专利名称：：牵涉α5β1拮抗剂的联合疗法的制作方法牵涉a5pi拮抗剂的联合疗法发明领域本发明涉及VEGF拮抗剂和a5pi拮抗剂用于治疗癌症和抑制血管发生和/或血管通透性(包括抑制疾病中的异常血管发生)的用途。本发明还涉及VEGFR激动剂ot5pi激动剂用于促进血管发生和血管通透性的用途。本发明还涉及新的抗a5pi抗体，包含它们的组合物和试剂盒，及制备和使用它们的方法。
背景技术：
：VEGF-A在病理性和非病理性血管发生中的重要作用已经得到了完全确立。在体内模型中施用VEGF诱导有力的血管发生应答(Plouet,Jetal.,(1989)EMBOJ.8:3801-3808;Leung,D.W.,etal.,(1989)Science246:1306-1309)。在小鼠中丧失单个VEGF-A等位基因引起胚胎致死性(Carmeliet,P.，etal.，(1996)Nature380:435-439;Ferrara,Netal.，(1996)Nature380:439-442)。还知道VEGF是血管通透性因子，因为它有能力诱导血管渗漏(Senger，D.R.etal.,(1995)Science219:983-985;Dvorak,H,F"etal.，(1995)Am.J.Pathol.146:1029-1039)。如此，在其它非病理性血管发生之外，VEGF-A牵涉发育的、生殖的和骨血管发生。VEGF-A能结合两种受体酪氨酸激酶(RTK),即VEGFR-l(Fit-l)和VEGFR-2(KDR,Flk-l)。一般认为VEGFR-2是VEGF-A的有丝分裂、血管发生和通透性增强效应的主要介导物。在2004年2月，美国食品和药品管理局(FDA)批准了贝伐单抗(bevacizumab)(—种人源化抗VEGF(血管内皮生长因子)-A单克隆抗体)联合基于5-氟尿嘧啶(FU)的化疗方案用于治疗转移性结肠直肠癌。后来，FDA批准了pegaptinib用于治疗湿性(新生血管性)年龄相关黄斑变性(AMD),pegaptinib是一种能阻断165个氨基酸的VEGF-A同工型的适体。尽管有这些进步，许多用VEGF拮抗剂治疗的患者最终死于他们的疾病。或只有部分响应的疾病。还需要开发备选的和/或更好的疗法来治疗因异常血管发生而恶化、引起或招致的癌症和疾病。发明概述本发明涉及用于治疗将会受益于血管发生降低、患有异常血管发生、和/或患有瘤形成的患者的药物和方法。依照一个实施方案，本发明提供了用于抑制受试者中的血管发生和/或血管通透性的方法，包括同时或顺次给受试者施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂的步骤。依照另一个实施方案，本发明提供了用于治疗患有疾病的受试者的方法，其中所述受试者曽经对用VEGF拮抗剂治疗疾病有响应，但是现在对VEGF拮抗剂部分有响应或不再有响应，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的a5(31拮抗剂的步骤。依照另一个实施方案，本发明提供了用于治疗患有疾病的受试者的方法，其中所述疾病对单独的或联合化疗的a5pi拮抗剂疗法有抗性或耐药性，所述方法包括给受试者施用治疗有效量的VEGF拮抗剂。本发明还涉及新的抗a5(31抗体、包含它们的试剂盒和组合物、及制备或使用它们的方法。依照一个实施方案，所述新的抗a5(31抗体是本文所述7H5抗体或7H12抗体、或其人源化形式或嵌合形式。依照另一个具体的实施方案，所述7H5抗体或7H12抗体、或其人源化形式或嵌合形式可以是Fab、Fab，、F(ab)'2、单链Fv(scFv)、Fv片段；双抗体、多特异性抗体和线性抗体的形式。依照另一个实施方案，所述新的抗a5(31抗体可以偶联至另一实体，诸如但不限于治疗剂或焚光染料或其它标志物，以检测患者中的或患者样品中的a5卩l。此类新的oc5(31抗体可用于多种治疗方法和诊断方法。例如，此类抗a5卩l抗体可用于治疗异常血管发生、瘤形成、眼病和自身免疫病。此类抗体可用于检测患者中的或患者样品中的a5(31蛋白质，其通过使此类抗体接触患者中的或患者样品中的a5(31蛋白质，并定性或定量测定结合至a5pl蛋白质的抗a5卩l抗体。依照又一个实施方案，本发明提供了用于治疗受试者中的癌症的方法，包括同时或顺次施用VEGF拮抗剂和a5pi拮抗剂的步骤。依照一个优选的实施方案，所述癌症对VEGF拮抗剂疗法有响应。在另一个实施方案中，提供了治疗患有AMD的受试者中的年龄相关黄斑变性(AMD)(包括湿性年龄相关黄斑变性)的方法，包括同时或顺次施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和a5卩l拮抗剂的步骤。在又一个实施方案中，提供了治疗受试者中的自身免疫病的方法，包括同时或顺次施用治疗有效量的VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂的步骤。在一个实施方案中，待治疗的受试者可以首先施用VEGF拮抗剂，随后用a5pi拮抗剂治疗。在另一个实施方案中，受试者同时用VEGF拮抗剂和a5131拮抗剂治疗。依照另一个实施方案，受试者用VEGF拮抗剂治疗，直至受试者对VEGF拮抗剂治疗没有响应，然后受试者用a5pi拮抗剂治疗。在一个具体的实施方案中，受试者在所述癌症是非侵入性的或早期的时候用VEGF拮抗剂治疗，而在所述癌症是侵入性(invasive)的时候用a5(31拮抗剂治疗。在另一个实施方案中，用a5(31拮抗剂治疗的受试者在患病组织中与来自未患有该病的受试者的组织相比具有升高的a5(31水平。在这种情况中，所述方法可进一步包括^^测受试者中的a5(31的步骤，例如在用VEGF拮抗剂治疗后在患病组织中。依照一个实施方案，所述侵入性癌症是转移癌。依照另一个实施方案，所述早期癌是通过辅助疗法(例如化疗或手术切除)治疗的癌症。在一个优选的实施方案中，所述受试者患有具有异常血管发生的疾病。依照另一个实施方案，所述疾病选自下组癌症、自身免疫病或眼病。依照一个优选的实施方案，所述疾病选自下组实体瘤、转移瘤、软组织肝瘤、具有眼新血管形成的疾病、具有异常血管发生的炎性疾病、移植入受试者后发生的疾病和具有纤维血管(fibrovascular)组织异常增殖的疾病。依照另一个优选的实施方案，所述癌症选自下组乳腺癌(包括转移性乳腺癌)、宫颈癌、结肠直肠癌(包括转移性结肠直肠癌)、肺癌(包括非小细胞肺癌)、非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴细胞白血病、肾细胞癌、前列腺癌(包括激素不应性前列&泉癌(homonerefractoryprostatecancer))、肝癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、间皮瘤、软组织癌、胃肠道间质瘤(gastrointestinalstromaltumor)、多形性成月交质细月包瘤和多发性骨髓瘤。依照另一个优选的实施方案，所述疾病选自下组视网膜病、年龄诱发的黄斑变性(例如湿性AMD)、糖尿病黄斑水肿、发红；银屑病、炎性肾病、溶血性尿毒综合征(haemolyticuremicsyndrome)、糖尿病肾病(例如增殖性寿唐尿病牙见网月莫病)、关节炎(例如银屑病关节炎、骨关节炎、类风湿性关节炎)、炎性肠病、慢性炎症、慢性视网膜剥离、慢性葡萄膜炎、慢性玻璃体炎、角膜移植片排斥、角膜新血管形成、角膜移植片新血管形成、克罗恩(Crohn)氏病、近视、眼新血管病、佩吉特(Paget)氏病、类天疱疮、多动脉炎、激光放射状角膜切开术后、视网膜新血管形成、斯耶格伦(Sogren)氏综合征、溃疡性结肠炎、移才直物排斥、肺部炎症、肾病综合征、水肿、与恶性肿瘤有关的腹水、中风、血管纤维瘤和新生血管性青光眼。在一个实施方案中，所述受试者进一步施用选自下组的治疗剂抗胂瘤剂、化疗剂和细胞毒剂。依照本发明的一个优选实施方案，将要用a5(31拮抗剂治疗的受试者在VEGF拮抗剂治疗后患有复发或变成对VEGF拮抗剂治疗耐受。依照另一个实施方案，将要用a5(31拮抗剂和VEGF拮抗剂治疗的受试者患有转移癌或先前已经用辅助疗法治疗过。在一个实施方案中，所述候选患者对于化疗剂(诸如伊立替康)是复发的、不应的、或有抗性的。此类疾病的例子包括但不限于转移性结肠直肠癌、复发性转移性结肠直肠癌、转移性乳腺癌、复发性转移性乳腺癌、转移性HER2+乳腺癌、乳腺癌、HER2+乳腺癌、转移性胰腺癌、结肠癌、非小细胞肺癌、直肠癌、非小细胞肺癌、转移性非小细胞肺癌、转移性卵巢癌、转移性肾细胞癌和肾细胞癌。依照一个实施方案，患有本文所述疾病的受试者在用VEGF拮抗剂治疗疾病后施用维持疗法，其中所述维持疗法是单独的或与VEGF拮抗剂顺次或同时施用的a5(31拮抗剂。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂可选自下组抗体、免疫粘附素、肽体(peptibody)、小分子和能在严格条件下与编码VEGF的核酸分子杂交的核酸(例如核酶、siRNA和适体)。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂是抗体。依照另一个实施方案，所述抗体是单克隆抗体。依照一个优选的实施方案，所述抗VEGF抗体能够被Avastin⑧抗体竟争性抑制对人VEGF的结合。依照另一个实施方案，所述抗VEGF抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。依照一个具体的实施方案，所述抗VEGF抗体是Avastin⑧抗体。依照另一个实施方案，所述抗VEGF抗体选自下组Fab、Fab，、F(ab)，2、单链Fv(scFv)、Fv片段；双抗体和线性抗体。依照另一个实施方案，所述VEGF拮抗剂是能结合VEGF和a5(31的双特异性抗体且是a5(31拮抗剂。依照一个优选的实施方案，所述oc5(31拮抗剂可选自下组抗体、免疫粘附素、肽体、小分子、和能在严格条件下与编码a5(31的核酸分子杂交的核酸。依照一个优选的实施方案，所述cx5(31拮抗剂是抗体。依照另一个实施方案，所述抗体是单克隆抗体。依照又一个实施方案，所述单克隆抗体是嵌合抗体，诸如称为M200或F200的抗人a5pi抗体。依照一个实施方案，所述抗a5pi抗体包含VH序列SEQIDNO:1和VL序列SEQIDNO:2。依照另一个实施方案，所述抗a5(31抗体包含序列SEQIDNO:3和序列SEQIDNO:4。依照另一个实施方案，所述抗a5(31抗体包含序列SEQIDNO:4和序列SEQIDNO:5。依照一个优选的实施方案，所述抗a5pi抗体能够被7H5抗体或7H12抗体竟争性抑制对人a5pi的结合。依照一个优选的实施方案，所述抗a5(31抗体是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。依照一个具体的实施方案，所述抗a5(31抗体是7H5抗体、7H12抗体、或其嵌合抗体或人源化抗体。依照另一个实施方案，所述抗a5卩l抗体选自下组Fab、Fab，、F(ab)，2、单链Fv(scFv)、Fv片段；双抗体和线性抗体。依照另一个实施方案，所述a5(31拮抗剂是能结合VEGF和a5(31的双特异性抗体且是VEGF拮抗剂。依照又一个实施方案，所述抗a5(31拮抗剂具有改变的效应器功能。依照一个实施方案，所述抗a5pl抗体改变成降低或阻止抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)活性(例如通过改变编码抗体Fc部分的核酸序列)。依照又一个实施方案，所述抗a5(31抗体已经改变成改进其在人体中的半衰期(例如通过改变编码抗体Fc部分的核酸序列)。依照一个实施方案，所述VEGF拮抗剂或a5(31拮抗剂偶联至细胞毒剂或化疗剂。依照另一个实施方案，所述细胞毒剂是放射性同位素或毒素。本发明提供了包含VEGF拮抗剂、a5(31拮抗剂、和药学可接受载体的组的a5(31的指令的制品。本发明还涉及VEGFR激动剂和a5(31激动剂促进血管发生和血管通透性的用途，及包含VEGFR激动剂和a5(31激动剂和药学可接受载体的组合物。所述VEGFR激动剂和a5(31激动剂联合疗法可用于治疗将会受益于血管发生和血管通透性升高的多种疾病，包括例如伤口愈合，诸如在治疗慢性伤口、急性伤口和正常伤口中。附图简述图1显示了在用抗VEGF抗体B20-4.1处理HT29异种移植物肿瘤后表达a5卩l的基质细胞的募集增加。图2显示了在直接结合测定法中7H5和7H12抗体结合至HUVEC细胞。图3显示了根据FACS分析，7H5和7H12抗体结合至HUVEC,但不结合至RAJI细胞。图4显示了在存在纯化的7H5和7H12单克隆抗体时HUVEC粘附至纤连蛋白。图5:(A)条线图通过总细胞计数显示了7H5和7HU对HUVEC细胞增殖的影响；(B)条线图通过另一测定法中的Alamar蓝染色显示了7H5和7H12对HUVEC细胞增殖的影响。图6是在用7H5处理后0小时和30小时HUVEC细胞迁移的照片，与阴性对照(IgG)进行比较。图7的条线图定量显示了在用7H5和7H12处理后的HUVEC细胞迁移图8的条线图显示了在用7H5和7H12处理后在凋亡测定法中表达活化的胱天蛋白酶-3的HUVEC细胞的百分比。图9的条线图显示了在用7H5和7H12处理后的HUVEC胱天蛋白酶3/7活性。图IO显示了7H12和/或贝伐单抗在家兔耳部伤口愈合模型中的活性。图1l显示了在乳腺癌模型中用抗VEGF抗体+A抗a5pi抗体治疗的小鼠的结果(A)图显示了经处理小鼠的组中值肿瘤体积；(B)Kaplan-Meier曲线图显示了留在研究中的动物的百分比随时间的函数。动物在其肿瘤达到或超过1500mm3时退出研究。图12显示了在结肠癌模型中用抗VEGF抗体+Z-抗a5pi抗体治疗的小鼠的结果(A)图显示了经处理小鼠的组中值肿瘤体积；(B)Kaplan-Meier曲线图显示了留在研究中的动物的百分比随时间的函数。动物在其肿瘤达到或超过1500mmS时退出研究。图13显示了在结肠癌模型中用抗a5(31抗体或化疗剂治疗的小鼠的结果(A)图显示了经处理小鼠的组中值肿瘤体积；(B)Kaplan-Meier曲线图显示了留在研究中的动物的百分比随时间的函数。动物在其肿瘤达到或超过1500mi^时退出研究。图14显示了结合至R9ab(—种家兔成纤维细胞细胞系)上oi5(31的^I-7H5的scatchard曲线。图15显示了结合至R9ab(—种家兔成纤维细胞细胞系)上a5pi的125I-7H12的scatchard曲线。图16显示了多种抗a5IM抗体的抗整联蛋白a5(31IgG表位定位/竟争性结合测定法的结果。发明详述不束缚于理论，我们建议基质细胞募集增加会将其它血管生长因子带至患病部位，从而补偿用VEGF拮抗剂疗法治疗的患者中VEGF活性的损失。用抗a5pi抗体靶向表达a5(31的基质细胞可导致基质细胞的减少，从而减少潜在补偿性血管生长因子的生成。或者/另外，我们建议抑制内皮-胞外基质相互作用，特别是抑制a5pl结合相互作用将通过抑制血管发生沿由于VEGF拮抗剂疗法引起的衰退血管留下的胞外基质轨迹返回而加强VEGF拮抗剂疗法。因此，与任何VEGF拮抗剂治疗同时或在任何VEGF拮抗剂治疗之后进行a5卩l拮抗剂治疗可抑制血管自该VEGF拮抗剂治疗恢复，从而新血管生长恢复。"a5pi"或"a5(31"指包含两个不同蛋白质(即亚基cx5和[31)的整联蛋白。a5(31已显示出结合纤连蛋白、L1-CAM和纤维蛋白原。a5(31整联蛋白还称为VLA-5(非常晚激活-5)、alpha5betal、CD49e/CD29、纤连蛋白受体、FNR和GPIc-IIa。依照一个优选的实施方案，所述a5(31是人oc5卩l。"a5，，也称为CD49e、alpha5、整联蛋白a5亚基、VLA-5a亚基、GPIc-IIa的IC亚基和FNRa链，其具有四种通过可变剪4妻生成的同工型(isoform)(A-D)。它们在其胞质结构域内有所不同。a5人同工型的氨基酸序列可分别见于例如Genbank编号X07979、U33879、U33882和U33880。"卩l"也称为CD29、betal、血小板GPIIa;VLA-(3链；卩-l整联蛋白链、CD29;FNRB;MDF2;VLAB;GPIIA;MSK12和VLA5B。人(31的氨基酸序列可见于例如Genbank编号X06256。术语"VEGF，，或"VEGF-A，，在用于本文时指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子及相关的121个、189个和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如Leung等5Wewce246:1306(1989)和Houck等Mo/.五wfocW",5:1806(991)所述，及其天然存在等位基因形式和加工形式。术语"VEGF"还指来自非人物种诸如小鼠、大鼠或灵长类动物的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF,mVEGF表示鼠VEGF，等等。术语"VEGF"还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的截短形式多肽。本申请中可能通过例如"VEGF(8-109)"、"VEGF(l-109)，，或"VEGF,65，，来鉴别任何此类形式VEGF。"截短的"天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示编号。例如，截短的天然VEGF中的第H位氨基酸(曱硫氨酸)也是天然VEGF中的第17位(曱硫氨酸)。截短的天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-l受体的结合亲和力。依照一个优选的实施方案，所述VEGF是人VEGF。"VEGF拮抗剂"指能够中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF活性(包括其与VEGF或一种或多种VEGF受体或编码它们的核酸结合)的分子。优选的是，所述VEGF拮抗剂能结合VEGF或VEGF受体。VEGF拮抗剂包括抗VEGF抗体及其抗原结合片段、能结合VEGF和VEGF受体并阻断配体-受体相互作用的多肽(例如免疫粘附素、肽体)、抗VEGF受体抗体和VEGF受体拮抗剂诸如VEGFR酪氨酸激酶的小分子抑制剂、能结合VEGF的适体和能在严格条件下与编码VEGF或VEGF受体杂交的核酸(例如RNAi)。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂能结合VEGF并抑制VEGF诱导的内皮细胞增殖(在体外)。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂以大于非VEGF或非VEGF受体的亲和力结合VEGF或VEGF受体。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂以介于luM和lpM之间的Kd结合VEGF或VEGF受体。依照另一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂以介于500nM和lpM之间的Kd结合VEGF或VEGF受体。依照一个优选的实施方案，所述VEGF拮抗剂选自下组多肽诸如抗体、肽体、免疫粘附素、小分子或适体。在一个优选的实施方案中，所述抗体是抗VEGF抗体(诸如AVASTIN⑧抗体)或抗VEGF受体抗体(诸如抗VEGFR2或抗VEGFR3抗体)。VEGF拮抗剂的其它例子包括VEGF-Trap、Mucagen、PTK787、SU〗248、AG-013736、Bay439006(sorafenib)、ZD-6474、CP632、CP-547632、AZD-2171、CDP-171、SU-14813、CHIR-258、AEE-788、SB786034、BAY579352、CDP-791、EG-3306、GW-786034、RWJ-417975/CT6758和KRN-633。"抗VEGF抗体"指以足够亲和力和特异性结合VEGF的抗体。优选的是，本发明的抗VEGF抗体可在靶向和干预其中牵涉VEGF活性的疾病或疾患中用作治疗剂。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同系物，诸如VEGF-B或VEGF-C,也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF或bFGF。一种优选的抗VEGF抗体是与杂交瘤ATCCHB10709所生成的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同表位的单克隆抗体。更优选的是，抗VEGF抗体是依照Presta等(1997)CancerRes.57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体，包括但不限于称为贝伐单抗(bevacizumab;BV;Avastin⑧)的抗体。依照另一个抗体。《衣照一个实施方案，所述抗VEGF抗体包含WO2005/012359的图24、25、26、27和29中披露的任一抗体(例如G6、G6-23、G6-31、G6-23.1、G6-23.2、B20、B20-4和B20.4.1)的重《连可变区和轻《连可变区。在另一个优选的实施方案中，称为ranibizumab的抗VEGF抗体是为了眼病诸如糖尿病神经病变和AMD而施用的VEGF拮抗剂。抗VEGF抗体"贝伐单抗，，(bevacizumab,BV),也称为"rhuMAbVEGF，，或"Avastin⑧"，是依照Prestae/"/.(1997)OwcerW饥57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体。它包含突变的人IgGl框架区和来自能阻断人VEGF结合其受体的鼠抗hVEGF单克隆抗体A4.6.1的抗原结合互补决定区。贝伐单抗大约93%的氨基酸序列(包括大部分框架区)衍生自人IgGl,而大约7%的序列衍生自鼠抗体A4.6.1。贝伐单抗具有约149，000道尔顿的分子量，而且是糖基化的。其它抗VEGF抗体包括美国专利No,6,884,879和WO2005/044853中记载的抗体。亲和力成熟的抗人VEGFFab片段。Ranibizumab是通过标准重组技术方法在大肠杆菌表达载体和细菌发酵中生成的。Ranibizumab是未糖基化的且分子量为约48,000道尔顿。参见W098/45331和US20030190317。"a5(31拮抗剂"指能抑制a5(31的生物学活性的任何分子。依照一个优选的实施方案，所述拮抗剂分子能特异性结合a5(31。依照一个优选的实施方案，所述拮抗剂分子能结合a5。依照一个优选的实施方案，a5(31拮抗剂以相对于非a5pi整联蛋白更大的亲和力优先结合a5(31。依照一个优选的实施方案，所述拮抗剂选自下组能抑制a5(31结合其配体(特别是纤连蛋白)的多肽诸如抗体、肽体或免疫粘附素、小分子或适体，或者能在严格条件下与编码a5卩l的核酸分子杂交的核酸(例如能干护La5表达的RNAi)。a5(31的生物学活性可以是选自下组的任一效应、效应组合或所有效应(1)结合纤连蛋白；(2)增强细胞在纤连蛋白上的迁移；(3)提高包含a5f31的细胞在存在纤连蛋白时的存活；(4)提高包含a5(31的细胞在存在纤连蛋白时的增殖；和(5)提高包含a5(31的细胞在存在纤连蛋白时的管形成。抗a5(31拮抗性抗体的例子包括M200和F200(WO2004/089988A2)、本文所述7H5抗体和7H12抗体、及其嵌合抗体、完全人抗体和人源化抗体。例如，M200和F200抗体可衍生自小鼠抗人a5(31抗体IIAl(Pharmingen，SanDiego，Ca)的可变重链和可变轻链。a5(31小分子抑制剂的例子包括Ac-PHSCN-NH2(WO-9822617A1)和(S)-2-[(2,4，6-三甲基苯基)磺酰基]氨基-3-[7-卡氧羰基-8-(2-吡啶基氨基曱基)-1-氧杂-2,7-二氨代螺-(4，4)-酮-2-烯-3-基]羰基氨基]丙酸。依照一个优选的实施方案，所述a5(31拮抗剂结合a5pi且不结合aV(33或aV(35或aV(31。依照一个优选的实施方案，所述a5(31拮抗剂以介于luM和lpM之间的Kd结合a5j31。依照另一个优选的实施方案，所述a5(31拮抗剂以介于500nM和lpM之间的Kd结合a5。依照一个优选的实施方案，所述a5(31抗体是能在竟争性结合测定法中与7H5抗体或7H12抗体竟争a5pl结合的抗体。依照另一个优选的实施方案，所述抗体是能被由下述杂交瘤生成的抗体竟争性抑制c6(31结合的抗体2006年3月7日作为A5/卩17H5,4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤或作为A5/(317H12.5.1.4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。"VEGFR激动剂"指能活化VEGF受体或提高其表达的分子。