专利名称：两性化合物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明提供一种含有氢硫(即，巯基，也作"硫醇基")-官能基的两性化合
物(thiol-flmctionalized amphiphilic compounds)及其应用。
背景技术：
根据已发表的文献内容，缓释剂型于粘膜上留滞时间可增进药物吸收作用 (M. L. Longer, H. S. Ch，ng,与J. R. Robinson.作为供口服受控药物递送平台的生 物粘附性聚合物。使用生物粘附性聚合物的Chlorothiazide 口服递送.Journal of Pharmaceutical Sciences 74: 406-411 (1985))。故已有数种用以粘附于粘附层的药 物递送系统正进行研究中。在最可行的概念中，使用粘膜粘连性聚合物例如几 丁聚糖(如L. Ilium, N. R Farraj，与S. S. Davis.几丁聚糖作为肽类的新颖鼻部递 送系统。Pharm. Res. 11: 1186-1189(1994).;及C. Prego， D. Torres,与M. J. Alonso. 几丁聚糖用于肽类的口服递送系统的可能性。Expert Opin. Drug Deliv. 2: 843-54 (2005).)、使用微米与纳米粒子(如E. Mathiowitz, J. S. Jacob, Y. S. Jong, G. P. Carino， D.E. Chickering， P. Chaturvedi， C. A. Santos, K. Vijayaraghavan， S. Montgomery, M. Bassett，与C. Morrdl.生物学上可磨蚀性微球体作为可能的口 服药物递送系统。Nature 386: 410-414 (1997);及S. A. Galindo-Rodriguez， E. AUemann， H. Fessi，与E. Doelker.聚合物纳米粒子用于药物与疫苗的口服递送: 于活体内研究的临床评估。Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 22: 419-64 (2005))、及微脂粒(H. M. Takeuchi， Yamamoto， Kawashima.涂覆以几丁聚糖或水溶性高分 子胶Carbopol的粘膜粘连性微脂粒用于肽类的口服递送，Int Symp. Control Rel. Bioact. Mater， 1999.)。所有前述的粘膜粘连功效均是以非-共价性键结为基础。
而使用非共价性键结的粘膜粘连系统其粘膜粘连性仍有待加强；另外，既有 利用粘膜粘连系统投递药物仍存在增进药物吸收的剂型的需要，因此，对于既 有利用粘膜粘连方式投药的系统与方法，仍有待进一步开发与研究的必要。
发明内容
本发明提供了一种利用巯基官能化的两性化合物以合成及应用非侵入性药 物递送系统。通过该巯基官能化的两性化合物可进一步形成微脂粒(liposome)和/ 或微胶粒(micelles)，使该微脂粒和/或微胶粒可以共价性键结与粘膜粘连系统结 合，而可应用于药物递送系统。
由于所形成的微脂粒和/或微胶粒其亲水性部位带有巯基(thio1 group，也称
为氢硫基，或硫醇基)，因此其可容易地与粘膜上的粘液糖蛋白形成双硫键。如 此，该微脂粒和/或微胶粒递送的药物不仅可通过上述双硫键得以稳定，同时可 通过具有巯基官能化的两性化合物亲水性部分，延长亲脂性药物在粘膜上的滞 留时间，而提高生物利用率或促进粘膜反应；另一方面，由于可通过本发明具 有巯基官能化的两性化合物所制的微脂粒和/或微胶粒而提高载药量，进而可降 低单位给药的药物剂量。
本发明的目的在于提供一种两性化合物，该化合物性质能使药物稳定并提 高载药量，可以降低给药剂量。
