毛发的张力和韧性改善剂和毛发用化妆品的制作方法

专利名称：毛发的张力和韧性改善剂和毛发用化妆品的制作方法
技术领域：
本发明涉及改善毛发的张力和韧性的药剂和含有该药剂的毛发用化妆品，较详细地，涉及通过活化毛发和毛囊的细胞，更详细地，涉及通过提高毛发相关基因的表达，从而改善毛发的张力和韧性的药剂以及含有该药剂的毛发用化妆品。

背景技术：
作为有关毛发的烦恼，有称为毛发稀少、毛发脱落的涉及毛根、毛囊的健康状态的烦恼，还有称为硬的、软的、没有张力和韧性、开叉的毛发、卷毛、干枯的涉及毛发的物性的烦恼。另外，即使是涉及毛发物性的烦恼，认为有起因于外在因素的损伤，如由于烫发剂或染发剂处理、紫外光暴露、大气污染物质暴露、梳子摩擦等对毛发的直接损伤所致；以及毛干形成中的内在因素参与的情形。在后一情形的毛发护理中，不仅需要图谋改善毛发的质，还需要使得毛根、毛囊本身的健康状态良好的治疗。因此，虽然统称为毛质的状态不好，其护理方法根据其原因而不同。
毛发自身由覆盖在其表面的毛小皮、其内部的占毛发大部分的毛皮质以及中心部的毛髓质构成。正在清楚毛小皮对毛发的硬感或张力和韧性感有大的贡献(曾我部敦他，J.Soc.Cosmet.Chem.Japan，36卷，3期(2002)，207-216页，“有关毛发物性的研究1-毛发的短径和长径测定以及弯曲应力评价法”)。已知毛小皮由酸性毛角蛋白Ha1、Ha2，碱性角蛋白Hb1、Hb2等纤维蛋白和修饰酶如转谷氨酰胺酶、肽基精氨酸脱亚胺酶，以及颗粒成分毛透明蛋白S100等多种成分构成。但是，这些成分与毛质如毛发的张力或韧性之间的关系还没有充分阐明。如果在生物化学和分子生物学水平充分阐明了左右毛质的机制，则可能提供与现有的毛质改善剂相比发挥更显著效果的改善剂。
作为认为对毛发赋予张力和韧性的现有的毛发用化妆品，有例如特开平11-302129号所记载的配合了具有键合反应性官能基的甲硅烷基的共聚体的毛发处理用组合物，其在毛发上通过加水分解形成硅氧烷键Si-O-Si，由此通过在共聚体分子间桥连而赋予毛发张力和韧性。但是，这些现有的毛发用化妆品是覆盖毛发表面的化妆品，不是浸透入毛发或被毛囊吸收而通过活化毛发和毛囊的细胞来改善毛发的张力和韧性的化妆品。
另外，以氨基乙磺酸为有效成分的细胞赋活剂在特开2002-97116号中，以N-甲基氨基乙磺酸为有效成分的细胞赋活剂及毛发的张力和韧性改善剂在国际公开WO2002/034253号公报中分别记载。虽然作为这些药剂的作用效果，记载有通过活化细胞增殖，控制毛发细胞、延长毛发生长期、活化毛发细胞的增殖、改善毛发的张力和韧性，但是其中的毛发张力和韧性改善效果仍然是通过毛发的物性试验(扭力矩)来评价的。因此，需要基于生物化学和分子生物学水平的活性评价的新的毛发张力和韧性改善剂。
发明的公开 本发明以提供基于生物化学和分子生物学水平的活性评价的新的毛发张力和韧性改善剂为目的。
本发明者在研究毛发的张力和韧性(作为其尺度的硬度，更详细地杨氏模量)与毛发相关基因的表达的相关关系时，发现毛角蛋白基因，特别是毛角蛋白Ha2基因、毛角蛋白Hb2基因和/或角蛋白相关蛋白质KAP5.1～5的各基因表达提高，更优选地毛角蛋白Ha2基因、KAP5.1基因、KAP5.2基因或KAP5.4基因的表达提高，则毛发的杨氏模量变高，即毛发产生张力和韧性感，进行了有关“以毛角蛋白基因为指标的毛质评价方法”的专利申请(特愿2004-164596号)。
本发明者此处新构建了用于评价各种药剂对毛发相关基因表达的效果的测试系统，在使用该测试系统深入研究各种化合物对毛发相关基因表达的效果时，发现特定的2-氨基噻唑衍生物和3-氨基异噁唑衍生物具有提高毛发相关基因表达的效果，从而完成了本发明。
即，在第一个方案中，本发明涉及以选自下述通式(1)所示的2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发张力和韧性改善剂，
(通式(1)中，R1、R2、R3和R4分别独立地代表氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、碳数6～14的芳基、5～14元的杂芳基，n和m代表0或1；但是，当n为1时，m为0，R3为氢原子或甲基；m为1时，n为0，R3为氢原子或甲基)。
本发明还涉及以选自上述通式(1)(但是，R2为氢原子)所示的2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发用化妆品。
本发明还涉及毛发张力和韧性改善方法，其包括将包含选自2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上化合物的毛发用化妆品应用至毛发或头皮。
本发明还涉及毛发用化妆品的制备方法，其特征在于将选自2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物添加至水相或油相，制备毛发用化妆品。
在第二个方案中，本发明涉及以选自下述通式(2)所示的3-氨基异噁唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发用化妆品
(通式(2)中，R1表示氢原子或甲基，R2表示氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、或碳数6～14的芳基，R3表示氢原子或甲基，R4表示氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、或碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、碳数6～14的芳基、碳数2～8的烷基羰基、碳数7～10的芳基羰基；另外，上述芳烷基、芳基、芳基羰基的芳基部分也可分别被碳数1～3个的烷基、碳数1～3个的烷氧基和羟基取代)。
合适地，上述毛发用化妆品为毛发张力和韧性改善剂。
本发明还涉及改善毛发张力和韧性的方法，其包括将包含选自上述通式(2)的3-氨基异噁唑衍生物及其可药用盐的1种以上化合物的毛发用化妆品应用至毛发或头皮。
本发明还涉及毛发用化妆品的制备方法，其特征在于将选自上述通式(2)的3-氨基异噁唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物添加至水相或油相，制备毛发用化妆品。
本发明的作为毛发张力和韧性改善剂以及毛发用化妆品的有效成分的2-氨基噻唑衍生物或3-氨基异噁唑衍生物和它们的可药用盐通过应用至毛发或头皮，能够浸透入毛发或被毛囊吸收，提高细胞内的角蛋白相关蛋白质KAP5的表达，改善毛发的张力和韧性。
附图简述

图1为显示KAP5.1报告质粒的构建和构成概略图。图1-A为显示包含KAP5.1基因和KAP5.2基因的DNA片段的PCR扩增的图，图1-B为显示将扩增的DNA片段向报告质粒载体pGL-3basic的克隆的图。
