专利名称：一种穿心莲根提取物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及中药领域，具体涉及中药提取物，特别是穿心莲根提取物。
背景技术：
穿心莲为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees，其根主要含有黄酮类、穿心莲内酯等成分。现代药理研究表明，穿心莲黄酮类成分具有心血管药理活性。目前市场上已有较多的以穿心莲为主要原料的中药制剂，如穿心莲片、穿心莲胶囊、穿心莲内酯滴丸、穿心莲注射液、复方穿心莲片等；但这些品种均以穿心莲的茎叶部分为原料，成品中主要含有内酯类成分，主要用于清热解毒、抗菌消炎，而且其质量控制体系也多以穿心莲内酯类成分进行构建；几乎没有以穿心莲黄酮类为主药的制剂，因为黄酮类物质主要存在于穿心莲根，这一部分在穿心莲药物的制备中不被利用，往往都是丢弃，造成浪费。
发明内容
本发明的目的是提供一种穿心莲根提取物。
本发明实现上述目的技术方案是一种穿心莲根提取物，该提取物是将穿心莲根用乙醇回流提取后经大孔树脂纯化得到，其中含有质量百分比为53.28～68.53％的下列总黄酮7-O-甲基汉黄芩素、穿心莲黄酮、5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮、5-羟基-3，7，8，2’-四甲氧基黄酮和5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
本发明所述的一种穿心莲根提取物，其中总黄酮中5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的质量百分比含量为穿心莲根提取物的6.85～11.38％。
本发明所述穿心莲根提取物的制备方法是(1)取穿心莲根粗粉，每次加40～70％乙醇10～30倍，在常压下加热回流提取1.0～1.5小时，重复提取2～3次，过滤，合并提取液；(2)将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，然后在5～20℃下，1000～3000rpm高速离心，取上清液，以0.5～2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用5～10BV水以0.5～2BV/h的流速洗脱，分别用20％，60％，90％乙醇进行梯度洗脱，收集60％和90％乙醇的洗脱液，浓缩，喷雾干燥即得。
所述的提取所用的乙醇浓度最佳是40％。
所述的乙醇回流提取次数最好为2次，提取时间分别为1.5和1.0小时；所述的离心速度最佳是2000rpm，上柱流速最佳是1.5BV/h，洗脱流速最佳是1BV/h。
本发明所述的提取物是将穿心莲根用乙醇回流提取后经大孔树脂纯化得到的，该方法不需要长时间在高温下进行，穿心莲中的天然活性成分，如7-O-甲基汉黄芩素、穿心莲黄酮、5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮、5-羟基-3，7，8，2’-四甲氧基黄酮、5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮不易分解破坏，很好地保留了穿心莲根的天然特征。
本发明所述的提取物可用于制备治疗抗血栓的药物，该药物可以是肠溶胶囊、软胶囊、滴丸、分散片、颗粒剂等。
所述的肠溶胶囊由本发明提取物与HPMC、微粉硅胶和硬脂酸镁组成。其制备方法是，先将本发明提取物与赋型剂HPMC和微粉硅胶按1∶1.5∶0.5的比例混合，制粒，干燥，再加入0.2％的润滑剂硬脂酸镁充分混合均匀，填充肠溶胶囊壳制成。
所述的软胶囊由本发明提取物与适量植物油、3％～5％的蜂蜡及少量润湿剂组成。其制备方法是，先将本发明提取物与辅料的混合物按1∶2.5的比例混合，再上扎囊机压制而成。
所述滴丸由本发明提取物与PEG4000及PEG6000混合组成。其制备方法是，先将本发明提取物与PEG4000及PEG6000按1∶0.5∶2.5的比例混合，再熔融，滴入冷却剂中制成。
所述分散片由本发明提取物与HPMC、乳糖及淀粉混合组成。其制备方法是，先将本发明提取物与HPMC、乳糖及淀粉按1∶0.7∶0.5∶1的比例混合，制粒，干燥，整粒，再加入1％硬脂酸镁混合均匀，再上压片机压制而成。