本发明的目的还在于提供一种利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微 脂粒或微胶粒来增加药物活性的应用。
本发明的目的还在于提供一种利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒或微胶粒作为酵素(酶)抑制剂的应用。
本发明的目的还在于提供一种制备两性化合物的方法，通过该方法得到一
种两性化合物，该化合物性质能使药物稳定并提高载药量。
为达到前述发明目的，本发明提供一种两性化合物，其以硫酸酯或磷酸酯
为主体，该两性化合物的亲水性部分具有一个或一个以上的巯基。
本发明的两性化合物，其中所述的硫酸酯优选为胆固醇硫酸酯；所述的磷酸 酯优选为胆固醇磷酸酯、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine，也称磷酯酰 基乙醇胺，或磷酸酰基乙醇胺)或磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，也称磷酸酯 酰基丝氨酸)；该两性化合物更优选为磷脂酰乙醇胺-谷胱甘肽或磷脂酰乙醇胺-硫基乙眯。
本发明还提供了一种微脂粒(liposome)，其由上述任一种两性化合物所构成。 优选的是，本发明的微脂粒，该微脂粒的中心含有亲水性药物； 更优选的是，本发明的微脂粒，该微脂粒的中心所含的亲水性药物的种类为 治疗性肽类药物。
上述治疗性肽类药物优选为胰岛素(insulin)、降钙素(calcitonin)、甲状旁腺素
(PTH)或类升糖素肽。
优选的是，本发明的微脂粒，其中该微脂粒的膜上含有亲脂性药物。 更优选的是，本发明的微脂粒，其中该亲脂性药物为紫杉醇(paditaxel)、多
柔比星(doxorubicin)或两性霉素B (amphotericin B)。
在本发明的优选实施例中，上述的微脂粒可为悬浮液、胶囊、干燥粉末、颗
粒、片剂、喷雾剂或吸入剂等形式。
本发明还提供了一种微胶粒，其由上述任一种两性化合物所构成。 优选的是，本发明的微胶粒，该微脂粒的中心含有亲水性药物。更优选的是，本发明的微胶粒，该微脂粒的中心所含的亲水性药物的种类为 治疗性肽类药物。
最优选的是，上述的治疗性肽类药物可为胰岛素(insulin)、降钙素(calcitonin)、 甲状旁腺素(PTH)或类升糖素肽。
优选的是，本发明的微胶粒，其中，该微脂粒的膜上含有亲脂性药物。
更优选的是，本发明的微胶粒，其中该亲脂性药物为紫杉醇(paclitaxel)、多 柔比星(doxorubicin)或两性霉素B (amphotericin B)。
在本发明的优选实施例中，上述的微胶粒可为悬浮液、胶囊、干燥粉末、颗 粒、片剂、喷雾剂或吸入剂等形式。
本发明还提供了一种利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒和/或 微胶粒来增加药物活性的应用。其中所述药物为木瓜蛋白酶与枯草杆菌蛋白酶。
上述应用中，所述的药物可为亲水性治疗性肽类药物，该治疗性肽类药物优 选为胰岛素(insulin)、降钙素(calcitonin)、甲状旁腺素(PTH)或类升糖素肽。
上述应用中，所述的药物可为亲脂性药物，该亲脂性药物优选为紫杉醇 (paclitaxel)、多柔比星(doxorubicin)或两性霉素B (amphotericin B)。
本发明还提供了一种利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒和域 微胶粒作为酵素抑制剂的应用。优选的是，该酵素为离子依赖型酵素；更优选 的是，该离子依赖型酵素为二价阳离子依赖型酵素；更优选，该二价阳离子为 锌离子；最优选，该离子依赖型酵素为羧基肽酶A、B、M或P、内肽酶(neprilysin)、 二肽基肽酶IV、肽基二肽酶A及胺基肽酶I、 A、 N、 P或W。
