IKK-β丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶抑制剂的制作方法

专利名称：IKK-β丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及的化合物可用于在体外或体内抑制组IKK尤其是IKKβ活性。
含有本发明化合物以及一种或多种药学上可接受的载体和赋形剂的药物组合物也是本发明的一部分。
在本发明的一个方面，本发明的化合物可用于制备组合物以治疗肿瘤性/增生性疾病、自身免疫性疾病，尤其是上述那些IKK尤其是IKKβ活性发挥作用的疾病。
另一方面，本发明提供了一种治疗上述疾病类型的方法，所述方法包括给予患有这种疾病的对象有效量的如上文定义的式(IA)或(IB)的化合物。
术语 文中，术语“(Ca-Cb)烷基”，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子的直链和支链烷基。因此，例如当a是1而b是6时，该术语包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
文中，术语“二价(Ca-Cb)亚烷基”，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子和两个不饱和化学价的饱和烃链。
文中，术语“(Ca-Cb)烯基”，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子并具有至少一个合适的E或Z立体化学的双键的直链和支链烯基部分。该术语包括，例如，乙烯基、烯丙基、1-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。
文中，术语″二价(Ca-Cb)亚烯基″表示含有a-b个碳原子、至少一个双键和两个不饱和化学价的烃链。
文中，术语″(Ca-Cb)炔基″，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子且还含有一个三键的直链和支链烃基。该术语可包括，例如，乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基和5-己炔基。
文中，术语″二价(Ca-Cb)亚炔基″，其中a和b是整数，表示含有a-b个碳原子和至少一个三键的二价烃链。
文中，术语″碳环″指含有最多达16个环原子且所有环原子均为碳原子的单环、二环或三环基团，并包括芳基和环烷基。
文中，术语″环烷基″指含有3-8个碳原子的单环的饱和碳环基团，该术语包括，例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。
文中，非限制性术语″芳基″指单环、二环或三环的碳环芳香基团，并包括含有两个通过共价键直接相连的单环碳环芳香环的基团。这种基团的例子有苯基、联苯基和萘基。
文中，非限制性术语″杂芳基″指含有一个或多个选自S、N或O的杂原子的单环、二环或三环芳香基团，并包括含有通过共价键直接相连的两个此类单环或者一个此类单环和一个单环芳基环的基团。这种基团的例子有噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、异噻唑基、苯并异噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、异噁唑基、苯并异噁唑基、异噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。
文中，非限制性术语″杂环基″或″杂环″包括上面定义的″杂芳基″，其非芳香含义包括含有一个或多个选自S、N或O的杂原子的单环、二环或三环非芳香基团，并包括由含有一个或多个这种杂原子的单环非芳香基团构成的基团，所述单环非芳香基团共价连接到另一个此类基团或连接到单环碳环基团。这种基团的例子有吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、吗啉基、哌嗪基、吲哚基、吗啉基、苯并呋喃基、吡喃基、异噁唑基、苯并咪唑基、亚甲二氧基苯基、亚乙二氧基苯基、马来酰亚胺基(maleimido)和琥珀酰亚胺基。
“二价亚苯基、亚吡啶基(pyridinylene)、亚嘧啶基(pyrimidinylene)或亚吡嗪基(pyrazinylene)基团”是有两个不饱和价的苯环、吡啶环、嘧啶环或吡嗪环，包括1，3-亚苯基、1，4-亚苯基，和以下这些
除非当其出现时文中另有说明，术语″取代的″用于本文所述的任何部分时表示被最多4个相容的取代基取代，各取代基独立为，例如，(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷氧基，羟基，羟基(C1-C6)烷基，巯基，巯基(C1-C6)烷基，(C1-C6)烷硫基，苯基，卤素(包括氟、溴和氯)，三氟甲基，三氟甲氧基，硝基，腈(-CN)，氧代，-COOH，-COORA，-CORA，-SO2RA，-CONH2，-SO2NH2，-CONHRA，-SO2NHRA，-CONRARB，-SO2NRARB，-NH2，-NHRA，-NRARB，-OCONH2，-OCONHRA，-OCONRARB，-NHCORA，-NHCOORA，-NRBCOORA，-NHSO2ORA，-NRBSO2OH，-NRBSO2ORA，-NHCONH2，-NRACONH2，-NHCONHRB，-NRACONHRB，-NHCONRARB或-NRACONRARB，其中，RA和RB独立为(C1-C6)烷基，(C3-C6)环烷基，苯基或含有5或6个环原子的单环杂芳基，或者当RA和RB连接到相同氮原子时形成环状氨基(例如吗啉代，哌啶基，哌嗪基或四氢吡咯基)。“任选的取代基”可以是上述取代基之一。
文中，术语“盐”包括碱加成盐、酸加成盐和季盐(quaternary salt)。酸性的本发明的化合物可与碱、有机碱形成盐，包括药学上可接受的盐，所述碱例如碱金属的氢氧化物如氢氧化钠和氢氧化钾；碱土金属的氢氧化物如氢氧化钙、氢氧化钡和氢氧化镁；所述有机碱例如N-甲基-D-葡糖胺、胆碱三(羟甲基)氨基-甲烷、L-精氨酸、L-赖氨酸、N-乙基哌啶、二苄基胺等。那些碱性的化合物(IA)和(IB)可与无机酸和有机酸形成盐，包括药学上可接受的盐，所述无机酸例如氢卤酸如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等，所述有机酸例如乙酸、酒石酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苹果酸、水杨酸、柠檬酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、苯甲酸、苯磺酸、谷氨酸、乳酸和扁桃酸等。
预计本发明化合物可以水合物或溶剂合物形式回收。术语‘溶剂合物’在文中用来描述包含本发明化合物和化学计量量的一种或多种药学上可接受的溶剂分子如乙醇的分子复合物。当所述溶剂是水时采用术语‘水合物’。
由于存在不对称碳原子，含有一个或多个实际的或潜在的手性中心的本发明的化合物可作为许多在各手性中心上具有R或S立体化学的非对映异构体存在。本发明包括所有这些非对映异构体和它们的混合物。
术语“酯”或“酯基”或“酯化的羧基”与上述取代基R1相连表示基团RxO(C＝O)-，其中R9是从理论上说衍生自醇RxOH的酯的特征性基团。
现在将更加详细地讨论本发明化合物中的可变取代基和基团 取代基R7 R7是H或任选取代的(C1-C6)烷基，如甲基、乙基或者正丙基和异丙基。目前优选R7是氢。
环A 环A是任选取代的有5-13个原子的二价芳基或杂芳基环，如单环5-或6-元环或者二环5，6-、6，6-或5，5-环系统。例子包括二价亚苯基、亚吡啶基、亚嘧啶基和亚吡嗪基。目前优选1，4-亚苯基或1，3-亚苯基。环A中的任选取代基可选自，例如，氟、氯、甲基、三氟甲基等。
式-(CH2)z-X1-L1-Y-NHCHR1R2的基团Z Z中的基团R1 R1是羧酸基，或可被一种或多种胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基。能够将本发明化合物的酯基水解成相应的酸的细胞内羧酸酯酶包括三种已知的人类的酶的同种型hCE-1、hCE-2和hCE-3。尽管这些酶被认为是主要的酶，但其它的酶如联苯基水解酶(BPH)也具有水解酯的作用。通常，如果羧酸酯酶将游离的氨基酸酯水解成母体酸，则当共价结合到IKK抑制剂时羧酸酯酶也会水解酯基序(ester motif)。因此，本文所述的破细胞测定法(broken cell assay)提供了一种直接、快速且简便的首次筛选具有所需水解曲线的酯的方法。当将用这种方法选出的酯基序通过选择性结合化学结合到调节剂时可采用相同的羧酸酯酶测定法再次测定，以证实它仍旧是该背景下的羧酸酯酶底物。
为被细胞内羧酸酯酶水解，特定的酯基R1的例子包括式-(C＝O)OR14的基团，其中，R14是R8R9R10C-，其中 (i)R8是氢或任选取代的(C1-C3)烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-或(C2-C3)烯基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立为0或1，Z1是-O-、-S-或-NR11-，其中R11是氢或(C1-C3)烷基；且R9和R10独立为氢或(C1-C3)烷基-； (ii)R8是氢或任选取代的R12R13N-(C1-C3)烷基-，其中R12是氢或(C1-C3)烷基和R13是氢或(C1-C3)烷基；或R12和R13与它们所结合的氮一起形成任选取代的5-或6-个环原子的单环杂环或8-10个环原子的二环杂环系统，且R9和R10独立为氢或(C1-C3)烷基-；或 (iii)R8和R9与它们所结合的碳一起形成任选取代的3-7个环原子的单环碳环或8-10个环原子的二环碳环系统，且R10是氢。
这些类别中，R10通常是氢。R14的具体例子包括甲基，乙基，正或异丙基，正、仲或叔丁基，环己基，烯丙基，苯基，苄基，2-、3-或4-吡啶基甲基，N-甲基哌啶-4-基，四氢呋喃-3-基，甲氧基乙基，茚满基，降冰片基，二甲基氨基乙基，或吗啉代乙基。目前优选R14是环戊基或叔丁基。
已知巨噬细胞通过释放细胞因子，尤其是TNFα和IL-1而在炎性疾病中发挥关键作用(范落恩(van Roon)等，Arthritis and Rheumatism，2003，1229-1238)。在类风湿性关节炎中，它们是维持关节炎症和关节破坏的主要贡献者。巨噬细胞也参与肿瘤的生长和发展(那第你(Naldini)和卡落卡(Carraro)，Curr DrugTargets Inflamm Allergy，2005，3-8)。因此，选择性靶向巨噬细胞增殖的试剂对于治疗癌症和自身免疫性疾病很有价值。预计靶向特定细胞类型能降低副作用。发明人已经发现了将抑制剂靶向表达hCE-1的细胞尤其是巨噬细胞以及其他衍生自骨髓-单核细胞谱系的细胞如单核细胞、破骨细胞和树突细胞的方法。该方法基于以下发现，即酯酶基序连接抑制剂的方式决定了它是否被所有三种人羧酸酯酶水解或仅被hCE-1水解，因此是否在不同细胞类型中累积。具体地说，已经发现巨噬细胞以及其他衍生自骨髓-单核细胞谱系的细胞，所述细胞可以是正常或癌性的，含有人羧酸酯酶hCE-1而其它细胞类型不含有。在通式(IA)和(IB)中，当酯酶基序R1CH(R2)NH-的氮不直接连接到羰基(-C(＝O)-)时，即当Y不是-C(＝O)、-C(＝O)O-或-C(＝O)NR3-基团时，该酯将仅被hCE-1水解，因此该抑制剂选择性累积于与巨噬细胞相关的细胞内。
Z中的氨基酸侧链R2 因为需要使酯基R1被细胞内羧酸酯酶水解，侧链基团R2的种类对于非巨噬细胞选择性化合物并不关键。对于巨噬细胞选择性化合物，优选的侧链是缬氨酸、环己基甘氨酸、叔丁基丝氨酸、叔丁基半胱氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和苯基甘氨酸。