所述颗粒剂由本发明提取物与β-环糊精及淀粉混合组成。其制备方法是，先将本发明提取物与2倍量的β-环糊精包合，再加入1.5倍量淀粉，混合，过筛，搅拌，制粒，干燥，整粒，分包装，即得颗粒剂。
本发明所述的提取物可以通过以下方法鉴定1、定量分析1.1紫外分光光度法测总黄酮含量(1)仪器、试剂与实验材料Agilent 8453E紫外可见分光光度计；Satorius电子分析天平(Sartorius Co.Ltd.Germany)；卢丁(中国药品生物制品检定所提供)；所用试剂均为AR。
(2)标准溶液的制备分别精密称取芦丁对照品3.2mg及4.0mg，加入60％乙醇溶解，分别定容至25mL及10mL，浓度分别为128ug·mL-1及400ug·mL-1。
(3)标准曲线及其线性范围分别取已配制好的浓度为128ug·mL-1的标准品液0.1mL，0.2mL，0.3mL，0.4mL，0.5mL，1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL，6.0mL，浓度为400ug·mL-1的标准品液1.0mL，3.0mL，5.0mL至25mL量瓶，加1.0mL的0.1mol·L-1Alcl31.0mL，以60％乙醇稀释至刻度。于282nm波长处测定吸收度。以吸收度对浓度作标准曲线，得回归方程为y＝0.0009x+0.0084；γ＝0.9995。线性范围为0.512ug·mL-1～80ug·mL-1。
(4)样品测定取本发明提取物1mg，甲醇溶解并定容至10ml，制成0.1mg·mL-1的供试品溶液。精密吸取上述溶液2mL至25mL容量瓶中，加1.0mL的0.1mol·L-1AlCl31.0mL，以60％乙醇稀释至刻度，放置30min后，于282nm波长处测定吸收值，根据标准溶液所得的回归方程计算总黄酮的质量X。
1.2高效液相色谱法测5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮含量(1)色谱条件Kromasil RP-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；甲醇-水(65∶35)；流速0.8mL/min；柱温30℃；检测波长276nm；进样量10μL；5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的理论塔板数不应低于6000，保留时间为17.62min。
(2)标准溶液的制备精密称取5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮(R6)对照品适量，加甲醇溶解并定容，分别制成浓度为0.11mg/mL的溶液，备用。
(3)标准曲线及其线性范围 分别精密吸取上述标准混和溶液1、2、4、6、8、10μL，依选定的色谱条件进样测定，标准溶液的色谱图见图1，5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的保留时间为19.31min；以峰面积(Y)对5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮成分质量(X)进行线性回归，回归方程为Y＝3365.9.5X-7.3058，γ＝0.9999，线性范围110～1100ng；γ为线性系数。
(4)样品测定 精密称取本发明所述提取物样品1mg，加甲醇定容至10ml，超声使其溶解，进样前以0.20μm微孔滤膜过滤。精密吸取5μl，依选定的色谱条件进样测定，样品溶液的色谱图见图2，根据标准溶液所得的回归方程计算5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的质量X。
2、定性分析高效液相色谱指纹图谱法。
(1)色谱条件Kromasil RP-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；水-乙腈-甲醇三元梯度洗脱；流速0.8mL/min；柱温30℃；检测波长276nm；进样量5μL。