本发明还提供一种制造巯基化两性化合物的方法，其包括
使磷脂酰乙醇胺溶解于水中以形成磷脂酰乙醇胺溶液；将约1倍至5倍体积的还原谷胱甘肽或异丙基-S-乙酰基硫代乙酰亚胺化物 与磷脂酰乙醇胺溶液混合；
搅拌后，加入碱液持续搅拌；及 自溶液中纯化两性化合物。
在本发明的优选实施例中，上述的方法，以l克磷脂酰乙醇胺为例，将其溶 解于水中；
将5克经还原谷胱甘肽溶于10毫升水后，搅拌加入前述磷脂酰乙醇胺溶液;
另加入氯化l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二酰亚胺5毫升至前述含有还原谷 胱甘肽及磷脂酰乙醇胺溶液中使溶液的最终浓度为200mM;
再加入最终浓度为200mM的N-羟基琥珀酰亚胺5毫升至前述溶液，经搅拌 后，以5MNaOH调整pH值至6.0，并持续搅拌培育7小时；及
收集经合成的两性化合物。
在本发明的另一优选实施例中，上述的方法，其中以500毫克磷脂酰乙醇胺 为例，将其溶解于水；
将500毫克异丙基-S-乙酰基硫代乙酰亚胺化物于持续搅拌下，分成五等份 历时1.5小时加入；
搅拌30分钟后，加入NH4OH使溶液的最终浓度为0.1M;
加入三(2-羧基乙基)磷脂酸盐；及
自溶液中纯化两性化合物。
提供上述方法得到的以及本发明上述提供的两性化合物及其所形成的微脂 粒和/或微胶粒，可有效延长亲水性及亲脂性药物于粘膜上的留滞时间，结果可 改善其生物利用性，或促进诱发粘膜反应。
图1:本发明利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒示意图； 图2:本发明的微脂粒与粘膜作用的示意图3:本发明实施例三的反应流程示意图；其中，由上至下，第一个化合物 为聚醚P85，第二个化合物为甲苯磺酸中间产物，第三个化合物为具巯基化官能
基的聚醚pluronic P85。
附图标号
10——微脂粒 11——巯基官能化基团
20——粘膜 21——巯基
具体实施例方式
以下结合附图详细说明本发明，但不限定本发明的实施范围。 本发明包括用于制备禾n/或使微脂粒(liposome)和/或微胶粒(micelles)更稳定
的新颖的粘膜粘连系化合物的合成及应用；所述的以脂质(包括微脂粒和/或微 胶粒)为主的新颖的递送系统，可用于延长亲水性和亲脂性药物于粘膜上的留 滞时间，并可改善其生物可利用性，或促进诱发粘膜反应。
粘膜粘连递送系统可以提高药物的生物利用率，而共价键的键结强度大于非 共价键，因此使用共价键的粘膜粘连(例如本发明优选的具体实施例中所示范的 DDS)，可较使用非共价键的粘膜粘连系统明显提高粘膜粘连性；因此，利用共 价键所形成的粘膜粘连系统，也可较使用非共价键的粘膜粘连系统有效提高口 服药的生物利用率。
粘膜粘附作用(mucoadheskm)是可通过本发明的具有巯基官能基的两性化合 物所调控。该巯基位于本发明的两性化合物的亲水性部位，当利用本发明的具有巯基官能基的两性化合物形成微脂粒和/或微胶粒时，该巯基位于微脂粒和/或 微胶粒的表面部位。通过本发明所获制的微脂粒和/或微胶粒，亲水性药物可被
并入亲水性中心(hydrophilic core),而亲脂性药物可被并入微脂粒的脂肪膜(lipid membrane)上；同时，微胶粒也可用于亲脂性药物的递送。
于各种研究中已证明，带有亲水性多糖与其他亲水性聚合物，包括聚丙烯酸 及其衍生物具有强力增进粘膜粘连的功效(A. Bernkop-Schnl)rch，粘液-粘连性聚 合物，其用途及其制造方法，AT1822898,奥地利，1999)。而且，将巯基导入 于微胶粒表面上，己证明可促使粘膜粘连作用增强(M. H. Dufresne， M. A. Gauthier与J. C. Lerousx，经巯基-官能化的微胶粒;从分子辨识到增进粘膜粘连。 Bioconjug. Chem. 16: 1027-33(2005》。因此，使用本发明的新颖的具巯基官能化 的两性化合物，可通过不同作用机制，改善多种不同药物的生物利用性或生物 活性。