氨基酸侧链的例子包括(C1-C6)烷基，苯基，2-、3-或4-羟基苯基，2-、3-或4-甲氧基苯基，2-、3-或4-吡啶基甲基，苄基，苯乙基，2-、3-或4-羟基苄基，2-、3-或4-苄氧基苄基，2-、3-或4-(C1-C6)烷氧基苄基，以及苄氧基(C1-C6烷基)-基团； 天然α氨基酸的特征性基团，其中的任何官能团可被保护； 基团-[Alk]nR16，其中，Alk是任选被一个或多个-O-或-S-原子或-N(R17)-基团[其中，R17是氢原子或(C1-C6)烷基]打断的(C1-C6)烷基或(C2-C6)烯基或，n是0或1，R16是任选取代的环烷基或环烯基； 在苯环中被式-OCH2COR18的基团取代的苄基，其中R18是羟基、氨基、(C1-C6)烷氧基、苯基(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基氨基、二((C1-C6)烷基)氨基、苯基(C1-C6)烷基氨基、氨基酸或酰基卤的残基、酯或其酰胺衍生物，所述残基通过酰胺键连接，所述氨基酸选自甘氨酸、α或β丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、谷氨酸或天冬氨酸； 在杂环中未被取代或被以下基团单-或二-取代的杂环(C1-C6)烷基卤素、硝基、羧基、(C1-C6)烷氧基、氰基、(C1-C6)烷酰基、三氟甲基(C1-C6)烷基、羟基、甲酰基、氨基、(C1-C6)烷基氨基、二-(C1-C6)烷基氨基、巯基、(C1-C6)烷硫基、羟基(C1-C6)烷基、巯基(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基苯基甲基；和 基团-CRaRbRc，其中 Ra、Rb和Rc各自独立为氢、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基、(C3-C8)环烷基；或 Rc是氢，Ra和Rb独立为苯基或杂芳基，如吡啶基；或 Rc是氢、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基或(C3-C8)环烷基，Ra和Rb与它们所结合的碳原子一起形成3-8元环烷基或5-6元杂环；或 Ra、Rb和Rc与它们所结合的碳原子一起形成三环(例如金刚烷基)；或 Ra和Rb各自独立为(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、苯基(C1-C6)烷基、或是除氢之外的如下文对Rc定义的基团，或者Ra和Rb与它们所结合的碳原子一起形成环烷基或杂环，且Rc是氢、-OH、-SH、卤素、-CN、-CO2H、(C1-C4)全氟烷基、-CH2OH、-CO2(C1-C6)烷基、-O(C1-C6)烷基、-O(C2-C6)烯基、-S(C1-C6)烷基、-SO(C1-C6)烷基、-SO2(C1-C6)烷基、-S(C2-C6)烯基、-SO(C2-C6)烯基、-SO2(C2-C6)烯基或基团-Q-W，其中，Q代表键或-O-、-S-、-SO-或-SO2-，W代表苯基、苯基烷基、(C3-C8)环烷基、(C3-C8)环烷基烷基、(C4-C8)环烯基、(C4-C8)环烯基烷基、杂芳基或杂芳基烷基，基团W可任选被一个或多个独立选自下组的取代基取代羟基、卤素、-CN、-CO2H、-CO2(C1-C6)烷基、-CONH2、-CONH(C1-C6)烷基、-CONH(C1-C6烷基)2、-CHO、-CH2OH、(C1-C4)全氟烷基、-O(C1-C6)烷基、-S(C1-C6)烷基、-SO(C1-C6)烷基、-SO2(C1-C6)烷基、-NO2、-NH2、-NH(C1-C6)烷基、-N((C1-C6)烷基)2、-NHCO(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C8)环烷基、(C4-C8)环烯基、苯基或苄基。
具体的R2基团的例子包括氢(甘氨酸“侧链”)、苄基、苯基、环己基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、叔丁氧基甲基、异丁基、仲丁基、叔丁基、1-苄硫基-1-甲基乙基、1-甲硫基-1-甲基乙基、1-巯基-1-甲基乙基和苯乙基。目前优选的R2基团包括苯基、苄基以及异丁基、环己基和叔丁氧基甲基。
对于要全身给予的本发明的化合物，优选被羧酸酯酶断裂的速率慢的酯，因为这种酯不易于被系统前代谢。因此它们完整到达其靶组织的能力增强了，且所述酯可在靶组织的细胞内被转化成酸产物。然而，对于局部给药而言，此时酯被直接施加于靶组织或通过例如吸入直接到达靶组织，通常需要这种酯被酯酶快速断裂，以使全身暴露和随后不希望的副作用最小。在本发明的化合物中，如果邻近α氨基酸酯α碳原子的碳原子被单取代，即R2是CH2Rz(Rz为单取代基)，则与上述碳原子如果被二取代或三取代(例如R2是苯基或环己基的情况)相比，这种酯趋于更快被断裂。
Z中的基团-(CH2)z-X1-L1-Y- 该基团(或键)来自于选择用来连接氨基酸酯基序R1CH(R2)NH-与分子其余部分。显然，用于该偶联的化学方法可以非常多，因此z、L1、X1和Y可以有许多组合。构成氨基酸酯基序与分子其余部分之间的连接化学的变量的精确组合将通常与作为一个整体的化合物的结合模式无关。另一方面，在一些情况下，连接化学选择与酶采取其它结合相互作用，从而增强了结合。
还应当注意，当氨基酸酯基序与分子其余部分之间的键不是细胞内肽酶活性(这种活性可导致从分子中切割下氨基酸)的底物时，上述氨基酸酯基序的益处(易于进入细胞、在细胞内被羧酸酯酶水解、以及在细胞内累积活性羧酸水解产物)最大。当然，也可将该化合物与破裂的细胞内容物一起孵育并分析任何此类切割来方便地测量对细胞内肽酶的稳定性。
当头脑中有了上述一般概念时，接下来就可以考虑构成基团-(CH2)z-X1-L1-Y-的各种变量 z可以是0或1； 在基团L1中，当Alk1和Alk2基团存在时，其例子包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH＝CH-、-CH＝CHCH2-、-CH2CH＝CH-、CH2CH＝CHCH2-、-C≡C-、-C≡CCH2-、CH2C≡C-和CH2C≡CCH2。Alk1和Alk2的其它例子包括-CH2W-、-CH2CH2W-、-CH2CH2WCH2-、-CH2CH2WCH(CH3)-、-CH2WCH2CH2-、-CH2WCH2CH2WCH2-和-WCH2CH2-，其中W是-O-、-S-、-NH-、-N(CH3)-或-CH2CH2N(CH2CH2OH)CH2-。Alk1和Alk2进一步的例子包括二价环丙基、环戊基和环己基。
Alk1和Alk2当存在时可以是支链烷基，如-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、或者任何取向的-CH2CH(CH3)-、-CH2C(CH3)2-。
在L1中，当n是0且m和p中至少一个是1时，所述基团是烃链(任选被取代，且可能含有醚、硫醚或氨基连接)。目前优选L1中没有任选的取代基。当m和p都是0时，L1是含有5-13个环原子的二价单环或双环碳环或杂环基团(任选被取代，但目前优选是未取代的，并可能通过醚键、硫醚键或氨基键连接相邻原子(注意此时Q是-Q2-X2-，如果可用于本申请)。当n是1且m和p中至少有一个是1时，L1是包含一条或多条烃链(任选被取代并可能具有醚键、硫醚键或氨基键)以及含有5-13个环原子的单环或双环碳环或杂环基团(任选被取代，但目前优选是未取代的，并可能通过醚键、硫醚键或氨基键连接相邻原子)的二价基团。
当Q存在时它可以是，例如，二价苯基、萘基、环丙基、环戊基或环己基，或是含有5-13个环成员的单环或二环杂环基团，如哌啶基、哌嗪基、吲哚基、吡啶基、噻吩基或吡咯基。
在本发明的一些实施方案中，L1、m和p可以是0而n为1。在其它实施方案中，n和p可以是0而m为1。在其它实施方案中，m、n和p可以都是0。再在其它实施方案中，m可以是0，n可以是1，而Q为单环杂环基团，且p可以是0或1。具体地说，Alk1和Alk2当存在时可以选自-CH2-、-CH2CH2-和-CH2CH2CH2-，而Q当存在时可以选自
其中E和G独立为CH或N。
X1代表键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5独立为氢或任选取代的C1-C6烷基如甲基或乙基。
Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基如甲基和乙基； 通常z将是0，而X1和Y将各自简单地是键，因此氨基酸酯基序R1R2CHNH-通过如上文定义和讨论的基团L1连接于含有X的环。
在本发明化合物的具体例子中，基团R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z-选自R1R2CHNH-(CH2)a-、R1R2CHNH-(CH2)aO-或R1R2CHNH-CH2CH＝CHCH2-，其中a是1、2、3、4或5。
在其他本发明化合物中，R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z-选自R1R2CHNHSO2-、R1R2CHNHCO-、
具体的本发明的化合物包括这里例举的那些，它们的盐、N-氧化物、水合物和溶剂合物。
如上所述，本发明所涉及的化合物是IKK、尤其是IKKβ激酶活性抑制剂，因此可用于治疗受IKK活性和NF-kB级联调节的疾病。这种疾病包括肿瘤性/增生性疾病、免疫疾病和炎性疾病。具体地说，所述化合物的用途包括治疗癌症如肝细胞癌或黑色素瘤，但也包括肠癌、卵巢癌、头颈癌和宫颈鳞状细胞癌、胃癌或肺癌、间变性少突神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤或髓母细胞瘤；以及治疗类风湿性关节炎、硬皮病、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、多发性硬化、糖尿病、特应性皮炎、移植物抗宿主病、或系统性红斑狼疮。
本发明涉及的化合物可被制成通过任何与其药代动力学特性一致的任何途径给予。可口服给予的组合物的形式可以是片剂，胶囊，粉末，颗粒，锭剂，液体或凝胶制品如口服、局部或无菌肠胃外溶液或悬浮液。供口服给药的片剂或胶囊可采用单位剂型，并可含有常规赋形剂，如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶或聚乙烯吡咯烷酮；填料，例如乳糖、蔗糖、玉米淀粉、磷酸钙、山梨糖醇或甘氨酸；压片润滑剂，例如硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇或二氧化硅；崩解剂，例如马铃薯淀粉，或可接受的润湿剂如月桂基硫酸钠。可按照常规制药实践中熟知的方法将片剂包衣。口服液体制剂的形式可以是，例如，水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可呈现为在使用前用水或其它合适载体重建的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，如悬浮剂，例如山梨糖醇、糖浆、甲基纤维素、葡萄糖浆、明胶、氢化食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、去水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(可包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、油性酯如甘油、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，需要的话还可含有常规的调味剂或着色剂。
当局部施用于皮肤时，可将药物制成霜剂、洗剂或软膏剂。可用于药物的霜剂或软膏剂配方是本领域熟知的常规配方，例如标准药物教科书如《英国药典》(British Pharmacopoeia)中描述的配方。
本发明的化合物可采取吸入形式给予。产生气溶胶时可采用(例如)压力驱动的喷射雾化器或超声雾化器，优选采用推进剂驱动的计量式气雾剂或者不采用推进剂，从例如吸入胶囊或其它“干粉”递送系统给予微粉化活性化合物。
可根据采用的吸入器系统按照上面的描述给予活性化合物。除了活性化合物，给药形式中可任选包含赋形剂，例如推进剂(例如，在计量式气雾剂中为Frigen)、表面活性物质、乳化剂、稳定剂、防腐剂、调味剂和填料(例如，在干粉吸入器中为乳糖)，或者，如果合适的话，其他活性化合物。
为了吸入，大量系统都是适用的，这些装置能产生最佳粒度的气溶胶并采用适合患者的吸入技术给予。除了采用适配器(间隔物(spacer)、扩展器)和梨形容器(例如