VEGFR激动剂包括但不限于例如VEGFR的配体激动剂、VEGF变体、抗体和活性片段。"a5(31激动剂"指能活化a5pl或提高其表达的分子。a5(31激动剂包括但不限于例如a5p1的配体激动剂。以结合至靶物上交叠的或相似的区域为特征的分子(诸如抗体)可以通过竟争性抑制/结合测定法来鉴定。在一个实施方案中，在竟争性抑制测定法中使用表达a5[31的HUVEC或其它细胞，而且使用FACS来评估两种抗a5j31抗体相对于纟皮此的结合位置。例如，可以将HUVEC细胞在锥形管中清洗，并以1000rpm离心5分钟。通常将沉淀物清洗两次。然后，可以将细胞重悬，计数，并放置在冰上直至使用。可以向孔中添力口100iil第一抗a5(31抗体(例如从l叫/ml浓度或更低浓度开始)。接着，可以向每个孔中添加100jil细胞(例如20xl()S个细胞)，并在冰上温育3O分钟。接着，可以向每个孔中添加100p1生物素化抗a5(31抗体(5lag/ml储液)，并在冰上温育30分钟。然后将细胞清洗，并以1000rpm离心S分钟。吸去上清液。向孔中添加第二抗体R-藻红蛋白偶联链霉亲合素(Jackson016-110-084)(100pl，1:1000)。接着，可以将板包裹在金属箔中，并在冰上温育30分钟。温育后，可以将沉淀物清洗，并以1000rpm离心5分钟。可以将沉淀物重悬，并转移至微量滴定管，供FACS分析。"血管发生因子"或"血管发生剂，，指刺激血管发育，例如促进血管发生(angiogenesis)、内皮纟田月包生长、血管稳、定性和/或血管生成(vasculogenesis)等的生长因子。例如，血管发生因子包括但不限于例如VEGF和VEGF家族的成员、P1GF、PDGF家族、成纤维细胞生长因子家族(FGF)、T正配体(血管生成素)、ephrin、Del-l、酸性(aFGF)和碱性(bFGF)成纤维细胞生长因子、卵泡抑素(Follistatin)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、肝细胞生长因子(HGF)/散射因子(SF)、白介素-8(IL-8)、Leptin、Midkine、胎盘生长因子、血小板衍生内皮细胞生长因子(PD-ECGF)、血小板衍生生长因子尤其是PDGF-BB或PDGFR-卩、Pleiotrophin(PTN)、Progranulin、Proliferin、转化生长因子-oc(TGF-a)、转化生长因子-(3(TGF-(3)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、血管内皮生长因子(VEGF)/血管通透性因子(VPF)等。它还包括加速伤口愈合的因子，诸如生长激素、胰岛素样生长因子-I(IGF-I)、VIGF、表皮生长因子(EGF)、CTGF及其家族的成员、及TGF-a和TGF-(3。参见例如KlagsbrunandD，Amore，Annu.Rev.Physiol.53:217-39(1991);StreitandDetmar,Oncogene22:3172-3179(2003);Ferrara&Alitalo,NatureMedicine5(12):1359-1364(1999);Tonini等,Oncogene22:6549-6556(2003)(例如列举已知血管发生因子的表l);Sato,Int.丄Clin.Oncol.8:200-206(2003)。在一个优选的实施方案中，依照本发明的抗VEGF抗体的"Kd"或"Kd值"是通过如下测定法所述使用Fab型式的抗体和VEGF分子进行的放射性标记VEGF结合测定法(RIA)来测量的通过在存在未标记VEGF的滴定系列的条件下，用最小浓度的(125I)标记VEGF(109)平衡Fab,然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉所结合的VEGF来测量Fab对VEGF的溶液结合亲和力(Chen，etal.,(1999)JMolBiol293:865-881)。为了确定测定条件，用50mM碳酸钠(pH9.6)中的5吗/ml捕捉用抗Fab抗体(CappelLabs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用PBS中的2。/。(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23。C)封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[^1]-VEGF(109)与连续稀释的感兴趣Fab,例如Fab-12(Prestaetal.,(1997)CancerRes.57:4593-4599)混合。然后将感兴趣Fab保温过夜；不过，保温可持续65个小时以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温l小时。然后除去溶液，并用含0.1%Tween-20的PBS洗4反8次。平^反千燥后，加入150(il/孑L闪烁液(MicroScint-20;Packard)，然后在Topcount伽马计数器(Packard)上对平板计数IO分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20。/。的浓度用于竟争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用BIAcoreTM-2000或BIAcoreTM-3000(BIAcore，Inc.,Piscataway，NJ)于25。C使用固定化hVEGF(8-109)CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。筒而言之，依照供应商的说明书用盐酸TV-乙基-,-(3-二曱基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和iV-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧曱基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5,BIAcoreInc.)。用10mM乙酸钠pH4.8将人VEGF稀释至5iig/ml(约0.2pM),然后以5pl/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入人VEGF后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25。C以约25pl/分钟的流速注入在含0.05%Tween-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAcoreEvaluationSoftwareversion3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(D和解离速率(k。ff)。平衡解离常数(Kd)以比率k。ff/k。。计算。参见例如Chen，Y.，etal"JMolBiol293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过l(^M-'s—'，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(astop-flowequippedspectrophometer)(AvivInstruments)或8000系歹'jSLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的人VEGF短型(8-109)或小鼠VEGF的条件下，测量PBS，pH7.2中的20nM抗VEGF抗体(Fab形式)于25。C的荧光发射强度(激发二295nm;发射=340nm，16nm带通)的升高或降低。可以使用a5(31作为靶物实施相似的结合测定法来测定抗a5p1Fab或抗体的Kd。在用于本文时，待治疗的受试者指哺乳动物(例如人、非人灵长类、大鼠、小鼠、牛、马、猪、绵羊、山羊、犬、猫等)。受试者可以是临床患者、临床试验志愿者、实验动物等。受试者可以是怀疑患有或有风险患上癌症、免疫病、或具有异常血管发生的任何其它疾病，诊断有癌症、免疫病、或具有异常血管发生的任何其它疾病。癌症、免疫病或展现出异常血管发生的任何其它疾病的许多诊断方法及那些疾病的临床描述是本领域已知的。依照一个优选的实施方案，有待依照本发明治疗的受试者指人。过度或不当(例如从医学观点看不良的血管发生位置、时间或启动)时。过度的、不当的或失控的血管发生发生于有促成疾病状态恶化或引起疾病状态的新血管生长时，诸如癌症尤其是血管化实体瘤和转移瘤(包括结肠癌、肺癌(尤其是小细胞肺癌)、或前列腺癌)，由眼新血管形成引起的疾病尤其是糖尿病性失明、视网膜病变、原发性糖尿病性视网膜病变(primarilydiabeticretinopathy)或年龄诱发的黄斑变性(AMD),脉络膜新血管形成(CNV),糖尿病黄斑水胂，病理性近视，vonHippel-Lindau病，眼组织胞浆菌病，视网膜中央静脉阻塞(CRVO)，角膜新血管形成，视网膜新血管形成和发红；银屑病、银屑病关节炎、成血管细胞瘤诸如血管瘤；炎性肾病，诸如肾小球肾炎，尤其是膜增生性肾小球肾炎、溶血性尿毒综合征(haemolyticuremicsyndrome)、糖尿病肾病或高血压肾硬化；各种炎性疾病，诸如关节炎，尤其是类风湿性关节炎、炎性肠病、银屑病、结节病、动脉硬化和移植后发生的疾病、子宫内膜异位症或慢性P孝喘，及超过70种其它疾患。新血管可供应患病组织，破坏正常组织，而且，在癌症的情况中，新血管可容许肿瘤细胞逃入循环并停留在其它器官中(肿瘤转移)。本发明涵盖治疗那些有风险发生上述疾病的患者。作为接受本发明抗体或多肽的候选者的其他患者具有或者有风险发生纤维血管组织异常增殖、酒渣鼻(红斑痤疮)、获得性免疫缺陷综合征、动脉阻塞、特应性角膜炎、细菌性溃疡、贝切特氏病(Bechetsdisease)、血液传播的肿瘤(bloodbometumor)、颈动脉阻塞性疾病、脉络膜新血管形成、慢性炎症、慢性视网膜剥离、慢性葡萄膜炎、慢性玻璃体炎、接触镜佩戴过度、角膜移植片排斥、角膜新血管形成、角膜移植片新血管形成、克罗恩氏病(Crohn'sdisease)、伊尔斯病(Ealesdisease)、流行性角膜结膜炎、真菌性溃疡、单纯疱渗感染、带状疱渗感染、高粘滞综合征、卡波西氏肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、白血病、脂质变性、莱姆氏病(Lyme'sdisease)、边缘角质层分离(marginalkeratolysis)、莫伦溃疡(Moorenulcer)、除麻风以外的分枝杆菌感染、近视、眼新血管疾病、视窝(opticpits)、奥-韦二氏综合征(Osler-Webersyndrome)(奥斯勒-韦伯-朗迪(Osler-Weber-Rendu)病)、骨关节炎、佩吉特氏病(Pagetsdisease)、扁平部睫状体炎(parsplanitis)、类天疱疾、phylectenulosis、多动月永炎、激光后并发症(post-lasercomplication)、原生动物感染、弹性假黄色瘤、翼状胬肉(pterygium),干燥性角膜炎、放射状角膜切开术、视网膜新血管形成、早产儿视网膜病、晶状体后纤维组织增生、类肉瘤/结节病(sarcoid)、巩膜炎、镰状细胞贫血、斯耶格伦氏综合征(Sogrenssyndrome)、实体瘤、斯塔力口特病(Stargartsdisease)、约-斯病(Steven'sJohnsondisease)、上纟彖角月莫炎(superiorlimbickeratitis)、梅毒、全身性狼痴、特里昂氏边缘变性(Terrien'smarginaldegeneration)、弓形虫病、夕卜伤、尤因肉瘤(Ewingsarcoma)的月中瘤、成神经细胞瘤的肿瘤、骨肉瘤的肿瘤、视网膜母细胞瘤的肺瘤、横紋肌肉瘤的肿瘤、溃疡性结肠炎、静脉阻塞、维生素A缺乏和韦格纳结节病(Wegenerssarcoidosis),与糖尿病有关的不良血管发生、寄生虫病、异常伤口愈合、外伤、损伤或手术后肥大、毛发生长抑制、排卵和黄体形成抑制、子宫中胚胎发育抑制和植入抑制。抗血管发生疗法可用于以下各项的一般治疗移植物排斥、肺部炎症、肾病综合征、先兆子痫、心包积液(诸如与心包炎有关的)和胸腔积液、特征为不良血管通透性的疾病和病症，例如与脑瘤有关的水肿、与恶性胂瘤有关的腹水、梅格斯氏(Meigs)综合征、肺部炎症、肾病综合征、心包积液、胸腔积液、与心血管疾病有关的通透性，诸如心月几斗更死和中风后的疾患，诸如此类。异常血管)、新生血管性青光眼(眼中的血管生长)、动静脉畸形(动脉与静脉之间的异常联络)、不连接的骨折(不会愈合的骨折)、动脉粥样硬化斑块'(动脉的硬化)、脓性肉芽肿(由血管构成的常见皮肤损伤)、硬皮病(结締组织疾病的一种形式)、血管瘤(由血管构成的肿瘤)、沙眼(第三世界失明的第一位原因)、血友病性关节、血管粘连和肥厚性瘢痕(异常瘢痕形成)。"治疗，，指治疗性处理和预防性或防范性措施二者。需要治疗的受试者包括早就患有病症的受试者以及要预防病症的受试者。术语"复发"指癌症或疾病在疾病消失的临床评估后返回。远距转移或局部复发的诊断可以视为复发。术语"耐受性"、"耐药性"、"抗性"或"不应性"指癌症或疾病对治疗没有响应。术语"辅助疗法"指在主要疗法(通常是手术)之后给予的治疗。癌症或疾病的辅助疗法可以包括免疫疗法、化疗、放疗或激素疗法。术语"维持疗法"指为了帮助维持先前的治疗效果而给予的有计划的复治。常常为了帮助将癌症保持在消退或延长对特定疗法的响应(不管疾病进展)而给予维持疗法。术语"侵入性癌"指超过其起始的组织层而传播进入正常周围组织的癌。侵入性癌可以是或不是转移性的。术语"非侵入性癌"指非常早期的癌或未传播超过起源组织的癌。术语"无进展存活"在肺瘤学中指治疗期间和之后癌症没有生长的时间长度。无进展存活包括患者经历完全响应或部分响应的时间量，以及患者经历稳定病情的时间量。术语"进行性疾病"在肺瘤学中可以指自治疗开始超过20%的肿瘤生长_或是由于质量的增加或是由于肿瘤的扩散。"病症，，指任何会受益于抗体治疗的疾患。例如，患有或需要预防异常血管发生(过度的、不当的或失控的血管发生)或血管通透性的哺乳动物。这包括慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物倾向于所讨论病症的病理状况。本文中待治疗的病症的非限制性例子包括恶性和良性肿瘤；非白血病和淋巴样恶性肿瘤；神经元、神经胶质、星细胞、下丘脑和其它腺体、巨噬细胞、上皮、基质和嚢胚腔病症；及炎性、血管发生性和免疫学病症。术语"癌症，，和"癌性"指或描述哺乳动物中特征典型的为细胞生长不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌(癌瘤)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤、和白血病。此类癌症的更具体例子包括鳞状细胞癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(livercancer,hepaticcarcinoma)、膀胱癌、肝瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、肾癌(kidneycancer,renalcancer)、前列腺癌、外阴癌、曱状A袈癌、头颈癌、直肠癌、结肠直肠癌、肺癌(包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌和肺的鳞癌)、鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、前列腺癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌(gastricorstomachcancer)(包括胃肠癌)、月夷&泉癌、成月交质细月包瘤、成视网膜细胞瘤、星形细胞瘤、泡膜细胞瘤、男性细胞瘤、肝瘤(hepatoma)、血液学恶性肿瘤(包括非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤和急性血液学恶性肿瘤)、子宫内膜癌或子宫癌、子宫内膜异位症、纤维肉瘤、绒毛膜癌、唾液腺癌、外阴癌、甲状腺癌、食管癌、肝癌(hepaticcarcinoma)、胆门癌、阴茎癌、鼻咽癌、喉癌、卡波西(Kaposi)氏肉瘤、黑素瘤、皮肤癌、许旺氏细胞瘤、少突神经胶质瘤、成神经细胞瘤、横紋肌肉瘤、骨源性肉瘤、平滑肌肉瘤、尿道癌、曱状腺癌、维尔姆斯(Wilm)氏肿瘤、以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞性(SL)NHL、中级/滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞性NHL、贝i积病(bulkydisease)NHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、毛细胞性白血病、慢性成髓细胞性白血病、和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)、以及梅格斯氏(Meigs)综合征、和瘢痣病(phakomatoses)有关的异常血管增殖。"月中瘤"在用于本文时指所有赘生性细胞生长和增殖，无论是恶性的或者是良性的，及所有癌前的和癌的细胞和组织。术语"抗肿瘤组合物"或"抗肺瘤剂"指可用于治疗癌症的组合物，其包含至少一种活性治疗剂，例如"抗癌剂"。治疗剂(抗癌剂)的例子包括但不限于例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、放射疗法中所使用的药剂、抗血管发生剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和其它用于治疗癌症的药剂诸如抗HER-2抗体、抗CD20抗体、表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)、HER1/EGFR抑制剂(例如erlotinib(TarcevaTM)、血小^反矛;亍生生长因子抑制剂(例如GleevecTM(ImatinibMesylate))、COX-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib))、干扰素、细胞因子、能与ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-p、BAFF、BR3、APRIL、BCMA或VEGF受体中的一种或多种靶物结合的拮抗剂(例如中和性抗体)、TRAIL/Apo2、及其它生物活性和有机化学剂等。本发明还涵盖它们的组合。"生长抑制剂"在用于本文时指在体外和/或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。如此，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))、TAXOL、和拓朴异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxombicin)、表柔比星(epirubicin)、柔红霉素(daunombicin)、依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)、泼尼4公(prednisone)、达卡巴口秦(dacarbazine)、双氯乙基曱胺(mechlorethamine)、顺粕(cisplatin)、曱氨喋呤(methotrexate)、5-氟尿嘧咬(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见TheMolecularBasisofCancer,MendelsohnandIsrael编，第1章,题为"Cellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs",Murakamietal.，WBSaunders,Philadelphia(1995)，尤其是第13页。术语"细胞毒剂"在用于本文时指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的物质。该术语意图包括放射性同位素(例如I131、I'25、Y^和Re'86)、化疗剂、和毒素诸如细菌、真菌、植物或动物起源的酶活毒素或其片段。"化疗剂"指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的例子包括烷化剂类(alkylatingagents),诸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN环磷酰胺(cyclophosphamide);磺酸烷基酯类(alkylsulfonates),"i者:^白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)牙口p底泊舒凡(piposulfan);氮丙口定类(aziridines),"i者^口笨佐替〉泉(benzodepa)、卡；皮酉昆(carboquone)、美妥替派(meturedepa)和乌瑞替派(uredepa);乙撑亚胺类(cthylenimines)和曱基蜜胺类(methylamelamines)，包4舌六甲蜜胺(altretamine)、三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撑石粦酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑石克代石奔酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟曱蜜胺(trimethylolomelamine);番篇枝内酉旨类(acetogenins)(尤其是布4立1"也辛(bullatacin)和布4立4也辛酮(bullatacinone));喜斗对石成(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan));莒藓抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海绵抑素(spongistatin);氮芥类(nitrogenmustards),诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、月旦石痒酰胺(cholophosphamide)、站,莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、双氯乙基曱胺(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥月旦甾醇(phenesterine)、〉发尼莫司汀(prednimustine)、曲石寿胺(trofosfamide)、尿嘧口定氮芥(uracilmustard);亚贿脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素类'诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(例如加利车霉素(calicheamicin),尤其是加利车霉素yll和加利车霉素a)ll(参见例如Agnew，Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994));蒽环类抗生素(dynemicin),包括dynemicinA;二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate);埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克4立霉素(aclacinomycin)、方丈线菌素(actinomycin)、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、方丈线菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地托比星(detombicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idambicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂-霧素C、審酉分酉臾(mycophenolicacid)、i若4i審素(nogalamycin)、才敢才览#素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、口票呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、《连黑菌素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗代谢物类，诸如曱氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧。定(5-FU);叶酸类似物，诸如二曱叶酸(denopterin)、曱氨蝶呤(methotrexate)、虫莱罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate);嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤(mercaptopurine)、石危咪嘌呤(thiamipi-ine)、硫鸟嘌呤(thioguanine);嘧咬类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苦(dideoxyuridine)、去氧氟尿香(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine);雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酉交屈4也名食酉同(dromostanolonepropionate)、表石危il酉享(epitiostanol)、美力食火克(mepitiostane)、睾内酯(testolactone);抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米4乇坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);叶酉交补充剂，诸如亚叶酸(folinicacid);醋葡搭内酯(aceglatone);醛磷酰胺糖芬(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid);恩尿。密口定(cniluracil);安p丫口定(amsacrine);bestrabucil;比生群(bisantrene);依达曲沙、(cdatraxate);地磷酰胺(defosfamide);地美可辛(demecolcine);地吖醌(diaziquone);elfornithine;依利醋按(elliptiniumacetate);埃坡霉素(epothilone);依托格鲁(etoglucid);硝酸镓；羟脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼达明(lonidamine);美登木素生对勿石威类(maytansinoids)，i者长口美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin);米托胍腙(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌达S事(mopidamol);二胺硝吖咬(nitracrine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);畔匕柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);鬼臼酸(podophyllinicacid);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴耕(procarbazine);PSK⑧多糖复合物(JHSNaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);才艮雾素(rhizoxin);西佐p南(sizofiran);虫系S走4者(spirogermanium);纟田交纟连孑包菌酉同酸(tenuazonicacid);三亚胺醌(triaziquone);2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疾孑包菌素(verrucarin)A、杆孑包菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine);达卡巴口秦(dacarbazine);甘露莫司、汀(mannomustine);二;臭甘露酉孚(mitobronitol);二溴卫矛酉孚(mitolactol);口底泊溴》克(pipobroman);gacytosine;阿斗唐月包苷(arabinoside)("Ara-C");环磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa);类紫杉醇类(taxoids)，例如TAXOL⑧帕利4也塞(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton,N丄)、ABRAXANETM帕利他塞的不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造纟内米茅贞冲立剂型(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois)和TAXOTERE⑧多西他塞(doxetaxel)(Rh6ne-PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);GEMZAR吉西他滨(gemcitabine);6-硫鸟嘌呤(thioguanine);巯基噤p令(mercaptopurine);曱氨虫某口令(methotrexate);柏类似、物，"i者^口》1页4白(cisplatin)禾口卡4白(carboplatin);长春石威(vinblastine);4白(platinum);依托泊苷(etoposide)(VP-16);异环磷酰胺(ifosfamide);米托蒽酉昆(mitoxantrone);长春新;威(vincristine);NAVELBINE⑧长春瑞滨(vinorelbine);能灭瘤(novantrone);替尼泊芬(teniposide);依达曲沙(edatrexate);道i若霉素(daunomycin);氨基虫菜呤(aminopterin);希罗达(xeloda);伊本膦酉交盐(ibandronate);伊立替康(irinotecan)(Camptosar，CPT-11)(包括伊立替康及5-FU和亚叶酸的治疗方案)；拓朴异构酶抑制剂RFS2000;二氟曱基鸟氨酸(DMFO);类视黄酸类(retinoids),诸如视黄酸(retinoicacid);卡培他滨(capecitabine);考布j也汀(combretastatin);亚叶酉臾(leucovorin)(LV);奥沙利铂(oxaliplatin),包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX);PKC-a、Raf、H-Ras、和EGFR(例如erlotinib(Tarceva))的、降低细胞增殖的抑制剂；及任何上述物质的药学可接受的盐、酸或衍生物。该定义还包括作用于调节或抑制激素对肺瘤作用的抗激素剂诸如抗雌激素类和选择性雌激素受体调控剂类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和FARESTON⑧托瑞米芬(toremifene);抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑、氨鲁米特(aminoglutethimide)、MEGASE醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN⑧依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔峻(fadrozole)、RIVISOR伏罗唑(vorozole)、FEMARA来曲唑(letrozole)和ARIMIDEX⑧阿那曲唑(anastrozole);抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)、尼鲁米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、和戈舍瑞林(goserelin);以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧咬类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常(abherant)细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核香酸，诸如例如PKC-a、Raf和H-Ras;核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如ANGIOZYME⑧核酸)和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗和VAXID⑧疫苗；PROLEUKINrlL-2;LURTOTECAN⑧拓朴异构酶l抑制剂；ABARELIXrmRH;长春瑞滨(Vinordbine)和埃斯波霉素(Esperamicins)(见美国专利No.4,675,187);及任何上述物质的药学可接受的盐、酸或衍生物。术语"前体药物，，在用于本申请时指与母药(parentdrug)相比对患病细胞的细胞毒性较小并能够酶促活化或转变为更具活性母药形式的药用活性物质(例如小分子)的前体或A'f生物形式。参见例如Wilman,"ProdrugsinCancerChemotherapy",BiochemicalSocietyTransactions,14,pp.375-382，615thMeetingBelfast(1986)和Stella等，"Prodrugs:AChemicalApproachtoTargetedDrugDelivery",DirectedDrugDelivery,Borchardt等，编，pp.247-267,HumanaPress(1985)。本发明的前体药物包括但不限于含磷酸盐/酯前体药物、含硫代磷酸盐/酯前体药物、含硫酸盐/酯前体药物、含肽前体药物、D-氨基酸修饰前体药物、糖基化前体药物、含p-内酰胺前体药物、含任选取代苯氧基乙酰胺的前体药物或含任选取代笨乙酰胺的前体药物、可转化为更具活性而无细胞毒性的药物的5-氟胞嘧啶和其它5-氟尿苷前体药物。可衍生为本发明使用的前体药物形式的细胞毒性药物的例子包括但不限于上文描述的那些化疗剂。"分离的"，在用于描述本文中所公开的各种多肽时，意指已经鉴定且与/自表达它的细胞或细胞培养物分开和/或回收的多肽。多肽的天然环境的污染性成分指通常会干扰其诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将多肽纯化至(1)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(2)根据使用考马斯蓝或优选银染色的非还原性或还原性条件下的SDS-PAGE，达到同质。既然多肽的天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的多肽包括重组细胞内的原位多肽。然而，分离的多肽通常通过至少一个纯化步骤来制备。"分离的，，多肽编码核酸或其它多肽编码核酸指已经鉴定且与多肽编码核酸的天然来源中通常与之关联的至少一种污染性核酸分子分开的核酸分子。分离的多肽编码核酸分子不同于在自然界中发现它时的形式或背景。分子有区别。然而，分离的多肽编码核酸分子包括通常表达该多肽的细胞中所包含的多肽编码核酸分子，例如当所述核酸分子在所述细胞中的染色体定位不同于它在天然细胞中的染色体定位时。术语"控制序列"指在特定宿主生物体中表达可操作连接的编码序列所必需的DNA序列。例如，适于原核生物的控制序列包括启动子、任选的操纵基因序列、和核糖体结合位点。已知真核细胞利用启动子、多腺苷酸化信号、和增强子。若一段核酸与另一段核酸序列处于功能性相互关系中，则它是"可操作连才妄的"。例如，若前序列(presequence)或分)必前导(secretoryleader)的DNA表达成参与多肽分泌的前蛋白质(preprotdn)，则它与该多肽的DNA可操作连接；若启动子或增强子影响编码序列的转录，则它与该序列可操作连接；或者，若核糖体结合位点的位置促进翻译，则它与编码序列可搡作连接。一般而言，"可操作连接的，，意味着相连的DNA序列是相邻的，而且在分泌前导的情况中意味着相邻且处于阅读状态。然而，增强子不必相邻。连接可以通过在方便的限制性位点处的连接来实现。若没有此类位点，则依照常规实践使用合成的寡核苦酸衔接头或4妻头。如本文中所定义的，"严格条件"或"高严格条件，，可以定义如下(1)对于洗涤使用低离子强度和高温，例如0.015M氯化钠/0.0015M柠檬酸钠/0.1%十二烷基硫酸钠，50。C;(2)在杂交期间使用变性剂，诸如曱酰胺，例如，50%(v/v)曱酰胺及0.10/。牛血清清蛋白/0.1%Ficoll/0.1%聚乙烯吡咯烷酮/具有750mM氯化钠，75mM柠檬酸钠的50mM磷酸钠缓沖液pH6.5,42。C,或(3)在使用50%曱酰胺，5xSSC(0.75MNaCl，0.075M柠檬酸钠),50mM磷酸钠(pH6.8),0.1%焦磷酸钠，5xDenhardt氏溶液，超声处理的鲑精DNA(50叱/ml),0.1%SDS和10。/。硫酸右旋糖芬的溶液中于42。C杂交过夜，于42。C在0.2xSSC(氯化钠/柠檬酸钠)中洗涤10分钟，接着是于55。C由含有ED丁A的0.1xSSC组成的1O分钟高严才各洗涤。关于本文中所鉴定的多肽序列的"百分比(％)氨基酸序列同一性"定义为对比序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与所比较多肽中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于测量对比的适宜参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，而且源代码(表l)已经连同用户文档一起提交给美国版权局(USCopyrightOffice,WashingtonD.C.,20559),并以美国版权注册号TXU510087注册。公众可通过Genentech公司(SouthSanFrancisco,Califomia)得到ALIGN-2程序。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIXV4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变本文所述氨基酸序列是连续的氨基酸序列，除非另有说明。在用于本文时，术语"免疫粘附素"指将异源蛋白质("粘附素")的结合特异性与免疫球蛋白恒定域的效应器功能联合起来的抗体样分子。在结构上，免疫粘附素包括具有不同于抗体抗原识别和结合位点(即是"异源"的)的期望结合特异性的氨基酸序列和免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分典型的是至少包含受体或配体(诸如VEGFR或纤连蛋白配体)的结合位点的连续氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可以从任何免疫球蛋白获得，诸如IgG-l、IgG-2、IgG-3或IgG-4亚型、IgA(包括IgA-l和IgA-2)、IgE、IgD或IgM。常常包含衍生自特异性结合靶物的序列的噬菌体展示选择的序列且其融合至免疫球蛋白Fc部分的肽体(peptibody)可以视为本文中的免疫粘附素。术语"抗体"以最广义使用，明确覆盖例如单克隆抗体(包括激动性、拮抗性和中和性抗体)、具有多表位特异性的抗体组合物、多克隆抗体、单链抗体、及抗体片段(见下文)，只要它们特异性结合天然多肽和/或展现出本发明的生物学活性或免疫学活性。依照一个实施方案，抗体结合寡聚体形式的靶蛋白，例如三聚体形式。依照另一个实施方案，抗体特异性结合蛋白质，该结合可受到本发明单克隆抗体(例如本发明保藏的抗体等)的抑制。短语抗体的"功能性片段或类似物"指与所指抗体具有共同的定性生物学活性的化合物。例如，本发明抗体的功能性片段或类似物可以是能特异性结合VEGF或a5pi的功能性片段或类似物。在一个实施方案中，抗体能阻止或实质性降低VEGF诱导细胞增殖的能力。"分离的"抗体指已经鉴定且自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(l)根据Lowry法的测定，抗体重量超过95%,最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用考马斯蓝或优选的银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白(IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，因此包含10个抗原结合位点；而分泌型IgA抗体可聚合而形成包含2-5个基本的4链单元及J链的多价装配物)。在IgG的情况中，4链单元通常是约150,000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫4t与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条重链在N-末端具有一个可变域(VH),接着是三个(对于a和Y链)或四个(对于p和s同种型)恒定域(Ch)。每条轻链在N-末端具有一个可变域(V。，接着是其另一端的一个恒定域(CO。Vl与Vh排列在一起，而CL与重链第一恒定域(CHl)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变区之间形成界面。一个VH和一个Vi—起配对而形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如《BasicandClinicalImmunology》,第8片反,DanielP.Stites,AbbaI.Terr和TristramG.Parslow(编)，Appleton&Lange，Norwalk，CT，1994，第71页和第6章。根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊推动物物种的L链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(k)和拉姆达(X)。根据其重链恒定域(CH)氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类別或同种型。有五类免疫球蛋白IgA、IgD、lgE、IgG和IgM,分别具有称作a、S、s、y和(i的重卡连。根据Ch序列和功能的较小差异，Y和a类可进一步分为亚类，例如人类表达下列亚类IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。术语"可变的"指可变域中的某些区段在抗体间序列差异广泛的实情。V结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均匀分布于可变域跨越的110个氨基酸。事实上，V区由15-30个氨基酸，称作框架区(FR)的相对不变异的区段及将框架区分开的每个长度为9-12个氨基酸，称作"高变区"的极度变异的较短区域组成。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR,它们大多采取(3-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成(3-折叠片结构一部分的三个高变区连接。每条链中的高变区通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的高变区一起促成抗体的抗原结合4立点的形成(参见KabateZa/.,Segwewces户rafe〖m1o//w附wwo/ogica//她reW,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)中抗体的参与。术语"高变区"在用于本文时指抗体中负责抗原结合的氨基酸残基。高变区一般包含来自"互补决定区"或"CDR"的氨基酸残基(例如Vl中的残基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)附近及Vh中的残基31-35B(Hl)、50-65(H2)和95-102(H3)附近(在一个实施方案中，Hl在残基3l-35附近)；Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD.(1991))和/或那些来自"高变环"的残基(例如Vl中的残基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)及Vh中的残基26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);ChothiaandLesk,J.Mol.Biol.196，-917(1987))。术语"单克隆抗体，，在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各抗体个体是相同的，除了可以以极小量存在的可能的天然存在突变形式外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。此外，与包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性之外，单克隆抗体的优势在于它们可以在未受到其它抗体污染的情况中合成。修饰语"单克隆"不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可用于本发明的单克隆抗体可通过最初由Kohler等Nature256:495(1975)记载的杂交瘤方法来制备，或者可通过重组DNA方法在细菌、真核动物或植物细胞中制备(参见例如美国专利No.4,816,567)。"单克隆抗体"还可使用例如Clad(son等Nature352:624-628(1991);Marks等J.Mol.Biol.222:581-597(1991)和下文实施例中记载的技术从噬菌体抗体库分离。单克隆抗体在本文中包括"嵌合"抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出本发明的生物学活性(参见美国专利No.4,816,567;Morrisonetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括包含衍生自非人灵长类动物(例如旧大陆猴类(OldWorldMonkey)、猿等)的可变域抗原结合序列和人恒定区序列的"灵长类化，，抗体。"完整抗体"指包含抗原结合位点以及(\和至少重链恒定域04、C2和Ch3的抗体。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。优选的是，完整抗体具有一项或多项效应器功能。"抗体片段"包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合或可变区。抗体片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利No.5,641,870,实施例2;Zapataetal.,ProteinEng.8(10):1057-1062(1995));单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。表述"线性抗体"一般指Zapataetal.,ProteinEng,8(10):1057-1062(1995)中所描述的抗体。简言之，这些抗体包含一对串if关的Fd区賴二(VH-CH1-VH-CH1)，该区段与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的，或者是单特异性的。