神经介肽u受体激动剂及其用途的制作方法

专利名称：：神经介肽u受体激动剂及其用途的制作方法神经介肽u受体激动剂及其用途交叉相关的申请本申请要求2006年3月20日申请的美国临时申请序列号60/783,933的权益。
背景技术：
：Ci)发明领域本发明涉及用于治疗代谢疾病如肥胖的神经介肽u受体激动剂。(2)相关技术的描述神经介肽U(neuromedinU,NMU)最初基于其收缩大鼠子宫平滑肌的能力而分离自猪脊髓，自那以后已涉及多种其它的生理过程，包括应激、伤害性感受、炎症、心血管功能和能量稳态。NMU的表征已鉴定出3种具有类似生物活性的肽在人、猪和狗中的全长NMU(25-聚体(NMU-25))，在大鼠和小鼠中的23-聚体(NMU-23),以及8-聚体(NMU-8)。NMU-8来源于全长NMU的切割，与全长前体共有相同的C-末端。NMU-8在脊推动物中是高度保守的，含有7个在已检验的所有物种之间都相同的C-末端残基；这些残基对生物活性至关重要(Brighton等，Pharmacol,Rev.56:231-248(2004))。NMU在调节能量稳态方面的作用得到药理学数据和遗传数据的支持。NMU的特性包括该物质在中枢给予时观察到的抑制食物摄取和增加能量消耗(Howard等，Nature406:70-74(2000);Nakazato等，Biochem.Biophys.Res.Comm.277:191-194(2000);Ivanov等，Endocrinol.143:3813-3821(2002);和Wren等，Endocrinol.,143:4227-4234(2002))。NMU-缺陷小鼠出现以摄食过量和降低的能量消耗为特征的肥胖(Hanada等，Nat.Med.,10:1067-1073(2004))，过度表达NMU的转基因小鼠瘦且食欲低(Kowalski等，J.Endocrinol.185:151-164(2005))。动物的内部能量状态同样影响NMU的表达和释》文(Wren等，同上)。已鉴定出两种高亲和力NMU受体NMURl(国际专利申请号PCT/US99/15941)和NMUR2(美国专利序号7163799)。NMURl主要在外周中表达，而NMUR2主要在脑中表达。药理学实验已用于更好地确定NMU对能量稳态的短期和长期作用，并鉴定哪种NMU受体涉及介导这些作用。业已表明，中枢或外周急性给予NMU在小鼠中以剂量依赖性方式减少食物摄取。中枢给予的NMU的降食欲作用在NMUR2-缺陷(A卩聽W,小鼠中不存在，但在NMURl-缺陷(^^〃勺小鼠中存在。相反，外周给予的NMU的降食欲作用在iVmw/;小鼠中不存在，但在Mm^2;小鼠中存在。另外，急性外周给予NMU在小鼠中剂量依赖性增加核心体温，提示NMUR1还可以调节能量消耗。中枢或外周慢性给予NMU在小鼠中再次以剂量依赖性方式降低食物摄取、体重和肥胖。在A^wry-转基因小鼠中，体重、身体组成、体温和食物摄取很大程度上不受慢性中枢给予大鼠NMU-23影响。在Mm^,-转基因小鼠中，体重、身体组成和食物摄取很大程度上不受慢性外周给予大鼠NMU-23影响。因为NMUR1和NMUR2所介导效力的作用部位不同，且似乎独:此独立，但对肥胖有作用，所以提示NMUR1选择性激动剂和NMUR2需要可用于治疗代谢疾病的神经介肽U受体激动剂。发明简述本发明提供神经介肽u受体激动剂。一方面，神经介肽u受体激动剂对一种受体亚型是特异性的，另一方面，神经介肽u受体激动剂能够结合和刺激NMUR1或NMUR2受体这二者。在其它方面，神经介肽U受体激动剂已^皮衍生化，使神经介肽U受体激动剂能够穿过血脑屏障，并与脑中的NMU受体相互作用。神经介肽U受体激动剂可在治疗上使用，并用作研究工具。神经介肽U受体激动剂的治疗应用包括给予个体神经介肽U受体激动剂，以治疗侵袭个体的代谢疾病。这类疾病包括但不限于肥胖症、代谢综合征或X综合征和II型糖尿病。糖尿病并发症，例如视网膜病，由此也可受到积极影响。肥胖是诸如糖尿病、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型癌症的共同病症(comorbidity),并可以明显促进这些疾病。给予本文7〉开的一种或多种神经介肽U受体激动剂以在个体中实现降低体重也可以用于预防这些疾病，并可以用作任一种上述疾病以及其它疾病的治疗的组成部分。在其它实施方案中，提供在个体中治疗代谢疾病的方法，包括给予该个体上述的一种或多种神经介肽U受体激动剂。代谢疾病可以选自糖尿病、代谢综合征、高血糖症和肥胖，并可以经外周途径给予到脑，例如口、粘膜、颊、舌下、鼻、直肠、皮下、经皮、静脉内、肌内或腹膜内途径。最后，可将神经介肽U受体激动剂给予个体，以实现该个体的食物摄取减少、实现该个体的体重增加减轻、防止该个体体重增加、实现该个体的体重下降和/或防止该个体的体重反弹。因此，本发明提供分离的神经介肽U受体激动剂，所述神经介肽U受体激动剂具有式(I)Zl-肽-Z2及其药学上可接受的盐，其中所述肽具有氛基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Xl0-Xll-Xl2-Xl3-Xl4-Xl5-Xl6-Xl7-Xl8-Xl9-X20-X21國X22画X23画X24画X25(SEQIDNO:27)，其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;X22为r、k、A或L;氨基酸X23为p、Sar、A或L;氨基酸X24为R、Harg或K;而氨基酸X25为N、任何D-或L-氨基酸、Nle或D-Nle、或A;Zl为任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至N-末端氛基；Z2为NH2或任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至C-末端羧基。在神经介肽U受体激动剂的具体方面，所述肽具有氛基酸序列X1國X2画X3隱X4誦X5-X6-X7-X8画X9画X10國X11-X12画X13画X14-X15-X16誦Xl7-Xl8-F-L-F-R-P-R-N(SEQIDNO:l)，其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在，其在具体的方面具有选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6的氨基酸序列。在现时优选的方面，所述肽具有示于SEQIDNO:2的氨基酸序列。在神经介肽U受体激动剂的另一方面，所述肽包含氨基酸序列F-R-V-D-E-E-F-Q-S-P-F-A-S-Q-S-R-G-Xl8_xl9-x20-X21-X22-x23-X24-X25(SEQIDNO:7)，其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱画氨基酸或酰基；氨基酸X19为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；M酸X20为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X22为K、A或L;氨基酸X23为Sar、A或L;氨基酸X24为Harg或K;和氨基酸X25为任何D-或L-氨基酸、Nle或D-Nle、或A，其在具体的方面具有选自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24和SEQIDNO:25的氨基酸序列。在神经介肽U受体激动剂的又一方面，所述肽包含氨基酸序列Xl—X2-X3画X4画X5漏X6-X7國X8(SEQIDNO:8)，其中氨基酸Xl为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X2为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X3为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X4为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X5为K、A或L;氛基酸X6为Sar、A或L;M酸X7为Harg或K;氨基酸X8为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A,其在具体的方面具有选自SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO、SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的氨基酸序列。在以上神经介肽U受体激动剂的其它方面，N-末端氛基酸共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。在神经介肽U受体激动剂的再其它方面，所述肽还在该肽的N-末端包含半胱氨酸残基，任选地存在针对所述半胱氨酸残基的保护基，该保护基如果存在的话，则连接至该半胱氨酸残基的N-末端M。在神经介肽U受体激动剂的具体方面，在N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。在现时优选的实施方案中，神经介肽U受体激动剂具有SEQIDNO:2的氨基酸，其还在该肽的N-末端包含半胱氨酸残基，针对该半胱氨酸残基存在连接至半胱氨酸残基的N-末端氨基的保护基和连接至硫醇基的PEG分子。神经介肽U受体激动剂还可以包含具有远端和近端的连接基团。连接基团以其远端共价连接至该肽的N-末端，并以近端共价连接至半胱氨酸残基的羧基末端，在半胱氨酸残基上任选地存在保护基，该保护基如果存在的话，则连接至该半胱氨酸残基的N-末端氨基。在具体的方面，其中半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。本发明还提供神经介肽U受体激动剂的任何一个或多个实施方案和方面在制备用于治疗代谢疾病的药物中的用途。疾病包括但不限于肥胖症、代谢综合征或X综合征以及II型糖尿病。诸如视网膜病的糖尿病并发症由此也可受到积极影响。肥胖是诸如糖尿病、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型癌症的共同病症，并可以明显促进这些疾病。因此，本发明提供含有一种或多种任何上述神经介肽U受体激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物。本发明还提供一种用于生产可以穿过血脑屏障的神经介肽u受体激动剂的方法，包括使一种或多种PEG分子与该肽共价连接，其中所述一种或多种PEG分子使所述肽能够穿过血脑屏障。因此，在具体的方面，神经介肽U受体激动剂具有式(I)Zl画肽画Z2及其药学上可接受的盐，其中所述肽具有氛基酸序列X1-X2-X3-X4画X5誦X6-X7-X8画X9國X10画X11-X12隱X13誦X14画X15誦X16誦X17-X18國X19-X20國x21画x22國x23画X24画x25(SEQIDNO:27)，其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸X8为不存在、Y、W、F、脱誦氨基酸或酰基；M酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；M酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;X22为R、K、A或L;M酸X23为p、Sar、A或L;氨基酸X24为R、Harg或K;而氨基酸X25为N，任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle,A;Zl为任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至N-末端氨基；Z2为NH2或任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至C-末端羧基。还提供一种用于生产包含全部或部分的NMU-25肽的神经介肽U受体激动剂的方法，所述NMU-25肽对神经介肽U受体亚型是特异性的，所述方法包括将在该肽的C-末端的7个氨基酸中的一个或多个变为对人NMU-25肽为非天然的氨基酸或氨基酸类似物。因此，一方面，所述肽包含氨基酸序列F-R-V-D-E-E-F-Q-S-P-F-A-S曙Q-S画R画G國Xl8漏Xl9-X20画x21-X22國x23腸x24-x25(SEQIDN0:7),其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe國Leu、D画Ala或A;^J^酸X21为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X22为K、A或L;氨基酸X23为Sar、A或L;氨基酸X24为Harg或K;而氨基酸X25为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle,或A,其在具体的方面具有选自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24和SEQIDNO:25的^J^酸序列。在神经介肽U受体激动剂的另一方面，所述肽包含氨基酸序列Xl-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8(SEQIDNO:8)，其中氨基酸Xl为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X2为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X3为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X4为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氛基酸、A或W;氨基酸X5为K、A或L;氛基酸X6为Sar、A或L;氨基酸X7为Harg或K;而氨基酸X8为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A,其在具体的方面具有选自SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO、SEQIDNO:l1、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的氨基酸序列。还提供一种在个体中治疗代谢疾病的方法，包括给予该个体治疗有效量的神经介肽U受体激动剂，以治疗代谢疾病，所述神经介肽U受体激动剂具有式(I)Zl國肽-Z2其中所述肽具有氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10國X11画X12國X13-X14-X15画X16-X17國X18画X19画X20-X21画X22画X23一X24-X25(SEQIDNO:27)，其中M酸1-17可以为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氮基酸、芳香族氨基酸、A或W;X22为R、K、A或L;氨基酸X23为p、Sar、A或L;氨基酸X24为R、Harg或K;而氨基酸X25为N,任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，A;Zl为任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至N-末端氨基；Z2为NH2或任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至C-末端羧基。该方法尤其可用于治疗选自肥胖症、代谢综合征或X综合征、II型糖尿病、糖尿病并发症、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型癌症的代谢疾病。在所述方法的具体方面，所述肽具有氛基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7画X8隱X9画X10-X11-X12画X13隱X14-X15画X16國X17-X18画F國L誦F-R-P-R-N(SEQIDNO:l)，其中氨基酸1-17可以为任何M酸或不存在，其在具体的方面具有选自SEQIDN0:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6的氨基酸序列。在现时优选的方面，所述肽具有示于SEQIDNO:2的氨基酸序列。在该方法的另一方面，所述肽包含氨基酸序列F-R-V-D-E-E-F-Q隱S國P國F-A國S-Q-S-R-G画Xl8陽Xl9-X20國x21-X22陽x23國x24-X25(SEQIDNO:7)，其中M酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-M酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氩基酸X20为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X22为K、A或L;氨基酸X23为Sar、A或L;氨基酸X24为Harg或K;氨基酸X25为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A，其在具体方面具有选自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24和SEQIDNO:25的氨基酸序列。在所述方法的又一方面，所述肽包含氛基酸序列X1-X2-X3-X4-X5画X6國X7誦X8(SEQIDN0:8)，其中^ij^酸Xl为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X2为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X3为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X4为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X5为K、A或L;氨基酸X6为Sar、A或L;氨基酸X7为Harg或K;而氨基酸X8为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A，其在具体方面具有选自SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的M酸序列。在以上方法的其它方面，N-末端氨基酸共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。在神经介肽U受体激动剂的再其它方面，所述肽在该肽的N-末端还包含半胱氨酸残基，任选地存在针对该半胱氨酸残基的保护基，该保护基如果存在的话，则连接至该半胱氨酸残基的N-末端氨基。在所述方法的具体方面，在N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。在现时优选的实施方案中，神经介肽U受体激动剂具有SEQIDNO:2的氨基酸，其在该肽的N-末端还包含半胱氨酸残基，针对该半胱氨酸残基存在连接至半胱氨酸残基的N-末端氨基的保护基和连接至硫醇基的PEG分子。神经介肽U受体激动剂还可以包含具有远端和近端的连接基团，所述连接基团以其远端共价连接至该肽的N-末端，连接基团的近端共价连接至半胱氨酸残基的羧基末端，任选地存在针对所述半胱氨酸残基的保护基，该保护基如果存在的话，则连接至半胱氨酸残基的N-末端氨基。在具体的方面，其中半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和椋榈酰的分子。在该方法的现时优选的实施方案中，神经介肽U受体激动剂具有式Ac-C2-肽-CONH2，其中Ac为乙酰基，C2为Cys(PEG)240kDa,所述肽具有示于SEQIDNO:2的氛基酸序列。附图筒述图1A表明，外周给予激动剂H减少食物摄取，这些降食欲作用由NMUR1介导。于暗期开始前约30分钟对膳食诱导的肥胖^附2^7+/+和八^^7-/-小鼠ip给予溶i某(水)、3.25mmol/kg的化合物H或3.25mmol/kg的hNMU-25,并分别于约2和18小时(过夜)后测量食物摄取。*，相对于溶媒P〈0.05，n-每个治疗组11-12只。图1B显示图1A中小鼠体重的过夜变化。图2A表明，急性外周给予NMURl-选择性激动剂H在野生型小鼠中显著降低食物摄取，但在Mww7敲除小鼠中不会如此，证实NMUR1是激动剂H的降食欲作用所必需的。另外，这些数据证实，作用。图2B表明，急性外周给予NMURl-选择性激动剂NMU13在野生型小鼠中也显著降低食物摄取，但在Mm/W敲除小鼠中不会如此，证实NMUR1也是该激动剂的降食欲作用所必需的。另外，这些数据证实，NMUR1-选择性激动作用足以概括泛NMUR1/2激动剂NMU的降食欲作用。