(2)标准溶液的制备精密称取7-O-甲基汉黄芩素(R1)、穿心莲黄酮(R3)、5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮(R4)、5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮(R6)各1mg，加甲醇溶解并定容5mL量瓶，再各取1mL混合，进样前以0.2μm的微孔滤膜过滤，备用。
(3)样品测定 精密称取本发明所述提取物样品1mg，加甲醇定容至10mL，超声使其溶解，进样前以0.20μm微孔滤膜过滤。精密吸取5μL，依选定的色谱条件进样测定，记录色谱图。
(3)标准品色谱图如3所示，R1为7-O-甲基汉黄芩素，R3为穿心莲黄酮，R4为5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮，R6为5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
(4)本发明提取物成分色谱指纹图谱的建立本发明提取物的指纹峰共有18个，为便于辨认和分析比较，将其特征峰指纹图谱分成I、II、III三组。第I组包括5～15min(1～5#峰)，第II组包括16～30min(6～10#峰)，第III组包括35～50min(11～18#峰)。如图4所示，黄酮类物质基本上都集中在第III组峰内，其中13#峰的滞留时间为37.8min，与标准品中R6峰相同，为5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮；16#峰的滞留时间为43.4min，与标准品中R1峰相同，为7-O-甲基汉黄芩素；17#峰的滞留时间为44.2min，与标准品中R3峰相同，为穿心莲黄酮；18#峰的滞留时间为46.1min，与标准品中R4峰相同，为5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮。
以下通过具体实验来进一步说明本发明的有益效果1、抗血小板凝集实验40只大鼠随机分为40组，每组10只，分别标号为正常组、本发明提取物给药组(低、中、高剂量)。给药组按10mg·kg-1，20mg·kg-1，40mg·kg-1剂量，以下述制备例1所得的提取物灌胃，每天1次，连续3周。
(1)本发明提取物对二磷腺苷(ADP)诱导大鼠血小板聚集的抑制作用研究给药3星期之后，乙醚麻醉大鼠，眼眶取血，插入聚乙烯管眼眶取血4毫升，置事先放有枸橼酸钠抗凝的硅化试管中，(血与抗凝剂的比例为9∶1)将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(1000rpm)10分钟，吸取上层米黄色溶液，即为富血小板血浆(PRP)。
精密称取1mgADP，加入1毫升生理盐水为备用液，分装成50uL小瓶共20瓶储存，用时取1小瓶50uL加入生理盐水1.25mL生理盐水为应用液(聚集剂)，每个标本加聚集剂40～50uL，标本量是0.45mL富血小板血浆。聚集剂一定遮光、冰箱保存。
抗血小板聚集活性测定打开3-9D型血流变四用仪，选择血小板聚集功能，取富血小板血浆0.45mL，装入聚集孔中，放入综合传感器箱中的中间孔(工作孔)。加入搅拌棒，打开搅拌开关，盖上小盖，调节传感器中电位器，调初值10左右，然后揭开小盖，加入聚集剂，盖上小盖，打开聚集仪菜单，选择聚集操作，计算机倒计时，到时报警。
实验结果采用T-test检验，各剂量组均与对照组比较，从表1、2、3、4可知，服用本提取物后可明显影响血小板的聚集功能，使其受到明显抑制，表明本提取物具有显著的抗血小板聚集作用。
表1本提取物抗血小板聚集率(x±s，n＝10)
注与正常对照组比较*P＜0.05，#P＜0.01。(表2、3、4同)
表2本提取物抗血小板聚集率(x±s，n＝10)
表3本提取物抗血小板聚集率(x±s，n＝10)
表4本提取物抗血小板聚集率(x±s，n＝10)
(2)本发明提取物对不同诱导剂诱导的血小板聚集抑制作用研究大鼠颈动脉取血后，置事先放有枸橼酸钠抗凝的硅化试管中，(血与抗凝剂的比例为9∶1)将血液与抗凝剂轻轻混匀，离心(1000rpm)10分钟，吸取上层米黄色溶液，即为富血小板血浆(PRP)。随后立即高速离心(3000rpm)十分钟，得贫血小板血浆(PPP)。
抑制血小板聚集实验取PRP和PPP入聚集杯中，在等量PRP中分别加入PBS对照和低、中、高浓度的穿心莲黄酮液，孵育5min；再分别加入终浓度为二磷酸腺苷(ADP)2mmol·L-1、花生四烯酸(AA)176mmol·L-1、肾上腺素5mmol·L-13种诱导剂，记录血小板聚集曲线。结果见表5。