图2为续图1的KAP5.1报告质粒的构建图，为显示通过亚克隆删除KAP5.1基因翻译区(起始密码子往后)的图。
图3为显示KAP5基因群的表达调节的图。
图4为显示比较人KAP5.1～5.5基因的推定编码蛋白质的氨基酸序列的图。
用于实施发明的最佳方案 本发明涉及通过赋活化毛发和毛囊的细胞，更详细地通过提高毛发相关基因的表达，改善毛发的张力和韧性的药剂和毛发用化妆品，提供了基于生物化学和分子生物学水平的活性评价的新的毛发张力和韧性改善剂以及毛发用化妆品，更详细地提供了基于测试对角蛋白相关蛋白质KAP5基因的表达调节效果的新的毛发张力和韧性改善剂以及毛发用化妆品。
本发明者在已申请的特愿2004-164596号“以毛角蛋白基因为指标的毛质评价方法”中，为了研究毛发的硬度与自毛发提取的各种基因之间的相关性，测定了作为毛发硬度的指标杨氏模量，其测定结果与通过各种基因的RT-PCR测定的表达量之间的关系使用Spearman秩相关系数进行统计学分析(Zar，J.H.J.Amer.Stat.Assoc.67578～580，1970，“Significancetesting of the Spearman rank correlation coefficient”)。结果发现，当毛角蛋白Ha2、KAP5.1、KAP5.2、KAP5.4基因的表达量大时，毛发的杨氏模量在统计学上显著提高。另外，虽然毛角蛋白Hb2基因的表达量大时没有统计学上的显著性，但发现毛发的杨氏模量提高。相反，毛皮质的其它构成蛋白质如毛角蛋白Ha1与毛发的硬度之间无相关性。因此，教导了与毛皮质比较，毛小皮构成蛋白质或相关基因与毛发硬度有关的趋势高。
毛角蛋白Ha2基因(NCBI GenBANK来源“X90761”)为角蛋白基因家族的一个构成成员，编码酸性蛋白质。毛角蛋白Ha2为I型角蛋白，与II型角蛋白异二聚体化而构成毛发和爪等。I型角蛋白位于染色体第17q12-q21区域。
毛角蛋白Hb2基因(NCBI GenBANK来源“Y19207”)为角蛋白基因家族的一个构成成员，编码碱性蛋白质。毛角蛋白Hb2为II型角蛋白，与I型角蛋白异二聚体化而构成毛发和爪等。II型角蛋白位于染色体第12q13区域。
属于人角蛋白相关蛋白质(KAP)5家族的KAP5.1～5基因(序列编号1～5)(人基因组DNA，染色体11克隆RP11-684B2，全序列，登录号AP000867)为仅已知其碱基序列的人EST，还未见有关其功能的报导。尚不明确提高KAP5.1～5基因的表达与毛发硬度之间的关系。不特别地受任何理论的束缚，如由KAP5.2基因编码的推定蛋白质为由富含半胱氨酸(约35.5％)、还富含低分子量氨基酸甘氨酸和丝氨酸(分别为18.8％和24.2％)的186个氨基酸组成的，因此认为不形成α-螺旋等二级结构，可以容易地进入角蛋白纤维之间，另外由多个丝氨酸残基的OH基也形成多个氢键，可能对毛发的机械强度具有大的贡献。其它的KAP5基因也同样地富含半胱氨酸、甘氨酸、丝氨酸，表达产物具有与KAP5.2同样的构造，认为对毛发的机械强度具有大的贡献。下述表1显示了KAP5.1～5基因的推定编码蛋白质的部分氨基酸组成。
表1 人KAP5.x的特性
KAP5.1～5.5基因(序列编号1～5)属于人角蛋白相关蛋白质KAP5家族，为相互间同源性比较高的基因群。由各基因编码的推定蛋白质的氨基酸序列之间的高同源性自图4和下述表2可明确。
表2 人KAP5.x-氨基酸序列的同源性
本发明者对观察到的与毛发硬度(杨氏模量)具相关性的毛角蛋白Ha2、Hb2基因、人角蛋白相关蛋白质KAP5.1、KAP5.2、KAP5.4基因中，特别是关于KAP5.1基因，新构建了用于评价各种药剂对该毛发相关基因的表达的效果的报告基因测试系统。使用该测试系统，深入研究了各种化合物对KAP5.1基因表达的效果。结果发现2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐中具有提高KAP5.1基因的表达的效果。
如前所述，KAP5.1～5.5基因(序列编号1～5)属于人角蛋白相关蛋白质KAP5家族，为相互间同源性比较高的基因群。另外，由图3可见，KAP5.1基因的启动子区的序列与其它的KAP5.2-5.5基因的启动子区的序列相互间非常近似，其调节机制同等的可能性高。因此，认为提高KAP5.1基因表达的药剂也提高其它KAP5基因表达的可能性非常高。
进一步地，由如前所述KAP5.1基因的表达量越大，毛发的杨氏模量在统计学上明显提高可见，提高KAP5.1基因表达的药剂提高毛发的硬度，改善毛发的张力和韧性。
本发明的2-氨基噻唑衍生物为公知的化合物，容易获得。另外，可以自容易获得的2-氨基噻唑等通过公知的方法容易地合成。
已知本发明的2-氨基噻唑衍生物为硝酸化作用抑制剂(特公昭46-9208)、抗菌剂或杀菌剂(WO96/16650)、搔痒治疗剂(特开2002-241308)和细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶cdk5、cdk2、糖原合酶激酶-3的抑制剂(特开2002-338556)的用途，但完全不知道其具有提高毛发相关基因表达的效果以及改善毛发的张力和韧性。另外，虽然也公开了用于脱毛、毛发的薄化和秃头的治疗的包含噻唑衍生物的药物组合物(特开2002-338556)，但对于提高毛发相关基因的表达均无任何提及，另外，在其中氨基噻唑衍生物的取代基R1(对应于本发明中的取代基R2)不包含氢原子这一点上，与本发明的2-氨基噻唑衍生物是不同的。
如果例示本发明的2-氨基噻唑衍生物的具体物质名，可例举2-氨基噻唑、2-氨基-4-甲基噻唑、2-氨基-5-甲基噻唑、2-氨基-4，5-二甲基噻唑、2-乙酰氨基噻唑、2-乙酰氨基-4-甲基噻唑、2-乙酰氨基-5-甲基噻唑、2-乙酰氨基-4，5-二甲基噻唑、2-乙酰氨基-4，5-二苯基噻唑、2-丙酰氨基噻唑、2-丁酰氨基噻唑、2-戊酰氨基噻唑、2-丙酰氨基-4-甲基噻唑、2-丁酰氨基-4-甲基噻唑、2-戊酰氨基-4-甲基噻唑、2-甲基氨基噻唑、2-二甲基氨基噻唑、2-甲磺酰氨基-4，5-二苯基噻唑，2-苯磺酰氨基-4，5-二苯基噻唑等。其中优选2-氨基噻唑、2-乙酰氨基噻唑和2-乙酰氨基-4-甲基噻唑。
虽然已知本发明的3-氨基异噁唑衍生物作为除草剂(特公昭54-44723)的用途，但完全不知道其具有提高毛发相关基因表达的效果以及改善毛发的张力和韧性。
