢吡啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并_唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基，6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并_唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、呫吨基、八氢-异喹啉基、_二唑基、1，2，3-_二唑基、1，2，4-_二唑基、1，2，5-_二唑基、1，3，4-_二唑基、_唑烷基、_唑基、_唑烷基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹啉基、喹喔啉基、奎宁环基、吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻喃基、苯并噻吩基、苯并_唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异_唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、亚甲二氧苯基、吗啉基、萘啶基、十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋喃咱基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、肉啉基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、吲哚烯基、二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异吲哚啉基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基以及异_唑基。杂环的其它实例包括氮杂环丁烷-1-基、2，5-二氢-1H-吡咯-1-基、哌啶-1-基、哌嗪-1-基、吡咯烷-1-基、异喹啉-2-基、吡啶-1-基、3，6-二氢吡啶-1-基、2，3-二氢吲哚-1-基、1，3，4，9-四氢咔啉-2-基、噻吩并[2，3-c]吡啶-6-基、3，4，10，10a-四氢-1H-吡嗪并[1，2-a]吲哚-2-基、1，2，4，4a，5，6-六氢-吡嗪并[1，2-a]喹啉-3-基、吡嗪并[1，2-a]喹啉-3-基、二氮杂_-1-基、1，4，5，6-四氢-2H-苯并[f]异喹啉-3-基、1，4，4a，5，6，10b-六氢-2H-苯并[f]异喹啉-3-基、3，3a，8，8a-四氢-1H-2-氮杂-环戊并[a]茚-2-基、以及2，3，4，7-四氢-1H-氮杂_-1-基、氮杂_-1-基。
本文中所使用的“杂芳基”是指具有至少一个杂原子环成员例如硫、氧、或氮的芳香杂环。杂芳基包括单环和多环(例如具有2、3或4个稠环)体系。杂芳基实例非限制性包括吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三嗪基、呋喃基、喹啉基、异喹啉基、噻吩基、咪唑基、噻唑基、吲哚基、吡咯基、_唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、异_唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、吲唑基、1，2，4-噻二唑基、异噻唑基、苯并噻吩基、嘌呤基、咔唑基、苯并咪唑基、二氢吲哚基等。在某些实施方案中，该杂芳基具有1至大约20个碳原子，在其它实施方案中，具有3至大约20个碳原子。在某些实施方案中，该杂芳基含有3至大约14个、3至大约7个、或5-6个成环原子。在某些实施方案中，该杂芳基具有1至大约4个、1至大约3个、或1-2个杂原子。
本文中所使用的“杂环烷基”是指非芳香性杂环，包括环化烷基、烯基和炔基，其中一个或多个成环碳原子被杂原子(例如O、N、或S原子)替代。“杂环烷基”实例包括吗啉代、硫代吗啉代、哌嗪基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、2，3-二氢苯并呋喃基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯、苯并-1，4-二_烷、哌啶基、吡咯烷基、异_唑烷基、异噻唑烷基、吡唑烷基、_唑烷基、噻唑烷基、咪唑烷基等。杂环烷基定义中还包括具有一个或多个与非芳香杂环稠合的芳香环(即具有共同的键)的基团，例如苯二甲酰亚胺基(phthalimidyl)、萘二甲酰亚胺基(naphthalimidyl)、以及杂环的苯并衍生物如吲哚烯(indolene)和异吲哚烯(isoindolene)基。在某些实施方案中，该杂环烷基具有1至大约20个碳原子，在其它实施方案中，具有大约3至大约20个碳原子。在某些实施方案中，该杂环烷基含有3至大约14个、3至大约7个、或5-6个成环原子。在某些实施方案中，该杂环烷基具有1至大约4个、1至大约3个、或1-2个杂原子。在某些实施方案中，该杂环烷基含有0-3个双键。在某些实施方案中，该杂环烷基含有0-2个叁键。
本文中所使用的“卤素”或“卤”包括氟、氯、溴、和碘。
本文中所使用的“烷氧基”是指-O-烷基。烷氧基实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)、叔丁氧基等。
本文中所使用的“烷硫基(thioalkoxy)”是指-S-烷基。
本文中所使用的“卤代烷氧基”是指-O-卤代烷基。卤代烷氧基实例是OCF3。
本文中所使用的“环烷基氧基”是指-O-环烷基。
本文中所使用的“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。
本文中所使用的“环烷基烷基”是指被环烷基取代的烷基。
本文中所使用的“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基。杂环基烷基实例包括“杂芳基烷基”(被杂芳基取代的烷基)和“杂环烷基烷基”(被杂环烷基取代的烷基)。在某些实施方案中，除了至少一个成环杂原子之外，杂环基烷基还具有3-24个碳原子。
本文中所使用的“氧代”是指＝O。
本文所述的化合物可以是不对称的(例如具有一个或多个立体中心)。除非另有限定，包括所有的立体异构体例如对映异构体和非对映异构体。含有被不对称取代碳原子的本发明化合物可以以旋光或外消旋形式分离。由旋光起始原料如何制备旋光形式的方法是本领域已知的，例如通过拆分外消旋混合物或立体有择合成。本文所述化合物中还可能出现烯烃、C＝N双键的各种几何异构体，本发明包括了所有的这类稳定异构体。对本发明化合物的顺式和反式几何异构体进行了描述，它们可以以异构体混合物或者单独的异构形式分离。
化合物的外消旋混合物的拆分可以通过本领域已知的任何一种方法完成。方法实例包括使用为旋光、成盐有机酸的“手性拆分酸”进行分步重结晶。适用于分步重结晶法的拆分试剂是例如旋光酸，例如D和L型的酒石酸、二乙酰基酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、扁桃酸、苹果酸、乳酸或者各种旋光樟脑磺酸(例如β-樟脑磺酸)。适用于分步结晶法的其它拆分试剂包括α-甲基苄基胺的立体异构纯形式(例如S和R形式、或者非对映异构纯形式)、2-苯基甘氨醇(glycinol)、降麻黄碱、麻黄碱、N-甲基麻黄碱、环己基乙基胺、1，2-二氨基环己烷等。
外消旋混合物的拆分还可以通过在装填有旋光拆分试剂(例如二硝基苯甲酰基苯基甘氨酸)的柱子上洗脱而完成。适宜的洗脱溶剂组合物可以由本领域技术人员确定。
本发明化合物还包括互变异构形式，例如酮-烯醇互变异构体。
本发明化合物还包括含有原子所有同位素的中间体或最终化合物。同位素包括具有相同原子序数但是不同原子数目的原子。例如氢的同位素包括氘和氚。
本文中所使用的短语″可药用的″是指落入合理的医学判断范畴中、适合与人和动物组织接触使用而不表现出过分的毒性反应、刺激反应、过敏反应、或者其它问题或并发症、且与其合理的获益/风险比例相称的化合物、原料、组合物、和/或剂型。
本发明还包括本文所述化合物的可药用盐。本文中所使用的″可药用盐″是指所公开化合物的衍生物，其中通过将当前的酸或碱部分转化成其盐形式对母体化合物进行修饰。可药用盐的实例包括但不限于碱性残基例如胺的无机或有机酸盐；酸性残基例如羧酸的碱或有机盐等。本发明的可药用盐包括母体化合物由例如无毒性无机或有机酸形成的常规无毒性盐或季铵盐。本发明的可药用盐可以由含有碱性或酸性基团的母体化合物通过常规化学方法合成得到。一般来说，这类盐可以通过将上述化合物的游离酸或碱形式与化学计量的适宜碱或酸在水或有机溶剂、或者两者的混合物中进行反应而制备得到；通常优选非水介质例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇、或乙腈。适宜的盐的列表参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版，MackPublishing Company，Easton，Pa.，1985，第1418页和Journal ofPharmaceutical Science，66，2(1977)，在此将其全部内容引入作为参考。
本发明还包括本文所述化合物的前药。本文中所使用的“前药”是指当向哺乳动物对象施用时，释放出活性母体药物的任意共价结合的载体。前药可以通过按照一定方式将化合物中所存在的官能团进行修饰而制备得到，这种方式使得该修饰作用可以通过常规处理或者在体内裂解得到母体化合物。前药包括其中羟基、氨基、巯基、或羧基与那些当向哺乳动物对象施用时分别裂解形成游离羟基、氨基、巯基、或羧基的任意一种基团相结合的化合物。前药的实例包括但不限于本发明化合物中的醇和胺官能团的乙酸盐、甲酸盐和苯甲酸盐衍生物。前药的制备和应用在T.Higuchi和V.Stella，″Pro-drugs as NovelDelivery Systems″，the A.C.S.Symposium Series第14卷，以及Bioreversible Carriers in Drug Design，Edward B.Roche著，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中进行了讨论，在此将其全部内容引入作为参考。
合成本发明化合物包括其盐、水合物、和溶剂化物可以采用各种已知的合成方法制备，并且可以按照任何一种可能的合成路线合成得到。
用于制备本发明化合物的反应可以在适宜的溶剂中进行，后者可以由有机合成领域的普通技术人员方便地选择。适宜的溶剂可以是在反应所进行的温度下(例如在溶剂凝固点至溶剂沸点之间的温度下)，基本上不与起始原料(反应物)、中间体、或产物发生反应的溶剂。指定的反应可以在一种溶剂或者不止一种溶剂的混合物中进行。根据特定的反应步骤，可以选择适合特定反应步骤的适宜溶剂。
本发明化合物的制备包括各种化学基团的保护和脱保护。是否需要保护和脱保护、以及选择何种保护基团可以由本领域技术人员方便地加以确定。保护基团的相关化学文献可以参见例如T.W.Green和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，第3版，Wiley & Sons，Inc.，New York(1999)，在此将其全部内容引入作为参考。
反应可以按照本领域已知的任何一种适宜方法进行监测。例如，产物的形成可以通过光谱手段(如核磁共振光谱(如1H或13C)、红外光谱、分光光度法(如UV-可见光)、或质谱)监测，或者通过色谱法(例如高效液相色谱法(HPLC)或薄层色谱法)监测。
下面的流程
图1-6提供了本发明化合物的合成路线实例，其中所述结构式中的各组成部分在本文中进行了定义。
式1-5的中间体可以采用流程图1中所述的方案制备。商购得到的羧酸1-1可以通过用碘甲烷/碳酸钾在DMF中进行处理而转化为酯(例如甲基酯)。所得到的酯1-2可以用卤化物(例如碘化物(R1I))、使用碱(例如六甲基二叠氮化锂(lithium hexamethyldisilazide)(LHMDS))进行烷基化，得到为顺式和反式非对映异构体(4∶1比例)混合物的烷基化产物1-3。少量的反式非对映异构体可以在酯水解得到酸后通过结晶除去。所得到的对映纯的酸1-4使用催化剂(例如Pd-C)进行氢化，得到饱和羧酸1-5。
流程图1 式2-5的中间体可以采用流程图2中概述的步骤制备。将商购得到的2-1(例如4-三氟甲基苯基乙腈)通过使用催化剂(例如阮内镍)氢化成胺后，所得到的胺用三氟乙酸酐进行酰化，可以得到酰胺2-3。所得到的酰胺可以用甲醛在强酸(例如硫酸)的存在下进行处理，得到环化的四氢异喹啉衍生物2-4。通过用碳酸钾在水和乙醇中处理，除去三氟乙酰基得到中间体2-5。
