治疗性吡唑基噻吩并吡啶的制作方法

专利名称：：治疗性吡唑基噻吩并吡啶的制作方法治疗性吡唑基噻吩并吡啶
背景技术：
：TGF-/5(转化生长因子-/5)活化纤维变性和肿瘤促进信号级联放大。三种哺乳动物TGF/5:TGF/31、TGF/32和TGF/33能够活化该TGF/3通路。TGF/3与细胞表面受体结合并通过它传导信号(见Singhetal.(2004)Curr.Opin.DrugDisc,andDev.,7:437-445)。TGF/3首先与1I型受体(T73RII)结合，所述II型受体随后与I型受体(T^RI)结合并将其磷酸化(即激活蛋白受体样激酶(ALK))。存在包含ALK-5的ALK蛋白质家族，所述ALK-5是针对TGF^最特异的ALK。ALK-5的活化造成细胞内蛋白质的磷酸化，这导致纤维变性和肿瘤发生的调节。因此，ALK-5抑制剂的研究是一个发现抑制剂的活跃的研究领域，所述抑制剂用于治疗癌症和涉及纤维变性的病症(见Singhetal.(2004))。涉及纤维变性的病症的一个例子是创伤修复期间瘢痕的形成。瘢痕(包括肥厚性瘢痕(hypertrophicscar)和瘢痕疙瘩(keloidscar))典型地由创伤处的胶原沉积造成。创伤可通过许多不同种类的机制产生，包括手术、意外受伤、烫伤、外伤等。据报道TGF/53的应用、针对TGF/31和TGF02的抑制TGF/3通路的抗体能够帮助减少瘢痕形成(O'KaneandFerguson,(1997)Int.J.Biochem.CellBiol.,29:63-78)。因此，本领域存在对小分子ALK-5抑制剂的现行需求，所述抑制剂可被用于减少瘢痕形成，和用于治疗其它纤维变性病症以及癌症。
发明内容本发明一方面提供式I的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>或其可药用盐，其中R1是噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[3,2-b]吡啶基、噻吩并[2,3-c]吡啶基或噻吩并[2,3-b]吡啶基，其各自可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由Q-C3-垸基、-(C「C3-烷基)-S-(C广Cr垸基)、-S-C广(V垸基、-(C广C3-垸基)-0-(C广C3-烷基)、-O-C广C3-垸基、-C(0)0-d-C3-烷基、-C(O)O-H、-C(0)NR3QR31、卤素、-CN、-OH组成的组，其中R^和R"各自独立地选自由H、禾nC广C3烷基-OH、Q-CV烷基、卤素、和-0-C广C3-垸基组成的组；W和113独立地选自由氢、C广CV垸基、-(C广Q-烷基)-S-(C广C3-垸基)、-S-d-C3-烷基、-(C广C3-垸基)-—(d-Q-烷基)、-O-C广Q-烷基、-C(O)O-d-Cr烷基、-C(O)O-H、-C(0)NR3QR31、卣素、-CN、-OH和Q-C6-环烷基组成的组，其中R^和R31各自独立地选自由H和CrCV烷基组成的组；或Fe和RS可一起形成5或6元杂芳基、苯基、CrC6-环烷基或4-6-元杂环烷基，其中所述C4-C6-环烷基或4-6-元杂环垸基可选地被一个到三个独立地选自卤素、-OH、氧代和CrC3烷基的取代基取代，其中所述5或6元杂芳基或苯基可选地被一个到三个独立地选自卤素、-CN、-OH、-0^1^3烷基和CrC3烷基的取代基取代；禾BR4、R5、116和R7选自由H、-OH、C3-环烷基、C广CV垸基、-(C广C3-垸基)-S-(d-C3-烷基)、-8-01^3-垸基、-(C广C3-烷基)-0-(C广C3-垸基)、-0-d-C3-垸基、-C(0)0-C广C3-烷基、-C(O)O-H、-C(0)NR3()R31、卤素、-CN、-OH组成的组，其中R^禾QR"各自独立地选自由H、和C广C3烷基CrQr烷基、-0-01-(33-烷基和卤素组成的组。在某些实施方案中，R1是噻吩并[3,2-c]吡啶基，其可如本文所指明的被可选地取代。噻吩并[3,2-c]吡啶的位置如下编号噻吩并[3,2-C]吡啶基是噻吩并[3,2-C]吡啶的单价基。因此在本发明的某些实施方案中是式II的化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、RS和W具有本文指明的任何数值，且其中噻吩并[3,2-c]基连接在2、3、4、6或7中的任何位置上。在某些实施方案中，Ri是噻吩并[2,3-c]吡啶基，其可如本文所指明的被可选地取代。噻吩并[2，3-c]吡啶的位置如下编号噻吩并[2,3-c]吡啶基是噻吩并[2,3-c]吡啶的单价基。因此在本发明的;些实施方案中是式III的化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、W和W具有本文指明的任何数值，且其中噻吩并[2，3-c]基连接在2、3、4、5或7中的任何位置上。在某些实施方案中，R1是噻吩并[2,3-b]吡啶基，其可如本文所指明的被可选地取代。噻吩并[2,3-b]吡啶的位置如下编号噻吩并[2,3-b]吡啶基是噻吩并[2,3-c]吡啶的单价基。因此在本发明的某些实施方案中是式IV的化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、W和W具有本文指明的任何数值，且其中噻吩并[2,3-b]基连接在2、3、4、5或6中的任何位置上。在某些实施方案中，Ri是噻吩并[3,2-b]吡啶基，其可如本文所指明的被可选地取代。噻吩并[3,2-b]吡啶的位置如下编号噻吩并[3,2-b]吡啶基是噻吩并[3,2-c]吡啶的单价基。因此在本发明的某些实施方案中是式V的化合物其中R1、R2、R3、R4、R5、W和R具有本文指明的任何数值，且其中噻吩并[3,2-b]基连接在2、3、5、6或7中的任何位置上。在某些实施方案中，R1是噻吩并[3,2-c]吡啶基或噻吩并[2，3-c]吡啶基。在某些实施方案中，R1是噻吩并[3，2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由C广C3-院基、陽(C广C3画院基)—S-(C广C3-院基)、""S-C广C3國綜基、-((^-(1!3-焼基)-O-(C广C3-垸基)、-0-(^-(:3-烷基、-QCOO-d-CV烷基、-C(O)O-H、-C(0)NR3QR31、囱素、-CN、-OH组成的组，其中R3Q和R"各自独立地选自由H、禾口C广C3烷基-OH、Q-CV烷基、卣素、和-0-C广C3-烷基组成的组；在某些实施方案中，R1是噻吩并[3,2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、d-C3烷基、卤素和-O-CrQ烷基组成的组。在某些实施方案中，W和W—起形成CrC6-环烷基或4-6-元杂环烷基，其中所述CrC6-环垸基或4-6-元杂环烷基可选地被一个到三个独立地选自氧代和Q-Q烷基的取代基取代。在其它实施方案中，]12和113—起形成C5-环烷基或4-6-元杂环垸基，其中所述4-6-元杂环烷基选自由以下组成的组四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑垸基、噁唑垸基、咪唑啉基、异噁唑烷基和吡咯垸基。在其它实施方案中，W和W—起形成C5-环垸基且R1是噻吩并[3,2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基。在某些实施方案中，本发明的化合物是(2-(6-甲基吡啶-2-基)-2,4，5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)噻吩并[3，2-c]吡啶或其可药用盐。在某些实施方案中，本发明的化合物是2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-2,4,5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)噻吩并[2,3-c]吡啶或其可药用盐。在其它实施方案中，W和W独立地选自由氢、CrC3-垸基、-(CrC3-垸基)-0-(CrC3-垸基)、-0-CrCr烷基、-C(O)O-d-C3-烷基、-C(O)O-H、-C(0)NR3QR31、卣素、-CN,-OH和(33-0环烷基组成的组，其中R"和R31各自独立地选自由H和Ci-C3烷基组成的组。在具体的实施方案中，W和RS独立地选自由H和Q-C3烷基组成的组。在更具体的实施方案中，f是CrC2烷基且R是氢。在某些实施方案中，R5、W和R"是H且W是CVC3-烷基。还在其它实施方案中，R"是甲基。在某些实施方案中，R5、W和R:是H，且W是甲基。在某些实施方案中，R1是噻吩并[3，2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶9基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、C广C3烷基、卤素和-0-d-Q烷基组成的组。在某些实施方案中，R1是噻吩并[3,2《]吡啶-2-基或噻吩并[2，3-0]吡啶-2-基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、C广C3烷基、卤素和-0-CrC3垸基组成的组。在某些实施方案中，R1是噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、d-C3烷基、卤素和-O-Q-Q烷基组成的组。在具体的实施方案中，R1是噻吩并[3,2-c]吡啶基-2-基。在某些实施方案中，在某些实施方案中，r5、RS和:r7是H;W是CKV烷基；且W是噻吩并[3，2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、d-C3垸基、卤素和-0-CrC3烷基组成的组。在某些实施方案中，R5、R，nW是H;114是甲基；且Ri是噻吩并[3,2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、CVC3烷基、卤素和-O-d-C3烷基组成的组。在某些实施方案中，R5、116和]17是11;R"是甲基；且W是噻吩并[3,2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基。在某些实施方案中，R5、RS和W是H;114是甲基；且Je是噻吩并[2,3-c]吡啶基。在某些实施方案中，R5、RS和R7是H;R"是甲基；且Ri是噻吩并[3,2-c]吡啶基。在某些实施方案中，R5、W和I^是H;114是甲基；W是噻吩并[2,3-c]吡啶基；且f和R独立地选自由氢和CrC3垸基组成的组。在某些实施方案中，R5、RS和R"是H;W是甲基；Ri是噻吩并[3,2-C]吡啶基；且W和RS独立地选自由氢和d-C3烷基组成的组。在某些实施方案中，R5、RS和R"是H;R"是甲基；1^是噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基；且112和W独立地选自由氢和CrCV烷基组成的组。在某些实施方案中，R5、RS和R7是H;114是甲基；Ri是噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基；且112和W独立地选自由氢和CrQ烷基组成的组。式i化合物的例子包括2-[l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；2-[3,4-二甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3，2-c]吡啶；2-[3-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；2-[3-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；2-[4-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；及其可药用盐。式I化合物的另一个例子是2-[4-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-111-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶及其可药用盐。在一个具体的实施方案中，该化合物是2-[4-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶。式I化合物的另一个例子是2-(4-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-111-吡唑-5-基)噻吩并[2,3-c;i吡啶或其可药用盐。另一方面，本发明提供了减少瘢痕形成的方法，包括对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其可药用盐。在某些实施方案中，式I的化合物被局部施用。在某些实施方案中，式I的化合物是2-噻吩并[3,2-c]吡啶；或其可药用±卜JUL。在某些实施方案中，本发明提供了减少现存瘢痕的方法，包括对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其可药用盐。在某些实施方案中，2-[4-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐可被用于制造抑制瘢痕形成的药物。另一方面，本发明提供了治疗TGF/3-介导的病症的方法，包括对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的式1的化合物或其可药用盐。在某些实施方案中，TGF^-介导的病症选自由以下组成的组癌症、乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、纤维变性疾病、肾小球肾炎、糖尿病肾病、肝纤维化、肺纤维化、动脉增生、再狭窄、硬皮病和皮瘢痕形成(dermalscarring)。在某些实施方案中，TGF/5-介导的病症是皮瘢痕形成。在某些实施方案中，式I的化合物是2-[4-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐。在某些实施方案中，TGF/3-介导的病症是皮瘢痕生成且式I的化合物是2-[4-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-C]吡啶或其可药用盐。另一方面，本发明提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式I化合物和可药用的赋形剂。在某些实施方案中，式1的化合物是2-[4-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐。另一方面，本发明提供了局部药物组合物，其包含治疗有效量的式I的化合物或其可药用盐，和适合局部应用的可药用赋形剂。在某些实施方案中，式I的化合物是2-[4-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-萄噻吩并[3，2-c]吡啶或其可药用盐。在又一实施方案中，本发明涉及试剂盒，其包含被包装用于零售分销的至少一种本发明的化合物，以及建议消费者如何使用该化合物减轻TGF/3-介导的病症的说明书。另一实施方案涉及化合物作为诊断剂用于检测TGF/3激活的通路的不适当激活的用途。定义除非另有明确说明，在本申请通篇(包括权利要求书)中使用时，以下的术语具有下文定义的含义。除了指出数量外，复数和单数应当被可互换地对待"瘢痕"是创伤位点处创伤修复后存在的痕迹。术语"瘢痕"包括瘢痕疙瘩、肥厚性瘢痕，和基本不隆起并且基本上不生长超过初始创伤边界"瘢痕疙瘩"是指创伤处瘢痕阻止的过度生长，其典型地生长超过初始创伤的边界。"肥厚性瘢痕"是指基本上不生长超过初始创伤边界的隆起的瘢痕。术语"创伤"是指破坏组织(例如皮肤)正常完整性的损伤。"创伤"可有意识地或意外地产生。创伤的例子包括撕裂、挫伤、闭合性创伤、开放性创伤、穿孔创伤、切伤、刺伤、烫伤等等。术语"式I的化合物"、"本发明的化合物"和"化合物"在本申请通篇中可互换使用，并应被认为是同义的。术语"患者"是指温血动物，例如荷兰猪、小鼠、大鼠、沙土鼠、猫、兔、犬、猴、大猩猩、短尾猴和人。术语"治疗"是指化合物缓解、减轻或减缓患者的疾病(或病症)进展或与该疾病相关的任何组织创伤的能力。术语"哺乳动物"是指哺乳纲的成员。哺乳动物的例子包括但不限于人、灵长类、大猩猩、啮齿动物、小鼠、大鼠、兔、马、家畜、犬、猫、绵羊和牛。在一个具体的实施方案中，哺乳动物是人。术语"异构体"是指如下文定义的"立体异构体"和"几何异构体"。术语"立体异构体"表示具有一个或多个手性中心并且每个中心以R或S构型存在的化合物。立体异构体包括所有的非对映异构体、对映异构体和差向异构体形式及其外消旋化合物和混合物。术语"几何异构体"表示以顺式、反式、抗、对(entgegen,E)和邻(zusammen,Z)形式及其混合物形式存在的化合物。式①的某些化合物可作为几何异构体存在。