表5血小板聚集抑制作用比较结果(x±s，n＝10)
注与正常对照组比较，*P＜0.05；与低剂量组比较，#P＜0.05；与中剂量组比较，△P＜0.05。
结果表明，低、中、高剂量组的本发明提取物均可明显抑制ADP、AA、肾上腺素诱导的血小板聚集(P＜0.01，ADP诱导的血小板聚集穿心莲黄酮半抑制浓度(Ic50)为23.3mg·L-1，AA诱导的Ic50为19.8mg/L，肾上腺素诱导的Ic50为21.4mg/L；高剂量组穿心莲黄酮对ADP、AA、肾上腺素诱导的血小板聚集的抑制率分别为77.38％、96.62％和92.67％。
3、本发明提取物对麻醉犬心肌耗氧量的影响15只犬随机分为3组，生理盐水组(1mL·kg-1)、心达康组(24mg·kg-1)和本发明提取物组(8mg·kg-1)，上述实验用药均在实验前配成混悬液以备灌胃给药。参照徐叔云主编《药理实验方法学》，麻醉犬，气管插管连接麻醉呼吸机。分离右侧股动脉，开胸，游离左冠状动脉前降支上部，放置电磁流量计探头测冠脉流量。分离右侧颈静脉，插心导管入冠状静脉窦。同步抽取冠状窦及股动脉血标本(0.5％肝素抗凝)，用血气分析仪测定动脉和静脉血氧含量。灌胃给予生理盐水或药物，分别分析给药前及给药后30、60、90、120min时动脉和静脉血气。实验结束时称重心脏和控血重，用于计算心肌耗氧量。公式为心肌耗氧量[mL·min-1·(100g)-1I＝冠脉血流量[mL·min-1·(100g)-1]×(动脉血氧含量-冠状窦血氧含量)。心肌氧摄取率(％)＝(动脉血氧含量-冠状窦血氧含量)/动脉血氧含量×100％。
实验数据以x±s表示，用SPSS11.0软件进行方差分析，作显著性检验。本发明提取物组灌胃后心肌耗氧量同生理盐水组相比有所下降，从30min开始至120min各时间点心肌耗氧量变化率与生理盐水组比差异有极显著性(P＜0.01)。心达康可显著降低心肌耗氧量，降低率与生理盐水组同时间点相比，3.0～120min差异显著(P＜0.01)，结果见表6。本发明提取物灌胃后可显著降低心肌氧摄取率；降低率与生理盐水组同时间点相比，从30min至120min各时间点差异均有极显著性(P＜0.01)。阳性对照心达康可显著降低心肌氧摄取率，结果见表7。本发明提取物可增加冠脉流量，增加率与生理盐水组同时间点相比，在30、60min差异显著(P＜0.05)。阳性对照药心达康也可明显增加冠脉流量，作用时间从30～90min，结果见表8。
可见，本发明提取物能显著降低心肌耗氧量，与心达康相比，具有见效快，服用剂量低的优点。
表6本发明提取物对犬心肌耗氧量的影响(n＝5)
注与给药前比较，a)P＜0.05，b)P＜0.01；与生理盐水组比较，c)P＜0.05，d)P＜0.01(表7、8同)。
表7本发明提取物对对犬心肌氧摄取率的影响(n＝5)
表8本发明提取物对犬冠脉流量的影响(n＝5)
4、本发明提取物对高血脂大鼠血脂水平的影响参照《现代药理实验方法》，采用高脂饲料喂养方法制备大鼠高脂血症模型。选用SD大鼠(180～200g)60只，雌雄各半，在本研究室环境中喂养基础饲料5d，测血清TC、TG正常值。然后随机分4组，即高脂血症模型组，丹香降脂颗粒组(阳性药对照组)、本发明提取物小剂量组及大剂量组，给予高脂饲料喂养。高脂饲料配方79％基础饲料，1％胆固醇，10％蛋黄粉，10％猪油。连续高脂饲料喂养10d，取血，离心，测血清TC值，证明均已形成高脂血症，各组选择10只继续高脂饲料喂养，并分别给予相应药物，模型组给予等容积NS，均灌胃给予。每日1次，于14d及28d分别取血测TC、TG，所得实验数据用SPSS11.0软件统计处理，用x±s表示。各组大鼠连续给药14d和28d测得的血清TC值如表9所示。表9结果显示本发明提取物有降低高血脂大鼠TC作用，其降脂作用强度强于丹香清脂颗粒药。连续给予本发明提取物14d及28d测得的TG值，见表10。
表9本发明提取物对高血脂大鼠TC的影响(x±s，n＝10)
注与高血脂模型组比较，*P＜0.05，#P＜0.01，(表10同)表10本发明提取物对高血脂大鼠TG的影响(x±s，n＝10)