如果例示本发明的3-氨基异噁唑衍生物的具体物质名，可以例举3-氨基异噁唑、3-氨基-4-甲基异噁唑、3-氨基-5-甲基异噁唑、3-氨基-5-乙基异噁唑、3-氨基-5-正丙基异噁唑、3-氨基-5-环丙基异噁唑、3-氨基-5-正丁基异噁唑、3-氨基-5-叔丁基异噁唑、3-氨基-5-正戊基异噁唑、3-氨基-5-异戊基异噁唑、3-氨基-5-正己基异噁唑、3-氨基-5-环己基异噁唑、3-氨基-5-正辛基异噁唑、3-氨基-5-苯基异噁唑、3-氨基-5-(对甲氧基苯基)异噁唑、3-氨基-5-(对-甲氧基苯乙基)异噁唑、3-氨基-4，5-二甲基异噁唑、3-乙酰氨基异噁唑、3-乙酰氨基-4-甲基异噁唑、3-乙酰氨基-5-甲基异噁唑、3-乙酰氨基-5-叔丁基异噁唑、3-(N-乙酰基-N-甲基氨基)-5-甲基异噁唑、3-(N-乙酰基-N-甲基氨基)-5-叔丁基异噁唑、3-乙酰氨基-4，5-二甲基异噁唑、3-丙酰氨基异噁唑、3-丙酰氨基-5-甲基异噁唑、3-丙酰氨基-5-叔丁基异噁唑、3-(N-丙酰基-N-甲基氨基)-5-甲基异噁唑、3-(N-丙酰基-N-甲基氨基)-5-叔丁基异噁唑、3-丁酰氨基-5-甲基异噁唑、3-丁酰氨基-5-叔丁基异噁唑、3-(N-甲基氨基)-5-甲基异噁唑、3-(N，N-二甲基氨基)-5-叔丁基异噁唑等。
“可药用盐”是指保留有与药剂化合物几乎同等的生物活性且无毒性的盐。对于作为这样的盐的例子没有特别的限定，如与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等无机酸一同形成的加成盐，与乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、富马酸、马来酸、抗坏血酸、安息香酸等有机酸一同形成的加成盐。
对于包含本发明的2-氨基噻唑衍生物或3-氨基异噁唑衍生物及它们的可药用盐的毛发张力和韧性改善剂以及毛发用化妆品的剂型无特别的限定，任一用于改善毛发的张力和韧性的通常使用的形式均可。可例举如液状、乳液状、乳化膏状、膏状、凝胶状、蜡状、雾状、泡状、气溶胶等。本发明的毛发张力和韧性改善剂以及毛发用化妆品可作为如发液、护发素(hair tonic)、发膏、摩丝、修护素(treatment)、育毛剂、香波、染发剂、膏、乳液、面膜等制品应用。
本发明的2-氨基噻唑衍生物或3-氨基异噁唑衍生物及它们的可药用盐的配合量取决于毛发化妆品的剂型，但通常为毛发化妆品总量的0.001～20质量％，优选地为0.01～5质量％。
本发明的毛发张力和韧性改善剂以及毛发化妆品可根据需要，在无损于本发明效果的范围内配合化妆品、准药品、药品的通常配合成分，根据常规方法制备。通常配合成分为如粉末成分、液体油脂、固体油脂、蜡、烃油、高级脂肪酸、高级醇、酯油、硅油、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、非离子型表面活性剂、保湿剂、水溶性高分子、增粘剂、皮膜剂、紫外线吸收剂、金属离子螯合剂、低级醇、多元醇、糖、氨基酸、有机胺、高分子乳剂、pH调节剂、皮肤营养剂、维生素、抗氧化剂、抗氧化助剂、香料、水等。
具体地，可配合的成分的例子如下。毛发张力和韧性改善剂以及毛发化妆品根据需要配合下述成分的一种或二种以上，根据目的剂型由常规方法制备。
聚乙烯粉末、聚甲基丙烯酸甲酯粉末、耐纶粉末等粉末类。二氧化钛、氧化锌、合成云母、滑石、高岭土、丝云母、氮化硼等无机颜料。红色226号、红色228号、蓝色404号等有机颜料。山茶油、夏威夷果仁油、橄榄油、蓖麻子油等油脂。霍霍巴油、蜂蜡、小炷树蜡、巴西棕榈蜡、羊毛脂等蜡。流动石蜡、角鲨烷、石蜡、地蜡、凡士林、微晶蜡等烃油。月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸等高级脂肪酸。鲸蜡醇、十八烷醇、异十八烷醇、辛基十二醇等高级醇。肉豆蔻酸异丙酯、苹果酸二异硬脂醇酯等酯油。聚甲基硅氧烷等硅油。高级脂肪酸皂、高级烷基硫酸酯盐、N-酰基肌氨酸盐、POE-烷基醚硫酸盐等阴离子表面活性剂。氯化烷基三甲基铵、氯化二烷基二甲基铵、苯扎氯铵等阳离子表面活性剂。烷基二甲基氨基乙酸甜菜碱、烷基酰胺丙基二甲基氨基乙酸甜菜碱等两性表面活性剂。聚氧乙烯型、多元醇酯型、环氧乙烷环氧丙烷嵌段共聚体等非离子型表面活性剂。聚乙二醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、山梨醇、透明质酸钠、吡咯烷酮羧酸钠等保湿剂。榅桲子、黄原酸胶、羧甲基纤维素、羧乙烯基聚合物等水溶性高分子。聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、硝基纤维素、高分子聚硅氧烷等皮膜剂。PABA类、肉桂酸类、水杨酸类、二苯甲酮类、苯并三唑类、二苯甲酰甲烷类等紫外线吸收剂。乙二胺四乙酸(EDTA)的钠盐等金属离子螯合剂。4，5-二噁啉代哒嗪酮等光稳定化剂。乙醇、丙醇、异丙醇、异丁醇、叔丁醇等低级醇。1，3-丁二醇、木糖醇、山梨醇、二甘醇、聚甘油等多元醇。三碳糖、四碳糖、五碳糖、六碳糖、脱氧糖、氨基糖、糖醛酸等单糖。海藻糖等寡糖。纤维素、硫酸软骨素等多糖。甘氨酸、丝氨酸、赖氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、谷氨酸、脯氨酸等氨基酸和其衍生物。单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺等有机胺。乳酸-乳酸钠、柠檬酸-柠檬酸钠等pH调节剂。维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素C、维生素E、生物素、烟酰胺等维生素和其衍生物。二丁基羟基甲苯、丁基羟基苯甲醚、没食子酸酯、亚牛磺酸、硫代牛磺酸等抗氧化剂。对羟基苯甲酸酯类、苯氧基乙醇等防腐剂。多种液化石油气(LPG)、氮气、二氧化碳气等喷射剂。甘草酸衍生物、甘草亭酸衍生物、日柏醇、氧化锌等消炎剂。凝血酸等蛋白酶抑制剂。熊果苷、抗坏血酸糖苷、4-甲氧基水杨酸盐、鞣花酸、苔黑酚等美白剂。视黄醇、α-羟酸等抗皱剂。蜂王胶、感光素、胆固醇衍生物等赋活剂。当药提取物、γ-谷维素、风箱树苷、维生素E和其衍生物、烟酸苄酯、腺苷、米诺地尔等血行促进剂。辣椒碱、辣椒酊、姜酊、斑蝥酊、壬酸香草酰胺等局部刺激剂。雌二醇、乙炔雌二醇等抗雄激素作用剂。泛酸和其衍生物。尿囊素、感光素301等毛囊赋活剂。水杨酸、硫黄、间苯二酚、硫化硒等角质剥离·溶解剂。维生素B6和其衍生物等抗脂溢剂。盐酸苯海拉明、马来酸氯苯那敏、樟脑、薄荷醇等镇痒剂。黄檗、黄连、紫草根、芍药、桦树、鼠尾草、枇杷、胡萝卜、芦荟、锦葵、鸢尾属植物、葡萄、薏苡仁、丝瓜、百合、番红花、川芎、生姜、小连翘、芒柄花、蒜、辣椒、陈皮、当归、海藻等各种提取物。
以下，通过举出具体例，对本发明进一步具体地说明。另外，本发明不受其限定。
实施例 例1 KAP5.1报告质粒的构建 对于认为与毛发的硬度(杨氏模量)有相关性的KAP5.1，通过PCR法扩增转录调节区后，进行报告质粒的构建。
A.DNA片段的PCR扩增 使用在5’末端添加了限制性酶NotI和MluI的识别位点的NM-F1引物(序列编号6)和R2引物(序列编号7)，以市售的人基因组DNA(获自Promega)为模板，通过PCR法扩增了含有KAP5.1基因和KAP5.2基因的约15kb DNA片段(图1-A)。
另外，PCR反应条件如下表所示。
