专利名称：一种从白菜叶片中提取黄酮的方法
技术领域：
本发明属于蔬菜营养技术的提取方法，具体涉及一种从白菜叶十片中提取黄酮的方法。
背景技术：
生物类黄酮是自然界中存在的酚类物质，亦称维生素P，常与维生素C伴存，属植物次级代谢产物，是自然界药用植物中主要活性成分之一。其生理功能主要有抗氧化作用、促进胰岛β细胞的恢复、降低血糖和血清胆固醇、改善糖耐量、对抗肾上腺素的升血糖作用、抑制醛糖还原酶、调节动物脂质代谢、提高与生长有关的内源激素水平，促进肌肉蛋白沉积、加速动物生长、增强机体的非特异免疫功能和体液免疫功能、抗菌抗病毒。膳食中类黄酮主要来源于蔬菜、水果。大白菜是我国的主要蔬菜之一，2003年栽培面积达269.9万hm2，占蔬菜总面积的15.75％，年产量10,197万t，占蔬菜总产量的19.24％(全国农业统计提要2004)。古代医书《名医别录》中说，白菜能通利肠胃，除胸中烦，解酒毒。清代《本草纲目拾遗》记载说，白菜汁，甘温无毒，利胃肠，除胸闷，利大小便，何中止嗽，冬季尤佳。因此有必要对白菜黄酮进行研究。
黄酮类化合物极性较强，易溶于极性溶剂，如碱水，热水，甲醇，乙醇等。植物中黄酮的提取方法比较成熟的主要有三种浸提法、水浴热回流法、超声波法。前两种方法因提取杂质多、提取时间长、提取液存放易腐败变质、后续过滤操作困难、收率较低等缺点，现已不常使用。超声辅助法是利用超声波的振动空化、机械粉碎、搅拌等作用，使植物组织在溶剂中瞬时产生的空化泡崩溃，而使组织中的细胞破裂，利于溶剂渗透到植物细胞内部，使细胞中的成分进入溶剂中，加速相互渗透、溶解，以增加黄酮类化合物在溶剂中的溶解。超声萃取技术的优点是可以大幅度地提高有效成分的提取率，缩短提取时间，一般处理儿十分钟即可，高效率，省溶剂。目前还有微波法、大孔树脂吸附法等，这些方法虽有其独特之处，但因为其使用范围有限，设备成本较高、工艺复杂、技术尚不成熟等原因而暂时没有广泛使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从白菜叶片中提取黄酮的方法。
为了实现上述目的，本发明通过如下技术方案得以实现一种白菜叶片中提取黄酮的方法，其特征在于，该方法以白菜叶为原料，经干燥粉碎、乙醇溶液萃取，过滤、除杂、减压回收、真空浓缩，得到黄酮提取物，具体包括下列步骤步骤一，将白菜叶片在120℃下杀青10min，于50℃～60℃下烘干，进行超细粉碎，得到60目的白菜叶粉末；步骤二，将白菜叶粉末置于超声提取器中，以80％质量分数的乙醇溶液作为提取溶剂，在50℃的温度下，以频率为60Hz的超声波，提取2次，每次提取的料液比为1∶20，合并滤液；步骤三，将滤液过滤后得到提取液，以2-3倍的石油醚进行萃取，除去提取液中的脂溶性杂质；步骤四，除杂质后的提取液减压回收，真空浓缩后即可得到黄酮提取物。
上述除杂质后的提取液在35℃下对提取液进行减压浓缩结晶，收集晶体，得到白菜类黄酮粗品。
本发明提供的从白菜中提取黄酮的方法的有益之处在于1)简单该方法简便易行，实验条件温和而且容易控制。
2)省时提取时间短。
3)高效提取液中黄酮含量较高，即得率较高。
4)成本低廉由于反应过程中没有加入除乙醇外的其它有机溶剂，因此在提取过程中不会引入其它的杂质，这就大大简化了分离纯化的步骤，降低了分离纯化的成本；其选用的乙醇和石油醚均可循环利用。
5)环保用于提取的溶剂可以循环使用，所以提取过程没有废液排出，有利于环境保护。
具体实施例方式
本发明的从白菜叶片中提取黄酮的方法，将白菜叶片在120℃下杀青10min，于50℃～60℃下烘干，粉碎，将白菜叶粉末置于超声提取器中，以80％的乙醇为提取液，料液比为(g/mL)1∶20，提取温度50℃～60℃，在50℃的温度下，以超声波频率60Hz，提取1小时，共提取两次，每次提取的料液比为1∶20，合并滤液，将滤液过滤后得到提取液，以2-3倍的石油醚进行萃取，除去提取液中的脂溶性杂质；除杂质后的提取液减压回收，真空浓缩后得到黄酮提取物。
以芦丁做标准物做出标准曲线，用紫外吸收光谱测定提取物中总黄酮的含量。
本发明提供的从白菜叶片中提取黄酮的方法，使用乙醇/水的混合溶剂，在一定温度和一定的超声波频率下对白菜样品进行提取，可以高效率的获得黄酮。