式(I)的化合物可具有一个或多个对称中心，因此作为两种或更多立体异构体形式存在。本发明包括式(I)化合物的所有个体立体异构体和几何异构体及其混合物。个体异构体可通过手性分离获得，通过在合成中使用可获得的合成构建单元用合适的立体化学引入相关的对称中心实现，或从非手性合成构建块开始通过不对称合成实现。本发明的某些化合物可作为互变异构形式存在。所有的这类互变异构形式包括在本发明的范围内。另外，本发明的化合物可以以未溶剂化和溶剂化的形式(包括水合形式)存在，所述溶剂化用可药用溶剂如水、乙醇等等实现。化合物还可以以一种或多种晶态(即多晶型)存在，或它们可以作为无定形固体存在。所有这些形式旨在被包括在本发明的范围内。术语"垸基基团"或"垸基"表示直链或分支烷的单价基。例如，"Cw垸基"是具有1到3个碳原子的垸基基团。d-C3直链烷基基团的例子包括甲基、乙基和正-丙基。支链CrC3烷基基团的例子包括异丙基。术语烷基包括"未经取代的烷基"和"经取代的烷基"二者，后者是指具有取代基的垸基，所述取代基替换烃主链的氢或一个或多个碳(例如一个到六个取代基)。这类取代基可独立地选自由卣素、I、Br、Cl、F、-0H、-(^0011和-^92组成的组。典型地，经取代的d-C3直链烷基基团包括2-氯丙基、2-羟基-乙基、2-氨基丙基和三氟甲基。术语"CVC6环垸基"是指含有3到6个碳的单环烷的单价基。"C3-C6环烷基"的例子包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。术语"C4-Q环烷基"是指含有4到6个碳的单环垸的单价基。"C4-C6环烷基"的例子包括环丁基、环戊基和环己基。"4-6-元杂环烷基"是指4-6元单环杂环烷的单价基。4-元杂环垸基是含有3个碳原子和一个选自氧、氮、硫的杂原子的4-元环。硫也可以作为S(O)或S(Oh存在。4-元杂环烷基基团的例子包括氧杂环丁基(oxetanyl)、硫杂环丁基(thietanyl)和氮杂环丁烷基(azetidinyl)。5-元的杂环烷基含有2到4个碳原子和1到3个杂原子，所述杂原子选自由以下组成的组10;1S;1N;2N;1S禾Q1N;1S禾Q2N;1o禾卩in;禾nio禾n2N，其中当两个o原子或一个o原子和一个s原子存在于环中时，所述两个O原子或一个O原子和一个S原子不彼此直接键合。硫也可以作为S(O)或S(Oh存在。5-元杂环垸基的例子包括四氢呋喃基、四氢噻吩基、咪唑烷基、噁唑烷基、咪唑啉基、异噁唑烷基和吡咯烷基。"6-元杂环烷基"含有3到5个碳原子和1到3个杂原子，所述杂原子选自由以下组成的组10;20;1S;2S;1N;2N;3N;1S，10和1N;1S禾口1N;1S禾卩2N;1S禾卩10;1S禾口2O;1O和1n;和10和2N，其中存在两个O原子或一个O原子和一个S原子时，所述两个O原子或一个O原子和一个S原子不彼此直接键合。硫也可以作为S(O)或S(0)2存在。6-元杂环烷基的例子包括四氢吡喃基、二噁垸基、1,3-二氧戊环基、1,4-二噻烷基、六氢嘧啶、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、吡唑烷基、吡唑啉基、1,2,3,6-四氢吡啶基、四氢噻喃基、1,1-二氧代-六氢-l入6-噻喃基、1,1-二氧代-六氢-1入6-硫吗啉基、硫吗啉基、噻噁烷基和1,3,5-三14噻嗯基(trithianyl)。"5-元杂芳基"是具有2到4个碳原子和1到3个杂原子的5-元的、单环的、芳环基，所述杂原子选自由以下组成的组10;1S;1N;2N;3N;1S禾卩1N;1S禾口2N;1O和1N;和1O和2N。在某些实施方案中，5-元杂芳基选自由以下组成的组呋喃基、咪唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻吩基、噻唑基和三唑基。"6-元杂芳基"是具有4到4个碳原子和1或2个杂原子的6-元的、单环的、芳环基，所述杂原子选自由1N和2N组成的组。在某些实施方案中，6-元杂芳基选自由以下组成的组吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基。发明详述化合物的制备制备式I化合物的通用合成流程图在下文公开。流程图1O流程图l描述吡唑6的合成。非质子溶剂如THF(四氢呋喃)、二乙醚等中的噻吩并[3，2-c]吡啶1(见例如Wikeletal.(1993)J.Het.Chem.,30:289-290)可与烷基-锂试剂例如正丁基锂在约-4(TC或以下反应。在流程图1中该噻吩并[3,2-c]吡啶显示未经取代，然而，其可如本文所述被可选地取代。向反应中添加N-甲基-N-甲氧基乙酰胺2(或其它合适的酰化剂如N-乙酰—吗啉、乙酸酐和乙酰氯)，并允许反应在-30到-45。C下进行，以提供酮3(例如l-(噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)乙酮)。然后在DMF(二甲基甲酰胺)中将酮3与二甲氧基-N,N-二甲基甲胺("DMF-DMA")于约70。C下反应，提供4(例如(E)-3-(二甲氨)-l-(噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙-2-烯-l-酮)。用吡啶基-肼5(例如1-(6-甲基吡啶-2-基)肼)在乙酸中于约8(TC下处理4，产生位置异构体(regioisomer)6和7。可使用常规纯化技术如沉淀、过滤和柱色谱将位置异构体7与6分离，提供6。流程图2流程图2描述吡唑6的备选合成途径。可在氮气大气下在例如THF的溶剂中在约-5(TC到-78。C下，将噻吩并[3,2-c]吡啶1的溶液与垸基锂试剂例如正-丁基锂反应。在流程图2中噻吩并[3,2-c]吡啶显示未经取代，然而，其可如本文所述被可选地取代。硼酸三异丙基酯和磷酸的添加产生硼酸9的磷酸盐。随后通过添加碱和钯催化剂将该硼酸9与吡啶基-吡唑10偶联以提供吡唑6，所述碱例如无机碳酸盐碱(例如Na2C03、K2C03、NaHC03等)或磷酸三钾，所述钯催化剂例如Pd(Cl2)dppf(二氯(l,l双(二苯基膦)二茂铁)钯(II))和dppf[(l,l双(二苯基膦)二茂铁。该反应可通过在合适的溶剂如THF或1,2-二甲氧基乙烷中；或在约80-10(TC下在二噁烷中回流l-24小时来完成。该反应也可以在存在KF和水时完成。相应的硼酸酯可用于代替硼酸9。10的基团LG代表合适的离去基团如三氟甲磺酰基、Br、I或C1。可分别使用噻吩并[3,2-b]吡啶、噻吩并[2，3-c]吡啶和噻吩并[2,3-b]吡啶代替1制备6的相应噻吩并[3,2-b]吡啶-2-基、噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基和噻吩并[2,3-b]吡啶-2-基类似物。可药用盐本发明的化合物(例如式I的化合物)可能够形成可药用的盐，包括但不限于酸加成盐和/或碱盐。式(I)化合物的可药用盐包括其酸加成盐和碱盐(包括双盐(disalt))。合适的盐的例子可在例如StahlandWermuth,HandbookofPharmaceuticalSalts:Properties,Selection,andUse,Wiley-VCH,Weinheim,Germany(2002);andBergeetal""PharmaceuticalSalts,"J.ofPharmaceuticalScience,1977;66:1-19中找至廿。式I化合物的可药用的酸加成盐包括来自无机酸例如烟酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、磷等等的无毒盐，以及来自有机酸例如脂肪族单羧酸和二羧酸、苯基-取代的链烷酸、羟基链烷酸、二元酸(alkanedioicacid)、芳香族酸、脂肪族磺酸和芳香族磺酸等的盐。因此这类盐包括醋酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(苯磺酸盐)、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐、辛酸盐、樟脑磺酸盐(樟脑磺酸盐)、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、乙二磺酸盐(l,2-乙烷二磺酸盐)、磷酸二氢盐、二硝苯甲酸盐、乙磺酸盐(乙烷磺酸盐)、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐(gluceptate)、葡萄糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、羟苯酰苯酸盐(hibenzate)、氢氯化物/氯化物、氢溴化物/溴化物、氢碘化物/碘化物、异丁酸盐、磷酸氢盐、羟乙基磺酸盐、D-乳酸盐、L-乳酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐(mandelate)、甲磺酸盐(甲磺酸盐)、偏磷酸盐、甲基苯甲酸盐、甲基硫酸盐、2-萘磺酸盐(2-萘磺酸盐)、烟碱酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、双羟萘盐(palmoate)、苯乙酸盐、磷酸盐、邻苯二甲酸盐(phthalate)、丙酸盐、焦磷酸盐、焦硫酸盐、葡萄糖二酸盐、癸二酸盐、硬脂酸盐、辛二酸盐(suberate)、琥珀酸盐、硫酸盐、亚硫酸盐、D-酒石酸盐、L-酒石酸盐、甲苯磺酸盐(甲苯磺酸盐)和昔萘酸盐(xinafoate)，以及式I化合物的盐。还考虑到的是氨基酸如精氨酸的盐、葡糖酸盐、半乳糖醛酸盐等等。.可如下制备碱性化合物的酸加成盐将游离碱形式与足量的期望的酸接触产生具体的盐。可通过将盐形式与碱接触并分离游离碱来再生游离碱形式。游离碱形式与它们各自的盐形式可在某些物理特性中稍微不同，所述物理特性例如在极性溶剂中的溶解度。可药用的碱加成盐可用金属或胺例如碱金属和碱土金属氢氧化物或有机胺来形成。作为阳离子使用的金属的例子是铝、钙、镁、钾、钠等等。合适的胺的例子包括精氨酸、胆碱、氯普鲁卡因、N,N'-二苄乙烯二胺、二乙胺、二乙醇胺(diethanolamine)、二乙醇胺(diolamine)、氨茶碱(乙烷-1,2-二氨)、甘氨酸、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基葡萄糖胺、醇胺(olamine)、普鲁卡因(苄星青霉素)和氨基丁三醇。可如下制备酸性化合物的碱加成盐以常规的方式将游离酸形式与足量的期望碱接触产生盐。可通过将盐形式与酸接触并分离游离酸来再生游离酸形式。游离酸形式与其各自的盐形式可在某些物理特性中稍微不同，所述物理特性例如在极性溶剂中的溶解度。药物组合物通常，本发明的化合物可作为药物组合物被施用，所述药物组合物包含一种或多种可药用的赋形剂。短语"药物组合物"是指适合在医学或兽医学用途中施用的组合物。短语"治疗有效量"表示化合物或其可药用盐的用量，所述用量在具体的受试者或受试者群体中被单独施用或与另一治疗剂或治疗组合施用时，足以抑制、终止或允许改善被治疗的疾病。例如在人或其他哺乳动物中，在实验室或临床环境中可针对具体疾病和被治疗的受试者，经实验确定治疗有效量。应当理解适当剂型、剂量和施用途径在药物和医学领域技术人员的水平内并在下文描述。本文使用术语"赋形剂"描述除了本发明化合物以外的任何成分。赋形剂的选择典型地在很大程度上取决于下述因素，例如具体的施用模式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响和剂型的本质。可药用的赋形剂部分地由被施用的具体组合物以及用于施用该组合物的具体方法决定。因此，存在本发明药物组合物的合适配制物的广阔多样性(见例如Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy,20thed.,Gennaroetal.Eds"LippincottWilliamsandWilkins,2000)。本发明的化合物可以被配制为下述形式的药物组合物糖桨、酏剂、悬浮液、粉末、颗粒剂、片剂、胶囊、锭剂、含片(troche)、水性溶液、霜剂、软膏剂、洗剂、凝胶、乳剂等等。为了从本发明的化合物制备药物组合物，可药用赋形剂典型地为固体和液体赋形剂。固体形式的制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊剂(cachet)、栓剂和可分散的颗粒剂。固体赋形剂可以是一种或多种物质，其也可作为稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料发挥作用。在粉末中，赋形剂典型地为精细分割的固体，其处于与精细分割的活性成分的混合物中。在片剂中，活性成分与具有必需的结合特性的赋形剂以合适的比例混合，并被压縮为期望的形状和大小。粉末和片剂典型地含有1%到95%(w/w)的活性化合物。在某些实施方案中，活性化合物的范围从5。/。到70。/。(w/w)。合适的赋形剂为碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、西黄蓍胶(tragacanth)、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等等。术语"制备"旨在包括将活性化合物与作为赋形剂的包封材料配制提供胶囊，所述胶囊中具有或不具有其他赋形剂的活性组分被赋形剂包围，从而所述赋形剂与所述活性组分结合。类似地，扁囊剂和锭剂被包括在内。片剂、粉末、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可被用作适合口服施用的固体剂型。为了制备栓剂，首先熔化低熔点蜡(例如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物)，并例如通过搅拌将活性组分均匀地分散在其中。然后将熔化的均匀混合物倒入尺寸便利的模具中，使其冷却并藉此固化。液体形式的制剂包括溶液、悬浮液和乳剂，例如水或水/丙二醇溶液。可通过将活性成分溶于水性或非水性可药用溶剂中来制备液体制剂，所述液体制剂也可含有本领域已知的悬浮剂、甜味剂、调味剂和防腐剂。还包括在内的是下述固体形式制剂，其旨在于使用前不久被转化为液体形式制剂用于口服施用。这类液体形式包括溶液、悬浮液和乳剂。这些制剂除了包含活性组分外可含有着色剂、香料、稳定剂、缓冲液、人工或天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等等。本发明的化合物可以被单独地或与其他合适组分组合地配制为有待通过吸入施用的气雾剂配制物(即它们可以被"喷成雾状")。气雾剂配制物可以被置于可加压的推进剂例如二氯二氟甲垸、丙烷、氮等等中。根据本发明的局部组合物可以是下述形式溶液、洗剂、油膏、霜剂、软膏剂、脂质体、喷雾、凝胶、泡沬、绷带贴片(rollerstick)或常规用于递送局部药物组合物的任何其他配制物。适合肠胃外(例如通过静脉、肌内、皮内和皮下途径)施用的配制物包括水性和非水性的等张无菌注射溶液和水性和非水性的无菌悬浮液，所述溶液可含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和使得该配制物与目标受体的血等张的溶质，所述悬浮液可含有悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。药物制剂优选地为单位剂型。在这类形式中，制剂被分割为含有适量活性组分的单位剂量。单位剂型可以是被包装的制剂，所述包装含有离散量的制剂，例如盒装的片剂、胶囊和管或安瓿中的粉末。单位剂型还可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂自身，或其可以是经包装形式的适当数量的这些剂型。化合物的配制物可以存在于单剂量或多剂量的密封容器如安瓿和管中。含有本发明化合物的组合物可以被包装用于零售分销(即制造的物品)。可以用指导患者如何使用产品的方式标记和包装这类物品。这类指导可包括要被治疗的病症、治疗的持续时间、给药时间表等。可以根据具体的应用和活性组分的效力，将单位剂量制剂中活性组分的量从0.1mg至lj1000mg，优选地1.0mg至U100mg，或从0.01%至1」95%(w/w)单位剂量变化或调整。在本发明上下文中，被施用给受试者的剂量应当足以在受试者中随着时间达到有益的治疗应答。如果期望的话，该组合物还含有其他相容的治疗剂。针对具体情况确定适当的剂量在执业医生的技艺范围内。典型地，通过使用的具体化合物的效力和受试者的病症、被治疗的疾病的严重性以及要被治疗的受试者的体重或表面积确定剂量。剂量的大小应通过具体受试者中伴随具体化合物施用的任何不良副作用的存在、本质和程度来确定。在确定待治疗的疾病的治疗或预防中要被施用的化合物的有效量时，医生可以评价下述因素，例如化合物的循环血浆水平、化合物毒性和/或疾病的进展等。另外，本发明的化合物可以以通过下述因素确定的速率被施用，所述因素包括应用于受试者的质量和总体健康时化合物的药物代谢动力学模式、禁忌药物和不同浓度下化合物的副作用。通常，治疗用较小的剂量起始，所述较小剂量少于化合物的最适剂量。之后通过小的增量提高剂量，直到达到该环境下的最佳作用。为了便利，如果需要的话可以将总每日剂量分割并且在当天分为多个部分施用。