流程图2 式3-9化合物(例如5-氮杂-四氢异喹啉)可以按照流程图3制备。商购得到的式3-1中间体(例如5-三氟甲基吡啶-2-醇)可以通过用溴在乙酸中处理溴化，形成式3-2中间体。将式3-2中间体用烷基锂例如正丁基锂或叔丁基锂锂化，然后用DMF猝灭，可以得到醛3-3。该醛通过用羟胺在甲酸钠/甲酸的存在下处理转化成氰基，得到中间体3-4。在将羟基转化为氯(3-5)之后，用丙二酸叔丁基甲基酯置换出氯，得到二酯3-6。在催化剂(例如阮内镍)的存在下进行氢化，将氰基还原成胺，后者用甲基酯环化，形成内酰胺。该内酰胺用强酸(例如TFA)处理，除去叔丁氧羰基。所得到的内酰胺3-8使用硼烷还原成胺，后者通过用Boc保护胺进行纯化。使用酸(例如HCl)的二_烷溶液除去Boc，得到产物3-9。
流程图3 式1-5的羧酸中间体可以与式4-1的胺采用标准酰胺形成试剂(例如PyBrop或BOP)进行偶联。当X＝N时，所得到的酰胺4-2可以用氧化剂(例如mCPBA)氧化，得到N-氧化物4-4。使用酸(例如HCl)的二_烷溶液除去4-2和4-4上的Boc基团，分别得到游离胺4-3和4-5。
流程图4 式5-5的环己酮衍生物可以按照流程图5中描述的顺序制备。杂环(R9-X；其中X是H或卤素)可以通过用丁基锂处理进行锂化，所得到的阴离子可以用1，4-环己酮单亚乙基缩酮(5-2)猝灭，得到醇5-3。将5-3用酸水溶液(例如HCl的水溶液)处理，使该缩酮转化为酮。所得到的酮5-4通过用LDA处理进行烷基化，然后用烷基卤化物(例如R8I)猝灭，得到式5-5的环己酮衍生物。杂环上的取代基可以在锂化之前出现，也可以将杂环按照常规方法(例如附加的锂化反应)在最后一步中进行衍生化，从而形成本发明的化合物。
流程图5
本发明化合物可以按照流程图6那样进行组合。将式5-5的酮用式4-3的胺、使用还原剂(例如三乙酰氧基硼氢化钠)进行还原胺化，生成式6-1化合物。按照常规方法，任选将6-1的连接胺进行烷基化、酰化、保护等，从而形成式6-2的衍生物。
流程图6 方法在某些实施方案中，本发明化合物可以调节一种或多种趋化因子受体的活性。术语“调节”是指增强或降低受体的活性。因此，本发明化合物可用于调节趋化因子受体的方法，所述方法是通过将上述受体与任何一种或多种本文所述的化合物或组合物接触。在某些实施方案中，本发明化合物可作为趋化因子受体的抑制剂。在进一步的实施方案中，通过施用调节量的式I化合物，本发明化合物可用于调节需要进行这种受体调节的个体中的趋化因子受体活性。
与本发明化合物相结合的和/或本发明化合物可以调节的趋化因子受体包括任何趋化因子受体。在某些实施方案中，所述趋化因子受体属于趋化因子受体的CC家族，包括例如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8和CCR10。在某些实施方案中，所述趋化因子受体是CCR2。
本发明化合物可以具有选择性。“选择性”是指相对于至少一种其它趋化因子受体而言，化合物结合或抑制某种趋化因子受体的亲和力或效力更高。
本发明化合物可以是CCR2的选择性抑制剂或结合剂，这意味着相对于其它趋化因子受体(例如至少一种CCR1、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8和CCR10)而言，本发明化合物结合或抑制CCR2的亲和力或效力更高。在某些实施方案中，相对于CCR5而言，本发明化合物对CCR2具有结合或抑制选择性。在某些实施方案中，相对于CCR1而言，本发明化合物对CCR2具有结合或抑制选择性。在某些实施方案中，相对于任何一种其它CCR而言，本发明化合物对CCR2具有结合或抑制选择性。选择性可以为至少大约10倍、至少大约20倍、至少大约50倍、至少大约100倍、至少大约200倍、至少大约500倍或者至少大约1000倍。结合亲和力和抑制剂效力可以按照本领域常规方法(例如本文所提供的方法)进行测量。
本发明进一步提供了治疗个体(例如患者)中与趋化因子受体相关的疾病或障碍的方法，所述方法通过向需要该治疗的个体施用治疗有效用量或剂量的本发明化合物或其药物组合物。与趋化因子受体相关的疾病可以包括任何一种直接或间接与趋化因子或趋化因子受体表达或活性相关的疾病、障碍或病况。与趋化因子或趋化因子受体相关的疾病还可以包括任何一种通过调节趋化因子受体进行预防、缓解、或治愈的疾病、障碍或病况。
与趋化因子或趋化因子受体相关的疾病、障碍和病况的实例包括炎症和炎性疾病、代谢疾病、免疫障碍和癌症。在某些实施方案中，所述与趋化因子受体相关的疾病是病毒感染例如HIV感染。炎性疾病的实例包括具有炎性因素的疾病，例如哮喘、季节性和常年性变应性鼻炎、鼻窦炎、结膜炎、与年龄相关的黄斑变性、食物过敏、鲭鱼肉中毒、银屑病、荨麻疹、搔痒症、湿疹、炎性肠病、血栓性疾病、中耳炎、肝硬化、心脏病、阿尔茨海默氏病、败血症、再狭窄、动脉粥样硬化、II型糖尿病、代谢综合症、多发性硬化、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、过敏性肺病、药物诱导的肺纤维化、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、肾炎、溃疡性结肠炎、特应性皮炎、中风、急性神经损伤、结节病、肝炎、子宫内膜异位、神经性疼痛、过敏性肺炎、嗜曙红细胞肺炎、迟发型超敏反应、间质性肺病(ILD)(例如与类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、全身性硬化症、斯耶格伦氏综合症、多肌炎或皮肌炎相关的特发性肺纤维化、或ILD)等。免疫障碍的实例包括类风湿性关节炎、银屑病关节炎、系统性红斑狼疮、重度肌无力、青少年发作型糖尿病；肾小球肾炎、autoimmunethroiditis、器官移植排斥(包括同种异体移植物排斥和移植物抗宿主病)。癌症的实例包括诸如乳癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤等的癌症，其特征在于巨噬细胞(例如与巨噬细胞相关的肿瘤、TAM)向肿瘤或患病组织中渗入。
本文中所使用的术语“接触”是指将所述的各部分一起集合在体内体系或体外体系中。例如，将趋化因子受体与本发明化合物“接触”包括向具有趋化因子受体的个体或患者例如人施用本发明化合物，以及例如将本发明化合物引入至含有含该趋化因子受体的细胞或纯化制品的样品中。
本文中所使用的术语“个体”或“患者”可以替代使用，是指任何一种动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其它啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、羊、马、或灵长类动物，最优选人。
本文中所使用的短语“治疗有效用量”是指发挥出一定生理或医学响应的活性化合物或药剂的用量，这种生理或医学响应可被研究人员、兽医、医生或者其它临床医生考虑为对于组织、体系、动物、个体或人而言是有意义的，包括下述中的一种或多种情况(1)预防疾病；例如在可能会患有疾病、病况或障碍但是尚未经历或表现出这种疾病的病状或症状的个体中，预防疾病、病况或障碍的出现(非限制性实例为预防过敏性肺病、药物诱导的肺纤维化、慢性阻塞性肺病(COPD)、移植后的移植物抗宿主病和/或同种异体移植物排斥、病毒感染、胰岛素耐受、动脉粥样硬化，或者预防变应性反应例如特应性皮炎、迟发型超敏反应、或季节性或常年性变应性鼻炎)；(2)抑制疾病及其进展；例如在正在经历或表现出疾病、病况或障碍的病状或症状的个体中，抑制这种疾病、病况或障碍及其进展(也就是使该病状和/或症状停止进一步发展)，例如抑制过敏性肺病、药物诱导的肺纤维化、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、狼疮或银屑病中的炎性或自体免疫应答，或者抑制动脉粥样斑块、阿尔茨海默氏病、黄斑变性的发展或者抑制胰岛素耐受发展为糖尿病状态，或者抑制肿瘤生长或在病毒感染的情形中稳定病毒载量；以及(3)缓解疾病，例如在具有症状或表现出疾病、病况或障碍的病状或症状的个体中，使这种疾病、病况或障碍得到缓解(也就是逆转该病状和/或症状)，例如降低过敏性肺病、药物诱导的肺纤维化、慢性阻塞性肺病(COPD)、类风湿性关节炎、狼疮或银屑病中的自体免疫应答，或者缩小与癌症相关的肿瘤或在病毒感染的情形中降低病毒载量。
为了治疗与趋化因子受体相关的疾病、障碍或病况，可以将一种或多种其它的药剂例如抗病毒剂、抗体、抗炎剂、胰岛素促分泌剂和致敏剂、血清脂质和脂质载体调节剂、和/或免疫抑制剂与本发明化合物联合使用。这些药剂可以与本发明化合物以单一或连续的剂型形式联合，或者可以将这些药剂按照单独的剂型形式同时或依次施用。
预期可与本发明化合物联合使用的适宜抗病毒剂可以包括核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTIs)、蛋白酶抑制剂、进入抑制剂、融合抑制剂、成熟抑制剂、以及其它抗病毒药物。
适宜NRTIs的实例包括齐多夫定(AZT)；去羟肌苷(ddl)；扎西他宾(ddC)；司他夫定(d4T)；拉米夫定(3TC)；阿巴卡韦(1592U89)；阿德福韦酯[双(POM)-PMEA]；洛布卡韦(BMS-180194)；BCH-10652；emitricitabine[(-)-FTC]；β-L-FD4(也称作β-L-D4C和β-L-2′，3′-dicleoxy-5-氟-胞苷)；DAPD、((-)-β-D-2，6-二氨基-嘌呤二氧戊环)；以及洛德腺苷(FddA)。
典型的适宜NNRTIs包括奈韦拉平(BI-RG-587)；地拉韦啶(BHAP，U-90152)；依法韦仑(DMP-266)；PNU-142721；AG-1549；MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2，4(1H，3H)-嘧啶二酮)；以及(+)-calanolide A(NSC-675451)和B。
典型的适宜的蛋白酶抑制剂包括沙奎那韦(Ro 31-8959)；利托那韦(ABT-538)；茚地那韦(MK-639)；nelfnavir(AG-1343)；安泼那韦(141W94)；拉西那韦(BMS-234475)；DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；以及AG-1 549。
其它的抗病毒剂包括羟基脲、利巴韦林、IL-2、IL-12、喷他夫西、enfuvirtide、C-34、环三氮杂二磺酰胺CADA PA-457和Yissum ProjectNo.11607。
在某些实施方案中，预期可与本发明化合物联合使用的抗炎或止痛剂可以包括例如阿片激动剂，脂肪氧化酶抑制剂(例如5-脂肪氧化酶抑制剂)，环氧化酶抑制剂(例如环氧化酶-2抑制剂)，白介素抑制剂(例如白介素-1抑制剂)，TNF抑制剂(例如英夫利昔单抗、依那西普、或NNMA拮抗剂阿达木单抗)，氧化亚氮抑制剂或氧化亚氮合成抑制剂，非甾类抗炎剂，或抑制细胞因子的抗炎剂(例如扑热息痛、阿司匹林、可待因、芬太尼、布洛芬、吲哚美辛、ketodolac、吗啡、萘普生、非那西丁、吡罗昔康，甾类止痛剂，舒芬太尼，sunlindac，替尼达普等)。类似地，本发明化合物还可以与下述药剂施用疼痛减轻剂；增效剂(例如咖啡因、H2-拮抗剂、西甲硅油、氢氧化铝或镁)；解充血剂(例如去氧肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱、羟甲唑啉、ephinephrine、萘甲唑啉、赛洛唑啉、丙己君、或者左旋脱氧麻黄碱)；镇咳剂(例如可待因、氢可酮、卡拉美芬、枸环戊酯、或右旋甲吗喃(dextramethorphan))；利尿剂；以及镇静剂或非镇静抗组胺剂。