)以及发射吹入喷雾的自动装置

为给予经过计量的气溶胶，尤其是采用干粉吸入器时，许多技术方案是适用的(例如，

或者例EP-A-0505321中描述的吸入器)。
为局部施用于眼睛，可用合适的水性或非水性无菌载体将药物制成溶液或悬浮液。也可含有添加剂，例如，缓冲剂，如偏亚硫酸氢钠或依地酸二钠；防腐剂，包括杀菌剂和杀真菌剂如醋酸苯汞或硝酸苯汞、苯扎氯铵或氯己定；以及增稠剂，如羟丙甲纤维素。
也可采用无菌介质肠胃外给予活性成分。根据所用载体和浓度，药物可悬浮于或溶于载体中。有利的是，佐剂如局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可溶解于载体中。
本发明的化合物可与许多抑制药物活性物质结合使用。例如，本发明的化合物可与细胞毒素、HDAC抑制剂、激酶抑制剂、氨基肽酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、bcl-2拮抗剂、mTor抑制剂和单克隆抗体(例如定位于生长因子受体的那些)一起使用。优选的细胞毒剂包括，例如，紫杉烷类、铂类、抗代谢物如5-氟尿嘧啶、拓扑异构酶抑制剂等。本发明的药物包含式(IA)或(IB)的氨基酸衍生物、其互变异构体或其药学上可接受的盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物，因此通常还包含细胞毒素、HDAC抑制剂、激酶抑制剂、氨基肽酶抑制剂和/或单克隆抗体。
此外，本发明提供了含有以下组分的药物组合物 (a)式(IA)或(IB)的氨基酸衍生物或其药学上可接受的盐、N-氧化物，水合物或溶剂合物 (b)细胞毒剂、HDAC抑制剂、激酶抑制剂、氨基肽酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、bcl-2拮抗剂、mTor抑制剂和/或单克隆抗体；和 (c)药学上可接受的载体或稀释剂。
还提供了包含以下组分的产品 (a)式(IA)或(IB)的氨基酸衍生物或其药学上可接受的盐、N-氧化物，水合物或溶剂合物和 (b)细胞毒剂、HDAC抑制剂、激酶抑制剂、氨基肽酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、bcl-2拮抗剂、mTor抑制剂和/或单克隆抗体， 这两种组分可单独、同时或依次用于人体或动物体的治疗。
合成 有多种合成策略可用来合成本发明所涉及的化合物，但它们都依赖于已知的化学方法并为合成有机化学家所知晓。因此可按照标准文献中描述的并为精通本领域的技术人员熟知方法合成式(I)的化合物。典型的文献来源有“高级有机化学(Advanced organic chemistry)”，第四版(威利出版社(Wiley))，J March，“综合有机转化(Comprehensive Organic Transformation)”，第二版(威利出版社)，R.C.拉洛克(R.C.Larock)，“杂环化学手册(Handbook of HeterocyclicChemistry)”，第二版(帕加蒙出版社(Pergamon))，A.R.卡提示基(A.R.Katritzky))，例如在“Synthesis”、“Acc.Chem.Res.”、“Chem.Rev”中找到的综述文章，或者通过标准在线文献检索找到的第一文献来源或来自诸如“ChemicalAbstracts”或“Beilstein”等第二文献来源中找到的论文。
本发明的化合物可通过许多方法来制备，所述方法在下文中一般描述并在下文的实施例中更加具体描述。在下面描述的反应中，可能需要保护最终产物中所需的反应性官能团，例如羟基、氨基和羧基，以避免它们参与不必要的反应[参见，例如，格林，T.W.(Greene，T.W.)，“有机合成保护基(Protecting Groupsin Organic Synthesis)”，约翰威利父子公司(John Wiley and Sons)，1999]。常规保护基可与标准方法结合使用。一些情况下，去保护可能是合成通式(IA)或(IB)的化合物的最终步骤，下文描述的本发明的方法应理解为延伸至去除保护基。
如上所述，本发明所涉及的化合物是IkB家族抑制剂，名为IKK-α和IKK-β，因此可用于治疗人类或其他动物的细胞增殖疾病如癌症，以及用于治疗炎症。
缩写 MeOH＝甲醇 EtOH＝乙醇 EtOAc＝乙酸乙酯 DCM＝二氯甲烷 DIBAL＝二异丁基氢化铵 DMF＝二甲基甲酰胺 DME＝甲醚 DMSO＝二甲亚砜 DMAP＝二甲基氨基吡啶 TFA＝三氟乙酸 THF＝四氢呋喃 Na2CO3＝碳酸钠 HCl＝盐酸 DIPEA＝二异丙基乙胺 LiHMDS＝二(三甲基甲硅烷基)酰胺锂 MP-CNBH3＝大孔三乙基甲基聚苯乙烯氰基硼氢化铵 NaH＝氢化钠 NaOH＝氢氧化钠 NaHCO3＝碳酸氢钠 HCl＝盐酸 Pd/C＝碳载钯 PdCl2(dppf)＝[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)。
EDC＝1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺 KOAc＝乙酸钾 TBAI＝四丁基碘化铵 ml＝毫升 g＝克 mg＝毫克 mol＝摩尔 mmol＝毫摩尔 Sat＝饱和的 LCMS＝高效液相色谱/质谱 NMR＝核磁共振 市售试剂和溶剂(HPLC级)无需进一步纯化即可使用。用Buchi旋转式蒸发仪除去溶剂。微波照射用设定在300W的Discover型CEM进行。用获自Fluorochem的粒度为40-63μ μm(230-400目)的硅胶通过快速层析柱纯化化合物。用制备型HPLC纯化化合物是在Agilent prep系统上进行的，采用反相Agilent prep-C18柱(5μm，50×21.2 mm)，10分钟0-100％B梯度(A＝水/0.1％氨水或0.1％甲酸，B＝乙腈/0.1％氨水或0.1％甲酸)，流速＝28毫升/分钟，在254nm UV检测。
在氘化溶剂中用Bruker 400或300MHz AV光谱仪记录1H NMR谱。化学位移(δ)用用百万分之一份表示。用Kieselgel 60 F254(Merck)板进行薄层层析(TLC)分析并用UV光显色。
分析型HPLC/MS方法如下Agilent Prep-C18柱，5μm(4.6×50mm，流速为2.5毫升/分钟)，用7分钟H2O-MeCN(含0.1％v/v甲酸)梯度洗脱，在254nm UV检测。梯度信息0.0-0.5分钟95％H2O-5％MeCN；0.5-5.0分钟从95％H2O-5％MeCN到5％H2O-95％MeCN；5.0-5.5分钟维持5％H2O-95％MeCN；5.5-5.6分钟维持5％H2O-95％MeCN，流速升至3.5毫升/分钟；5.6-6.6分钟维持5％H2O-95％MeCN，流速为3.5毫升/分钟；6.6-6.75分钟返回95％H2O-5％MeCN，流速为3.5毫升/分钟；6.75-6.9分钟维持95％H2O-5％MeCN，流速为3.5毫升/分钟；6.9-7.0分钟维持95％H2O-5％MeCN，流速降至2.5毫升/分钟。质谱采用Agilent多模式源以正(APCI+ESI+)或负(APCI+ESI-)模式获得。
可用于合成本发明的通式(IA)和(IB)的化合物的这种方法的例子列在下面方案1-9所示的反应中，但不限于此。
方案1列举了制备下述例子的常规合成途径，它采用常规Suzuki化学方法将有关硼酸酯(或酸)中间体(4-11)与中间的噻吩核心(中间体1)偶联起来。