使用方法尽管本发明的化合物最典型地可被用于减少瘢痕形成，但是本发明不限于该具体的病症。本发明的化合物可被用于减少现存的瘢痕。本发明的化合物还可以被用于缓解任何类型的TGF/3-介导的病症。TGF/3-介导的病症的例子包括所有类型的癌症(例如乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、黑色素瘤、所有血液恶性肿瘤等)，以及所有类型的纤维变性疾病(例如肾小球肾炎、糖尿病肾病、肝纤维化、肺纤维化、动脉增生和再狭窄、硬皮病和皮瘢痕形成)。在一个具体的实施方案中，TGF/3-介导的病症是皮瘢痕形成。术语"施用"是指使化合物与受试者接触的方法。因此，本发明的化合物可以通过包括注射的多种途径被施用，即静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内、肠胃外或腹膜内施用。本文所述的化合物还可以通过吸入被施用，例如鼻内施用。另外，本发明的化合物可以经皮、局部和通过植入被施用。在某些实施方案中，本发明的化合物被经口递送。化合物还可以被经直肠、经颊、阴道内或经眼递送。当被施用以减少瘢痕形成时，本发明的化合物典型地可被应用于创伤和/或创伤周围的区域。例如，本发明的化合物可以以下述形式被局部施用至创伤处贴片、溶液、洗剂、油膏、霜剂、软膏剂、脂质体、喷雾、凝胶、泡沫、绷带贴片或常规用于递送局部药物组合物的任何其他配制物。或者，本发明的化合物可以通过注射被施用进创伤处或创伤周围区域。在某些实施方案中，本发明的化合物被施用至创伤处，该创伤已被缝合、钉住(stapled)、粘贴和/或用绷带包扎等。在某些实施方案中，本发明的化合物在创伤发生后立即被施用。在其他实施方案中，本发明的化合物在创伤发生后1小时、8小时、12小时、l天、2天、3天、l周、2周、l个月、6个月、1年或多于一年之内被施用。在一个具体的实施方案中，创伤通过切开产生。在某些实施方案中，可对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物或其可药用盐，以抑制瘢痕疙瘩形成。在某些实施方案中，可对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物或其可药用盐，以抑制肥厚性瘢痕形成。在某些实施方案中是抑制瘢痕形成的方法，包括对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的式I的化合物或其可药用盐，其中所述瘢痕会在皮肤上产生。瘢痕的减少或瘢痕形成的抑制旨在传达根据患者或保健执业医生(例如医师)所判断的，本发明的化合物涉及减少瘢痕的出现。瘢痕的减少或瘢痕形成的抑制可伴随着一个或多个以下指标的改善，所述指标涉及痊愈期间细胞外基质沉积的减少、胶原沉积的减少、尺寸的减少、形状的减少、厚度的减少、表面积的减少、严重性的减少、高度的减少、着色的改善等。在一个典型的实施方案中，该化合物被局部施用。在本文中使用时，局部表示直接将化合物(和可选的运载体)应用于皮肤或创伤区域。局部施用特别适用于对皮肤的创伤。剂量可以变化，但是作为普遍的方针，化合物可以以约0.01到50w/w%，更典型地从约0.1到10w/w。/。的量存在于可药用运载体中。药物组合物可被一天1次到4次地应用至受影响的区域。在本发明的其他实施方案中，化合物可与其他化合物、药剂或敷料共同施用，以进一步增强其活性，或最小化可能的副作用。在本申请中使用23时，共同施用是指使用促进预期结果的给药方案将式I的化合物与第二药物一起施用，所述第二药物典型地具有不同的作用机制。这可涉及同时给药、在单日内不同时间给药，或甚至在不同日给药。化合物可被单独地施用，或可以被组合为单一配制物。为了减少瘢痕，可将药剂、化合物或敷料与本发明的化合物共同施用，所述药剂、化合物或敷料包括TGF&、TGF&抗体、TGF/2抗体、曲安奈德(triamcinoloneacetonide)(9-氟-11,16,17-三羟基-17画(2-羟乙酰基)-10,13-二甲基-6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17-十二氢环戊[a]菲-3-酮)、类固醇、皮质类固醇、抗生素、局部抗生素以及硅酮压片(siliconesheeting)。此外，促进伤口痊愈的药剂、化合物或敷药可被共同施用至创伤上，其包括5-氟尿嘧啶、雌激素、nACh(烟碱乙酰胆碱)受体激动剂、FGF(成纤维细胞生长因子)、EGF(表皮生长因子)、IGF(胰岛素样生长因子)以及PDGF(血小板衍生的生长因子)。另外，以下的治疗性药剂可与本发明的化合物共同施用，以治疗TGF/3-介导的病症。合适的治疗药剂的例子包括但不限于标准非类固醇抗炎剂(下文称作NSAID，s)(例如吡罗昔康(piroxicam)、双氯芬酸(diclofenac))，丙酸(例如萘普生(naproxen)、氟比洛芬(flubiprofen)、非诺洛芬(fenoprofen)、酮洛芬(ketoprofen)以及布洛芬(ibuprofen))、芬那酯(fenamate)(例如甲芬另I3酸(mefenamicacid)、B引哚美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、阿扎丙宗(apazone))、吡唑酮(例如丁二苯吡唑二酮)、水扬酸盐类(例如阿司匹林)、COX-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)和艾托考昔(etoricoxib))、镇痛剂和关节内疗法(例如皮质类固醇)和透明质酸(例如海尔根(hyalgan)和欣维可(synvisc))、抗癌剂(例如内皮抑制素(endostatin)和制管张素(angiostatin))、细胞毒类药(例如阿霉素(adriamycin)、道诺霉素(daunomycin)、川页钼(cis-platinum)、依托泊苷(etoposide)、泰素(taxol)、泰索帝(taxotere))、生物碱(例如长春新碱(vincristine))和抗代谢物(例如甲氨喋吟(methotrexate))、心血管药剂(例如钙通道阻滞剂)、降脂剂(例如抑制素(statin))、非诺贝特(fibrate)、/5-阻断剂、ACE抑制剂、血管紧张素-2受体拮抗剂和血小板聚集抑制剂、CNS药剂(例如作为抗抑郁药(例如舍曲林(sertmline))、抗帕金森症药(例如塞利吉林(deprenyl)、左多巴(L-dopa)、力必平(Requip)、乐伯克(Mirapex))、MAOB抑制剂(例如司来吉兰(selegine)和雷沙吉兰(rasagiline))、comP抑制齐U(例如答是美(Tasmar))、A-2抑制剂、多巴胺重摄取抑制剂、NMDA拮抗剂、尼古丁激动剂、多巴胺激动剂和神经元一氧化氮合成酶抑制剂)、抗阿尔茨海默症药物(例如多奈哌齐(donepezil)、他克林(tacrine)、COX-2抑制剂、丙戊茶碱或麦翠福纳(metryfonate))、骨质疏松药(例如雷洛西芬(roloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、拉索昔芬(lasofoxifene)或福善美(fosomax))，和免疫抑制剂(例如FK-506和雷怕霉素(rapamycin))。尽管本发明已联系其特定的实施方案进行了描述，但是应当理解技术人员能够进行进一步的修饰，并且该申请旨在涵盖下述任何变更、用途或适应，所述变更、用途或适应一般遵循本发明的原理，并且包括来自于本领域已知或惯例实践的对本公开的偏离。展示以下的实施例和生物学数据从而进一歩阐述本发明。该公开不应被理解为以任何方式限制本发明。实施例1:2-a"6-甲基吡啶-2-基VlH-吡唑-5-基〗噻吩并「3,2-cl吡啶。歩骤i.噻吩并[3，2-c]吡啶。将噻吩并[3,2-c]吡啶(9.20g;深棕橙色固体；见Wikeletal.(1993)J.Het.Chem.,30:289-290)溶于012(:12中并进行柱色谱(BiotageHorizon体系，120gIscoRediSep柱，用己烷平衡，用45%EtOAc("乙酸乙酯")/己垸等度洗脱)。收集的级分是淡黄色的油，其在真空中浓縮获得8.48g固体。或者也如下纯化噻吩并[3,2-c]吡啶将噻吩并[3,2-c]吡啶(84.6g)溶于约180mL二氯甲烷中。将溶液分为三份大致均一的部分。将各部分应用于快速硅胶筒(flashsilicacartridge)(AnalogixSuperFlashSF65-400)并用等度方法洗脱(己烷中45%或50%乙酸乙酯)。浓縮想要的级分，提供作为浅实施例黄色固体的噻吩射3,2-C]吡啶。三个组合的色谱法提供了总计75g标题化合物；^丽R(400MHz,CDC13)S9.12(d,1H,/=1.0Hz),8.44(d,1H，/=5.7Hz)，7.79(dt,1H,/=5.7，1.0Hz),7.47(m,1H),7.43(m,1H);MS(APCI+)m/z136(Mtf)。步骤ii.l-(噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)乙酮。将噻吩并[3,2-c]吡啶(5.0g)在75mLTHF(四氢呋喃)中的溶液在CH3CN/干冰浴中冷却至-45。C。逐滴添加正丁基锂(己烷中1.6M)(35.0ml)，将内部温度维持在-40"或低于-40°C。该添加耗时约45分钟。反应在-45"C下搅拌1小时。添加5mLTHF中的N-甲基-N-甲氧基乙酰胺，并且反应因此被加热至-3(TC。将反应在-45匸搅拌1.5小时。用饱和的NH4C1淬灭反应。水层具有约8的pH。将水层三次萃取进EtOAc中。用盐水洗涤组合的有机提取物，并在MgS04上干燥。将材料过滤，在旋转蒸发仪上浓縮并进行柱色谱(BiotageHorizon体系，120gAnalogix柱，用己烷平衡，用50%EtOAc/己烷洗脱)。在旋转蒸发仪上浓縮最纯净的级分，然后与Et20—起研磨以去除一些颜色，并通过过滤收集淡橙色固体(2.667g)。步骤iii.(E)-3-(二甲基氨基)-l-(噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙-2-烯-l-酮。向20mLDMF中1-(噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)乙酮(3.17g)的溶液中添加N，N-二甲基甲酰胺-二甲基縮醛(DMF-DMA)(9.5ml)。将反应加热至70°C保持过夜。然后将反应冷却至室温。在旋转蒸发仪上去除DMF，获得深棕橙色固体。用EtOAc和水稀释残余物。大量黄色固体是明显的。通过过滤收集该固体(3.54g)。将该固体在5(TC真空烘箱中干燥。步骤iv.2-(1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基)噻吩并[3,2-c]吡啶。将(E)-3-(二甲基氨基)-l-(噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-酮(3.69g)和1-(6-甲基吡啶-2-基)肼(3.3g)(其可如下文实施例7歩骤U所述被合成)溶于40mL乙酸中。将反应加热至8(TC保持4.5小时。将反应冷却至室温并在旋转蒸发仪上去除溶剂。将深橙红色残余物溶于EtOAc中并添加饱和的NaHC03直至水层pH约为7-8(约250mL)。将水层数次萃取进EtOAc中。用盐水洗涤合并的有机提取物并在MgS04上干燥。将材料过滤、浓缩并进行柱色谱，80gIscoRediSep柱，0-50%，保持在50%，50-75%，保持在75。/。EtOAc/己烷)。将含有想要的材料的级分合并并浓縮。将得到的材料溶于热MeOH中，并且通过冷却至室温形成沉淀。室温下一小时后，将烧瓶在4。C储存3小时。通过过滤收集固体，用己烷冲洗得到2.79g。将材料溶于沸腾的乙腈中并使其冷却至室温。一旦沉淀开始明显，通过过滤收集沉淀。该沉淀是不想要的位置异构体(2-(1-(6-甲基吡啶-2-基)-111-吡唑-3-基)噻吩并[3,2-c]吡啶)。将该过程重复四次，从而用想要的位置异构体(2-(1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基)噻吩并[3,2-c]吡啶)富集该乙腈滤液。该乙腈滤液冷却后含有白色沉淀，其为想要的产物。获得l.llg总产量的想要的产物(2-(l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基)噻吩并[3,2-c]吡啶)。实施例2:2-「3-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基VlH-吡唑-5-基l噻吩并「3,2-cl吡步骤i.噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基硼酸。将含有噻吩并[3,2-c]吡啶(5.0g,37mmol,1当量)的带有内部温度计的三颈烧瓶抽成真空，然后用氮大气填充。添加THF(60mL)并将溶液冷却至-44。C(CH3CN/干冰)。在10分钟期间添加正-丁基锂(1.6M/己垸，25mL,41mmol,1.1当量)，同时维持内部温度处于或低于-33。C。将反应在-33至ij-45。C搅拌60分钟。添加硼酸三异丙基酯(10.2mL,44mmo1,1.2当量)并去除冷却浴。使反应进行105分钟。然后添加3.0mL磷酸(85%水，3.0mL,44mmol,1.2当量)。形成黄色固体，将其用水和Et20(各约150mL)稀释。通过过滤收集黄色固体并通过抽吸过夜干燥(5.05g)。分析数据&NMR(400MHz,M五Zffi4M7丄-d4)Sppm7.95(1H,s),8.09(1H,d,5.9Hz)，8.34(1H,d,/=6.1Hz),9.09(1H,s)。MS(APCI,M+l)180.1。针对C7H6BNS02H3P04的微量分析经计算的C,30.35;H,3.27;N,5.06;P,11.18。观察到27的C,41.12;H，3.19;N，6.53;P,0.68%。步骤ii.3-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-醇。将乙酰乙酸乙酯(IOmL,78mmol)和(6-甲基-卩比啶-2-基)-肼(10.1g,82mmol)在100mL醋酸中组合。将反应加热至8(TC保持4小时15分钟。将反应冷却至室温。在旋转蒸发仪中去除溶剂以提供深色残余物，将其溶于EtOAc中。用饱和的NaHC03将溶液洗涤两次，然后用水洗涤一次，然后用盐水洗涤一次。双相混合物中赤褐色固体开始明显。过滤该双相混合物，收集固体。将固体用Et20洗涤，提供第一固体(6.02g)。使用分液漏斗分离滤液层。在MgS04上干燥有机层。将材料过滤并通过旋转蒸发仪浓縮。将得到的棕色固体与Et20—起研磨，并进行过滤以提供第二固体(1.98g)和第一滤液。固体从第一滤液中沉淀出来，通过将该滤液倾倒在另一滤纸上收集该沉淀，提供了1.69g的第三固体。将第一滤液和1.98g(第二固体)浓縮至干燥。将得到的固体溶于热EtOAc中并添加己烷，直到混浊持续存在。允许溶液放置过夜。通过过滤分离了非常深色的固体，并进行柱色谱(BiotageHorizon体系，35gAnalogix柱，30%EtOAc/己烷)。分离黄色固体，将其溶于热EtOAc中并添加己垸直至混浊持续存在。允许溶液放置过夜。将母液倒出，并将固体在5(TC的真空烘箱中干燥若干小时，提供第四固体。将第一固体(6.02g)、第三固体(1.69g)和第四固体(4.03g)合并，提够给你了11.74g标题化合物。步骤iii.3-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯。将3-甲基小(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-醇(CH2C12(100mL)中10.0g)和Et3N(三乙胺)(8.1mL)的混合物在-70。C冷却。在10分钟期间添加三氟甲磺酸酐(9.8mL)，同时维持温度低于-5(TC。反应悬浮液被加热至室温并成为溶液。浓縮溶液以去除大部分CH2C12。将溶液直接上样在AnalogixSuperFlashSF65-400上；使用Biotage自动分级收集器；EtOAc/己垸(20/80)。分离含无色液体的级分(9.46g)。步骤iv:2-[3-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3，2-c]吡啶。在装有回流冷凝器的100mL三颈圆底烧瓶中添加3-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯(1.16g)、噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基硼酸(1.0g)、磷酸三钾(2.3g)和30mL二噁烷。将烧瓶在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。向其中添加PdCl2(dppf)(Strem，二氯[l,l'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲垸加成物，0.60g)。