本研究结果发现，本发明提取物可明显降低血清TC和TG水平，与高血脂模型组相比有显著差异，与丹香清脂颗粒组相比，本发明提取物40mg·kg-1的降脂作用更强。本实验结果为临床应用本发明提取物于高血脂症提供了药理学依据。
5、本发明提取物的活血化瘀作用研究3月龄清洁级Wista大鼠(180～220g)共50只，随机分为5组①模型对照组生理盐水(10mL·kg-1)；②活血化瘀药物对照组复方丹参滴丸(67.9mg·kg-1)；③本发明提取物高剂量组(100mg·kg-1)；④本发明提取物中剂量组(50mg·kg-1)；⑤本发明提取物低剂量组(25mg·kg-1)；。实验每组各10只。
各组大鼠分笼饲养于不锈钢金属笼内，每笼5只，室温调节在(26±2)℃，湿度控制在40％～70％，自由饮食和摄水。每天灌胃1次，连续21d。第21天，停药禁食不禁水。于第22天，对各组均给予1mg/kg的盐酸肾上腺素生理盐水溶液，用20％氨基甲酸乙酯(0.70ml/100g)腹腔麻醉，先观测动物的肠系膜微循环，然后分离大鼠腹主动脉取血，分别制备血清和抗凝血(抗凝剂分别为2％EDTANa2、3.8％枸橼酸钠)，检测血液流变学各项指标。所得实验数据用SPSS11.0软件统计处理，用x±s表示。
本发明提取物大剂量组可有效抑制低剪切速下大鼠的血液黏度，降低1.0s-1、5.0s-1剪切速下的血液黏度值，和模型对照组比较差异有显著性(P＜0.01)，结果见表11。同时，高剂量组对造模后大鼠的红细胞聚集指数具有显著降低作用，和模型对照组比较差异有显著性(P＜0.05)，对红细胞变形性无显著作用，和模型对照组比较差异无显著性，见表12。造模后，本发明提取物中、高剂量组可显著抑制大鼠血小板聚集性，并降低血小板黏附性，与模型对照组比较差异有非常显著性(P＜0.01、P＜0.05)，说明本发明提取物具有明显的活血化淤的作用，见表13。
表11本发明提取物对大鼠血液黏度的影响(x±s，n＝10)
注与高血脂模型组比较，*P＜0.05，#P＜0.01(表12、13同)表12本发明提取物对大鼠红细胞聚集性和变形性的影响(x±s，n＝10)
表13本发明提取物对血小板黏附性和聚集性的影响((x±s，n＝10)
图1是标准品溶液的高效液相色谱图，其中R6为5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
图2是实施例1所得提取物的高效液相色谱图，其中R6为5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
图3是标准品溶液的高效液相色谱图，其中R1为7-O-甲基汉黄芩素，R3为穿心莲黄酮，R4为5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮，R6为5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
图4是实施例1所得提取物的高效液相色谱指纹图谱，其中R1为7-O-甲基汉黄芩素，R3为穿心莲黄酮，R4为5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮，R6为5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
具体实施例方式
制备例例1取干燥的穿心莲根2000g，粉碎成粗粉。
取穿心莲根粗粉，加40％乙醇30倍浸泡12小时，在常压下加热提取1.5小时，趁热过滤，药渣再加40％乙醇20倍，加热提取1小时，趁热过滤，合并两次乙醇提取液。将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以3000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂生产)，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用水以1.5BV/h的流速洗脱树脂柱，至水洗液无色后，再依次以20％、60％、90％乙醇以1BV/h的流速洗脱，各乙醇梯度间的递增以上一梯度洗脱液至无色为依据，收集浓度为60％和90％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，喷雾干燥。