方案1 方案2例举了合成这些苯基取代的噻吩类似物替代方法。

方案2 方案3例举了合成取代的苯基连接基噻吩类似物的方法。

方案3 方案4例举了合成延长的连接基噻吩类似物的方法。

方案4 方案5和6例举了合成延长的氧连接的噻吩类似物的方法。

方案5
方案6 方案7例举了合成另一种烯基连接基噻吩类似物的方法。

方案7 方案8例举了合成烯基连接基噻吩类似物的替代方法。

方案8 方案9例举了合成苯基取代的延伸连接基噻吩类似物的方法。

方案9 中间体 中间体1 5-溴-2-(氨甲酰氨基)噻吩-3-羧酰胺
用方案1中阶段1-4表示的中间体1的合成详细描述于WO03104218。
中间体2 2-(氨甲酰基氨基)-5-(4-甲酰基苯基)噻吩-3-羧酰胺
在DME(50ml)中5-溴-2-(氨甲酰基氨基)噻吩-3-羧酰胺(1.0g，3.79mmol)、4-甲酰基苯基硼酸(0.625g，4.17mmol)和四(三苯基膦)Pd催化剂(0.438g，0.379mmol)的混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(10ml)。反应容器用氮气吹扫并在90℃加热过夜。LCMS显示原料被完全消耗。用旋转式蒸发仪浓缩反应混合物。将所得深棕色残余物溶于DCM(17ml)并与2M氢氧化钠水溶液(8.5ml)一起搅拌20分钟。加入二乙醚(20ml)并将混合物再搅拌30分钟。所得悬浮液超声2分钟。过滤得到沉淀，沉淀用热的二乙醚以得到有色固体(440mg)。
LCMSm/z 288[M-H]+；m/z 290[M+H]+。
中间体3a-3i制备氨基酸酯 途径I.
Route II.
制备的中间体
中间体3a 中间体3b
中间体3c 中间体3d
中间体3e 中间体3f
中间体3g中间体3h中间体3i 列表1 合成列表1列出的化合物 途径I(以中间体3e为例) 阶段1-酯形成
0℃下在(S)-2-叔丁氧基羰基氨基-3-环己基-丙酸(5g，19.4mmol)的DMF(50mL)溶液中加入环戊醇(8.8ml，97.15mmol)、EDCI(4.09g，21.37mmol)，最后加入DMAP(237mg，1.94mmol)。反应混合物被升至室温并搅拌18小时。在真空下除去DMF以得到澄清油状物。该油状物在水和EtOAc之间分离。将有机相干燥(MgSO4)并真空浓缩。粗制萃取物通过柱层析纯化(25％EtOAC庚烷溶液)以得到所需澄清油状产物(14.87g，55％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ；7.09(1H，d)，5.08(1H，t)，3.76(1H，t)，1.50-1.85(10H，br m)，1.39(9H，s)，1.00-1.25(9H，br m)。
阶段2-(2S)-氨基(环己基)乙酸环戊酯盐酸盐(中间体3e)
将阶段1产物(14.87g，45.69mmol)溶于DCM(100mL)并用4M HCl/二噁烷(22.8mL，91.38mmol)处理，将反应混合物室温搅拌24小时。粗制混合物被减压浓缩以得到橙色油状物。将该油状物与Et2O一起研磨以得到白色沉淀。所得沉淀进一步用Et2O洗涤以得到所需白色粉末状产物(7.78 g，65％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ；8.45(3H，br s)，5.22(1H，t)，3.28(1H，d)，1.95-1.50(10H，br m)，1.30-0.90(9H，br m)。
途径II(以中间体3c为例) 阶段1-(1S)-2-(环戊氧基)-2-氧代-1-苯基乙基铵(phenylethanaminium)甲基苯磺酸酯(中间体3c)
在(S)-苯基甘氨酸(5g，33.1mmol)的环己烷(150mL)浆液中加入环戊醇(29.84mL，331mmol)和对甲苯磺酸(6.92g，36.4mmol)。该反应装有Dean-Stark接收器并加热至135℃以完全溶解。12小时后，反应物被冷却至室温导致有白色固体沉淀。将该固体过滤并用EtOAc洗涤，然后减压干燥以得到所需白色粉末状产物(11.01g，85％)。1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ；.8.82(2H，br s)，8.73(1H，br s)，7.47(7H，m)，7.11(2H，d)，5.25(1H，br s)，5.18(1H，m)，2.29(3H，s)，1.87-1.36(8H，m)。
上述中间体的相应的(R)-氨基酸酯可用上述方法的类似方法从相关的市售(R)-氨基酸开始制备。此外，相应的亮氨酸和苯基甘氨酸叔丁酯是市售的并可在适当时直接使用。
中间体4a N-[3-(二羟基硼基)苄基]-L-亮氨酸环戊酯
按照方案2所示合成途径合成中间体4a。
向中间体3a(244.6mg，1.227mmol)和(3-甲酰基苯基)硼酸(184mg，1.227mmol)的DCM(10ml)的溶液中用20分钟分份加入NaBH(OAc)3(780mg，3.68mmol)。将反应物室温搅拌2小时，之后将反应混合物倒入1M HCl(50ml)并用DCM(50ml)洗涤。水相用NaHCO3中和至pH 7并用DCM(2×50ml)萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥并除去溶剂。分离出的产物(270.3mg，0.811mmol，66.1％产率)为无色泡沫状固体，可直接使用。
LCMSm/z 334[M+H]+。
中间体4b [3-({[(1S)-2-(环戊氧基)-2-氧代-1-苯乙基]氨基}甲基)苯基]硼酸
按照与中间体4a类似的合成途径在方案2中用中间体3c合成中间体4b。
LCMSm/z 354[M+H]+。
中间体4c [3-({[(1S)-1-环己基-2-(环戊氧基)-2-氧代乙基]氨基}甲基)苯基]硼酸
按照与中间体4a类似的合成途径在方案2中用中间体3e合成中间体4c。
LCMSm/z 360[M+H]+。
中间体4d O-叔丁基-N-[3-(二羟基硼烷基)苄基]-L-丝氨酸环戊酯
按照与中间体4a类似的合成途径在方案2中用中间体3f合成中间体4d。
LCMSm/z 364[M+H]+。
中间体4e O-叔丁基-N-[3-(二羟基硼烷基)苄基]-L-苏氨酸环戊酯
按照与中间体4a类似的合成途径在方案2中用中间体3g合成中间体4e。
LCMSm/z 322[M+H]+。
中间体4f N-[3-(二羟基硼烷基)苄基]-L-缬氨酸环戊酯
按照与中间体4a类似的合成途径在方案2中用中间体3i合成中间体4f。
LCMSm/z 320[M+H]+。
中间体5a N-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷(dioxaborolan)-2-基)苄基]-L-亮氨酸环戊酯
按照方案3所示合成途径合成中间体5a。
在装有(S)-2-(4-溴-3-氯-苄基氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯(715mg，1.775mmol)，双[频哪醇合(pinacolato)]二硼(90mg，3.55mmol)，PdCl2(dppf)(130mg，0.178mmol)和乙酸钾(348mg，3.55mmol)的烧瓶中加入DMSO(10ml，无水)并用氮气彻底吹扫反应容器。将反应混合物置于预加热至80℃的油浴中。2小时后分析显示除了残余原料有所需产物。将反应物在80℃再放置3小时。将反应混合物冷却至室温并倒入水(10ml)中。产物萃取入Et2O，合并的有机萃取物用水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并除去溶剂。残余物通过柱层析纯化，用10-20％EtOAc的己烷溶液洗脱以得到150mg无色油状物。通过在SCX上捕获和释放进行进一步的纯化得到62mg，0.131mmol，7.4％产率。LCMSm/z 450[M+H]+。
(S)-2-(4-溴-3-氯-苄基氨基)-4-甲基-戊酸环戊酯按下面的描述制备。
在装有4-溴-3-氯-苯醛(0.5g，2.278mmol)和中间体3a(0.537g，2.278mmol)的试管中加入DCM(10ml)并室温搅拌20分钟，之后一次性加入NaBH(OAc)3(1.45g，6.83mmol)。将反应物室温搅拌2小时。将反应混合物倒入2M HCl并用DCM萃取。含水层用NaHCO3中和并重萃取入DCM。合并的有机萃取物用水洗涤，用硫酸镁干燥并真空除去溶剂以得到900mg无色油状物。LCMS分析显示除了未反应的中间体3a有所需产物。产物通过柱层析纯化，用50-100％DCM的己烷溶液洗脱以得到715mg，1.243mmol，54.5％产率无色油状物。LCMSm/z401.8/403.8[M+H]+。
4-溴-3-氯-苯醛按下面的描述制备。
在0℃将4-溴-3-氨基-苯醛(1.39g，6.95mmol)溶于浓HCl(15ml)并用硝酸钠(0.504g，7.30mmol)处理。将反应物搅拌30分钟，然后用30分钟升至室温。将混合物放冷后加入搅拌的处于室温的氯化铜(0.964g，9.74mmol)的浓HCl(10ml)溶液。绿色溶液在60℃加热45分钟，然后冷却。将反应混合物倒入水并萃取入EtOAc。合并的有机层用水、NaHCO3和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空除去溶剂以得到1.2g棕色油状物。产物通过柱层析纯化，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。分离出无色蜡质固体状产物(1.061g，4.50mmol，64.7％产率)。
中间体5b N-[2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苄基]-L-亮氨酸环戊酯
在方案3中用4-溴-2-甲基-苯醛通过中间体5a的类似方法合成 LCMSm/z 430[M+H]+。
中间体6a N-{2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯
按照方案4所示合成途径合成中间体6a。
用氮气吹扫装有(S)-2-[2-(4-溴-苯基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(320mg，0.837mmol)、双[频哪醇合]二硼(319mg，1.255mmol)、PdCl2(dppf)(30mg，5mol％)和KOAc(123mg，1.255mmol)的试管并加入DMSO(无水，2ml)。反应混合物在80℃搅拌5小时并通过LCMS判断反应是否完成。将混合物冷却至室温，倒入水中并用醚萃取。合并的有机层用水(x 3)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发以得到467.2mg深色油状残余物。该深色残余物通过柱层析纯化，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱以得到223 mg无色油状产物(62％)。LCMSm/z 430[M+H]+。
(S)-2-[2-(4-溴-苯基)-乙基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯按下面的描述制备。
在室温、惰性气体下用20分钟在中间体3a(500mg，2.509mmol)和4-溴苯基乙醛(510mg，2.56mmol)的DCM(15ml)溶液中边搅拌边加入NaBH(OAc)3(1.595g，7.53mmol)并室温搅拌30分钟。在反应混合物中加入2M HCl(50ml)并用DCM(50ml×2)萃取。DCM层用硫酸镁干燥并除去溶剂以得到994mg油状无色固体，在SCX上捕获和释放得到淡黄色油状产物(320mg，33％)。LCMSm/z 384[M+H]+。
中间体6b N-{2-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯
在方案4中用4-溴-3-氯-苯基乙醛通过中间体6a的类似方法合成。
LCMSm/z 464[M+H]+。
中间体6c N-{2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛通过中间体6a的类似方法合成。
LCMSm/z 430[M+H]+。
中间体6d(2S)-苯基({2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}氨基)乙酸环戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛和中间体3c通过中间体6a的类似方法合成。
LCMSm/z 450[M+H]+。
中间体6e O-叔丁基-N-{2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-丝氨酸环戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛和中间体3f通过中间体6a的类似方法合成。
LCMSm/z 460[M+H]+。
中间体6f O-叔丁基-N-{2-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-苏氨酸环戊酯
在方案4中用3-溴苯基乙醛和中间体3g通过中间体6a的类似方法合成。
LCMSm/z 474[M+H]+。
中间体7a N-{3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯氧基]丙基}-L-亮氨酸环戊酯
中间体7a的合成途径示于方案5。
在(S)-2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(0.37g，0.897mmol)、双[频哪醇合]二硼(0.684g，2.69mmol)、PdCl2(dppf)(0.066g，0.090mmol)和KOAc(0.264g，2.69mmol)的混合物中加入DMSO(2ml)。混合物用氮气吹扫并置于预加热至80℃的油浴中。4小时后通过LC-MS判断反应是否完成。将混合物冷却至室温并倒入醚和水的混合物中。水相用醚萃取，合并的有机物用水(x 4)和盐水洗涤。干燥和蒸发之后对残余物进行柱层析，用5-10％EtOAc的己烷溶液洗脱。产量＝0.2g，0.435mmol，48.5％产率。LCMSm/z 460[M+H]+。
(S)-2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯按下面的描述制备。
向中间体3a(0.365g，1.833mmol)和3-(4-溴-苯氧基)-丙醛(0.6g，1.833mmol)的DCM(15ml)的溶液中加入NaBH(OAc)3(1.166g，5.50mmol)。在室温搅拌2小时后通过LC-MS判断反应是否完成。在反应混合物中加入1M HCl(10ml)并快速搅拌10分钟。将混合物倒入饱和NaHCO3并用DCM萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥、过滤并蒸发。对残余物进行柱层析，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。产量＝0.375g，0.818mmol，44.6％产率。
LCMSm/z 412和414[M+H]+。
3-(4-溴-苯氧基)-丙醛按下面的描述制备。
将2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基]-[1，3]二氧戊环(1.5g，5.49mmol)溶于丙酮(15ml)并用水(10ml)处理。在该溶液中加入HCl(14.98ml，165mmol)。室温搅拌1小时后通过TLC(20％EtOAc的己烷溶液)判断反应完全。将混合物倒入水中并用醚萃取。合并的有机层用2M NaOH、水和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。产量＝0.6g，1.833mmol，33.4％产率。
2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基]-[1，3]二氧戊环按下面的描述制备。
将DMF(50ml)中的4-溴苯酚(10g，57.8mmol)、TBAI(0.813g，5.78mmol)和K2CO3(7.99g，57.8mmol)的混合物加入2-(3-溴-丙基)-[1，3]二氧戊环(10.19ml，87mmol)。将混合物在预热至50℃的油浴中放置3小时。将混合物冷却至室温，倒入2MNaOH并用醚萃取。合并的有机层进一步用2MNaOH、1M HCl(x 2)、水(x 2)和盐水洗涤。用硫酸镁干燥、过滤并真空蒸发后将残余物吸附到二氧化硅上并进行柱层析，用6％EtOAc的己烷溶液洗脱以得到白色固体。产量＝12.5g，43.5mmol，75％产率。
中间体7b N-{3-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯氧基]丙基}-L-亮氨酸环戊酯
通过中间体7a的类似方法在方案5中用4-溴-3-氯苯酚合成。
LCMSm/z 494[M+H]+。
中间体8a N-{5-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯氧基]戊基}-L-亮氨酸环戊酯
中间体8a的合成途径示于方案6。
在(S)-2-[5-(4-溴-苯氧基)-戊基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯(0.63g，1.430mmol)、双[频哪醇合]二硼(0.908g，3.58mmol)、PdCl2(dppf)(0.105g，0.143mmol)和KOAc(0.351g，3.58mmol)的混合物中加入DMSO(5ml)。混合物用氮气吹扫并置于预热至80℃的油浴。加热4小时后通过LC-MS判断反应完成。将混合物倒入水中并用醚萃取。合并的有机物用水(x 3)和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并减压蒸发，对其进行柱层析，用10％EtOAc的己烷溶液洗脱。产量＝0.61g，1.214mmol，85％产率。LCMS纯度97％m/z 488[M+H]+。
(S)-2-[5-(4-溴-苯氧基)-戊基氨基]-4-甲基-戊酸环戊酯按下面的描述制备。
将DIPEA(2.2ml，13.01mmol)加入DMF(5ml)中的中间体3a(2.3g，9.76mmol)和TBAI(0.458g，3.25mmol)的混合物。在上述混合物中加入1-溴-4-(5-氯-戊氧基)-苯(0.903g，3.25mmol)的DMF(2ml)溶液并置于预热至95℃的油浴。将混合物搅拌过夜。LC-MS显示约60％转化。将混合物倒入水中并用醚萃取，合并的有机层用饱和NaHCO3、水(x 2)和盐水洗涤。干燥(MgSO4)和减压蒸发之后对残余物进行柱层析，用10-15％EtOAc的己烷溶液洗脱。产量＝0.64g，1.381mmol，42.5％产率。
1-溴-4-(5-氯-戊氧基)-苯按照上面已经描述过的合成2-[3-(4-溴-苯氧基)-丙基]-[1，3]二氧戊环的类似过程制备。LCMS纯度95％m/z 440和442[M+H]+。
中间体8b N-{5-[3-氯-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯氧基]戊基}-L-亮氨酸环戊酯
通过中间体8a的类似方法在方案6中用1-溴-2-氯-4-(5-氯-戊氧基)-苯合成。
LCMS纯度98％m/z 522[M+H]+。
中间体9a N-(叔丁氧基羰基)-N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-亮氨酸环戊酯
中间体9a的合成途径示于方案7。
将N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸环戊酯(204mg，0.413mmol)、双[频哪醇合]二硼(157mg，0.619mmol)、乙酸钾(60.7mg，0.619mmol)和PdCl2(dppf)(16.85mg，0.021mmol)的混合物悬浮液DMSO(1.6ml)并用氮气吹扫。将反应混合物加热至油浴温度为50℃并搅拌过夜。将反应混合物在醚和水之间分配。含水层再用一份醚萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩以得到棕色残余物。残余物通过柱层析纯化，用5％乙酸乙酯的异己烷溶液洗脱。分离出无色澄清油状的所需产物(102mg，0.188mmol，46％)。LCMS纯度100％m/z 542.1[M+H]+。
N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸环戊酯按下面的描述制备。
将N-烯丙基-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸环戊酯(1g，2.95mmol)、4-溴-碘苯(0.917g，3.24mmol)、乙酸钯(II)(0.066g，0.295mmol)、TBAI(1.197g，3.24mmol)和碳酸氢钠(0.742g，8.84mmol)的混合物悬浮于无水乙腈(10ml)。混合物用氮气吹扫并置于预热至70℃的油浴中。将反应物搅拌2小时。LCMS证实未反应完全，因此再在反应混合物中加入3mg乙酸钯(II)。再反应3小时后将反应混合物静置并冷却至室温。粗制反应混合物用乙腈洗脱并吸附到二氧化硅上，之后进行柱层析，用5％乙酸乙酯的异己烷溶液洗脱。分离出无色油状所需产物(220mg，0.445mmol，15％产率)。LCMS纯度100％m/z 494.0，496.0[M+H]+。
N-烯丙基-N-(叔丁氧基羰基)-L-亮氨酸环戊酯按下面的描述制备。
将N-烯丙基-L-亮氨酸环戊酯(2g，8.36mmol)和Boc-酐(1.824g，8.36mmol)一起加入试管然后用隔板盖住试管。将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物在醚和水之间分配。有机相依次用1M HCl、饱和NaHCO3和盐水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩以得到无色油状物(2.66g，7.84mmol，94％)。LCMS纯度100％m/z 340.2[M+H]+。
N-烯丙基-L-亮氨酸环戊酯按下面的描述制备。
将水合氢氧化锂(2.72g，64.7mmol)和