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作"Fab"片段，和一个残余"Fc"片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由一条完整轻链及一条重链的可变域(VH)和第一恒定域(CHl)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab')2片段，它粗略相当于两个通过二硫键相连的Fab片段，具有二价抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab，片段因在Ch1结构域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab，-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带一个游离硫醇基的Fab，的称谓。F(ab')2抗体片段最初是作为成对Fab'片段生成的，在Fab'片段之间具有铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联形式。Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条重链的羧基末端部分。抗体的效应器功能是由Fc区中的序列决定的，该区还是受到在某些类型细胞上发现的Fc受体(FcR)识别的部分。"Fv"是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密、非共价结合的一个重链可变区和一个轻链可变区的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中散发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，贡献出抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个CDR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。"单链Fv",也可缩写为"sFv"或"scFv"，是包含连接成一条多肽链的抗体VH和V[i吉构域的抗体片段。优选的是，sFv多肽在VH和VL结构域之间还包含多肽接头，使得sFv形成抗原结合期望的结构。关于sFv的综述参见Plucl(thun，于《ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies》，vol.113，Rosenburg和Moore编,Springer-Verlag，NewYork,pp.269-315,1994;Borrebaeck1995,见下文。术语"双抗体"指通过在VH和VL结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(见上一段)而制备的小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非链内配对，导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个"交叉"SFV片段的异二聚体，其中两种抗体的VH和Vii吉构域存在于不同多肽链上。双抗体更完整的描述于例如EP404,097;WO93/11161;Hollingeretal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,卯6444-6448(1993)。非人(例如啮齿类)抗体的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人抗体的序列的嵌合抗体。在极大程度上，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的高变区残基用具有期望抗体特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类的高变区残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架区(FR)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有发现的残基。进行这些修饰是为了进一步改进抗体的性能。通常，人源化抗体包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc),通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见Jonesetal.，Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.,Nature332:323-329(1988);Presta,Curr.Op.StructBiol.2:593-596(1992)。"物种依赖性抗体"指对来自第一哺乳动物物种的抗原具有强于该抗原来自第二哺乳动物物种的同系物的结合亲和力的抗体。通常，物种依赖性抗体"特异性结合，，人类抗原(即具有不超过约lx10-7M，优选不超过约lxl(T8M，最优选不超过约lx10—9M的结合亲和力(Kd)),但是对该抗原来自第二非人哺乳动物物种的同系物具有比其对人类抗原的结合亲和力弱至少约50倍，或至少约50(M咅，或至少约1000倍的结合亲和力。物种依赖性抗体可以是上文定义的各种类型抗体，但是优选人源化抗体或人抗体。在此类实施方案中，根据焚光激活细胞分选(FACS)分析或放射免疫沉淀(RIA)的测定，多肽、抗体、拮抗剂或组合物结合"非靶物"蛋白质的程度将小于该多肽、抗体、拮抗剂或组合物对其特定靶物蛋白质的结合的约10%。对于多肽、抗体、拮抗剂或组合物对靶分子的结合，术语"特异结合"或"特异性结合"特定多肽或特定多肽靶物上的表位或对其"特异"意味着可测量的不同于非特异相互作用的结合。特异结合可通过例如测定分子的结合并与对照分子的结合比较来测量，所述对照分子通常是结构相似但没有结合活性的分子。例如，特异结合可通过与对照分子的竟争来测定，所述对照分子与靶物相似，例如过量的未标记靶物。在这种情况中，若经标记輩巴物与探针的结合受到过量未标记靶物的竟争性抑制，则指示特异结合。术语"特异结合"或"特异性结合"特定多肽或特定多肽靶物上的表位或对其"特异"在用于本文时可由例如对靶物的Kd为至少约l()4M，或至少约10—SM，或至少约10—6M，或至少约10;M，或至少约10"M,或至少约10力M,或至少约10-"M，或至少约10—"M,或至少约10"M或更大的分子展现。在一个实施方案中，术语"特异结合"指这样的结合，其中分子结合特定多肽或特定多肽上的表位，而基本上不结合任何其它多肽或多肽表位。抗体"效应器功能"指那些可归于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括Clq结合和补体依赖性细胞毒性；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC);吞噬作用；细胞表面受体下调；和B细胞活化。"天然序列Fc区"包含与自然界中找到的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。Fc序列的例子记载于例如{旦不限于Kabat等，《S叫uencesofImmunologicalInterest》，第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md，1991。"变异Fc区"包含由于至少一处本文所定义的"氨基酸修饰"而与天然序列Fc区有所不同的氨基酸序列。优选的是，变异Fc区具有与天然序列Fc区或与亲本多肽的Fc区相比至少一处氨基酸替代，例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中具有约l处至约10处氨基酸替代，优选约1处至约5处氨基酸替代。在一个实施方案中，变异Fc区在本文中将与天然序列Fc区拥有至少约80%的同源性，至少约85%的同源性，至少约90%的同源性，至少约95%的同源性或至少约99%的同源性。根据另一个实施方案，变异Fc区在本文中将与亲本多肽的Fc区拥有至少约80。/。的同源性，至少约85%的同源性，至少关于本文中所鉴定的多肽和抗体序列的"百分比(。/。)氨基酸序列同一性"候选序列中与所比较多肽中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于测量对比的适宜参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，。/。氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2获得的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech公司编写，而且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(USCopyrightOffice,WashingtonD.C.，20559)，并以美国版权注册号TXU510087注册。公众可通过Genentech公司(SouthSanFrancisco,Califomia)得到ALIGN-2程序。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，优选数码UNIXV4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。术语"含Fc区多肽"指包含Fc区的多肽，诸如抗体或免疫粘附素(见下文定义)。Fc区的C-末端赖氨酸(依照EU编号系统的残基447)可以消除，例如在纯化多肽的过程中或者通过重组改造编码多肽的核酸。因此，依照本发明包含具有Fc区的多肽(包括抗体)的组合物可包含所有K447残基都被消除的多肽群体、无一K447残基被消除的多肽群体、或具有K447残基的多肽与没有K447残基的多肽的混合物。贯穿本说明书和权利要求书，Kabat编号系统一般在提及可变域中的残基(大约是轻链残基1-107和重链残基1-113)时使用(例如Kabat等，《SequencesoflmmunologicalInterest》，第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md，1991)。"EU编号系统"或"EU指数"一般在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如Kabat等，《SequencesofProteinsoflmmunologicalInterest》,第5版,PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD,1991中报道的EU指数，明确收入本文作为参考)。除非本文中另有说明，提及抗体可变域中的残基编号指根据Kabat编号系统的残基编号方式。除非本文中另有说明，提及抗体恒定域中的残基编号指根据EU编号系统的残基编号方式。术语"Fc受体"或"FcR"用于描述结合抗体Fc区的受体。在一个实施方案中，本发明的FcR指结合IgG抗体的FcR(y受体)，包括Fc^RI、FqRII和FcyRIII亚类的受体，包括这些受体的等位变体和可变剪接形式。FqRII受体包括FqRIIA("活化受体")和FcyRIIB("抑制受体")，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体Fq/RIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcyRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见综述Dagron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。该术语包括同种异型(aJIotype)，诸如FcYRIIIa同种异型FcYRIIIA画Phe158、FcyRIIIA-Va1158、FcyRIIA-R131和/或FcyRIIA-H131。FcR的综述参见RavetchandKinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991);Capeletal.,Immunomethods4:25-34(1994);deHaasetal"J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。术语"FcR"在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。该术语还包括新生儿受体，FcRn，它负责将母体IgG转移给月台儿(Guyeretal"J.Immunol,117:587(1976);Kimetal.,J.Immunol.24:249(1994))。术语"FcRn"指新生儿Fc受体(FcRn)。FcRn在结构上与主要组织相容性复合物(MHC)相似，由非共价结合的a-链和(32-微球蛋白组成。新生儿Fc受体FcRn的多种功能的综述见GhetieandWard(2000)Annu.Rev.Immunol.18,739-766。FcRn在免疫球蛋白IgG自母体被动投递至幼仔和调节血清IgG水平中发挥作用。FcRn可起到补救受体的作用，即在细胞中和穿越细胞结合和转运完整形式的被胞饮IgG，并挽救它们免于默认的降解途径。WO00/42072(Presta)和Shieldsetal"J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)记载了对FcR的结合得到改良或消除的抗体变体。将这些出版物的内容明确收入本文作为参考。人IgGFc区的"CH1结构域"(也称为"CI"或"HI"结构域)通常自大约氨基酸118延伸至大约氨基酸215(EU编号系统)。"铰链区，'通常定义为自人lgGl的Glu216至Pro230的区段(Burton，Molec.Immunol.22:161-206(1985))。其它IgG同种型的铰链区可以通过将第一个和最后一个形成重链间S-S键的半胱氨酸残基置于相同位置而与IgGl序列对比。Fc区的"低级铰链区，，通常定义为紧挨着铰链区C-末端的一段残基，即Fc区的残基233-239。在先前的报告中，FcR结合一般归功于IgGFc区的低级铰链区中氨基酸残基。人IgGFc区的"CH2结构域"(也称为"C2"或"H2"结构域)通常自大约氨基酸231延伸至大约氨基酸340。CH2结构域的独特之处在于它没有与另一结构域紧密配对。而是，有两个N-连接的分支的碳水化合物链介于完整天然IgG分子的两个CH2结构域之间。推测碳水化合物可能提供结构域-结构域配对的替代且有助于稳定CH2结构域。Burton,Molec.Immunol.22:161-206(1985)。"CH3结构域，，(也称为"C3"或"H3"结构域)包含Fc区中CH2结构域C-末端的一段残基(即自抗体序列的大约氨基酸残基341至C末端，通常是1gG的氨基酸残基446或447)。"功能性Fc区"拥有天然序列Fc区的"效应器功能"。例示性的"效应器功能"包括Clq结合、补体依赖性细胞毒性、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、吞噬作用、细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)下调等。此类效应器功能一般要求Fc区与结合结构域(例如抗体可变域)联合，而且可使用多种测定法来评估，例如本文中所7>开的。"Clq"指包含供免疫球蛋白Fc区结合的位点的多肽。Clq与两种丝氨酸蛋白酶即Clr和Cls—起形成复合物CI，即补体依赖性细胞毒性(CDC)途径的第一组分。人Clq可购自例如Quidel，SanDiego,CA。术语"结合结构域"指多肽中能结合另一分子的区域。在FcR的情况中，结合结构域可以包含其多肽链(例如其oc链)中负责Fc结合的部分。一种有用的结合结构域是FcRa链的胞外结构域。具有FcR结合亲和力或ADCC活性"改变"了的变异IgGFc的抗体或肽体指与亲本多肽或者与包含天然序列Fc区的多肽相比FcR结合活性(例如FqR或FcRn)和/或ADCC活性得到增强或减弱的抗体或肽体。"展现出对FcR的结合增加"的变异Fc以高于亲本多肽或天然序列IgGFc的亲和力(例如更低的表观Kd或IC50值)结合至少一种FcR。依照一些实施方案，与亲本多肽相比结合的增强是约3倍，优选约5倍、10倍、25倍、50倍、60倍、100倍、150倍、200倍、直到500倍，或结合改进约25%到1000%。"展现出对FcR的结合减少"的多肽变体以低于亲本多肽的亲和力(例如更高的表观Kd或更高的IC50值)结合至少一种FcR。与亲本多肽相比结合的减弱可以是约40%或结合的更多降低。"抗体依赖性细胞介导的细胞毒性"或"ADCC"指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如天然杀伤(NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)上的分泌型Ig使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的耙细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。该抗体"武装"(arm)细胞毒性细胞，而且是此类杀伤作用绝对要求的。介导ADCC的主要细胞，即NK细胞，只表达FcYRin,而单核细胞表达FcyRI、FcyRII和FcyRIII。RavetchandKinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的FcR表达。为了评估感兴趣分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定法，诸如美国专利No.5,500,362或5,821,337或下文实施例中所记载的。(NK)细胞。或者/另外，可在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如Clynesetal.,PNAS(USA)95:652-656(1998)中所披露的。包含"展现出增强的ADCC"或在存在人效应细胞时比具有野生型IgGFc变异Fc区的多肽指在具有变异Fc区的多肽和具有野生型Fc区的多肽(或亲本ADCC的多肽。一般而言，此类变体使用本文中所披露的体外ADCC测定法来鉴定，但是涵盖用于测定ADCC活性的其它测定法或方法，例如在动物冲莫型中。在一个实施方案中，优选的变体在介导ADCC方面比野生型Fc(或亲本多肽)更加有效，约5倍到约100倍，例如约25倍到约50倍。"补体依赖性细胞毒性"或"CDC"指存在补体时对靶细胞的溶解。经典补体途径的激活是由补体系统第一组分(Clq)结合其关联抗原所结合的抗体(适宜亚类的)起始的。为了评估补体激活，可进4于CDC测定法，例如如Gazzano-Santoroetal.,J.Immunol.Methods202:163(1996)中所记载的。具有改变的Fc区氨基酸序列和增强的或减弱的C1q结合能力的多肽记载于美国专利No.6，194，551B1和W099/51642。将这些专利出版物的内容明确收入本文作为参考。还可参见Idusogieetal.，J.Immunol.164:4178-4184(2000)。"人效应细胞"指表达一种或多种FcR并行使效应器功能的白细胞。依照一个实施方案，该细胞至少表达FcyRin并行使ADCC效应器功能。介导胞、单核细胞、细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞，优选PBMC和NK细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如如本文所述从血液或PBMC分离。用于测量FcRn结合的方法是已知的(参见例如Ghetie1997，Hinton2004),而且记载于下文实施例。人FcRn高亲和力结合多肽对人FcRn的体内结合和血清半衰期可以在例如表达人FcRn的转基因小鼠或转染人细胞系中，或者在施用了FC变异多肽的灵长类动物中测定。在一个实施方案中，具体而言，具有变异IgGFc的本发明抗a5(31抗体展现出比具有野生型IgGFc的多肽升高的结合亲和力，升高至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少50倍、至少60倍、至少70倍、至少80倍、至少100倍、至少125倍、至少I50倍。在一个具体的实施方案中，对人FcRn的结合亲和力提高了约170倍。关于对FcRn的结合亲和力，在一个实施方案中，多肽的EC50或表观Kd(在pH6.0)小于luM,更优选小于或等于100nM,更优选小于或等于10nM。在一个实施方案中，关于升高的对FcYRIII(F158;即低亲和力同种型)的结合亲和力，EC50或表观Kd小于或等于10nM,而对FcyRin(V158;高亲和力同种型)，EC50或表观Kd小于或等于3nM。依照另一个实施方案，若测试抗体和对照抗体结合曲线在中点处的吸光度数值的比例(例如A45。nm(抗体)/A450圆,非.m,)小于或等于40%，则抗体对Fc受体的结合相对于对照抗体(例如Herceptin⑧抗体)的降低可以认为是相对于对照抗体显著的。依照另一个实施方案，若测试抗体和对照抗体结合曲线在中点处的吸光度数值的比例(例如A45Q。m(抗体)/A45()nm(对照抗体))大于或等于125%,则抗体对Fc受体的结合相对于对照抗体(例如Herceptin⑧抗体)的升高可以认为是相对于对照抗体显著的。参见例如实施例16。"亲本多肽"或"亲本抗体"指包含产生变异多肽或抗体的氨基酸序列且所述变异多肽或抗体与之进行比较的多肽或抗体。典型的是，亲本多肽或亲本抗体缺少一处或多处本文中所公开的Fc区修饰且与本文中所公开的多肽变体相比在效应器功能方面有所不同。亲本多肽可以包含天然序列Fc区或具有预先存在氨基酸序列修饰(诸如添加、删除和/或替代)的Fc区。本发明的抗体可以衍生自噬菌体展示。在用于本文时，"文库"或"库"指众多抗体或抗体片段序列，或者编码这些序列的核酸，这些序列在根据本发明方法导入这些序列的变异氨基酸组合方面是不同的。"噬菌体展示，，是一种将变异多肽作为与外壳蛋白至少一部分的融合蛋白展示在噬菌体(例如丝状噬菌体)颗粒表面上的技术。噬菌体展示的效用在于能够对随机化蛋白质变体的大型文库快速且高效分选那些能以高亲和力与靶抗原结合的序列的实情。肽和蛋白质文库在噬菌体上的展示已经用于对数以百万计的多肽筛选那些具有特异性结合特性的多肽。多价噬菌体展示法已经用于展示小随机肽和小蛋白，其通过与丝状噬菌体的基因III或基因Vm融合来实现。WellsandLowman,CwrQpZ".幼-wrf.所o/.3:355-362(1992),及其中引用的参考文献。在单价噬菌体展示中，将蛋白质或肽文库与基因III或其一部分融合，并在存在野生型基因m蛋白时以低水平表达，使得噬菌体颗粒展示一个拷贝的融合蛋白或者不展示融合蛋白。亲合效应(avidityeffect)相对于多价噬菌体得到了降低，使得分选基于内在的配体亲和力，而且使用噬菌粒载体，这简化了DNA操:作。LowmanandWells，M"/zoA.'爿飽/zocfe&五"，o/ogy3:205-0216(1991)。"噬菌粒"是具有细菌复制起点(例如ColEl)和一个拷贝的噬菌体基因区间的质粒载体。噬菌粒可利用任何已知噬菌体，包括丝状噬菌体和人类噬菌体。质粒一般也包含抗生素抗性的可选择标志物。克隆入这些载体的DNA区段可以像质粒一样扩增。在给容纳这些载体的细胞提供生成噬菌体颗粒所必需的所有基因时，质粒的复制模式变成滚环复制，以生成质粒DNA的一条链的拷贝，并包装噬菌体颗粒。噬菌粒可形成感染性或非感染性噬菌体颗粒。此术语包括这样的噬菌粒，它们包含与异源多肽基因连接成基因融合物的噬菌体外壳蛋白基因或其片段，使得异源多肽展示在噬菌体颗粒的表面上。术语"p藍菌体载体"指包含异源基因且能够复制的双链复制型噬菌体。噬菌体载体具有容许噬菌体复制和噬菌体颗粒形成的噬菌体复制起点。噬菌体优选是丝状噬菌体，诸如M13、fl、fd、Pf3噬菌体或其衍生物，或者是人类噬菌体，诸如X、21、(p80、cp81、82、424、434等或其衍生物。对多肽诸如肽体、免疫粘附素、抗体和短肽的共价修饰包括在本发明的范围内。一种类型的共价修饰包括使多肽的靶氨基酸残基与有机衍生化试剂反应，该有机衍生化试剂能够与多肽的选定侧链或者N-或C-末端残基起反应。用双功能剂进行的衍生化可用于例如使多肽与不溶于水的支持基质或表面交联，以用于纯化抗体的方法，反之亦然。常用的交联剂包括例如l,l-双(重氮乙酰基)-2-苯乙烷、戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯例如与4-叠氮水杨酸形成的酯、同双功能亚氨酸酯包括二琥珀酰亚氨基酯诸如3,3'-二硫代双(琥珀酰亚氨基-丙酸酯)、双功能马来酰亚胺诸如双-N-马来酰亚胺-l，8-辛烷和诸如曱基—3—[(对—叠氮苯基)二硫代]丙酰亚胺酸酯等试剂。