图3A表明，急性皮下给予PEG化NMU在给药后3天内降低食物摄取。与PEG化类似物的体外和体内代谢谱相一致，NMU1在与hNMU-25相比时在降低过夜食物摄取方面表现出更高的功效，在给药后3天内观察到食物摄取减少。还观察到体重显著降低(图3B)。图3B显示图3A中小鼠的体重变化。图4A表明，NMU12也是一种有效的降食欲肽。与NMU1类似，在单次皮下给予该激动剂后3天内观察到食物摄取和体重(图4B)显著下降。图4B显示图4A中小鼠的体重变化。图5A表明，NMU12的降食欲作用由NMUR1和NMUR2受体介导。急性给予NMU12在野生型动物中高度有效，但在NMUR1/NMUR2双敲除动物中没有观察到作用。图5B显示图5A中小鼠体重的每日变化。图6A表明，PEG化的NMU12的降食欲作用由NMUR1和NMUR2受体这二者介导。在给药后两天内在NMUR1敲除动物中观察到食物摄取和体重(图6B)降低。然而，仅在NMUR2敲除动物中观察到过夜作用。这与仅由NMUR1介导的hNMU-25的降食欲作用相反，证实hNMU-25和NMU12具有不同的作用机制。图6B显示了图6A中的小鼠在4天内的体重变化。图7A表明，慢性给予NMU12可以降低食物摄取和体重。NMU12每曰1次(QD)、每隔1日1次(Q2D)或每3天1次(Q3D)给药。该图显示了在开始治疗后9天内体重的累积变化。最后1剂在研究的第4天给予，检测进行至第9天。图7B表明，图7A中小鼠的累积食物摄取在用于NMU12的所有给药范式中都被显著降低。于这些剂量的食物摄取相对于溶媒治疗组降低12國27%。图7C表明，相对于溶i某对照组，图7A中小鼠体重的累积变化范围为降低3.3%至多达7.3%。图8显示了用掺入(spike-in)试验对比hNMU-25与PEG化激动剂NMU1和NMU12在血浆中的体外稳定性。PEG化在人血浆中提供更高的稳定性。hNMU-25在人血浆中的半衰期低于16小时，而PEG化激动剂在于37。C温育的人血浆中表现出超过3天的半衰期。图9显示了hNMU-25和PEG化激动剂NMU12在小鼠中的药代动力学特性的比较。PEG化提供了更高的体内代谢稳定性。对动物皮下给药10mg/kghNMU-25或NMU12。在给药后不同的时间点收集血浆，并用生物测定检测。虚线指示测定的检测限度(LOD)。发明详述本发明提供神经介肽U受体激动剂。本文描述的神经介肽U受体激动剂作用于NMU受体、结合NMU受体并刺激NMU受体活性。一方面，神经介肽U受体激动剂对一种受体亚型是特异性的，其中此特异性纟皮定义为在对应的NMUR1或NMUR2受体结合测定中具有的IC50值低于约200nM。选择性基于功能活性或人NMUR2/人NMUR1的EC50比率(对于NMUR1选择性肽)和人NMURl/人NMUR2的EC50比率(对于NMUR2选择性肽)。此外，本文描述的选择性神经介肽U受体激动剂范围为约21-909倍选择性(针对NMUR1)和约2-200倍选择性(针对NMUR2)。另一方面，神经介肽U受体激动剂能够结合并刺激NMUR1和NMUR2受体这二者，并已^皮衍生化，使神经介肽U受体激动剂能够穿过血脑屏障，并与脑中的NMU受体相互作用。神经介肽U受体激动剂可在治疗上使用，并用作研究工具。可将一种或多种神经介肽U受体激动剂给予个体，以治疗侵袭个体的代谢疾病。这类疾病包括但不限于肥胖症、代谢综合征或X综合征和II型糖尿病。糖尿病并发症，例如-见网膜病，由此也可受到积极影响。肥胖是一种诸如糖尿病、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型癌症的共同病症，并可以明显促进这些病症。给予本文公开的一种或多种神经介肽U受体激动剂以在个体中实现体重下降还可以预防这些疾病，并可以用作任一种上述疾病以及其它疾病的治疗的组成部分。在其它实施方案中，提供在个体中治疗代谢疾病的方法，包括给予该个体上述的一种或多种神经介肽U受体激动剂。代谢疾病可以选自糖尿病、代谢综合征、高血糖症和肥胖，并可以经外周途径给予到脑，例如口、粘膜、颊、舌下、鼻、直肠、皮下、经皮、静脉内、肌内或腹膜内途径。在具体的实施方案中，神经介肽U受体激动剂可用于在个体中治疗多种疾病。根据本文公开内容，对本领域一般技术人员显而易见的是，可将神经介肽U受体激动剂给予个体，以实现该个体的食物摄取减少、实现该个体的体重增加减轻、防止该个体体重增加、实现该个体的体重下降和/或防止该个体的体重反弹。研究工具用途可包括神经介肽U受体激动剂的用途以及NMU受体或其片段的存在。研究工具用途的实例包括筛选对NMU受体有活性的化合物、测定样品或制品中的NMU受体的存在情况以及检验NMU的作用或效力。另外，可通过在釆用测试化合物的竟争实验中使用神经介肽U受体激动剂，使用神经介肽U受体激动剂筛选NMU结合化合物(激动剂或拮抗剂)。本发明的神经介肽U受体激动剂包含通式(I)Zl國肽國Z2及其药学上可接受的盐，其中所述肽具有氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Xl0-Xll-Xl2-Xl3-Xl4-Xl5_xl6-Xl7-Xl8-Xl9-X20-X21-X22-X23-X24隱x25(SEQIDNO:27),其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X19为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；M酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;X22为R、K、A或L;氨基酸X23为p、Sar、A或L;M酸X24为R、Harg或K;而氨基酸X25为N、任何D-或L-氨基酸、Me或D-Nle、A;Zl为任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至N-末端氨基；Z2为NH2或任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至C-末端羧基。在具体的实施方案中，所述肽具有氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6画X7陽X8-X9画X10画X11曙X12画X13-X14画X15-X16画X17-X18画F-L曙F画R画P-R-N(SEQIDNO:l),其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在。具有以上氨基酸序列的具体神经介肽U受体激动剂的氨基酸序列示于表l。在其它实施方案中，所述肽包含氨基酸序列F醫R-V-D-E-E画F-Q-S画P画F-A-S國Q-S-R画G画Xl8—Xl9-X20哩x21-X22画x23國x24画x25(SEQIDN0:7)，其中M酸X18为不存在、Y、W、F、脱-M酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe誦Leu、D-Ala或A;^J^酸X21为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X22为K、A或L;氨基酸X23为Sar、A或L;氨基酸X24为Harg或K;而M酸X25为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A。具有以上氨基酸序列的肽的实例示于表2。在又一个实施方案中，所述肽包含氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8(SEQIDNO:8)，其中氨基酸Xl为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X2为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X3为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;酸X4为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X5为K、A或L;氨基酸X6为Sar、A或L;氨基酸X7为Harg或K;而氨基酸X8为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A。具有以上氨基酸序列的肽的实例示于表2。在具体方面，神经介肽U受体激动剂任选地包含共价连接至N-末端氨基的保护基。共价连接至神经介肽U受体激动剂的N-末端氨基的保护基降低了氨基末端在体内条件下的反应性。氨基保护基包括陽Cl國10烷基、-Cl-lO取代烷基、-C2-10烯基、-C2-10取代烯基、芳基、-Cl-6烷基芳基、-C(0)-(CH2)l-6-COOH、-C(0)-Cl-6烷基、-C(O)-芳基、-C(0)-0-Cl-6烷基或-C(O)-O-芳基。在具体的实施方案中，M末端保护基选自乙酰基、丙基、琥珀酰基、苄基、苄氧基羰基和叔丁M羰基。N-末端氨基酸的脱氨化是设想用于在体内条件下降低M末端的反应性的另一种修饰。其中神经介肽U受体激动剂衍生物连接至聚合物的神经介肽U受体激动剂的化学修饰组合物也包括在本发明范围内。选定的聚合物通常4支修饰得具有单个反应基，例如用于酰化的活性酯或用于烷基化的醛，使得提供给本发明方法的聚合程度可控。聚合物的混合物包括在聚合物的范围内。优选地，为了终产物制品的治疗用途，聚合物将为在药学上可接受的。聚合物或其混合物可以选自例如聚乙二醇(PEG)、单甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纤维素或基于其它碳水化合物的聚合物、聚-(N-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇。在又一些实施方案中，通过PEG化、胆固醇化或棕榈酰化修饰神经介肽U受体激动剂。可对神经介肽U受体激动剂中的任何氨基酸残基进行修饰，然而，在现时优选的实施方案中，修饰是针对神经介肽U受体激动剂的N-末端氨基酸，或者直接修饰N-末端氨基酸，或者通过偶联加至N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基或加至N-末端的连接物如Ttds。在其它实施方案中，神经介肽U受体激动剂的N-末端包含半胱氨酸残基，针对该半胱氨酸残基的保护基偶联该半胱氨酸残基的N-末端氨基，并用N-乙基马来酰亚胺、PEG基团、胆固醇基团或棕榈酰基团衍生化半胱氨酸硫醇基。在又一些实施方案中，将乙酰化半胱氨酸残基加入神经介肽U受体激动剂的N-末端，并用N-乙基马来酰亚胺、PEG基团、胆固醇基团或棕榈酰基团衍生化半胱氨酸的硫醇基。众所周知，某些蛋白的特性可通过连接聚乙二醇(PEG)聚合物而被修饰，该连接增加蛋白的流体力学体积，由此通过肾脏过滤减慢其清除。(参见例如Clark等，J.Biol.Chem.271:21969-21977(1996))。因此，可预见的是，可PEG化核心肽残基来提供增强的治疗利益，例如通过延长体内半衰期增强功效。本发明人已发现，在神经介肽U受体激动剂的N-末端包含PEG基团不仅相比于天然NMU-25肽延长PEG化神经介肽U受体激动剂的血清半衰期，而且能使特定的神经介肽U受体激动剂如NMU12穿过血脑屏障，并与脑中的NMUR2受体相互作用。一般而言，在静脉内给药后，天然NMU-25被由系统循环快速清除。如在图7中所示，将聚乙二醇分子共价连接至人NMU-25(NMU1)的N-末端苯丙氨酸残基的氨基，或共价连接至通过酰胺键共价连接至NMU-25(NMU12)的N-末端苯丙氨酸残基的半胱氨酸残基的硫醇基，显著增加完整的人NMU-25(NMU1)于37。C的半衰期。因此，PEG化神经介肽U受体激动剂将改善神经介肽U受体激动剂的药代动力学和药效学。肽PEG化方法在文献中众所周知，描述于以下参考文献(每个文献均在此引入作为参考)Lu等，Int.J.PeptProteinRes.43:127-38(1994);Lu等，Pept.Res.6:140-6(1993);Felix等，Int.J.Pept.ProteinRes.46:253-64(1995);Gaertner等，Bioconjug.Chem.7:38-44(1996);Tsutsumi等，Thromb.Haemost.77:168-73(1997》Francis等，Int.J.Hematol.68:1-18(1998);Roberts等，J.Pharm.Sci.87:1440-45(1998);和Tan等，ProteinExpr.Purif.12:45-52(1998)。聚乙二醇或PEG意在包含已用于衍生化其它蛋白的任一种形式的PEG,包括但不限于单-(Cl-lO)烷氧基或芳氧基聚乙二醇。适宜的PEG部分包括例如40kDa的甲氧基聚(乙二醇)丙醛(Dow,Midland,Michigan);60kDa的甲氧基聚(乙二醇)丙醛(Dow,Midland,Michigan);40kDa的曱氧基聚(乙二醇)马来酰亚胺-丙酰胺(Dow，Midland,Michigan);31kDa的a-甲基-w-(3-氧代丙氧基)、聚氧乙烯(NOFCorporation,Tokyo);mPEG2-NHS-40k(Nektar);mPEG2-MAL-40k(Nektar)、SUNBRIGHTGL2-400MA((PEG)240kDa)(NOFCorporation,Tokyo)、SUNBRIGHTME-200MA(PEG20kDa)(NOFCorporation,Tokyo)。PEG基团一般经由通过PEG部分上的反应基(例如醛基、氨基、硫醇基或酯基)对神经介肽U受体激动剂上的反应基(例如醛基、氨基、硫醇基或酯基)进行的乙酰化或还原性烷基化连接至神经介肽U受体激动剂。PEG分子可以共价连接至神经介肽U受体激动剂中任何位置的任何Lys、Cys或K(CO(CH2)2SH)残基。可利用N-末端氨基直接将本文所述神经介肽U受体激动剂PEG化到N-末端的任何氨基酸。可将"连接臂"加至神经介肽U受体激动剂，以利于PEG化。已广泛报告了在半胱氨酸的硫醇侧链的PEG化(参见例如Caliceti&Veronese,Adv.DrugDeliv.Rev.55:1261-77(2003))。如果在该肽中没有半胱氨酸残基，则可以通过取代或通过将半胱氨酸加至N-末端氨基酸引入半胱氨酸残基。已被PEG化的那些神经介肽U受体激动剂已通过加至N-末端氨基酸的半胱氨酸残基的侧链被PEG化。或者，PEG分子可以共价连接至神经介肽U受体激动剂的C-末端中的酰胺基团。一般而言，有至少一个PEG分子共价连接至神经介肽U受体激动剂。在具体的方面，PEG分子为分支的，而在其它方面，PEG分子可为线性的。在具体的方面，PEG分子的分子量介于1kDa和100kDa之间。在其它方面，PEG分子选自10、20、30、40、50和60kDa。又在其它方面，PEG分子选自20、40或60kDa。在有两个PEG分子共价连接至本发明的神经介肽U受体激动剂的情况下，每个PEG分子均为1-40kDa，在具体的方面，它们具有20和20kDa、10和30kDa、30和30kDa、20和40kDa或40和40kDa的分子量。在具体的方面，神经介肽U受体激动剂包含mPEG-半胱氨酸。mPEG-半胱氨酸中的mPEG可具有多种分子量。该分子量的范围优选为5kDa-200kDa,更优选为5kDa-100kDa,进一步优选为20kDa-60kDA。mPEG可以为线性的或分支的。目前，优选神经介肽U受体激动剂通过加至N-末端氨基酸的半胱氨酸的侧链被PEG化。目前，激动剂优选包含mPEG-半胱氨酸。mPEG-半胱氨酸中的mPEG可以具有多种分子量。该分子量的范围优选为5kDa-200kDa,更优选为5kDa-100kDa，进一步优选为20kDa-60kDA。mPEG可为线性的或分支的。一种用于PEG化合成的神经介肽U受体激动剂的有用策略包括通过在溶液中形成缀合连接肽和PEG部分，它们各自均携带彼此互相反应的特殊官能团。神经介肽U受体激动剂可易于用常规固相合成制备。神经介肽U受体激动剂被适宜的官能团在特定位点"预活化"。前体在与PEG部分反应前^^纯化并充分表征。肽与PEG的缀合通常于水相中发生，并可以易于通过反相分析HPLC监测。PEG化的神经介肽U受体激动剂可易于通过阳离子交换层析或制备HPLC纯化，并通过分析HPLC、氨基酸分析和激光解吸质谱表征。神经介肽U受体激动剂可以包含其它非序列修饰，例如糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化、羧基化、甲基化或任何其它操作或修饰，例如与标记组分缀合。然而，在具体方面，本文的神经介肽u受体激动剂利用天然氨基酸或天然氨基酸的D异构体、采用非天然氨基酸(例如曱硫氨酸亚砜、曱疏氨酸甲基锍、正亮氨酸、s-氨基己酸、4-氨基丁酸、四氢异喹啉-3-羧酸、8-氨基辛酸、4-氨基丁酸、Lys(N(s)-三氟乙酰基)或合成类似物(例如o-氨基异丁酸、p或y-氨基酸和环形类似物)的取代。在其它方面，神经介肽U受体激动剂包含融合蛋白，其具有为神经介肽U受体激动剂的第一个部分和为异源肽的第二个部分。神经介肽U受体激动剂可通过多种化学技术修饰，以产生和未修饰的神经介肽U受体激动剂具有基本相同的活性和/或具有其它需要特性的衍生物。共价连接至c-末端羧基的保护基在体内条件下降低羧基末端的反应性。例如，无论是羧基末端还是侧链的肽羧酸基团，都可以以药学上可接受的阳离子盐的形式提供，或者可以被酯化，形成Cl-6酯，或^f皮转变为式NRR2的酰胺，其中R和R2各自独立为H或Cl-6烷基，或者组合形成杂环，例如5元环或6元环。羧基末端保护基优选连接至最后一个氨基酸的a-羰基。羧基末端保护基包括但不限于酰胺、曱酰胺和乙酰胺。无论是N-末端还是侧链的肽氨基都可以为药学上可接受的酸加成盐的形式，例如HC1盐、HBr盐、乙酸盐、苯甲酸盐、甲苯磺酸盐、马来酸盐、酒石酸盐和其它有机酸盐，或者可以被修饰为Cl-6烷基或二烷基氨基，或者^支进一步转变为酰胺。可使用众所周知的技术将神经介肽U受体激动剂侧链的羟基转变为Cl-6烷氧基或Cl-6酯。肽侧链的苯环和苯酚环可被一个或多个囟素原子取代，例如氟、氯、溴或碘，或者被Cl-6烷基、Cl-6烷氧基、羧酸及其酯或者这些羧酸的酰胺取代。神经介肽U受体激动剂侧链的亚曱基可被延长为同系C2-4亚烃基。硫醇可以用众多公认保护基中的任一种来保护，例如乙酰胺基团。本领域技术人员还知晓将环形结构引入本发明肽中的方法，以选择和提供对结构的构象约束，从而使得稳定性提高。例如，可以向所述肽添加羧基末端或氨基末端半胱氨酸残基，使得在被氧化时该肽将包含二硫键，由此产生环形肽。其它肽环化方法包括形成好u醚以及氣基和氨基末端酰胺和酯。多糖聚合物是可用于蛋白修饰的另一类水溶性聚合物。葡聚糖是由主要通过al-6键连接的单个葡萄糖亚基组成的多糖聚合物。葡聚糖本身可以多种分子量范围使用，并且可易于获得约1kD至约70kD的分子量。葡聚糖是自身用作溶々某或与另一种溶々某组合的合适的水溶性聚合物(参见例如WO96/11953和WO96/05309)。业已报道了与治疗性或诊断性免疫球蛋白缀合的葡聚糖的应用；参见例如欧洲专利公开号0315456。当葡聚糖根据本发明被用作溶媒时，优选约1kD至约20kD的葡聚糖。如上所述，任选存在"连接"基团。在存在连接基团时，其化学结构并不关4定，因为它主要用作间隔基。然而，在某些实施方案中，连接物自身可以为本发明组合物提供改善的特性。连接物优选由通过肽键连接在一起的氨基酸组成。因此，在具体的实施方案中，连接物由通过肽键连接的l-20个氨基酸组成，其中所述氨基酸选自20种天然氨基酸。正如本领域技术人员所了解的，这些氨基酸中有一些可为糖基化的。在一个更优选的实施方案中，所述l-20个氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺和赖氨酸。甚至更优选地，连接物由大部分在空间上为非位阻的氨基酸(如甘氨酸和丙氨酸)组成。因此,优选的连接物是聚甘氨酸(尤其是(Gly)4、(Gly)5)、聚(Gly-Ala)和聚丙氨酸。连接物的其它具体实例为(Gly)3Lys(Gly)4;(Gly)3AsnGlySer(Gly)2;(Gly)3Cys(Gly)4;和GlyProAsnGlyGly。还可以使用非肽连接物。例如，可以使用烷基连接物，如-NH-(CH2)s-C(0)-，其中s-2-20。这些烷基连接物还可以被诸如低级烷基(例如Cl-6)低级酰基、卤素(例如C1、Br)、CN、NH2、苯基等的任何非空间位阻基团取代。一种代表性的非肽连接物为PEG连接物，其中n使该连接物的分子量为100-5000kD,优选100-500kD。还可以以与上文所述相同的方式改变所述肽连接物，以形成衍生物。其它连接物包括Ttds(l-氨基-4，7,10-三氧杂-13-十三胺琥珀酰亚胺酸(succinimicacid))。本发明包括非对映体以及其外消旋和已拆分光学异构纯形式。神经介肽U受体激动剂可以包含D-氨基酸、L-氨基酸或其组合。一般而言，氨基酸为L-型，特定的氨基酸为D-型。如本领域所知，可如下表示单个氨基酸A-Ala-丙氨酸；C=Cys=半胱氨酸；D-Asp=天冬氨酸；E=Glu=谷氨酸；F=Phe=苯丙氨酸；G=Gly=甘氨酸；H-His-组氨酸；I-Ile-异亮氨酸；K-Lys-赖氨酸；L-Leu-亮氨酸；M-Met-甲石危氨酸；N-Asn-天冬酰胺；P-Pro-月甫氨酸；Q-G1"谷氨酰胺；R-Arg-精氨酸；S-Se"丝氨酸；T-Thr-苏氨酸；V-Val-缬氨酸；W-Trp-色氨酸；和Y-Tyr-酪氨酸。