在本发明中其使用经巯基官能化的胆固醇硫酸酯(thiol-flmctionalized cholesterylsulfate)或经巯基官能化的胆固醇磷酸酯(cholesterylphosphate)。经巯基
官能化的磷酸酯类包括经巯基官能化的磷脂酰乙醇胺 (phosphatidylethanolamine)， 与经巯基官能化的磷脂酰丝氨酸 (phosphatidylserine)，也可用于制造微脂粒。于本发明的一个实施例中，使用经 巯基官能化的胆固醇作为微脂粒和/或微胶粒的稳定剂。
进一步地，也可使用前述微脂粒和/或微胶粒的衍生物，特别是展现交联表 面的稳定化衍生物，其可通过氧化(形成双硫化物)，可使用于本发明的稳定化衍 生物(stabilizing derivatives)可包含但不限于，胆固醇(cholesterol)、经巯基官能化 的胆固醇(thiol-functionalized cholesterol)等，使用胆固醇其不直接参与微脂粒的形成，而是像脂双层膜的结构一般，使胆固醇镶嵌于微脂粒上以稳定微脂粒的
结构；使用经巯基化的胆固醇则可使该巯基官能化的胆固醇位于微脂粒的表面， 以利微脂粒形成双硫键与粘膜结合而增进粘膜粘连性；或通过使用其他交联剂， 该交联剂可为可氧化位于微脂粒和/或微胶粒表面的巯基者，包含但不限于 H202，其他可与微脂粒和/或微胶粒表面巯基作用并使该微脂粒和/或微胶粒结构 稳定的交联剂也可使用，以完成交联作用。
根据本发明，在微脂粒和/或微胶粒的分子结构上导入巯基可通过各种不同 反应完成，作为携带巯基的化合物，此处，半胱氨酸提供许多优点，不仅可广 泛取得且可以合理价格制得。
本发明所描述经巯基官能化的两性化合物展现粘膜粘连作用的增进作用。先 前文献己描述如何如何通过两性化合物形成微脂粒和/或微胶粒，其如何测量微 脂粒的粘膜粘连作用(H. Takeuchi， J, Thongborisute， Y, Matsui， H. Sugihara， H. Yamamoto与Y. Kawashima.用于聚合物及经聚合物涂覆粒子的新颖粘膜粘连测 试方法以设计最适的粘膜粘连性药物递送系统。Adv. Dmg Ddiv. Rev. 57: 1583-94 (2005))。
根据本发明的具体实施例，剂量形式是基于巯基官能化的两性化合物所形成 的微脂粒和/或微胶粒，其内包含经粘膜吸收或通过诱发粘膜反应的药物种类。 在一个实施例中，亲脂性药物可由微脂粒/微胶粒来溶解，且可通过粘膜粘连作 用的特性媒介，进一步改善陡峭的浓度梯度(steep concentration gradient)进而改 善经粘膜的运送作用。另外，由于低药物装载量往往是聚合物纳米粒子的一项 缺点，本发明具巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒和/或微胶粒可提高亲 水性药物的装载量，例如使肽类药物具有高药物装载量。本发明将诸如肽类的亲水性药物并入微脂粒中，可导致改善药物对肠道酵素的稳定性。通过使用经 巯基官能化的微脂粒，能够组合现存递送系统技艺的数项优点，包括保护不被 分解、增加溶解度、微脂粒的高药物装载量、及改善巯基化聚合物的粘膜粘连 与穿透能力。
在本发明中，药物可被并入微脂粒/微胶粒中，且将不会与新颖巯基官能化
两性化合物共价结合。可通过已知的方法，包括薄膜方法(thin film methods)或注 射法(injectionmethod)制得以脂质为主的递送系统。也可将微脂粒/微胶粒冷冻干 燥，可行的冷冻干燥方式为在标准状态下利用低温(例如< 50。C)低压将微脂粒/ 微胶粒进行干燥，或其他干燥步骤以获得干燥粉末。