在某些实施方案中，预期可与本发明化合物联合使用的药剂可以包括但不限于(a)VLA-4拮抗剂，例如描述在US 5,510,332、WO95/15973、WO96/01644、WO96/06108、WO96/20216、WO96/229661、WO96/31206、WO96/4078、WO97/030941、WO97/022897、WO98/426567、WO98/53814、WO98/53817、WO98/538185、WO98/54207、以及WO98/58902中的VLA-4拮抗剂；(b)甾类(例如倍氯米松、甲基强的松龙、倍他米松、泼尼松、地塞米松、和氢化可的松；(c)免疫抑制剂例如环孢菌素、他克莫司、raparnycin以及其它FK506类型免疫抑制剂；(d)抗组胺类(HI-组胺拮抗剂)，例如bromopheniramine、氯苯那敏、右氯苯那敏、曲普利啶、氯马斯汀、苯海拉明、二苯拉林、曲吡那敏、羟嗪、甲地嗪、异丙嗪、阿利马嗪、阿扎他定、赛庚啶、安他唑啉、非尼那敏pyrilarnine、asternizole、特酚伪麻片、氯雷他定、西替利嗪、非索非那定、desearboethoxyloratadine等；(e)非甾类抗哮喘剂，例如特布他林、奥西那林、非诺特罗、isoethaiine、沙丁胺醇、比托特罗、吡布特罗、茶碱、色甘酸钠、阿托品、异丙托溴铵、白三烯拮抗剂(例如扎鲁斯特、孟鲁斯特、普仑斯特、伊拉斯特、泊比斯特、SKB-106，203)、白三烯生物合成抑制剂(例如齐留通、BAY-1005)；(f)非甾类抗炎剂(NSAIDs)，例如丙酸衍生物(如阿明洛芬、苯_洛芬、布氯酸、卡洛芬、芬布芬、非诺洛芬、氟洛芬、氟比洛芬、布洛芬、吲哚洛芬、酮洛芬、咪洛芬、萘普生、奥沙普嗪、吡洛芬、普拉洛芬、舒洛芬、噻洛芬酸、和硫_洛芬)、乙酸衍生物(例如吲哚美辛、acernetacin、阿氯芬酸、环氯茚酸、双氯芬酸、芬氯酸、芬克洛酸、芬替酸、呋罗芬酸、异丁芬酸、伊索克酸、oxpinac、舒林酸、硫平酸、托美丁、齐多美辛、和佐美酸)、芬那酸衍生物(氯芬那酸、甲氯芬那酸、甲芬那酸、尼氟酸和托芬那酸)、联苯基羧酸衍生物(二氟尼柳和氟苯柳)、oxicarns(isoxicarn、吡罗昔康、舒多昔康和替诺昔康)、水杨酸盐类(乙酰水杨酸、柳氮磺吡啶)和吡唑酮类(阿扎丙宗、bezpiperylon、非普拉宗、莫非布宗、羟布宗、保泰松)；(g)环氧化酶-2(COX-2)抑制剂；(h)磷酸二酯酶IV型(PDE-IV)抑制剂；(i)趋化因子受体的其它抑制剂，特别是CXCR-4、CCRl、CCR2、CCR3和CCR5；(j)胆固醇降低剂，例如HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、sirrivastatin和普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、以及其它他汀类)、多价螯合剂(考来烯胺和考来替泊)、烟酸、非诺贝酸衍生物(吉非贝齐、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝特)、以及普罗布考；(k)抗炎生物剂，例如抗-TNF治疗剂、抗-IL-1受体、CTLA-4Ig、抗-CD20、和抗-VLA4抗体；(l)抗糖尿病剂，例如胰岛素、磺酰脲、双胍(二甲双胍)、U-葡萄糖苷酶抑制剂(阿卡波糖)和orlitazones(曲格列酮和吡格列酮)；(m)干扰素β制品(干扰素β-lo.、干扰素β-1P)；(n)其它化合物例如氨基水杨酸、抗代谢物例如硫唑嘌呤和6-巯嘌呤、和细胞毒性癌症化学治疗剂。本发明化合物与第二活性成分的重量比可以不同，这取决于各种成分的有效剂量。
例如，可以将CCR2拮抗剂联合抗炎药剂-起用于治疗炎症、代谢疾病、自体免疫疾病、癌症或病毒感染，从而使得相对于单独使用上述治疗剂而言其治疗响应情况得到改善，并且不加重其毒性效应。获得叠加或协同效应是联合本发明CCR2拮抗剂与其它药剂理想的结果。
药物制剂和剂型当用作药物时，式I化合物可以以药物组合物的形式施用。这类组合物可以按照药学领域熟知的方法制备，并且可以通过各种不同途径给药，这取决于是否希望局部或全身性治疗以及待治疗的区域。给药可以是局部(包括眼用和粘膜给药，包括鼻内、阴道和直肠递送)、肺部(例如通过吸入或包括通过雾化器喷入散剂或气雾剂；气管内、鼻内、外皮和经皮给药)、口服或非肠道给药。非肠道给药包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌内给药或者注射或输注给药；或者颅内例如鞘内或心室内给药。非肠道给药可以为快速浓注剂，或者是例如通过连续输注泵给药。用于局部给药的组合物和制剂可以包括透皮贴剂、软膏剂、洗剂、霜剂、凝胶剂、滴剂、栓剂、喷雾剂、液体制剂和散剂。常规药物载体、水性、粉末或油性基质、增稠剂等可能是必要或者是适宜的。包衣橡皮套、手套等也可能是有用的。
本发明还包括这样的药物组合物，其中含有一种或多种上述式I化合物作为活性成分以及一种或多种可药用载体。在制备本发明组合物时，通常将活性成分与赋型剂相混和，通过赋型剂稀释或者以例如胶囊剂、囊剂、纸剂、或者其它容器形式封闭在上述载体中。当赋型剂作为稀释剂使用时，它可以是固体、半固体、或液体物质，其作为活性成分的溶媒、载体或介质。因此，所述组合物可以为片剂、丸剂、散剂、锭剂、囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂(为固体形式或者呈现在液体介质中)、其中含有例如至多10重量％的活性化合物的软膏剂形式、明胶软胶囊剂和硬胶囊剂、栓剂、灭菌注射溶液剂、以及灭菌封装散剂。
在制备制剂时，可以将活性化合物在与其它成分混合之前进行研磨得到适宜的粒径。如果活性化合物是基本上不溶解的，则可以将其研磨至粒径小于200目。如果活性化合物为基本上水溶性的，则可以将粒径通过研磨进行调节，使得其基本上均匀分布于制剂中，例如为大约40目。
适宜赋型剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨糖醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、海藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆、和甲基纤维素。制剂还可以另外含有润滑剂例如滑石、硬脂酸镁、和矿物油；润湿剂；乳化剂和助悬剂；防腐剂例如甲基和丙基羟基苯甲酸酯；甜味剂；和芳香剂。可以将本发明的组合物配制使得在采用本领域已知的步骤向患者给药后，可以迅速、持续和延迟释出活性成分。
可以将上述组合物配制成单元剂型，其中每个剂型含有大约5至大约1000mg(1g)、更通常是大约100至大约500mg活性成分。术语″单元剂型″是指适合用于人对象和其它哺乳动物的单元剂型的物理离散单元，其中每个单元含有计算产生所需治疗效果的预定用量的活性物质与适宜的药物赋型剂。
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物中含有大约5至大约50mg活性成分。本领域普通技术人员应该理解，这可以具体体现为该化合物或组合物中含有大约5至大约10、大约10至大约15、大约15至大约20、大约20至大约25、大约25至大约30、大约30至大约35、大约35至大约40、大约40至大约45、或者大约45至大约50mg活性成分。
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物中含有大约50至大约500mg活性成分。本领域普通技术人员应该理解，这可以具体体现为该化合物或组合物中含有大约50至大约75、大约75至大约100、大约100至大约125、大约125至大约150、大约150至大约175、大约175至大约200、大约200至大约225、大约225至大约250、大约250至大约275、大约275至大约300、大约300至大约325、大约325至大约350、大约350至大约375、大约375至大约400、大约400至大约425、大约425至大约450、大约450至大约475、或者大约475至大约500mg活性成分。
在某些实施方案中，本发明的化合物或组合物中含有大约500至大约1000mg活性成分。本领域普通技术人员应该理解，这可以具体体现为该化合物或组合物中含有大约500至大约550、大约550至大约600、大约600至大约650、大约650至大约700、大约700至大约750、大约750至大约800、大约800至大约850、大约850至大约900、大约900至大约950、或者大约950至大约1000mg活性成分。
活性化合物在不同剂量范围内都可能是有效的，通常是以药物有效的用量施用。然而应该理解的是，实际施用的化合物用量通常是由医师根据相关条件(包括待治疗的病况、所选择的给药途径、施用的实际化合物、个体患者的年龄、体重、和响应情况、患者症状的严重程度等)加以确定。
为了制备固体组合物(例如片剂)，将主要的活性成分与药物赋型剂混和形成含有本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。在提到所述预制剂组合物为均匀时，通常将活性成分均匀分散在组合物中，使得该组合物可以方便地再分成等效的单元剂型，例如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将上述固体预制剂再分成上述类型的单元剂型，其中含有例如0.1至大约1000mg本发明的活性成分。
本发明的片剂或丸剂可以被包衣或者通过其它方式混和，得到提供延长作用优势的剂型。例如，该片剂或丸剂可以含有内部剂量和外部剂量组分，后者以外膜的形式位于前者表面。这两种组分可以被肠衣层隔开，肠衣层可以抑制在胃中崩解，从而允许内部组分完整地通过十二指肠或者延迟释出。各种材料可以用于上述肠衣层或包衣，这类材料含有多个聚合酸和聚合酸的混合物，例如虫胶、十六醇、和乙酸纤维素。
其中可以合并入本发明化合物和组合物的用于口服给药或注射给药的液体形式包括水性溶液剂、被适当调味的糖浆剂、水性或油性混悬剂、和用食用油(例如棉花籽油、芝麻油、椰子油、或花生油)加香的乳剂以及酏剂和类似的药物溶媒。
吸入或吹入组合物包括在可药用水性或有机溶剂、或其混合物中的溶液剂和混悬剂、以及散剂。该液体或固体组合物中可以含有如上所述的适宜的可药用赋型剂。在某些实施方案中，上述组合物通过口服或鼻呼吸途径给药获得局部或全身性效果。组合物可以采用惰性气体处理使呈雾状。雾状溶液剂可以直接由喷雾装置进行呼吸，其中该喷雾装置可以附加有面罩、或间歇正压呼吸机。溶液剂、混悬剂、或散剂组合物可以通过口服给药或者由以适当方式递送该制剂的装置给药。
施用至患者的化合物或组合物用量可以随待治疗对象、给药目的(例如预防或治疗)、患者状态、给药方式等变化而变化。在治疗性应用中，可以将组合物按照足以治愈或者至少部分制止该疾病症状及其并发症恶化的用量施用至已经罹患疾病的患者。有效剂量取决于待治疗疾病，同时还可以由主治医师结合各种因素加以判断，例如疾病的严重程度、患者年龄、体重和大致情况等。
向患者施用的本发明组合物可以为上述的药物组合物形式。这些组合物可以通过常规的灭菌技术灭菌，或者被无菌过滤。可以将水性溶液剂进行封装或冻干，在给药前该冻干制剂可以与无菌液体载体混和。化合物制剂的pH通常为3-11，更优选为5-9，最优选为7-8。应该理解，使用某些前述赋型剂、载体、或稳定剂可能导致形成可药用盐。
本发明化合物的治疗剂量可以随治疗的特定用途、化合物的给药方式、患者的健康水平、以及处方医师的判断水平变化而变化。本发明化合物在药物组合物中的比例和浓度可以随各种因素变化而变化，包括剂型、化学特性(例如疏水性)、和给药途径。例如，可以将本发明化合物以含有大约0.1至大约10％w/v化合物的水性生理学缓冲溶液剂形式用于非肠道给药。某些典型的剂量范围为大约1μg/kg至大约1g/kg体重每天。在某些实施方案中，剂量范围为大约0.01mg/kg至大约100mg/kg体重每天。上述剂量取决于各种变量，例如疾病或障碍的类型和恶化程度、特定患者的总体健康状况、所选择化合物的相对生物活性、赋型剂配方、以及给药途径。有效剂量可以由来自体外或动物模型测试系统的剂量-响应曲线推断得到。
本发明化合物还可以与一种或多种其它活性成分联合使用，所述其它活性成分可以包括任何一种药剂例如抗体、免疫抑制剂、抗炎剂、化学治疗剂、脂质降低剂、HDL提高剂、胰岛素促分泌剂或致敏剂、用于治疗类风湿性关节炎的药物等。
类风湿性关节炎(RA)治疗方案类风湿性关节炎(RA)患者使用疾病调节剂(甲氨蝶呤、抗疟药、金、青霉胺、柳氮磺吡啶、氨苯砜、来氟米特、或生物制剂)进行治疗，可以获得不同程度的疾病控制效果，包括获得完全缓解。这些临床响应与疾病活动的标准评分有关，该ACR标准具体包括疼痛、技能、触痛关节的数量、肿胀关节的数量、患者整体评价、医师整体评价、炎症的实验室测量(CRP和ESR)、以及关节结构性损伤的放射性评价。目前的疾病调节药物(DMARDs)需要持续给药以维持最佳效果。慢性施用这些药物涉及明显的毒性反应和宿主防御反应。此外，患者通常比较反感特定的治疗，而要求变化的治疗方案。基于上述原因，可以使常规DMARD撤药的有效的新治疗方法将具有重要的临床优势。
对抗-TNF治疗(英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗)、抗-IL-1治疗(激酶)或者其它调节疾病的抗风湿药物(DMARD)包括但不限于甲氨蝶呤、环孢菌素A、氯金化钠、抗疟药、青霉胺或来氟米特具有明显响应的患者(其疾病在临床上获得减轻)，可以使用抑制CCR2表达和/或活性的物质进行治疗，包括核酸(例如反义或siRNA分子)、蛋白质(例如抗-CCR2抗体)、小分子抑制剂(例如本文所公开的化合物以及本领域已知的其它趋化因子受体抑制剂)。
在某些实施方案中，抑制CCR2表达和/或活性的物质是小分子CCR2抑制剂(或拮抗剂)。该CCR2拮抗剂可以按照不超过大约500mg/天的剂量给药，每天1次或每天2次。患者可以放弃目前的治疗或者降低剂量，同时维持使用CCR2拮抗剂的治疗。联合使用CCR2拮抗剂及其当前疗法对患者进行治疗可以持续1至大约2天，然后中止或者降低DMARD剂量和继续使用CCR2拮抗剂进行治疗。