表3 94℃2分钟

68℃8分钟 NM-F1引物(序列编号6)和R2引物(序列编号7)如下表所示。另外，表中所示编号表示人基因组DNA，染色体11克隆RP11-684B2，全长序列，登录号AP000867.5的序列编号的位置。
表4 序列6 TTTGCGGCCGC

TTTCAGTAATGTGCCCCTCTTATGCT NotI位点

KAP5.1基因5’上游区的特异序列 51039 TTTCAGTAATGTGCCCCTCTTATGCT 51064 序列7 66762 AGGTTGAAGTGATGAGGT CAGGAAAG 66737 KAP5.2基因3’下游区的特异序列 B.DNA片段向载体的克隆 经扩增的DNA片段用限制性酶MluI和NheI双重消化，通过琼脂糖凝胶电泳分离后，回收约4.9kb的DNA片段。将该DNA片段克隆至具有编码萤火虫萤光素酶(firefly luciferase)的基因的报告载体pGL-3basic(获自Promega)的MluI和NheI位点之间(图1-B)。通过亚克隆[步骤1SacI/NcoI片段(154bp，图2)亚克隆入pGL-3basic。步骤2向得到的质粒中插入SacI片段(约4.0kbp，图2)]，构建了含有KAP5.1的5’上游区(序列编号8)的报告质粒pGL-3-KAP5.1(图2)。
例2 KAP5.1报告基因测试法 将永生化外毛根鞘细胞(IORS)(根据特开2000-89获得)于75cm2瓶中播种80万个细胞，37℃、5％CO2的条件下培养6天。培养基使用角质形成细胞-SFM培养基(Gibco)。
第一天导入质粒DNA(一过性)。根据Effectene转染试剂(QIAGEN)的操作手册，用上述构建的报告质粒pGL3-KAP5.1(萤火虫萤光素酶)和市售的内部标准质粒pRL-TK(海肾(renilla)萤光素酶)双转化培养的IORS细胞。
第二天将转化的细胞以10～16万个细胞/孔播种至24孔的多孔板，于37℃、5％CO2的条件下培养一晚。
第三天将各孔的培养基换为溶解了各种药剂的基础培养基，于37℃、5％CO2的条件下培养一晚。
第四天测试法。使用双萤光素酶报告基因测试系统(Dual-Luciferase Reporter Assay System)(Promega)，根据制造者的操作手册，测定各孔的萤光素酶活性。发光计使用AutoLumat LB953(BERTHOLD)。
作为阴性对照，除了不含有药剂外，进行相同条件的测试(K-SFM(-))。测试结果示于表5。提高基因表达的效果以提高率(与以阴性对照为100时的比)表示。
表5 如表5所示，观察到本发明的2-氨基噻唑衍生物或3-氨基异噁唑衍生物提高KAP5.1基因表达的效果。
在本实施例中虽然仅显示了对KAP5.1的测试结果，但如前所述，由于KAP5.1基因启动子区的序列与其它的KAP5.2-5.5基因启动子区的序列相互间非常相似(图3)，其调控机制同等的可能性高，所以认为提高KAP5.1表达的药剂也提高其它的KAP5基因的表达，是改善张力和韧性的药剂。
例3 毛发用化妆品的制备 本发明的毛发用化妆品的配方例如下所示。另外，配合量为质量％。蜡的硬度用(株)アイテクノエンジニアリング制カ一ドメ一タ一·マツクスME-415测定(径5.6mm；速度7秒/英寸；荷重200g；温度37℃)。粘度用芝浦システム株式会社制单一元筒型旋转粘度计1287于温度30℃测定。另外，凝胶、修护素等高粘度物质使用VS-H1型(转头6号/10rpm)，喷雾液、发液、摩丝、护发素、育毛剂等低粘度物质使用VS-A1型(转头1号/60rpm)。
例3.1蜡 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的蜡。乳化蜡状，硬度20。该蜡使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.2喷雾液 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的喷雾液。雾状(气溶胶)，粘度5。该喷雾液使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.3凝胶 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的凝胶。透明固形状(凝胶)，粘度30000。该凝胶使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.4发液 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的发液。透明固形状，粘度8。该发液使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.5修护素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的修护素。乳化膏状，粘度25000。该修护素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.6摩丝 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的摩丝。原液/喷射剂90/10。泡状(气溶胶)，粘度5。该摩丝使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
原液 喷射剂 LPG 例3.7护发素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的护发素。透明液状，粘度7。该护发素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.8护发素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的护发素。透明液状，粘度7。该护发素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.9育毛剂 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的育毛剂。透明液状，粘度7。该育毛剂使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.10育毛剂 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的育毛剂。透明液状，粘度7。该育毛剂使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.11洗发液 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的洗发液。透明液状，粘度3000。