将烧瓶再次在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。将反应加热至100。C并允许其过夜运行。将反应冷却至室温并滤过硅藻土(Celite)垫子，用EtOAc(600mL)洗脱。在旋转蒸发仪上将EtOAc滤液浓縮至干燥。用.CH2Cl2稀释该残余物并过滤掉米色固体。通过柱色谱(BiotageHorizon体系，34gAnalogix柱，0-100%EtOAc/己烷，保持在100%EtOAc，然后是10%MeOH/EtOAc)纯化CH2C12滤液。含有想要的产物的级分被合并并在旋转蒸发仪上浓縮得到深色油。在Phenomenex,GeminiC-18柱(150x19mm,5mM;流动相A:水(+0.1%NH4OH),B:CH3CN(+0.1%NH4OH);梯度IO分钟期间90-10%A，在90%A保持1.5分钟；流速28mL/分钟；注射体积2mL;检测DAD210-350nm,MSAPCI+,MSAPCr)上对深色油(约800mg)进行制备柱色谱。在旋转蒸发仪上干燥想要的级分。将固体溶于热EtOH中，然后添加2-5mL庚垸。静置后过滤该材料。将该滤液浓縮至干燥。添加二乙醚并将该溶液在烧结玻璃漏斗上过滤。使用额外的二乙醚洗涤该材料，直到〈0mg的棕色固体残存在烧结玻璃漏斗上。将滤液浓縮至干燥，得到灰白色固(off-white)体。将该灰白色固体溶于热EtOH(约1-2mL)中，并用庚烷稀释直到混浊持续存在，并允许其静置。然后针状物(淡黄色)开始从该溶液中沉淀。约3小时后，将母液倒入另一烧瓶中。将该针状物在4CTC真空烘箱中干燥超过48小时，以提供65mg的白色固体。mpl31-132°C。实施例3:2-「3-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基1噻吩并「3，2-cl吡步骤i:5-乙基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-醇。将6-甲基-口比徒-2-基)-肼(lO.Og)和乙基丙酰基醋酸盐(12mL)在冰醋酸(100mL)中的搅拌混合物加热至8(TC保持五小时。将反应混合物在减压(reducedpressure)下浓縮，并用饱和水性碳酸氢钠(200mL)处理该蒸发物。用乙酸乙酯(200mL)萃取该混合物。有机相用新鲜部份的饱和水性碳酸氢钠(200mL)、水(200mL)和盐水溶液(200mL)洗涤。随后将有机相在无水硫酸钠上干燥并在减压下浓縮。通过快速硅胶柱色谱纯化蒸发物。用梯度(100%己烷到己烷中60%乙酸乙酯)通过硅胶筒(Analogk,400g)洗脱提供了油。将该油在氯仿中重建并在减压下浓縮溶液，提供作为油的标题化合物(7.2g);力NMR(400MHz,CDC13)S13.07(broads,1H)，7.70(m,1H),7.64(d,1H,_/=8.2Hz),6.92(d,1H,尸7.4Hz)，5.42(s,1H),2.59(四重峰，2H,J^7.6Hz),2.51(s,3H):1.24(t,3H,J=7.6Hz);13CNMR(100MHz,CDC13)S13.5,22.7,23.8,86.8,108.8,119.2,140.2,154.3,155.0,157.2，157.4;MS(APCI+)204(MH"。步骤ii:三氟-甲磺酸5-乙基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯。于-78t:下氮大气中，在5分钟期间向5-乙基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-醇(7.1g)和三乙胺(5.4mL)在二氯甲垸(75mL)中的搅拌混合物中添加三氟甲磺酸酐(6.5mL)。去除冷浴，允许反应混合物温热至室温并搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓縮，并通过快速硅胶柱色谱来纯化该浓缩物。用梯度(在2400mL期间从100%已垸到已烷中的35%乙酸乙酯)通过硅胶筒(AnalogixSuperFlashSF65-400)洗脱在氯仿追踪(chloroformchase)后提供了作为油的标题化合物(10.38g);力NMR(400MHz,CDC13)S7.69(m,1H),7.59(dd,1H,J-8.2，0.6Hz),7.07(dd,1H,J=7.6，0.4Hz),6.10(s,IH)，2.68(四重峰，2H，J=7.6Hz),2.57(s,3H),1.28(t,3H,>7.6Hz);19FNMR(376MHz,CDC13)S-73.9(s);MS(APCI+)336(MH+),204(MH+-S02CF3)。步骤iii:2-[3-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶。向100ml装有回流冷凝器的三颈圆底烧瓶中添加3-乙基小(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯(1.21g)、噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基硼酸(1.0g)、磷酸三钾(2.3g)和30mL二噁烷。将烧瓶在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。向其中添加PdCl2(dppf)(Strem，二氯[l,l'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲垸加成物，0.60g)。将烧瓶再次在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。将反应加热至IO(TC并允许其继续过夜。将反应冷却至室温。然后将反应滤过硅藻土(Celite)，用EtOAc充分冲洗。在旋转蒸发仪上浓縮滤液并用CH2Cl2稀释深色的油性材料。从CHbCl2过滤了灰白色的固体。将滤液上样在柱(BiotageHorizon体系，34gAnalogix柱，0-100%EtOAc/庚烷，然后保持在100%EtOAc)上。收集想要的级分，得到深色油(约900mg)。将该级分在Phenomenex,GeminiC-18柱上进行色谱分离，如上文实施例2中所述。将想要的级分合并并在旋转蒸发仪中干燥，提供固体样品。将该固体样品溶于温热的EtOH中。将该溶液在旋转型蒸发仪上浓縮至干燥，获得深色残余物。将该残余物在45X:真空烘箱中干燥2小时。得到的材料部分是深色油，部分是固体。添加二乙醚并过滤该材料，以提供深棕色固体和浅橙-黄色滤液。将滤液浓縮至干燥获得茶色固体(231mg)。向茶色固体中添加二乙醚。将该材料滤过有沟槽的滤纸，在滤纸上留下棕色残余物。将滤液在旋转蒸发仪上浓縮至干燥。将得到的固体再次溶于热EtOH(1-2mL)中，并用庚烷稀释直到混浊持续存在。静置2小时后，没有明显的沉淀。然后将该液体浓縮至干燥。在旋转蒸发仪上时，当该液体减少至大约一半初始体积时，棕色固体是明显的。将液体从旋转蒸发仪取下，并且该溶液开始显示白色混浊。使用滤纸将该液体过滤在另一烧瓶中以去除棕色固体。白色固体开始在滤液中沉淀。约15分钟后，未观察到更多沉淀，并将该材料过滤获得固体。将该固体在4(TC真空烘箱中干燥约48小时，以提供71mg，mp89-90。C。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula>实施例4:2-「4-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基VlH-吡唑-5-基1噻吩并「3,2-cl吡啶。步骤i:4-乙基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-醇。在室温下搅拌KOMe(14.0g)和丁酸乙酯(19.8mL)在DMF(15mL)中的悬浮液。在15分钟期间添加甲酸乙酯(8.1mL)，这造成大量发泡。将该反应再搅拌一小时，并且反应成为没有泡沬层的非常易于搅拌的混合物。在20分钟期间添加1-(6-甲基吡啶-2-基)胼(12.3g)、MeOH(35mL)和HOAc(5.7mL)的溶液。该反应是放热的，并在添加起始之后到达3(TC的温度。使用冰-水浴在溶液的剩余添加期间保持反应低于2(TC。将反应物回流加热3小时，然后在室温下搅拌约48小时。用冰-水浴将该反应冷却至10°C。用HOAc(10mL)将pH调整至约7，以获得粘稠的、不可搅拌的团块。用H20(100mL)将反应稀释，得到深红色溶液。用EtOAc(200mL)萃取该溶液。将该有机相用H20(2xlOOmL)洗涤、用(MgS04)和SiO2(30mL)干燥，并通过SiO2(30mL)过滤。将该材料浓縮，提供10.50g的深棕色油。使用AnalogixSuperFlashSF65-400和Biotage自动级分收集器对该油进行色谱分离；EtOAc/已烷(40/60)。将包含想要的产物的级分合并，提供6.40g黄-橙色液体。歩骤ii:4-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯。将4-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-醇(6.40g)在CH2C12(65mL)和Et3N(4.8mL)中的溶液于-70。C下冷却。在10分钟期间添加三氟甲磺酸酐(Tf20)(5.83mL)，同时维持温度低于-5(TC。该反应是放热的。将该反应低于-50°。下额外搅拌30分钟，然后加温至室温。随后将该反应在-5(TC或低于-50。C冷却，并添加额外部份的Tf20(1.1mL;20%)和Et3N(1.0mL;20%)。孵育1小时后，接着该反应物浓縮以去除大部分CH2Cl2。将该反应直接上样于AnalogixSuperFlashSF40-150上；使用Horizon自动级分收集器；EtOAc/庚垸(20/80)。用EtOAc/庚烷(30/70)洗涤柱。收集包含想要的产物的级分，提供6.98g淡黄色液体。步骤iii:2-[4-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶。在装有回流冷凝器的100mL三颈圆底烧瓶中添加4-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯(1.2g)、噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基硼酸(1.2g)、磷酸三钾(2.3g)和30mL二噁烷。将烧瓶在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。向其中添加PdCl2(dppf)(Strem，二氯[l,r-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加成物，0.60g)。将烧瓶再次在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。将反应加热至IO(TC过夜。然后添加0.295gPdCl2(dppf)(Strem，二氯[l，l'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加成物)并将反应持续4小时15分钟。将反应冷却至室温。将反应内容物滤过硅藻土并用EtOAc充分冲洗直到想要的产物被洗脱。在旋转蒸发仪上浓縮滤液，形成深色残余物。在CH2Cl2中吸收该深色残余物并过滤掉固体。通过在旋转蒸发仪上浓縮縮减得到的滤液，之后将材料上样在柱上(BiotageHorizon体系，700mL期间从0-100%EtOAc，然后保持在100%EtOAc，500mL)。明显具有最多产物的管在烧瓶的侧面具有白色固体。通过旋转蒸发仪浓縮含有想要的产物的管，得到深色油。与扱20—起研磨该深色油并过滤掉固体。从滤液中分离额外的固体沉淀物并与来自初始过滤的固体合并。将合并的固体溶于热EtOH(约2mL)中。添加庚烷直到沉淀开始形成。然后形成了深色固体。约10分钟后，似乎固体完成了沉淀。将混合物经过滤纸过滤进另一烧瓶中。用更多庚垸稀释滤液，直到混浊持续存在。允许滤液在室温静置过夜。白色针状物在烧瓶中形成，深色残余物留在烧瓶底部。将烧瓶内含物在旋转蒸发仪上浓縮至干燥，并溶于1-2mL热EtOH中，经过滤纸过滤并用庚烷稀释直到混浊持续存在。允许烧瓶静置2小时。然后将混合物置于旋转蒸发仪上，减少材料的体积。在旋转蒸发仪上时，当存在初始体积的大约一半时，棕色固体开始明显。将烧瓶从旋转蒸发仪上取下并使用滤纸过滤进另一烧瓶中，以去除棕色固体。白色固体开始在滤液中沉淀。通过过滤收集该白色固体并在40°C真空烘箱中干燥超过48小时，获得85mg标题化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula>实施例5:2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-2，4,5，6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)噻吩并[3，2-c]吡啶。步骤i:噻吩并[3，2-c]吡啶-2-硼酸。在-4(TC下，在数分钟期间向由噻吩并[3,2-c]吡啶(2.0g)在无水四氢呋喃(25mL)中组成的搅拌混合物中添加由1.6M正-丁基锂在己垸(10mL)中组成的溶液(首先逐滴，随后通过缓慢的、稳定的流注添加)。将混合物搅拌5分钟随后添加硼酸三异丙基酯(4.2mL)。去除冷浴并允许混合物搅拌1小时。向搅拌混合物中添加水(2mL)，这导致淡黄色的固体立即沉淀。通过真空过滤收集沉淀，并用水轻轻冲洗(得到混浊黄色滤液)固体，随后用二乙醚轻轻冲洗(得到深橙色滤液)。将滤液的水性部份从该有机溶剂中分离，然后用1，4-二噁烷(100mL)稀释，并将溶液在减压下浓縮。向浓縮物中添加1,4-二噁垸(100mL)禾口随后在减压下浓縮被重复两次，以在最后蒸发时提供黄色粉末(0.8g)。步骤ii:2-[(6-甲基-吡啶-2-萄-亚肼基]-环戊烷羧酸乙酯。在氮大气下将乙基2-氧代环戊烷羧酸酯(6.34g,5.88mL)和(6-甲基-吡啶-2-基)-肼(5g)在乙醇(IOOmL)中的溶液加热至8(TC保持约19小时。将反应混合物冷却至室温并在真空中去除溶剂，提供粗材料(7.72g)，所述粗材料被直接用于下一步反应。步骤iii:2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2,4,5,6-四氢-环戊吡唑-3-醇。在减压下将粗2-[(6-甲基-吡啶-2-基)-亚肼基]-环戊烷羧酸乙酯(6.6g)和甲醇钠(2.73g)在甲醇(250mL)中的溶液浓縮至接近干燥，提供棕色糊剂。然后将该糊剂加热至16CTC2小时，关注过量的气泡。2小时后将反应冷却至室温并添加水(IOOmL)。用1NHC1将pH调节至7，然后添加乙酸乙酯(200mL)，并搅拌得到的混合物直到沉淀溶解发生。将各层分离并用另一部分乙酸乙酯(IOOmL)洗涤水性层。用水(200mL)和盐水(200mL)洗涤合并的有机层，在MgS04上干燥、过滤，并在真空中浓縮，以提供不经任何进一步纯化而使用的产物(3.6g)。备选地可通过用21.0g2-[(6-甲基-吡啶-2-基)-亚肼基]-环戊烷羧酸乙酯开始在125'C的更低温度下进行相同的反应，提供17.3g粗产物。歩骤iv:三氟-甲磺酸2-(6-甲基-卩比啶-2-基)-2,4,5,6-四氢-环戊吡唑-3-基34酯。向经烘箱干燥的圆底烧瓶中添加二氯甲烷(350mL)中的2-(6-甲基-口比啶-2-基)-2，4,5,6-四氢-环戊吡唑-3-醇(17.3g)和三乙胺(9.76g,13.44mL)，并将反应混合物冷却至-78。C。在10分钟期间通过压力平衡漏斗向其中添加三氟甲垸磺酸酐(16.23mL)。将得到的混合物在-78。C下搅拌1小时，然后使其温热至室温，并额外搅拌1小时。在真空中去除溶剂，提供棕色沉淀。通过快速硅胶色谱(60%己烷/40%乙酸乙酯)纯化棕色沉淀，提供灰白色固体(8.848g)，之后提供稍微较不纯净材料的另一批材料(12.2g)。步骤iv:2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-2，4，5,6-四氢环戊[c]吡唑-3-基)噻吩并[3,2-c]吡啶。用噻吩并[3,2-c]吡啶-2-硼酸(0.7g)填充装有回流冷凝器和进气门的经烘箱干燥的三颈圆底烧瓶。将烧瓶抽空并用氮气吹泡三次。将烧瓶的内容物在氮大气下保持4天。向反应烧瓶中添加三氟-甲磺酸2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2,4,5,6-四氢-环戊吡唑-3-基酯(0.7g)、磷酸三钾(2.5g)和1,4-二噁烷(30mL)。将烧瓶抽空并再用氮气吹泡三次。添加二氯[l，l'-双(二苯基斷二茂铁]钯(II)二氯甲垸加成物(0.65g)和U'-双(二苯基膦)二茂铁(0.43g)，对混合物排气并用氮再吹泡三次。对搅拌混合物回流过夜。用乙酸乙酯(250mL)稀释反应混合物，用活性炭处理溶液并滤过硅藻土。