本发明的神经介肽U受体激动剂的实例示于表1，其包含氛基酸序歹'JX1-X2画X3-X4-X5誦X6-X7-X8画X9-X10隱X1l-Xl2-Xl3-Xl4國Xl5隱Xl6-Xl7國Xl8画F-L-F-R画P國R-N(SEQIDNO:l),其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在。神经介肽u受体激动剂于c-末端用氩基保护，于N-末端用乙酰基保护(神经介肽U受体激动剂NMU1除外)。除了神经介肽U受体激动剂NMU2以外，神经介肽U受体激动剂还包括在N-末端的半胱氨酸残基，针对该半胱氨酸残基的乙酰基共价连接该半胱氨酸残基的氨基。如在该表中所示，对于许多神经介肽U受体激动剂，半胱氨酸残基的硫醇基与第二个基团反应。例如，对于该表中显示在N-末端具有Cl的神经介肽U受体激动剂，神经介肽U受体激动剂在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有N-乙酰化半胱氨酸残基，其通过其硫醇基连接至N-乙基马来酰亚胺基；对于该表中显示在N-末端具有C2的神经介肽U受体激动剂，神经介肽U受体激动剂在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有N-乙酰化半胱氨酸残基，其通过其硫醇基连接至(PEG)240kDa;对于显示在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有C4的神经介肽U受体激动剂，神经介肽U受体激动剂在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有N-乙酰化半胱氨酸残基，其通过其硫醇基连接至(PEG)20kDa;对于显示在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有C5的神经介肽U受体激动剂，神经介肽U受体激动剂在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有N-乙酰化半胱氨酸残基，其通过其硫醇基连接至(PEG)220kDa;对于显示在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有C6的神经介肽U受体激动剂，神经介肽U受体激动剂在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有N-乙酰化半胱氨酸残基，其通过其硫醇基连接至(PEG)40kDa;对于显示在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有C3的神经介肽U受体激动剂，神经介肽U受体激动剂在神经介肽U受体激动剂的N-末端具有N-乙酰化半胱氨酸残基，其通过其硫醇基连接至胆固醇。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>C6=Cys(PEG)40kDa，它们各自对应于经由侧链碌^醇用所示MW的分支PEG[(PEG)2]或线性PEG进行PEG化的半胱氨酸残基；C3二Cys(胆固醇基)，对应于经由侧链硫醇连接至胆固醇的半胱氨酸残基；Ttds，l-氨基-4,7,10-三氧杂-13-十三胺琥珀酰亚胺酸；a，D-丙氨酸；Ac=乙酰基；Pam二棕榈酰除了含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的那些神经介肽U受体激动剂以外，示于表l的神经介肽U受体激动剂是双特异性的，因为它们可以结合并活化NMUR1或NMUR2受体。业已发现，含有SEQIDNO:25的神经介肽U受体激动剂为NMUR1特异性的。示于表1的神经介肽U受体激动剂的PEG化似乎延长神经介肽U受体激动剂的血清半衰期，并且有重要意义地，使特定神经介肽U受体激动剂如NMU12能够穿过血脑屏障。例如，如在实施例4及图6A和6B中所示，表明NMU12能够在7Wm^7敲除小鼠中降低食物摄取和降低重量增加。结果表明，外周给予的PEG化肽NMU12能够穿过血脑屏障。PEG化似乎使NMU1、NMU9和NMU20的血清半衰期延长3天，使NMU11和NMU18的血清半衰期延长2天。NMU9和NMU12的差别在于共价连接至N-末端半胱氨酸残基的硫醇基的(PEG)240kDa的来源。本发明的神经介肽U受体激动剂的实例包含氨基酸序列F-R-V-D國E画E誦F國Q國S國P-F國A國S國Q-S-R-G-Xl8漏Xl9画x20画x21-X22-X23画x24画x25基酸Xl8或Xl为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸Xl9或X2为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20或x3为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;^J^酸X21或X4为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X22或X5为K、A或L;氨基酸X23或x6为Sar、A或L;氨基酸X24或X7为Harg或K;而氨基酸X25或x8为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A。具有以上M酸序列的肽的实例示于表2。一般而言，含有SEQIDNO:7或SEQIDNO:8的肽对NMUR1受体是特异性的；然而，如在实施例中所示，神经介肽U受体激动剂N、O和P是双特异性的。<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>还提供含有治疗有效量的一种或多种本文公开的神经介肽u受体激动剂的药物组合物，用于在个体中治疗代谢疾病。这些疾病包括但不限于肥胖症、代谢综合征或x综合征、n型糖尿病、糖尿病并发症如视网膜病、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型的癌症。本文的肥胖相关疾病是与肥胖相关、由肥胖引起或因肥胖产生的疾病。"肥胖症"是存在过量体脂的情况。肥胖症的操作性定义基于身体质量指数(BMI)，按体重与身高(以米计)的平方的比值(kg/m"(bodyweightperheightinmeterssquared)计算。"月巴胖症，，是指在其它方面健康的个体具有大于或等于30kg/m2的身体质量指数(BMI)的情况，或具有至少一种肥胖相关病症(co-morbidity)的个体具有大于或等于27kg/m2的BMI的情况。"肥胖症患者/个体"是指身体质量指数(BMI)大于或等于30kg/m2的其它方面健康的患者或BMI大于或等于27kg/m2并具有至少一种肥胖相关病症的患者。"肥胖风险患者/个体"是指具有25kg/m2至低于30kg/m2的BMI的其它方面健康的个体，或具有25kg/m2至低于27kg/m2BMI的具有至少一种肥胖相关病症的患者。在亚洲，越来越多的肥胖相关风险于较低体重指数(BMI)发生。在亚洲国家，包括日本，"肥胖症"是指患者具有至少一种由肥胖引BMI大于或等于25kg/n^的情况。在亚洲国家，包括日本，"肥胖症患者"是指具有至少一种由肥胖引起的或与肥胖有关的相关病症(其需要减肥或通过减肥可改善)、且BMI大于或等于25kg/r^的患者。在亚洲国家，"具肥胖风险的个体"是指BMI大于23kg/m2至小于25kg/m2的个体。本文使用的术语"肥胖症"意在包括所有以上的肥胖症定义。由肥胖症引起的或与肥胖症相关的相关病症包括但不限于糖尿病、非胰岛素依赖性2型糖尿病、葡萄糖耐量降低、空腹血糖升高(impairedfastingglucose)、胰岛素耐药性综合征、异常脂血症、高血压、高尿酸血症、痛风、冠状动》jc病、心肌梗塞、心绞痛、睡眠呼吸暂停综合征、皮克威克综合征、脂肪肝；脑梗塞、脑血栓形成、短暂性脑缺血发作、矫形外科疾病、关节炎畸形、腰痛、月经病以及不育症。具体地说，相关病症包括高血压、高脂血症、异常脂血症、葡萄糖耐受不良、心血管病、睡眠呼吸暂停、糖尿病以及其它肥胖相关病症。"治疗"(肥胖症或肥胖相关疾病的治疗)是指给予本发明化合物，以降低或保持肥胖患者的体重。治疗的一种结果可为减轻肥胖患者的体重(相对于给予本发明化合物之前的患者体重)。治疗的另一种结果为可防止先前因节食、锻炼或药物疗法而减重的体重反弹。治疗的另一种结果为可降低肥胖相关疾病的发生率和/或严重性。该治疗可适当地导致患者减少食物或热量摄取，包括减少总食物摄取或减少膳食中特定组分如碳水化合物或脂肪的摄取；和/或抑制营养吸收；和/或抑制代谢率降低；以及使有需要的患者减肥。该治疗还可以改变代谢率，例如代谢率提高而不是抑制代谢率的降低或除此之外还抑制代谢率的降低；和/或使通常由减肥所致的代谢抗性最小。"预防"(肥胖症或肥胖相关疾病)是指给予本发明化合物，以降低或保持有肥胖风险的患者/个体的体重。预防的一种结果可为减轻具有肥胖风险的患者/个体的体重(相对于给予本发明化合物之前的患者体重)。预防的另一种结果是可防止先前因节食、锻炼或药物疗法而减重的体重反弹。预防的另一种结果是如果在有肥胖风险的患者发生肥胖前给予该治疗，则可防止肥胖发生。预防的另一种结果是如果在有肥胖风险的患者发生肥胖前给予该治疗，则可减少肥胖相关病症的发生率和/或严重性。而且，如果在已经肥胖的患者中开始治疗，则该治疗可防止肥胖相关疾病的发生、发展或恶化，所述肥胖相关疾病例如但不限于动脉硬化、n型糖尿病、多嚢性卵巢病、心血管病、骨关节炎、皮肤病、高血压、胰岛素耐药性、高胆固醇血症、高甘油三酯血症及胆石病。本文中的肥胖相关疾病是与肥胖有关的、由肥胖引起的或因肥胖产生的病症。肥胖相关疾病的实例包括暴食和食欲过盛、高血压、糖尿病、血浆胰岛素浓度升高和胰岛素耐药性、异常脂血症、高脂血症、子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌和结肠癌、骨关节炎、阻塞性睡眠呼吸暂停、胆石病、胆结石、心脏病、心律异常和心律失常、心肌梗塞、充血性心力衰竭、冠心病、猝死、中风、多嚢性卵巢病、颅咽管瘤、普拉德-威利综合征、弗勒利希综合征、GH-缺陷患者、正常变异身材矮小症、特纳综合征以及其它表现为代谢活动降低或以总无脂肪体重百分率计的静息能量消耗减少的病理性病症，例如患有急性成淋巴细胞性白血病的儿童。肥胖相关病症的其它实例为代谢综合征(也叫做X综合征)、胰岛素耐药性综合征、性和生殖功能障碍(例如不育症)、男性性腺功能减退症和女性多毛症、胃肠蠕动障碍(例如与肥胖相关的胃食管反流)、呼吸障碍(例如肥胖-通气不足综合征(皮克威克综合征))、心血管疾病、炎症(例如全身性脉管炎)、动脉硬化、高胆固醇血症、高尿酸血症、下背痛、胆嚢病、痛风和肾癌。本发明的化合物还用于降低肥胖的继发性后果的风险，如降低左心室肥大的风险。本文中使用的术语"糖尿病"包括胰岛素依赖性糖尿病(IDDM,又称为I型糖尿病)和非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM,又称为II型糖尿病)。I型糖尿病或胰岛素依赖性糖尿病是胰岛素绝对不足的结果，胰岛素是调控葡萄糖利用的激素。II型糖尿病或胰岛素非依赖性糖尿病(即非胰岛素依赖性糖尿病)经常发生在正常胰岛素水平乃至高胰岛素水平的情况下，似乎是组织无力对胰岛素作出适当应答的结果。大多数II型糖尿病患者也^J巴胖患者。本发明的化合物可用于治疗I型糖尿病和II型糖尿病。所述化合物治疗II型糖尿病特别有效。本发明的化合物还可以用于治疗和/或预防妊娠性糖尿病。本文公开的神经介肽U受体激动剂在与药学上可接受的载体组合时可用于药物组合物。这样的组合物包含治疗有效量的神经介肽U受体激动剂和在药学上可接受的载体。该组合物还可以包含(除神经介肽U受体激动剂和载体以外)稀释剂、填充剂、盐、緩沖剂、稳定剂、溶解剂和本领域众所周知的其它材料。如有需要，含有神经介肽U受体激动剂的组合物可以盐形式给予，只要所述盐是药学上可接受的。盐可以使用合成有机化学领域技术人员知晓的标准方法制备。术语"个体"意在包括人和伴倡动物或驯养动物，例如狗、猫、马等。因此，式I的组合物还用于治疗或预防猫和狗的肥胖和肥胖相关性疾病。同样，术语"哺乳动物"包括伴侣动物，如猫和狗。术语"在药学上可接受的盐"是指从药学上可接受的无毒碱或酸制得的盐，所述碱和酸包括无机或有机碱和无机或有机酸。从无机碱得到的盐包括铝、铵、钓、铜、三价铁、二价铁、锂、镁、锰、亚锰、钾、钠、锌盐等。特别优选的为铵、钙、镁、钾和钠盐。从药学上可接受的有机非毒性碱得到的盐包括以下物质的盐伯、仲和叔胺，取代的胺，包括天然取代的胺，环状胺和阳离子交换树脂，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二千基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二曱基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-吗啉、N-乙基哌啶、葡萄糖胺、葡糖胺、组氨酸、海巴明(hydrabamine)、异丙基胺、赖氨酸、曱基葡萄糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三曱胺、三丙胺、氨基丁三醇等。术语"在药学上可接受的盐"还包括所有可接受的盐，如乙酸盐、乳糖醛酸盐、苯磺酸盐、月桂酸盐、苯曱酸盐、苹果酸盐、碳酸氢盐、马来酸盐、硫酸氬盐、扁桃酸盐、酒石酸氢盐、甲磺酸盐、硼酸盐、甲基溴化物、溴化物、曱基硝酸盐、乙二胺四乙酸钙盐、曱基硫酸盐、樟脑磺酸盐、粘酸盐、碳酸盐、萘磺酸盐、氯化物、硝酸盐、克拉维酸盐、N-甲基葡萄糖胺、柠檬酸盐、铵盐、二氢氯化物、油酸盐、乙二胺四乙酸盐、草酸盐、乙二磺酸盐、朴酸盐(双羟萘酸盐)、丙酸酯十二烷基硫酸盐(estolate)、棕榈酸盐、乙磺酸盐、泛酸盐、富马酸盐、磷酸盐/二磷酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、聚半乳糖醛酸盐、葡糖酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、硬脂酸盐、乙醇酰对氨基苯基砷酸盐(glycollylarsanilate)、硫酸盐、己基间苯二酚盐、次乙酸盐、海巴明(hydrabamine)、琥珀酸盐、氢溴酸盐、鞣酸盐、盐酸盐、酒石酸盐、羟基萘甲酸盐、茶氯酸盐(teoclate)、碘化物、曱苯磺酸盐、异硫代硫酸盐、三乙碘化合物(triethiodide)、乳酸盐、泛酸盐(panoate)、戊酸盐等，其可^皮用作改变溶解度或水解特性的剂型，或者可被用于持久释药或前药制剂中。要理解的是，如此处所用，提到的通式(I)的神经介肽U受体激动剂还包括药学上可接受的盐。本文使用的术语"在药学上可接受的"是指非毒性材料，其不干扰活性成分的生物活性的有效性，由联邦或州政府的管理机关批准或在美国药典或其它一般认可的药典中列出用于动物，更具体地说用于人。术语"载体"是指可与治疗剂一起给予的稀释剂、佐剂、赋形剂或溶^(某，包括但不限于诸如水和油的无菌液体。载体的特征取决于给药途径。神经介肽U受体激动剂可为多聚体(例如异二聚体或同二聚体)，或与其自身或其它肽的复合物。结果，本发明的药物组合物可含有一种或多种为这样的多聚或复合形式的神经介肽U受体激动剂。本文使用的术语"治疗有效量"是指药物组合物或方法的每种活性成分的总量，该量足以显示有意义的患者利益，即治疗、康复、预防或改善相关医学病症，或增加这些病症的治疗、康复、预防或改善的速率。在单独给药的活性成分应用于个体时，该术语是指该单独的成分。当联合应用时，该术语是指产生疗效的活性成分的組合量，无论是联合、序贯还是同时给药。药物组合物可以包含一种或多种神经介肽U受体激动剂；一种或多种神经介肽U受体激动剂和一种或多种用于治疗代谢疾病的其它药物；或者可以将含有一种或多种神经介肽U受体激动剂的药物组合物与含有用于治疗代谢疾病的药物的药物组合物同时使用。这样的疾病包括但不限于肥胖症、代谢综合征或X综合征、II型糖尿病、糖尿病并发症、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型的癌症。当所述药物组合物含有用于治疗代谢疾病的另一种药物时，或者当治疗包括第二种含有用于治疗代谢疾病的药物的药物组合物时，所述药物包括但不限于大麻类(CB1)受体拮抗剂、胰高血糖素样肽1(GLP-1)受体激动剂、脂肪酶抑制剂、痩素、四氬泥泊司他汀、2-4-二硝基酚、阿卡波糖、西布曲明、phentamine、脂肪吸收阻断剂、辛伐他汀、美伐他汀、依泽替米贝、阿伐它汀、西他列汀、二曱双胍、奥利司他、Qnexa、托吡酯、纳曲酮、bupriopion、芬特明、氯沙坦、含氢氯p塞。秦的氯沙坦等。与本发明化合物联合使用的合适的药物包括但不限于(a)抗糖尿病药，如(l)PPARy激动剂，如格列酮类(例如环格列酮；达格列酮；恩格列酮；伊格列酮(isaglitazone)(MCC-555);匹格列酮(ACTOS);罗格列酮(AVANDIA);曲格列酮；利格列酮(rivoglitazone),BRL49653;CLX-0921;5-BTZD、GW-0207、LG-100641、R483和LY隱300512等，及在W097/10813、97/27857、97/28115、97/28137、97/27847、03/000685和03/027112中公开的那些，以及SPPARMS(选择性PPARy调节物)，例如T131(Amgen)、FK614(Fujisawa)、萘格列酮和metaglidasen;(2)双胍类如丁福明；二曱双胍；和苯乙双胍等；(3)蛋白酪氨酸磷酸酶-lB(PTP-1B)抑制剂，如ISIS113715、A画401674、A画364504、IDD-3、IDD2846、KP-40046、KR61639、MC52445、MC52453、C7、OC-060062、OC掘39、OC29796、TTP-277BC1，以及在WO04/041799、04/050646、02/26707、02/26743、04/092146、03/048140、04/089918、03/002569、04/065387、04/127570和US2004/167183中公开的那些药物；(4)磺酰脲类如醋酸己脲；氯磺丙脲(chlorpropamide);4争/必月夷(氯石黄丙脲(diabinese));才各列本脲(glibenclamide);格列吡嗪；优降糖(格列本脲(glyburide));格列美脲；格列齐特；格列戊脲；格列喹酮；格列索脲；妥拉磺脲和曱苯磺丁脲等；(5)氯茴苯酸类如瑞格列奈、metiglinide(GLUFAST)和那格列奈等；(6)a葡萄糖苷水解酶抑制剂，如阿卡波糖；脂解素；卡格列波糖；乙格列酯；米格列醇；伏格列波糖；普那米星-Q;salbostatin;CKD國711;MDL-25,637;MDL-73,945和MOR14等；(7)a-淀粉酶抑制剂，如淀粉酶抑肽、萃他丁(trestatin)和Al-3688等；(8)促胰岛素分泌类，如利诺格列、米格列奈(mitiglinide)(GLUFAST)和ID1101A-4166等；(9)脂肪酸氧化抑制剂，如氯莫克舍和乙莫克舍等；(10)A2拮抗剂，如咪格列唑；伊格列咮；德格列哚；咪唑克生；earoxan和氟洛克生等；(ll)胰岛素或胰岛素才莫拟物，如biota、LP-100、novar叩id、地特胰岛素、赖脯胰岛素、甘精胰岛素、锌胰岛素混悬液(长效胰岛素和超长效胰岛素)；Lys-Pro胰岛素、GLP-1(17-36)、GLP-l(73-7)(胰岛素调理素)、GLP-l(7-36)-NH2)、艾塞那肽/醋酸艾塞那肽(Exendin-4)、艾塞那肽LAR、Linaglutide、AVE0010、CJC1131、BIM51077、CS872，TH0318、BAY陽694326、GP010、ALBUGON(融合白蛋白的GLP画1)、HGX-007(Epac激动剂)、S-23521和在WO04/022004、WO04/37859中公开的那些等；(12)非噻唑烷二酮类，如JT-501和法格列扎(GW-2570/GI-262579)等；(13)PPARa/y双重激动剂，如AVE0847、CLX-0940、GW-1536、GW1929、GW-2433、KRP國297、L画796449、LBM642、LR画90、LY510919、MK-0767、ONO5129、SB219994、TAK-559、TAK曙654、677954(GlaxoSmithkline)、E-3030(Eisai)、LY510929(Lilly)、AK109(Asahi)、DRF2655(Dr.Reddy)、DRF8351(Dr.Reddy)、MC3002(Maxocore)、TY51501(ToaEiyo)、naveglitazar、muraglitizar、peliglitazar、替赛才各列4也(tesaglitazar)(GALIDA)、瑞才各列扎(reglitazar)(JTT画501)、西格列他钠，以及在WO99/16758、WO99/19313、WO99/20614、WO99/38850、WO00/23415、WO00/23417、WO00/23445、WO00/50414