使用CCR2拮抗剂替代传统DMARD具有诸多优势。传统DMARD具有严重的累积剂量限制性副作用，最常见的是对肝有损害以及具有免疫抑制作用。预期CCR2拮抗作用具有提高了的长期安全性，因而没有与传统DMARD相类似的免疫抑制能力。另外，生物制剂的半衰期通常为数天或数周，这是在处理副作用问题时需要考虑的方面。可口服生物利用的CCR2拮抗剂的半衰期预期以小时计算，这使得相对于生物制剂而言，在副作用事件之后长期曝露在药物之下的风险极低。另外，目前的生物制剂(英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、激酶)通常是通过静脉注射或皮下给药，这要求医生进行给药或者患者自己注射。这导致可能出现输注反应或注射部位反应。使用口服的CCR2拮抗剂可以避免这些问题。
糖尿病和胰岛素耐受治疗方案2型糖尿病在西方社会是导致发病率和死亡率的原因之一。在极大部分患者中，该疾病特征在于伴随着肝和外周组织中胰岛素耐受的胰腺β-细胞功能障碍。根据与该疾病相关的主要机理，两类常见的口服疗法可用于治疗2型糖尿病胰岛素促分泌素(磺脲类例如格列苯脲)和胰岛素致敏剂(二甲双胍和噻唑烷二酮类例如罗格列酮)。据显示，同时利用这两种机理的联合治疗可以控制该疾病的代谢缺陷，并且在多数情形中显示出可以缓解外源性胰岛素给药的需要。然而，胰岛素耐受通常是随着时间不断发展的，这导致需要进一步补充胰岛素。此外，被称作代谢综合症的糖尿病前期已经被证实其特征在于葡萄糖耐量降低，特别是与肥胖相关的葡萄糖耐量降低。多数发展成为2型糖尿病的患者最初都是由胰岛素耐受开始，同时当这些患者不能继续维持防止葡萄糖内稳态损失所需的高胰岛素程度时，还会出现高血糖。胰岛素耐受因素的发作是疾病发作的高度前兆，这意味着发展成为2型糖尿病、高血压和冠心病的风险增加。
葡萄糖耐量降低与由胰岛素耐受状态发展成2型糖尿病之间最密切的关系在于存在向心性肥胖。大多数2型糖尿病患者是肥胖的，并且肥胖症自身与胰岛素耐受有关。显然，向心性肥胖是胰岛素耐受发展成为2型糖尿病的主要危险因素，这表明来自内脏脂肪的信号加快了发展成胰岛素耐受和疾病的进展。除了分泌的蛋白质因子之外，肥胖还诱导了细胞炎性应答，其中由骨髓衍生的巨噬细胞聚集在脂肪库中，成为脂肪组织巨噬细胞。脂肪组织巨噬细胞按照肥胖症测量比例聚集在脂肪组织中。组织浸润的巨噬细胞是大部分炎性细胞因子的来源，后者被证实在脂肪细胞中诱导了胰岛素耐受。
脂肪组织按照肥胖症的比例产生MCP-1，这表明其活性通过CCR2发出信号还可能在巨噬细胞在脂肪组织中的聚集方面具有重要作用。目前还不清楚的是，MCP-1/CCR2之间的相互作用是否直接负责向脂肪细胞补充单核细胞，减少向人脂肪组织补充巨噬细胞是否将直接导致促炎性反应分子的生成减少以及促炎性反应分子生成是否直接与胰岛素耐受有关。
显示出胰岛素耐受的糖尿病前期(血糖正常)或糖尿病(血糖过多)患者可以使用抑制CCR2表达和/或活性的物质进行治疗，包括例如核酸(如反义或siRNA分子)、蛋白质(如抗-CCR2抗体)、小分子抑制剂(如本文所公开的化合物以及本领域已知的其它抑制剂)。在某些实施方案中，抑制CCR2表达和/或活性的物质为小分子CCR2抑制剂(或拮抗剂)。所述CCR2拮抗剂可以按照不超过大约500mg/天的剂量口服给药，每天一次或两次。患者可以退出当前的治疗或者减小当前治疗的剂量，并且维持CCR2拮抗剂的治疗。或者，可以利用CCR2拮抗剂治疗对其当前的治疗进行补充，从而提高效力或者防止发展成为进一步的胰岛素依赖性。
使用CCR2拮抗剂对传统药剂进行替代或补充所具有的优势有很多。这类药剂可用于例如预防由糖尿病前期、胰岛素耐受状态发展成为糖尿病状态。这类药剂可以减少或取代对于使用胰岛素致敏剂的需要以及伴随它们的毒性反应。这类药剂还可以用于减少对于外源性胰岛素补充的需要或者延长需要进行外源性胰岛素补充的时间。
动脉粥样硬化治疗方案动脉粥样硬化这种病况其特征在于脂肪物质沉着在动脉壁中。斑块中含有脂肪物质、胆固醇、细胞废物、钙以及组成动脉衬里的其它物质的上述沉着物。斑决可以逐渐长大至足以减少流经动脉的血液。然而，更明显的损伤是出现在当上述斑块变得不稳定并破裂时。破裂后导致形成血液凝块的斑块可以阻断血液流动或者停止，而流动在身体的其它部分。如果凝块阻断了供给心脏的血流的话，则会引起心脏病发作。如果阻断了供给大脑的血流的话，则会引起中风。动脉粥样硬化是一种慢性复杂疾病，通常开始于儿童期，并且一般随着人的年龄增大而进一步恶化。
血液中胆固醇水平升高是冠心病的主要危险因子。由于胆固醇构成了斑块的主要组成，因此斑块形成的进程可以通过降低循环胆固醇或者升高运输胆固醇的高密度脂蛋白(HDL)来进行控制。降低循环胆固醇可以通过例如使用或借助来自食物中的摄取物来抑制其在肝中的合成。通过上述机理作用的这类药物可包括用于降低高胆固醇水平的药物胆汁酸吸收剂、脂蛋白合成抑制剂、胆固醇合成抑制剂和纤维酸(fibricacid)衍生物。升高循环HDL另外还可以通过施用例如普罗布考或者高剂量的烟酸。利用多种机理的治疗据显示可以延缓疾病的进程以及斑块破裂的进程。
动脉粥样硬化通常伴随着细胞炎性应答，由骨髓衍生的巨噬细胞在细胞炎性应答中聚集在顺着血管壁的脂肪纹中，成为泡沫细胞。泡沫细胞是被证实可诱导斑块进展的大多数炎性细胞因子以及能够促进斑块脱稳定的酶的来源。动脉粥样硬化组织还产生出MCP-1，这表明其通过CCR2发出信号而产生的活性在泡沫细胞形式的巨噬细胞在斑块中的聚集方面同样具有重要作用。据证实，CCR2-/-小鼠在脂肪纹中具有明显减少了的巨噬细胞，后者由高脂肪饮食或者脂类代谢中的遗传变异产生。
显示出高循环胆固醇、低HDL、或升高了的CRP或者具有通过成像显示出的血管壁斑块、或者具有任何其它证明存在动脉粥样硬化的证据的患者可以使用抑制CCR2表达和/或活性的物质进行治疗，例如核酸(如反义或siRNA分子)、蛋白质(如抗-CCR2抗体)、小分子抑制剂(如本文所公开的化合物以及本领域已知的其它趋化因子受体抑制剂)。在某些实施方案中，所述抑制CCR2表达和/或活性的物质是小分子CCR2抑制剂(或拮抗剂)，例如本发明的化合物。该CCR2拮抗剂可以按照不超过大约500mg/天的剂量给药，每天1次或每天2次。患者可以放弃目前的治疗或者降低剂量，同时维持使用CCR2拮抗剂的治疗。或者，也可以使用CCR2拮抗剂治疗对其当前的治疗进行补充，从而提高其在例如预防斑块发展、稳定已经形成的斑块或者诱导斑块退化方面的效果。
使用CCR2拮抗剂对传统药剂进行替代或补充所具有的优势有很多。这类药剂可用于例如预防斑块发展至与其可能发生破裂相关的不稳定期。这类药剂可以减少或取代对于使用胆固醇调节药物或HDL升高药物的需要以及它们所伴随的毒性反应，包括但不限于面红、肝损伤和肌肉损伤例如肌病。这类药剂还可以减少为了打开血管壁而要求进行手术的需要或者延长为了打开血管壁而要求进行手术的时间，或者为了限制因潜在的斑块破裂而引起的损伤而要求使用抗凝血剂的时间。
标记化合物和测定方法本发明另一方面涉及荧光染料、自旋标记、重金属或者放射标记的式I化合物，其不仅可用于成像，还可以用于在体外和体内测定中定位和量化组织样本包括人中的趋化因子受体，以及通过抑制对标记化合物的结合而识别出趋化因子受体配体。因此，本发明包括含有上述标记化合物的趋化因子受体测定。
本发明进一步包括同位素标记的式I化合物。“同位素的”或“放射标记的”化合物是指其中一个或多个原子被具有不同于自然界中通常发现的原子质量或质量数(即天然存在的)的原子质量或质量数的原子所替代或取代的本发明化合物。可与本发明化合物掺合的适宜放射性核素包括但不限于2H(也写作D氘)、3H(也写作T氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、33Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I以及131I。掺入本发明放射标记化合物中的放射性核素取决于该放射标记化合物的特定应用。例如，对于体外趋化因子受体标记和竞争测定而言，掺有3H、14C、82Br、125I、131I、35S的化合物通常是最有用的。对于放射成像应用而言，13C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br通常是最有用的。
应该理解的是，“放射标记的”或“标记化合物”是指掺有至少一个放射性核素的化合物。在某些实施方案中，该放射性核素选自3H、14C、125I、35S和82Br。
将放射性同位素合掺入有机化合物中的合成方法适用于本发明的化合物，并且是本领域众所周知的。
本发明的放射标记化合物可用于筛选测定中对化合物进行识别/评价。一般来说，可以评价出新合成或识别的化合物(即测试化合物)降低本发明放射标记化合物对趋化因子受体的结合力的能力。因此，测试化合物和放射标记化合物竞争与趋化因子受体结合的能力与其结合亲和力直接相关。
试剂盒本发明还包括可用于例如治疗或预防与趋化因子受体相关的疾病的试剂盒，所述试剂盒包括一个或多个含有含治疗有效量的式I化合物的药物组合物的容器。如果需要的话，所述试剂盒还可以进一步包括一种或多种各种常规药物试剂盒组分，例如含有一种或多种可药用载体的容器、本领域技术人员所显而易见的其它容器等。试剂盒中还可以包括作为插页或标签的说明书，用于指示施用组分的用量、施用指南和/或混和这些组分的指南。
下面通过具体的实施例对本发明进行更详细的描述。下面的实施例仅仅是出于示例说明的目的而提供的，其并不意味着以任何方式对本发明构成限制。本领域技术人员可以方便地识别出那些可进行变化或调节而得到基本上相同的结果的非关键参数。
具体实施例方式
实施例 实施例14-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-吡啶-2-基环己醇步骤A-1 (1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-羧酸甲酯向(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-羧酸(10.0g，44mmol)的DMF(25mL)溶液中加入碳酸钾(6.33g，45.8mmol)，再加入甲基碘化物(4.0mL，64mmol)。在室温下搅拌过夜后，反应混合物用EtOAc稀释。溶液用水洗涤4次，盐水洗涤1次，干燥(MgSO4)并浓缩。残余物高真空干燥过夜，得到标题化合物(11g，99％)。MS计算值C12H19NO4(M+H)+242；实测值142.1(M-Boc+H)+。1H NMR(CDCl3)δ5.86(m，2H)，4.90(m，1H)，4.80(m，1H)，3.72(s，3H)，3.50(m，1H)，2.51(m，1H)，1.86(m，1H)，1.42(s，9H)。
步骤A-2 (1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-羧酸甲酯在-78℃下，在10分钟内向1.00M六甲基乙硅叠氮化锂的THF(202mL)溶液中加入(1R，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]环戊-2-烯-1-羧酸甲酯(22.10g，91.59mmol)的THF(36.2mL)溶液。上述溶液在-78℃下搅拌30分钟，然后加入一份异丙基碘化物(10.0mL，100mmol)。混合物随后转移至读取温度为-24℃的冰箱中，保持过夜。反应用氯化铵水溶液猝灭，所得到的溶液用乙醚萃取三次。乙醚层用硫酸钠干燥，真空蒸发。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到标题化合物(20.2g)。MS计算值C15H25NO4(M+H)+284；实测值184.2(M-Boc+H)+。
步骤A-3 (1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-羧酸向(1S，4S)-4-(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-羧酸甲酯(18.42g，65mmol)在THF(500mL)、甲醇(500mL)和水(100mL)中的溶液中加入氢氧化锂单水合物(5.00g，119mmol)。混合物加热回流过夜。18小时后，TLC显示存在极低痕量的原料。真空除去有机溶剂后，水层用乙醚(200mL)萃取，除去未反应的原料。水层用浓HCl酸化至pH＝4，同时在冰浴中冷却。所得到的溶液用二氯甲烷萃取3次。萃取液用MgSO4干燥并浓缩得到固体(17g)。将固体溶解于热乙酸乙酯(22mL)中，向溶液中加入己烷(550mL)。溶液缓慢冷却至室温，然后放入读取温度为-22至-24℃的冰箱中。两天后，除去结晶，液体真空蒸发后，得到为白色泡沫状固体的目标产物(9.78g，56％)。MS计算值C14H23NO4(M+H)+270；实测值170.1(M-Boc+H)+。
步骤A-4 (1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷羧酸向(1S，4S)-4-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊-2-烯-1-羧酸(9.78g，36.3mmol)的乙醇(250mL)溶液中加入10％钯-碳(550mg)。混合物在55psi的氢气下振摇过夜，然后通过硅藻土过滤。滤液真空蒸发，得到标题化合物(9.45g，96％)。MS计算值C14H25NO4(M+H)+272；实测值172.1(M-Boc+H)+。