该洗头液使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.12蜡 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的蜡。乳化蜡状，硬度20。该蜡使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.13喷雾液 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的喷雾液。雾状(气溶胶)，粘度5。该喷雾液使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.14凝胶 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的凝胶。透明固形状(凝胶)，粘度30000。该凝胶使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.15发液 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的发液。透明固形状，粘度8。该发液使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.16修护素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的修护素。乳化膏状，粘度25000。该修护素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.17摩丝 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的摩丝。原液/喷射剂90/10。泡状(气溶胶)，粘度5。该摩丝使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
原液 喷射剂 LPG 例3.18护发素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的护发素。透明液状，粘度7。该护发素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.19护发素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的护发素。透明液状，粘度7。该护发素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.20护发素 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的护发素。透明液状，粘度7。该护发素使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.21育毛剂 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的育毛剂。透明液状，粘度7。该育毛剂使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.22育毛剂 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的育毛剂。透明液状，粘度7。该育毛剂使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.23育毛剂 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的育毛剂。透明液状，粘度7。该育毛剂使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
例3.24洗发液 按照以下配方，根据常规方法制备含有本发明药剂的洗发液。透明液状，粘度3000。该洗头液使用感也好，观察到张力、韧性感提高。
产业上的可利用性 本发明的毛发张力和韧性改善剂以及毛发用化妆品为通过使用至毛发或头皮，能浸透入毛发或被毛囊吸收，从而改善毛发张力和韧性的物质，作为美容方法是有用的。
序列表
<110>株式会社资生堂
<120>毛发的张力和韧性改善剂和毛发用化妆品
<130>S745
<150>JP2005-220504
<151>2005-07-29
<150>JP2005-247571
<151>2005-08-29
<160>8
<210>1
<211>498
<212>DNA
<213>人(Homo Sapiens)
<220>
<222>(1)...(498)
<220>
<223>KAP5.1
<300>
<308>AP000867
<400>1
atgggctgct gtggctgttc cgaaggctgt ggctccggct gtgggggctg tggctccggc
tgtgggggct gtggctctgg ctgtggggga tgtggctcca gctgctgtgt gcccgtctgc
tgctgcaagc ccgtgtgctg ctgtgtgcca gcctgttcct gctccagctg tggctcctgt
gggggctcca agggaggctg tggctcctgt gggggctcca aggggggctg tggctcttgt
gggggttcta aggggggctg tggttcttgt ggctgctccc agtgcagctg ctataagccc
tgctgctgct cctcaggctg tgggtcatcc tgctgccagt ccagctgctg taagccctgc
tgctgccagt ccagctgctg taagccctgc tgctgttcct caggctgtgg gtcatcctgc
tgccagtcca gttgctgcaa tccctgctgc tcccagtcta gctgctgtgt ccccgtgtgc
tgccagtgta agatctga
<210>2
<211>564
<212>DNA
<213>人
<220>
<222>(1)...(564)
<220>
<223>KAP5.2
<300>
<308>AP000867
<400>2
atgggctgct gtggctgctc tggaggctgt ggctccggct gtgggggctg cggctctggc
tgtgggggat gtggctctag ctgctgtgtg cccatctgct gctgcaagcc cgtgtgctgc
tgtgtgccag cctgttcctg ctccagctgt ggctcctgtg ggggctccaa ggggggccgt
ggctcctgtg ggggctccaa gggggactgt ggctcctgtg ggggctccaa gggaggctgt