、WO01/00579、WO01/79150、WO02/062799、WO03/033481、WO03/033450、WO03/033453中^^开的那些；和(14)其它胰岛素增敏药物；(15)VPAC2受体激动剂；(16)GLK调节剂，如PS丽5、RO281675、RO274375和在WO03/015774、WO03/000262、WO03/055482、WO04/046139、WO04/045614、WO04/063179、WO04/063194、WO04/050645中7>开的那些等；(17)类维生素A调节剂，如在WO03/000249中公开的那些；(18)GSK3|3/GSK3抑制剂，如4-[2-(2-溴苯基)-4-(4-氟苯基-lH-咪唑-5-基]吡啶、CT21022、CT20026、CT画98023、SB-216763、SB4101U、SB-675236、CP-70949、XD4241和在WO03/037869、03/03877、03/037891、03/024447、05/000192、05/019218等中公开的那些等；(19)糖原磷酸化酶(HGLPa)抑制剂，如AVE5688、PSN357、GPi隱879，在WO03/037864、WO03/091213、WO04/092158、WO05/013975、WO05/013981、US2004/0220229和JP2004-196702中公开的那些等；(20)ATP消耗促进剂，如在WO03/007990中公开的那些；(21)PPARy激动剂和二甲双胍如AVANDAMET的固定组合；(22)PPAR泛激动剂，如GSK677954;(23)GPR40(G蛋白偶联受体40),也称为SNORF55，如BG700和在WO04/041266、04/022551、03/099793中公开的那些；(24)GPR119(也叫做RUP3;SNORF25)，如RUP3、HGPRBMY26、PFI007、SNORF25;(25)腺嘌呤核普受体2B拮抗剂，如ATL-618、ATl-802、E3080等；(26)肉毒碱棕榈酰转移酶抑制剂，如ST1327和ST1326等；(27)果糖1,6-二石寿酸酶抑制剂，如CS-917、MB7803等；(28)胰高血糖素拮抗剂，例如AT77077、BAY694326、GW4123X、NN2501和在WO03/064404、WO05/00781、US2004/0209928、US2004/029943中公开的那些等；(30)葡糖-6-石寿酸酶抑制剂；(31)烯醇丙酮酸磷酸羧激酶(PEPCK)抑制剂；(32)丙酮酸脱氢酶激酶(PDK)活化剂；(33)RXR激动剂，如MC1036、CS00018、JNJ10166806和在WO04/089916、US6759546中公开的那些等；(34)SGLT抑制剂，例如AVE2268、KGT1251、T1095/RWJ394718;(35)BLX陽1002;(b)降脂剂，如(l)胆汁酸多价螯合剂，如考来烯胺、考来维仑(colesevelem)、考来替泊、交联葡聚糖的二烷基氨基烷基衍生物；降脂树脂2号(Colestid⑧)；LoCholest⑧和消胆胺(Questran⑧)等；(2)HMG-CoA还原酶抑制剂，如阿托伐他汀、伊伐他汀、匹伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、利伐斯的明(rivastatin)、罗苏伐他汀、辛伐他汀和罗苏伐他汀(ZD-4522)等，特别是辛伐他汀；(3)HMG-CoA合酶抑制剂；(4)胆固醇吸收抑制剂，如FMVP4(ForbesMedi-Tech)、KT6-971(KotobukiPharmaceutical)、FM-VA12(ForbesMedi國Tech)、FM-VP-24(ForbesMedi-Tech)、stanolester、(3-谷甾醇、甾醇苷如替奎安；和氮杂环丁酮类(azetidinones)如依泽替米贝，以及在WO04/005247中公开的那些等；(5)酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂，如阿伐麦布、依鲁麦布(eflucimibe)、帕替麦布(pactimibe)(KY505)、SMP797(Sumitomo)、SM32504(Sumitomo)以及在WO03/091216中公开的那些等；(6)CETP抑制剂，如JTT705(JapanTobacco)、托彻普(torcetrapib)、CP532、632、BAY63-2149(Bayer)、SC591、SC795等;(7)角鲨烯合成酶抑制剂；(8)抗氧化剂，如普罗布考等；(9)PPARa激动剂，如千氯贝特、苯扎贝特、环丙贝特、氯贝丁酯、依托贝特、非诺贝特、gemcabene和吉非贝齐、GW7647、BM170744(Kowa)、LY518674(Lilly)、GW590735(GlaxoSmithkline)、KRP-101(Kyorin)、DRF10945(Dr.Reddy)、NS-220/R1593(NipponShinyaku/Roche)、ST1929(SigmaTau)、MC3001/MC3004(MaxoCorePharmaceuticals)、gemcabenecalcium、其它苯氧酸(fibricacid)衍生物，如Atromid⑧、Lopid⑧和Tricor,以及在US6,548,538中公开的那些等；(10)FXR受体调节剂，如GW4064(GlaxoSmithkline)、SR103912、QRX401、LN-6691(LionBioscience)和在WO02/064125、WO04/045511中公开的那些等；(11)LXR受体调节剂，如GW3965(GlaxoSmithkline)、T9013137和XTC0179628(X-CeptorTherapeutics/Sanyo),以及在WO03/031408、WO03/063796、WO04/072041中公开的那些等；(12)脂蛋白合成抑制剂，如烟酸；(13)肾素血管紧张素系统抑制剂；(14)PPAR5部分激动剂，如在WO03/024395中公开的那些；(15)胆汁酸重吸收抑制剂，如BARI1453、SC435、PHA384640、S8921、AZD7706等，和胆汁酸多价螯合剂，如考来维仑(WELCHOL/CHOLESTAGEL);(16)PPARy激动剂，如GW501516(Ligand，GSK)、GW590735、GW-0742(GlaxoSmithldine)、T659(Amgen/Tularik)、LY934(Lilly)、丽C610050(NovoNordisk)和在W097/28149、WO01/79197、WO02/14291、WO02/46154、WO02/46176、WO02/076957、WO03/016291、WO03/033493、WO03/035603、WO03/072100、WO03/097607、WO04/005253、WO04/007439和JP10237049中公开的那些等；(17)甘油三酯合成抑制剂；(18)微粒体甘油三酯转运(MTTP)抑制剂，如英普他派、LAB687、JTT130(JapanTobacco)、CP346086和在WO03/072532中/>开的那些等；(19)转录调节剂；(20)角鲨烯环氧酶抑制剂；(21)低密度脂蛋白(LDL)受体诱导剂；(22)血小板聚集抑制剂；(23)5-LO或FLAP抑制剂；和(24)烟酸受体激动剂，包括HM74A受体激动剂；(25)PPAR调节剂，如在WO01/25181、WO01/79150、WO02/79162、WO02/081428、WO03/016265、WO03/033453中公开的那些；(26)烟酸-结合铬，如在WO03/039535中公开的那些；(27)取代的酸衍生物，公开在WO03/040114;(28)输注的HDL,如LUV/ETC-588(Pfizer)、APO-A1Milano/ETC216(Pfizer)、ETC國642(Pfizer)、ISIS301012、D4F(BruinPharma)、合成三聚ApoAl、靶向泡沫细胞的BioralApoAl等；(29)IBAT抑制剂，如BARI143/HMR145A/HMR1453(Sanofi-Aventis)、PHA384640E(Pfizer)、S8921(Shionogi)、AZD7806(AstrZeneca)、AK105(AsahKasei)等；(30)Lp-PLA2抑制剂，如SB480848(GlaxoSmithkline)、659032(GlaxoSmithkline)、677116(GlaxoSmithkline)等；(31)影响脂质組成的其它药物，包括ETC1001/ESP31015(Pfizer)、ESP-55016(Pfizer)、AGI1067(AtheroGenics)、AC3056(Amylin)、AZD4619(AstrZeneca);和(c)抗-高血压剂，如(l)利尿药，如噻溱类，包括氯噻酮、氯噻。秦、二氯苯磺胺、氢氟瘗溱、吲达帕胺和氢氯噻嗪；袢利尿剂，如布美他尼、依他尼酸、呋塞米和扭4i塞米；保钟剂(potassiumsparingagent)，如阿米洛利和氨苯蝶啶；和醛固酮拮抗剂，如螺内酯、epirenone等；(2)P-肾上腺素能阻断剂，如醋丁洛尔、阿替洛尔、倍他洛尔、贝凡洛尔、比索洛尔、波吲洛尔、卡替洛尔、卡维地洛、塞利洛尔、艾司洛尔、茚诺洛尔、美托洛尔(metaprolol)、纳多洛尔、奈必洛尔、喷布洛尔、"l咮洛尔、普萘洛尔、索他洛尔、特他洛尔、替利洛尔和噻吗洛尔等；(3)钙通道阻滞剂，如氨氯地平、阿雷地平、阿折地平、巴尼地平、贝尼地平、千普地尔、cinaldipine、氯维地平、地尔硫草、依福地平、非洛地平、戈洛帕米、伊拉地平、拉西地平、来米地平、乐卡地平、尼卡地平、硝苯地平、尼伐地平、尼莫地平、尼索地平、尼群地平、马尼地平、普拉地平和维拉帕米等；(4)血管紧张素转化酶(ACE)抑制剂，如贝那普利；卡托普利；西拉普利；地拉普利；依那普利；福辛普利(fosinopril);咪达普利；losinopril;莫昔普利；奮那普利；会普利4立；雷米普利；培咮普利；perindropril;quanipril;螺普利；tenocapril;群多普利和佐芬普利等；(5)中性内肽酶抑制剂，^口奥马曲4i、cadoxatril和依卡曲尔、福辛普利(fosidotril)、山帕曲拉、AVE7688、ER4030等；(6)内皮素拮抗剂，如替唑生坦、A308165和YM62899等；(7)血管扩张剂，如肼屈溱、可乐定、米诺地尔和烟醇(nicotinylalcohol)等；(8)血管紧张素II受体拮抗剂，如坎地沙坦、依普罗沙坦、厄贝沙坦、氯沙坦、普拉沙坦、他索沙坦、替米沙坦、缬沙坦和EXP-3137、FI6828K和RNH6270等；(9)oc/(3肾上腺素能阻断剂，如尼普洛尔、阿罗洛尔和氨>5黄洛尔等；(lO)al阻滞剂，如特拉哇嗓、乌拉地尔、喊哇漆、布那哇療、曲马哇噢、多沙哇噢、萘咪地尔、吲咮拉明、WHIP164和XEN010等；(11)a2激动剂，如洛非西定、噻美尼定、莫索尼定、利美尼定和guanobenz等；(12)醛固酮抑制剂等；(13)血管生成素-2结合剂，如在WO03/030833中/>开的那些；和(d)抗-肥胖剂，如(l)5HT(5-羟色胺)转运抑制剂，如帕罗西汀、氟西汀、芬氟4i明、氟伏沙明、舍曲林和丙米"秦，以及在WO03/00663中公开的那些，以及血清素/去甲肾上腺素再吸收抑制剂，如西布曲明(MERIDIA/REDUCTIL)和多巴胺吸收抑制剂/Nor印enephrine吸收抑制剂，如radafaxinehydrochloride,353162(GlaxoSmithkline)等;(2)NE(去曱肾上腺素)转运抑制剂，如GW320659、despiramine、他舒普仑和诺米芬辛；(3)CB1(大麻素-l受体)拮抗剂/反向激动剂，如利莫那班(ACCOMPLIASanofiSynthelabo)、SR-147778(SanofiSynthelabo)、AVE1625(Sanofi-Aventis)、BAY65-2520(Bayer)、SLV319(Solvay)、SLV326(Solvay)、CP945598(Pfizer)、E-6776(Esteve)、01691(Organix)、ORG14481(Organon)、VER24343(Vernalis)、NESS0327(UnivofSassari/UnivofCagliari),以及在美国专利序号4,973,587、5,013,837、5,081,122、5,112,820、5，292,736、5,532,237、5,624,941、6,028,084和6,509367;及WO96/33159、WO97/29079、WO98/31227、WO98/33765、WO98/37061、WO98/41519、WO98/43635、WO98/43636、WO99/02499、WO00/10967、WO00/10968、WO01/09120、WO01/58869、WO01/64632、WO01/64633、WO01/64634、WO01/70700、WO01/96330、WO02/076949、WO03/006007、WO03/007887、WO03/020217、WO03/026647、WO03/026648、WO03/027069、WO03/027076、WO03/027114、WO03/037332、WO03/040107、WO04/096763、WO04/111039、WO04/111033、WO04/111034、WO04/111038、WO04/013120、WO05/000301、WO05/016286、WO05/066126和EP-658546中公开的那些等；(4)脑肠肽激动剂/拮抗剂，如BVT81-97(BioVitrum)、RC1291(Rejuvenon)、SRD-04677(Sumitomo)、未酰化的脑肠肽(ThemTechnologies)和在WO01/87335、WO02/08250、WO05/012331中公开的那些等；(5)H3(组胺H3)拮抗剂/反向激动剂，如噻普酰胺、3-(lH-咪唑-4-基)丙基N-(4-戊烯基)氨基甲酸酯)、clobenpropit、iodophenpropit、imoproxifan、GT2394(Gliatech)和A331440，及在WO02/15905中公开的那些；和0-[3-(lH-咪唑-4-基)丙醇]氨基甲酸酯类(Kiec画Kononowicz,K.等，Pharmazie,55:349-55(2000》、包含哌咬的组胺H3-受体拮抗剂(Lazewska,D.等，Pharmazie，56:927-32(2001)、二苯甲酮衍生物及相关化合物(Sasse,A.等，Arch.Pharm.(Weinheim)334:45-52(2001))、取代的N-苯基氨基甲酸酯类(Reidemeister,S.等，Pharmazie，55:83-6(2000))和proxifan衍生物(Sasse,A.等，J.Med.Chem..43:3335-43(2000))和组胺H3受体调节剂，如在WO03/024928和WO03/024929中公开的那些；(6)黑色素聚集激素1受体(MCH1R)拮抗剂，如T-226296(Takeda)、T71(Takeda/Amgen)、AMGN隱608450、AMGN画503796(Amgen)、856464(GlaxoSmithkline)、A224940(Abbott)、A798(Abbott)、ATC0175/AR224349(ArenaPharmaceuticals)、GW803430(GlaxoSmithkine)、NBI-lA(NeurocrineBiosciences)、NGX-1(Neurogen)、SNP-7941(Synaptic),SNAP9847(Synaptic),T-226293(ScheringPlough)、TPI-1361-17(SaitamaMedicalSchool/UniversityofCaliforniaIrvine)和在WO01/21169、WO01/82925、WO01/87834、WO02/051809、WO02/06245、WO02/076929、WO02/076947、WO02/04433、WO02/51809、WO02/083134、WO02/094799、WO03/004027、WO03/13574、WO03/15769、WO03/028641、WO03/035624、WO03/033476、WO03/033480、WO04/004611、WO04/004726、WO04/011438、WO04/028459、WO04/034702、WO04/039764、WO04/052848、WO04/087680;和日本专利申请序号JP13226269、JP1437059、JP2004315511中公开的那些等；(7)MCH2R(黑色素聚集激素2R)激动剂/拮抗剂；(8)NPY1(神经肽YYl)拮抗剂，如BMS205749、BIBP3226、J-115814、BIBO3304、LY隱357897、CP-671906和GI-264879A;以及在美国专利序号6,001,836和WO96/14307、WO01/23387、WO99/51600、WO01/85690、WO01/85098、WO01/85173和WO01/89528中公开的那些;(9)NPY5(神经肽YY5)拮抗剂，如152,804、S2367(Shionogi)、E-6999(Esteve)、GW-569180A、GW誦594884A(GlaxoSmithkline)、GW画587081X、GW國548118X;FR235,208;FR226928、FR240662、FR252384;1229U91、GI-264879A、CGP71683A、C-75(Fasgen)LY-377897、LY366377、PD-160170、SR國120562A、SR-120819A、S2367(Shionogi)、JCF國104和H409/22;和在美国专利序号6,140,354、6,191,160、6,258,837、6,313,298、6，326，375、6,329,395、6,335,345、6,337,332、6,329,395和6,340,683;EP國01010691、EP-01044970和FR252384;和PCT公开号WO97/19682、WO97/20820、WO97/20821、WO97/20822、WO97/20823、WO98/27063、WO00/107409、WO00/185714、WO00/185730、WO00/64880、WO00/68197、WO00/69849、WO01/09120、WO01/14376、WO01/85714、WO01/85730、WO01/07409、WO01/02379、WO01/02379、WO01/23388、WO01/23389、WO01/44201、WO01/62737、WO01/62738、WO01/09120、WO02/20488、WO02/22592、WO02/48152、WO02/49648、WO02/051806、WO02/094789、WO03/009845、WO03/014083、WO03/022849、WO03/028726、WO05/014592、WO05/01493;和Norman等，J.Med.Chem.43:4288-4312(2000)中公开的那些；(IO)瘦素，如重组人类瘦素(PEG-OB,HoffmanLaRoche)和重组曱二磺酰人类痩素(Amgen);(ll)瘦素衍生物，如在专利序号5,552,524;5,552,523;5,552,522;5,521,283;和WO96/23513;WO96/23514;WO96/23515;WO96/23516;WO96/23517;WO96/23518;WO96/23519;和WO96/23520中公开的物质；(12)阿片样物质拮抗剂，如纳美芬(Revex⑧)、3-甲氧基纳屈酮、纳洛酮和纳屈酮；及在WO00/21509中/>开的那些；(13)苯基二氢喹唑啉拮抗剂，如SB-334867-A(GlaxoSmithkline);和在WO01/96302、01/68609、02/44172、02/51232、02/51838、02/089800、02/090355、03/023561、03/032991、03/037847、04/004733、04/026866、04/041791、04/085403中公开的那些等；(14)BRS3(铃蟾肽受体亚型3)激动剂；(15)CCK-A(促胰酶素-A)激动剂，如AR-R15849、GI181771、JMV-180、A-71378、A-71623、PD170292、PD149164、SR146131、SR125180、butabindide、及在US5,739,106中公开的那些；(16)CNTF(睫状神经营养因子)，如GI-181771(Glaxo-Sm池Kline);SR146131(SanofiSynthelabo);butabindide;和PD170,292、PD149164(Pfizer);(17)CNTF衍生物，如axokine(Regeneron);和在WO94/09134、WO98/22128和WO99/43813中公开的那些；(18)GHS(促生长