步骤B-1 2-[4-(三氟甲基)苯基]乙烷胺在帕尔烧瓶中，将[4-(三氟甲基)苯基]乙腈(10.0g，54mmol)溶解于2.00M氨水的甲醇(100mL)溶液中。向其中加入阮内镍(大约1g)。混合物在氢气氛下(50psi)振摇20小时，通过硅藻土过滤，然后用二氯甲烷洗涤数次。滤液浓缩后，得到为固体的标题化合物。MS计算值C9H10F3N(M+H)+190；实测值173.1(M+H-NH3)+。
步骤B-2
2，2，2-三氟-N-{2-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}乙酰胺向冷却于冰浴中的2-[4-(三氟甲基)苯基]乙胺(9.7g，44mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(13mL，77mmol)的二氯甲烷(80mL)溶液中通过注射器缓慢加入三氟乙酸酐(9.05mL，64mmol)。在冰浴中搅拌10分钟后，撤去冰浴，继续搅拌30分钟。反应通过加入水猝灭，所得到的溶液用二氯甲烷萃取2次。合并的萃取液用1N HCl和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到粗产物(14.2g)。由EtOAc和己烷结晶，得到为白色针状物的标题化合物(8.5g，68％)。MS计算值C11H9F6NO(M+H)+286；实测值286.0。
步骤B-3 2-(三氟乙酰基)-7-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉将2，2，2-三氟-N-{2-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}乙酰胺(4.00g，14mmol)和多聚甲醛(0.63g)合并在烧瓶中，溶解于乙酸(11mL)中。缓慢加入硫酸(11mL)。混合物由浑浊溶液转至透明，观察到发生放热反应。40分钟后，将烧瓶置于冰浴中。反应用冷水猝灭，所得到的溶液用EtOAc萃取3次。合并的萃取液用水、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到黄色油状物(4.1g，83％)。MS计算值C12H9F6NO(M+H)+298；实测值298.0。
步骤B-4 7-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉将2-(三氟乙酰基)-7-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(4.1g，12mmol)溶解于乙醇(16.0mL)中。加入碳酸钾(4.0g，29mmol)和水(4mL)，混合物回流2小时。冷却后，溶液用水稀释，二氯甲烷萃取4次。合并的萃取液干燥(MgSO4)后，过滤并浓缩。通过高压硅胶色谱法纯化，用梯度为100％A至20％B(A＝1％NH4OH/5％MeOH/EtOAc；B＝1％NH4OH/MeOH)洗脱13分钟，得到标题化合物(1.4g，59％)。MS计算值C10H10F3N(M+H)+202；实测值202.0。
步骤C-1 ((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基氨甲酸叔丁酯向步骤B-4的7-(三氟甲基)-1，2，3，4-四氢异喹啉(1.7g，8.45mmol)、步骤A-4的(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷羧酸(2.75g，10.14mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.70g，5.73mmol)、和N，N-二异丙基乙基胺(7.0mL，40.2mmol)的二氯甲烷(30.0mL)溶液中加入溴代三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐(5.119g，10.98mmol)。在室温下搅拌36小时后，溶液真空浓缩。残余物通过二氧化硅柱色谱法纯化，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到2.1g(55％)所需产物。MS计算值C24H33F3N2O3(M+H)+455；实测值355(M-Boc+H)+。
步骤C-2 (1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺将((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨甲酸叔丁酯(0.80g，1.76mmol)溶解于4M HCl的1，4-二_烷(10mL)溶液中。搅拌2小时后，溶液真空蒸发，得到为HCl盐的所需产物(0.64g，94％)。MS计算值C19H25F3N2O(M+H)+355；实测值355.2。
步骤D-1 8-吡啶-2-基-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇向冷却于-78℃下的2-溴吡啶(14g，88.6mmol)的无水乙醚(300mL)溶液中缓慢加入2.5M正丁基锂(36mL)。加料后，在-78℃下继续搅拌1小时。向其中缓慢加入1，4-环己二酮单乙烯缩酮(15g，96mmol)的无水乙醚(300mL)溶液。加料完毕后，混合物温热至0℃，继续搅拌1小时。反应通过加入氯化铵(4.5g)的水溶液(100mL)猝灭。分离有机相后，水相用二氯甲烷萃取4次。合并的有机相周MgSO4干燥并浓缩。由EtOAc结晶，得到7g所需产物。母液在硅胶上纯化，用10％MeOH/EtOAc洗脱，又得到3g所需产物。MS计算值C13H17NO3(M+H)+236；实测值236.0。
步骤D-2 4-羟基-4-(吡啶-2-基)环己酮将上述产物溶解于THF(30mL)和3N HCl的水(30mL)溶液中。混合物在50℃下搅拌3小时。冷却至室温后，向溶液中搅拌加入NaHCO3，直到不出现鼓泡。有机相分离后，水层用EtOAc萃取3次。合并的有机层用MgSO4干燥并浓缩。残余物用EtOAc研磨，得到5.5g标题化合物。MS计算值(M+H)+192；实测值192.0。
步骤D-3 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-吡啶-2-基环己醇向步骤D-2的4-羟基-4-吡啶-2-基-环己酮(42.3mg，0.221mmol)和步骤C-2的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺(103mg，0.221mmol)的CH2Cl2(8mL)溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(200mg，1.0mmol)。在室温下搅拌过夜后，反应用NaOH水溶液猝灭。溶液用CH2Cl2萃取。有机层真空浓缩。残余物通过HPLC纯化，得到两种非对映异构体。异构体1LCMS计算值C30H38F3N3O2(M+H)+530；实测值530.1。异构体2MS实测值530.1。
实施例24-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-_唑-2-基)环己醇步骤A 4-羟基-4-(1，3-_唑-2-基)环己酮在室温下，向1，3-_唑(2.0mL，30.41mmol)的THF(20mL)溶液中加入1.0M硼烷的THF(30.4mL)溶液。混合物搅拌1小时后，冷却至-78℃。向上述溶液中加入1.6M正丁基锂的己烷(19mL)溶液。在-78℃下搅拌1小时后，加入1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-酮(5.22g，33.45mmol)的THF(10mL)溶液。在-78℃下搅拌5小时后，反应通过加入3M HCl的水(40mL)溶液猝灭。所得到的溶液在室温下搅拌过夜，用碳酸钾中和，EtOAc萃取3次。合并的萃取液用MgSO4干燥并浓缩。通过二氧化硅快速色谱法纯化，用EtOAc洗脱，得到所需产物(3.9g，70％)。LC-MS计算值C9H11NO3(M+H)+182；实测值182.0。
步骤B 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-_唑-2-基)环己醇向实施例1步骤C-2的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺(113.0mg，0.3188mmol)的THF(1mL)溶液中加入4-羟基-4-(1，3-_唑-2-基)环己酮(80.3mg，0.443mmol)，再加入三乙胺(0.5mL，3.6mmol)，最后加入三乙酰氧基硼氢化钠(135mg，0.638mmol)。搅拌过夜后，反应通过加入NaOH溶液猝灭。所得到的溶液用二氯甲烷萃取。萃取液用MgSO4干燥并真空浓缩。残余物通过快速色谱法纯化，用EtOAc/1％NH4OH洗脱，得到两种异构体。异构体1∶73mg。MS计算值C28H36F3N3O3(M+H)+520；实测值520.1。异构体2∶56mg。MS实测值520.1。
实施例34-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-嘧啶-2-基环己醇步骤A 8-嘧啶-2-基-1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-醇在-78℃下，向2-溴嘧啶(0.20g，1.258mmol)的无水二氯甲烷(3.0mL)溶液中逐滴加入1.6M正丁基锂的己烷(0.86mL)溶液。反应混合物在-78℃下搅拌29分钟，逐滴加入1，4-二氧杂-螺[4.5]癸-8-酮(0.196g，1.26mmol)的CH2Cl2(3mL)溶液。反应在-78℃下搅拌50分钟，用NH4Cl水溶液萃取。温热至室温后，混合物用CH2Cl2萃取3次。合并的萃取物用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到0.50g粗产物。通过硅胶柱色谱法纯化，用0-＞50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到0.159g(54％)为浅褐色-黄色固体的所需产物。MS(M+H)+237.2。
步骤B 4-羟基-4-嘧啶-2-基环己酮向来自步骤A的产物(190mmol，44g)的THF(200mL)溶液中加入HCl水溶液(300mmol，100mL)。反应搅拌2天后，用二乙醚萃取。水层随后用NaOH水溶液(50％)中和，得到pH为11，用EtOAc(6×300mL)萃取。有机层合并后，用MgSO4干燥并真空浓缩。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，得到所需酮(18g，49％)。MS(M+H)+193.1。
步骤C 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-嘧啶-2-基环己醇向4-羟基-4-嘧啶-2-基-环己酮(59.8mg，0.31mmol)和实施例步骤C-2的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺(110mg，0.31mmol)的CH2Cl2(10mL)溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(131mg，0.62mmol)。搅拌过夜后，加入更多的三乙酰氧基硼氢化钠，使还原剂的当量达到5当量。继续搅拌5小时后，反应用NaOH水溶液萃取。所得到的溶液用EtOAc萃取3次。合并的萃取液用
MgSO4干燥并浓缩。快速色谱法纯化后，再通过HPLC纯化，得到两种异构体。异构体1和异构体2MS计算值C29H37F3N4O2(M+H)+531；实测值531.1。
实施例44-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-2-基)环己醇步骤A 8-(1，3-噻唑-2-基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇在-78℃下，将1.6M正丁基锂的己烷(8.1mL，12.92mmol)溶液加入至噻唑(1.0g，11.75mmol)的THF(10mL)溶液中，同时在N2下搅拌。在-78℃下搅拌1小时后，向溶液中通过注射器加入1，4-环己二酮单乙烯缩酮(1.84g，11.75mmol)的THF(10mL)溶液，在-78℃下继续搅拌3小时。加入水(5mL)，反应混合物温热至室温，用EtOAc萃取3次。合并的有机层干燥(MgSO4)后，过滤，真空浓缩并色谱处理，得到2.53g(89％)所需化合物。MS(M+H)+＝242.2。