其它修饰包括谷氨酰胺酰和天冬酰胺酰残基分别脱酰胺为谷氨酰和天冬氨酰残基，脯氨酸和赖氨酸的羟基化，丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化，赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的a-氨基的曱基化(T.E.Creighton,Proteins:StructureandMolecularProperties,W.H.Freeman&Co.,SanFrancisco,pp.79-86(1983)),N-末端胺的乙酰化，及任何C-末端狻基的酰胺化。其它修饰包括将毒素偶联至拮抗剂诸如美登素和美登木素生物碱类、加利车霉素和其它细胞毒剂。对多肽的另一类共价修饰包括，以美国专利Nos.4,640,835;4,496,689;4,301,144;4,670，417;4,791，192或4,179,337所述方式，将多肽与多种非蛋白质性质的聚合物之一连接，例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化亚烷基(polyoxyalkylene)。嵌合分子包含与另一种异源多肽或氨基酸序列融合的多肽(例如免疫粘附素或肽体)。在一个实施方案中，此类嵌合分子包括多肽与蛋白质转导结构域的融合物，所述蛋白质转导结构域将多肽靶向投递至多种组织，更具体的说就是穿过血脑屏障，其中使用例如人免疫缺陷病毒TAT蛋白的蛋白质转导结构域(Schwarzeetal.,1999,Science285:1569-72)。在另一个实施方案中，此类嵌合分子包括带有标签多肽的多肽的融合物，所述标签多肽提供了抗标签抗体可选择性结合的表位。表位标签通常位于多肽的氨基或羧基末端。此类带表位标签形式的多肽的存在可使用针对所述标签多肽的抗体来检测。而且，表位标签的提供使多肽易于使用抗标签抗体或另一类结合所述表位标签的亲和基质通过亲和纯化来纯化。多种标签多肽及其各自抗体是本领域已知的。例子包括多组氨酸(poly-his)或多-组氨酸-甘氨酸(poly-his-gly)标签；流感HA标签多肽及其抗体12CA5(Fieldetal.，Mol.Cell.Biol.8:2159-2165(1988));c-myc标签及其抗体8F9、3C7、6E10、G4、B7和9E10(Evanetal.,MolecularandCellularBiology5:3610-3616(1985));及单纯疱渗病毒糖蛋白D(gD)标签及其抗体(Paborskyetal.,ProteinEngineering3(6):547-553(1990》。其它标签多肽包括Flag肽(Hoppetal.，BioTechnology6:1204-1210(1988));KT3表位肽(Martinetal.,Science255:192-194(1992));a-微管蛋白表位肽(Skinneretal.,J.Biol.Chem.266:15163-15166(1991));及T7基因10蛋白肽标签(Lutz-Freyermuthetal.,Proc.Natl.Acad.Sci,USA87:6393-6397(1990))。在一个备选实施方案中，嵌合分子可包括多肽与免疫球蛋白或免疫球蛋白特定区域的融合物。对于二价形式的嵌合分子(例如"免疫粘附素")，此类融合物可以是与IgG分子Fc区的融合。本发明的Ig融合物包括大致包含或只包含人的残基94-243、残基33-53或残基33-52以置换Ig分子内的至少一个可变区的多肽。在一个特别优选的实施方案中，免疫球蛋白融合物包含IgGl分子的铰链、CH2和CH3，或者铰链、CH1、CH2和CH3区。关于免疫球蛋白融合物的制备还可参见1995年6月27日公告的美国专利No.5，428，130。本发明提供了用于抑制或预防复发的肿瘤生长或复发的癌细胞生长的方法和组合物。在各种实施方案中，癌指复发的肿瘤生长或复发的癌细胞生长，其中癌细胞的数目没有显著减少，或者增多了，或者肿瘤体积没有显著缩小，或者增大了，或者癌细胞体积或数目未能有进一步缩小/减少。确定癌细胞是否是复发的肿瘤生长或复发的癌细胞生长可以通过本领域关于测定治疗对癌细胞有效性知道的任何方法在体内或在体外进行。对抗VEGF治疗有抗性的肿瘤是复发的肿瘤生长的一个例子。本文中所公开的多肽、抗体、拮抗剂、或组合物的"有效量"指足以实现明确规定的目的的量。"有效量"可凭经验且以已知方法，联系规定的目的来确定。术语"治疗有效量"指在哺乳动物(aka患者)中有效"治疗"疾病或病症的本发明抗体、多肽、或拮抗剂的量。在癌症的情况中，药物的治疗有效量可减少癌细胞数目；缩小肿瘤体积或重量；抑制(即一定程度的减緩，优选停止)癌细胞浸润到周围器官中；抑制(即一定程度的减缓，优选停止)肿瘤转移；一定程度的抑制肿瘤生长；和/或一定程度的减轻与癌症有关的一种或多种症状。就药物可预防现有癌细胞生长和/或杀死现有癌细胞的程度而言，它可以是细胞抑制性的和/或细胞毒性的。在一个实施方案中，治疗有效量是生长抑制量。在另一个实施方案中，治疗有效量是延长患者存活的量。在另一个实施方案中，治疗有效量是改进患者无进展存活的量。在伤口愈合的情况中，术语"有效量"或"治疗有效量，，指药物有效加速或改进受试者中的伤口愈合的量。治疗剂量指对患者展现出治疗效果的剂量，而亚治疗剂量指对所治疗的患者不展现出治疗效果的剂量。"'f曼性伤口"指不愈合的伤口。参见例如Lazarusetal.,Definitionsandguidelinesforassessmentofwoundsandevaluationofhealing,Arch.Dermatol.130:489-93(1994)。慢性伤口包括j旦不限于例如动脉溃疡、糖尿病性溃疡、压迫性溃疡、静脉溃疡等。急性伤口可以发展成慢性伤口。急性伤口包括但不限于由例如热伤、外伤、手术、大面积皮肤癌切除、深部真菌和细菌感染、血管炎、硬皮病、天疱疮、中毒性表皮坏死松解症等引起的伤口。参见例如Buford,WoundHealingandPressureSores,HealingWell.com,2001年10月24日出版。"正常伤口"指经历正常伤口愈合修复的伤口。本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物的"生长抑制量"指能够在体外或在体内抑制细胞，尤其是肿瘤，例如癌细胞生长的量。本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物为了抑制赘生性细胞生长的"生长抑制量"可以凭经验和通过已知方法或本文中提供的例子来确定。本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物的"细胞毒性量"指能够在体外或在体内引起细胞，尤其是肿瘤，例如癌细胞破坏的量。本发明多肽、抗体、拮抗剂或组合物为了抑制赘生性细胞生长的"细胞毒性量，，可以凭经验和通过本领域已知方法来确定。"自身免疫病"在本文中指因个体自身组织引起的和针对个体自身组织的疾病或病症或其共分离(co-segregate)或表现或者由此产生的疾患。自身免疫性疾病或病症的例子包括但不限于关节炎(类风湿性关节炎诸如急性关节炎、慢性类风湿性关节炎、痛风性关节炎、急性痛风性关节炎、慢性炎性关节炎、退行性关节炎、感染性关节炎、莱姆(Lyme)关节炎、增生性关节炎、银屑病性关节炎、脊推关节炎和幼发型类风湿性关节炎，骨关节炎，慢性进行性关节炎(arthritischronicaprogrediente),变形性关节炎，慢性原发性多关节炎，反应性关节炎，和强直性脊柱炎)，炎性过度增殖性皮肤病，银屑病诸如斑块状银屑病、滴状银屑病、脓疱性银屑病和指甲银屑病，皮炎包括接触性皮炎、慢性接触性皮炎、变应性皮炎、变应性接触性皮炎、疱疹样皮炎和特应性皮炎，x连锁的高IgM综合征，荨麻渗诸如慢性特发性荨麻疹包括慢性自身免疫性荨麻疹，多肌炎/皮肌炎，青少年型皮肌炎，中毒性表皮坏死松解症，硬皮病(包括系统性硬皮病)，硬化诸如系统性硬化、多发性硬化(MS)诸如脊髓-眼(spino-optical)MS、原发性进行性MS和复发性消退性(relapsingremitting)MS、进行性系统性硬化、动脉粥样硬化、动脉硬化、播散性硬化(sclerosisdisseminata)和共济失调性(ataxic)硬化，炎性肠病(IBD)(例如克罗恩氏(Crohn)病，结肠炎诸如溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,colitisulcerosa)、微观(microscopic)结肠炎、胶原性结肠炎、息肉状结肠炎、坏死性小肠结肠炎和透壁性结肠炎，和自身免疫性炎性肠病)，坏疽性脓皮症，结节性红斑，原发性硬化性胆管炎，巩膜外层炎)，呼吸窘迫综合征包括成人型或急性呼吸窘迫综合征(ARDS),脑膜炎，整个或部分葡萄膜的炎症，虹膜炎，脉络膜炎，自身免疫性血液学病症，类风湿性脊推炎，突发性听觉丧失，IgE介导的疾病诸如过敏反应和变应性和特应性鼻炎，脑炎诸如拉斯默森氏(Rasmussen)脑炎和边缘系和/或脑干脑炎，葡萄膜炎诸如前葡萄膜炎、急性前葡萄膜炎、肉芽肿性葡萄膜炎、非肉芽肿性葡萄膜炎、晶状体抗原性葡萄膜炎、后葡萄膜炎或自身免疫性葡萄膜炎，具有和没有肾病综合征的肾小球肾炎(GN)诸如慢性或急性肾小球肾炎诸如原发性GN、免疫介导的GN、膜性GN(膜性肾病)、特发性膜性GN、膜性增殖性GN(MPGN)包括I型和n型、和急进性GN，变应性疾患，变应性反应，湿渗包括变应性或特应性湿渗，哞喘诸如支气管。孝喘(asthmabronchiale,bronchialasthma)和自身免疫性。孝喘，涉及T细胞浸润和慢性炎性应答的疾患，慢性肺部炎性疾病，自身免疫性心肌炎，白细胞粘附缺陷，系统性红斑狼疳(SLE)(systemiclupuserythematosus,systemiclupuserythematodes)诸如皮肤SLE、亚急性皮月夫红斑狼疮、新生儿狼疮综合征(NLE)、播散性红斑狼痴、狼疮(包括狼痴肾炎、狼疮脑炎、儿科狼疮、非肾狼疮、盘状狼疮、狼疮脱发)，幼发型(I型)糖尿病包括儿科胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)、成人期发作的糖尿病(n型糖尿病)、自身免疫性糖尿病、特发性尿崩症，与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性和迟发型超敏感性有关的免疫应答，结核病，结节病，肉芽肿病包括淋巴瘤样肉芽肿病、韦格纳氏(Wegener)肉芽肿病，粒细胞缺乏，血管炎病包括血管炎(包括大血管血管炎(包括风湿性多肌痛和巨细胞(高安氏(Takayasu))动脉炎)，中血管血管炎(包括川崎氏(Kawasaki)病和结节性多动脉炎)，微观(microscopic)多动脉炎，CNS血管炎，坏死性、皮肤性或超敏感性血管炎，系统性坏死性血管炎，和ANCA相关血管炎诸如丘-施二氏(Churg-Strauss)血管炎或综合征(CSS))，颞动脉炎，再生障碍性贫血，自身免疫性再生障碍性贫血，库姆斯(Coombs)阳性贫血，戴-布二氏(DiamondBlackfan)贫血，溶血(perniciousanemia,anemiapemiciosa)，阿《火森氏(Addison)病,单纟屯纟工纟田月包'l"生贫血或再生障碍(PRCA)，因子vm缺乏，血友病A,自身免疫性嗜中性粒细胞减少症，全血细胞减少症，白细胞减少症，涉及白细胞渗出的疾病，CNS炎性病症，多器官损伤综合征诸如那些败血症、外伤或出血继发的，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基底膜病，抗磷脂抗体综合征，变应性神经炎，贝切特氏(Bechet或Behcet)病，卡斯尔曼氏(Castleman)综合征，古德帕斯丘氏(Goodpasture)综合征，雷诺氏(Reynaud)综合征，斯耶格伦氏(Sjogren)综合征，史-约二氏(Stevens-Johnson)综合征，类天疱瘙诸如大疱性类天疱痴和皮肤类天疱疮，天疱疮(包括寻常型天疱疮、落叶型天疱疮、粘膜类天疱疮型天疱痴和红斑性天疱疾)，自身免疫性多内分泌病，莱特氏(Reiter)病或综合征，免疫复合物肾炎，抗体介导的肾炎，慢性神经病诸如IgM多神经病或IgM介导的神经病，血小板减少症(例如心肌梗死患者发生的)包括血栓性血小板减少性紫癜(TTP)和自身免疫或免疫介导的血小板减少症诸如特发性血小板减少性紫癜(ITP)包括慢性或急性ITP，睾丸和卵巢的自身免疫病包括自身免疫性睾丸炎和卵巢炎，原发性曱状腺功能减退症，曱状旁腺功能减退，自身免疫性内分泌病包括曱状腺炎诸如自身免疫性曱状腺炎、桥本氏腺炎，自身免疫性曱状腺病，特发性曱状腺功能减退症，格雷夫斯氏(Gmves)病，多腺性综合征诸如自身免疫性多腺体综合征(或多腺性内分泌病综合征)，瘤外综合征包括神经学瘤外综合征诸如兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)肌无力综合征或伊顿-兰伯特(Lambert-Eaton)综合征，僵体或僵人综合征，脑脊骨逸炎i者i口变应'性月S脊骨4炎(allergicencephalomyelitis,encephalomyelitisallergica)和实验性变应性脑脊髓炎(EAE)，重症肌无力，小脑变性，神经性肌强直，视性眼阵挛或视性眼阵挛肌阵挛综合征(OMS)，和感觉神经病，席汉氏(Sheehan)综合征，自身免疫性肝炎、慢性肝炎、类狼疮肝炎、巨细胞性肝炎、慢性活动性肝炎或自身免疫性慢性活动性肝炎，淋巴样间质性肺炎，梗阻性细支气管炎(非移植)对NSIP,格-巴二氏(Guillain-Barr6)综合征，贝格尔氏(Berger)病(IgA肾病)，特发性IgA肾病，线性IgA皮肤病，原发性胆汁性肝硬化，肺硬变，自身免疫性肠病综合征，乳糜泻，腹部疾病，口炎性腹泻(麸质肠病)，顽固性口炎性腹泻，特发性口炎性腹泻，冷球蛋白血症、肌萎缩侧索硬化(ALS)(卢格里克氏(LouGehrig)病)，冠状动脉病，自身免疫性内耳病(A正D)或自身免疫性听觉丧失，视性眼阵挛肌阵挛综合征(OMS),多软骨炎诸如顽固性或复发性多软骨炎，肺泡蛋白沉着症，淀粉样变，巩膜炎，非癌性淋巴细胞增多，原发性淋巴细胞增多包括单克隆B细胞淋巴细胞增多(例如良性单克隆丙种球蛋白病和性质未确定的单克隆丙种球蛋白病(MGUS))，周围神经病，瘤外综合征，通道病诸如癫痫、偏头痛、心率失常、肌肉病症、失聪、失明、周期性瘫痪和CNS的通道病，孤独症，炎性肌病，局灶性节段性肾小球硬化(FSGS)，内分泌性眼病，葡萄膜视网膜炎，脉络膜视网膜炎，自身免疫性肝脏病学病症，纤维肌痛，多发性内分泌衰竭，施密特氏(Schmidt)综合征，肾上腺炎，胃萎缩，早老性痴呆，脱髓鞘病诸如自身免疫性脱髓鞘病，糖尿病肾病，德雷斯勒氏(Dressler)综合征，斑秃，CREST综合征(钙质沉着症、雷诺氏(Raynaud)现象、食道运动功能障碍、指端硬化和毛细管扩张)，男性和女性自身免疫性不孕不育，混合性结締组织病，恰加斯氏(Chagas)病，风湿热，习惯性流产，农民肺，多形红斑，心脏切开术后综合征，柯兴氏(Cushing)综合征，养鸟者肺，变应性肉芽肿性血管炎，良性淋巴细胞性血管炎，阿尔波特氏(Alport)综合征，肺泡炎诸如变应性肺泡炎和纤维化肺泡炎，间质性肺病，输血反应，麻风，痴疾，利什曼病，锥虫病(kypanosomiasis)，血。及虫病，虫回虫病，曲霉病，Sampter氏综合4正，卡普兰氏(Caplan)综合征，登革，心内膜炎，心内膜心肌纤维化，弥漫性肺间质纤维化，间质性肺纤维化，特发性肺纤维化，嚢性纤维化，眼内炎，持久隆起性红斑(erythemaelevatumetdiutinum),胎儿成红细胞增多症，嗜曙红细胞性筋膜炎(faciitis)、舒尔曼氏(Shulman)综合征，费尔提氏(Felty)综合征，llariasis,睫状体炎诸如慢性睫状体炎、异时性睫状体炎、虹膜睫状体炎或Fuch氏睫状体炎，亨诺-许兰二氏(Henoch-Schonlein)紫癜，人免疫缺陷病毒(HIV)感染，艾柯病毒感染，心肌病，阿尔茨海默氏(Alzheimer)病，细小病毒感染，风疹病毒感染，种痘后综合征，先天性风疹感染，爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒感染、腮腺炎，埃文斯(Evans)综合征，自身免疫性性腺衰竭，西登哈姆氏(Sydenham)舞蹈病，链球菌后肾炎，闭塞性血栓血管炎(thromboangitisubiterans),甲状腺毒症，脊髓痨，脉络膜炎，巨细胞性多肌痛，内分泌性眼病，慢性超敏感性肺炎，干燥性角膜结膜炎，流行性角膜结膜炎，特发性肾炎综合征，微小病变肾病，良性家族性和缺血-再灌注损伤，视网膜自身免疫，关节炎症，支气管炎，慢性阻塞性气道疾病，硅沉着病，口疮，口疮性口炎，动脉硬化性病症，无精子发生(aspermiogenese)，自身免疫性溶血，伯克氏(Boeck)病，冷球蛋白血症，杜普伊特伦氏(Dupuytren)挛缩，晶体过敏性眼内炎(endophthalmiaphacoanaphylactica)，变应'l"生小肠炎(enteritisallergica),麻风节结性红斑，特发性面瘫，慢性疲乏综合征，风湿热(febrisrheumatica)，哈-里二氏(Hamman-Rich)病，感觉神经性听觉丧失，阵发性血红蛋白尿(haemoglobinuriaparoxysmatica),'l"生&，功能;咸退，局P艮'l"生回肠炎(ileitisregionalis)，白细胞减少症，传染性单核细胞增多症，横贯性(traverse)脊髓炎，原发性特发性粘液水肿，肾病，交感性眼炎(ophthalmiasymphatica),肉芽肿性睾丸炎(orchitisgranulomatosa),胰腺炎，急性多神经4艮炎，坏疽性脓皮症，奎尔万氏(Quervain)甲状腺炎，获得性脾萎缩，由于抗精虫抗体的不育症，非恶性胸腺瘤，白癜风，SCID和爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒相关疾病，获得性免疫缺陷综合征(AIDS),寄生虫病诸如利什曼虫，中毒性休克综合征，食物中毒，涉及T细胞浸润的疾患，白细胞粘附缺陷，与细胞因子和T-淋巴细胞介导的急性和迟发性超敏感性有关的免疫应答，涉及白细胞渗出的疾病，多器官损伤综合征，抗原-抗体复合物介导的疾病，抗肾小球基底膜病，变应性神经炎，自身免疫性多内分泌病，卯巢炎，原发性粘液水肿，自身免疫性萎缩性胃炎，交感性眼炎，风湿病，混合性结締组织病，肾病综合征，胰岛炎，多内分泌衰竭，周围神经病，自身免疫性多腺性综合征I型，成人期发作的特发性甲状旁腺功能减退(AOIH)，全秃，扩张型心肌病，获得性大疱性表皮+A解(epidermolisisbullosaacquisita,EBA)，血色素沉着，心月几炎，肾病综合征，原发性硬化性胆管炎，化脓性或非化脓性鼻窦炎，急性或慢性鼻窦炎，筛窦炎，额窦炎，上颌窦炎或蝶窦炎，嗜曙红细胞相关病症诸如嗜曙红细胞增多症、肺嗜曙红细胞增多性浸润、嗜曙红细胞增多-肌痛综合征、吕弗勒氏(Loffler)综合征、慢性嗜曙红细胞性肺炎、热带肺嗜曙红细胞增多、支气管肺曲霉病、曲霉肿、或含有嗜曙红细胞的肉芽肿，过敏反应，血清阴性脊推关节炎病，多内分泌自身免疫病，硬化性胆管炎，巩膜、巩膜外层、慢性粘膜皮肤假丝酵母病，布鲁顿氏(Bmton)综合征，婴儿期一过性低丙种球蛋白血症，威斯科特-奥尔德里齐(Wiskott-Aldrich)综合征，共济失调性毛细管扩张，与以下各项有关的自身免疫性病症胶原病、风湿病、神经病学疾病、缺血再灌注紊乱、血压应答降低(reductioninbloodpressureresponse)、血管功能障；寻、毛细管扩张(antgiectasis)、组织损伤、心血管缺血、痛觉过敏、脑缺血和伴随血管化的疾病，变应性超敏感性病症，肾小球肾炎病，再灌注损伤，心肌或其它组织的再灌注损伤，具有急性炎性成分的皮肤病，急性化脓性脑膜炎或其它中枢神经系统炎性病症，粒细胞输血相关综合征，细胞因子诱发的中毒，急性重度炎症，慢性顽固性炎症，肾盂炎，肺硬变，糖尿病性视网膜病，糖尿病性大动脉病症，动脉内增生，消化性溃疡，心瓣炎，和子宫内膜异位症。癌症治疗可以通过例如但不限于肿瘤消退、肿瘤体积或大小收缩、距进展的时间、存活持续时间、无进展存活、整体响应率、响应持续时间、生活质量、蛋白质表达和/或活性来评估。因为本文所述抗血管发生剂靶向肿瘤血管结构而不必是赘生性细胞本身，所以它们代表了一类独特的抗癌药，并因此可以要求独特的对药物的临床应答的测量和定义。例如，二维分析中大于50%的肿瘤收缩是宣告响应的标准截留。然而，本发明的a5(31拮抗剂和VEGF挥抑制肿瘤效果。因而，可采用测定治疗功效的方法，包括例如测量血管发生的血浆或尿液标志物和通过放射学成像测量响应。取决于待治疗的适应症和本领域熟练医师所熟悉的与剂量给药有关的因素，以有效治疗该适应症同时最小化毒性和副作用的剂量施用本发明的抗体。为了治疗癌症、自身免疫病或免疫缺陷病，治疗有效量可以在例如50mg/剂到2.5g/m2的范围内。在一个实施方案中，所施用的剂量是大约250mg/m2到大约400mg/m2或500mg/m2。在另一个实施方案中，剂量是大约250-375mg/m2。在又一个实施方案中，剂量范围是275-375mg/m2。率/速率的降低或进一步视力丧失的预防来评估。对于AMD疗法，体内功效可以通过例如下述一项或多项来测量评估最好矫正视力(BCVA)自基线到期望时间的均值变化；评估在期望时间与基线相比视力损失小于15个字母的受试者比例；评估在期望时间与基线相比视力获得超过或等于15个字母的受试者比例；评估在预期时间Snellen视力相当于20/2000或更差的受试者比例；评估NEI视觉功能问巻(VisualFunctioningQuestionnaire);评估预期时间CNV的大小和CNV渗漏的量，通过焚光素血管造影术评估；等。术语"检测"意图包括测定物质的存在与否或对物质的量定量。该术语如此指将本发明的材料、组合物、和方法用于定量和定性测定。一般而言，用于检测的具体技术对于本发明的实施不是至关重要的。例如，依照本发明的"检测"可以包括观察a5基因产物、mRNA分子、或a5多肽的存在与否；a5多肽水平或结合至靶物的量的变化；a5多肽的生物学功能/活性的变化。在一些实施方案中，"检测"可以包括检测野生型0C5水平(例如mRNA或多肽水平)。检测可以包括对与对照相比介于10%和90%之间任何数值、或介于30%和60%之间任何数值、或超过100%的变化(升高或降低)的定量。检测可以包括对介于2倍和10倍之间(含两端值)任何数值或更大(例如100倍)的变化的定量。术语"标记物"在用于本文时指与抗体直接或间接偶联的可检测化合物或组合物。标记物自身可以是通过自身就可检测的(例如放射性同位素标记物或荧光标记物)，或者在酶标记物的情况中，可催化可检测的底物化合物或组合物的化学改变。新的抗a5pl抗体本文中提供了能结合人a5(31并竟争性抑制抗a5pi抗体结合人a5pl的新抗体。依照一个实施方案，所述抗a5pl抗体是由选自下组的杂交瘤生成的2006年3月7日在ATCC作为a5/(317H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤和作为a5/(317H12.5丄4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。依照另一个实施方案，所述抗体是由选自下组的杂交瘤生成的2006年3月7日在ATCC作为a5/)317H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤和作为a5/pi7H12.5丄4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。依照又一个实施方案，所述抗体包含由2006年3月7日在ATCC作为a5/(317H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤生成的抗体的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)序列。在另一个实施方案中，所述抗体包含由2006年3月7日在ATCC作为a5/(317H12.5丄4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤生成的抗体的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)序列。还涵盖所保藏杂交瘤的抗体的人抗体或嵌合抗体形式。依照一个实施方案，所述抗体能以介于500nM和lpM之间的Kd结合人a5(31。依照另一个实施方案，所述抗体不能结合aVp3或aV(35或aVpi。依照另一个实施方案，所述抗体包含人IgG,例如人IgGl或人IgG4的Fc序列。