将得到的滤液在减压下浓缩，并在Biotage体系上120gRediSepflash硅胶筒上纯化浓縮物，在1800mL期间从100%己烷到100%乙酸乙酯，然后是100%乙酸乙酯直到想要的材料被洗脱。想要的材料是深色残余物。深色液体与粘附在烧瓶内侧的固体分离。通过移液管分离用纯乙醇取出该液体，并将深色溶液蒸发过夜，得到深色粘稠残余物。将材料溶于乙腈(15mL)中，并通过制备HPLC纯化(WatersprepHPLC体系；固定相WatersDeltPakC185mm，100Angstom，300x50mmI.D.，P/N011801,WAT011801,No.330C09125W;移动相含0.1%甲酸的、在30分钟期间从80:20到40:60的水-乙腈)。将组合的级分合并并在减压下浓縮，得到澄清的无色水性溶液。用饱和的水性碳酸钾处理该溶液，得到乳状悬浮液。用一份二乙醚和两份乙酸乙酯萃取，在无水碳酸钾上干燥组合的萃取物，并在减压下浓縮，得到随时间开始固化的薄膜。将该薄膜溶于醇乙醇中，并在减压下浓縮，提供随时间固化的浅黄色油。在室温下对材料进行高度真空处理，提供呈浅黄色固体的标题化合物(21mg);熔点固体形式从121-126。C开始变性，在146-148。C下烙解。实施例6:2-「3,4-二甲基-l"6-甲基吡啶-2-基)-m-吡唑-5-基l噻吩并「3,2-cl步骤i.3,4-二甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-醇。向250mL圆底烧瓶中添加2-甲基乙酰乙酸乙酯(5.0g,35mmol)、l-(6-甲基吡啶-2-基)肼(4.48g,36mmol)和12mL乙酸。将混合物在8CTC加热9小时。向混合物中添加水和EtOAc。分离各层。用EtOAc萃取水性层。将合并的有机层用水和盐水洗涤、干燥(MgS04)、过滤并在真空中浓縮(6.68g)。歩骤ii.3,4-二甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯。向含有3，4-二甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-醇(6.68g,33mmol)的500mL圆底烧瓶中添加Et3N(5.5mL,39mmol)和35mLCH2C12.。将溶液在干冰丙酮浴中冷却。缓慢添加Tf20(6.1mL,36mmol)。将混合物在-78。C搅拌并允许其温热至室温。然后将混合物在真空中浓縮。使用Bu)tageHorizon体系(0到25。/。EtOAc/己烷)纯化粗产物，得到无色油(8.28g)。步骤2-[3,4-二甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶。向装有回流冷凝器的100mL三颈圆底烧瓶中添加3,4-二甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-m-吡唑-5-基三氟甲磺酸酯(0.90g.2.7mmol,1.2胆量)、噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基硼酸磷酸三氢(0.72g,2.6mmol,1当量)、磷酸三钾和20mL二噁烷。将烧瓶在真空下排空，并用氮气对悬浮液吹泡。向其中添加PdCl2(dppf)(Strem，二氯[l,l'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(n)二氯甲垸加成物，0.45g，0.65mmol，0.3当量)。将烧瓶再次在真空下抽空，并用氮气对悬浮液吹泡。将反应加热至IO(TC保持16小时，然后冷却至至温o将反应滤过硅藻土，用EtOAc充分冲洗直到所有想要的材料被洗脱(约400mL)。将EtOAc滤液浓縮为深色残余物。将深色残余物在吡啶。CH2Cl2中吸收并将固体滤除。对CH2Cl2进行柱色谱(BiotageHorizon体系，在800mL期间从0-100。/o庚烷/EtOAc，然后保持在100%EtOAc,500mL)。将级分浓縮为3部分含有浅色油(420mg)的部分在静置过夜后固化。将该材料溶于热EtOH中并添加庚烷。静置过夜后，未显示固体沉淀。将材料浓縮至干燥。添加约15mLEt20并将材料滤过滤纸，留下小量的茶色残余物。将该残余物浓縮至干燥，并添加约1mLEt20。然后添加约15mL庚垸直至混合物保持混浊。在4。C静置约2小时后没有明显沉淀物。然后将材料浓縮至干燥，获得棕色油。添加庚烷并形成小的圆形固体，其中一些是灰白色的，其它是棕色的。倒出庚烷并将固体在5(TC真空烘箱中干燥约48小时，提供229mg茶色固体，108-109。C。实施例7:2-「4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基V2H-吡唑-3-基l-噻吩并「3,2-cl吡步骤i:噻吩并[3,2-c]吡啶2-硼酸磷酸三氢。于-4(TC下在五分钟期间向噻吩并[3,2-c]吡啶(2.0g)在无水四氢呋喃(25mL)的搅拌混合物中逐滴添加1.6M正-丁基锂在己烷(10mL)中的溶液。将反应混合物搅拌10分钟，随后添加硼酸三异丙基酯(4.2mL)。去除冷浴，允许将混合物搅拌3小时。向搅拌混合物中添加磷酸(85%水性溶液，1.2mL)。随后添加水(10mL)，这导致淡黄色的固体立即沉淀。添加更多水(100mL)并添加二乙醚(100mL)。将悬浮液真空国过滤。将固体吸干，提供呈淡黄色粉末的标题化合物(2.73g);针对C7H6BN02S*H3P04的微量分析％C(计算/观察)30.35/31.41，％H3.27/3.24，％N5.06/5.04，％S11.58/11.93，％P11.18/8.58;1H-NMR(400MHz,DMSO-A,CDC13,CD3OD,D20混合物)<59.01(d,1H,7=1.0Hz)，8.26(d,1H，/=6.0Hz)，7.94(s,1H),7.91-7.83(m,1H);MS(APCI+)m/z180(MH+)。歩骤ii:l-(6-甲基吡啶-2-基)肼。将2-溴-6-甲基-吡啶(602.10g)和肼水合物(1570ml)的混合物在12(TC回流6小时，然后在室温下搅拌约48小时。用二乙醚(3X1.5L)萃取分离的固体，并将合并的醚萃取物用盐水洗涤，在Na2S04上干燥，过滤并浓縮(430g)。将残基在醚(200ml)与己烷(1.5L)的混合物中搅拌，过滤并用己垸中5%的二乙醚洗涤，得到淡黄色固体(粘稠的)。将固体在106-113'C/2mm下真空蒸馏，其立即固化。然后将固体溶于2L二乙醚中并通过添加2L己垸来沉淀，过滤并真空干燥，得到呈白色固体的1-(6-甲基吡啶-2-基)肼(240g)。备选地，也可如下合成l-(6-甲基-吡啶-2-基)-肼用机械搅拌器、氮进气孔和回流冷凝器装备有外罩的反应烧瓶，并将外罩冷却至l(TC。将反应器程序设定为如果在任何时间点内部温度超过8(TC时自动冷却至0°C。将反应器用稳定的氮气流吹泡。向反应器中装入25g(0.225mol)2-氟-6-甲基吡啶，随后装入100ml异丙醇，并将外罩温度调节至73。C(对应于70。C的内部温度)。向反应器中装入44g(0.90mol)65%的水性肼，并将混合物搅拌过夜，期间外罩设定在7(TC。用125ml甲基叔丁基醚(MTBE)和13ml饱和盐水稀释反应器内容物得到两层，将其分离。用2x60mlMTBE萃取水性层。将组合的有机层合并并在硫酸钠(无水)上干燥。通过过滤去除干燥剂，并通过旋转蒸发仪浓縮有机滤液。得到的油在静置后固化，得到呈白色固体的想要的产物(21.1g)。步骤iii:4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-醇。在氮大气下室温下经烘箱干燥的500mL三颈反应管中，向甲醇钠(13.6g)在无水四氢呋喃(50mL)中的搅拌混合物中添加无水甲酸甲酯(12.6mL)。该混合物起泡，并用缓慢的、稳定的流注通过注射器向悬浮液中添加甲酸乙酯(28.7mL)，同时用手旋转反应管以便于悬浮液更有效的混合。随后将混合物在室温下搅拌5小时。添加冰醋酸C14mL》同时用手将反应管剧烈旋转数分钟，以便于更有效的混合。随后将悬浮液搅拌过夜，并滤过硅藻土。将硅藻土滤塞用二乙醚洗涤两次(2x200mL)并抽干。滤液产生稀疏的白色固体沉淀，通过进一步真空滤过介质烧结的布氏漏斗(mediumfrittedBiichnerftmnel)去除所述沉淀。在减压(水浴温度=45°0下浓縮后来的滤液，提供了澄清的浅色油(约15g)。该油具有乙酸的特殊气味。将该油溶于纯乙醇(50mL)中。向该溶液中添加固体(6-甲基-吡啶-2-基)-肼(5.4g)。在氮大气下对38搅拌混合物进行四天的柔和回流。在减压下浓縮混合物并将得到的橙色油溶于二氯甲垸(50mL)中。将二氯甲垸溶液应用于Biotage仪器上的400-gAnalogix快速硅胶筒上。用梯度(在四倍体积或2400mL期间从100%庚烷到庚烷中70%乙酸乙酯)在该Biotage仪器上洗脱。将级分干燥获得固体(7.1g)。备选地，也可如下生产4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-醇在室温下，约0.5小时期间，向甲酸乙酯(117.5g)和丙酸乙酯(54.0g)在40ml四氢呋喃(THF)的溶液中逐滴添加叔丁醇钾(502mlTHF中1.0摩尔溶液)白色沉淀随着一些鼓泡开始形成。在又一7.5小时后过滤反应，将固体用二乙醚洗涤，然后在真空下于4(TC干燥16小时，得到呈灰色粉末的2-乙氧羰基-丙-l-醇钾(23.5g)。向该钾盐(17.6g)在450ml1-丙醇的溶液中添加(6-甲基-吡啶-2-基)-肼(11.7g)，然后添加乙酸(6.5ml)。搅拌10分钟后，在柔和回流下将混合物加热5小时。添加更多乙酸(5.5ml)并将回流再继续16小时。在真空下去除溶剂。用乙酸乙酯(350ml)稀释得到的残余物，并用饱和的碳酸氢钠溶液(200ml)小心洗涤溶液，直到剩余的乙酸被中和。分离各相并用乙酸乙酯(50ml)萃取水相。合并有机相，然后用水(IOOml)洗涤，之后用盐水(IOOml)洗涤并在硫酸镁上干燥。通过过滤去除干燥剂并在真空下去除溶剂，得到呈橙色固体的产物(16.26g)。步骤iv:三氟-甲磺酸4-甲基-2-(6-甲基-卩比啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯。在-78。C下氮大气下，在5分钟期间通过注射器用缓慢的、稳定的流注向4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-醇的二氯甲烷溶液(50mL二氯甲垸中13.39g)和额外的二氯甲垸(多50mL，总计100mL二氯甲烷)中三乙胺(llmL)的搅拌混合物中添加三氟甲磺酸酐(triflicanhydride)(13.3mL)。去除冷浴并允许混合物在1小时三十分钟期间逐歩温热至室温。将混合物在减压下浓縮，并通过快速硅胶色谱纯化浓縮物。在Biotage仪器上通过400-gAnalogk快速硅胶筒用梯度(在三倍柱体积或1800mL期间从100%庚烷到庚烷中30%乙酸乙酯，然后在两倍额外柱体积或1200mL期间从30%到45%乙酸乙酯)洗脱，提供呈澄清无色油的标题化合物(18.04g)。iH-NMR(400MHz,CDC13)57.68(m,1H)，7.59(d,7=8.0Hz,1H)，7.50(s,1H),7.07(d，J=7.4Hz,1H),2.56(s,3H),2.07(s,3H);19F-NMR(376MHz，CDC13)5-74.12(s,3F);13C-NMR(100MHz,CDC13)S157.9,151.1,141.3,139.5,139.0，122.0，118.6(四重峰，JC.F=321.0Hz),111.9,108.7，23.6,7.3;MS(APCI>/z322。步骤v:2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶。用噻吩并[3,2-c]吡啶-2-硼酸磷酸三氢(1.0g)、三氟-甲磺酸4-甲基-2-(6-甲基-卩比啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯(1.16g)、磷酸三钾(2.3g)、1，4-二噁烷(30mL)、二氯[l,r-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲垸加成物(0.60g)和双(二苯基膦)二茂铁(0.40g)填充装有回流冷凝器和进气门的经烘箱干燥的三颈圆底烧瓶，并在氮大气下对搅拌混合物进行18小时的回流。用乙酸乙酯(250mL)稀释反应混合物，将溶液用活性炭处理并滤过硅藻土。将滤液在减压下浓縮，并通过硅胶色谱纯化浓縮物。在Biotage体系上经过120gRediSep快速硅胶筒洗脱，在1800mL期间从100%庚烷到100%乙酸乙酯，然后是100%乙酸乙酯，直到想要的物质量(mass)被洗脱，提供油(1.2g);MS(APCI+)m/z307(MH+)。通过溶于乙腈(30mL)并分为两等分进一步纯化产物。过滤后将溶液接着通过制备HPLC纯化(WatersprepHPLC体系；固定相WatersDeltPakC185mm,100Angstom,300x50mmLD.，P/N011801,WAT011801,No.330C09125W;移动相含0.1%甲酸的、在30分钟期间从90:10到50:50的水-乙腈)。在减压下将合并的级分浓縮为水性溶液，去除乙腈。用饱和的水性碳酸钾处理澄清的水性溶液，得到混浊的白色悬浮液。允许该悬浮液在室温静置过夜。通过真空过滤收集形成的固体白色沉淀物，并在真空烘箱(77。C)中干燥过夜，提供呈白色固体(0.506g)的标题化合物，熔点157-158°C。实施例1-7的iHNMR和质谱分析数据报告于下文表1中表l<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>实施例8:2-r4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡哇-3-基l-噻吩并「3,2-cl吡啶。步骤i:2-(4,4,5,5-四甲基-[l,3，2]二氧硼戊环-2-基)-噻吩并[3,2-c]吡啶。在N2大气下将100mLTHF中噻吩并[3,2-c]吡啶(5.0g)的溶液冷却至-78°C(丙酮/干冰)。在二十分钟期间逐滴添加正-丁基锂(28ml，己烷中1.6M，瓶子刚打开)，同时将内部温度维持位于或低于-64。C。将混合物在-78。C下搅拌一小时，随后添加硼酸三异丙酯(瓶子刚打开，10.2ml)。去除冷浴，允许混合物在30分钟期间温热至室温。将混合物在室温下搅拌1小时。向反应混合物中添加频哪醇(pinacol)(5.9g)在二乙醚(20mL)中的混合物。二十分钟后，添加冰醋酸(2.2mL)，反应混合物中形成沉淀。将反应混合物滤过硅藻土，用氯仿冲洗直到UV-活性材料被洗脱(约2500mL)。用5%氢氧化钠溶液(总计约500mL)将滤液萃取两次。将水性碱性相在室温下静置过夜。在CH3CN/干冰浴中冷却水性层，并用10%水性烟酸中和，同时保持内部温度处于或低于5°C。将经中和的水性溶液在氯仿中萃取10次。在无水硫酸镁上干燥合并的萃取物，并在减压下浓縮获得固体。将该产物与用相似方式相同规模进行的其它三个反应的产物合并，提供合并的固体(23.52g)。将合并的固体溶于约1L沸腾的乙醇中。允许该溶液冷却至室温。室温下约4个小时后，将溶液于4'C储存过夜。茶色材料从溶液中沉淀。将液体通过滤纸倒出。将固体在真空烘箱(50。C)中干燥1小时，提供呈茶色固体的标题化合物(14.02g);力-NMR(400MHz，CDCl3含有一滴D20以完全溶解)S1.39(12H，s)，7.89(1H,d,/=5.3Hz),7.97(1H，s)，8.45(1H，d,/=4.5Hz),9.18(1H，s);MS(APCI+)m/z262.备选地，也可如下生产2-(4,4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧硼戊环-2-基)-噻吩并[3,2-c]吡啶在15-20分钟期间在氮气下向-7(TC的噻吩并[3,2-c]吡啶(21.6g)在400mL干燥四氢呋喃的溶液中添加正-丁基锂(99.9ml己烷中1.6摩尔的溶液)，保持温度低于-65。C。溶液开始混浊并呈深棕色。45分钟后添加硼酸三异丙酯(33.06g)，混合物成为均匀的。将混合物在-70到-75。C下搅拌2小时。允许混合物温热至-3(TC，然后在4分钟期间添加频哪醇在100mL二乙醚中的溶液。反应混合物成为橙色均匀溶液。允许温度42温热至5。C并在该温度下保持1小时。非常缓慢地将反应混合物用40mLl,4-二噁垸中的4M烟酸中和(pH7)，保持温度低于10°C。沉淀形成。将反应混合物搅拌1小时，然后通过过滤收集固体。将固体在真空下于40"C干燥16小时。用400mL水将干燥的固体(36g)搅拌1.5小时。过滤浆体并收集固体。将固体在空气流中干燥60分钟，得到想要的产物(34.5g)。&NMR(400MHz,氯仿-d)Sppm1.21(s,12H)7.66-7.70(m,1H)7.80(d,>0.78Hz,1H)8.28(d，《/=5.65Hz,1H)8.98(d，/=0.97Hz,1H)。