ggttcttgtg gctgctccca gtgcagctgc tataagccct gctgttgctc ctcaggctgt
gggtcatcct gctgccagtc cagctgctgc aaaccctgct gttcccagtc cagctgttgt
aagccctgca gctgctcttc aggctgtggg tcatcctgct gccagtccag ctgctgcaag
ccctgctgtt cccagtccag ctgctgtaag ccctgctgct gctcttcagg ctgtgggtca
tcctgctgcc agtccagctg ctgcaagccc tgctgttccc agtccagctg ctgtgtccca
atttgctgcc agtgcaagat ctga
<210>3
<211>510
<212>DNA
<213>人
<220>
<222>(1)...(510)
<220>
<223>KAP5.3
<300>
<308>AP000867
<400>3
atgggctgct gtggctgctc cggaggctgt ggctccagct gtggaggctg tgactccagc
tgtgggagct gtggctctgg ctgcaggggc tgtggcccca gctgctgtgc acccgtctac
tgctgcaagc ccgtgtgctg ctgtgttcca gcctgttcct gctctagctg tggcaagcgg
ggctgtggct cctgtggggg ctccaaggga ggctgtggtt cttgtggctg ctcccagtgc
agttgctgca agccctgctg ttgctcttca ggctgtgggt catcctgctg ccagtgcagc
tgctgcaagc cctactgctc ccagtgcagc tgctgtaagc cctgttgctc ctcctcgggt
cgtgggtcat cctgctgcca atccagctgc tgcaagccct gctgctcatc ctcaggctgt
gggtcatcct gctgccagtc cagctgctgc aagccctgct gctcccagtc cagatgctgt
gtccctgtgt gctaccagtg caagatctga
<210>4
<211>609
<212>DNA
<213>人
<220>
<222>(1)...(609)
<220>
<223>KAP5.4
<300>
<308>AP000867
<400>4
atgggctgct gtggctgctc cggaggctgt ggctccggct gtgggggttg tggctccggc
tgtgggggct gtggctccgg ctgtgggggc tatggctctg gctgtggggg ctgtggctcc
agctgctgtg tgcccgtctg ctgctgcaag cccgtgtgct gctgtgtgcc agcctgttcc
tgctccagct gtggctcctg tgggggctcc aagggggact gtggctcttg tgggggctcc
aaagggggct gtggttcctg tgggggctcc aaggggggct gtggctcctg tgggggctcc
aaggggggct gtggttcttg tgggggctcc aaggggggct gtggctcctg tgggggctcc
aaaggtggct gtggttcctg tgggggctcc aaggggggct gtggttcttg tggctgctcc
cagtgcaatt gctgtaagcc ctgctgctgc tcctcaggct gtggatcctg ctgccagtcc
agctgctgca atccctgctg ctgccagtcc agctgctgtg tccccgtgtg ctgccagtct
agctgctgca agccctgctg ctgtcagtcc agctgctgtg tccccgtgtg ctgccagtgt
aagatctga
<210>5
<211>471
<212>DNA
<213>人
<220>
<222>(1)...(471)
<220>
<223>KAP5.5
<300>
<308>AP000867
<400>5
atgggctgct gtggctgttc tggaggctgt ggctctggct gtgggggctg tggctccggc
agtgggggct gtggctctgg ctgtgggggc tgtggctcca gctgctgtgt gcccatttgc
tgctgcaagc ctgtgtgctg ctgtgtgcca gcctgttcct gctccagctg tggctcctgt
gggggctcca aagggggctg tggctcttgt gggagctcca agggtgggtg tggttcttgt
ggctgctccc agtccaactg ctgtaagccc tgctgctcct cctcaggctg tgggtcattc
tgctgccagt ccagctgctc caaaccctgc tgctgccaat ccagctgctg ccagtccagc
tgctgcaagc cctgctgctg ccaatccagc tgctgccagt ctagctgctt caagccctgc
tgctgccagt ccagctgctg tgtccccgtg tgctgccagt gtaagatctg a
<210>6
<211>43
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>NM-F1
<400>6
tttgcggccg cacgcgtttt cagtaatgtg cccctcttat gct
<210>7
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>R2
<400>7
aggttgaagt gatgaggtca ggaaag
<210>8
<211>4159
<212>DNA
<213>人
<220>
<222>(1)...(4159)
<220>
<223>KAP5.1
<300>
<308>AP000867.5
<400>8
tttcagtaat gtgcccctct tatgctctcc tcagggttta gcatgcatcc cttaaacaaa
gaaagtagcc tcatataagc aatggttttg tgactagagt gcctcagtcc attattgctg
ctataagata ataattgacc tgggtaattg ataaagaaca gaaatgtact ttctcagagt