在另一个实施方案中，Fc序列已经改变或者有其它方式变化，使得它缺乏抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)效应器功能，这常常与它们对Fc受体(FcR)的结合有关。可改变效应器功能的Fc序列变化或突变有许多例子。例如，WO00/42072(Presta)和Shieldsetal.J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)记载了具有提高的或降低的FcR结合的抗体变体。将这些出版物的内容明确收入本文作为参考。所述抗体可以是Fab、Fab，、F(ab)V单链Fv(scFv)、Fv片段；双抗体和线性抗体的形式。同样，所述抗体可以是能结合a5(31的多特异性抗体，而且是a5pi拮抗剂，但是还能结合一种或多种其它靶物并抑制其功能(例如VEGF)。所述抗体可以偶联至治疗剂(例如细胞毒剂、放射性同位素和化疗剂)或标记物，后者用于检测患者样品中的a5pi或者通过成像用于检测体内a5131(例如放射性同位素、荧光染料和酶)。还涵盖编码抗a5pi抗体的核酸分子、包含编码两种可变域之一或二者的核酸分子的表达载体、及包含所述核酸分子的细胞。这些抗体可用于本文所述疗法和用于^^测患者样品中的(例如FACS、免疫组化(IHC)、ELISA测定法)或患者中的a5(31蛋白。新的组合物本文中提供了用于抑制患有疾病的受试者中的血管发生和/或血管通透性的新组合物，该组合物包括VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂。所述VEGF拮抗剂和所述a5(31拮抗剂在治疗循环中可以同时或顺次施用。此类联合疗法对于治疗疾病是有用的，包括那些具有异常血管发生和/或血管通透性且将会受益于抗血管发生疗法的疾病。此类疾病包i舌-f旦不限于癌症、眼病、和自身免疫病。或者，受试者可以用所述VEGF拮抗剂治疗，随后施用所述a5(31拮抗剂，例如用VEGF拮抗剂治疗，直至受试者对VEGF拮抗剂治疗没有响应，然后受试者用a5(31拮抗剂治疗。依照一个实施方案，受试者在癌是非侵入性的时候用VEGF拮抗剂治疗，而在癌是侵入性的时候用a5(31拮抗剂治疗。有些与无病患者或对照相比天然经历升高的a5(31水平或者响应VEGF拮抗剂疗法而经历升高的a5(31水平的患者可以是尤其对此联合疗法有响应的。涵盖进一步包括治疗剂(例如抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒剂)的组合物。例如，有待用化疗(例如伊立替康)和a5pi拮抗剂治疗的患者或已经用化疗和a5卩l拮抗剂治疗过的患者可受益于VEGF拮抗剂疗法。或者，已经用化疗和VEGF拮抗剂治疗过的患者可受益于a5pl拮抗剂疗法。在一个优选的实施方案中，所述抗VEGF抗体是Avastin⑧抗体。在另一个优选的实施方案中，所述抗a5卩l抗体是本文所述抗a5(31抗体。涵盖包含VEGF拮抗剂、a5pi拮抗剂和任选的化疗剂的试剂盒。药用配制剂依照本发明使用的抗体的治疗用配制剂通过将具有期望纯度的抗体与任选的药学可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版，Osol,A.编(1980))混合，以冻干配制剂或水溶液的形式制备，共贮存。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，包括緩冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和曱硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二曱基千基铵；氯化己烷双胺；笨扎氯铵、苯索氯铵；酚、丁醇或苯曱醇；对羟基苯曱酸烷基酯，诸如对羟基苯曱酸的曱酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA;糖类，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEENTM、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。例示性的抗体配制剂记载于WO98/56418，在此明确收入作为参考。适于皮下施用的冻干配制剂记载于WO97/04801。此类冻干配制剂可用合适的稀释剂重建至高蛋白质浓度，重建的配制剂可皮下施用于本文中待治疗的哺乳动物。本文中的配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性化合物，优选那些活性互补且彼此没有不利影响的化合物。例如，可能希望进一步提供细胞毒剂、化疗剂、细胞因子或免疫抑制剂(例如作用于T细胞的免疫抑制剂，诸如环孢霉素或结合T细胞的抗体，例如结合LFA-l的抗体)。此类其它药剂的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量、疾病或病症或治疗的类型、及上文讨论的其它因素。这些通常是以与本文所述相同的剂量，以本文所述施用路径而使用的，或是迄今所采用的剂量的大约1-99%。活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶嚢中(例如分別是羟曱基纤维素或明胶微胶嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微胶嚢)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶嚢)，或在粗滴乳状液中。此类纟支术披露于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,第16版，Osol,A.编(1980)。可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有拮抗剂的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜或微胶嚢。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-曱基丙烯酸酉旨)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利No.3,773,919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如UJPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚-D-(-)-3-羟基丁酸。用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易的通过使用无菌滤膜过滤来实现。制品和试剂盒本发明的另一个实施方案是包含可用于治疗肿瘤、眼病或自身免疫病和相关疾患的物质的制品。所述制品可以包括容器及容器上或与容器相关的标签或包装插页。合适的容器包括例如药瓶、药管、注射器等。所述容器可以用多种材料制成，诸如玻璃或塑料。一般而言，所述容器装有有效治疗所述疾患的组合物，可以具有无菌存取口(例如所述容器可以是静脉内溶液袋或带有皮下注射针可刺穿的塞子的药瓶)。所述组合物中的至少一种活性药剂是本发明的VEGF拮抗剂或a5卩l拮抗剂或VEGFR激动剂或a5卩l激动剂。所述标签或包装插页指明该组合物用于治疗所述具体疾患。所述标签或包装插页进一步包含关于对患者施用所述抗体组合物的说明书。还涵盖包含本文所述联合疗法的制品和试剂盒。包装插页指通常包括在治疗用产品商品化包装中的说明书，它包含有关此类治疗用产品使用的适应症、用法、剂量、施用、禁忌和/或警告的信息。在一个实施方案中，包装插页指明该组合物用于治疗非何杰金氏淋巴瘤。另外，所述制品可进一步包括第二容器，其中装有药学可接受緩沖液，诸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸盐緩沖盐水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。它可进一步包括从商业和用户立场出发需要的其它物质，包括其它緩冲液、稀释剂、滤器、针和注射器。还提供了可用于各种目的的试剂盒，例如用于分离或检测患者中的a5卩l和/或VEGF,任选联合所述制品。为了分离和纯化a5pi，所述试剂盒可包含与珠子(例如s印harose珠子)偶联的抗oc5(31抗体。可提供包含用于aS(31和/'或VEGF体外检测和定量的抗体，例如在ELISA或Westem印迹中进行的。与制品一样，所述试剂盒包括容器及容器上或与容器相关的标签或包装插页。例如，所述容器装有包含至少一种本发明抗a5(31抗体的组合物。可包括装有例如稀释剂和緩冲液、对照抗体的别的容器。所述标签或包装插页可提供该组合物的描述以及意图体外或诊断使用的说明书。单克隆抗体单克隆抗体可使用例如杂交瘤方法来制备，诸如那些由KohlerandMilstein,Nature,256:495(1975)记载的，或者可以通过重组DNA方法(美国专在杂交瘤方法中，通常用免疫剂免疫小鼠、仓鼠、或其它适宜的宿主动物以引发生成或能够生成如下抗体的淋巴细胞，所述抗体将特异性结合所述免疫剂。或者，可以在体外免疫淋巴细胞。免疫剂通常包括感兴趣蛋白质的多肽或融合蛋白或者包含该蛋白质的组合物。一般而言，若想要人起源的细胞，则使用外周血淋巴细胞(PBL);或者，若想要非人哺乳动物来源，则使用脾细胞或淋巴结细胞。然后，使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与永生化细胞系融合，以形成杂交瘤细月包(Goding,MonoclonalAntibodies:PrinciplesandPractice,NewYourk,AcademicPress,1986，pp.59-103)。永生化细胞系通常是经转化的哺乳动物细胞，特别是啮齿类、牛、和人起源的骨髓瘤细胞。通常，采用大鼠或小鼠骨髓瘤细胞系。杂交瘤细胞可以在合适的培养基中培养，所述培养基优选含有抑制未融合的永生化细胞生长或存活的一种或多种物质。例如，若亲本细胞缺乏酶次黄。票呤鸟。票呤磷酸核糖转移酶(HGPRT或HPRT),则用于杂交瘤的培养基典型的将含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸苷(HAT培养基)，这些物质阻止HGPRT缺陷细胞生长。优选的永生化细胞系是那些高效融合、支持所选抗体生成细胞稳定的高水平表达抗体、并对诸如HAT培养基的培养基敏感的。更优选的永生化细胞系是鼠骨髓瘤系，其可以从例如索尔克研究所细胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego，California,USA)和美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,Virginia,USA)获得。人骨骨逸瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也已记载用于生成人单克隆抗体(Kozbor,J.Immunol.133:3001(1984);Brodeuretal.,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987,pp.51-63)。然后可以对杂交瘤细胞正在其中培养的培养液测定针对多肽的单克隆抗体的存在。可以通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射免疫测定法(RIA)或酶联免疫吸附测定法(ELISA),测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。此类技术和测定法是本领域已知的。单克隆抗体的结合亲和力可通过例如MunsonandPollard，Anal.Biochein.107:220(1980)的Scatchard分析来测定。在鉴定出想要的杂交瘤细胞后，该克隆可通过有限稀释规程进行亚克隆并通过标准方法进行培养(Goding,见上文)。适于这一目的的培养基包括例如I)ulbecco氏改良Eagle氏培养基和RPMI-1640培养基。或者，杂交瘤细胞可以在哺乳动物中作为腹水进行体内培养。可通过常规免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白A-Sepharose、羟磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析，自培养液或腹水分离或纯化亚克隆分泌的单克隆抗体。单克隆抗体还可以通过重组DNA方法来制备，i者如美国专利No.4,816,567中所记载的。编码本发明单克隆抗体的DNA可以容易的使用常规规程分离和测序(例如通过使用能够特异性结合编码鼠抗体重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。以本发明的杂交瘤细胞作为此类DNA的优选来源。一旦分离，可将DNA置于表达载体中，然后将该表达载体转染到原本不生成免疫球蛋白蛋白质的宿主细胞中，诸如猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞，以在重组宿主细胞中获得单克隆抗体的合成。还可以修饰DNA,例如通过替代即用人重链和轻链恒定域的编码序列代替同源鼠序列(美国专利No.4,816,567;Morrisonetal.,见上文)，或通过将非免疫球蛋白多肽的整个或部分编码序列与免疫球蛋白编码序列共价连接。可以用此类非免疫球蛋白多肽替代本发明抗体的恒定域，或者可以用它们替代本发明抗体的一个抗原结合位点的可变域，以创建嵌合二价抗体。所迷抗体可以是单价抗体。用于制备单价抗体的方法是本领域已知的。例如，一种方法牵涉重组表达免疫球蛋白轻链和经修饰的重链。所述重链一般在Fc区中任何位点处截短以防止重链交联。或者，将相关半胱氨酸残基用另一种氨基酸残基替代或者删除以防止交联。体外方法也适用于制备单价抗体。消化抗体以生成其片段，特别是Fab片段，可以使用但不限于本领域已知技术来实现。人抗体和人源化抗体抗体可以是人源化抗体或人抗体。非人(例如鼠)抗体的人源化形式指通常最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其它抗原结合子序列)。人源化抗体包括人免疫球蛋白(受体抗体)中的CDR残基用具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或家兔的CDR残基替换的抗体。在有些情况中，将人免疫球蛋白的Fv框架残基用相应的非人残基替换。人源化抗体还可包含在受体抗体和输入CDR或框架序列中都没有发现的残基。通常，人源化抗体可以包含至少一个、通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有CDR对应于非人免疫球蛋白的CDR，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白共有序列的FR。人源化抗体优选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区(Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal.，Nature332:323-329(1988);Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992》。用于人源化非人抗体的一些方法在本领域和下文实施例中有描述。通常，人源化抗体中引入了一个或多个来自非人来源的氨基酸残基。这些非人氨基酸残基常常称作"输入"残基，它们通常取自"输入"可变域。依照一个实施方案，人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法进行(Jonesetal.,Nature321:522-525(1986);Riechmannetal"Nature332:323-327(1988);Verhoeyenetal.，Science239:1534-1536(1988》，即用啮齿类CDR或CD化字列替代人抗体的相应序列。因此，此类"人源化"抗体是这样的抗体(美国专利No.4,816,567),其中基本上少于整个人可变域用来自非人物种的相应序列替代。在实践中，人源化抗体通常是其中一些CDR残基和可能的一些FR残基用来自啮齿类抗体中类似位点的残基替代的人抗体。作为人源化的替代方法，可生成人抗体。例如，现在有可能生成这样的转基因动物(例如小鼠)，它们在缺乏内源性免疫球蛋白生成的情况下能够在免疫后生成人抗体完整全集。例如，已经记载了嵌合和种系突变小鼠中抗人种系免疫球蛋白基因转移到此类种系突变小鼠中将导致在抗原攻击后生成人抗体。参见例如Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2551(1993);Jakobovitsetal.,Nature362:255-258(1993);Bmggemannetal.,YearinImmuno.7:33(1993);美国专利No.5,545,806,5,569,825,5,591,669(都属于GenPharm);5,545,807;WO97/17852。或者，可以如下生成人抗体，即将人免疫球蛋白基因座导入转基因动物，例如内源免疫球蛋白基因已经部分或完全灭活的小鼠。在攻击时，观察到人抗体的生成在所有方面与在人中看到的密切相似，包括基因重排、装配、和抗体全集。这种方法记载于例如美国专利No.5,545,807;5，545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;和5,661,016,及下列科学出版物:Marksetal.，Bio/Technology,10:779-783(1992);Lonbergetal.，Nature,368:856-859(1994);Morrison,Nature,368:812-813(1994);Fishwildetal.,NatureBiotechnology,14:845-851(1996》Neuberger,NatureBiotechnology,14:826(1996);LonbergandHuszar,Intern.Rev.Immunol"13:65-93(1995)。或者，噬菌体展示技术(McCaffertyetal.,Nature348:552-553(19卯))可用于在体外从来自未免疫供体的免疫球蛋白可变域(V)基因全集生成人抗体和抗体片段。依照这种技术的一个实施方案，将抗体可变域序列以符合读码框的方式克隆到丝状噬菌体诸如M13或fd的主要或次要外壳蛋白基因中，并在噬菌体颗粒表面上展示为功能性抗体片段。噬菌体展示可以以多种形式进行，例如下文实施例部分所述，或者综述参见例如Johnson,KevinS.andChiswell,DavidJ.,CurrentOpinioninStructuralBiology3:564-571(1993)。V基因区段的数种来源可用于噬菌体展示。Clacksonetal.,Nature352:624-628(1991)从衍生自经免疫小鼠脾的小型V基因随机组合文库中分离出大量不同的抗Q恶唑酮抗体。可基本上遵循Marksetal.,J.Mol.Biol.222:581-597(199〗)或Griffithetal.,EMBOJ.12:725-734(1993)所记载的4支术，由未免疫人供体构建V基因全集和分离针对大量不同抗原(包括自身抗原)的抗体。还可参见美国专利No.5，565,332和5,573，905。5,567,610和5，229,275)。人抗体还可以使用本领域已知的多种技术来生产，包括噬菌体展示库(IIoogenboomandWinter,J.Mol.Biol"227:381(1991);Marksetal.，J.Mol.Biol.,222:581(1991))。Cole等人和Boerner等人的技术也可用于制备人单克隆抗体(Coleetal.,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,AlanR.Liss，p.77(1985)和Boerneretal"J.Immunol.,147(1):86-95(1991))。多特异性抗体体，优选人抗体或人源化抗体(例如，双特异性抗体对至少两种抗原具有结合特异性)。例如，结合特异性之一可以是针对a5(31抗体，结合特异性之另一可以是针对任何其它抗原。依照一个优选的实施方案，另一抗原是细胞表面蛋白或受体或受体亚基。例如，所述细胞表面蛋白可以是天然杀伤(NK)细胞受体。如此，依照一个实施方案，本发明的双特异性抗体可结合a5(M和结合VEGF。用于构建双特异性抗体的方法的例子已有描述。传统的是，双特异性抗体的重组生产基于两对免疫球蛋白重链/轻链的共表达，其中两种重链具有不同的特异性(MillsteinandCuello,Nature305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤来进行正确分子的纯化。类似的规程^l露于1993年5月13日公布的WO93/08829及Trauneckeretal.,EMBOJ.10:3655-3659(1991)。可以将具有期望结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。优选的是，与包含至少部分铰链、CH2和CH3区的免疫球蛋白重链恒定域进行融合。优选的是，在至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(CH1)。将编码免疫球蛋白重链融合物和，在需要时，免疫球蛋白轻链的DNA插入分开的表达载体，并共转染到合适的宿主生物体中。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如Sureshetal"MethodsinEnzymology121:210(1986)。还记载了从重组细胞培养物直接生成和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，已使用亮氨酸拉链生成双特异性抗体。Kostelnyetal.,J.Immunol.148(5):1547-1553(1992)。将来自Fos和Jim蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的Fab'部分连接。抗体同二聚体在4交链区还原以形成单体，然后重新氧化以形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生成抗体同二聚体。Hollingeretal"Pro"Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)记载的"双抗体"技术提供了构建双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过接头相连的VH和VL,所述接头太短使得同一条链上的两个结构域之间不能配对。因此，迫使一个片段上的VH和VL结构域与另一个片段上的互补VL和VH结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。还报道了通过使用单链Fv(sFv)二聚体构建双特异性抗体片段的另一种策略。参见Gmberetal.，J.Immunol.152:5368(1994)。设想了具有超过两个效价的抗体。例如，可制备三特异性抗体。Tuttetal.，J.Immunol.147:60(簡)。异源偶联抗体异源偶联抗体由两种共价连接的抗体构成。此类抗体建议用于例如将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利No.4,676,980)及用于治疗HIV感染(WO91/00360;WO92/200373;EP03089)。设想了可在体外使用合成蛋白质化学的已知方法制备抗体，包括那些涉及交联剂的方法。例如，可使用二硫化物交换反应或通过形成硫醚键来构建免疫毒素。适于此目的的试剂的例子包括亚氨基硫醇酯/盐(iminothiolate)和4-巯基丁酰亚氨酸曱酯(methyl-4-mercaptobutyrimidate)及例如美国专利No.4,676,980中所乂〉开的。效应器功能工程改造可能希望在效应器功能方面修饰本发明的抗体，从而增强例如抗体在治疗癌症中的效力。例如，可向Fc区中引入半胱氨酸残基，从而使得在该区中形成链间二硫键。如此生成的同二聚体抗体可具有改善的内在化能力和/或提高的补体介导的细胞杀伤和抗体依赖性细胞细胞毒性(ADCC)。参见Caronetal.，J.Exp.Med.176:1191-1195(1992)和Shopes,J.Immunol.148:2918-2922(1992)。