以新颖巯基官能化的两性化合物为主的剂量形式，并不仅限于口服悬浮液或 存在胶囊中的干燥粉末。其他优选的剂量形式包括鼻部或肺部喷雾剂。
药物一般包括两大类1.亲水性药物，和2.亲脂性药物。特别对于具有半 衰期少于3小时的药物，以经巯基官能化两性化合物为主的微脂粒/微胶粒的粘 膜粘连性，可促成持续释出与更恒定的血浆浓度，并且能减少投药次数。亲水 性药物，包括但不限于，治疗性肽类，如胰岛素、降钙素、甲状旁腺素及类升 糖素肽。许多各类亲脂性药物，包括但不限于，紫杉醇(paclitaxd)、多柔比星 (doxorubicin)或两性霉素B(amphotericin B),可使用以经巯基官能化两性化合物 为主的剂量形式投药。而且，该技术可用于基因递送，或通过非侵入性投药途 径的疫苗接种。于本发明所描述的药物递送系统，包括在有巯基存在下增进其 活性的药物种类，例如木瓜蛋白酶与枯草杆菌蛋白酶。
根据本发明另一实施例，新颖的经巯基官能化两性化合物是欲用于制备微脂 粒和/或微胶粒,以供非侵入性药物递送系统，特别是粘膜粘连性药物递送系统。主要的非侵入性途径，包括但不限于，经口腔、鼻、肺、阴道、直肠、经皮 肤或口服途径。 一种不同于一般持续释放型态的药物递送系统，可达成该持续 释放型态的药物递送系统，可通过使用不同种类的二硫化合键，在微脂粒和/或 微胶粒表面来修饰或其它交联作用来达成。
根据本发明，递送系统的投药所含有的有效剂量药物，该剂量可根据所属技 术领域中具有通常知识者对于特定药物的剂量加以选择。然而，必须考虑的是， 当使用本新颖药物递送系统时，因为改善药物穿透能力与配合其他优点功效， 而可降低所使用的药物剂量。
因此，本发明主要的目的在于通过组合前述各种机制，增进已经核准的药 物的生物利用性。本发明的投药途径为非侵入性、经粘膜吸收或部分经接种疫 苗方式吸收等的组合。
巯基团可与各种离子复合，尤其是锌离子。因此，本发明所描述的经巯基官 能化的两性化合物，也可以于吸收部位直接与锌或其他离子复合，而导致部分 酵素抑制作用。也可通过将酵素直接与本发明所描述的经巯基官能化两性化合 物结合，而介导酵素抑制作用。于是，本发明所描述的经巯基官能化的两性化 合物也可被使用作为酵素抑制剂，特别是对于胃肠道的锌依赖性酵素，包括但
不限于羧基肽酶A、 B、 M与P、内肽酶(neprilysin)、 二肽基肽酶IV、肽基二肽 酶A及胺基肽酶I、 A、 N、 P与W。
请参阅图1所示，其为包含经巯基官能基的两性化合物，是均一地聚合成微 脂粒的状态示意图。根据本发明的具体实施例，经巯基官能化的两性化合物， 可均匀地形成微脂粒和/或微胶粒，而形成微脂粒和/或微胶粒的方法，其属于所 属技术领域中具有通常知识者可依申请前的现有技术完成。根据本发明另一具体实施例，可通过经巯基官能化两性化合物的巯基与粘液 的巯基间形成双硫键，而媒介该经巯基官能化两性化合物的粘膜粘连性。请参
阅图2所示，其表示该巯基官能化的两性化合物的媒介机制，微脂粒和/或微胶 粒10表面的巯基11，可与粘膜20上的表皮细胞的巯基21形成双硫键。又，小 粒径的微脂粒和/或微胶粒可助于延长在粘膜上的留滞时间。
此外，也可以不同方式合成巯基官能化的两性化合物，包括将不同单体聚合 成于其亲水部分中具有位于末端的巯基团的共聚物，该经巯基官能化的基团共 聚物(block-copolymer)主要用于形成表面具有外露的巯基的微胶粒。请参阅下列 反应式，其为一种基团共聚物的修饰作用的实施例。反应式中使带有巯基的半 胱氨酸结合至pluronic⑧共聚物上。
HO
CH ，CH ，O
CH 2 CHO CH，
CH2CH 20
H
2
」m
(l)经由添加半胱氨酸导入一个巯基:
CH。CH ，O
CH 2CHO
CH，CH ，O
H
m
(2)经由添加半胱氨酸导入两个巯基:
o
CH。CH ,O
■SH
CH2CHO I
CH,
CH,CH ,O
-NH.