步骤B 4-羟基-4-(1，3-噻唑-2-基)环己酮将8-(1，3-噻唑-2-基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(1.0g，4.14mmol)在20mL THF/3N HCl(1∶1)中的溶液在50℃下搅拌1小时。冷却至室温后，混合物用Na2CO3处理至pH 8，用EtOAc萃取3次。合并的有机层用饱和NaCl水溶液萃取，干燥(MgSO4)并浓缩，得到0.80g(98％)标题化合物。MS(M+H)+＝198.2。
步骤C 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-2-基)环己醇在室温下，向(1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺TFA盐(46.8mg，0.132mmol)和4-羟基-4-(1，3-噻唑-2-基)环己酮(30.4mg，0.154mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙胺(23.6uL，0.169mmol)，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(56mg，0.26mmol)。搅拌过夜后，混合物用二氯甲烷稀释，NaHCO3中和。有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，得到两种异构体。异构体1和异构体2LC-MS计算值C28H36F3N3O2S(M+H)+536；实测值536.2。
实施例54-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-2-基)环己醇步骤A-1 3-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-醇在室温下，向5-(三氟甲基)吡啶-2-醇(10.52g，62mmol)和醋酸钠(5.29g，64mmol)的冰醋酸(38mL)溶液中加入溴(3.36mL，65mmol)。白色浑浊溶液缓慢转变为透明褐色溶液，将其在80℃下加热2.5小时。混合物冷却至室温，然后减压蒸发。残余物用饱和NaHCO3溶液中和至pH＝8。所得到的溶液用EtOAc萃取3次。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并真空蒸发，得到15.1g(99.8％)为白色固体的粗产物(15.1g，98.8％)。LC-MS计算值C6H3BrF3NO(M+H)+241.9；实测值241.9/243.9。
步骤A-2 2-羟基-5-(三氟甲基)烟碱醛在室温下，将3-溴-5-(三氟甲基)吡啶-2-醇(8.20g，31.2mmol)分成小份加入至氢化钠(0.8575g，33.94mmol)的无水THF(76mL)溶液中。加料完毕后，反应混合物冷却至-78℃，用1.7M叔丁基锂的戊烷(40.0mL)溶液处理，后者通过注射器在15分钟内逐滴加入。搅拌5分钟后，缓慢加入无水DMF(8.16mL，105mmol)，同时保持温度低于-50℃。反应混合物随后搅拌过夜，使其温热至室温。所得到的浅褐色混合物通过加入NH4Cl饱和溶液猝灭。通过加入NaHCO3水溶液，调节溶液pH至9-10。所得到的溶液用EtOAc萃取4次。合并的萃取液干燥(MgSO4)后，过滤并浓缩，得到为褐色固体的粗产物(7.33g，＞100％粗收率)。MS计算值C7H4F3NO2(M+H)+192；实测值192.1。
步骤A-3 2-羟基-5-(三氟甲基)烟腈将2-羟基-5-(三氟甲基)吡啶甲醛(3.80g，17.9mmol)(大约90％纯度)、甲酸钠(1.46g，20.8mmol)、盐酸羟胺(1.47g，20.8mmol)在甲酸(36.6mL)中的混合物在室温下搅拌2小时(浑浊褐色溶液)，然后加热回流过夜(先是透明褐色容易，然后又变为浑浊)。冷却至室温后，反应混合物用水猝灭，EtOAc萃取3次。合并的有机层用水洗涤，MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到3.03g(90％)为褐色固体的所需粗产物(大约75％纯度)。MS计算值C7H3F3N2O(M+H)+189；实测值189.0。
步骤A-4 2-氯-5-(三氟甲基)烟腈向磷酰氯(1.28mL，13.6mmol)和喹啉(0.834mL，6.92mmol)的混合物中加入2-羟基-5-(三氟甲基)烟腈(2.93g，11.7mmol)(粗产物，75％纯度)。所得到的混合物加热回流4小时。冷却至100℃后，缓慢加入水(7.0mL)。混合物进一步冷却至室温，小心用饱和NaHCO3中和。所得到的溶液用EtOAc萃取3次，有机层合并后用MgSO4干燥，过滤并真空蒸发。粗产物(2.35g)通过快速色谱法纯化(15∶85 EtOAc/己烷)，得到1.81g(75％)为暗褐色固体的所需化合物(＞85％纯度)。
步骤A-5 [3-氰基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基]丙二酸叔丁基甲基酯在氮气下，通过注射器在15分钟内向氢化钠(0.752g，29.8mmol)的THF(18mL)悬浮液中逐滴加入丙二酸叔丁基甲基酯(3.18mL，17.9mmol)的无水THF(15mL)溶液。反应混合物搅拌30分钟后，缓慢加入2-氯-5-(三氟甲基)烟腈(4.0g，14.5mmol)的THF(30mL)溶液。在室温下搅拌过夜后，反应混合物用NH4Cl水溶液猝灭。真空除去THF，水溶液用EtOAc萃取3次。合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空蒸发。褐色粗产物(7.1g)通过快速色谱法(10∶90 EtOAc/己烷)纯化，得到4.20g(84％)为黄色油状物的所需产物。LC-MS计算值C15H15F3N2O4(M+H)+345；实测值245.0(M-CO2tBu+H+1)+。
步骤A-6 7-氧代-3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-7，6-二氮杂萘-8-羧酸叔丁酯向[3-氰基-5-(三氟甲基)吡啶-2-基]丙二酸叔丁基甲基酯(4.02g，11.7mmol)的乙醇(60mL)溶液中加入阮内镍(0.60g，10mmol)浆状物。混合物置于帕尔装置上，在40psi的氢气下氢化过夜。悬浮液通过硅藻土过滤，滤液真空蒸发后，得到3.68g(99.6％)为黄色油状物的所需产物。LC-MS计算值C14H15F3N2O3(M+H)+317；实测值217.1(M-CO2tBu+H+1)+。
步骤A-7 3-(三氟甲基)-5，8-二氢-1，6-二氮杂萘-7(6H)-酮向7-氧代-3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-1，6-二氮杂萘-8-羧酸叔丁酯(3.60g，11.4mmol)的二氯甲烷(14mL)溶液中加入三氟乙酸(6.75mL)，所得到的混合物在室温下搅拌0.5小时。溶液减压蒸发后，残余物溶解于CH2Cl2中。混合物通过缓慢加入饱和NaHCO3溶液中和，除去有机层。水层用CH2Cl2萃取4次，合并的有机层用MgSO4干燥，过滤并真空蒸发，得到2.45g(100％)为黄色固体的所需产物。LC-MS计算值C9H7F3N2O(M+H)+217；实测值217.0。
步骤A-8
3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-1，6-二氨杂萘向3-(三氟甲基)-5，8-二氢-1，6-二氮杂萘-7(6H)-酮(2.08g，9.62mmol)的THF(14mL)黄色悬浮液中缓慢加入1.0M硼烷的THF(48.5mL)溶液，所得到的透明黄色溶液在室温和N2下搅拌过夜。反应过夜后，检测到两个峰。主峰(＞80％)为硼烷络合物，次峰为所需产物峰(＜15％)。为了使硼烷络合物裂解，将浑浊的反应混合物通过逐滴加入6M HCl(12mL)进行处理。生成大量的泡沫和热。所得到的浑浊浅黄色溶液在室温下搅拌过夜。蒸发除去溶剂后，将黄色粗产物溶解于25mL DMSO中，缓慢用TFA(4mL)处理得到黄褐色透明溶液，其通过制备性-HPLC纯化得到大约2.60g(63％)为二-TFA盐的所需浅黄色粘性产物。LC-MS 203.0(M+H)+。
为了进一步纯化产物，将前面所得到的TFA盐通过用NaOH溶液处理进行中和。向所得到的游离碱(270mg，1.3mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入重碳酸二叔丁酯(580mg，2.7mmol)，再加入二异丙基乙基胺(520mg，4.0mmol)。在室温下搅拌过夜后，溶液用二氯甲烷稀释，饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到Boc-保护产物。产物用4M HCl的1，4-二_烷(10mL)溶液处理。在室温下搅拌2小时后，溶液真空蒸发。残余物用乙醚处理，得到为白色固体的所需产物(159mg)。MS计算值C9H9F3N2(M+H)+203；实测值203.0。
步骤B-1 ((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨甲酸叔丁酯向实施例1步骤A-1的3-(三氟甲基)-5，6，7，8-四氢-1，6-二氮杂萘二盐酸盐(159mg，0.574mmol)、步骤A-4的(1S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-异丙基环戊烷羧酸(0.21g，0.79mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入4-二甲氨基吡啶(38mg，0.32mmol)和二异丙基乙基胺(180mg，1.4mmol)，再加入溴代三(吡咯烷基)_六氟磷酸盐(270mg，0.57mmol)。在室温下搅拌过夜后，溶液用二氯甲烷稀释，饱和NaHCO3、水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到300mg所需产物。MS计算值C23H32F3N3O3(M+H)+456；实测值356.2(M-Boc+H)+。
步骤B-2 (1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氨杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊胺将((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨甲酸叔丁酯(300mg，0.6mmol)溶解于4M HCl的1，4-二_烷(20mL)溶液中。在室温下搅拌2小时后，将溶液浓缩。残余物用乙醚处理，得到250mg黄色固体。MS计算值C18H24F3N3O(M+H)+356；实测值356.1。
步骤C 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氨杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-2-基)环己醇在室温下，向步骤B-2的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊胺(41mg，0.12mmol)、实施例4的4-羟基-4-(1，3-噻唑-2-基)环己酮(46mg，0.23mmol)、和三乙胺(0.064mL，0.46mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(73mg，0.35mmol)。在室温下搅拌过夜后，混合物用二氯甲烷稀释，NaHCO3中和。有机层用水和盐水稀释，Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，用0％-5％三乙胺的乙酸乙酯溶液洗脱，得到两种异构体(15mg和13mg)。MS计算值C27H35F3N4O2S(M+H)+537；实测值537.2。
实施例64-[((1R，35)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(4-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇由4-甲基-1，3-噻唑出发，按照类似于实施例4中描述的方法制备得到标题化合物。MS计算值C29H38F3N3O2S(M+H)+550；实测值550.2。
实施例74-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(4-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇由4-甲基-1，3-噻唑出发，按照类似于实施例5中描述的方法制备得到标题化合物。MS计算值C28H37F3N4O2S(M+H)+551；实测值551.3。