具有增强的抗肿瘤活性的同二聚体抗体还可^吏用如Wolffetal.,CancerResearch53:2560-2565(1993)中描述的异双功能交联剂来制备。或者，抗体可改造成具有双重Fc区，由此可具有增强的补体溶解和ADCC能力。参见Stevensonetai.,Anti-CancerDrugDesign3:219-230(1989)。可以进行Fc区序列中的突变或改变以改进FcR结合(例如FqR、FcRn)。依照一个实施方案，本发明的抗体具有至少一项改变的选自下组的效应器功能ADCC、CDC、和改进的FcRn结合，与天然IgG或亲本抗体相比。数种有用的特定突变的例子记载于例如Shields,RLetal.(2001)JBC276(6):6591-6604;Presta,L.G.,(2002)BiochemicalSocietyTransactions30(4):487-490;WO出片反物W000/42072。依照一个实施方案，Fc受体突变是选自下组的至少一个位置的替代Fc区的238、239、246、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、332、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439,其中Fc区的残基编号方式依照EU编号系统。免疫偶联物本发明还关于包含偶联有细胞毒剂的抗体的免疫偶联物，所述细胞毒剂诸如化疗剂、毒素(如细菌、真菌、植物或动物起源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射偶联物)。上文已经描述了可用于生成此类免疫偶联物的化疗剂。可使用的酶活性毒素及其片段包括白喉毒素A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单月包菌户化McfowCT7aaeragz'wom)、蓖麻毒蛋白(ricin)A链、相思豆毒蛋白(abrin)A链、蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链、a-帚曲霉素(sarcin)、油桐(/!/ew"fes/oraz"毒蛋白、香石竹(dianthin)毒蛋白、美洲商陆(尸to/acaa"犯n'ca朋)毒蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(Momordicacharantia)抑制物、麻疯杉十毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、月巴泉草(sapaonariaofficinalis)抑制物、白树毒蛋白(gelonin)、丝林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(trichothecenes)。多种放射性核素可用于生成放射偶联抗体。例子包括^Bi、131I、131In、9()￥和186Re。抗体和细胞毒剂的偶联物可使用多种双功能蛋白质偶联剂来制备，诸如N-琥珀酰亚氨基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫烷(IT)、亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二曱酯)、活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)、醛类(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯曱酰基)己二胺)、双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯曱酰基)乙二胺)、二异氰酸酯(诸如曱苯2,6-二异氰酸酯)、和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可如Vitettaetal.,Science238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的l-异硫氰酸苯曱基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体偶联的例示性螯合剂。参见WO94/11026。在另一个实施方案中，可将抗体与"受体"(诸如链霉亲合素)偶联从而用于肿瘤预先靶向，其中对患者施用抗体-受体偶联物，接着使用清除剂由循环中清除未结合的偶联物，然后施用与细胞毒剂(如放射性核苦酸)偶联的"配体"(如亲合素)。免疫脂质体本文中所公开的抗体还可配制成免疫脂质体。含有抗体的脂质体可通过本领域已知方法来制备，诸如Epsteinetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82:3688(1985);Hwangetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4030(1980);美国专利No.4,485，045和4,544,545。循环时间延长的脂质体披露于美国专利No.5,013,556。可用包含磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG衍生化磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)的脂类组合物通过反相蒸发法生成特别有用的脂质体。将脂质体挤过具有设定孔径的滤器，产生具有期望直径的脂质体。可如Martinetal.,J.Biol.Chem.257:286-288(1982)中所述，将本发明抗体的Fab，片段经二硫化物交换反应与脂质体偶联。任选在脂质体中包含化疗剂(诸如多柔比星(Doxorubicin))。参见Gabizonetal.,J.NationalCancerInst.81(19):1484(1989)。抗体和多肽的药用组合物鉴定的其它分子，可以以药用组合物的形式施用以治疗上文和下文所述各种病症o'脂转染剂(lipofectin)或脂质体也可用于将本发明的多肽和抗体或组合物投递到细胞中。在使用抗体片段时，优选特异性结合靶蛋白质的结合结构域的最小抑制性片段。例如，基于抗体的可变区序列，可设计保留结合靶蛋白质序列的能力的肽分子。此类肽可以化学合成和/或通过重组DNA^I支术生成(参见例如Marascoetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:7889-7893(1993))。本文中的配制剂还可含有所治疗具体适应症所必需的超过一种活性化合物，优选活性互补且彼此没有不利影响的。或者/另外，组合物还可包含增强其功能的药剂，诸如例如细胞毒剂、化疗剂或生长抑制剂。合适的是，此类分子以对于预定目的有效的量组合存在。活性成分还可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶嚢中(例如分别是羟曱基纤维素或明胶微胶嚢和聚(曱基丙烯酸甲酉旨)微胶嚢)、在胶状药物投递系统中(例如脂质体、清蛋白微球体、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶嚢)、或在粗滴乳状液中。此类技术7>开于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,见上文。用于体内施用的配制剂必须是无菌的。这可容易的通过使用无菌滤膜过滤来实现。可制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物半透性基质，该基质是定型产品的形式，例如薄膜或微胶嚢。持续释放基质的例子包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利3,773,919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸？乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物诸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的可注射微球体)及聚—D—(+3—羟基丁酸。虽然诸如乙烯-乙酸乙烯和乳酸—乙醇酸等聚合物能够释放分子达100天以上，但是某些水凝胶释放蛋白质的时间较短。当胶嚢化抗体在体内长时间维持时，它们可能由于暴露于37°C的潮湿环境而变性或聚集，导致生物学活性损失和免疫原性可能改变。可以根据相关机制来设计合理的稳定化策略。例如，如果发现聚集机制是经由石克醇-二硫化物互换的分子间S-S键形成，那么可通过修饰巯基残基、由酸性溶液冻干、控制湿度、采用适宜添加剂和开发特定聚合物基质组合物来实现稳定。诊断用途和成i象经标记的特异性结合多肽的抗体及其衍生物和类似物可用于诊断目的，以检测、诊断、或监测与本发明多肽的表达、异常表达和/或活性有关的疾病和/或病症。依照一个优选的实施方案，本发明的抗体可用于诊断测定法或成像测定法，其牵涉将抗体注射入受试者。本发明提供了VEGF或a5(31多肽异常表达的检测，包括(a)使用一种或多种本发明抗体测定个体的细胞(例如组织)或体液中多肽的表达，并(b)将基因表达水平与标准基因表达水平进行比较，由此所测定基因表达水平与标准表达水平相比的升高或降低指示异常表达。本发明的抗体还用于测定生物学样品中的蛋白质水平，其中使用本领域技术人员知道的经典免疫组织学方法(参见例如Jalkanen,etal.,J.Cell.Biol.101:976-985(1985);Jalkanen,etal.,J,Cell.Biol.105:3087-3096(1987》。可用于检测蛋白质基因表达的其它基于抗体的方法包括免疫测定法，诸如酶联免疫吸附测定法(ELISA)和放射免疫测定法(RIA)。合适的抗体测定法标记物是本领域知道的，包括酶标记物，诸如葡萄糖氧化酶；^:射性同位素，诸如石典(13II、125I、123I、121I)、碳("C)、硫("S)、氮(3H)、铟(n5mIn、1I3mIn、H2In、mIn)、锝("Tc、99mTc)、铊(加Ti)、镓(6^、67Ga)、钇(脂Pd)、钼("Mo)、^(mXe)、氟('8F)、l53Sm、177Lu、159Gd、149Pm、'40La、(75Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru;鲁米诺；荧光标记物，诸如荧光素和罗丹明；及生物素。本领域已知的技术可应用于标记本发明的抗体。此类技术包括但不限于使用双功能偶联剂(参见例如美国专利No.5,756,065;5,714,631;5,696,239;5,652,361;5,505,931;5,489,425;5,435,990;5,428,139;5,342,604;5,274,119;4,994,560;5,808,003,将每一篇的内容完整收入本文作为参考)。动物(优选哺乳动物，最优选人)中与VEGF和/或a5pi表达或异常表达有关的疾病或病症的诊断可包括检测哺乳动物中的a5(31和/或VEGF分子的步骤。在一个实施方案中，在施用VEGF拮抗剂后，诊断包括(a)对哺乳动物施用(例如胃肠外、皮下、或腹膜内)有效量的经标记抗a5pl抗体，(b)在施用后等待一段时间，容许经标记分子优先在受试者中a5pi分子表达的部位集中(及未结合的经标记分子清除至背景水平)；(c)测定背景水平；并(d)检测受试者中的经标记分子，其中检测到经标记分子高于背景水平指示受试者患有与a5(31表达或异常表达有关的特定疾病或病症。背景水平可以通过多种方法来测定，包括将检测到的经标记分子的量与事先为特定系统测定的标准曲线比4交。依照一个具体的实施方案，a5(31多肽表达或过表达是在施用VEGF拮抗剂治疗剂后的诊断或预后测定法中测定的，即评估在细胞表面上存在的a5f31水平(例如经免疫组化测定法，使用抗a5pi抗体)。或者/另外，可以测量细胞中编码a5(31多肽的核酸或mRNA的水平，例如经焚光原位杂交，使用基于核酸的探针，其对应于编码a5pi的核酸或其互补序列(FISH;参见W098/45479,公布于1998年10月)、Southem印迹、Northern印迹、或聚合酶链式反应(PCR)技术，诸如实时定量PCR(RT-PCR)。还可以通过测量生物学流体诸如血清中的脱落抗原来研究a5(31过表达，例如使用基于抗体的测定法(还可参见例如美国专利No.4,933,294，公告于1990年6月12日；WO9I/05264,公布于1991年4月18日；美国专利No.5,401,638，公告于1995年3月28日；及Siasetal.,J.Immunol.Methods132:73-80(1990》。在上述测定法以外，多种体内测定法可供熟练从业人员使用。例如，可以将哺乳动物身体内的细胞暴露于抗体，其任选用可检测标记物标记，例如放射性同位素，并可以评估抗体对哺乳动物中细^L的结合，例如通过外部扫描》文射性或通过分析耳又自先前暴露于抗体的哺乳动物的活检。将本文中所引用的所有出版物(包括专利和专利申请)完整收入本文作为参考，具体包括2006年3月21日提交的美国临时申请No.60/784,704;2006年3月22日提交的美国临时申请No.60/785,330;和2006年12月22日提交的美国临时申请No.60/871,743。以下DNA序列根据布达佩斯条约的条款保藏于美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection(ATCC)，10801UniversityBlvd.,Manassas,VA20110-2209,USA),如下所述材料保藏号保藏曰a5/pi7H5.4.2.8PTA-74212006年3月7日(x5/(317H12.5丄4PTA-74202006年3月7日本文保藏是依据国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约(BudapestTreaty)及其(布达佩斯条约)实施细则的规定进行的。这保证了自保藏之日起保存保藏的存活培养物30年。保藏物可根据布达佩斯条约的条款通过ATCC获得，并服从Genentech公司与ATCC之间的协议，它保证了在有关美国专利授权后或者在任何美国或外国专利申请向公众公开后，以两者中居先者为准，公众可永久且不受限制的获得保藏培养物的后代，而且保证了依据35U.S.C122及依照它的管理章程(包括37C.F.R.1.14,特别要提及886OG638)由美国专利和商标局长批准的个人将有资格获得保藏培养物的后代。本申请的受让人已同意，若保藏材料的培养物在合适条件下培养时死亡、丢失或遭到破坏，则他将在接到通知后迅速用同一培养物的另一份材料所授予的权利实施本发明的许可。除非另有说明，实施例中提及的商品化试剂依照制造商的说明书使用。下文实施例和整篇说明书中以ATCC编号所鉴别的那些细胞的来源是美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Manassas,VA)。除非另有说明，本发明使用重组DNA技术的标准流程，诸如上文及以下教科书中所i己载的那些Sambrooketal.,见上文；Ausubeletal.,CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience,N.Y"1989;Innisetal.,PCRProtocols:AGuidetoMethodsandApplications,AcademicPress,Inc.,N.Y"1990;Harlowetal.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress,ColdSpringHarbor,1988;Gait,OligonucleotideSynthesis,IRLPress,Oxford,1984;Freshney,AnimalCellCulture,1987;Coliganetal.,CurrentProtocolsinImmunology,1991。贯穿整篇说明书和权利要求书，词语"包含"或其变化形式，诸如"包括，，或"含有"理解为意味着包括所述整数/成分或整数组/成分组，但不排除任何其它整数/成分或整数组/成分组。认为前述书面描述足以使本领域技术人员能够实施本发明。提供下述实施例仅出于例示目的，并非意图以任何方式限制本发明的范围。实际上，才艮据上面的描述，在本文所显示和描述之外，本发明的多种修饰对于本领域技术人员是显而易见的，而且落在所附权利要求的范围内。实施例实施例l:抗VEGF疗法后表达a5pi的基质细胞的募集将无胸腺,J、鼠中已用抗VEGF抗体B20-4.1单一疗法治疗的HT-29人结直肠癌异种移植物的切片针对抗a5(31表达染色。与在本研究中用对照抗体(抗豚草抗体)治疗的对照组相比，B20-4.1单一疗法产生与很小或无活性对应的中值距终点时间(timetoendpoint,TTE)。已对所述胂瘤进行一周两次，持续58天的测量。当动物的肺瘤达到终点体积1000mmS时或者在58天时，以先到者为准，对它们实施安乐死，并且为每只小鼠计算TTE。已从百分比肺瘤生长延迟(。/。TGD)确定治疗结果，将。/。TGD定义为治疗小鼠的中值TTE比对照小鼠的中值TTE的百分比增加，使用Logrank分析，0.01SP^0.05视为显著差异，PO.01视为高度显著差异。对照组的中值TTE值为20.6天。B20-4.1单一疗法的治疗产生与没有活性对应的20.1天中值TTE。图1显示了用抗a5p1抗体染色的肿瘤切片。在抗VEGF治疗后观察到增加的基质细胞募集。这些基质细胞对整联蛋白o6pl为阳性(亮绿染色)。实施例2:抗a5pi抗体给小鼠注射纯化的人a5(31(ChemiconCC1027)。将表达抗a5(31抗体的浆细胞瘤细胞分离并转化入杂交瘤细胞系。将命名为7H5.4.2.8和7H12.5.1.4的两个杂交瘤细胞系保藏于ATCC。见上文。由7H5.4.2.8杂交瘤产生的抗体是mlgG2aK抗体(这里也称为"7H5抗体")。由7H12.5丄4杂交瘤产生的抗体是mlgG2bK抗体(这里也称为"7H12抗体")。实施例3:HUVEC直接结合测定法用PBS将含有生长中的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的组织培养物清洗两次。用3-4ml5mMEDTA/PBS溶液将细胞从培养瓶脱离。将新鲜的培养基加给细胞并混合。对该混合物中的细胞的等分试样计数。将细胞离心并用清洗緩冲液(50mMTris，150mMNaCl，pH7.5)清洗一次。调整细胞浓度，使得可以将细胞以25ul/孔以25,000细胞/孔接种到96孔MSD高结合平板上，或者4,000细胞/孔在384孔平板上(分别为Cat//L11XB-1或存L11XB-2，MesoScaleDiagnostics,LLC)。将细胞在平板上于室温温育l小时以允许捕获。为了封闭孔，将25ul存储緩冲液(在TBS(50mMTris，150mMNaCl)+lmMCaCl2/lmMMgC2,pH7.5)中的30。/。胎牛血清(FBS))加入孔并于室温温育30分钟至1小时。用测定緩冲液(带有lmMCaCl2/lmMMgCl2的TBS,pH7.2+2-4%FBS)将抗a5(31抗体连续稀释以具有多种抗体浓度。用清洗缓冲液清洗孔两次，然后吸千。将25ul抗体稀释液加入孔，然后在冰上温育l小时。用TBS将孔清洗三次。将25ul0.5ug/mlxmuFc-sulfo-tag溶液加入每个孔并且在冰上温育45分钟至1小时。xmuFc-sulfo-tag是山羊抗鼠IgG(产品目录号R23-AC-5)。添加MSD-SA-tag(产品目录号R32-21-AD-5)，并在冰上温育45分钟至1小时。用TBS将孔清洗三次。将150ul2X阅读缓沖液加入每个孔(4XMSD阅读緩冲液，用dH20稀释至2X,cat#R92TD-1(无表面活性剂))。将随后的电化学发光(ECL)信号通过光电二极管来测量并且使用MSD阅读仪(默认6000方案)量化为相对光单位。图2显示了HUVEC直接结合测定法的结果。7H5抗体的EC50为0.22nM。7H12抗体的EC50为0.38nM。实施例4:抗ot5pi抗体FACS测定法将7H12或7H5抗体与RAJI细胞(不表达a5f31mRNA的细胞系)或HUVEC细胞(表达高水平a5(31mRNA的细胞系)在100ul中温育。使用萸光偶联的第二抗体来检测结合的细胞。图3显示了通过FACS分析，7H12和7H5结合IIUVEC细胞而不结合RAJI细胞。通过使用兔滑膜细胞(HIG-82)或恒河猴(rhesusmonkey)细胞(CL-160猕猴(macacamulatta)成纤维细胞或CRL-1780视网膜内皮细胞)实施相同技术，我们观察到7H12和7H5结合兔和猴细胞。实施例5:存在抗a5pi抗体时对纤连蛋白的细胞粘附将纤连蛋白(SigmaF1141(牛)或Roche1080938(人))在碳酸钠緩冲液中稀释至lug/ml。将100jul纤连蛋白溶液加入NUNCmaxisorp96孔平板的每个孔并且让其于4。C结合过^！(NUNC96孔平底免疫平板，MaxiSorpN/Ster439454(VWR62409-002))。然后将孔用磷酸盐緩沖盐水(PBS)清洗并用1%BSA(SigmaA9418)封闭至少30分钟。然后用PBS将该平板清洗三次。将20，000个HUVEC细胞加入每个孔并且与含有1.4mMMgCl2和1.4mMCaCb的生长培养基中各种浓度的7H5或7H12温育。然后将该温育混合物加入纤连蛋白包被的平板。在没有加入抑制性抗体的情况中，将在相同生长培养基中的大约20,000个细胞加入每个对照孔。将平板以140g旋转5分钟以使细胞与底物的接触同步。将细胞在C02培养箱中培养各种时间长度(0至120分钟)。培养时间的长度随各种细胞系而不同。然后用PBS将平板清洗三次。将所有液体从孔中去除并且于-80。C冷冻。然后于室温解冻平板。将CyQuant缓沖液(MolecularProbesCyQuantC7026)加到孔中并且将平板于室温温育10分钟。测量OD读数。图4显示了7H5抗体的lC50为0.85ug/ml(3.44nM),而7H12抗体的IC50为0.7ug/ml(4.38nM)。实施例6:使用HUVEC细胞的增殖测定法将96孔平板用纤连蛋白(lpg/ml)包被过夜。然后用PBS清洗平板。将3000-5000个内皮细胞(EC)加入96孔板的每个孔并且允许完全附着至孔。将抗a5抗体加入(包括同种型对照)。为每种条件使用3个孔。然后将细胞和抗体温育l-24小时。在若干浓度(例如(^g/ml，4|ag/ml,16pg/ml,60(ag/ml,120jig/ml)测试抗整联蛋白a5卩1抗体。然后将细胞用BrdU标记，即通过将它们与2(^lBrdU存储溶液(在PBS中25mg/ml)在lml组织培养基(EGM2+来自Clonetics的所有补充物(Cat#CC-4176))中温育。此温育后，将细胞用4。/oPFA固定，用1NHCI处理20分钟，用PBS清洗若干次，然后在10。/。山羊血清(带有0.2o/。Triton的PBS)中封闭l-2小时。然后将细胞用针对BrdU的单克隆抗体(BDCat#347580,在带有0.2%Triton和5%山羊血清的PBS中1:40稀释)染色并于4。C温育过夜。次日，将细胞用PBS清洗3次并在黑暗中于室温与Alexa-594偶联的抗家兔(1:800)第二抗体温育4小时。将孔再次清洗并与DAPI(在PBS中1:10,000稀释)温育IO分钟。用PBS最后一次清洗后，通过在5X拍摄DAPI染色的照片来对每孔总细胞数计数。使用红色滤光器来为在相同视野中对BrdU为阳性的细胞拍照。增殖评估为在该视野中对BrdU为阳性的细胞的百分比。然后使用Excel来分析结果。图5a显示了在5000的起始细胞数后于32小时的HUVEC总细胞计数。图5b显示了在抗体浓度为20ug/ml中于24小时的HUVEC总细胞计数。实施例7:迁移测定方案将HUVEC在EGM2+来自Ckmetics的所有补充物(Cat#CC-4176)中在5pg/ml纤连蛋白包被的24孔平板上培养，直至细胞汇合。然后通过2[il吸液器尖头对每个孔中央的细胞划线(scared)并且洗去通过划线去除的细胞。将带有对照抗体、7H5或7H12的细胞培养基加入不同孔。在20吗/ml使用所有测试的抗体。然后使细胞允许生长1至2天。监测创伤区域。图6显示了在0小时和30小时，在带有ECM-2中的20ug/ml抗a5抗体(7H5)的情况中5ug/ml纤连蛋白上的HUVEC迁移照片。图7是用7H5或7H12抗体处理的细胞在30小时的0/。迁移的图。实施例8:HUVEC激活的胱天蛋白酶-3免疫染色凋亡测定法将96孔平板用纤连蛋白(lpg/ml)包被过夜。用PBS清洗平板。然后，将3000-5000个HUYEC细胞铺入96孔板的每个孔并且在完全培养基(带有EGM-2SingleQuots(CambrexCC-4176)的EBM-2培养基(CambrexCC-3156))中培养过夜。