SH主要的合成方法是将含有至少一个位于该化合物的亲水性部分的官能基I 的两性化合物，与含有至少一个官能基II的带有巯基的化合物进行反应；官能 基I与II，包括但不限于，伯胺类、甲醇类、羧基或羧酸氯化物，优选的合成途 径为，将(例如)磷酸类如磷脂酰乙醇胺的伯胺基，与(例如)胺基酸如半胱氨酸或 谷胱甘肽脂羧基形成酰胺键。对于羧基的活化，可使用额外的化合物，例如， 碳二酰亚胺，如氯化l-乙基-3- (3-二甲胺基丙基)碳二酰亚胺(EDAC)，如实 施例一。
另一种用于合成经巯基官能化两性化合物的合成途径，包括通过使用亚胺基 硫烷HCL(形成硫丁基眯)，或异丙酮-S-乙烯基硫代乙酰亚胺化物(形成硫基乙 眯)，将磷脂类的伯胺基加以修饰，如实施例二。
用于使共聚物例如聚醚pluronics 与带有巯基的半胱氨酸或N-乙烯基-半 胱氨酸基间形成共价键的优选合成途径以形成酯类。酯化反应可通过将带有巯 基的化合物的羧基，与共聚物(例如聚醚pluronics )位于末端的甲醇(一级醇) 基进行酸催化反应而完成。其他合成途径包括将带有巯基的化合物的羧酸氯化 物，与共聚物的醇基进行反应。于所有此等反应中，可通过适宜的保护基团将 其他官能基加以保护。
在本发明中所使用的专有名词"两性化合物(amphiphilic compound)"意指同 时具有亲水性和亲脂性部分的化合物。在本发明中，两性化合物的主体优选是 指例如胆固醇硫酸酯、胆固醇磷酸酯、磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine) 或磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine)。
为能详细了解本发明的技术特征和实用功效，并可依照说明书的内容来实 施，并进一步以附图所示的优选实施例详细说明如后实施例
实施例~:磷脂酰基乙醇胺-谷胱甘肽共轭物的合成
通过使谷胱甘肽的羧基部分与磷脂酰乙醇胺的伯胺基形成酰胺键，而将经还 原的谷胱甘肽共价接附至磷脂酰乙醇胺。
首先，将1克磷脂酰乙醇胺溶解于水中，将pH值调整至6.0。之后，于搅
伴下将5克还原谷胱甘肽溶于10毫升纯化水中，然后，将溶于5毫升纯化水的 氯化l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二酰亚胺(l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride; EDAC)加入，其终浓度为200mM。其后，将溶于5 毫升纯化水中的N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide; NHS)于激烈搅拌下 加入该反应混合物中，其终浓度为200mM。将pH值以5MNaOH调整至6.0。 将反应混合物于室温下，于持续搅拌下培育7小时。将所成的磷酸酰乙醇胺-谷 胱甘肽共轭物以适当方式进行纯化。磷脂酰乙醇胺与磷脂酰乙醇胺-谷胱甘胺的 反应结构如下
实施例二磷酸酰乙醇胺-硫基乙眯的合成
为获得具有所希望浓度的磷脂质溶液，遂将500毫克磷脂酰乙醇胺溶解于预 定体积的水中。将pH值调整至6-6.5。待完全溶解后，将500毫克异丙基-S-乙 酰基硫代乙酰亚胺化物于持续搅拌下，分成五等份历时1.5小时加入。将反应混合物于室温下再另搅拌30分钟。然后，将NH4OH经30分钟加入，其终浓度为 0.1M 。最后，将三(2-羧基乙基)磷盐酸盐(tris(2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride; TCEP)经30分钟加入。将所成的经硫基官能化磷脂酰乙醇胺进行 纯化。未经修饰和新颖经修饰的磷脂酰乙醇胺的结构为