实施例84-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇步骤A 8-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇在-78℃和N2下，将1.6M正丁基锂的己烷(5.70mL，9.12mmol)溶液搅拌加入至8-(1，3-噻唑-2-基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(1.00g，4.14mmol)的THF(10mL)溶液中。在-78℃下搅拌1小时后，在-78℃下通过注射器向溶液中加入甲基碘化物(0.71mL，9.12mmol)。反应混合物缓慢温热至室温，搅拌过夜。加入水和EtOAc。水层用EtOAc萃取3次。合并的有机层用饱和NaCl洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，通过使用20％EtOAc/己烷的快速色谱法处理，得到0.77g(71％)标题化合物。MS(M+H)+＝256.1。
步骤B 4-羟基-4-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己酮将8-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(1.0g，4.14mmol)在20mL THF/3N HCl(1∶1)中的溶液在50℃下搅拌1小时。冷却至室温后，混合物用Na2CO3处理至pH 8，用EtOAc萃取3次。合并的有机层用饱和NaCl溶液洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到0.82g(99％)所需产物。MS(M+H)+＝212.2。
步骤C 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇在室温下，向来自实施例1步骤C-2中的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺TFA盐(40mg，0.1mmol)和4-羟基-4-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己酮(32.6mg，0.15mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙胺(31μL，0.22mmol)，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(56mg，0.26mmol)。搅拌过夜后，混合物用二氯甲烷稀释，NaHCO3中和。有机层用Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过二氧化硅快速色谱法纯化，用5％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到两种异构体(13mg和10mg)。LC-MS计算值C29H38F3N3O2S(M+H)+550；实测值550.2。
实施例94-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-5-基)环己醇步骤A 8-(1，3-噻唑-5-基)-1，4-二氧杂螺[4，5]癸-8-醇在-78℃和N2下，将2-三甲基甲硅烷基-噻唑(2.5g，15.89mmol)的THF(20mL)溶液中搅拌加入至1.6M正丁基锂的己烷(11.9mL，19.07mmol)溶液。在-78℃下搅拌0.5小时后，通过注射器向溶液中加入1，4-环己二酮单亚乙基缩酮(2.48g，15.89mmol)的THF(20mL)溶液，在-78℃下继续搅拌1小时。加入水(5mL)和EtOAc，反应混合物温热至室温后，用EtOAc萃取3次。合并的有机层干燥(MgSO4)后，过滤并由EtOAc结晶，得到3.4g(90％)所需产物。MS(M+H)+＝242.1。
步骤B 4-羟基-4-(1，3-噻唑-5-基)环己酮向8-(1，3-噻唑-5-基)-1，4-二氧杂螺[4.5]癸-8-醇(0.95g，4.14mmol)的THF(20mL)溶液中加入3N HCl(10mL)水溶液。混合物在50℃下搅拌1小时。冷却至室温后，溶液用Na2CO3处理至pH 8，用EtOAc萃取3次。合并的有机层用饱和NaCl溶液洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到0.78g(98％)所需产物。MS(M+H)+＝198.2。
步骤C 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-5-基)环己醇在室温下，向实施例1步骤C-2中的(1R，3S)-3-异丙基-3-([7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺TFA盐(30.0mg，0.0846mmol)和4-羟基-4-(1，3-噻唑-5-基)环己酮(23.4mg，0.119mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液中加入三乙胺(0.0236mL，0.169mmol)，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(42mg，0.20mmol)。搅拌过夜后，混合物用二氯甲烷稀释，饱和NaHCO3中和。有机层用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用5％MeOH/CH2Cl2洗脱，得到两种异构体。两种异构体的LC-MS计算值C28H36F3N3O2S(M+H)+536；实测值536.2。
实施例104-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-5-基)环己醇在室温下，向实施例5步骤B-2中的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊胺(41mg，0.12mmol)、4-羟基-4-(1，3-噻唑-5-基)环己酮(46mg，0.23mmol)和三乙胺(0.064mL，0.46mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(73mg，0.35mmol)。混合物搅拌过夜，用CH2Cl2稀释，饱和NaHCO3中和。有机层用水和盐水洗涤，Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用0％-5％三乙胺的乙酸乙酯溶液洗脱，得到两种异构体。两种异构体的LC-MS计算值C27H35F3N4O2S(M+H)+537；实测值537.1。
实施例114-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己醇步骤A 4-羟基-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己酮在-78℃下，向1，3-噻唑(1g，11.76mmol)的THF(20mL)溶液中加入1.6M正丁基锂溶液(9mL)。在-78℃下搅拌1l时后，加入碘甲烷(1.7g，11.76mmol)。在-78℃下继续搅拌3小时后，加入1.6M正丁基锂(9mL)溶液。在-78℃下再搅拌1小时后，加入1，4-环己二酮单乙烯缩酮(1.8g，11.76mmol)的THF(5mL)溶液。反应继续搅拌3小时，然后通过加入EtOAc和盐水猝灭。有机相分离后，用盐水洗涤，MgSO4干燥并浓缩。通过硅胶快速色谱法纯化，用20％-50％EtOAc/己烷洗脱，得到为油状物的缩酮。将该油状物溶解于THF(5mL)和5％HCl水溶液(10mL)中。在室温下搅拌过夜后，溶液用Na2CO3中和，EtOAc萃取3次。萃取液用MgSO4干燥并浓缩，得到所需产物(0.8g，30％)。MS计算值C10H13NO2S(M+H)+212；实测值212.0。
步骤B 4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己醇在室温下，向来自实施例1步骤C-2中的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊胺TFA盐(30.0mg，0.0846mmol)和4-羟基-4-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己酮(25.1mg，0.119mmol)的二氯甲烷(8mL)溶液中加入三乙胺(0。0236mL，0.169mmol)，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(42mg，0.20mmol)。搅拌过夜后，混合物通过加入饱和NaHCO3猝灭。所得到的溶液用CH2Cl2萃取3次。合并的萃取液用盐水洗涤，Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用5％MeOH/CH2Cl2纯化，得到两种异构体(15和12mg)。对两种异构体的LC-MS计算值C29H38F3N3O2S(M+H)+550；实测值550.2。
实施例124-[((1R，3S)-3-异丙基-3-[[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己醇在室温下，向实施例5步骤B-2中的(1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊胺(41mg，0.12mmol)、4-羟基-4-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己酮(49mg，0.23mmol)和三乙胺(0.064mL，0.46mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中加入三乙酰氧基硼氢化钠(73mg，0.35mmol)。混合物在室温下搅拌过夜，然后通过加入饱和NaHCO3猝灭。所得到的溶液用CH2Cl2萃取3次。合并的萃取液用水和盐水洗涤，Na2SO4干燥并真空蒸发。残余物通过硅胶快速色谱法纯化，用0％-5％三乙胺的乙酸乙酯溶液洗脱，得到两种异构体。对两种异构体的LC-MS计算值C28H37F3N4O2S(M+H)+551；实测值551.3。
实施例ACCR2体外测定本发明新化合物拮抗趋化因子受体(例如CCR2)功能的能力可以通过适宜的筛选(例如高通量测定)测得。例如，可以在细胞外酸化测定、钙通量测定、配体结合测定、磷酸化测定、受体内摄作用测定或者趋化性测定中对药剂进行测试(参见例如Hesselgesser等人，JBiol.Chem.273(25)15687-15692(1998)；WO 00/05265和WO98/02151)。
在适宜的测定中，使用可以被分离或重组衍生化的CCR2蛋白质，其具有哺乳动物CCR2蛋白质的至少一种特性、活性或功能特性。所述特异性特性可以是结合特性(例如结合配体或抑制剂)、信号活动(例如活化哺乳动物G蛋白、诱导细胞溶质游离钙[Ca++]i浓度的迅速和瞬间升高、诱导特异性蛋白质磷酸化)、细胞响应功能(例如刺激趋化性或由白细胞释放的炎性介质)等。
在结合测定实例中，将含有CCR2蛋白质或其变异体的组合物保持在适合结合的条件下。将CCR2受体与待测定的化合物接触，对结合情况进行检测或测量。
在基于细胞的测定实例中，使用由人外周血管分离出来的、且主要表达CCR2蛋白的细胞。或者，使用具有编码CCR2受体的核酸序列的带菌体或表达盒进行稳定或瞬间转染的细胞可预期用作CCR2蛋白的来源。将这些细胞保持在适合表达该受体的条件下，在适合结合的条件下与药剂接触。可以使用标准方法对结合情况进行检测。例如，结合程度可以相对于适宜的对照品进行测定。另外，含有上述受体的细胞级分例如膜级分可以替代完整细胞使用。
对于测定中结合力或络合物形成情况的检测可以直接或间接进行。例如，可以将药剂用适宜的标记(例如荧光标记、标记、同位素标记、酶标记等)标记，然后通过检测该标记对结合力进行测定。特异性和/或竞争性结合可以使用未标记的药剂或配体作为竞争对手，通过竞争性或置换性研究进行评价。
可以将本发明化合物的CCR2拮抗活性表达为在受体结合测定中，实现对特异性结合的50％抑制作用所需要的抑制剂浓度(IC50值)，在上述测定中使用125I-标记的MCP-1作为配体以及由正常人全血通过密度梯度离心制得的外周血单核细胞(PBMC)。优选将特异性结合水平定义为总结合水平(例如过滤器上的总cpm)减去非特异性结合水平。将非特异性结合水平定义为在存在过量未标记竞争对手(例如MCP-1)下仍然检测到的cpm含量。