分子筛粉末(15g)的悬浮液在DMF(150ml)中搅拌20分钟。加入中间体3a(游离基)(6g，30.1mmol)并继续搅拌40分钟。然后加入烯丙基溴(3.13ml，36.1mmol)并将混合物室温搅拌过夜。LCMS显示有产物形成并有少量二烷基化产物。将混合物过滤，倒入水中并醚萃取(x 3)。合并的有机层用水(x 3)和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。对残余物进行柱层析，用5％EtOAc的己烷溶液洗脱。分离出无色油状产物。产量＝4.34g，18.13mmol，60.2％产率。LCMSm/z 240.1[M+H]+。
中间体9b N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-亮氨酸叔丁酯
中间体9b的合成途径示于方案8。
将双频哪醇合二硼(0.897g，3.53mmol)、PdCl2(dppf)(0.120g，0.165mmol)和KOAc(0.347g，3.53mmol)加入N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸叔丁酯(0.9g，2.354mmol)的DMSO(5ml)溶液，烧瓶用氮气排空和充填。反应物然后在80℃加热3小时。将反应物倒入水(50ml)中并用EtOAc(2×50ml)萃取产物。合并的有机物然后用水(2×25ml)和盐水(25ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空浓缩以得到黑色油状物。粗制材料通过柱层析纯化并用10％EtOAc的异己烷溶液洗脱产物以得到黄色油状物。(0.62g，1.444mmol，61.3％产率)。LCMSm/z 430[M+H]+。
N-[(2E)-3-(4-溴苯基)丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸叔丁酯按下面的描述制备。
在(E)-3-(4-溴-苯基)-丙烯醛(0.75g，3.20mmol)和L-亮氨酸叔丁酯(1.073g，4.80mmol)的混合物中加入THF(20ml)，然后加入约5g 4A分子筛粉末。容器用氮气吹扫并在预热至60℃的油浴中放置70分钟，之后反应完全。混合物用冰浴冷却并用一份Na(OAc)3BH(3.39g，15.99mmol)处理。搅拌30分钟后加入水(1ml)和MeOH(3ml)来帮助溶解。再搅拌40分钟后通过TLC(20％EtOAc的己烷溶液)判断反应完全。将1M HCl(50ml)加入混合物，然后将混合物倒入饱和NaHCO3溶液并用醚萃取。合并的有机萃取物用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发，之后通过柱层析纯化，用10-20％EtOAc的己烷溶液洗脱。产量＝1g，2.354mmol，73.6％产率。LCMSm/z 382[M+H]+。
(E)-3-(4-溴-苯基)-丙烯醛按下面的描述制备。
在(E)-3-(4-溴-苯基)-丙-2-烯-1-醇(1g，4.69mmol)的DME(20ml)溶液中加入二氧化猛(8.16g，94mmol)。室温搅拌1小时后通过TLC(20％EtOAc的己烷溶液)判断反应完成。混合物通过硅藻土垫过滤，用DME(2×15ml)洗涤。真空蒸发后获得无色固体。产量＝0.95g，4.50mmol，96％产率。
(E)-3-(4-溴-苯基)-丙-2-烯-1-醇按下面的描述制备。
在-78℃氮气下用1小时在(E)-3-(4-溴-苯基)-丙烯酸乙基酯(13.5g，52.9mmol)溶液中逐滴加入DIBAL的甲苯溶液(159ml，159mmol)。加完之后将溶液在相同温度下再搅拌1小时，然后用5分钟升至-50℃。在反应混合物升至室温期间逐滴加入1M HCl(200ml)。之后在室温迅速搅拌30分钟，加入EtOAc(500ml)并收集有机层。含水层再用EtOAc萃取。合并的有机相再用1M HCl和盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空蒸发。将残余物与己烷(100ml)一起研磨以得到白色固体，过滤收集该白色固体并用己烷(200ml)洗涤。产量＝9.8g，46.0mmol，87％产率。
中间体9c(2S)-苯基({(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}氨基)乙酸环戊酯
用中间体9b的类似合成途径在方案8中用中间体3c合成中间体9c。
LCMSm/z 462[M+H]+。
中间体9d (2S)-环己基({(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}氨基)乙酸环戊酯
用中间体9b的类似合成途径在方案8中用中间体3e合成中间体9d。
LCMSm/z 468[M+H]+。
中间体9e O-叔丁基-N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-丝氨酸环戊酯
用中间体9b的类似合成途径在方案8中用中间体3f合成中间体9e。
LCMSm/z 472[M+H]+。
中间体9f N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-D-亮氨酸叔丁酯
用中间体9b的类似合成途径在方案8中用环戊基-D-亮氨酸酯合成中间体9f。
LCMSm/z 442[M+H]+。
中间体9g (2S)-环己基({(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}氨基)乙酸叔丁酯
用中间体9b的类似合成途径在方案8中用中间体3h合成中间体9g。
LCMSm/z 468[M+H]+。
中间体9h O-叔丁基-N-{(2E)-3-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-苏氨酸环戊酯
用中间体9b的类似合成途径在方案8中用中间体3g合成中间体9g。
LCMSm/z 486[M+H]+。
中间体10N-{(2E)-3-[3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]丙-2-烯-1-基}-L-亮氨酸环戊酯
用中间体9a的类似合成途径在方案7中用3-溴-碘苯合成中间体10。
LCMSm/z 442[M+H]+。
中间体11a N-{2-[2-氟-5-(((4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯
中间体11a的合成途径示于方案9。
将N-{2-[2-氟-5-溴苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯(450mg，1.124mmol)、双-频哪醇合二硼(428mg，1.686mmol)、PdCl2(dppf)(92mg，0.112mmol)和乙酸钾(276mg，2.81mmol)在干燥容器内合并并用氮气吹扫。加入DMSO(3ml)并将混合物在80℃加热18小时以使反应完全。将混合物在Et2O(50ml)和水(100ml)之间分配并分离各相。水相用Et2O(2×25ml)萃取，合并的有机相用盐水(3×100ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发以得到粗制黄色油状产物。该物质通过柱层析纯化(5-10％EtOAc/异己烷)得到淡黄色油状产物(286mg，0.511mmol，45.5％产率)。m/z 448[M+H]+。
N-{2-[2-氟-5-溴苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯按下面的描述制备。
将(5-溴-2-氟苯基)乙醛(0.336g，1.548mmol)溶于DCM(12ml)并用中间体3a(0.719g，1.935mmol)处理。所得溶液室温搅拌20分钟，然后用三乙氧基硼氢化钠(1.641g，7.74mmol)分多次处理。将混合物室温搅拌2小时以使反应完全。混合物用1M HCl猝灭，然后用NaHCO3溶液中和。混合物用DCM(75ml)稀释并分离各相。水相用DCM(25ml)萃取，合并的有机相用NaHCO3溶液(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发以得到粗制黄色油状产物。该物质通过柱层析纯化(5％EtOAc/异己烷)得到淡黄色油状产物(450mg，0.877mmol，56.6％产率)。m/z 400[M+H]+。
(5-溴-2-氟苯基)乙醛按下面的描述制备。
在0℃用30分钟将4-溴-2-乙烯基-1-氟苯(1.3g，3.23mmol)的DCM(10ml)溶液逐滴加入四乙酸铅(1.434g，3.23mmol)的TFA(5ml)溶液。使混合物升至室温并搅拌1.5小时。TLC分析提示未反应完全，因此将混合物室温搅拌18小时。将混合物倒入水(50ml)中并搅拌10分钟，然后用DCM(50ml)萃取。有机相用NaHCO3溶液(100ml)和盐水(100ml)洗涤，干燥(MgSO4)并真空蒸发以得到粗制黄色油状产物。通过柱层析纯化(0-5％EtOAc/异己烷)得到淡黄色油状产物(336mg，1.548mmol，47.9％产率)。
4-溴-2-乙烯基-1-氟苯按下面的描述制备。
在-10℃用1M LiHMDS(18.47ml，18.47mmol)逐滴处理甲基三苯基鏻溴化物(6.60g，18.47mmol)的THF(40ml)溶液并在此温度下将所得溶液搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。然后逐滴加入5-溴-2-氟苯醛(2.5g，12.31mmol)的THF(10ml)溶液。将混合物在-78℃搅拌10分钟，然后升至室温并再搅拌3小时。将混合物倒入水(200ml)中并萃取入异己烷(2×200ml)。合并的有机相用盐水洗涤(200ml)，干燥(MgSO4)并真空蒸发以得到粗制产物。通过柱层析纯化得到澄清无色油状产物(1.34g，3.33mmol，27.1％产率)。
中间体11b N-{2-[2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯
中间体11b类似于中间体11a在方案9中用5-溴-2-甲基苯醛合成。LCMSm/z 444[M+H]+。
中间体11c N-{2-[2-氯-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环硼烷-2-基)苯基]乙基}-L-亮氨酸环戊酯
中间体11c类似于中间体11a在方案9中用5-溴-2-氯苯醛合成。LCMSm/z464[M+H]+。
实施例 以下实施例列举了本发明具体化合物的制备以及其IKK抑制特性 实施例1(2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(苯基)乙酸环戊酯
LC/MS纯度95％，m/z 493[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.8(1H，s)，7.72(2H，br s)，7.6(2H，d，J＝8.8Hz)，7.46(2H，d，J＝8.3Hz)，7.5-7.3(5H，m)，7.0(2H，s)，5.1(1H，m)，4.2(1H，s)，3.6(2H，s)，3.0(1H，s)，1.9-1.4(8H，m)。
氮气下在5-(4-甲酰基-苯基)-2-脲基-噻吩-3-羧酸酰胺(中间体2)(0.15g，0.518mmol)和中间体3c(0.227g，1.037mmol)的四氢呋喃(4.5ml)溶液中加入DIPEA(0.181ml，1.037mmol)并将反应物搅拌5分钟然后加入乙酸(1.5ml)。再搅拌10分钟后加入MP-CNBH3(0.665g，1.556mmol)并将反应物室温搅拌1.5小时，然后过夜。MP-CNBH3用二氯甲烷洗涤，将合并的洗液和滤液真空浓缩。将残余物溶于小量甲醇并通过5g SCX柱，产物用1％氨的甲醇溶液洗脱。粗产物通过柱层析纯化，用3∶2乙酸乙酯∶异己烷洗脱(75mg，49％)。
以下实施例按照实施例1的类似方法制备。
实施例2N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸环戊酯
从中间体2和中间体3a制备。
LC/MS纯度99％，m/z 473[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.46(2H，d，J＝8.3Hz)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.53(1H，d，J＝12.9Hz)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，1.80-1.71(3H，m)，1.68-1.33(8H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(3H，d，J＝8.8Hz)。
实施例3 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-苯丙氨酸环戊酯
从中间体2和中间体3d制备。
LC/MS纯度98％，m/z 507[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.46(2H，d，J＝8.3Hz)，7.25(2H，d，J＝8.3Hz)，7.21(5H，m)，7.0(2H，br s)，5.0(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.58(1H，d，J＝12.9Hz)，3.35(1H，m)，2.90(1H，dd，J＝7.3Hz)，2.79(1H，dd，J＝8.1Hz)，1.80-1.71(2H，m)，1.68-1.33(6H，m)。
实施例4(2R)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(苯基)乙酸环戊酯
从中间体2和中间体3c(R)异构体制备。
LC/MS纯度95％，m/z 493[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.8(2H，d，J＝8.4Hz)，7.62(2H，br s)，7.4(2H，d，J＝8.7Hz)，7.5-7.3(7H，m)，7.0(2H，br s)，5.15(1H，m)，4.43(1H，s)，3.7(2H，s)，3.1(1H，s)，1.9-1.4(8H，m)。
实施例5(2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(2-萘基)乙酸环戊酯
从中间体2和中间体3b制备。
LC/MS纯度93％，m/z 543[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.8(4H，m)，7.69(1H，s)，7.65(2H，br s)，7.55-7.43(5H，m)，7.3(2H，d，J＝13.4Hz)，7.26(1H，br s)，6.9(2H，br s)，5.15(1H，m)，4.43(1H，s)，3.7(2H，s)，3.1(1H，s)，1.9-1.4(8H，m)。
实施例6 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苄基}-L-亮氨酸环戊酯
在氮气下在装有中间体5a(62mg，0.138mmol)、中间体1(33.1mg，0.125mmol)和四(三苯基膦)钯(14.48mg，0.013mmol)的试管中加入DME。搅拌反应混合物并加入1ml碳酸氢钠水溶液。将反应试管置于预热至80℃的油浴中。2小时后分析显示完全转化成所需产物。将反应混合物冷却至室温并倒入水中，萃取入EtOAc，合并的有机萃取物用水/盐水洗涤，之后用硫酸镁干燥。产物通过柱层析纯化，用3-5％MeOH的DCM溶液洗脱以得到37.5mg，0.072mmol，57.8％产率。
LCMS纯度98％m/z 507/509[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.44(2H，d，J＝8.7Hz)，7.29(1H，s)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.53(2H，d，J＝12.9Hz)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，1.80-1.71(2H，m)，1.68-1.33(6H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
实施例7 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-2-甲基苄基}-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例6的类似过程用中间体5b合成。
LCMS纯度99％，m/z 487[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，br s)，7.3(3H，m)，7.2(1H，d，J＝7.7Hz)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.7(1H，d，J＝13.1Hz)，3.5(1H，d，J＝13.1Hz)，3.1(1H，br s)，3.0(1H，br s)，2.3(3H，s)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.4(2H，m)，0.9(3H，d J＝6.6Hz)，0.8(3H，d J＝6.6Hz)。
实施例8 N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸环戊酯
用氮气吹扫装有四(三苯基膦)钯(99mg，0.085mmol)、中间体1(22mg，0.854mmol)和中间体4a(313mg，0.939mmol)的试管并加入DME(无水，12ml)。在混合物中加入饱和碳酸氢钠水溶液(2.5ml)并将反应混合物在90℃的油浴中加热4小时。将混合物冷却至室温，倒入水(50ml)中并用EtOAc(100ml)萃取。合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥并在真空下蒸发至干。残余物通过柱层析纯化，用0-3％MeOH的DCM溶液洗脱。分离出淡黄色固体状所需产物(291mg，0.573mmol，67.1％产率)。
LCMS纯度100％m/z 473[M+H]+，472[M-H]-。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.7(1H，s)，7.62(2H，br s)，7.46(1H，s)，7.25(3H，m)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.72(1H，d，J＝13.7Hz)，3.53(2H，d，J＝12.9Hz)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，1.80-1.71(2H，m)，1.68-1.33(6H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
实施例9-15 以下实施例按照实施例8的类似方法用中间体4b-4f中详细描述的各种氨基酸酯来合成。