素分泌素受体)激动剂，如丽703、海沙瑞林(hexarelin)、MK-0677、SM-130686、CP-424,391、L-692,429和L-163,255，和在美国专利序号6358951、美国专利申请序号2002/049196和2002/022637;和WO01/56592和WO02/32888中公开的那些；(l9)5HT2cO羟色胺受体2c)调节剂，如APD3546/AR10A(ArenaPharmaceuticals)、ATH88651(Athersys)、ATH88740(Athersys)、BVT933(Biovitrum/GSK)、DPCA37215(BMS)、IK264;LY448100(Lilly)、PNU22394;WAY470(Wyeth)、WAY629(Wyeth)、WAY161503(Biovit讓)、R國1065、VR1065(V函lis/Roche)YM348;以及在美国专利序号3,914,250;和PCT/>布号01/66548、02/36596、02/48124、02/10169、02/44152;02/51844、02/40456、02/40457、03/057698、05/000849中公开的那些等；(20)Mc3r(黑皮质素3受体)激动剂；(21)Mc4r(黑皮质素4受体)激动剂，如CHIR86036(Chiron);C腿915(Chiron);織-10142(Mela画)、ME-10145(Melacure)、HS-131(Melacure)、NBI72432(NeurocrineBiosciences),丽C70-619(NovoNordisk)、TTP2435(Transtech),及在PCT公布号WO99/64002、00/74679、01/991752、01/0125192、01/52880、01/74844、01/70708、01/70337、01/91752、01/010842、02/059095、02/059107、02/059108、02/059117、02/062766、02/069095、02/12166、02/11715、02/12178、02/15909、02/38544、02/068387、02/068388、02/067869、02/081430、03/06604、03/007949、03/009847、03/009850、03/013509、03/031410、03/094918、04/028453、04/048345、04/050610、04/075823、04/083208、04/089951、05/000339和EP1460069以及US2005049269和JP2005042839中公开的那些等；(22)单胺重摄取抑制剂，如西布曲明(Meridia⑧/Reductil⑧)及其盐和在美国专利序号4/746,680、4，806,570和5,436,272和美国专利7>开号2002/0006964和WO01/27068和WO01/62341中公开的那些；(23)5-羟色胺重摄取抑制剂，如右芬氟拉明、氟西汀，及在美国专利序号6,365,633和WO01/27060和WO01/162341中公开的那些；(24)GLP-1(胰高血糖素-样肽l)激动剂；(25)托p比酯(Topimax⑧)；(26)植物药化合物(phytopharmcompound)57(CP644,673);(27)ACC2(乙酰-辅酶A羧化酶-2)抑制剂；(28)(33(|3肾上腺素能受体3)激动剂，如rafebergron/AD9677/TAK677(Dainippon/Takeda)、CL-316，243、SB418790、BRL画37344、L-796568、BMS-196085、BRL-35135A、CGP12177A、BTA-243、GRC1087(GlenmarkPharmaceuticals)、GW427353(solabegronhydrochloride)、曲卡君、'泽尼卡D7114、N-5984(NisshinKyorin)、LY-377604(Lilly)、KT07924(Kissei)、SR59119A和在美国专利序号5,705,515、US5,451,677;和W094/18161、W095/29159、W097/46556、WO98/04526和W098/32753、WO01/74782、WO02/32897、WO03/014113、WO03/016276、WO03/016307、WO03/024948、WO03/024953、WO03/037881、WO04/108674中公开的那些等；(29)DGAT1(甘油二酯酰化转移酶l)抑制剂；(30)DGAT2(甘油二酯酰化转移酶2)抑制剂；(31)FAS(脂肪酸合成酶)抑制剂，如浅蓝菌素和C75;(32)PDE^粦酸二酯酶)抑制剂，如茶碱、己酮可可碱、扎普司特、昔多芬、氨力农、米力农、西洛酰胺、罗列普拉和西洛司特及在WO03/037432、WO03/037899中描述的化合物；(33)甲状腺激素卩激动剂，如KB-2611(KaroBioBMS)和在WO02/15845;和日本专利申请号JP2000256190中公开的那些；(34)UCP-1(解偶联蛋白1)、2或3激活剂，如植烷酸、4-[(E)-2-(5,6,7,8-四氢-5,5,8,8-四曱基-2-萘基)-l-丙稀基]苯甲酸(TTNPB)和视黄酸；及在WO99/00123中公开的那些；(35)酰基-雌激素类，如油酰基-雌酮，其公开于delMar-Grasa,M.等，ObesityResearch,9:202-9(2001);(36)糖皮质激素受体拮抗剂，如CP472555(Pfizer)、KB3305和在WO04/000869、WO04/075864中公开的那些等；(37)ll卩HSD-1(11-|3羟基类固醇脱氢酶1型)抑制剂，如BVT3498(AMG331)、BVT2733、3-(l-金刚烷基)-4-乙基-5-(乙硫基)-4H-l,2,4-三唑、3-(l-金刚烷基)-5-(3,4，5-三曱氧基苯基)-4-甲基-4H-1,2,4-三唑、3-金刚烷基-4,5,6,7，8,9,10，11,12,33画十氬國1,2,4-三哇并[4,3画3][11]轮烯，及在WO01/90091、01/90090、01/90092、02/072084、04/011410、04/033427、04/041264、04/027047、04/056744、04/065351、04/089415、04/037251中公开的那些等；(38)SCD-1(硬脂酰-辅酶A去饱和酶-l)抑制剂；(39)二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制剂，如异亮氨酸瘗唑烷、缬氨酸吡咯烷(valinepyrrolidide)、西他列汀、saxagliptin、NVP-DPP728、LAF237(维格列汀)、P93/01、TSL225、TMC-2A/2B/2C、FE999011、P9310/K364、VIP0177、SDZ274-444、GSK823093、E3024、SYR322、TS021、SSR162369、GRC8200、K579、丽7201、CR14023、PHX1004、PHX1149、PT-630、SK隱0403;和在WO02/083128、WO02/062764、WO02/14271、WO03/000180、WO03/000181、WO03/000250、WO03細2530、WO03層2531、WO03層2553、WO03/002593、WO03細4498、WO03/004496、WO03/005766、WO03/017936、WO03/024942、WO03/024965、WO03/033524、WO03/055881、WO03/057144、WO03/037327、WO04/041795、WO04/071454、WO04/0214870、WO04/041273'WO04/041820、WO04/050658、WO04/046106、WO04/067509、WO04/048532、WO04層9185、wo04/108730、WO05/009956.WO'04/09806、WO05/023762、us2005/043292和EP1258476中公开的那些；(40)脂肪酶抑制剂，如四氢泥泊司它汀(奥利司他/XENICAL)、ATL962(Alizyme/Takeda)、GT389255(Genzyme/Peptimmune)、Triton曹l339、RHC80267、泥泊司它汀、茶皂素和二乙基伞形酮基石粦酸酯、FL-386、WAY-121898、Bay-N-3176、缬氨内酯、埃斯特拉(estemcin)、厄比内酯A、厄比内酯B和RHC80267,及在WO01/77094、WO04/111004和美国专利序号4,598,089、4,452，813、5,512,565、5,391,571、5,602,151、4，405，644、4,189,438和4,242,453中公开的那些等；(41)脂肪酸转运抑制剂；(42)二羧酸酯转运抑制剂；(43)葡萄糖转运抑制剂；和(44)磷酸盐转运抑制剂；(45)降食欲二环化合物，如1426(Aventis)和1954(Aventis)，及在WO00/18749、WO01/32638、WO01/62746、WO01/62747和WO03/015769中公开的那些；(46)肽YY和PYY激动剂，如PYY336(Nastech/Merck)、AC162352(ICInnovations/Curis/Amylin)、TM30335/TM30338(7TMPharma)、PYY336(EmisphereTehcnologies)、PEG化肽YY3-36、在WO03/026591、04/089279中公开的那些等；(47)脂质代谢调节剂，如山楂酸、高根二醇、熊果酸熊果醇、白桦脂酸、白桦脂醇等，及在WO03/011267中公开的那些；(48)转录因子调节剂，如在WO03/026576中^Hf的那些；(49)Mc5r(黑皮质素5受体)调节剂，如在WO97/19952、WO00/15826、WO00/15790、US20030092041中公开的那些等；(50)脑衍生的神经营养因子(BDNF),(51)Mclr(黑皮质素1受体调节剂，如LK-184(Proctor&Gamble)等；(52)5HT6拮抗剂，如BVT74316(BioVitrum)、BVT5182c(BioVitrum)、E-6795(Esteve)、E-6814(Esteve)、SB399885(GlaxoSmithkline)、SB271046(GlaxoSmithkline)、RO國046790(Roche)等；(53)脂肪酸转运蛋白4(FATP4);(M)乙酰辅酶A羧化酶(ACC)抑制剂，如CP640186、CP610431、CP640188(Pfizer);(55)C-末端生长激素片段，如AOD9604(MonashUniv/MetabolicPharmaceuticals)等；(56)胃泌酸调节素；(57)神经肽FF受体拮抗剂，如在WO04/083218中^^开的那些等；(58)胰淀素激动剂，如Symlin/普兰林肽/AC137(Amylin);(59)蝴蝶亚仙人掌和亚罗汉属提取物；(60)BVT74713和其它肠道脂质食欲抑制剂；(61)多巴胺激动剂，例如安非他酮(WELLBUTRIN/GlaxoSmithkline);(62)唑尼沙胺(ZONEGRAN/Dainippon/Elan)等。可与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体化合物包括特定的CB1拮抗剂/反向激动剂，其包括在WO03/077847中描述的那些，包括A43-(4-氯苯基)-2(S)-苯基-l(5)-甲基丙基]-2-(4-三氟曱基-2-嘧咬基氧基)-2-曱基丙酰胺、iV-[3-(4-氯苯基)-2-(3-氰基苯基)-l-甲基丙基]-2-(5-三氟甲基-2-吡咬基氧基)-2-甲基丙酰胺、丛[3-(4-氯苯基)-2-(5-氯-3-吡啶基)-l-甲基丙基]-2-(5-三氟甲基-2-吡啶基氧基)-2-曱基丙酰胺，及其药学上可接受的盐；以及在WO05/000809中的那些，其包括以下3-{1-[双(4-氯苯基)曱基]氮杂环丁烷-3-亚基}-3-(3,5-二氟苯基)-2,2-二甲基丙腈、1-{1-[1-(4-氯苯基)戊基]氮杂环丁烷-3-基}-1-(3,5-二氟苯基)-2-甲基丙-2-醇、3-((S)-(4-氯苯基)(3-[(lS)-l-(3,5-二氟苯基)_2-羟基-2-曱基丙基]氮杂环丁烷-1-基}曱基)苄腈、3-((S)-(4-氯苯基)(3-[(lS)-l-(3，5-二氟苯基)-2-氟-2-甲基丙基]氮杂环丁烷-l-基)甲基)苄腈、3-((4-氯苯基){3-[1-(3,5-二氟苯基)-2,2-二甲基丙基]氮杂环丁烷-1-基}甲基)苄腈、3-((lS)-l-(l-[(S)-(3-氰基苯基)(4-氰基苯基)甲基]氮杂环丁烷-3-基}-2-氟-2-曱基丙基)-5-氟苄腈、3-[(S)-(4-氯苯基)(3-((lS)-2-氟-l-[3-氟-5-(4H-l,2,4-三唑-4-基)苯基]-2-曱基丙基)氮杂环丁烷-l-基)曱基]苄腈和5-((4-氯苯基){3-[(13)-1-(3,5-二氟苯基)-2-氟-2-曱基丙基]氮杂环丁烷-1-基}曱基)噻吩-3-曱腈，及其药学上可接受的盐；以及3-[(5)-(4-氯苯基)(3-{(15>2-氟小[3-氟-5-(5-氧代-4,5-二氢-1,3，4-嗯二唑-2-基)苯基]-2-甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)曱基]千腈、3-[(5)-(4-氯苯基)(3-{(15)-2-氟-1-[3-氟-5-(1,3,4-噁二唑-2-基)苯基]-2-甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]苄腈、3-[(5)-(3-{(1。-1-[3-(5-氨基-1,3,4-嗯二唑-2-基)-5-氟苯基]-2-氟-2-甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)(4-氯苯基)甲基]苄腈、3-[(5)-(4-氰基苯基)(3-{(15)-2-氟-1-[3國氟-5-(5-氧代-4,5-二氢-1,3,4-嗯二唑-2-基)苯基]-2-甲基丙基}氮杂环丁烷画l画基)曱基]苄腈、3-[(5)-(3-{(15)-1-[3-(5-城-1,3,4-噁二唑-2-基)-5國氟苯基]-2-氟-2-甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)(4-氰基苯基)甲基]苄腈、3-[(5)-(4-氰基苯基)(3-{(15)-2-氟-1-[3-氟-5-(1,3,4-嗯二唑-2-基)苯基]画2-曱基丙基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]苄腈、3-[(5)-(4-氯苯基)(3-{(15)-2-氟-1-[3-氟-5-(1,2,4-嗯二唑-3-基)苯基]-2-甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)曱基]苄腈、3画[(15>1-(1-{(5>(4-氰基苯基)[3醫(1,2,4國嗯二唑-3國基)苯基]-甲基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-甲基丙基]-5-氟苄腈、5-(3-{1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-2-氟-2-甲基丙基}-5-氟苯基)-1//-四唑、5-(3-{1-[1-(二苯基甲基)氮杂环丁烷-3-基]-2-氟-2-曱基丙基}-5-氟苯基)-1-甲基-1//-四唑、5-(3-{1-[1-(二苯基曱基)氮杂环丁烷-3-基]-2-氟-2-曱基丙基)-5-氟苯基)-2-甲基-2H-四唑、3-[(4-氯苯基)(3-{2-氟-1-[3-氟-5-(2-曱基-21^四唑-5-基)苯基]-2-甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)曱基]千腈、3-[(4-氯苯基)(3-{2-氟-1-[3-氟-5-(1-曱基-1//-四唑-5-基)苯基]-2-曱基丙基}氮杂环丁烷-1-基)曱基]苄腈、3-[(4-氰基苯基)(3-{2-氟-1-[3-氟-5_(1_曱基_1//_四唑_5_基)苯基]_2-曱基丙基}氮杂环丁烷-1-基)曱基]千腈、3-[(4-氰基苯基)(3-{2-氟-1-[3-氟-5-(2-甲基-2//-四唑-5-基)苯基]-2画甲基丙基}氮杂环丁烷-1-基)甲基]千腈、5-{3-[(5)-{3-[(15)-1-(3-渙-5-氟苯基)-2-氟-2-甲基丙基]氮杂环丁烷-1-基}(4-氯苯基)曱基]苯基}-1,3，4-嗨二唑-2(3//)-酮、3-[(15>1-(1-{(5)-(4-氯苯基)[3-(5-氧代-4,5國二氢-1,3,4-嗨二唑-2-基)苯基]甲基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-甲基丙基]-5-氟苄腈、3-[(15>1-(l-{(5>(4-氰基苯基)[3-(5-氧代-4,5-二氢-1,3,4-嗨二唑-2-基)苯基]甲基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-曱基丙基]-5-氟苄腈、3-[(lQ-l-(l-(0SK4-M苯基)[3-(l,3,4-嗨二唑-2-基)苯基]曱基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-曱基丙基-5-氟千腈、3-[(15)-1-(1-{(5>(4-氯苯基)[3-(1，3，4-嗯二唑-2-基)苯基]曱基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-甲基丙基]-5-氟苄腈、3-((15>1-{1-[(5)-[3-(5-氨基-1,3,4-嗨二唑-2-基)苯基](4-氯苯基)甲基]氮杂环丁烷-3-基}-2-氟-2-甲基丙基)-5-氟苄腈、3-((15)-1-{1-[(^)-[3-(5-氨基-1,3,4-嗯二唑-2-基)苯基](4-氰基苯基)曱基]氮杂环丁烷-3-基}-2-氟-2-甲基丙基)-5-氟千腈、3-[(lQ-l-(l《5K4-氰基苯基)[3-(1，2,4-嗯二唑-3-基)苯基]曱基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-曱基丙基]-5-氟苄腈、3-[(15)-1-(1-{(5)-(4-氯苯基)[3-(1,2,4-嚼二唑-3-基)苯基]甲基}氮杂环丁烷-3-基)-2-氟-2-甲基丙基]-5-氟苄腈、5-[3-((S)-(4-氯苯基){3-[(15)-1-(3,5-二氟苯基)-2-氟-2-曱基丙基]氮杂环丁烷-1-基}曱基)苯基]-l,3,4-嚼二唑-2(3/f)-酮、5-[3-((5)-(4-氯苯基){3-[(15)-1-(3，5-二氟苯基)-2-氟-2-甲基丙基]氮杂环丁烷-1-基}甲基)苯基]-l,3，4-嗨二唑-2(3//>酮、4-{(5)-{3-[(15)-1-(3,5-二氟苯基)-2-氟-2-甲基丙基]氮杂环丁烷-1-基}[3-(5-氧代-4,5-二氢-1,3,4-嗯二唑-2-基)苯基]曱基}-苄腈、ACOMPLIA(利莫那班、AKl-哌啶基)-5-(4-氯苯基)-l-(2,4-二氯苯基)-4-甲基吡唑-3-甲酰胺、SR14ni6A)、3-(4-氯苯基-N，-(4-氯苯基)磺酰基-N-甲基-4-苯基-4,5-二氢-lH-吡唑-l-曱酰胺(SLV-319)、他拉那班(taranabant)、A4(lS,2S)-3-(4-氯苯基)-2-(3-氰基苯基)-l-甲基丙基]-2-甲基-2-[[5-(三氟曱基)-2-吡啶基]氧基]丙酰胺，及其药学上可接受的盐。可与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体NPY5拮抗剂包括3-氧代-N-(5-苯基-2-吡嗪基)-螺[异苯并呋喃-l(3H)，4，-哌啶]-l，-甲酰胺、3-氧代-N-(7-三氟曱基吡啶并[3,2-b]吡啶-2-基)螺-[异苯并呋喃-1(3印,4，-哌啶]-1，-曱酰胺、N-[5-(3-氟苯基)-2-嘧啶基]-3-氧代螺-[异苯并呋喃-l(3H),4，-哌啶]-l，-甲酰胺、反式-3，-氧代-N-(5-苯基-2-嘧啶基)螺[环己烷-l,l，(3，H)-异苯并呋喃]-4-曱酰胺、反式-3，-氧代-N-[l-(3-喹啉基)-4-咪唑基]螺[环己烷-l,l，(3，H)-异苯并呋喃]-4-甲酰胺、反式-3-氧代_^_(5-苯基-2-吡嗪基)螺[4-氮杂异-苯并呋喃-1(3印,1，-环己烷]-4，-甲酰胺、反式-N-[5-(3-氟苯基)-2-嘧义基]-3-氧代螺[5-氮杂异苯并呋喃-l(3H),l，-%己烷]-4，-甲酰胺、反式-N-[5-(2-氟苯基)-2-嘧啶基]-3-氧代螺[5-氮杂异苯并呋喃-l(3H),l，-环己烷]-4，-曱酰胺、反式-N-[l-(3,5-二氟苯基)-4-咪唑基]-3-氧代螺[7-氮杂异苯并呋喃-1(3印,1，-环己烷]-4，-曱酰胺、反式-3-氧代-N-(l-苯基-4-吡唑基)螺[4-氮杂异苯并呋喃-1(3^,1，-环己烷]-4，-甲酰胺、反式-N-[l-(2-氟苯基)-3-吡唑基]-3-氧代螺[6-氮杂异苯并呋喃-l(3H),l，-环己烷H，-曱酰胺、反式-3-氧代-N-(l-苯基-3-吡唑基)螺[6-氮杂异苯并呋喃-l(3H),l，-环己烷]-4，-甲酰胺、反式-3-氧代-1^-(2-苯基-1,2，3-三唑-4-基)螺[6-氮杂异苯并呋喃-1(3印,1，-环己烷]-4，-甲酰胺，及其药学上可接受的盐和酯。