cctgaaggct gggaagtcca agatcaaggt gctgatatct ggtgtgggcc ttcttactgt
gtcttcacat attggaaggc agaagggcaa gagagcatga atatgttgtc ctcacatggc
agaagaacag aaaggggtga atgccctctc tcaagtcctt cttggagcag cactaattca
ttccaagtac cttttgttag gccccacctc ccaacactct tgcattgggg atgaagtttc
taatacatga attttggggg acacatgcag accatggcat aaaggaacct ctctccccac
atggagtaca actgagcagg gaacccagct gagcagctga agtaagcagc ctaagaggag
tgaacactct gcctggggaa gagagaaaac aacagcagag agacttgtga gattttcaga
aataattgag taggggaaaa gattccccac aaacaacaag atgaggatag attattctta
tttggatagg aaaggaaagg atattgtctg ggtgcagtgg ctcacacctg caatcccagc
actttgggag gccaaggtag gaggatcact ggaggccagg agtttgagac cagccagagc
aacatggcaa ggccccatct ctacaaaaag tttaaaagtt agctgggtat ggtgatacat
gcctatattc ccagctacct aggaggccaa ggcgggaaga ttccttaagc ccagaagttt
gaaggtgcag taagctgtgg tcacgtcact gcaatccagc ccaggtgaca gaggaagact
tcatctaaaa aaaaaaaagt gatccccagt aatatagttt gcatgcttcc tccaaatctt
atgttggtgg ggcctgctgg gaggtgtttg gatcatgggt gtagattttt catgaatggt
ttagcaccat ctccttggtg atgaataagt tcgagcaaga tctggttgtt taaaaatatg
tggcactgac caggcatggt ggctcatgca tgtcatctca acactttggg aggctgaggt
gggcagatca cctgaggtca ggagttcgag accagcctga ccaacaggga gaaaccctgt
ctctactaaa aatacaaaat tagccaggtg tggtggtgca tgcctgtact cccagctatt
cgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa cctgggaagc ggaggttgcg gtgagccgag
atcatgccat tgtactccag cctgagtaac aagagcaaaa ctccatctca aaaaaaaaat
gtgtggcctc tgtccctcca ccagctctct ctttctcagc tgtcaccatg tggcatgcct
gctcctgctt tgccttctac catgaataaa agctccctga gggcctcacc agaagctgag
cagatgtcgg tgccatgctt gtacaactag cagaaccagg agccaattaa acctttttta
tttataaatt acccagcctc agatatttct ttatggcaac acaaaaaata cagaaaactg
taccaggaat ggtatgttgc tataaagtca cctgaaaatg tggaggtgac tttggaactg
ggtaatggcc agagattgga agatttttgg agggctcaga agaagacaga aagatgagga
aaaggtggga actcctttga gactggttaa atggttgtgt ccaaaataat taaagtgata
agaacaatga agtccagcct gatgaggtct cagatggaaa tgaggaactt actgaaaact
aaaacaaaga tcacttgtgt tacaccttgg cagagagctt gaccatattg tgcttcatgc
cctagggggc tctgaaaatt tctacttagg agtgatgact taggatatct agtggaagaa
atttctaagc agcaaacatt caagctgtgg cctgactgaa tctaacatcg tattctcaca
tgcaagagca cataaatgaa ttaaagttgg aatttatatt taaaagggaa tcaaagtgta
aaagtttgga aactttgcag catggccatg tggcagagaa tgaaaaagca ttatcaggag
aggaatccaa gcaggctata gagcaaccac ctgctagaga tattagcatg actcaaaaaa
caaacaaaaa aacccaagtg ctaatagcca acacaattgg aaaagacttc aaatgcattt
caaaagtgtt tgagacagcc cctctcatca ctgacctaga ggtctaggag gacaccatgg
tttcaggggc tcaccccagg ccctcactgc cctgcatagc cttggagcac tgctccccac
acataggcta ctccagctcc agcctcagct caaaagaccc caaatgtaac tctggcttca
gagggtgcaa gccataagcc ttggtagctc ccatgtggtg ttaagcctgt aggtgcgtag
aatacaagag tgaaggaggc ttgggatcct ctacctagat tgcagaggat ttatgagaaa
gcctgggcac tcaggcagaa gcctgctgca ggggcagagc ccgcacagag gatatatact
agggcagtgt agaggggaaa tgtggagtag gaggcccaca cagagtcccc actggggcat
tgcttaattg agctgtgggg aggaggacac catcctccag gccccagaat ggtagagcca
ctggcagctt acatcttgag catggagaag ctgcaggcac acaactccaa cccatgagag