步骤ii:2-[4-甲基-2-(6-甲基-卩比啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶。用2-(4,4,5,5-四甲基-[l,3,2]二氧硼戊环-2-基)-噻吩并[3，2-c]吡啶(11.56g)、三氟-甲磺酸5-乙基-2-(6-甲基-口比啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯(16.4g)、磷酸三钾(28g)和1,4-二噁垸(300mL)填充装有回流冷凝器和进气门的经烘箱干燥的500mL三颈圆底烧瓶。将反应管抽空并用氮气吹洗。将除气和氮气吹洗重复两次。向混合物中添加二氯[i,r-双(二苯基膦)二茂铁]钯(n)二氯甲垸加成物(7.3g)和l，l'-双(二苯基膦)二茂铁(5.0g)，并对混合物再进行三次除气和氮气吹洗，随后在30分钟期间逐步进行柔和回流。将混合物在氮气下回流搅拌2.5小时，随后添加氟化钾(Bg)和水(1.2mL)。将搅拌混合物在回流中继续15分钟，随后稍微冷却并滤过硅藻土。用乙酸乙酯(lL)洗涤过滤垫，并用活性炭处理滤液。将碳悬浮液滤过硅藻土。用额外的乙酸乙酯(300mL)洗涤该过滤垫，并在减压下浓縮滤液，得到粗的、红棕色油性残余物(约35g)。用若干毫升纯乙醇处理残余物，并在减压下浓縮。将残余物与快速硅胶(IOOg)和乙酸乙酯中5%甲醇溶液(200mL)混合。过滤混合物，并用200mL新鲜的5%甲醇在乙酸乙酯中的溶液洗涤两次。在减压下浓縮滤液，提供红棕色油性残余物(约25g)。将残余物溶于若干毫升乙醇中。随后通过静置形成沉淀物，并通过真空过滤收集。用庚烷洗涤固体，提供粘稠的、红橙色粉末(4.6g)。乙醇-庚烷滤液产生沉淀，通过真空过滤收集该沉淀得到米色固体(4.3g)。在蒸汽上将该米色固体溶于纯乙醇中。逐渐冷却澄清的溶液产生沉淀，通过真空过滤收集该沉淀。吸干得到固体(2.25g)。将固体在纯乙醇(15mL)中煮沸并从中沉淀，得到白色固体(1.62g)。将固体再次在乙醇中煮沸并从中沉淀，得到呈白色固体的标题化合物(1.20g)。H-丽R(400MHz,CDC13)59.12(s,1H),8.46(d,/=5.9Hz，1H),7.94(d，卢6.0Hz,1H),7.68-7.64(m,2H),7.48-7.43(m,2H)，7.04(d，/=7.6Hz,1H)，2.21(s,3H),2.19(s,3H);MS(APCI+)w/z307.实施例9:2-「4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基l-噻吩并「3,2-cl口比啶。步骤i:2-甲基-6-(4-甲基-口比唑-l-基)-吡啶。反应条件1向50mL无水乙腈中4-甲基-吡唑(1.0g)的溶液中添加碳酸铯(5.9g)，然后添加2-氟-6-甲基吡啶(1.5g)。将反应混合物在回流中搅拌18小时。过滤反应混合物去除铯盐，然后将滤液蒸发得到粗制油。通过提供的快速色谱(硅胶，庚烷中20%乙酸乙酯)纯化，干燥后获得呈黄色油的1.32g标题化合物。'H-NMR(400MHz;DM5^-^)58.34(s，1H),7.80(t,1H),7.63(d,1H)，7.59(s,1H),7.13(d，1H),2.47(s,3H),2.08(s,3H);MS(APCI+)m/z174(MH+)。反应条件2用4-甲基-吡唑(5.0g)起始，以相似的方式在更大规模上进行对反应1步骤1所进行的反应。产生了5.92g标题化合物。反应条件3备选地用乙腈中的4-甲基-吡唑(1.0g)起始，使用1.1当量叔丁醇钾作为碱，生产了1.75g标题化合物。反应条件4备选地，用THF中的4-甲基-吡唑(1.0g)起始，使用1.1当量的叔丁醇钾作为碱，生产了0.238g标题化合物。反应条件5另外，如下制备步骤i的标题化合物在冰浴中40分钟期间，在氮大气下向无水DMF(40mL)中60%氢化钠(8.04g)的悬浮液中逐滴添加4-甲基-吡唑(15g)在30mlDMF中的溶液。将得到的混合物在室温下搅拌0.5小时，然后逐滴添加2-氟-6-甲基吡啶(22.33g)。将混合物在8(TC搅拌3小时并冷却。将反应混合物倒入冰-水中，并用乙酸乙酯萃取两次。用水和盐水洗涤合并的有机相，在Na2S04上干燥并过滤。将滤液真空浓縮得到残余物，通过色谱纯化该残余物(庚烷中2%-10%乙酸乙酯)，得到呈无色油的标题化合物。步骤ii:2-(5-溴-4-甲基吡唑-l-基)-6-甲基吡啶。向14mL无水THF中2_甲基_6_(4_甲基_批唑_1_基)_吡啶(0.52g)(通过步骤i中的反应条件1制备)的冷(-60。C)溶液中添加1.33mL2.5M正-丁基锂(0.21g)在己烷中的溶液。将反应混合物在-6(TC搅拌一小时。添加10mLN-溴琥珀酰亚胺(0.59g)在THF中的溶液，然后将最终溶液在-6(TC搅拌2小时。添加饱和的氯化铵(20mL)，然后允许反应混合物温热至24°C。将反应混合物用300mL乙酸乙酯稀释，然后分离水相。用额外的饱和氯化铵(50mL)洗涤有机相，然后用盐水(50mL)洗涤。分离有机层，干燥(硫酸钠)、过滤然后将滤液蒸发，得到粗制红色油。通过提供的快速色谱纯化(硅胶，庚烷中20%乙酸乙酯)，干燥后得到0.377g呈黄色油的标题化合物；NMR(400MHz;DMSO-^OS7.88(t,1H),7.69(s，1H),7.44(s,1H)，7.32(s,1H),2.50(s,3H),2.02(s,3H);MS(APCI+)m/z254(MH+)。备选的反应条件也可如下制备歩骤ii的化合物2-(5-溴-4-甲基吡唑-l-基)-6-甲基吡啶1)使用如上所述类似的反应条件，用2-甲基-6-(4-甲基-吡唑-l-基)-吡啶(1.0g)起始制备2-(5-溴-4-甲基吡唑-l-基)-6-甲基吡啶，提供标题化合物(829mg)。2)使用如上所述类似的反应条件，用2-甲基-6-(4-甲基-卩比唑-1-基)-吡啶(5.0g)起始制备2-(5-溴-4-甲基吡唑-l-基)-6-甲基吡啶，提供标题化合物(2.64g)。3)使用如上所述类似的反应条件，用2-甲基-6-(4-甲基-吡唑-1_基)-吡啶(1.0g)起始制备2-(5-溴-4-甲基吡唑-1-基)-6-甲基吡啶，提供标题化合物。另外，使用1,2-二溴四氟乙烷(1.5当量)代替N-溴琥珀酰亚胺(NBS)作为溴化剂(756mg)。步骤iii:2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶。向2-(5-溴-4-甲基吡唑-l-基)-6-甲基吡啶(2.0g)在20mL无水1,2-二甲氧基乙垸(DME)的溶液中，添加双三苯基膦二氯化钯(palladiumbistriphenylphosphinedichloride)(0.153g)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后添加20mL水，之后添加碳酸氢钠(2.0g)，然后添加三氟-甲磺酸5-乙基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯(3.1g)。将反应混合物回流18小时，然后冷却至室温。将反应混合物用400mL二乙醚稀释，然后用水(100mL)、饱和的碳酸氢钠(2x100mL)和盐水(100mL)洗涤有机相。将有机层(硫酸镁)干燥、过滤，然后蒸发滤液得到黄色浆体。将混合物用25mL乙酸乙酯稀释。材料未全部进入溶液中。将混合物研磨15分钟然后过滤(第一次过滤)取出黄色固体，用乙酸乙酯(2x10mL)冲洗该固体。将固体晾干15分钟，提供44Smg稍微不纯的产物。将来自上文第一次过滤的滤液在6g硅胶上蒸发并进行快速色谱(硅胶，庚烷中80%乙酸乙酯，乙酸乙酯，然后是甲醇中95%乙酸乙酯)，得到0.565g。标题化合物的合并重量为1.01g，呈黄色固体。从乙醇沉淀得到呈黄色固体的标题化合物(0.764g);熔点155-156°C;MS(APCI+)m/z307(MH+)。实施例10.2-「4-甲基-2"6-甲基-吡啶-2-基V2H-吡唑-3-基l-噻吩并「3,2-cl口比歩骤i:4-溴-吡啶。4-溴吡啶盐酸化物(20.0g,102.9mmol)被分隔在EtOAc和5。/。NaHC03之间。分离各层，并用EtOAc萃取水相。用水和盐水洗涤合并的有机萃取物，在Na2S04上干燥并在4(TC浴中于减压下蒸发，提供13.7g(84。/。)挥发油，其立即被用于下一步骤中。歩骤ii:4-溴-卩比啶-3-甲醛(4-Bromo-pyridine-3-carbaldehyde)。用N2吹扫4-溴吡啶(13.7g，86.8mmol)在300mLTHF中的悬浮液，并在干燥N2大气下冷却至-78。C。在约3分钟期间添加二异丙胺锂的溶液(庚烷/THF/苯乙烷中的2.0M溶液，43.4mL,86.8mmol)。30分钟后，添加DMF(二甲基甲酰胺)。将反应混合物在-78。C下维持3小时，之后将其温热至室温过夜。用饱和的NHUC1淬灭反应混合物并在减压下浓縮，以去除大部分THF。用EtOAc萃取水性混合物。用水和盐水洗漆合并的有机相，在46Na2S04上干燥、蒸发并进行色谱分离(150gAnalogix硅胶柱，用45分钟期间从100%庚垸到30%EtOAc/庚烷的梯度洗脱)。合并含有产物的级分，并将其蒸发得到2.20g(13.6。/o)标题化合物。MSm/zl86(M+H)+。步骤iii:l-噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基-丙-l-酮。向硫氢化钠水合物(1.31g，17.7mmol)在5mL水中的溶液中添加DMF(30mL)和K2C03(3.27g,23.7mmol)。将混合物在冰浴中冷却至(TC，之后添加1-溴-2-丁酮(2.68g,17.7mmol)。15分钟后，添加4-溴吡啶-3-甲醛(2.20g,11.8mmol)在DMF(20mL)的溶液。将反应混合物在45'C搅拌2.5天。用水稀释反应混合物并用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤合并的有机萃取物，在Na2S04上干燥，并蒸发得到粗制产物(1.80g,80%)，该产物被用于下一步骤中而无需进一步纯化。MSm/z192(M+H)+。步骤iv:3-二甲氨基-2-甲基-1-噻吩射3，2-c]吡啶-2-基-丙酮。用N2吹扫l-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基-丙-l-酮(1.80g,9.41mmol)和二甲氧基甲基-二甲基-胺(5.32mL,37.8mmol)在DMF(20mL)中的溶液，并加热至8(TC保持18小时。将反应混合物用1:1的水/盐水稀释并用EtOAc萃取。用1:1的水/盐水和盐水洗涤有机萃取物，在Na2S04上干燥，并蒸发得到2.1g粗制材料。将残余物重复溶于甲苯中，并蒸发直至获得恒定的残余物重量。MSm/z247(M+H)+。步骤v:2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶。将3-二甲氨基-2-甲基-1-噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基-丙酮(1.31g,5.32mmol)在乙酸(20mL)中的溶液加热至90°C。将(6-甲基-吡啶-2-基)-肼在乙酸(8mL)中的溶液加热至90°C，然后添加至3-二甲氨基-2-甲基-1-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基-丙酮溶液中。将混合物在95。C加热15分钟，之后从加热中取出并在室温下搅拌18小时。在减压下去除溶剂，并将残余物从甲苯中蒸发两次。对由此获得的残余物进行色谱分离(Analogk110g硅胶柱，用100。/oCH3CN洗脱)，提供0.45g(28。/。)橙色油。也可如下进行制备实施例10步骤iii的化合物(l-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基-丙-l-酮)的第二种方法步骤i:4-溴-吡啶-3-甲醛。用N2吹扫4-溴吡啶盐酸化物(5.0g,25.7mmol)在THF(100mL)中的悬浮液并冷却至-78"C。在3分钟期间添加二异丙胺锂(庚垸/THF/苯乙烷中2.0M的溶液，27.0mL,54.0mmol)的溶液。30分钟后添加DMF(8.56mL,110.6mmol)。将反应混合物在-78。C搅拌15分钟，之后在水浴中快速温热至室温。允许反应在室温下搅拌18小时。用饱和的NH4Cl(100mL)淬灭反应并用EtOAc萃取。用水和盐水洗涤合并的有机萃取物，在Na2S04上干燥，蒸发并进行色谱分离(Analogk150g硅胶柱，用1小时期间从100%庚垸到50%EtOAc/庚垸的梯度洗脱)，得到1.50g(31%)呈浅黄色固体的标题化合物。MSm/z186(M+H)+。步骤ii:噻吩并[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲基酯。向4-溴-卩比啶-3-甲醛(1.50g,8.06mmol)在DMF(10mL)和水(lmL)中的溶液中添加K2C03(1.34g,9.68mmol)和巯基乙酸甲酯(0.87mL,9.68mmol)。将混合物在45。C加热18小时。将反应混合物从加热浴中取出并用水(50mL)稀释。1小时后，过滤形成的松散固体并用水洗涤。将由此获得的材料在6(TC真空烘箱中干燥至0.92g(59%)的恒定重量。MSm/z194(M+H)+。歩骤iii:噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸甲氧基-甲基-酰胺。用N2吹扫0，N-二甲基羟胺盐酸化物(2.32g，23.8mmol)在THF(20mL)中的悬浮液并冷却至-78。C，之后添加正-丁基锂(己烷中1.6M,30.0mL,48.1mmol)。去除水浴并搅拌15分钟，之后放回水浴中并添加噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸甲基酯(0.92g,4.76mmol)在THF(10mL)中的溶液。45分钟后，添加饱和的NH4C1。用EtOAc稀释混合物；用水、1MHC1、水、5%NaHC03、水和盐水洗漆；在Na2S04上干燥，并蒸发获得0.54g(51%)的油，其随后通过静置固化。由此获得的产物被用于下一步骤中而无需进一歩纯化。MSm/z223(M+H)+。步骤iv:l-噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基-丙-l-酮。将噻吩并[3,2-c]吡啶-2-羧酸甲氧基-甲基-酰胺(0.54g，2.43mmol)溶于THF(10mL)中，用&吹扫，并在冰浴中冷却至0°C。添加乙基溴化镁(醚中3M，2.43mL，7.29mmol)，并允许反应温热至室温过夜。不再进一步纯化反应混合物。MSm/z192(M+H)+。也可如下进行制备实施例10步骤iii化合物(l-噻吩并[3，2-c]吡啶-2-基-丙-l-酮)的第三种方法步骤i:N-甲氧基-N-甲基-丙酰胺。在(TC下氮大气中，向O,N-二甲基-羟胺盐酸化物(ll.lg)和丙酰氯(9.4mL)在二氯甲烷(300mL)中的搅拌混合物中添加吡啶(18.2mL)。去除冷浴并允许混合物逐步温热至室温，在该温度下在整个周末期间对其搅拌。搅拌混合物中形成白色沉淀物。用10%水性盐酸处理混合物，并搅拌直至沉淀物溶于二相溶液中。分离各层并用饱和水性碳酸氢钠(100mL)和盐水溶液(100mL)洗涤，在无水硫酸镁上干燥，并在减压下浓縮，提供呈澄清无色油的标题化合物(12.05g);^-NMR(400MHz;CDC13)S3.62(s,3H),3.11(s，3H)，2.38(四重峰，J=7.6Hz，2H),1.07(t,J=7.6Hz,3H);13C-NMR(100MHz;CDC13)5175.5,61.3,32.5，25.4,8.9;MS(APCI+)m/z118(MH+)。步骤ii:l-噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基-丙-l-酮。在-4(TC(乙腈-干冰浴)下向噻吩并[3,2-c]吡啶(1.0g)在无水四氢呋喃(50mL)的搅拌混合物中添加正-丁基锂(1.6M,4.7mL)在己烷中的溶液。将混合物冷却至-78。C，然后添加N-甲氧基-N-甲基-丙酰胺(0.97g)在无水四氢呋喃(10mL)中的溶液。去除冷浴，然后允许反应混合物逐歩温热至室温。将混合物搅拌过夜(14小时)。用饱和的水性氯化铵(150mL)处理混合物。然后用乙酸乙酯(500mL)萃取混合物，并用盐水溶液(IOOmL)洗涤萃取物。在无水碳酸钾上干燥有机相，在减压下浓縮，在氯仿中重建，在减压下再次浓縮，提供橙棕色半固体(1.17g)。通过快速硅胶色谱纯化该半固体，使用Analogix二氧化硅柱(115g二氧化硅)。用0-30%乙酸乙酉旨/庚烷随后30-60%乙酸乙酉旨/庚烷洗脱。浓縮含产物的级分得到0.49g产物。还通过蒸发适当的级分分离起始材料(0.45g)。49实施例11:2-「4-甲基-2-(6-甲基-卩比啶-2-基〗-2^吡唑-3-基1-噻吩并「3,2-cl吡啶。