可与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体ACC-1/2抑制剂包括l'-[(4,8-二曱氧基喹啉-2-基)羰基]-6-(1//-四唑-5-基)螺[色满-2,4'-哌咬]-4-S同；(5-{1'-[(4,8-二曱氧基喹啉-2-基)羰基]-4-氧代螺[色满-2，4'-哌啶]-6-基}-2//-四唑-2-基)新戊酸甲酯；5-{1'-[(8-环丙基-4-甲氧基喹啉-2-基)羰基]-4-氧代螺[色满-2,4'-哌啶]-6-基}烟酸；l'-(8-甲氧基-4-吗啉一4-基-2-萘曱酰基)-6-(1//-四唑-5-基)螺[色满-2，4'-哌啶]-4-酮；和1'-[(4-乙氧基-8-乙基喹啉-2-基)羰基]-6-(1//-四唑-5-基)螺[色满-2,4'-哌啶]-4-酮；及其在药学上可接受的盐和酯。MK-3887,L-001738791。可与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体MCH1R拮抗剂包括1-{4-[(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)氧基]苯基}-4-[(4-氟千基)氧基]吡啶-2(1//)-酮、4-[(4-氟千基)氧基]-1-{4-[(1-异丙基氮杂环丁烷-3-基)氧基]苯基〉吡啶-2(l/f)-酮、l-[4-(氮杂环丁烷-3-基氧基)苯基]-4-[(5-氯吡啶-2-基)甲氧基]吡啶-2(1//)-酮、4-[(5-氯吡啶-2-基)曱錄]-1-{4-[(1-乙基氮杂环丁烷-3-基)氧基]苯基)吡啶-2(l/f)-酮、4-[(5-氯吡啶-2-基)甲氧基]_1_{4-[(1-丙基氮杂环丁烷-3-基)氧基]苯基}吡啶-2(1//)-酉同和4-[(5-氯吡啶-2-基)曱氧基]-1-(4-{[(25)-1-乙基氮杂环丁烷-2-基]甲氧基}苯基)吡咬-2(1//)-酮，或其药学上可接受的盐。可与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体DP-IV抑制剂为7-[(3R)-3-氨基-4-(2,4,5-三氟苯基)丁酰基]-3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-l，2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪，或其在药学上可接受的盐。可与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体H3(组胺H3)拮抗剂/反向激动剂包括在WO05/077905中描述的那些，包括3-{4-[(1-环丁基-4-哌啶基)氧基]苯基卜2-乙基吡啶并[2,3-d]-嘧啶-4(3H)-酮、3隱(4國[(l曙环丁基画4画哌"纽)氧基]苯基〉-2-曱基吡啶并[4，3-d]嘧啶-4(3H)画酮、2-乙基-3-(4-{3-[(33)-3-曱基哌啶-l-基]丙氧基〉苯基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮2-曱基-3-(4-(3-[(3S)-3-甲基哌啶-l-基]丙氧基)苯基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮、3-{4-[(1-环丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}-2，5-二曱基-4(3H)-喹唑啉酮、3-(4-[(l-环丁基-4-哌"絲)氧基]苯基)-2-曱基-5-三氟曱基-4(3印-会唑啉酮、3-{4-[(1-环丁基-4-哌啶基)氧基]苯基}-5-甲氧基-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮、3-{4-[(1-环丁基哌啶-4-基)氧基]苯基)-5-氟-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮、3-{4-[(1-环丁基哌啶-4-基)氧基]苯基卜7-氟-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮、3-{4-[(1-环丁基哌啶-4-基)氧基]苯基}-6-曱氧基-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮、3-{4-[(1-环丁基哌啶-4-基)氧基]苯基卜6-氟-2-曱基-4(3H)-喹唑啉酮、3-{4-[(1-环丁基哌啶-4-基)氧基〗苯基)-8-氟-2-曱基-4(3H)-喹唑啉酮、3-{4-[(1-环戊基-4-哌啶基)氧基〗苯基)-2-曱基吡啶并[4,3-d]嘧啶-4(3H)-酮、3-{4-[(1-环丁基哌啶-4-基)氧基]苯基卜6-氟-2-甲基吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮、3-{4-[(1-环丁基-4-哌"絲)氧基〗苯基}-2-乙基吡啶并[4，3-(1〗嘧啶-4(3印-酉同、6-曱氧基-2-甲基-3-(4-[3-(l-哌啶基)丙ll^]苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮、6-曱氧基-2-甲基-3-H-[3-(l-p比咯烷基)丙氧基]苯基)p比啶并[3,4-d]嘧啶曙4(3H)-酮、2,5-二甲基-3-{4-[3-(1-吡咯烷基)丙絲]苯基}-4(3印-会唑啉酮、2-曱基-3-{4-[3-(卜他咯烷基)丙氧基]苯基}-5-三氟曱基-4(3印-喹唑啉酮、5-氟-2-曱基-3-(4-[3-(l-哌啶基)丙氧基]苯基)-4(3H)-会唑啉酮、6-曱氧基-2-甲基-3-{4-[3-(1-哌啶基)丙氧基]苯基}-4(3印-喹唑啉酮、5-甲氧基-2-曱基-3-(4-{3-[(35)-3-甲基哌啶-l-基]丙氧基}苯基)-4(3H)-喹唑啉酮、7-甲氧基-2-甲基-3-(4-(3-[(3S)-3-曱基哌啶-l-基]丙氧基}苯基)-4(3H)-喹唑啉酮、2-曱基-3-(4-{3-[(35)-3-甲基哌啶-1-基]丙氧基}苯基)吡啶并[2,3-d]嘧咬-4(3H)-酮、5-氟-2-甲基-3-(4-(3-[(2R)-2-曱基吡咯烷-l-基]丙緣}苯基)-4(3印-喹唑啉酮、2-甲基-3-(4-(3-[(2!1)-2-甲基p比咯烷-l-基]丙氧基〉苯基)吡啶并[4,3-d]嘧"定-4(3H)-酮、6-甲氧基-2-甲基一3-(4-(3-[(2R)-2-甲基吡咯烷-l-基]丙氧基〉苯基)-4(3H)-喹唑啉酮、6-甲氧基-2-甲基-3-(4-{3-[(23)-2-甲基p比咯烷-l-基]丙氧基}苯基)-4(3H》喹唑啉酮，及其药学上可接受的盐.与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体CCK1R激动剂包括3-(4-{[1-(3-乙氧基苯基)-2-(4-甲基苯基)-1//-咪唑-4-基]羰基}-1-哌嗪基)-l-萘酸；3-(4-{[1-(3-乙氧基苯基)-2-(2-氟-4-甲基苯基)-1//-咪唑-4-基]羰基}-1-哌嗪基)-1-萘酸；3-(4-{[1-(3-乙氧基苯基)-2-(4-氟苯基)-1//-咪唑_4-基]羰基}-1-哌嗪基)-1-萘酸；3-(4-{[1-(3-乙氧基苯基)-2-(2,4-二氟苯基)-1//-咪唑-4-基]羰基}-1-哌嗪基)-1-萘酸；和3-(4-{[1-(2,3-二氢-1，4-苯并二嗨英-6-基)-2-(4-氟苯基)-1//-咪唑-4-基]羰基}-1-哌溱基)-1-萘酸；及其药学上可接受的盐。MK-8406与神经介肽U受体激动剂联合使用的具体MC4R激动剂包括1)(55>1'-{[(3&4尺)-1-叔-丁基-3-(2,3，4-三氟苯基)哌啶-4-基]羰基}-3-氯-2-甲基-5-[1-甲基-1-(1-甲基-1//-1,2,4-三唑-5-基)乙基]_5//-螺[呋喃并[3，4-6]吡啶-7,4，-哌啶];2)(5i)-l'-([(3尺，4")-l-叔-丁基-3-(2,3,4-三氟苯基)-哌啶-4-基]羰基}-3-氯-2-甲基-5-[1-甲基-1-(1-甲基-1//-1,2,4-三唑-5-基)乙基]-5//-螺[呋喃并[3,4-6]吡啶-7,4，-哌啶];3)2-(1'-{[(3&4")-1國叔-丁基_4-(2,4-二氟苯基)吡咯烷-3-基]羰基}-3-氯-2-曱基-5//-螺[呋喃并[3,4-6]吡啶-7,4，-哌啶]-5-基)-2-甲基丙腈；4)1'-{[(3&4尺)-1-叔-丁基-4-(2,4-二氟苯基)吡咯烷-3-基]羰基}-3-氯-2-甲基-5-[1-甲基-l-(l-曱基-1//-1,2,4-三唑-5-基)乙基]-5//-螺[呋喃并[3,4-6]吡啶-7,4，-哌啶];5)Aq(3凡4i)-3-((3-氯-2-曱基-5-[l-甲基-l-(l-甲基-l/f-l,2，4-三唑-5-基)乙基]-1'//,5//-螺[呋喃并-[3,4-6]吡啶-7,4，-哌啶]-1'-基}羰基)-4-(2,4-二氟苯基)-环戊基甲基四氢-2//-吡喃-4-胺；6)2-[3-氯-1'-({(1尺,2^)-2-(2，4-二氟苯基)-4-[甲基(四氢-2//-吡喃-4-基)#^]-环戊基}-羰基)-2-甲基-5//-螺[呋喃并[3,4-6]吡啶-7，4，-哌啶]-5-基]-2-甲基-丙-腈；及其药学上可接受的盐。另外，肠促胰岛激素胰高血糖素样肽1(GLP-1)的其它肽类似物和才莫拟物也可以和神经介肽u受体激动剂联合使用。给予个体含有一种或多种神经介肽U受体激动剂的药物组合物的方法包括但不限于皮内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。可通过任何常规途径给予组合物，例如通过输注或推注、通过上皮或粘膜与皮肤外膜(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)的吸收、眼睛等，并可以连同其它生物活性药剂一起给予。给药可为系统的或局部的。另外，可通过任何合适的途径有利地将组合物给予中枢神经系统，包括心室内和鞘内注射。连接贮器(例如Ommaya贮器)的心室内导管可便于心室内注射。还可以通过使用吸入器或喷雾器和含雾化剂的制剂利用肺部给药。还可能需要向需要治疗的区域局部给予一种或多种神经介肽U受体激动剂；这通过例如但不限于在手术当中局部输注、局部应用、注射、利用导管、利用栓剂或利用植入体实现。多种传递系统是已知的，并可用于给予神经介肽U受体激动剂，所述传递系统包括但不限于脂质体嚢化、微粒、微嚢；微细胞；聚合物；胶嚢；片剂；等等。在一个实施方案中，神经介肽U受体激动剂可在嚢泡中传递，尤其可以在脂质体中传递。在脂质体中，除了其它在药学上可接受的载体之外，神经介肽U受体激动剂还与两性物质组合，所述两性物质例如为以胶束的聚集形式存在的脂质、不溶性单层、液晶或在水溶液中的板层。适于脂质体配制的脂类包括但不限于甘油一酯、甘油二酯、硫脑苦脂、溶血卵磷脂、磷脂、急苷、胆汁酸等。这些脂质体制剂的制备在本领域的技术水平之内，如在美国专利序号4,837,028和美国专利序号4,737,323中7>开的。在又一个实施方案中，神经介肽U受体激动剂可在控释系统中递送，所述控释系统包括但不限于传递泵(参见例如Saudek等，NewEngl.J.Med.321:574(1989)和半透性聚合材料(参见例如Howard等，J.Neurosurg.71:105(1989))。另外，可将控释系统置于治疗靶标(例如脑)附近，由此仅需要一部分系统齐寸量。参见例如Goodson,载于A/e&'ca/^^//ca"om1o/Cowfra〃ed化/簡e，1984.(CRCPress,BoccaRaton,Fla.)。有效治疗特定疾病或病症的含神经介肽U受体激动剂的组合物的量取决于该疾病或病症的性质，并可以由本领域一般技术人员通过标准临床技术来确定。另外，体外测定任选地可用于帮助鉴定最佳剂量范围。制剂中所用的精确剂量还取决于给药途径和该疾病或病症的整体严重性，并应根据执业医师的判断和每名患者的情况来决定。最后，主治医师将决定治疗每名个体患者所用的组合物量。最初，主治医师将给予低剂量的组合物，并观察患者反应。可给予较大剂量的组合物，直至对该患者获得最佳疗效，此时剂量不再增加。一般而言，为单剂量或分剂量的日剂量范围处于约0.001mg/kg至约100mg/kg哺乳动物体重的范围内，优选0.01mg/kg至约50mg/kg，最优选0.1-10mg/kg。另一方面，在某些情况下，可能必需使用这些限度之外的剂量。然而，静脉内给予含有神经介肽U受体激动剂的组合物的适宜剂量范围一般为约5-500微克(吗)活性化合物/公斤(Kg)体重。适于鼻内给予的剂量范围一般为约0.01pg/kg体重至lmg/kg体重。有效剂量可由得自体外或动物模型测试系统的剂量-响应曲线外推。栓剂一般包含在0.5%-10%重量范围内的活性成分；口服制剂优选包含10%-95%的活性成分。最后，主治医师将决定使用含本发明的神经介肽U受体激动剂的组合物的适宜疗程。剂量还将根据年龄、体重和个体患者的应答而改变。还提供一种药物包装或药盒，其包含一个或多个容器，所述容器装有一种或多种药物组合物成分和神经介肽U受体激动剂。所述容器任选地可附带管理药品或生物制品的生产、使用或销售的政府机关规定形式的通知书，该通知书反映了政府机关对用于人用的生产、使用或销售的批准。以下实施例意在促进对本发明的进一步理解。实施例1人或啮齿动物NMURl-或NMUR2-表达细胞系的产生将编码NMUR1或NMUR2的人、小鼠或大鼠cDNA(如在Howard等，Nature406:70-74(2000)中所述)亚克隆入pcDNA5(Invitrogen)中，并使用脂转染胺试剂(Invitrogen)转染入购自Invitrogen(Carlsbad,CA)的FLP-InCHO细胞和HEK-293FLP-In细胞。Flp-In系统允许使用来自酵母的Flp重组酶于特定基因组位置整合和表达特定目标基因。通过在含有200pg/mL潮霉素的培养基(Invitrogen)中生长选择转染的细胞。冷冻早期传代数的群体，这些储液用于进一步的研究。通过FLIPR以及RT-PCR功能性鉴定表达mRNA的稳定克隆。基于公开的基因组数据库，啮齿动物NMUR1受体看起来没有传统甲硫氨酸(ATG)作为用于翻译的起始密码子，但包含替代的起始密码子(对大鼠为TTG,对小鼠为CTG)。由此产生两个不同的啮齿动物NMUR1细胞系一个细胞系具有由基因组数据库预测的密码子，另一个细胞系用工程过的甲硫氨酸(ATG)作为起始密码子。另外，在稳定表达处于CMV启动子控制下的水母素基因的HEK-293/aeq17细胞中产生表达人受体的稳定细胞系。将人NMUR2cDNA克隆入pCDNA3.1中，在含有G418和潮霉素(NMUR2)或嘌呤霉素(NMUR1)的培养基中选择转染细胞后，将人NMUR1亚克隆入pIRES-puro(Clontech，MountainView,CA)中。实施例2体外功能测定NMU受体主要通过Gaq/n蛋白发信号；因此对功能活性可使用钓流测定。FLIPR测定将表达人和或啮齿动物NMUR1或人NMUR2受体的稳定细胞系以12,000个细胞/孔的密度铺板在包被聚赖氨酸的384孔黑壁平板上过夜。第二天，由平板除去培养基，随后对细胞加载，用FLIPR緩冲液(lXHank，s緩冲盐水，其含有20mMHEPES、0.1%BSA、2.5mM丙磺舒(Sigma)和1.6mMTR40)稀释的钙敏感染料Fluo-3(MolecularProbes)。除非另有说明，否则所有试剂都得自Invitrogen。将肽储液以2mM储液浓度重悬浮在DMSO中，并在实验当天用FLIPR緩沖液稀释至4nM工作储液浓度。在于室温温育90分钟后，将细胞平板加载到FLIPR(MolecularDevices)上，以在加入化合物/肽之前和之后监测细胞荧光(激发=488nM;发射=540nM)。用1|liM肽作为最高剂量，使用FLIPR对表达NMUR的细胞系4企测8-12点的剂量反应。以最大荧光单位减去每孔刚刚在刺激前的荧光作为加入肽后的反应。使用GraphPadPrism(SanDiego，CA)软件计算ECso值。神经介肽U受体激动剂(NMU1至NMU25)在FLIPR测定中对人(表3)、小鼠(表4)和大鼠(表5)NMUR1和NMUR2的体外响应。EC50以nM值报告。活性百分率是指于1^M的最大反应相比于相同浓度的hNMU-25反应。NT-未测试。各表表明，大部分神经介肽U受体激动剂是双特异性的，结合NMUR1和NMU2受体这二者。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage61</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage62</column></row><table>水母素除了FLIPR之外，还可以使用水母素测定来评价NMU受体功能。表达水母素(aequorinjellyfish)基因的稳定细胞系可通过监测细胞内钩流用于报告GPCR的活化。目标是鉴定特异性刺激水母素生物发光的化合物。通过用腔肠动物萤光素腔肠素处理细胞产生钙依赖性发光。简而言之，用腔肠素(MolecularProbes,Carlsbad,CA)"充电，，表达hNMURl或hNMUR2的HEK-293/aeq17细胞的汇合单层。用含有300谷胱甘肽和0.1%FBS的培养基淋洗汇合的T75烧瓶。细胞于37。C在8mL培养基、0.1%FBS、300谷胱甘肽和20腔肠素中温育1小时。随后用6mLECB緩沖液(140mMNaCl、20mMKCl、20mMHEPES、5mM葡萄糖、1mMMgCl、1mMCaCl2、0.1mg/mLBSA，pH7.3-7.4)淋洗T75烧瓶。用ECB緩沖液由烧瓶中移出细胞，沉淀，并以2x105个细胞/mL的密度重悬浮。将激动剂加至细胞，使用照度计测定活性。IP1测定除了直接检测钙以外，还可以通过检测肌醇1磷酸(IP1)测定NMU受体活性，肌醇1磷酸是磷脂酰肌醇级联的主产物之一，与Gq偶联活性紧密相关。可使用来自Cisbio(Bedford,MA)的测定试剂盒(IPOne)，其使用HTRF(均相时间分辨荧光)检测IP1水平。该测定依照生产商指引。简而言之，将细胞以30,000个细胞/孔的密度铺板在384孔白壁板上过夜。第2天，由细胞中除去培养基，加入10iuL用刺激緩沖液(10mMHEPES、1mMCaCl2、0.5mMMgCl2、4,2mMKCL、146mMNaCl、5.5mM葡萄糖、50mML1C1，pH7.4)稀释的激动剂。将细胞于37。C与激动剂温育1小时。加入检测分子、IPl-d2缀合物和抗IP1穴状化合物(按照生产商方案制备)，将细胞于室温温育1小时。用Envision机器检测荧光，由设备读数的荧光比率计算结果。NMU受体活性的替代检测其它数据提示，NMU受体信号转导可通过God偶联活性发生。业已表明，活化hNMURl或hNMUR2对毛喉素(IOixM)刺激的cAMP累积产生抑制。为检测Gi偶联的信号转导，可检测对毛喉素诱导的cAMP的抑制。简而言之，在进行实验前将细胞铺板24小时。将神经介肽U受体激动剂加入细胞，并温育10分钟，接着加入10|xM毛喉素。在IO分钟温育后，由细胞提取cAMP，并通过放射受体测定检测。在有和没有激动剂处理的情况下，检测cAMP的基础水平和毛喉素刺激的cAMP水平。在表6和7中显示了对物种间的NMUR1特异性的NMUR1亚型选择性神经介肽U受体激动剂的功能数据和结合数据的概述。活性百分率相对于天然hNMU反应计算。表6对NMUR1选择性肽H的体外响应<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>()表示具有100。/。活性的人NMU-25的值<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>()表示具有100。/。活性的人NMU-25的值实施例3结合测定膜制备用磷酸緩沖盐水收获表达NMU受体的汇合细胞单层(上述HEK细胞)，通过离心收集，并重悬浮在膜緩沖液(50mMTrisClpH7.4,5mMMgCl2，1X蛋白酶抑制剂混合物，10pM石粦酰二肽)中。在细胞沉淀匀浆后，将溶液于4°C以18,000rpm离心20分钟。将沉淀重悬浮在膜緩冲液中，以产生0.5-5^g^L膜的终浓度，并储存于-80。C。125/-/jMWX/_25结合测定实验以96孔形式使用2-5pg膜和0.1nM125i-hNMU-25(约12,000cpm/孑L)在200体积的测定緩沖液(25mMTrisCl,pH7.4，10mMMgCl2,2mMEDTA,1X蛋白酶抑制剂混合物，100pg/mL杆菌肽(Bacitricin)，10|LiM磷酰二肽)中进行。对于非特异性结合，加入1^MhNMU-25。