精密称取本发明所述提取物样品1mg，加甲醇溶解并定容至10mL。精密吸取上述溶液2mL至25mL容量瓶中，加1.0mL的0.1mol/L AlCl31.0mL，以60％乙醇稀释至刻度，放置30min后，于282nm波长处测定吸收值。根据标准溶液所得的回归方程计算总黄酮部位中黄酮的平均含量为68.53％。
精密称取本实施例所述提取物样品1mg，加甲醇溶解并定容至10mL。进样前以0.20μm微孔滤膜过滤。精密吸取5μL，依选定的色谱条件进样测定，根据标准溶液所得的回归方程计算本发明提取物中5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的含量11.38％，色谱图见图2，本实施例提取物的高效液相指纹图谱见图4。
例2取新鲜干燥的穿心莲根1000g，粉碎成粗粉。
取穿心莲根粗粉，加50％乙醇30倍浸泡12小时，在常压下加热回流提取1.0小时，趁热过滤，药渣再加50％乙醇20倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次乙醇提取液。将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂生产)，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用水以1.5BV/h的流速洗脱树脂柱，至水洗液无色后，再依次以20％、60％、90％乙醇以1BV/h的流速洗脱，各乙醇梯度间的递增以上一梯度洗脱液至无色为依据，收集浓度为60％和90％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，喷雾干燥。所得提取物中总黄酮含量为65.62％，5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的含量10.16％。
例3取新鲜干燥的穿心莲根1000g，粉碎成粗粉。
取穿心莲根粗粉，加70％乙醇20倍浸泡12小时，在常压下加热回流提取1.5小时，趁热过滤，药渣再加50％乙醇15倍，加热回流提取1小时，趁热过滤，合并两次乙醇提取液。将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，在5～20℃下以2000rpm离心，取上清液加于已处理好的AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂生产)，以2BV/h(倍柱体积每小时)的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用水以1BV/h的流速洗脱树脂柱，至水洗液无色后，再依次以20％、60％、90％乙醇以1BV/h的流速洗脱，各乙醇梯度间的递增以上一梯度洗脱液至无色为依据，收集浓度为60％和90％的乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩，喷雾干燥。所得提取物中总黄酮含量为53.28％，5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的含量6.85％。
应用例例1将制备例1所得提取物48.3g用适量乙醇稀释后，按照等量递加法分别赋型剂HPMC和微粉硅胶按1∶1.5∶0.5的比例混合均匀，过6号筛制成颗粒，于60℃温度下干燥3小时。取1#空肠溶胶囊，分别填充以上干燥颗粒，每1粒胶囊0.3g，于囊口处涂一层阿拉伯胶浆，套封胶囊，用干燥纱布擦拭胶囊后，装于密闭棕色瓶内，即得。该制剂的用量为每天两次，每次2粒，口服。
例2将制备例1所得提取物42.2g与100g花生油混合，加入10g蜂蜡及1g吐温-80，再用旋转式扎囊机压制成500粒软胶囊(0.3g/粒)。该制剂的用量为每天两次，每次2粒，口服。
例3将制备例2所得提取物41.3g与大豆油50g混合，加入5.0g蜂蜡及0.8g吐温-80，再用旋转式扎囊机压制成300粒软胶囊(0.3g/粒)。该制剂的用量为每天两次，每次4粒，口服。
例4将制备例3所得提取物43.6g用适量乙醇稀释后再与淀粉200g混匀，过120目筛，于60℃下烘干3小时，装胶囊(0.3g/粒)。该制剂的用量为每天两次，每次3粒，口服。
例5