*实施例12用下述实验过程从实施例11制备。
在实施例11(40mg，0.080mmol)的DCM(2ml)溶液中加入三氟乙酸(0.4ml)。将反应混合物室温搅拌过夜。在真空下除去溶剂并在残余物中加入甲醇和2滴乙酸。将溶液加载到SCX柱上并用1％氨的甲醇溶液洗脱产物。真空浓缩氨流分得到一种油状物，在其中加入DCM和异己烷。通过过滤收集获得的固体(22mg，55％产率)。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，brs)，7.4(1H，s)，7.4(1H，d)，7.3(2H，m)，7.1(1H，d)，6.9(2H，br s)，5.1(1H，m)，4.8(1H，br s)，3.8(1H，d)，3.6(3H，m)，3.2(1H，br s)，1.8(2H，m)，1.6-1.4(6H，m)。
实施例16N-(2-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
用氮气吹扫装有中间体6a(153mg，0.356mmol)、中间体1(86mg，0.324mmol)和Pd(PPh3)4(37.4mg，0.032mmol)的试管。加入DME(6ml，无水)和NaHCO3(1.0ml，饱和水溶液)并将反应物在80℃加热3小时。将反应混合物冷却至室温并倒入水(50ml)中。用EtOAc(2×40ml)萃取产物，有机层用水(50ml)和盐水(50ml)洗涤并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂得到被三苯基膦氧化物污染的棕色油状固体。通过在SCX上捕获和释放进行纯化(用MeOH洗脱)得到53mg仅70％纯的橙色油状物。产物通过柱层析纯化，用50％EtOAc的己烷溶液洗脱以得到42mg(27％)淡橙色粉末。
LCMS纯度96％m/z 487[M+H]+；485[M-H]-。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.8(2H，s)，7.44(2H，d，J＝8.7Hz)，7.29(1H，s)，7.23(2H，d，J＝8.7Hz)，6.9(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，2.6-2.79(4H，m)，1.80-1.71(3H，m)，1.68-1.33(7H，m)，1.32(1H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
实施例17 N-(2-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例16的类似过程用中间体6b合成。
LCMS纯度98％m/z 522[M+H]+.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.9(1H，s)，7.8(2H，s)，7.42(1H，s)，7.29(1H，s)，7.23(2H，d，J＝8.7Hz)，6.9(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.10(1H，t，J＝7.1Hz)，2.6-2.79(4H，m)，1.80-1.71(3H，m)，1.68-1.33(7H，m)，1.32(1H，m)，0.81(3H，d，J＝8.7Hz)，0.78(2H，d，J＝8.8Hz)。
实施例18 N-(2-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例16的类似过程用中间体6c合成。
LCMS纯度99％，m/z 487[M+H]+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，br s)，7.3(4H，m)，7.1(1H，d，J＝7.4Hz)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.2(1H，br s)，3.0(1H，br s)，2.7(4H，m)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.3(2H，m)，0.9(3H，d J＝6.6Hz)，0.8(3H，d J＝6.6Hz)。
以下实施例按照实施例18的类似方法用中间体6d-6f中详细描述的各种氨基酸酯来合成。