实施例B结合测定在结合测定中使用人PBMC对本发明化合物进行测试。例如，将200,000-500,000个细胞用0.1-0.2nM125I-标记的MCP-1、在有或没有未标记的竞争对手(10nM MCP-1)或者各种浓度的待测试化合物的情况下培养。125I-标记的MCP-1通过适宜的方法制得或者由商业供应商(Perkin Elmer，Boston MA)购得。结合反应在50-250μL由1M HEPESpH 7.2、和0.1％BSA(牛血清血蛋白)组成的结合缓冲液中、在室温下进行30分钟。通过经由快速过滤收集膜而中断结合反应，所述快速过滤采用预先浸泡在0.3％聚乙烯亚胺或磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的玻璃纤维过滤器(Perkin Elmer)。过滤器用大约600μL含有0.5M NaCl或PBS的结合缓冲液冲洗，然后干燥，通过在γ计数器(Perkin Elmer)上计数测得结合放射活性的含量。
根据上述结合测定草案，本发明化合物具有小于大约3000nM的IC50值。
实施例C趋化性测定在改良的博伊登室(Neuro Probe)中，使用人外周血单核细胞测量本发明化合物在白细胞趋化性测定中拮抗CCR2功能的能力。将500,000个细胞在不含血清的DMEM介质(In Vitrogen)中、在有或没有抑制剂的情况下培养并温热至37℃。趋化室(Neuro Probe)同样也预热。将400μL温热的10nM MCP-1加入至所有孔中的底部室中，除了阴性对照中加入DMEM之外。将8微米膜过滤器(Neuro Probe)置于顶部，关闭隔室盖。然后将细胞加入至隔室盖的空穴中，隔室盖与过滤器膜下方的隔室孔相连。整个隔室在37℃下、5％CO2中培养30分钟。然后抽吸出细胞，打开隔室盖，轻轻除去过滤器。过滤器顶部使用PBS洗涤3次，顶部保持不接触。过滤器风干后，用Wright Geimsastain(Sigma)着色。过滤器通过显微镜计数。将阴性对照孔作为背景，从所有数值中扣掉。通过对照迁移至含有拮抗剂的孔底部隔室中的细胞数量与迁移至MCP-1对照孔的底部隔室中的细胞数量，测得拮抗剂的效力。
根据上述趋化性测定，本发明化合物具有小于大约3000nM的IC50值。
除了本文所描述的内容之外，根据前面的说明，本发明的各种变型对于本领域技术人员而言是显而易见的。这些变型同样落入附录权利要求书的范围之内。在此将本申请中引用的每一篇文献包括专利、专利申请、和出版物的全部内容引入作为参考。
权利要求
1.式I化合物 或其可药用盐或前药，其中虚线表示任选键；X是N、NO或CR3；R1是C1-6烷基、(C0-6烷基)-O-(C1-6烷基)、(C0-6烷基)-S-(C1-6烷基)、(C0-6烷基)-(C3-7环烷基)-(C0-6烷基)、OH、CO2R10、杂环基、CN、NR10R12、NSO2R10、NCOR10、NCO2R10、NCOR10、CR11CO2R10、CR11OCOR10、或者苯基；R2是H、OH、卤素、C1-3烷基、NR10R12、CO2R10、CONR10R12、NR10COR11、OCONR10R12、NR10CONR10R12、杂环基、CN、NR10-SO2-NR10R12、NR10-SO2-R12、SO2-NR10R12、或者氧代；其中所述C1-3烷基任选被1-6个选自F和OH中的取代基取代；R3是H、OH、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NR10R11、NR10CO2R11、NR10CONR10R11、NR10SO2NR10R11、NR10-SO2-R11、杂环基、CN、CONR10R12、CO2R10、NO2、SR10、SOR10、SO2R10、或者SO2-NR10R11；R4是H、C1-6烷基、CF3、OCF3、Cl、F、Br或者苯基；R5是C1-6烷基、C1-6烷氧基、CO-(C1-6烷基)、C1-6硫代烷氧基、吡啶基、F、Cl、Br、C4-6环烷基、C4-6环烷基氧基、苯基、苯氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基氧基、杂环基、CN、或者CO2R10；其中所述C1-6烷基任选被一个或多个OH或F取代；其中所述C1-6烷氧基、CO-(C1-6烷基)、或C1-6硫代烷氧基任选被一个或多个F取代；其中所述吡啶基、苯基或苯氧基任选被一个或多个选自卤素、CF3、C1-4烷基和CO2R10中的取代基取代；其中所述C3-6环烷基或C3-6环烷基氧基任选被一个或多个F取代；R6是H、CF3、C1-6烷基、F、Cl、或者Br；R7是H或者任选被1-3个选自卤素、OH、CO2H、CO2-(C1-6烷基)、或C1-3烷氧基中的取代基取代的C1-6烷基；R8是H、C1-6烷基、F、C1-3烷氧基、C1-3卤代烷氧基、C3-6环烷基、C3-6环烷基氧基、OH、CO2R10、OCOR10；其中所述C1-6烷基任选被一个或多个选自F、C1-3烷氧基、OH或CO2R10中的取代基取代；或者R7和R8一起形成桥连C2-4亚烷基或-(C0-2烷基)-O-(C1-3烷基)-基团，从而形成5-7元环；R9是任选被1-4个选自下述的取代基取代的杂环基C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR1R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16；R10是H、C1-6烷基、苄基、苯基、或者C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基、苄基、苯基、或C3-6环烷基任选被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3中的取代基取代；R11是H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苄基、苯基、或者C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基、苄基、苯基、或C3-6环烷基任选被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3中的取代基取代；R12是H、C1-6烷基、苄基、苯基、或者C3-6环烷基，其中所述C1-6烷基、苄基、苯基、或C3-6环烷基任选被1-3个选自卤素、OH、C1-3烷基、C1-3烷氧基、CO2H、CO2-(C1-6烷基)和CF3中的取代基取代；R13和R14各自独立地是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、芳基、环烷基、芳烷基、或者环烷基烷基；R15和R16各自独立地是H、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、芳基、环烷基、芳烷基、或者环烷基烷基；或者R15和R16和与其相连的N原子一起形成4-6元杂环基。
2.权利要求1的化合物，其中X是N或NO。
3.权利要求1的化合物，其中X是CR3。
4.权利要求1的化合物，其中R1是C1-6烷基。
5.权利要求1的化合物，其中R1是丙-2-基。
6.权利要求1的化合物，其中R2是H、OH、卤素、或C1-3烷基。
7.权利要求1的化合物，其中R2是H。
8.权利要求1的化合物，其中R3是H、OH、卤素或C1-6烷基。
9.权利要求1的化合物，其中R3是H。
10.权利要求1的化合物，其中R4是H。
11.权利要求1的化合物，其中R5是被1-4个F取代的C1-6烷基。
12.权利要求1的化合物，其中R5是CF3。
13.权利要求1的化合物，其中R6是H。
14.权利要求1的化合物，其中R7是H。
15.权利要求1的化合物，其中R8是H。
16.权利要求1的化合物，其中R9是任选被1-4个选自下述的取代基取代的杂芳基C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
17.权利要求16的化合物，其中所述杂芳基是任选被1-4个选自下述的取代基取代的5-或6-元杂芳基C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
18.权利要求16的化合物，其中所述杂芳基是吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基或三嗪基，各自任选被1-4个选自下述的取代基取代C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
19.权利要求16的化合物，其中所述杂芳基是噻吩基、呋喃基、噻唑基、_唑基、或咪唑基，各自任选被1-4个选自下述的取代基取代C1-6烷基、C2-6链烯基、C2-6链炔基、卤素、C1-4卤代烷基、CN、NO2、OR13、SR13、C(O)R14、C(O)OR13、C(O)NR15R16、NR15R16、NR15CONHR16、NR15C(O)R14、NR15C(O)OR13、S(O)R14、S(O)2R14、S(O)NR15R16或者SO2NR15R16。
20.权利要求16的化合物，其中所述杂芳基是噻唑基、_唑基、嘧啶基、或吡啶基，各自任选被1-3个F、Cl、Br、I、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基或者三氟甲基取代。
21.权利要求1的化合物，具有式II
22.权利要求1的化合物，具有式IIIa、IIIb或IIIc
23.权利要求1的化合物，选自下述的化合物4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-吡啶-2-基环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-_唑-2-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-嘧啶-2-基环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-2-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-2-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(4-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(4-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(5-甲基-1，3-噻唑-2-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-5-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(1，3-噻唑-5-基)环己醇；4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[7-(三氟甲基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己醇；以及4-[((1R，3S)-3-异丙基-3-{[3-(三氟甲基)-7，8-二氢-1，6-二氮杂萘-6(5H)-基]羰基}环戊基)氨基]-1-(2-甲基-1，3-噻唑-5-基)环己醇；或者其可药用盐。
24.组合物，所述组合物中含有权利要求1-23中任意一项的化合物和可药用载体。
25.调节趋化因子受体活性的方法，所述方法包括将所述受体与权利要求1-23中任意一项的化合物接触。
26.权利要求25的方法，其中所述受体是CCR2。
27.权利要求25的方法，其中所述调节相当于抑制。
28.治疗患者与趋化因子受体表达或活性有关的疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的权利要求1-23中任意一项的化合物。
29.权利要求28的方法，其中所述疾病是炎性疾病或免疫障碍。
30.权利要求28的方法，其中所述疾病是类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、狼疮、多发性硬化、神经性疼痛、移植排斥、糖尿病、或肥胖。
31.权利要求28的方法，其中所述疾病是癌症。
32.权利要求28的方法，所述方法进一步包括施用抗炎剂。
全文摘要
本发明涉及作为趋化因子受体调节剂的式I化合物，本发明化合物、及其组合物可用于治疗涉及趋化因子受体表达和/或活性的疾病。
文档编号C07D417/12GK1950085SQ200580014999
公开日2007年4月18日 申请日期2005年5月10日 优先权日2004年5月11日
发明者薛楚标, 郑长胜, 曹敢峰, 冯皓, M·夏, R·安南德, J·戈兰恩, B·迈特卡夫 申请人:因赛特公司