用2-(4,4,5,5-四甲基-[l,3,2]二氧硼戊环-2-基)-噻吩并[3,2-c]吡啶(10g)、三氟-甲磺酸4-甲基-2-(6-甲基-P比啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯(14g)、磷酸三钾(24g)和1,4-二噁烷(200mL)填充装有回流冷凝器和进气门的500mL三颈圆底烧瓶。将反应管抽空并用氮气吹洗。将除气和氮气吹洗重复两次。向混合物中添加二氯[i,r-双(二苯基膦)二茂铁]钯(n)二氯甲垸加成物(3.2g)、U'-双(二苯基膦)二茂铁(2.2g)、氟化钾(llg)和水(lmL)，并对混合物再进行三次除气和氮气吹洗，随后在20分钟期间使其逐步达到80°C。将混合物在8(TC搅拌IO分钟，随后逐步冷却至室温并静置过夜。将混合物真空滤过硅藻土，并通过滤塞用两份乙酸乙酯(800mL和600mL)洗涤。合并滤液并在减压下浓縮，得到深色残余物。将残余物溶于二氯甲烷(200mL)中。固体沉淀，并通过真空过滤将其去除。在加压下浓縮滤液，提供橙棕色固体(20g)。用室温乙腈(200mL)处理固体，将得到的悬浮液旋流(swirled)并真空过滤，提供黄色固体(9.1g)。将该第二固体溶于蒸汽浴上沸腾的乙腈(75mL热溶液体积)中，允许橙色溶液在30分钟期间冷却至室温。固体沉淀，密封烧瓶并将其在4"C下储存过夜。将该沉淀真空过滤并吸干，提供呈灰白色固体(4.80g)的标题化合物。将该固体与以相似的方式从其它实验中分离的各批固体(总质量21.5g)合并，得到合并的固体。将合并的固体进一步与从以下实验中获得的固体(8.92g)合并用干燥的氮气吹扫3-二甲氨基-2-甲基-1-噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基-丙酮(31.35g)在冰醋酸(500mL)中的溶液和(6-甲基-口比啶-2-基)-肼(15.67g)在冰醋酸(200mL)中的溶液，并在氮气下加热至90°C。合并两种混合物并加热至95。C保持15分钟。停止加热，允许混合物冷却并在室温下搅拌过夜。在减压下将粗制反应混合物浓縮为约100g深色油。将残余物溶于甲苯中并蒸发至约70g。乙酸的强烈气味是明显的，因此将蒸发物溶于甲苯中并蒸发为约70g的油。尽管由此获得的残余物仍然具有弱的乙酸味，但是将其溶于乙腈(200mL)中并允许在室温下静置。2.5天后未形成沉淀，因此将该溶液在减压下于60'C浴中蒸发。将得到的油溶于乙腈(约200mL)中，允许其冷却至室温。形成小量沉淀物，将其收集并用小量乙腈洗涤。过滤后，大量固体从母液中沉淀。收集沉淀物并用小量乙腈洗涤。在60°C真空烘箱中干燥后，获得12.05g材料。将由此获得的固体从250mL沸腾的乙腈中再次分离，在真空烘箱中于6(TC干燥至恒定重量后提供固体(8.92g)2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶。将合并的21.5g和8.92g批次悬浮于乙腈中，达到500mL的总体积。将悬浮液在蒸汽浴上加热至沸腾。大部分固体溶于溶液中，但是一些微粒仍然不溶，通过热的真空过滤将其去除。收集在2L滤瓶中的滤液快速地产生白色固体沉淀。添加乙腈至600mL的体积。将滤液在蒸汽浴上煮沸直至所有的固体溶解。将烧瓶从蒸汽浴上取出，通过将混合物静置于实验台上2.5小时使其逐步冷却至室温。通过真空过滤收集在该时间期间来自溶液的白色固体，提供呈白色固体(24.85g的标题化合物；'H-NMR(400MHz，CDC13)S9.06(d,/=0.8Hz,1H),8.43(d,/=5.7Hz，1H)，7.72(ddd,J=5.7,1.0,0.8Hz,IH),7.64(s,1H),7.61(t,/=7.8Hz,IH),7.36(d,/=8.0Hz,1H)，7.31(d，J=0.8Hz,1H),7.03(d，J=7.6Hz,IH),2.26(s,3H),2.18(s，3H);MS(APCI+)m/z307(MH+),(APCT)m/z305(M-H+)。实施例12.2-(4-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基)噻吩并「2,3-cl吡先前已合成了实施例12步骤iii的噻吩并[2,3-c]吡啶(见例如Graulichetal.(2004)Synthesis12:1935-1937;Graulichetal.(2005)J.Med.Chem.48(15):4972-4982)。步骤i:(2,2-二甲氧基-乙基)-噻吩-2-基亚甲基-胺。使用Dean-Stark分离器(trap)将噻吩-2-甲醛(7.5mL,82.3mmol，AlfaAesar)、氨基乙酰二甲醛51(8.82mL,82.3mmol,AlfaAesar)在100mL甲苯中的溶液加热至115°C，以去除水。3小时后，将反应冷却至室温。将反应置于旋转蒸发仪上以蒸发甲苯，这得到棕色的液体(约17.3g)，将该液体用于下一步骤中而无需进一步加工。&丽R(400MHz，氯仿-d)5ppm3.42(6H,s),3.73(1H,d,7=5.3Hz),4.65(1H,t,/=5.3Hz)，7.07-7.41(3H,m)。步骤ii:{[(2,2-二甲氧基-乙基)-乙氧羰基-氨基]-噻吩-2-基-甲基H粦酸二甲基酯。在N2大气下向步骤i(16.3g,82.3mmol)中获得的油中添加60mLTHF。将反应冷却至-10。C(MeOH/冰)，并安装内部温度计。逐滴添加氯甲酸乙酯(7.9mL,82.3mmo1)，保持其内部温度处于或低于-9.5。C。将反应在-l(TC下搅拌10分钟，去除浴并允许反应温热至室温。使用冰浴作为散热件，添加亚磷酸三甲酯(10.7mL,90.5mmol)。允许反应逐步温热至室温，并搅拌过夜。在旋转蒸发仪上去除溶剂。添加甲苯并在旋转蒸发仪上蒸发。然后第二次进行甲苯添加和蒸发。通过柱色谱纯化得到的粘稠棕色油(BiotageHorizon体系，330gIscoRediSep柱，1倍柱体积期间0-100%EtOAcZ己烷，然后保持在100%EtOAc)。将想要的级分合并并浓縮，得到23.48g粘稠的棕色油。歩骤iii:噻吩并[2，3-c]吡啶。将来自步骤ii的材料(23.5g,61.6mmol)溶于100mLCH2Ch中。在N2大气下用回流冷凝器和内部温度计装备三颈烧瓶。将烧瓶抽空并用氮气吹扫。向反应中缓慢添加氯化钛(IV)(40mL,369mmol)。将反应温度维持在4(TC左右。添加约15mL后，将反应置于冰浴上以控制温度。允许反应逐步温热至室温，之后加热至4(TC过夜。将反应加热至4(TC保持18小时，然后冷却至室温。将反应内容物分部分倒入更大的烧杯中，所述烧杯含有200g冰和200mLNH4OH，观察到大量烟。将反应剧烈搅拌数分钟。过滤反应，然后用CHC13(3x100mL)冲洗固体。将二相滤液转移至分液漏斗并分离各层。将有机层萃取进1NHC1(2xl00mL)中。用20mL012(312洗涤水性HC1层，并用浓縮的NH4OH小心碱化，直到达到约9的pH。将产物萃取进CH2Cl2(3xl00)中。在MgS04上干燥有机层，过滤，浓縮为橙色油，所述橙色油固化为橙色固体。通过柱色谱纯化粗制材料(BiotageHorizon体系，120gIscoRediSep柱，用100%庚烷平衡，用45%EtOAc/庚垸洗脱)。分离白色固体(4.20g)。^NMR(400MHz,DMSCW6)5ppm7.56(1H,dd，《/=5.5,0.8Hz),7.86(1H,dd,/=5.5,1.0Hz),8.10(1H,d,/=5.3Hz),8.46(1H,d,/=5.5Hz),9.25(1H,s)。NMR(400MHz,氯仿-力Sppm7.40(1H,d,/=5.5Hz)，7.74(2H,m),8.52(1H，d,J=5.5Hz),9.19(1H,s).MS(APCI,M+l)136.0。步骤iv:噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基硼酸磷酸三氢。将含有来自步骤iii的材料(4.12g，30.5mmol)的、装有内部温度计的三颈烧瓶抽空，然后填充氮大气。添加THF(50mL)并将溶液冷却至-44°C(CH3CN/干冰)。在10分钟期间添加正-丁基锂(1.6M/己烷，21mL，34mmol)，同时维持内部温度处于或低于-35。C。将反应在-33到-45。C下搅拌75分钟。添加硼酸三异丙基酯(8.4mL,36.6mmol)并去除冷浴。将反应搅拌一小时，然后添加磷酸(85%水性，2.5mL,33.5mmol)。将反应用10mL水稀释，得到沉淀。将反应剧烈搅拌15分钟。通过过滤收集黄色固体，用EtOAc(约50mL)冲洗，得到白色粉末状固体(9.57g)。用50mL水洗涤约一半材料，以分离3.16g淡粉色固体。如通过光谱数据所测定的，两批材料是相同的。〗HNMR(400MHz,甲醇-d4)5ppm7.87(1H,d，/=5.5Hz),7.95(1H，s),8.41(1H,d,J=5.7Hz)，9.11(1H,s)。步骤v:2-(4-甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-1H-吡唑-5-基)噻吩并[2,3-c]吡啶。在250mL三颈烧瓶中向50mL二噁烷中添加三氟-甲磺酸4-甲基-2-(6-甲基—批啶—2—基)—2H-吡唑-3-基酯(1.23g，其可如实施例7步骤iv中所述被合成)、来自歩骤iv的材料(2.00g)、氟化钾(l.llg)、磷酸三钾(2,44g)。将烧瓶用真空抽空，并用氮气吹扫。向其中添加PdCl2(dppf)(Strem，二氯[l,l'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加成物，280mg)禾ndppf配体(Strem,l,l'-双(二苯基膦)二茂铁，212mg)和水(O.IOmL)。将反应加热至80-llTC持续2.5小时，然后冷却至室温。将反应与来自以相似方式运行的另一反应的材料合并。将粗制反应材料滤过硅藻土垫子，用EtOAc(约750mL)冲洗。将滤液在旋转蒸发仪上浓縮至干燥。用CH2C]2稀释深色残余物并将固体滤除。将CH2Cl2滤液在旋转蒸发仪上浓縮为黑色残余物。通过滤过硅胶塞并用50%EtOAc/己烷(总计约800mL)洗脱来纯化粗制的材料。来自硅胶塞过滤的级分产生两批材料(一种纯净，一种不纯)。将其分别浓縮至干燥。与Et20—起研磨不纯的材料，并通过过滤收集白色固体。浓縮滤液并重复Et20研磨，得到83mg。合并仅含有想要的产物的级分加上83mg的一批，并与纯净的一批一起被纯化。向材料中添加5-10mLEtOH，将其加热至沸腾。一旦所有的材料溶解，将其从加热中取出并允许其静置。然后米色固体开始沉淀。将母液倒出，并用小量冷EtOH冲洗沉淀物。将沉淀物在5(TC真空烘箱中干燥过夜，提供550mg米色固体。&NMR(400MHz,CDC13)Sppm9.09(1H,s),8.50(1H，d,J=5.7Hz),7.62-7.69(3H，m)，7.39(1H,d,/=7.99Hz)，7.27(1H，d，J=0.6Hz),7.04(1H，d,/=7.4Hz)，2,25(3H,s)，2.19(3H，s).MS(APCI，M+l)307.1.mp124,125。C。实施例13.2-(2-(6-甲基吡啶-2-基)-2A5,6-四氢环戊「cl吡唑-3-基)噻吩在250mL三颈烧瓶中向45mL二噁烷中添加三氟-甲磺酸2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2,4,5，6-四氢-环戊吡唑-3-基酯(1.33g，其可如实施例5中歩骤iv所述被合成)、来自实施例12步骤iv的材料(2.00g)、氟化钾(l.llg)、磷酸三钾(2.44g)。将烧瓶在减压下抽空并用氮气吹扫。向其中添加PdCl2(dppf)(Strem，二氯[l，l'-双(二苯基膦)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加成物,280mg)和dppf配体(Strem,1,1'-双(二苯基膦)二茂铁，212mg)和水(O.IOmL)。将反应加热至80-llTC持续3.5小时，然后冷却至室温。将反应材料滤过硅藻土垫子，用EtOAc(约250mL)冲洗。将EtOAc滤液在旋转蒸发仪上浓縮至干燥。用CH2Cl2稀释得到的深色残余物并滤除固体。将CH2C12滤液在旋转蒸发仪上浓縮为黑色残余物，所述黑色残余物用CH3CN稀释并进行超声处理。通过过滤收集茶色固体(0.520g)。将滤液浓并「2,3-cl吡啶。縮至干燥并通过柱色谱纯化(BiotageHorizon体系，12gAnalogix柱，0-50。/。EtOAc/庚烷，然后保持在50%EtOAc/庚垸)，得到约300mg固体。合并300mg固体和茶色固体(0.520g)，并用约10mLEtOH稀释，加热至沸腾，过滤并允许其冷却至室温。固体材料开始沉淀。在室温下静置过夜后，将母液倒出并用小量冷的EtOH冲洗剩余的材料。将固体在45'C真空烘箱中干燥1.5小时，提供410mg固体。力NMR(400MHz，CDCl3)Sppm9.05(1H,s)，8.45(1H,d,J=5.7Hz),7.70(1H，t，/=7.7Hz)，7.62(1H,d,5.7Hz),7.38(1H,d,/=7.9Hz),7.25(1H,d,/=1.2Hz),7.15(1H,d,J=7.6Hz),2.85-2.91(4H，m),2.51-2.58(2H,m)，2.46(3H,s).MS(APCI,M+1)333.1.mp145-146。C。实施例14:2-「4-甲基-2-(6-甲基吡啶-2-基)2H-吡唑o-3-基l噻吩并「3,2-cl吡将三氟-甲磺酸4-甲基-2-(6-甲基-妣啶-2-基)-2H-吡唑-3-基酯(36.6g,114mmoL)、碳酸钾(39.4g,285mmol)和2-(4，4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼戊环-2—基)-噻吩并[3,2-c]吡啶(31.2g,120mmol)在甲苯(300mL)、异丙醇(IPA)(75mL)和水(75mL)中制成浆体。随后将反应混合物抽真空，然后用氮气吹扫。这总共重复五次。添加双(三苯膦)钯(II)氯化物(4.4g,6.27mmol)，并将反应加热至78°C。2小时后允许反应混合物冷却。分离水性层，并过滤有机层以去除黑色催化剂残余物。将有机层用水(80mL)洗涤。将有机层用3MHC1(100mL)和水(100mL)萃取。向水性层中添加碳(0.5g)和硅藻土(9g)，并浓縮溶液以去除残余的甲苯。过滤水性层。通过添加50%NaOH使得水性层成为碱性(pH=10)。黄色固体沉淀。过滤该固体，用水洗涤并通过将空气从中抽过将其干燥，得到24.1g(69.1%)黄色固体。将该固体在甲苯(250mL)中制成浆体。将该浆体加热至65。C并过滤。浓縮滤液。将残余物在甲苯(IOOmL)中制成浆体并过滤。用甲苯(40mL)洗涤滤饼。通过将空气从中抽过干燥该滤饼，得到19.2g(55。/。)粗制产物。将该19.2g与其它相似地制备的样品合并，得到141.7g。将合并的固体在IPA(500mL)中制成浆体，并将浆体加热至83'C，但是固体并未完全进入溶液中。添加IPA(300mL)并将浆体加热至83t:，得到深色溶液。允许溶液以8'C/小时冷却至室温。过滤浆体，并用IPA(200ml)洗涤滤饼。将滤饼在5(TC下干燥60小时，得到131.8g想要的产物。生物学实施例1ALK-5激酶测定方法已描述于现有技术中(见例如，Lapingetal.(2002)Mol.Pharmacol.2002;62:58-62)。如下测定特定实施例中列举的化合物对于ALK-5自磷酸化(autophosphorylation)活性的抑制和对a-酪蛋白的ALK-5磷酸化的抑制。材料缓冲液50mMHEPES,pH7.6，含10mMNaCl、10mMMgCl2和1mMDTT。GST-ALK-5蛋白质-0.44mg/ml(约7/^M储存液)。1:350的稀释得到20nM的储存液，其在测定中最终被转化为2nM。在用杆状病毒(Baculovirus)转染的sf9昆虫细胞中表达人ALK-5，所述杆状病毒在pFastBac载体(Invi加gen)中表达N-末端与谷胱甘肽S-转移酶GST融合的ALK-5截短序列(氨基酸H149-M5Q3),。通过在4。C超声处理破坏细胞。将裂解液在40,000xg下离心45分钟，并将上清液应用至谷胱甘肽Sepharose4FastFlow(AmershamBioscienses)的10ml柱上，该柱用100mMTris-HClpH7.6缓冲液平衡，所述缓冲液含有300mMNaCl、10%甘油、1%NP40、2mM二硫苏糖醇(DTT)和每50ml—片完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂(Roche)。用5倍柱体积的50mMTrisHC1pH8.0洗涤柱，该TrisHC1含有150mNNaCl、10%甘油、2mMDTT和每100ml—片完全不含EDTA的蛋白酶抑制剂。用含有8mM还原型谷胱甘肽的洗涤缓冲液洗脱柱。收集级分并于4。C下在20mMTrisHC1pH8.0中透析过夜，所述TrisHC1含有10%甘油、150mMNaCl、2mMDTT禾口1mM4-(2-氨乙基)-苯磺酰氟化物.HC1(AEBSF)(Sigma)at4°C.