实施例22 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-氟苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例16的类似过程用中间体11a合成。
LCMS纯度100％，m/z 505[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.6(2H，br s)，7.4(1H，m)，7.3(1H，m)，7.3(1H，m)，7.1(1H，t)，6.9(2H，br s)，5.0(1H，m)，3.1(1H，s)，2.7-2.5(4H，m)，1.9(1H，br s)，1.7(2H，m)，1.6-1.4(7H，m)，0.8(3H，d)，0.8(3H，d)。
实施例23 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-甲基苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例16的类似过程用中间体11b合成。
LCMS纯度97％，m/z 499.4[M-H]-，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(2H，br s)，7.3(2H，br s)，7.2(1H，d)，7.1(1H，d)，7.0(2H，br s)，5.1(1H，m)，3.2(1H，m)，2.7(4H，m)，2.2(3H，s)，1.9(1H，m)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.4(2H，m)，0.9(3H，d)，0.8(3H，d)。
实施例24 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例16的类似过程用中间体11c合成。
LCMS纯度96％，m/z 519.5[M-H]-，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.7(1H，br s)，7.5(1H，d)，7.4(1H，d)，7.4(1H，dd)，7.3(1H，br s)，7.0(2H，br s)，5.1(1H.M)，3.2(1H，m)，2.8(3H，m)，2.6(1H，m)，2.0(1H，br s)，1.8(2H，m)，1.6(7H，m)，1.3(2H，m)，0.9(3H，d)，0.8(2H，m)，0.9(3H，d)。
实施例25 N-(3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯氧基}丙基)-L-亮氨酸环戊酯
在中间体7a(0.2g，0.435mmol)、中间体1(0.126g，0.479mmol)和Pd(PPh3)4(0.050g，0.044mmol)的混合物中加入DME(5ml)，然后加入2ml饱和NaHCO3溶液。混合物用氮气吹扫并置于预热至80℃的油浴中。在此温度搅拌3小时后通过LC-MS判断反应完全。将混合物冷却至室温，用MeOH稀释并吸附到二氧化硅上。对残余物进行柱层析，用3-4％MeOH的DCM溶液洗脱。然后对材料进行SCX捕获和释放。产量＝0.11g，0.213mmol，48.9％产率。
LCMS纯度100％m/z 517(M+H)+；515(M-H)-。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.91(1H，s)，7.61(1H，br s)，7.52(1H，s)，7.38(2H，d，J＝8.8Hz)，7.24(1H，br s)，6.90(3H，d，J＝8.8Hz)，5.05(1H，t，J＝5.9Hz)，3.98(2H，t，J＝6.4Hz)，3.07(1H，br s)，2.61(1H，t，J＝6.6Hz)，1.70-1.83(4H，m)，1.49-1.61(6H，m)，1.32(2H，t，J＝7.1Hz)，0.81(6H，dd，J＝12.0，6.6Hz)。
实施例26 N-(3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}丙基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例25的类似过程用中间体7b合成。
LCMS纯度98％m/z 552(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.98(1H，s)，7.61(1H，br s)，7.49(1H，s)，7.41(1H，d，J＝8.8Hz)，7.27(1H，brs)，7.07(1H，m)，6.9(2H，m)，5.08(1H，m)，4.07(2H，m)，3.05(1H，m)，2.6(1H，m)，1.8(4H，m)，1.60-1.49(7H，m)，1.3(2H，m)，0.81(3H，d，J＝8.4Hz)，0.79(3H，d，J＝8.7Hz)。
实施例27 N-(5-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯氧基}戊基)-L-亮氨酸环戊酯
在中间体8a(600mg，1.231mmol)、中间体1(361mg，1.231mmol)和Pd(PPh3)4(142mg，0.123mmol)的混合物中加入DME(8ml)。加入饱和NaHCO3(3ml)溶液后用氮气吹扫混合物并将其置于预热至80℃的油浴。4小时后通过LCMS判断反应完全。混合物用MeOH稀释，吸附到二氧化硅上并进行柱层析，用3-5％MeOH的DCM溶液洗脱。蒸发后分离产物(0.305g，0.543mmol，44.1％产率)。
LCMS纯度100％m/z 545(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.91(1H，s)，7.60(1H，br s)，7.52(1H，s)，7.38(2H，d，J＝8.8Hz)，7.23(1H，brs)，6.91(3H，m)，5.05(1H，t，J＝6.1Hz)，3.92(2H，t，J＝6.4Hz)，3.06(1H，m)，2.34(1H，m)，1.72-1.80(2H，m)，1.65(3H，dd，J＝10.5，6.1Hz)，1.55(3H，dd，J＝10.5，7.Hz)，1.50-1.61(3H，m)，1.38(4H，d，J＝2.9Hz)，1.30(3H，t，J＝7.3Hz)，0.81(6H，dd，J＝11.0，6.6Hz)。
实施例28N-(5-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}戊基)-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例27的类似过程用中间体8b合成。
LCMS纯度98％m/z 580(M+H)+。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ10.97(1H，s)，7.69(1h，br s)，7.45(1H，s)，7.4(1H，d，J＝13Hz)，7.23(1H，br s)，7.05(1H，d，J＝8.5Hz)，6.9(3H，m)，5.1(1H，m)，4.0(2H，m)，3.05(1H，m)，2.3(1H，m)，1.75(2H，m)，1.69-1.45(9H，m)，1.44-1.22(6H，m)，0.81(3H，d，J＝8.4Hz)，0.79(3H，d，J＝8.7Hz)。
实施例29 N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例27的类似过程用中间体9a合成。
在N-(叔丁氧基羰基)-N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸环戊酯(中间体9a)(39mg，0.065mmol)的二氯甲烷(1ml)溶液中加入三氟乙酸(0.5ml)。将反应混合物室温搅拌2小时。真空除去溶剂以建立反应混合物。残余物用甲醇稀释并通过SCX层析捕获，产物用氨的甲醇溶液洗脱。将氨流分真空浓缩以得到油状残余物。将该物质溶于二氯甲烷并加入异己烷。真空除去溶剂后获得淡橙色固体(24.3mg，0.049mmol，75％)。
LCMS纯度100％，m/z 499.0[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.4(2H，d，J＝8.3Hz)，7.3(2H，d，J＝8.8Hz)，7.2(1H，br s)，6.9(2H，br s)，6.4(1H，d，J＝15.7Hz)，6.2(1H，m)，5.0(1H，m)，3.3(1H，H)，3.2(2H，m)，1.8-1.7(2H，m)，1.6-1.5(7H，m)，1.3(2H，m)，0.8(6H，m)。
实施例30-40 以下实施例按照实施例29的类似方法用各种市售的单取代和二取代的4-溴-碘苯如中间体9a的详细描述在方案7中合成。

实施例41-48 以下实施例按照实施例27的类似方法用中间体9b-9h中详细描述的各种氨基酸酯在方案8中合成。



实施例49 N-[(2E)-3-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸环戊酯
通过实施例16的类似过程用中间体10合成。
LCMS纯度98％，m/z 499.2[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.5(1H，s)，7.3(3H，m)，7.2(1H，m)，6.9(2H，br s)，6.5(1H，d)，6.3(1H，m)，5.0(1H，m)，3.3(1H，m)，3.2(1H，m)，2.1(1H，br s)，1.8(2H，bm)，1.7-1.5(7H，m)，1.4(2H，m)，0.8(6H，m)。
NMR数据 实施例50 (2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(苯基)乙酸
LC/MS纯度96％，m/z 425[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，br s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.5(2H，m)，7.4-7.3(8H，m)，6.9(2H，m)，4.2(1H，s)，3.7(2H，q，J＝13.9and 6.6Hz)。
在(2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(苯基)乙酸环戊酯(实施例1)(50mg，102μmol)的四氢呋喃(1ml)溶液中加入1.0M LiOH水溶液(0.508ml，508μmol)。在40℃的油浴中搅拌反应物。4小时后LCMS指示90％反应完。除去油浴并将反应物在室温搅拌过夜。在真空下除去溶剂并将残余物加入水(2ml)。在溶液中加入5滴乙酸，有固体沉淀。该固体通过过滤收集并依次用水、乙醇和二乙醚洗涤，之后减压干燥(26mg，60％)。
以下实施例按照实施例50的类似方法制备。如果有必要，化合物可通过制备型HPLC纯化以获得良好纯度。
实施例51 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸
从实施例2制备。LC/MS纯度99％，m/z 405[M+H]+。
实施例52 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-苯丙氨酸
从实施例3制备。LC/MS纯度98％，m/z 439[M+H]+。
实施例53 (2R)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(苯基)乙酸
从实施例4制备。LC/MS纯度95％，m/z 425[M+H]+。
实施例54 (2S)-({4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(2-萘基)乙酸
从实施例5制备。LC/MS纯度98％，m/z 475[M+H]+。
实施例55 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苄基}-L-亮氨酸
从实施例6制备。LC/MS纯度98％，m/z 508[M+H]+。
实施例56 N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-2-甲基苄基}-L-亮氨酸
从实施例7制备。LCMS纯度92％，m/z 417[M-H]+。
实施例57 N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸
从实施例8制备。LC/MS纯度98％，m/z 405[M+H]+。
以下实施例按照实施例50的类似方法制备。如果有必要，化合物可通过制备型HPLC纯化以获得良好纯度。


实施例63 N-(2-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸
从实施例16制备。LC/MS纯度96％，m/z 487[M+H]+。
实施例64 N-(2-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸
从实施例17制备。LC/MS纯度98％，m/z 522[M+H]+。
实施例65 N-(3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯氧基}丙基)-L-亮氨酸
从实施例25制备。LC/MS纯度100％，m/z 517[M+H]+。
实施例66 N-(3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}丙基)-L-亮氨酸
从实施例26制备。LC/MS纯度100％，m/z 552[M+H]+。
实施例67 N-(5-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯氧基}戊基)-L-亮氨酸
从实施例27制备。LC/MS纯度100％，m/z 545[M+H]+。
实施例68 N-(5-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苯氧基}戊基)-L-亮氨酸
从实施例28制备。LC/MS纯度98％，m/z 580[M+H]+。
实施例69 N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸
从实施例29制备。LCMS纯度100％，m/z 431.0[M+H]+，1H NMR(400MHz，DMSO-d6)，δ11.0(1H，s)，7.7(1H，s)，7.6(1H，br s)，7.5(2H，d，J＝8.3Hz)，7.4(2H，d，J＝8.3Hz)，7.3(1H，br s)，7.0(2H，br s)，6.6(1H，d，J＝16.1Hz)，6.2(1H，m)，3.5(1H，m)，3.3(2H，m)，1.8(1H，m)，1.4(2H，m)，0.8(6H，m)。
以下实施例按照实施例50的类似方法制备。如果有必要，化合物可通过制备型HPLC纯化以获得良好纯度。

以下实施例按照实施例50的类似方法制备。如果有必要，化合物可通过制备型HPLC纯化以获得良好纯度。



实施例87 N-(2-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸
从实施例18制备。LCMS纯度98％，m/z 417[M-H]+。
以下实施例用实施例87的类似方式合成。