<formula>formula see original document page 18</formula>为获取具有巯基化官能基的聚醚(pluronic)，可通过甲苯磺酸(tosylate)或经 溴化的中间产物使醇基转换为巯基。其中用以合成甲苯磺酸中间产物、对甲苯 磺酰氯O -toluenesulfonyl chloride),或合成溴化中间产物的溴化物如PBr3、 Ph3P/CBr4或HBf4均可使用。其中在步骤中，也可视需要地使用适当的亲核剂， 例如，硫脲(thiourea)、硫乙酸钠(sodium thioacetate)、硫L氰4t钾(potassium thiocyanate)或三硫代碳酸纟内(sodium trithiocarbonate)。
实施例三合成巯基化官能基的pluronic P85
请参阅图3所示，为本实施例的反应流程示意图。取100 ml且设有滴入口 (dropping funnel)、加热器、氮注入口(nitrogen inlet)的3-颈反应烧瓶，并将反应 烧瓶内充氮。将液态的氢氧化钠(例如以60mmol溶于12ml的蒸馏水中)，及将 在10ml内所含的30 mM聚醚pluronic P85注入反应烧瓶中并在快速搅拌下冷却 至3 。C。将p-甲苯磺基氯(toluene sulfonyl chloride,艮卩，TsCl)(在20mL中含有60mM)移转至漏斗中，并在15分钟内逐渐加入，并维持其温度在3-l(TC之间。 在0。C下搅拌反应混合物4小时，而后以乙醚(Et20)萃取并以真空干燥。自上述 步骤获取15 mmol的甲苯磺酸中间产物(Tosylate intermediate)后，将15ml乙醇 (95%)及30 mmol硫代尿素(thiourea)加入一个50ml的反应烧瓶中。该烧瓶与一 个冷凝器及一个氮注入器连结，使该反应混合物混合(refluxed)3小时。将氢氧化 钠(NaOH，例如在5ml水中含有20 mmol)加入并继续反应3小时。浓縮该反应 混合物后，以蒸馏水稀释，并以盐酸(HC1)中和，最后以二氯甲烷(CH2Cb)萃取 和蒸发。最终产物，即，具巯基化官能基的聚醚pluronicP85，经由灭菌的方式 单离。
以上所述，仅是本发明的优选实施例，并非对本发明作任何形式上的限制， 任何本领域技术人员，若在不脱离本发明所提技术特征的范围内，利用本发明 所揭示技术内容所作出局部更动或修饰的等效实施例，并且未脱离本发明的技 术特征内容，均仍属于本发明技术特征的范围内。
权利要求
1. 一种两性化合物，其以硫酸酯或磷酸酯为主体，该两性化合物的亲水性部分连接有一个或一个以上的巯基。
2. 如权利要求1所述的两性化合物，其中该硫酸酯为胆固醇硫酸酯。
3. 如权利要求1或2所述的两性化合物，其中磷酸酯为胆固醇磷酸酯、磷脂 酰乙醇胺或磷脂酰丝氨酸。
4. 如权利要求3所述的两性化合物，其中该两性化合物为磷脂酰乙醇胺-谷 胱甘肽或磷脂酰乙醇胺-硫基乙眯。
5. —种微脂粒，其利用权利要求1至4任一项所述的两性化合物所构成。
6. 如权利要求5所述的微脂粒，其中该微脂粒中心含有亲水性药物。
7. 如权利要求6所述的微脂粒，其中该微脂粒中心所含的亲水性药物为治疗 性肽类药物。
8. 如权利要求7所述的微脂粒，其中该治疗性肽类药物为胰岛素、降钙素、 甲状旁腺素或类升糖素肽。
9. 如权利要求5所述的微脂粒，其中该微脂粒的膜上含有亲脂性药物。
10. 如权利要求9所述的微脂粒，其中该亲脂性药物为紫杉醇、多柔比星或 两性霉素B。
11. 如权利要求5所述的微脂粒，该微脂粒为悬浮液、胶囊、干燥粉末、颗 粒、片剂、喷雾剂或吸入剂的形式。