在缓冲液(50mg/ml)中将a-酪蛋白(Sigma,弁C8032)制成2mM。冷ATP含有10mM冷ATP(来自缓冲液中的10mM储存溶液)。热ATP由缓冲液中0.5/zCi/孔7-33P-ATP(Amersham,AH9968)组成。测定缓冲液-每10ml缓冲液1ml500mMHEPES(pH7.6)20Ml5MNaCl1001MMgCl210Ad1MDTT(二硫苏糖醇)测定方法在96孔滤底平板(Millipore，#MSDVN6B50)中，添加58/zl测定缓冲液达到各孔。在测定缓冲液中添加10/d冷ATP混合物，然后添加10^储存溶液的1:10稀释液。然后以50X终浓度添加2/xl被测试的化合物(DMSO)。添加热ATP混合物(IO//1)，并通过添加10/xlALK-5蛋白质(2mM终浓度)在含0.05%BSA(胎牛血清)的测定缓冲液中1:350的稀释液来起始反应。将反应在室温下混合5分钟，然后在室温下持续145分钟。然后通过添加100/xl冰冷的20%TCA(三氯乙酸)终止反应。然后将测定在4"C孵育至少1小时，随后通过抽吸经过滤器将各孔的内容物过滤。用200;il冰冷的10%TCA将孔洗涤三次。去除塑料基底(sub-base)之前和之后将平板底部印迹(blotted)，并在室温下干燥过夜。添加30yl闪烁液，并在WallacTri-Lux闪烁计数器上每孔计数1分钟。下表2中报告了IC5Q(nM)值，其为在一个或多个实验中测定的两个或更多ICs。值的平均。括号中报告了测定的次数("n")。如果有4次或更少的测定，则将产生平均ICso值的个体值列于括号内。标准误差是标准差除以表2<table>tableseeoriginaldocumentpage57</column></row><table>44.33(n=4;1.0，2.84,5.66,7.82);SE=1.51512.9(n=4;31，12.5,1.0，7.24);SE=6.46635.2(n=2;38.6,31.8);SE=3.4176.65(n=16);SE=0.61127.94(n=2;10.4,5.47);SE=2.481318.9(n=2;26.7，11.2);SE-7.73生物学实施例2ALK-5基因报告子测定法已在现有技术中描述(见例如Maliekaletal.(2004)JBiolChem279(35):36287-36292)。如下测定特定实施例中所列化合物在TGF/31刺激的NIH-3T3细胞中对Smad结合元件(SBE)萤光素酶报告子活性的抑制。以下的萤光素酶测定使用NIHZ3T3细胞(鼠成纤维细胞)，所述细胞用Smad结合元件(SBE)萤光素酶报告子构建体瞬时转染。该被表达的构建体响应刺激Smad信号转导途径的药剂。材料NIH-3T3纟田胞(ATCCCRL-1658)含酚红的Dulbecco's改良Eagle培养基(LifeTechnologies11965-092)不含酚红的Dulbecco's改良Eagle培养基(LifeTechnologies21063-029)胎牛血清(LifeTechnologiesSH30071.03)福至尔(Fugene)(Roche1814443)Opti-MEMI(LifeTechnologies31985-070)Dual-Glo萤光素酶测定体系(PromegaE2940,E2980)'庆大霉素溶液(10微克/微升)(LifeTechnologies15710-064)96-孔测定平板，白色，TCT(CorningCostar3917)75厘米组织培养烧瓶(CorningCostar430641)pRL-CMV载体(PromegaCorporation,Madison，WI，产品E2261)(pRL是编码处于组成型活性巨细胞病毒(CMV)启动子控制下的iem7/a58mn/om^萤光素酶的载体)转化生长因子&-(R&D体系，Minneapolis,MN,产品240-B)pSBE4-Luc/BV4载体(也己知为pSBE4-luc载体)(其含有4个拷贝的Smad结合元件和萤火虫萤光素酶编码区)(Zaweletal.(1998)MolCell.1(4):611-617)。方法:将NIH-3T3细胞维持在含10%胎牛血清和10微克~1庆大霉素的Dulbecco's改良Eagle培养基中。每周一以1:5到1:10将细胞分流，每周三再次分流。对于测定需要的细胞，在周五将其以l:20分流并维持至周一。不要让细胞生长至完全汇合。第l天，O小时(实验开始)使用15毫米生长培养基(Dulbecco's改良Eagle培养基，10%胎牛血清，10微克/毫米庆大霉素)将160万NIH/3T3细胞涂布于75厘米烧瓶中用于转染。第1天，实验开始后7小时制备转染a.在1.5毫米的微量离心管中，向400微升Opti-MEM中直接添加48微升福至尔。在室温下孵育5分钟。b.在上述孵育周期中，将8微克SBE-luc和0.16微克CMV-pRL小量分至400微升Opti-MEM中。c.向歩骤"b"中的DNA添加来自步骤"a"的福至尔/Opti-MEM。在室温下孵育15到45分钟。d.向上文涂布的细胞中添加复合的DNA(第1天，0小时)。更换培养基不是必要的。在37。C，5%032下孵育过夜。第2天，实验开始后24小时在Dulbecco's改良Eagle培养基、10%胎牛血清、10微克/毫米庆大霉素中以200,000细胞/ml的密度从经转染的细胞(第1天，步骤2)制备细胞悬浮液。将细胞涂布于测定平板(白色TCT)中，100微升/孔用于96-孔板。这使得细胞数量为20，000细胞/孔。在37。C，5%(302下孵育5-6小时。第2天，实验开始后31小时a.如果需要的话制备剂量应答平板。b.用不含血清的100微升Dulbecco's改良Eagle培养基、10微克/毫米庆大霉素洗涤平板。c.添加170微升/孔的Dulbecco's改良Eagle培养基、10微克/毫米庆大霉素、0.5%胎牛血清，d.将测试化合物和对照转移至测定平板(白色，TCT)，20微升10X储存液用于96-孔板。e.用化合物处理30-60分钟后，向各孔中添加250皮克/毫米转化生长因子A(添加10微升20X储存液)。第3天，实验开始后51小时针对萤光素酶活性来测定平板。a.根据制造商的说明，用Dual-Glo萤光素酶缓冲液重建冻干的Dual-Glo萤光素酶底物。b.从培养箱取出测定平板，使其达到室温10分钟。c.从测定平板中吸出培养基。添加80微升经稀释的Steady-Glo萤光素酶底物，其含有l份不含酚红的Dulbecco's改良Eagle培养基。密封该平板并在室温下孵育至少IO分钟。d.在PackardTopCountHTS平板读取器上读数，使用6秒/孔的单光子计数(SPC)模式读取来自pSBE4-Luc/BV4pSBE4-luc的萤火虫萤光素酶活性。e.在读取平板的萤火虫萤光素酶活性后，去除密封并向各孔中加入40微升STOP和Glo试剂。再次密封平板并在室温下至少孵育10分钟。如针对萤火虫萤光素酶一样在PackardTopCoimt上对平板读数，以读取来自pRL的7em7/fl萤光素酶活性。该萤光素酶活性用作转染对照。萤火虫萤光素酶活性用作测定读数。针对每个具体的样品，将萤光素酶测定活性标准化为Aem7/fl测定活性。下表3中报告了IC5Q(nM)值，其为在一个或多个实验中测定的两个或更多ICso值的平均。括号中报告了测定的次数("n")。如果n为4或更少，则将产生平均IC^值的个体值列于括号内。同样报告了标准误差(SE)。标准误差是标准差除以测定次数("n")。表3实施例ic50(nM)1149(n=4;117,133,164,183);SE=14.9i2440(n=3;211,504,605);SE=1183403(n=3;286,453,471);SE=58.9421.5(n=3;11.5，26,27);SE=5.0530.8(n=4;22,27,30,44);SE=4.716244(n=3;186,199,348);SE=52.0735.9(n=21);SE=2.471242.5(n=2;51.0,34.0);SE=8.51357.5(n=2;52.0,63.0);SE=5.5配制物实施例1制备含2%(w/w)2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并材料、乙醇(200Proof),USP(AaperAlcoholandChemicalCo,KY)丙二醇(纯度〉99.5%)，ACS试剂(Sigma-AldrichChemicals,St丄ouis,MO)聚乙二醇(PEG400)，分子量380-420(MallinkrodtBakerInc.，Phillipsburg,NJ)羟丙基纤维素(KLUCEL⑧HF)(HerculesIncorporated,Wilmington,DE)水，Chromosolve⑧用于HPLC(Sigma-AldrichChemicals,St.Louis,MO)苯甲醇(纯度〉99%)(Sigma-AldrichChemicals,St.Louis,MO)步骤将2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶(2g)转移至150-ml玻璃瓶中。然后向瓶中添加丙二醇(30g)、聚乙二醇(30g)、水(IOg)和苯甲醇(2g)和乙醇(20g)。将混合物搅拌2小时。然后向溶液中添加KLUCELHF(500mg)，随后添加适量乙醇至100g。将溶液搅拌过夜，得到含2%(w/w)2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩射3,2-c]吡啶的凝胶。配制物实施例2制备含1%(w/w)2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶的凝胶。材料乙醇(200Proof),USP(AaperAlcoholandChemicalCo,KY)丙二醇(纯度>99.5%)，ACS试剂(Sigma-AldrichChemicals,St丄ouis，MO)聚乙二醇(PEG400)，分子量380-420(MallinkrodtBakerInc.,Phillipsburg,NJ)轻丙基纤维素(KLUCEL⑧HF)(HerculesIncorporated,Wilmington,DE)zK，Chromosolve⑧用于HPLC(Sigma-AldrichChemicals,St.Louis,MO)苯甲醇(纯度>99%)(Sigma-AldrichChemicals,St.Louis,MO)歩骤将2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]-噻吩并[3,2-c]吡啶(1g)转移至150-ml玻璃瓶中。然后向瓶中添加丙二醇(30g)、聚乙二醇(30g)、水(10g)和苯甲醇(2g)和乙醇(20g)。将混合物搅拌30分钟到1小时。然后向溶液中添加KLUCELHF(500mg)，随后添加适量乙醇至100g。将溶液搅拌过夜，得到含1%(w/w)2-[4-甲基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2H-吡62唑-3-基]-噻吩并[3,2-C]吡啶的凝胶。应当理解本文所述的实施例和实施方案仅用于阐述的目的，受其启发的多种修饰或改变对本领域技术人员而言是显然的，并且旨在被包括在该申请的思想和范围以及附带的权利要求书的范围内。本文中引用的所有出版物、专利和专利申请都以其整体通过参考并入本文用于所有的目的。权利要求1.式I的化合物或其可药用盐，其中R1是噻吩并[3，2-c]吡啶基、噻吩并[3，2-b]吡啶基、噻吩并[2，3-c]吡啶基或噻吩并[2，3-b]吡啶基，其各自可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由C1-C3-烷基、-(C1-C3-烷基)-S-(C1-C3-烷基)、-S-C1-C3-烷基、-(C1-C3-烷基)-O-(C1-C3-烷基)、-O-C1-C3-烷基、-C(O)O-C1-C3-烷基、-C(O)O-H、-C(O)NR30R31、卤素、-CN、-OH组成的组，其中R30和R31各自独立地选自由H、和C1-C3烷基-OH、C1-C3-烷基、卤素、和-O-C1-C3-烷基组成的组；R2和R3独立地选自由氢、C1-C3-烷基、-(C1-C3-烷基)-S-(C1-C3-烷基)、-S-C1-C3-烷基、-(C1-C3-烷基)-O-(C1-C3-烷基)、-O-C1-C3-烷基、-C(O)O-C1-C3-烷基、-C(O)O-H、-C(O)NR30R31、卤素、-CN、-OH和C3-C6-环烷基组成的组，其中R30和R31各自独立地选自由H和C1-C3烷基组成的组；或R2和R3可一起形成5或6元杂芳基、苯基、C4-C6-环烷基或4-6-元杂环烷基，其中所述C4-C6-环烷基或4-6-元杂环烷基可选地被一个到三个独立地选自卤素、-OH、氧代和C1-C3烷基的取代基取代，其中所述5或6元杂芳基或苯基可选地被一个到三个独立地选自卤素、-CN、-OH、-O-C1-C3烷基和C1-C3烷基的取代基取代；且R4、R5、R6和R7选自由H、-OH、C3-环烷基、C1-C3-烷基、-(C1-C3-烷基)-S-(C1-C3-烷基)、-S-C1-C3-烷基、-(C1-C3-烷基)-O-(C1-C3-烷基)、-O-C1-C3-烷基、-C(O)O-C1-C3-烷基、-C(O)O-H、-C(O)NR30R31、卤素、-CN、-OH组成的组，其中R30和R31各自独立地选自由H、和C1-C3烷基C1-C3-烷基、-O-C1-C3-烷基和卤素组成的组。2.权利要求1的化合物或其可药用盐，其中W是噻吩并[3,2-c]吡啶基或噻吩并[2,3-c]吡啶基，其可选地被一个到三个取代基取代，所述取代基各自独立地选自由-OH、C厂C3烷基、卤素和-0-CrC3垸基组成的组。3.权利要求1或2的化合物或其可药用盐，其中W和R独立地选自由氢、Q-C3-垸基、-((31《3-烷基)-0-((:1-(:3-烷基)、-O-C广CV烷基、-C(O)O-C广C3-烷基、-C(O)O-H、-C(O)NR30R31、卣素、-CN、-OH和C3-C6-环烷基组成的组，其中R"和R"各自独立地选自由H和Q-C3烷基组成的组。4.权利要求1、2或3的化合物或其可药用盐，其中112和R独立地选自由氢和CrCV烷基组成的组。5.权利要求1、2、3或4的化合物或其可药用盐，其中112是CrC2垸基且RS是氢。6.权利要求1的化合物，其中所述化合物选自由以下化合物组成的组2-[l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；2-[3,4-二甲基-1-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；2—[3-甲基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；2-[3-乙基-l-(6-甲基吡啶-2-基)-m-吡唑-5-基]噻吩并[3，2-c]吡啶；2-[4-乙基小(6-甲基吡啶-2-基)-lH-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶；及其可药用盐。7.权利要求1的化合物，其中所述化合物是2-[4-甲基-2-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐。8.2-[4-甲基-2-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐。9.一种抑制瘢痕形成的方法，包括对需要这类治疗的哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐。10.2-[4-甲基-2-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑-3-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐在制造药物中的用途，所述药物用于抑制瘢痕形成。11.一种药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐，和可药用的赋形剂。12.权利要求1的药物组合物，其中所述化合物是2-[4-甲基-2-(6-甲基吡啶-2-基)-2H-吡唑-5-基]噻吩并[3,2-c]吡啶或其可药用盐。13.—种局部药物组合物，包含治疗有效量的权利要求l、2、3、4、5、6、7或8中任一项的化合物或其可药用盐，和适合局部应用的可药用赋形剂。全文摘要本发明提供式I的化合物及其可药用盐，其中R¹、R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶及R⁷具有说明书中对其定义的任何值，及其可药用盐，所述化合物及其可药用盐适合在包含一种或多种式I化合物的TGFβ-组合物的治疗中用作治疗剂。文档编号C07D495/04GK101528752SQ200780038650公开日2009年9月9日申请日期2007年10月4日优先权日2006年10月16日发明者惠芬·陈,斯蒂芬·道格拉斯·巴雷特,詹姆士·B·克莱默,马克·劳伦斯·布莱斯申请人:辉瑞产品公司