实施例90 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-氟苯基}乙基)-L-亮氨酸
从实施例22制备。LCMS纯度97％，m/z 435[M-H]+。
实施例91 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-甲基苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
从实施例23制备。LCMS纯度98％，m/z 431[M-H]+。
实施例92 N-(2-{5-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-2-氯苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯
从实施例24制备。LCMS纯度97％，m/z 451[M-H]+。
实施例93 N-[(2E)-3-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸
从实施例49制备。LC/MS纯度90％，m/z 431[M+H]+。
测量生物学活性 IKK-β酶试验 有英国佩斯利的因维曲根公司(Invitrogen，Paisley，UK)进行试验测量化合物抑制IKKβ激酶活性的能力。Z′-LYTETM生化试验采用基于荧光的偶联酶模式并基于磷酸化肽和非磷酸化肽对蛋白水解切割的不同敏感性。肽底物用构成FRET对的两种荧光团标记(每个末端一种荧光团)。在初步反应中，激酶将ATP的γ磷酸转移到合成FRET-肽的单个丝氨酸或苏氨酸残基上。在二次反应中，位点特应性蛋白酶识别并切割非磷酸化的FRET-肽。FRET-肽的磷酸化能抑制被扩展剂(Development Reagent)切割。切割打断了FRET-肽上供体荧光团(即香豆素)和受体樱桃(即荧光素)之间的FRET，从而未被切割的磷酸化FRET-肽得以保留FRET。采用放射测量法来量化反应进程，该方法计算400nm激发供体荧光团之后供体发射与受体发射的比值(发射比)。
最终的10μL激酶反应物包括0.9-8.0ng IKBKB(IKKβ)、2μM Ser/Thr 05肽和ATP，用50mM HEPES pH 7.5、0.01％BRIJ-35、10mM MgCl2、1mM EGTA配制。试验在ATP浓度为或接近Km时进行。激酶反应物室温孵育60分钟后加入5μL 1∶128稀释的扩展剂。试验平板再室温孵育60分钟，并用荧光平板阅读器读读数。
从DMSO配制的检测化合物原液的1/3log连续稀释液获得一式两份数据点。从最高浓度10μM开始进行9次稀释，包括‘无化合物’空白。收集数据并采用IDBS的XLfit软件进行分析。剂量反应曲线是205号模型(S形剂量反应模型)的拟合曲线。从生成的曲线可确定并汇报50％抑制浓度。
THP-1细胞的LPS-刺激 以4×104细胞/孔的密度将100μl THP-1细胞接种于V形底96孔组织培养处理平板并在5％CO2下于37℃孵育16小时。加入用100μl组织培养基配制的抑制剂2小时后用最终浓度为1μg/ml的LPS(大肠杆菌菌株005:B5，西格玛公司(Sigma))刺激细胞并在5％CO2下于37℃孵育6小时。通过夹心ELISA(R&D系统公司，#QTA00B)测量无细胞上清液的TNF-α水平。
人全血的LPS-刺激 用肝素化真空采血器(vacutainer)(BD公司(Becton Dickinson))通过静脉穿刺采集全血并用等体积RPMI1640组织培养基(西格玛公司)稀释。取100μl接种于V形底96孔组织培养处理平板。加入用100μl RPMI1640培养基配制的抑制剂2小时后用最终浓度为100ng/ml的LPS(大肠杆菌菌株005:B5，西格玛公司(Sigma))刺激所述血液并在5％CO2下于37℃孵育6小时。通过夹心ELISA(R&D系统公司，#QTA00B)测量无细胞上清液的TNF-α水平。
IC50值被归入3个范围之一，如下 范围AIC50＜1000nM 范围B1000nM＜IC50＜5000nM 范围CIC50＞5000nM NT＝未检测 结果表格 破碎细胞羧酸酯酶试验 可对任何给定的本发明的化合物(其中R1是酯基)通过以下试验进行检测以确定它是否能够满足被胞内酯酶水解的要求。
制备细胞提取物 U937或Hut116肿瘤细胞(约109)，用4倍体积的Dulbeccos PBS(约1升)洗涤并在4℃以525g离心10分钟使其沉淀。重复两次，然后将最终的细胞沉淀物重悬于35ml冷的匀浆缓冲液(Trizma 10mM、NaCl 130mM、CaCl2 0.5mMPH 7.0，25℃)。通过氮气气蚀制备匀浆(700psi，50分钟，4℃)。将匀浆保持在冰上并用抑制剂混合物补足以得到以下最终浓度 亮肽素1μM 抑肽酶0.1μM E64 8μM 胃酶抑素1.5μM 苯丁抑制素162μM 胰凝乳蛋白酶抑制剂33μM 将细胞匀浆在525g离心10分钟以使其澄清，所得上清液被用作酯酶活性来源并可储存于-80℃直至使用。
测量酯的切除 用如上制备的这种细胞提取物测量酯变为相应的羧酸的水解作用。为达到这种效果，将细胞提取物(约30ug/0.5ml总测试体积)在Tris-HCl 25mM、125mMNaCl、缓冲液(25℃时PH为7.5)中于37℃孵育。在0时刻加入最终浓度为2.5μM的相应的酯(底物)并将样品在37℃孵育适当时间(通常为0或80分钟)。加入3倍体积的乙腈终止反应。对于0时刻样品，在加入酯化合物之前加入乙腈。12,000g离心5分钟后，在室温下通过LCMS(SciexAPI 3000，HP1100二元泵，CTC PAL)分析样品中的酯及其相应的羧酸。采用的色谱条件基于AcCN(75×2.1mm)柱和流动相，流动相为5-95％乙腈水溶液/0.1％甲酸。
表1列出了数据，这些数据显示了若干通过一些不同连接基化学部分与各种胞内酶抑制剂偶联的氨基酸酯基序都被胞内羧酸酯酶水解成相应的酸。

表权利要求
1.式(IA)或(IB)所示化合物或其盐、N-氧化物，水合物或溶剂合物
其中
R7是H或任选取代的(C1-C6)烷基；和
环A是任选取代的5-13个环原子的芳基或杂芳基环；
Z是式R1R2CHNH-Y-L1-X1-(CH2)z-所示基团，其中
R1是羧酸基(-COOH)，或者可被一种或多种胞内酯酶水解成羧酸基的酯基；
R2是天然或非天然α氨基酸的侧链；
Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)-NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基；
L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-所示二价基团，其中
m、n和p独立为0或1，
Q是(i)具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，或(ii)当p是0时，是式-Q1-X2-所示二价基团，其中X2是-O-、-S-或NRA-，其中RA是氢或任选取代的C1-C3烷基，Q1是具有5-13个环成员的任选取代的二价单环或双环碳环或杂环基团，
Alk1和Alk2独立代表任选取代的二价C3-C7环烷基，或任选取代的直链或支链的C1-C6亚烷基、C2-C6亚烯基(alkenylene)或C2-C6亚炔基(alkynylene)，所述基团可任选含有或终止于醚(-O-)、硫醚(-S-)或氨基(-NRA-)连接，其中RA是氢或任选取代的C1-C3烷基；
X1是键、-C(＝O)、或-S(＝O)2-、-NR4C(＝O)-、-C(＝O)NR4-、-NR4C(＝O)NR5-、-NR4S(＝O)2-或-S(＝O)2NR4-，其中R4和R5独立为氢或任选取代的C1-C6烷基；和
z是0或1；
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R7是氢。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于，环A是任选取代的1，4-亚苯基或1，3-亚苯基。
4.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，环A中的任选取代基选自氟、氯、甲基或三氟甲基。
5.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，R1是式-(C＝O)OR14所示酯基，其中R14是R8R9R10C-，其中
(i)R8是氢或任选取代的(C1-C3)烷基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-或(C2-C3)烯基-(Z1)a-[(C1-C3)烷基]b-，其中a和b独立为0或1，Z1是-O-、-S-或-NR11-，其中R11是氢或(C1-C3)烷基；且R9和R10独立为氢或(C1-C3)烷基-；
(ii)R8是氢或任选取代的R12R13N-(C1-C3)烷基-，其中R12是氢或(C1-C3)烷基和R13是氢或(C1-C3)烷基；或R12和R13与它们所结合的氮一起形成任选取代的5-或6-个环原子的单环杂环或8-10个环原子的二环杂环系统，且R9和R10独立为氢或(C1-C3)烷基-；或
(iii)R8和R9与它们所结合的碳一起形成任选取代的3-7个环原子的单环碳环或8-10个环原子的二环碳环系统，且R10是氢。
6.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其特征在于，R1是甲基，乙基，正丙基或异丙基，正丁基、仲丁基或叔丁基，环己基，烯丙基，苯基，苄基，2-、3-或4-吡啶基甲基，N-甲基哌啶-4-基，四氢呋喃-3-基、甲氧基乙基、茚满基、降冰片基、二甲基氨基乙基或吗啉代乙基酯基团。
7.如权利要求1-4中任一项所述的化合物，其特征在于，R1是环戊基或叔丁基酯基团。
8.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是环己基甲基、环己基、吡啶-3-基甲基、仲丁基、叔丁基、1-苄硫基-1-甲基乙基、1-甲硫基-1-甲基乙基或1-巯基-1-甲基乙基。
9.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其特征在于，R2是苯基、苄基、苯乙基、环己基、叔丁氧基甲基或异丁基。
10.如上述权利要求中任一项所述的化合物，其特征在于，基团R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z-选自R1R2CHNH-(CH2)a-、R1R2CHNH-(CH2)aO-或R1R2CHNH-CH2CH＝CHCH2-，其中a是1、2、3、4或5。
11.如权利要求1所述的化合物，其选自下组
N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸环戊酯
N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸环戊酯
N-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]-3-氯苄基}-L-亮氨酸环戊酯
N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸环戊酯
(2S)-{[(2E)-3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]氨基}(苯基)乙酸环戊酯
(2S)-({3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(苯基)乙酸环戊酯
N-[(2E)-3-{4-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]-3-甲基苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸环戊酯
(2S)-[(2-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}乙基)氨基](苯基)乙酸环戊酯
N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)噻吩-2-基]苄基}-L-苏氨酸环戊酯
(2S)-({3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}氨基)(环己基)乙酸环戊酯
N-[(2E)-3-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}丙-2-烯-1-基]-L-亮氨酸环戊酯
N-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苄基}-L-亮氨酸叔丁酯，和
N-(2-{3-[4-氨甲酰基-5-(氨甲酰基氨基)-2-噻吩基]苯基}乙基)-L-亮氨酸环戊酯，
以及其盐、N-氧化物、水合物或溶剂合物。
12.一种包含上述权利要求中任一项所述化合物以及一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂的药物组合物。
13.如权利要求1-11中任一项所述的化合物在制备用于抑制IKK酶活性的组合物中的应用。
14.如权利要求13所述的应用，用于离体或体内抑制IKKβ活性。
15.如权利要求1-11中任一项所述的化合物在制备用于治疗肿瘤性/增生性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病的组合物中的应用。
16.一种抑制IKK酶活性的方法，所述方法包括使所述酶接触IKK酶活性抑制有效量的如权利要求1-11中任一项所述的化合物。
17.如权利要求16所述的方法，用于离体或体内抑制IKKβ活性。
18.一种治疗肿瘤性/增生性疾病、自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，该方法包括给患有这种疾病的对象施用有效量的如权利要求1-11中任一项所述的化合物。
19.如权利要求13所述的应用或如权利要求18所述的方法，其特征在于，用于治疗癌细胞增殖。
20.如权利要求13所述的应用或如权利要求18所述的方法，其特征在于，用于治疗肝细胞癌或黑色素瘤。
21.如权利要求13所述的应用或如权利要求18所述的方法，其特征在于，用于治疗肠癌、卵巢癌、头颈癌和宫颈鳞状细胞癌、胃癌或肺癌、间变性少突神经胶质瘤、多形性成胶质细胞瘤或髓母细胞瘤。
22.如权利要求13所述的应用或如权利要求18所述的方法，其特征在于，用于治疗类风湿性关节炎、硬皮病、炎性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、慢性阻塞性肺病、哮喘、多发性硬化、糖尿病、特应性皮炎、移植物抗宿主病、或系统性红斑狼疮。
全文摘要
式(IA)或(IB)的化合物是IkB激酶(IKK)活性抑制剂，可用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病，式(IA)或(IB)中，R7是H或任选取代的(C1-C6)烷基；环A是任选取代的5-13个环原子的芳基或杂芳基环或环系统；Z是式R1R2CHNH-Y-L1-X1-(CH2)z-的基团，其中z是0或1；R1是羧酸基(-COOH)，或可被一种或多种胞内羧酸酯酶水解成羧酸基的酯基；R2是天然或非天然α氨基酸的侧链；Y是键、-C(＝O)-、-S(＝O)2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NR3-、-C(＝S)-NR3、-C(＝NH)NR3或-S(＝O)2NR3-，其中R3是氢或任选取代的C1-C6烷基；L1是式-(Alk1)m(Q)n(Alk2)p-的二价基团，其中m、n、p、Q、Alk1和Alk2如权利要求中所定义。
文档编号C07D333/00GK101541779SQ200780040236
公开日2009年9月23日 申请日期2007年10月29日 优先权日2006年11月1日
发明者D·F·C·莫法特, S·J·戴维斯, M·H·查尔顿, S·C·赫斯特, S·T·奥尼恩斯, J·G·威廉姆斯 申请人:色品疗法有限公司