加入约5pL肽，以检测拮抗剂活性，完整的反应于室温振摇温育80分钟。通过经0.3%聚乙烯亚胺预浸的Millipore96孔滤板快速过滤终止反应，并用冰冷的緩沖液(5mMTrisClpH7.4，10mMMgCl2，2.5mMEDTA,0.04%TritonX-100)洗涤。于室温过夜风干平板，回收的放射性通过标准闪烁计数测定。IC50值使用GraphPadPrism4欠件测定。数据分析使用Prism(GraphPadSoftware)拟合浓度-反应曲线和放射配体结合数据。结果汇总于下表8和9。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage66</column></row><table>表9<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>实施例4神经介肽U受体激动剂的合成可以使用本领域众所周知的技术生产神经介肽U受体激动剂。例如，可化学合成或生化合成截短的NMU类似物的多肽区，如有需要，该多肽区可^皮修饰，以产生^皮封闭的N-末端和/或^皮封闭的C-末端。化学合成多肽的技术在本领域众所周知。(参见例如Vincent,载于尸r/f/t/eofwdDragDe/Zve^，NewYork,N.Y.,Dekker,1990)。包4舌将核酸导入细胞中并表达核酸的生化合成技术的实例提供于Ausubel,CWraf尸ratoco/sM/ecw/arJohnWiley,1987-1998，和Sambrook等，载于A/o/ecw/arC/ow/"g,丄a6orato^yA/awwa/，第2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989。1.1氨基酸取代和修饰神经介肽U受体激动剂NMU1是一种PEG化肽，其中40kDa的分支PEG连接在天然人神经介肽U肽的N-末端。该肽的N-末端基团用分支(PEG)240KN-羟基琥珀酰亚胺类似物(例如mPEG2-NHS-40k;Nektar,SanCarlos,CA;目录号2Z3Y0T01)酰化。这设计用于产生具有改善的药理学特征的神经介肽U受体激动剂。为NMU的野生型序列的肽前体与40kDa分支PEG的N-羟基琥珀酰亚胺衍生物反应。用该试剂PEG化特异性发生在该肽的N-末端氨基，因为该氨基是该肽中唯一可用的氨基。神经介肽U受体激动剂NMU2是在N-末端被乙酰化的天然NMU肽。其^皮设计用于研究在N-末端乙酰化或更一般地酰化对活性的影响。基于覆盖残基19-25的最小活性序列，通过在N-末端加入额外的乙酰化半胱氨酸残基在这些残基17-25修饰所述肽序列。半胱氨酸硫醇基团(a)被N-乙基马来酰亚胺进一步衍生化，以获得NMU6，它是一种用于缀合的控制肽；(b)被(PEG)240kDa进一步衍生化，以获得NMU7，它是^皮设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物；或(c)被胆固醇基团进一步衍生化，以获得NMU11,它是被设计得具有改善的体内药理学特征的脂化类似物。由天然NMU序列开始并在N-末端加入乙酰化半胱氨酸残基设计其它肽序列。例如，半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU8,它是一种用于缀合的控制肽；(b)用来自Nektar的(PEG)240kDa(mPEG2-MAL-40k,目录号2D3Y0T01)衍生化，以获得NMU9，或用来自NOFCorporation,Japan的(PEG)240kDa(SUNBRIGHTGL2-400MA)衍生化，以获得NMU12;(c)用胆固醇基团衍生化，以获得NMU10;(d)用(PEG)20kDa衍生化，以获得NMU21;(e)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU26;或(f)用(PEG)40kDa衍生化，以获得NMU27。所有这些神经介肽U受体激动剂都祐:设计得具有改善的体内药理学特征。在其它肽实例中，天然NMU-25在20位的氛基酸残基被改变为D-丙氨酸，在21位的氨基酸残基被改变为色氨酸。这些突变赋予NMUR1受体额外的选择性，并在N-末端具有额外的乙酰化半胱氨酸残基。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU13,它是一种控制肽；或(b)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU14，它是一种被设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物。基于含有氨基酸残基19-25的最小活性序列设计肽NMU15和16，以获得PEG化的肽。通过在N-末端引入作为间隔基的Ttds基团(l画氨基-4,7,10-三氧杂-13國十三胺琥珀酸(succinicacid))和乙酰化的半胱氨酸残基修饰序列。引入间隔基是为了使由于加入PEG部分而引起的最小序列活性的影响最小。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU15，它是一种用于缀合的控制肽；或者(b)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU16，它是一种被设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物。基于N-末端截短的序列12-25设计肽NMU17和18，以获得PEG化的肽。该肽在N-末端具有额外的乙酰化半胱氨酸残基。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU17，它是一种用于缀合的控制肽；或者(b)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU18，它是一种被设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物。基于N-末端截短的序列7-25设计肽NMU19和20，以获得PEG化的肽。该肽在N-末端具有额外的乙酰化半胱氨酸残基。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU19,它是一种用于缀合的控制肽；或者(b)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU20，它是一种被设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物。由天然NMU序列开始，并在N-末端加入两个半胱氨酸残基，设计肽NMU22和23。该肽的N-末端被乙酰化。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU22，它是一种用于缀合的控制肽；或者(b)用(PEG)20kDa衍生化，以获得NMU23,它是一种被设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物。肽NMU24和25基于天然NMU序列，在该序列的N-末端加入棕榈酰化半胱氨酸残基。设计它们是为了研究对以下的活性的影响(l)对脂肪酸链的N-末端棕榈酰化，或更一般地酰化；和(2)PEG化和脂化的联合作用。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU24，它是一种被设计得具有改善的体内药理学特征的脂化类似物，还被设计用作用于缀合的控制肽；或者(b)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU25，该脂化和PEG化的类似物被设计得具有改善的体内药理学特征。肽NMU28和29覆盖天然NMU的残基17-25。在N-末端加入乙酰化半胱氨酸残基以及用作间隔基的Ttds基团。引入间隔基是为了使由于加入PEG部分而引起的对序列活性的影响最小。半胱氨酸硫醇基团(a)用N-乙基马来酰亚胺衍生化，以获得NMU28,它是一种用于缀合的控制肽；或者(b)用(PEG)240kDa衍生化，以获得NMU29，它是一种^皮设计得具有改善的体内药理学特征的PEG化类似物。1.2.PEG化和/或胆固醇化考虑NMU的结构及其与NMU受体的相互作用，选择本发明的神经介肽U受体激动剂上的PEG化位点。因此，PEG化优选为位点特异性的。有可能在肽NMU的N-末端MPEG化，因为这是该序列中唯一可用的氨基。例如，用分支(PEG)240kDaN-羟基琥珀酰亚胺类似物(例如mPEG2-NHS-40k,Nektar,目录号2Z3Y0T01)酰化该肽的N-末端基团。1.3.神经介肽U受体激动剂的合成用肽合成仪ABI433A(AppliedBiosystems)使用Fmoc/tBu化学通过固相合成来合成神经介肽U受体激动剂(参见表1)。对于每一种肽都使用0.75克1%交|关的树脂Fmoc-LinkerAM-Champion(BiosearchTechnologies,Inc.,Novato,CA)和用改性Rink连接物p-[(R,S)-a-[9H画药_9-基-曱氧基甲酰氨基]-2,4-二曱氧基苄基]-苯氧基乙酸衍生化的PEG画PS基树脂(Rink,TetrahedronLett.28:3787-3789(1987);Bematowicz等，TetrahedronLett.30:4645-4667(1989》。用相对于无氨基树脂4倍过量的活化氨基酸进行60分钟的酰化反应。氨基酸用等摩尔量的HBTU(2-(lH-苯并三唑-l-基)-l,l,3,3-四甲基脲六氟磷酸酉旨)和2倍摩尔过量的DIEA(N，N-二异丙基乙胺)的DMF溶液活化。或者，使用Fmoc/t-Bu化学用Pioneer肽合成4义(AppliedBiosystems)通过固相合成来合成该肽。在此情况下，在合成仪上组装肽末端之后，所有的酰化反应都用相对于无氨基树脂4倍过量的活化氨基酸进行60分钟。侧链保护基为对于Asp、Glu、Ser和Tyr为叔-丁基；对于Asn、Cys和Gln为三苯曱基；对于Arg为2,2，4,6,7-五甲基二氬苯并呋喃-5-磺酰基。通过与10倍过量的乙酸肝的DMF溶液反应在组装的肽末端进行N-末端乙酰化反应。通过与相对于无氨基树脂4倍过量的活化的棕榈酸反应在组装的肽末端进行N-末端棕榈酰化反应(对于NMU24和NMU25)。棕榈酸用等摩尔量的DIPC(1,3-二异丙基碳二亚胺)和HOBt(羟基苯并三唑)的DMF溶液活化。在合成结束时，用20mL切割混合物、88%TFA、5%苯酚、2%三异丙基硅烷和5"/o水(SoleandBarany,J.Org.Chem.57:5399-5403(1992))于室温单独地处理干的肽-树脂2.5小时。过滤每种树脂，将溶液加入冷的甲基-叔-丁醚，以便沉淀所述肽。在离心后，用新鲜的冷甲基-叔-丁醚洗涤肽沉淀，以除去有机清除剂。该过程重复两次。千燥最终的沉淀，重悬浮在H20、20%乙腈中，并冻干。使用半制备型WatersRCMDelta-PakTMC4或Cl8柱(40x200mm,15pm)，并使用洗脱剂(A)0.1%TFA的水溶液和(B)0.1%TFA的乙腈溶液、流速80mL/分钟，通过反相HPLC纯化粗肽。用Phenomenex,JupiterC4柱(150x4.6mm,5pm)或ReproSil國Pur300C4柱(l50x4.6mm,5(xmXDr'MaischGmbH)或Beckman,UltrasphereCl8柱(250x4.6mm,5nm)、流速1mL/分钟进行分析HPLC。纯化的肽用MicromassLCZ平台通过电喷雾质谱表征。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在HEPES0.1MpH7.3、EDTA4mM中进行肽NMU6的合成。加入1.5摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在HEPES0.1MpH7.3、EDTA4mM中进行肽NMU8的合成。加入1.5摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在HEPES0.1MpH7.3、尿素8M、EDTA4mM中进行肽NMU13的合成。加入l.S摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在HEPES0.1MpH7.3、EDTA4mM中进行肽NMU15的合成。加入1.5摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含石危醇的NMU肽前体溶解在HEPES0.1MpH7.3、EDTA4mM中进行肽NMU17的合成。加入1.5摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在磷酸钠0.1MpH6.5、尿素4M、EDTA4mM中进行肽NMU19的合成。加入1.5摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在磷酸钠0.2MpH6.5、尿素8M、EDTA4mM中进行肽NMU22的合成。加入3摩尔过量的N画乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含硫醇的NMU肽前体溶解在磷酸钠0.2MpH6.5、尿素8M、EDTA4mM中进行肽NMU24的合成。加入3摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。通过将含石危醇的NMU肽前体溶解在HEPES0.1MpH7.3、EDTA4mM中进行肽NMU28的合成。加入1.5摩尔过量的N-乙基马来酰亚胺。在l小时温育后，通过HPLC纯化该肽。1.4.神经介肽U(NMU)类似物的PEG化在允许酰胺键(NMU1)或硫醚键形成的条件下进行PEG化反应。然后使用阳离子交换层析(IXC)和大小排阻层析(SEC)分离PEG化的NMU肽。阳离子交换层析(IXC)在TSKSP-5PW(Tosoh)柱(l6x100mm)上用3.5柱体积NaCl(0-1M)的甲酸0.2%溶液的线性梯度、流速加载1mL/分钟、梯度洗脱2mL/分钟进行。大小排阻层析(SEC)在TSK-HW50(Tosoh)柱(21x700mm)上用乙酸0.1%(重量/体积)、30%乙腈、流速1mL/分钟进行。使用RP-HPLC、HPLC-SEC和MALDI-Tof质谱表征PEG化的NMU类似物。由天然NMU肽前体合成NMU1肽，以产生具有经酰胺键共价连接的PEG的衍生物。NMU1的合成将8.7mg肽前体(2.8imiol)溶解在1.5mL0.2MHEPES，pH7.3中。然后将溶解在3.5mL水中的360mgmPEG2-NHS-40k(NEKTAR,2Z3Y0t01)(8.6pmol)(肽对PEG的比率为1:3mol/mol)加入该溶液。在18小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。由含硫醇的NMU肽前体合成NMU7、NMU9、NMU12、NMU14、NMU16、NMU18、NMU20、NMU21、NMU23、NMU25、NMU26、NMU27和NMU29肽，以产生具有经硫醚4定共价连接的PEG的衍生物。NMU7的合成将10mg肽前体(7.6pmol)溶解在1mL0.2MHEPES,pH7.3、4mMEDTA中。然后将溶解在3mL水中的340mgmPEG2-MAL-40k(NEKTAR,2D3Y0T01)(8.4pmol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)力口入该溶液。在l小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU9的合成将15mg肽前体(4.6jimol)溶解在1mL0.2M磷酸钠，pH6.5、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的204mgmPEG2-MAL-40k(NEKTAR，2D3Y0T01)(5.1ixmol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU12的合成将8mg肽前体(2.5nmol)溶解在1mL0.1MHEPES,pH7.3、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的115mgSUNBRIGHTGL2-400MA(NOFCorp.)(2.7nmol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU14的合成将10mg肽前体(3.1jxmol)溶解在1mL0.1MHEPES,pH7.3、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的145mgSUNBRIGHTGL2-400MA(NOFCorp.)(3.4(imol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU16的合成将8.3mg肽前体(6.0iumol)溶解在1mL0.1MHEPES,pH7.3、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的280mgSUNBRIGHTGL2画400MA(NOFCorp.)(6.6pmol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)加入该溶液。在l小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU18的合成将10mg肽前体(5.4pmol)溶解在1mL0.1MHEPES,pH7.3、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的250mgSUNBRIGHTGL2-400MA(NOFCorp.)(5.9nmol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)加入该溶液。在l小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%曱酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU20的合成将10mg肽前体(4.1inmol)溶解在1mL0.1M磷酸钠，pH7.3、尿素4M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的174mgSUNBRIGHTGL2-400MA(NOFCorp.)(4.1pmol)(肽对PEG的比率为1:1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%曱酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU21的合成将10mg肽前体(3.1iumol)溶解在1mL90mM石舞酸钠，pH6.6、尿素4M、4mMEDTA中。然后将溶解在1mL水中的65mgSUNBRIGHTME-200MA(NOFCorp.)(3.1fimol)(肽对PEG的比率为1:1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU23的合成将10mg肽前体(3.0inmol)溶解在1mL90mM石粦酸钠，pH7.1、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的157mgSUNBRIGHTME-200MA(NOFCorp.)(7.5pmol)(肽对PEG的比率为1:2.5mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU25的合成将10mg肽前体(2.9iumol)溶解在1mL90mM磷酸钠，pH7.1、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL尿素8M中的125mgSUNBRIGHTGL2-400MA(NOFCorp.)(2.9iLimol)(肽对PEG的比率为1:1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%曱酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU26的合成将10mg肽前体(3.1nmol)溶解在1mL90mM磷酸钠，pH7.1、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的70mgSUNBRIGHTGL2-200MA(NOFCorp.)