12. —种微胶粒，其利用权利要求1至4任一项所述的两性化合物所构成。
13. 如权利要求12所述的微胶粒，其中该微胶粒中心含有亲水性药物。
14. 如权利要求13所述的微胶粒，其中该微胶粒中心所含的亲水性药物为治 疗性肽类药物。
15. 如权利要求14所述的微胶粒，其中该治疗性肽类药物为胰岛素、降钙素、 甲状旁腺素或类升糖素肽。
16. 如权利要求12所述的微胶粒，其中该微胶粒的膜上含有亲脂性药物。
17. 如权利要求16所述的微胶粒，其中该亲脂性药物为紫杉醇、多柔比星或 两性霉素B。
18. 如权利要求12所述的微胶粒，该微胶粒为悬浮液、胶囊、干燥粉末、颗 粒、片剂、喷雾剂或吸入剂的形式。
19. 一种利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒和/或微胶粒来增 加药物活性的应用。
20. 如权利要求19所述的应用，其中该药物为木瓜蛋白酶与枯草杆菌蛋白
21. 如权利要求19所述的应用，其中该药物为亲水性治疗性肽类药物。
22. 如权利要求21所述的应用，其中该治疗性肽类药物为胰岛素、降钙素、 甲状旁腺素或类升糖素肽。
23. 如权利要求19所述的应用，其中该药物为亲脂性药物。
24. 如权利要求23所述的应用，其中该亲脂性药物为紫杉醇、多柔比星或两 性霉素B。
25. —种利用经巯基官能化的两性化合物所形成的微脂粒和/或微胶粒作为 酵素抑制剂的应用。
26. 如权利要求25所述的应用，其中该酵素为离子依赖型酵素。
27. 如权利要求26所述的应用，其中该离子依赖型酵素为二价阳离子依赖型 酵素。
28. 如权利要求27所述的应用，其中该二价阳离子为锌离子。
29. 如权利要求28所述的应用，其中该离子依赖型酵素为羧基肽酶A、 B、M或P、内肽酶、二肽基肽酶IV、肽基二肽酶A及胺基肽酶I、 A、 N、 P或W。
30. —种制造巯基化两性化合物的方法，其包括 使磷脂酰乙醇胺溶解于水中以形成磷脂酰乙醇胺溶液；将1倍至5倍体积的还原谷胱甘肽或异丙基-S-乙酰基硫代乙酰亚胺化物与 磷脂酰乙醇胺溶液混合；搅拌后，加入碱液持续搅拌；及 自溶液中纯化两性化合物。
31. 如权利要求30所述的方法，其中以1克磷脂酰乙醇胺溶解于水中；将5克经还原谷胱甘肽溶于10毫升水后，搅拌加入前述磷脂酰乙醇胺溶液;另加入氯化l-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二酰亚胺5毫升至前述含有还原谷 胱甘肽及磷脂酰乙醇胺溶液中使溶液的最终浓度为200mM;再加入最终浓度为200mM的N-羟基琥珀酰亚胺5毫升至前述溶液，经搅 拌后，以5MNaOH调整pH值至6.0，并持续搅拌培育7小时；及收集上述合成的两性化合物。
32. 如权利要求30所述的方法，其中以500毫克磷脂酰乙醇胺溶解于水；将500毫克异丙基-S-乙酰基硫代乙酰亚胺化物于持续搅拌下，分成五等份 历时1.5小时加入；搅拌30分钟后，加入NH4OH使溶液的最终浓度为0.1M; 加入三-(2-羧基乙基)磷脂酸盐；及 自溶液中纯化两性化合物。
全文摘要
本发明提供一种两性化合物，其以硫酸酯或磷酸酯为主体，并于化合物的亲水性部分连接有一个或一个以上的巯基；利用本发明所提供的两性化合物，其可形成微脂粒或微胶粒，进而可通过该微脂粒或微胶粒，作为非侵入性的药物递送系统；该微脂粒或微胶粒也可作为酵素调节方面的应用。
文档编号C07K5/093GK101434646SQ200710166998
公开日2009年5月20日 申请日期2007年11月14日 优先权日2007年11月14日
发明者魏马汀 申请人:政德制药股份有限公司