将制备例1提取物88.1g与40g PEG4000及200g PEG6000混合，熔融，滴入冷却剂甲基硅油中即得滴丸(50mg/粒)。该制剂的用量为每天两次，每次2.0g，口服。
例6将制备例3提取物与1.5倍量的β-环糊精包合，加入60g淀粉，混合，再过80目筛2次，置搅拌机中，加入蒸馏水适量，搅拌10分钟，制软材，过16目筛制粒，湿粒于60℃鼓风干燥箱中干燥，干粒过16目筛整粒。加入羧甲基淀粉钠10g及硬脂酸镁2g，混合均匀，压片，包薄膜衣，得片剂。该制剂的用量为每天三次，每次2片，口服。
例9将制备例1提取物46.5g用2倍量的β-环糊精包合，再加入60g淀粉，混合，再过80目筛2次，置搅拌机中，加入蒸馏水适量，搅拌10分钟，制软材，过16目筛制粒，湿粒于60℃鼓风干燥箱中干燥，干粒过16目筛整粒，分包装，即得颗粒剂。该制剂的用量为每天3次，每次1袋(2g)，温水冲服。
例10将制备例2提取物40.3g与HPMC、乳糖及淀粉按1∶0.9∶0.9∶1.2的比例混合均匀，用95％乙醇20目制粒，50℃以下干燥1小时、16目筛整粒，再加入1％硬脂酸镁混合均匀，压制成片重为0.32g的片剂。即得分散片。该制剂的用量为每天2次，每次3片，温水冲服。
权利要求
1.一种穿心莲根提取物，该提取物是将穿心莲根用乙醇回流提取后经大孔树脂纯化得到，其中含有质量百分比为53.28～68.53％的下列总黄酮
7-0-甲基汉黄芩素、穿心莲黄酮、5-羟基-7，8，2’3’-四甲氧基黄酮、5-羟基-3，7，8，2’-四甲氧基黄酮和5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮。
2.权利要求1所述的一种穿心莲根提取物，其特征在于所述的总黄酮中5，2’-二羟基-7，8-二甲氧基黄酮的质量百分比含量为穿心莲根提取物的6.85～11.38％。
3.权利要求1或2所述穿心莲根提取物的制备方法，该方法由以下步骤组成(1)取穿心莲根粗粉，每次加40～70％乙醇10～30倍，在常压下加热回流提取1.0～1.5小时，重复提取2～3次，过滤，合并提取液；(2)将乙醇提取液减压浓缩至无醇味，然后在5～20℃下，1000～3000rpm高速离心，取上清液，以0.5～2BV/h的流速上大孔吸附树脂柱，待吸附饱和后，先用5～10BV水以0.5～2BV/h的流速洗脱，分别用20％，60％，90％乙醇进行梯度洗脱，收集60％和90％乙醇的洗脱液，浓缩，喷雾干燥即得。
4.权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的提取所用的乙醇浓度是40％。
5.权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的乙醇回流提取次数为2次，提取时间分别为1.5和1.0小时。
6.权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的离心速度是2000rpm。
7.权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的上柱流速是1.5BV/h。
8.权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述的洗脱流速是1BV/h。
9.权利要求1或2所述的穿心莲根提取物在制备治疗抗血栓的药物中的应用。
全文摘要
本发明提供了一种穿心莲根提取物，其特征在于含有53.28～68.53％总黄酮(其中5，2’－二羟基－7，8－二甲氧基黄酮6.85～11.38％)。该提取物是将穿心莲根粗粉浸泡乙醇中，常压加热回流提取，然后将乙醇提取物通过大孔吸附树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇浓度为60～90％的洗脱液，最后减压浓缩，喷雾干燥得到，尽可能地保留了原料药中的黄酮类成分7－O－甲基汉黄芩素、穿心莲黄酮、5－羟基－7，8，2’3’－四甲氧基黄酮、5－羟基－3，7，8，2′－四甲氧基黄酮、5，2’－二羟基－7，8－二甲氧基黄酮，很好地保持穿心莲根的天然特征。
文档编号C07D311/00GK101040883SQ20071002762
公开日2007年9月26日 申请日期2007年4月20日 优先权日2007年4月20日
发明者祝晨蔯, 林朝展 申请人:广州中医药大学