(3.1)amol)(肽对PEG的比率为1:1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%曱酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU27的合成将10mg肽前体(3.1(amol)溶解在1mL90mM磷酸钠，pH7.1、尿素8M、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的136mgmPEG-马来酰亚胺-40kDa(DOWpharma,008-016)(3.4iumol)(肽对PEG的比率为1:1.1mol/mol)加入该溶液。在1小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。NMU29的合成将8mg肽前体(5.1jumol)溶解在1mL0.1MHEPES,pH7.3、4mMEDTA中。然后将溶解在2mL水中的217mgSUNBRIGHTGL2-400MA(NOFCorp.)(5.1pmol)(肽对PEG的比率为1:1mol/mol)加入该溶液。在l小时温育后，酸化PEG化肽溶液至1%甲酸，并通过阳离子交换层析(IXC)纯化。IXC纯化的PEG化肽通过SEC进一步纯化，并通过RP-HPLC和MALDI-Tof表征。1.5.神经介肽U(NMU)类似物的胆固醇化用胆固醇衍生化在允许形成硫醚键的条件下进行。然后通过RP-HPLC纯化胆固醇化的神经介肽U受体激动剂，并通过电喷雾质谱表征。NMU10的合成将18mg肽前体(5.6^miol)溶解在1mLDMF中。然后将3mg胆固醇溴乙酸酯(14jimol)溶解在70THF中(肽对胆固醇溴乙酸酯的比率为1:1.1mol/mol),并将5iuLD正A(N,N-二异丙基乙胺)(相对于肽2.5倍摩尔过量)加入该溶液。在1小时温育后，胆固醇化肽通过RP-HPLC纯化，并通过电喷雾质谙表征。NMU11的合成将17mg肽前体(12.9pmol)溶解在1mLDMF中。然后将7.2mg胆固醇溴乙酸酯(14iimol)'溶解在0.17mLTHF中(肽对胆固醇溴乙酸酯的比率为1:1.1mol/mol),并将11.7|uLD正A(相对于肽5倍摩尔过量)力口入该溶液。在l小时温育后，胆固醇化肽通过RP-HPLC纯化，并通过电喷雾质谱表征。实施例5采用NMU及其类似物的喂饲研究使用标准同源重组技术产生NMUR1敲除(A^wW-Z-)小鼠。随后将Nmurl小鼠转移至TaconicFarms,在那里它们:帔保持于75%C57BL/6x25%129S6/SvEv混合遗传背景，或者与C57BL/6回交6代。NMUR2敲除(1^1111"2-/-)小鼠由DeltagenInc.,SanMateo，CA得到许可，并随后转移至TaconicFarms,在那里它们被保持于75%C57BL/6><25%129/OlaHsd混合遗传背景，或者与C57BL/6回交7代。NMUR1和NMUR2双敲除(Nmurl&2-A)小鼠通过使N61^111111"1-/-小鼠与N7Nmur2-/J、鼠杂交产生。将小鼠单独圏养在常规的SPF设施的Tecniplast笼中。小鼠最初保持定期的饲料，然后在它们的生命早期转换至高脂肪膳食(D12492:60%kcal来自脂肪；ResearchDiets,Inc.,NewBrunswick,NJ)，水随意获取，12小时昼/12小时夜周期。称重随意喂伺的膳食诱导的雄性肥胖小鼠，并在昼循环的暗期开始前约30分钟i.p.或s.c.给药，并提供预称重的等份高脂肪膳食D12492,然后在最初的暗期开始后2小时和18小时(第1天)、42小时(第2天)、66小时(第3天)和90小时(第4天)称重该膳食。于18、42、66和90小时时间点称重小鼠。数据显示了喂饲研究的结果(所有值都报告为平均值土SEM，并使用双尾非配对Student'sf检验分析数据；p值《0.05纟皮^t艮告为显著的，并用星号指示)。如在图2A和2B中所示，急性外周给予NMURl-选择性肽、神经介肽U受体激动剂H和NMU13，在野生型小鼠中显著降低食物摄取，但在7VmwW敲除小鼠中不能，证实NMUR1是这些类似物的降食欲作用所需要的。另外，这些数据证实，NMURl-选择性激动作用足以概括泛NMUR1/2激动剂NMU的降食欲作用。图3A和3B图解了以下发现急性皮下给予PEG化NMU在给药后3天内降低食物摄取。与PEG化类似物的体外和体内代谢特征相一致，在和hNMU-25相比时，NMU1在降低过夜食物摄取方面表现出更高的功效，并在给药后3天内观察到食物摄取减少。还观察到体重显著下降。图4A和4B证实，NMU12也是有效的降食欲肽。与NMU1类似，在单次皮下给予肽后的3天内，观察到食物摄取和体重显著下降。此外，图5A和5B表明，NMU12的降食欲作用由NMUR1和NMUR2受体介导。急性给予NMU12在野生型动物中高度有效，但在NMUR1/NMUR2双敲除动物中未观察到作用。因为针对NMUR2受体的作用主要发生在脑中，所以结果表明，NMU12能够穿越血脑屏障。NMUR2降低食物摄取和体重的作用需要中枢接触，而NMUR1的这些作用需要外周接触。图6A和6B表明，PEG化的NMU12的长期降食欲作用由NMUR1和NMUR2受体这二者介导。在NMUR1敲除动物中于给药后2天内观察到食物摄取和体重下降。然而，在NMUR2敲除动物中仅观察到过夜作用。这与仅由NMUR1介导的hNMU-25的降食欲作用相反，证实hNMU-25和NMU12具有截然不同的作用机制。图7A-7C表明，慢性给予NMU12可降低食物摄取和体重。NMU12每天1次(QD)、每隔1天1次Q2D)或每3天1次(Q3D)给予。图A显示了在开始治疗后9天内体重的累积变化。最后1剂在研究第4天给予，检测进行至第9天。累积食物摄取(B)和体重(C)在NMU12的所有给药范式中都显著减少。于这些剂量的食物摄取相对于溶々某治疗组减少12-27%。同样，相对于溶々&于照组，体重的累积变化范围为下降3.3%至多达7.3%。由采用hNMU-25和NMU类似物的体内实验产生的食物摄取和体重变化的下降百分率的汇总示于表10。计算是基于溶々某反应。表10<table>tableseeoriginaldocumentpage80</column></row><table>实施例6血浆稳定性实验为测定NMU12和NMU1在不同物种的血浆中的稳定性，进行体外掺入实验。将NMU12、NMU1或hNMU-25以1pM终浓度加入血浆(购自Bioreclamation)，并于多个温度(室温、4。C和37。C)温育。于不同的时间点获取这些血浆样品的等份试样，于-80。C冷冻，随后用表达人NMUR1的细胞系进行FLIPR测定，以确定在多个温育时间点后保留的活性肽百分率。样品中余下的肽活性百分率基于在用肽样品进行任何温度挑战之前于起始时间点(T=O)的样品FLIPR反应计算。在T-0时，预期收率为100%。图8图示了采用掺入实验hNMU-25和PEG化神经介肽U受体激动剂NMU1和NMU12在人血浆中的体外稳定性，表明NMU的PEG化在人血浆中提供更高的稳定性。hNMU-25在人血浆中的半衰期低于l6小时，而PEG化类似物NMU1(PEG化hNMU-M)和NMU12在于37。C温育的人血浆中表现出大于3天的半衰期。实施例7使用生物测定进行肽的药代动力学分析使用生物测定检测给药动物中的神经介肽U受体激动剂NMU12-接触水平，并与hNMU-25*接触水平比4交。用10mg/kgNMU12或hNMU-25皮下给药动物，于给药后的不同时间点收集血浆。生物测定为基于FLIPR的测定，该测定基本如上所述进行，具有以下修改。测定前的样品制备在冰上进行，以使血浆样品的降解最小。测定用4%血浆作为终浓度进行。3点滴定用给药的血浆进行，并使用FLIPR对表达人NMUR1的细胞系测试。取最大荧光单位减去刚刚在刺激之前的每个孔的荧光作为加入样品后的反应。除了给药血浆样品的3点滴定之外，肽(hNMU-25或NMU12)的16-点滴定用4%血浆(原初血浆)进行，以用作标准。使用GraphPadPrism软件，基于由合适标准的外推，计算血浆中的肽浓度。图9显示了hNMU-25和PEG化NMU12在小鼠中的药代动力学特性，表明NMU的PEG化提供了更大的体内代谢稳定性。虚线表示测定的检测限度(LOD)。这些实验表明，NMU的PEG化同时增强其体外和体内的代谢稳定性。尽管本文参考示例性实施方案描述了本发明，但应当理解的是，本发明不限于这些实施方案。本领域一般技术人员和有权使用本文教导的人员会认识到属于本发明范围的另外的修改和实施方案。因此，本发明仅由本文随附的权利要求限制。权利要求1.一种神经介肽U受体激动剂，所述神经介肽U受体激动剂具有下式结构Z1-肽-Z2及其药学上可接受的盐，其中所述肽具有氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18-X19-X20-X21-X22-X23-X24-X25(SEQIDNO27)，其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸X18为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X19为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A；氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W；X22为R、K、A或L；氨基酸X23为P、Sar、A或L；氨基酸X24为R、Harg或K；而氨基酸X25为N、任何D-或L-氨基酸、Nle或D-Nle、A；Z1为任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至N-末端氨基；Z2为NH2或任选存在的保护基，其如果存在的话，则连接至C-末端羧基。2.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中N-末端氨基酸共价连^t妾至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。3.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽还在该肽的N-末端包含半胱氨酸残基，针对所述半胱氨酸残基任选地存在保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至所述半胱氨酸残基的N-末端紘4.权利要求3的神经介肽U受体激动剂，其中所述在N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。5.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中在N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接PEG分子。6.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中具有远端和近端的连接基团以其远端共价连接至所述肽的N-末端，所述连接基团的近端共价连接半胱氨酸残基的氣基末端，针对所述半胱氨酸残基任选地存在保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至所述半胱氨酸残基的N-末端氨基。7.权利要求6的神经介肽U受体激动剂，其中所述半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和棕榈酰的分子。8.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中肽具有氨基酸序列X1画X2-X3-X4画X5國X6-X7-X8陽X9誦X10画X11國X12國X13國X14画X15-X16画Xl7-Xl8-F-L-F-R-P-R-N(SEQIDNO:l),其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在。9.权利要求8的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽具有选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6的氨基酸序列。10.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽具有示于SEQIDNO:2的氨基酸序列。11.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中所述激动剂具有结构式Ac-C2-肽-CONH2，其中Ac为乙酰基，C2为Cys(PEG)240kDa，而所述肽具有示于SEQIDNO:2的氨基酸序列。12.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽包含氨基酸序列F-R-V-D-E-E-F-Q-S-P-F-A-S-Q-S-R-G-Xl8—Xl9-X20-X21-X22画x23國x24画x25(SEQIDNO:7),其中絲酸Xl8为不存在、y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X22为K、A或L;氮基酸X23为Sar、A或L;氨基酸X24为Harg或K;而M酸X25为任何D-或L-氨基酸，Nle或D-Nle，或A。13.权利要求12的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽包含选自SEQIDNO:14、SEQIDNO:15、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23、SEQIDNO:24和SEQIDNO:25的氨基酸序列。14.权利要求1的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽包含氨基酸序列X1-X2國X3國X4國X5画X6画X7-X8(SEQIDNO:8)，其中氨基酸Xl为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X2为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X3为不存在、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X4为NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;氨基酸X5为K、A或L;氨基酸X6为Sar、A或L;氨基酸X7为Harg或K;而氨基酸X8为任何D-或L-氩基酸、Nle或D-Nle、或A。15.权利要求13的神经介肽U受体激动剂，其中所述肽包含选自SEQIDNO:9、SEQIDNO:IO、SEQIDNO:ll、SEQIDNO:12、SEQIDNO:13、SEQIDNO:16、SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19、SEQIDNO:20和SEQIDNO:21的M酸序列。16.—种用于生产可穿过血脑屏障的神经介肽U受体激动剂的方法，包括使所述激动剂共价连接一个或多个PEG分子，其中所述一个或多个PEG分子使所述肽能够穿过血脑屏障。17.权利要求16的方法，其中所述神经介肽U受体激动剂具有下式结构Zl-肽-Z2及其药学上可接受的盐，其中所述肽具有氨基酸序列X1-X2-X3-X4國X5國X6國X7-X8陽X9隱X10陽Xl1國Xl2画Xl3國Xl4國xl5-X6_xl7画Xl8画Xl9證X20-X21-X22-x23誦x24國x25(SEQIDNO:27)，其中氨基酸1-17可为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸Xl9为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;X22为R、K、A或L;氨基酸X23为p、Sar、A或L;氨基酸X24为R、Harg或K;氨基酸X25为N、任何D-或L-氨基酸、Nle或D-Nle、A.;Zl为任选存在的保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至N-末端氨基；Z2为NH2或任选存在的保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至C-末端羧基。18.—种用于生产包含全部或部分的NMU-25肽的神经介肽U受体激动剂的方法，所述NMU-25肽对神经介肽U受体亚型是特异性的，所述方法包括将所述肽的C-末端的7个氨基酸中的一个或多个改变为人NMU-25肽非天然的氨基酸或氨基酸类似物。19.一种用于治疗个体代谢疾病的方法，包括给予该个体治疗有效量的神经介肽U受体激动剂，以治疗该个体中的疾病，所述神经介肽U受体激动剂具有下式结构Zl画肽國Z2及其药学上可接受的盐，其中所述肽具有氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6画X7-X8國X9國X10-X11画X12-X13國X14-X15画X16國X17-X18-X19-X20-X21画X22-X23國X24画X25(SEQIDNO:27)，其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在；其中氨基酸Xl8为不存在、Y、W、F、脱-氨基酸或酰基；氨基酸X19为A、W、Y、F或脂肪族氨基酸；氨基酸X20为不存在、L、G、肌氨酸(Sar)、D-Leu、NMe-Leu、D-Ala或A;氨基酸X21为F、NMe-Phe、脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸、A或W;X22为R、K、A或L;氨基酸X23为p、Sar、A或L;氨基酸X24为R、Harg或K;氨基酸X25为N、任何D-或L-氨基酸、Nle或D-Nle、A;Zl为任选存在的保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至N-末端氨基；Z2为NH2或任选存在的保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至C-末端羧基。20.权利要求19的方法，其中所述代谢疾病选自肥胖症、代谢综合征或X综合征、II型糖尿病、糖尿病并发症、高血压、异常脂血症、心血管疾病、胆结石、骨关节炎和某些类型的癌症。21.权利要求19的方法，其中所述代谢疾病为肥胖症。22.权利要求19的方法，其中肽具有氨基酸序列Xl-X2-X3-X4誦X5-X6-X7画x8隱x9画Xl0國Xll-Xl2國Xl3-Xl4隱Xl5誦Xl6誦Xl7國Xl8-F画L國F國R-P-R-N(SEQIDNO:l)，其中氨基酸1-17可以为任何氨基酸或不存在。23.权利要求22的方法，其中所述肽具有选自SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6的^J^酸序列。24.权利要求23的方法，其中所述肽具有示于SEQIDNO:2的氨基酸序列。25.权利要求19的方法，其中所述N-末端氨基酸共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和椋榈酰的分子。26.权利要求19的方法，其中所述肽还在该肽的N-末端包含半胱氨酸残基，针对所述半胱氨酸残基任选地存在保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至所述半胱氨酸残基的N-末端氨基。27.权利要求26的方法，其中所述在N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和椋榈酰的分子。28.权利要求26的方法，其中所述在N-末端的半胱氨酸残基的硫醇基共价连接PEG分子。29.权利要求19的方法，其中具有远端和近端的连接基团以其远端共价连接至所述肽的N-末端，所述连接基团的近端共价连接半胱氨酸残基的羧基末端，针对所述半胱氨酸残基任选地存在保护基，所述保护基如果存在的话，则连接至所述半胱氨酸残基的N-末端氨基。30.权利要求29的方法，其中所述半胱氨酸残基的硫醇基共价连接至一个或多个选自PEG、胆固醇、N-乙基马来酰亚胺基和椋榈酰的分子。31.权利要求19的方法，其中所述激动剂具有式Ac-C2-肽-CONH2,其中Ac为乙酰基，C2为Cys(PEG)240kDa,所述肽具有示于SEQIDNO:2的氛基酸序列。32.权利要求1-15中任一项的神经介肽U受体激动剂在制备用于治疗代谢疾病的药物中的用途。33.权利要求1-15中任一项的神经介肽U受体激动剂在制备用于治疗肥胖症的药物中的用途。34.权利要求1-15中任一项的神经介肽U受体激动剂在制备用于治疗II型糖尿病的药物中的用途。35.—种包含权利要求1-15中任一项的神经介肽U受体激动剂和药学上可接受的载体的药物组合物。全文摘要公开了用于治疗代谢疾病如肥胖症和糖尿病的神经介肽U受体激动剂。文档编号C07K14/43GK101443356SQ200780017412公开日2009年5月27日申请日期2007年3月16日优先权日2006年3月20日发明者A·M·佩尔,A·佩西,D·J·马什,E·比安基,M·A·贝德纳尔克,P·因加利内拉申请人:默克公司;P.安杰莱蒂分子生物学研究所