cagctgcagg gtgcgaacct tgcaaagcca caagggtgga gttccccaag gccttaggag
cccacccctc actccagtgt accctggatg tgggactggg agtccaagga cattattttg
gagctttaag atttaatggc tgccctgctg gatttcagac atgcatgggg tctgtagccc
cttcctttgg gctgatttct cccttttgga atgggaatgt ttacccaatg cctccaccct
catgtatctt caaagtaaat aatgtgtttt gattttcaca agttcattgg tggaagggac
ttggacttgg gactttggac ttgatgttgg aatgagtcaa gacattgaga ggactgttgg
gaagagatga ttctattctg caatgtaagg acatgagatt tgaggggtca aggggataat
gatacagttg ggatgtcccc tccaaatctc ttgtcgaaat gtaatcccca gtgttgaagg
aggggcctgc aaggaggtgt ttaggtcatg ggggcggatc cctcatgact ggcttagcgc
catctccttg gtgatgagtg tgttcactca gatctggttg ttcgcaagtg tgtggcccct
cctcacccct tgctcccact ctcacgatgt ggtgagcctg ctcctgcttc accttccacc
atgaggaaaa gctccctgag ggcctgccca gaagctgagc agaggtgggt gccatgcttg
tgcagcctgc agaaccatga gccattctaa cctttccttt ataaattacc cagcttcaag
tatttcttta gagcaatgca aaactgagaa tggcatgagt aaaatataaa gaccatggat
aattttgaaa tctaaaaatg tgaaattaat attcctgggg gagtcaacac aggaaagatg
agagcacgtg ggcaaaggct gttgcccatt ggtcacatgt ggtcagcaga gagcaggtga
ccagcaccct ggagctttgc gggaagcacc agacagcctg gagctgaggt ttcaattgta
ggggccaaaa caaataggga aaaagacaaa tttagtaaac aaagaaagta gatgctcaac
tgagccagga ggaagtcact agcaaagagg aaaaaaaata gagctctgga aaaatagcgt
aaacagtcac aaggaagcga ccctgtattg tgcctgacct ctggacaggt atataaagag
cccgggctca gggggctcca cacctgcacc tccctctcac ctgctcctct acctgctcca
ccctcaatcc accagaacc
权利要求
1.以选自下述通式(1)所示的2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发张力和韧性改善剂，
(通式(1)中，R1、R2、R3和R4分别独立地代表氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、碳数6～14的芳基、5～14元的杂芳基，n和m代表0或1；但是，当n为1时，m为0，R3为氢原子或甲基；m为1时，n为0，R3为氢原子或甲基)。
2.权利要求1所述的毛发张力和韧性改善剂，其中通式(I)中的R2为氢原子。
3.权利要求1或2所述的毛发张力和韧性改善剂，其中2-氨基噻唑衍生物选自2-氨基噻唑、2-乙酰氨基噻唑和2-乙酰氨基-4-甲基噻唑。
4.以选自下述通式(1)所示的2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发用化妆品，
(通式(1)中，R1、R3和R4分别独立地代表氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、碳数6～14的芳基、5～14元的杂芳基，R2代表氢原子，n和m代表0或1；但是，当n为1时，m为0，R3为氢原子或甲基；m为1时，n为0，R3为氢原子或甲基)。
5.权利要求4所述的毛发用化妆品，其中2-氨基噻唑衍生物选自2-氨基噻唑、2-乙酰氨基噻唑和2-乙酰氨基-4-甲基噻唑。
6.改善毛发张力和韧性的方法，其包括将权利要求1所述的选自2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物应用至毛发或头皮。
7.毛发用化妆品的制备方法，其特征在于将权利要求4所述的选自2-氨基噻唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物添加至水相或油相，制备毛发用化妆品。
8.含有以选自下述通式(2)所示的3-氨基异噁唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发用化妆品
(通式(2)中，R1表示氢原子或甲基，R2表示氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、或碳数6～14的芳基，R3表示氢原子或甲基，R4表示氢原子、直链或支链的碳数1～8的烷基、直链或支链的碳数2～8的链烯基、或碳数3～8的环烷基、碳数7～10的芳烷基、碳数6～14的芳基、碳数2～8的烷基羰基、碳数7～10的芳基羰基；另外，所述芳烷基、芳基、芳基羰基的芳基部分也可分别被碳数1～3个的烷基、碳数1～3个的烷氧基和羟基取代)。
9.毛发张力和韧性改善剂，其含有以选自权利要求8所定义的通式(1)的3-氨基异噁唑衍生物及其可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分。
全文摘要
以选自下述通式(1)所示的2-氨基噻唑衍生物或通式(2)所示的3-氨基异噁唑衍生物及它们的可药用盐的1种以上的化合物作为有效成分的毛发张力和韧性改善剂，(如图)(通式(1)和(2)中，R1、R2、R3、R4、n和m如说明书中给出的定义。)
文档编号C07D277/46GK101232863SQ200680027868
公开日2008年7月30日 申请日期2006年7月21日 优先权日2005年7月29日
发明者末继胜, 福西宏忠, 饭野雅人, 八卷悟史, 相马勤 申请人:株式会社资生堂