本发明的方法是根据相似相溶的原理进行的。其过程的实质是黄酮化合物从白菜细胞内部向溶剂转移的传质过程首先，溶剂分子从溶剂主体传递到白菜固体颗粒的表面。然后，白菜细胞由于超声波作用破裂，溶剂渗透到植物细胞内部。接下来，细胞中的成分由于超声波的作用迅速进入溶剂中。最后，黄酮化合物从白菜固体颗粒溶解于溶剂主体中。其中，黄酮化合物在所选溶剂中溶解度大小以及向溶剂扩散的难易程度是影响提取率的两个主要因素。而黄酮化合物在所选溶剂中的扩散速度又取决于提取温度、料液比、固体颗粒大小、超声频率等因素。
黄酮化合物通常存在于植物细胞内，而细胞膜产生的扩散阻力使得其浸捉速率比较小。对原料进行诸如干燥或粉碎之类的预处理，有助于植物细胞膜的破裂，溶剂也容易进入植物细胞内部直接溶解黄酮，从而可以提高提取效率。
以下是发明人给出的具体实施例。
实施例1将刚进入结球期的橙色叶球白菜采收后，称重、清洗，将叶片摊开，于烘箱中110℃下杀青5min，50～60℃下烘干，粉碎至60目，准确称取粉碎后干燥至恒重的白菜样品0.1g于三角瓶中，以20mL 80％乙醇为提取剂，超声频率为60Hz，提取1h，共提取两次。合并滤液，过滤，以水定容至50mL，用2倍的石油醚脱脂，得到黄酮提取液，经分光光度法测定，得黄酮含量为0.653mg，在35℃下对提取液进行减压浓缩结晶，收集晶体，此为黄酮粗提物，共得到0.671mg晶体。
实施例2将成熟期橙色叶球白菜采收后，称重、清洗，将叶片摊开，于烘箱中110℃下杀青5min，50～60℃下烘干，粉碎至60目，准确称取粉碎后干燥至恒重的白菜样品0.2g于三角瓶中，以40mL 80％乙醇为提取剂，超声频率为60Hz，提取1h，共提取两次。合并滤液，过滤，以水定容至100mL，2倍的石油醚脱脂，得到黄酮提取液，经分光光度法测定，得黄酮含量为0.244mg，在35℃下对提取液进行减压浓缩结晶，收集晶体，此为黄酮粗提物，共得到0.250mg晶体。
实施例3将成熟期普通结球白菜采收后，称重、清洗，将叶片摊开，于烘箱中110℃下杀青5min，50～60℃下烘干，粉碎至60目，准确称取粉碎后干燥至恒重的白菜样品0.5g于三角瓶中，以100mL 80％乙醇为提取剂，超声频率为60Hz，提取1h，共提取两次。合并滤液，过滤，在35℃下对提取液进行减压浓缩至20mL左右，以50mL石油醚萃取脱脂，得到黄酮提取液，经分光光度法测定，其黄酮含量为0.087mg，在35℃下对浓缩液继续进行减压浓缩结晶，收集晶体，此为黄酮粗提物，共得到0.089mg晶体。
权利要求
1.一种从白菜叶片中提取黄酮的方法，其特征在于，该方法以白菜叶为原料，经干燥粉碎、乙醇溶液萃取，过滤、除杂、减压回收、真空浓缩，得到黄酮提取物，具体包括下列步骤步骤一，将白菜叶片在120℃下杀青10min，于50℃～60℃下烘干，进行超细粉碎，得到60目的白菜叶粉末；步骤二，将白菜叶粉末置于超声提取器中，以80％质量分数的乙醇溶液作为提取溶剂，在50℃的温度下，以频率为60Hz的超声波，提取2次，每次提取的料液比为1∶20，合并滤液；步骤三，将滤液过滤后得到提取液，以2-3倍的石油醚进行萃取，除去提取液中的脂溶性杂质；步骤四，除杂质后的提取液减压回收，真空浓缩后即可得到黄酮提取物。
2.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的除杂质后的提取液在35℃下对提取液进行减压浓缩结晶，收集晶体，得到白菜类黄酮粗品。
全文摘要
本发明公开了一种从白菜叶片中提取黄酮的方法，该方法以白菜叶片为原料，以80％乙醇为提取液，在50－60℃，超声频率为60Hz下提取两次，合并滤液，过滤后，石油醚除杂，最后将滤液真空浓缩后得到黄酮提取物。本发明提供的方法简便易行，试验条件温和而且容易控制；提取时间短；提取液黄酮含量高；由于提取过程中没有加入乙醇以外的其它有机溶剂，因此提取过程中不会引入其它杂质，以石油醚除杂，以HPLC法检测到除杂后色谱图中去除了大部分杂峰，主要黄酮类物质分离度和理论塔板数更高。用于提取和除杂的溶剂可以循环利用，所以没有废液排出，有利于环境保护。
文档编号C07H17/00GK101016287SQ20071001740
公开日2007年8月15日 申请日期2007年2月12日 优先权日2007年2月12日
发明者张鲁刚, 李娟 , 张明科, 惠麦侠 申请人:西北农林科技大学