如果将2H-11小鼠内皮细胞用于凋亡测定法，那么该培养基是带有10%FBS的50/50培养基。次曰，将一组孔改变为无血清培养基并且温育4-6小时以使细胞饥饿并且使它们处于非增殖状态。将其他组细胞保持在完全培养基中并且代表活跃增殖中的细胞。在4-6小时后，添加抗体(包括同种型对照)。一^:而言，为每种条件使用3个孔。然后将细胞与抗体温育l-48小时。通常将抗整联蛋白a5jM抗体在下列浓度测试0pg/ml，4fig/ml，16jig/ml，60jag/ml和120pg/ml。此温育后，将细胞用4。/oPFA固定，在10%山羊血清(带有0.2。/。Triton的PBS)中封闭1-2小时，然后用特异地识别胱天蛋白酶3的活化形式的单克隆抗体(例如来自BioVision的家兔抗活性胱天蛋白酶3抗体，在带有0.2%Triton和5%山羊血清的PBS中1:50稀释)染色。将抗胱天蛋白酶3抗体和固定的细胞于4。C温育过夜。次日，将细胞用PBS清洗3次并与Alexa-594偶联的抗家兔第二抗体(l:800)在黑暗中于室温温育4小时。将细胞再次清洗并与DAPI(在PBS中1:10,000稀释)温育10分钟。用PBS最后一次清洗后，通过在5X拍摄DAPI染色的照片来对每孔总细胞数计数。使用红色滤光器来为在相同视野中对活化的胱天蛋白酶3为阳性的细胞拍照。凋亡评价为对活化的胱天蛋白酶3为阳性的细胞的百分比。然后使用Excel来分析结果。图8显示了7H5和7H12没有活跃的诱导凋亡。实施例9:HUVEC胱天蛋白酶-3/7活性比色测定法使用7H5和7H12抗体(来自Promega的Apo-One胱天蛋白酶-3/7测定法，参见标准96孔测定法说明书的技术通报No.295)来进行胱天蛋白酶3/7活性测定法。一般而言，用纤连蛋白(l|ag/ml)将96孔平板包被过夜。用PBS清洗平(带有EGM-2SingleQuots(CambrexCC-4176)的EBM-2培养基(CambrexCC-3156))中培养过夜。如果将2H-11小鼠内皮细胞用于凋亡测定法，那么该培养基是带有10。/。FBS的50/50培养基。次曰，将一组孔改变为无血清培养基并且温育4-6小时以使细胞饥饿并且使它们处于非增殖状态。将其他组细胞保持在完全培养基中并且代表活跃增殖中的细胞。在4-6小时后，添加抗体(包括同种型对照)。一般而言，为每种条件使用3个孔。然后将细胞与抗体温育24-48小时。通常将抗整联蛋白a5pi抗体在下列浓度测试0|ig/ml，4jig/ml，16|ig/ml,60pg/ml和12(Vg/ml。此温育后，将10(HUApo-One胱天蛋白酶3/7试剂加入每孔，然后使用平板混合器以300rpm温和混合30秒。然后将平板于室温温育1至8小时然后使用读板仪。在485nm激发波长和530nm发射波长测量每孔的荧光。由胱天蛋白酶3/7底物的切割产生的荧光信号(RLU)指示凋亡。图9显示了7H5和7H12没有活跃的诱导凋亡。实施例10:管形成测定法可以对抗(x5[31抗体评估它们抑制管形成的能力。下列内容是7W/Awtewe/fl/.(2003)A^cravascw/ari^化wc/2(56f200"702-772中描述的基于HUVEC萌芽和管形成测定法的管形成测定法的一个实例。一般而言，可以将HUVEC细胞与右旋糖酐包被的Cytodex3微载体(AmershamPharmaciaBiogech,Piscataway,NJ)以400个HUVEC每玉朱的浓度在lmlEGF-2培养基中混合。在37。C和5。/。C02，持续4小时，可以每20分钟将带细胞的珠子轻柔地振荡。温育后，可以将带有细胞的珠子转移到25cm^且织培养瓶(BDBiosciences,Bedford,MA)并且在37。C和5。/。C02,在5mlEGM-2中停留12-16小时。次日，可以将带细胞的珠子用lmlEGM-2清洗三次并且在2.5mg/ml纤维蛋白原(Sigma，St.Louis,MO)中重悬于200粒细胞包被的珠子Zml的浓度。可以将500ul纤维蛋白原/珠溶液加入在24孔组织培养平板的一个孔中的0.625单位凝血酶(Sigma)。纤维蛋白原/珠溶液可以于室温凝结5分钟，然后在37。C和5。/。CO2凝结20分钟。可以将lmlEGM-2(含有2。/。FBS)加入每个孔并且在37。C和5。/。CO2与纤维蛋白凝块平衡30分钟。将培养基从孔中去除并且用lml新鲜培养基更换。可以将大约20，000个皮肤成纤维细胞(Detroit551,ATCC,Rockville,MD)铺在该凝块的上面。可以隔天更换培养基。可以监测珠子测定法7天。可以将HUVEC包被的珠子在纤维蛋白凝胶中温育2-3天，该凝胶上带有或者不带有500ul抗a5pi抗体(7H5和7H12)，然后转移到配备有多维轴(multidimensionalaxes)的NiconEclipseTE300的载物台，并在37。C和5。/oC02维持72小时。通过考虑纤维蛋白凝胶体积可以计算出将要使用的最终抗体浓度，即最终抗体浓度==总抗体质量/(培养基体积+纤维蛋白凝胶体积)。使用Metamorph软件可以每20分钟从多个珠子捕获图像。使用珠子的高分辨率图像(例如带有4x物镜的IX70Olympus显微镜)可以完成体外血管定量。与对照(未处理的)相比，可以确定每珠芽数目，其中可以将芽定义为长度等于珠子直径的血管。可以通过随意单位测量芽长度。实施例11:异种移植物/同种异基因移植物胂瘤模型中的联合研究可以在异种移植物/同种异基因移植物肿瘤模型中评估a5pl拮抗剂疗法和VEGF拮抗剂疗法的同时施用和顺次施用。优选的是，所述模型对VEGF拮抗剂疗法很少或没有响应。下列内容是可以使用的模型的实例(a)无胸腺棵鼠中的Fo5同种异基因移植物(衍生自mmtv-Her2转基因小鼠的乳腺肿瘤)(Finkle，D.,etal.，(2004)Clin.CancerRes.10:2499-2511);(b)无胸腺棵鼠中的HT29异种移植物(人结直肠系)；和(c)RIP-TbAg(Tg模型中的胰腺肿瘤)。典型的是，可以腹膜内、皮下或静脉内施用所述疗法。例如，抗VEGF抗体可以每周一次施用10mg/kg或者每周两次施用5mg/kg。基于其亲和力和活性，可以估计将要施用的oi5(31拮抗剂诸如抗体的量。在一个实验中，可以将VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂依照同步进度表施用5-6周。或者/另外，可以顺次施用VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂(例如，抗VEGF抗体施用三周，接着抗a5(31抗体定量给药三周)。可以基于胂瘤进展、肿瘤灌注(tumorperfusion)、肿瘤血管密度、形态学和/或存活等来评估治疗功效。可以通过例如肿瘤体积和/或肿瘤质量来测量肿瘤进展。可以将FITC-凝集素灌注以及血管标志物染色用于评估伴随肿瘤进展的血管变化。实施例12:MDA-MB231人乳腺肿瘤模型对HRLN雌性棵鼠在胁腹皮下注射5x1()S个MDA-MB231人乳腺癌细胞。(HRLN是品系名)。允许肿瘤生长，直至它们达到80-120mn^的平均大小。然后将携带肿瘤的小鼠分成4组，并且当每组的平均肿瘤体积为约1OOmm3时开始治疗。该研究期间每周对肿瘤体积测量两次。使用标准测径法进行肿瘤体积测量。称为10E7的仓鼠抗小鼠整联蛋白oc5单抗是在Genentech生产的。当肺瘤为1.5g或者已过去了60天，以先到者为准，则达到该实验的终点。在一些情况中，对响应者跟踪更久。当达到终点时，对动物实施安乐死。处理细节描述如下(1)对照组注射抗豚草对照单抗(10mg/kg,ip(腹膜内，interperitoneally)，一周一次)(2)抗VEGF单一药剂组:注射抗VEGF单抗B20.4.1(10mg/kg，ip,—周一次)(3)联合组B20.4.1(10mg/kg,ip,—周一次)+仓鼠抗小鼠整联蛋白a5单抗10E7(10mg/kg，ip，一周两次)(4)抗整联蛋白a5单一药剂组注射仓鼠抗小鼠整联蛋白a5单抗10E7(10mg/kg,ip，一周两次)对照组数据:<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage73</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>抗整联蛋白a5单一药剂组数据:<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>此初步数据显示了抗oc5+抗VEGF联合活性的早期迹象。在该研究的终点后，计算了每组的平均肿瘤体积(图11A)。还绘制了K叩lan-Meier曲线图以显示该研究中的剩余动物百分比，作为时间的函数(图IIB)。数据显示，抗整联蛋白a5pi抗体增强了抗VEGF在乳腺癌模型中的功效。实施例13:家兔耳伤口愈合模型中的7H12和贝伐单抗将新西兰白兔称重并用异氟烷(isofluorane)麻醉。在每只家兔中，自内表面并沿着两耳廓边缘修剪毛。将任何剩余的毛用脱毛洗液从手术部位去除。将手术部位用聚维酮碘(betadinescmb)清洁，接着酒精冲洗。使用无菌技术，将圆形8mm打孔活检装置用于在每个耳朵中产生一个到耳软骨深度的伤口。用骨膜起子和精细的剪刀去除在下面的软骨膜。将Opsite⑧弹性绷带放置于每个伤口上，并允许该家兔自麻醉恢复。每天去除Opsite⑧敷料，检查伤口，表面应用处理，并且应用新鲜的#丈料。在第O(手术后立即地)、7、10、14和18天，通过测量伤口直径来计算伤口缺口。处理组是每个伤口30ul中的100ug贝伐单抗(抗VEGF抗体)，每天一次(n=4)每个伤口30ul中的100ug7H12(抗(i5(31抗体)，每天一次(n=4)每个伤口15ul中的100ug贝伐单抗+15ul中的100ug7H2，每天一次(n=4)每个伤口30ul中的100ug曲妥单抗(抗HER2抗体)，每天一次(n=3)数据显示了抗VEGF和抗ot5f31联合疗法在这种血管发生模型中较之单独的单一药剂具有惊人的效果(图IO)。实施例14:结肠癌中的抗a5pi+抗VEGF联合疗法对HRLN雌性nu/nu小鼠在胁腹皮下注射1mmHT29月中瘤石卒片(结肠月中瘤)。允许肿瘤生长，直至它们达到80-120mn^的平均大小，之后用疗法治疗。然后将携带肿瘤的小鼠分成4组<table>tableseeoriginaldocumentpage75</column></row><table>3<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>使用标准测径法一周两次进行肿瘤体积测量。称为10E7的仓鼠抗小鼠整联蛋白a5单抗是在Genentech产生的。对体重在2天里测量5次，然后每周两次(biwk)直至该研究结束。实验的终点是1.5g的肺瘤体积或者60天，以先到者为准。对一些响应者跟踪更久。当达到终点时，对动物实施安乐死。定量给药体积是10mL/kg(0.200ml/20g小鼠)，根据体重调整该体积。在施用10E7后30分钟施用j尹立替康(irinotecan)。对于显示完全消退(CR)的动物，将肿瘤植入部位的组织于终点收集并且保存在福尔马林中，接着70%EtOH，用于随后的研究。将待冷冻的所有样品放置在冷冻模子中，将其在箔中包裹并且在液氮上速冻。在该研究的终点后，计算了每组的平均肿瘤体积(图13A)。还绘制了KapJan-Meier曲线图以显示该研究中的剩余动物百分比，作为时间的函数(图13B)。数据显示，抗整联蛋白ct5pi抗体没有增强化疗剂(伊立替康)在结肠癌模型中的活性，但是它也不阻碍化疗剂(伊立替康)的活性。此观察结果与我们关于在抗a5pi疗法在抗血管发生中(一般而言，特别是在肿瘤学背景中的抗血管发生中)显著有用之前应当发生血管损伤的信念是一致的。通过VEGF拮抗剂诸如AVASTIN⑧抗体可以S)起这种血管损伤。单独地，化疗剂在这种模型中没有引起显著的血管损伤。可以设想所有这些药剂(VEGF拮抗剂Ax5(31拮抗剂/化疗剂)的同时或顺次使用，使得存在VEGF拮抗剂以引起血管损伤。实施例16:oc5卩lScatchard曲线图使用1odogen方法来将抗a5(31抗体石典化，并且使用PD-10柱通过凝胶过滤将放射性标记的抗体自游离^I-Na纯化。将R9ab细胞，即家兔成纤维细胞系(购自ATCC,No.CCL-193)在24孔平板中以约50,000每孔接种，并且于37。C在5%C02中培养48小时。用结合緩冲液(含有2%FBS和50mMHEPES的50:50DMEM/F12培养基，pH7.2)将细胞清洗三次，然后在冰上温育15分钟。将清洗后的细胞在冰上与大约50pM'"I-抗(x5pi单克隆抗体温育4小时，该1"l-抗a5卩1单克隆抗体含有递减浓度的未标记抗oc5P1单克隆抗体，该未标记抗a5(31单克隆抗体在结合緩沖液中连续地从0.5uM稀释成13个三次重复测试的浓度。用结合緩沖液将细胞清洗三次，然后用200ulSDS裂解缓冲液(1%SDS,8M尿素，00mM甘氨酸，pH3.0)溶解。将细胞溶胞物在WallacWizard1470Y计数器上计数。使用Genentech的程序NewLigand评估结合数据，NewLigand使用Munson和Robard(Munson，P.andRobard,D.(1980)Anal.Biochem.107:220-239)的曲线拟合算法以确定抗体的结合亲和力和结合位点的浓度。图14和15显示了在这些结合测定法中，7H5抗体具有0.10nM的Kd,而7H12抗体具有0.30nM的Kd。实施例17:抗整联蛋白a5piIgG表位作图/竟争性结合测定法首先将抗整联蛋白a5piIgG的三倍连续稀释物在PBST緩沖液(PBS和0.5%(w/v)BSA和0.050/0(v/v)Tween20)中与人整4关蛋白a5(31抗原(lug/ml;R&D)包被的96孔NuncMaxisorp平板于室温温育l-2小时，接着加入0.3nM生物素化的h7H5.vlhlgGl(由Genentech，Inc.产生的7H5抗体变体)温育15分钟，0.3nM生物素化h7H5.vlhlgGl是通过亚最大结合信号(50-70%)确定的。然后用PBT緩沖液(PBS和0.05。/。(v/v)Tween20)清洗该平板5次。将结合的生物素化h7H5.vlhlgGl用在PBST緩沖液中l:2500稀释的链霉亲合素辣根过氧化物酶偶联物(Pierce)检测，用3,3，,5,5，-四曱基联苯胺(TMB,Kirkegaard&PerryLabs，Gaithersburg,MD)底物显色大约5分4f,用1.0MH3P04淬灭，并用分光光度法在450nm读数。用四参数非线性回归曲线拟合禾呈序(Kaleidagraph，SynergySoftware)拟、合曲线。图16显示了结合的h7H5.vl受到递增量的冷m7H5的竟争。事实上，m7H5竟争曲线几乎等同于h7H5.vl竟争曲线(^:据未显示)。冷m7H12也与生物素-h7H5.vl竟争a5f31结合，表明h7H5.vl和m7H12在a5(31上的结合表位是交叠的。另一方面，对照抗体没有与结合的h7H5.vl竟争。权利要求1.一种抗体，其能结合人α5β1和竞争性抑制抗α5β1抗体对人α5β1的结合，其中所述抗α5β1抗体是由选自下组的杂交瘤生成的2006年3月7日在ATCC作为α5/β17H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤和作为α5/β17H12.5.1.4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。2.依照权利要求l的抗体，其中该抗体是由选自下组的杂交瘤生成的2006年3月7日在ATCC作为a5/pl7H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤和作为a5/(317H12.5丄4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。3.依照权利要求l的抗体，其中该抗体包含由2006年3月7日在ATCC作为a5/卩l7H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤生成的抗体的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)序列。4.依照权利要求l的抗体，其中该抗体包含由2006年3月7日在ATCC作为oc5/卩l7H12.5丄4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤生成的抗体的重链可变域(VH)和轻链可变域(VL)序列。5.依照权利要求l的抗体，其中该抗体是由选自下組的杂交瘤生成的抗a5卩l抗体的人源化抗体或嵌合抗体2006年3月7日在ATCC作为a5/卩l7H5.4,2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤和作为a5/pl7H12.5丄4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。6.依照权利要求l-5任一项的抗体，其中该抗体能以介于500nM和lpM之间的Kd结合人a5卩l。7.依照权利要求l的抗体，其中该抗体不能结合aVf33或aVp5或aV卩l。8.依照权利要求l和3-5任一项的抗体，其中该抗体包含人IgG的Fc序列。9.依照权利要求l和3-5任一项的抗体，其中该抗体包含人IgGl或人IgG4的Fc序列。10.依照权利要求8的抗体，其中该抗体包含缺乏抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)效应器功能的Fc序列。11.依照权利要求1和3-5任一项的抗体，其中该抗体选自Fab、Fab'、F(ab)，2、单链Fv(scFv)、Fv片段；双抗体和线性抗体。12.依照权利要求l和3-5任一项的抗体，其中该抗体是多特异性抗体。13.依照权利要求l和3-5任一项的抗体，其偶联至治疗剂。14.依照权利要求13的抗体，其中所述治疗剂选自细胞毒剂、^:射性同位素和4匕疗剂。15.依照权利要求l和3-5任一项的抗体，其偶耳关至标记物。16.依照权利要求15的抗体，其中所述标记物选自放射性同位素、荧光染料禾口酵。17.—种分离的核酸分子，其编码权利要求1-5任一种抗体的重链可变域(VH)或轻链可变域(VL)或VH和VL结构域二者。18.—种表达载体，其编码权利要求17的核酸分子。19.一种细胞，其包含权利要求17的核酸分子。20.依照权利要求19的细胞，其中所述细胞是2006年3月7日在ATCC作为a5/(317H5.4.2.8(ATCCNo.PTA-7421)保藏的杂交瘤或作为a5/卩l7H12.5.1.4(ATCCNo.PTA-7420)保藏的杂交瘤。21.—种生产抗体的方法，包括培养权利要求19或20的细胞，并从细胞培养物回j]史^t体。22.—种组合物，其包含权利要求l和3-5任一项的抗体及药学可接受载体。23.—种检测来自患者的样品中的a5pi蛋白质的方法，其通过使依照权利要求1-5任一项的抗体接触样品，并检测结合至a5(31蛋白质的抗a5(31抗体。24.依照权利要求23的方法，其中所述抗体在免疫组化(IHC)测定法中或在ELISA测定法中使用。25.依照权利要求l和3-5任一项的抗体在制备用于抑制受试者中的血管发生和/或血管通透性的药物中的用途。26.依照权利要求l和3-5任一项的抗体在制备用于治疗受试者中的疾病的药物中的用途，其中所述疾病具有异常血管发生或血管通透性。27.—种抑制患有疾病的受试者中的血管发生和/或血管通透性的方法，包括施用VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂。28.—种用于治疗受试者中的癌症的方法，包括施用VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂。29.—种治疗受试者中的眼病的方法，包括施用VEGF拮抗剂和a5(31拮抗剂。30.—种治疗受试者中的自身免疫病的方法，包括施用VEGF拮抗剂和a5卩l^吉^L齐寸。31.依照权利要求27-30任一项的方法，其中给所述受试者先施用VEGF拮抗齐'J，后施用a5(31拮抗剂。32.依照权利要求27-30任一项的方法，其中给所述受试者同时施用VEGF拮抗剂和a5卩l拮抗剂。33.依照权利要求27的方法，其中所述受试者患有具有异常血管发生或血管通透性的疾病。34.依照权利要求27的方法，其中所述疾病选自肿瘤、自身免疫病或眼病。35.依照权利要求27-30任一项的方法，其中将受试者用VEGF拮抗剂治疗，直至受试者对VEGF拮抗剂治疗没有响应，然后将受试者用a5(31拮抗剂治疗。36.依照权利要求28的方法，其中将受试者在所述癌症是非侵入性的时候用VEGF拮抗剂治疗，而在所述癌症是侵入性的时候用a5(31拮抗剂治疗。37.依照权利要求27的方法，其中所述受试者在患病组织中与来自未患有该病的受试者的组织相比具有升高的a5pi水平。38.依照权利要求27-30任一项的方法，其中给受试者进一步施用选自下组的治疗剂抗肺瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒剂。39.依照权利要求27-30任一项的方法，其中所述抗VEGF抗体对人VEGF的结合受到Avastin⑧抗体的竟争性抑制。40.依照权利要求42的方法，其中所述抗VEGF抗体是Avastin⑧抗体。41.依照权利要求27-30任一项的方法，其中所述a5(31拮抗剂偶联至细胞毒剂。42.依照权利要求41的方法，其中所述细胞毒剂是放射性同位素、化疗剂或毒素。43.依照权利要求27-30任一项的方法，其中所述VEGF拮抗剂是抗体。44.依照权利要求27-30任一项的方法，其中所述a5(31拮抗剂是抗体。45.依照权利要求43的方法，其中所述抗VEGF抗体是人源化抗体或人抗体。46.依照权利要求44的方法，其中所述抗a5pi抗体是人源化抗体或人抗体。47.—种组合物，其包含VEGF拮抗剂、a5(31拮抗剂及制药学可接受载体。48.—种试剂盒，其包含检测已经用VEGF拮抗剂治疗过的受试者中的a5卩l的指令。49.依照权利要求47的组合物在制备用于抑制患有疾病的受试者中的血管发生和/或血管通透性的药物中的用途。50.依照权利要求49的用途，其中所述疾病选自癌症、眼病、自身免疫病。51.依照权利要求49的用途，其中所述疾病选自实体瘤、转移瘤、软组织肿瘤、具有眼新血管形成的疾病、具有异常血管发生的炎性疾病、移植入受试者后发生的疾病和具有纤维血管组织异常增殖的疾病。52.依照权利要求50的用途，其中所述癌症选自乳腺癌、宫颈癌、结肠直肠癌、肺癌、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、头颈癌、黑素瘤、卵巢癌、间皮瘤、软组织癌、和多发性骨髓瘤。53.依照权利要求49的用途，其中所述疾病选自视网膜病、年龄诱发的黄斑变性、发红、银屑病、银屑病关节炎、炎性肾病、溶血性尿毒综合征、糖尿病肾病、关节炎、炎性肠病、慢性炎症、慢性视网膜剥离、慢性葡萄膜炎、慢性玻璃体炎、角膜移植片排斥、角膜新血管形成、角膜移植片新血管形成、克罗恩氏病、近视、眼新血管病、骨关节炎、佩吉特病、类天疱疮、多动脉炎、激光放射状角膜切开术后、视网膜新血管形成、斯耶格伦氏综合征、溃疡性结肠炎、移植物排斥、肺部炎症、肾病综合征、水肿、与恶性肿瘤有关的腹水、中风、血管纤维瘤和新生血管性青光眼。54.(x5(31拮抗剂在制备用于治疗患有疾病的受试者的药物中的用途，其中所述受试者曾经对用VEGF拮抗剂治疗疾病有响应，但是现在对VEGF拮抗剂部分有响应或不再有响应。55.依照权利要求54的用途，其中所述受试者在患病组织中与来自未患有该病的受试者的组织相比具有升高的a5pl水平。56.依照权利要求54的用途，其中给受试者进一步施用选自下组的治疗剂抗肿瘤剂、化疗剂、生长抑制剂和细胞毒剂。57.VEGF拮抗剂在制备用于治疗患有疾病的受试者的药物中的用途，其中所述受试者曾经对用a5(31拮抗剂治疗疾病有响应，但是现在对a5(31拮抗剂部分有响应或不再有响应。58.—种组合物，其包含VEGFR激动剂和a5(31激动剂。59.依照权利要求58的组合物在制备药物中的用途。60.依照权利要求59的用途，其中所述药物促进伤口愈合。全文摘要本发明涉及VEGF拮抗剂和α5β1拮抗剂用于治疗癌症和抑制血管发生和/或血管通透性(包括抑制疾病中的异常血管发生)的用途。本发明还涉及VEGFR激动剂α5β1激动剂用于促进血管发生和血管通透性的用途。本发明还涉及新的抗α5β1抗体、包含它们的组合物和试剂盒、及制备和使用它们的方法。文档编号C07K16/28GK101448858SQ200780018402公开日2009年6月3日申请日期2007年3月21日优先权日2006年3月21日发明者叶伟兰,雁吴,格雷格·普洛曼,阿南·丘撒拉佩,马克·特西尔-拉维格尼申请人:健泰科生物技术公司