以条件性方式结合于需要的分子的氨基酸序列的制作方法

专利名称：：以条件性方式结合于需要的分子的氨基酸序列的制作方法以条件性方式结合于需要的分子的氨基酸序列本发明涉及以条件性方式(如本文中定义)结合于需要的分子的氨基酸序列，涉及包括所述氨基酸序列或基本由其组成的蛋白质和多肽；涉及编码所述氨基酸序列、蛋白质或多肽的核酸；涉及包括所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的组合物，和具体地，药物组合物；并且涉及所述氨基酸序列、蛋白和多肽的用途。由本文中进一步的描述，本发明的其它方面、实施方案、优势和应用将变得清楚。结合于需要的分子的蛋白质和肽是本领域中熟知的。一些非限制性实例包括具有免疫球蛋白折叠的肽和蛋白质(即，免疫球蛋白)，诸如抗体和抗体片段、源自抗体和抗体片段的结合单位和结合分子(诸如重链可变结构域、轻链可变结构域、结构域抗体和适合于作为结构域抗体使用的蛋白质和肽、单结构域抗体和适合于作为单结构域抗体使用的蛋白质和肽、纳米抗体⑧和dAbsTM;以及前述任一项的合适片段)，以及包括所述抗体片段、结合单位或结合分子的构建体(诸如scFv和双抗体)。参考本文中引用的现有技术。其它结合单位或结合分子例如包括，但不限于，基于除免疫球蛋白外其它蛋白质支架的分子，其包括但不限于蛋白质A结构域、淀粉酶抑肽(tendamistat)、纤连蛋白、脂笼蛋白、CTLA-4、T-细胞受体、设计的锚蛋白重复序列和PDZ结构域(Binz等，自然生物技术(Nat.Biotech)2005,巻23:1257)、和基于DNA或RNA的结合部分，其包括但不限于DNA或RNA适体(Ulrich等.组合的化学高通量筛选(CombChemHighThroughputScreen)20069(8):619-32)。在第一方面，本发明涉及针对需要的分子的氨基酸序列(本文中也称为"本发明的氨基酸序列")，其中所述氨基酸序列a)在第一生物学条件下，以1(TS摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合20于需要的分子；和b)在第二生物学条件下，以至少10倍不同于(具体地多于)所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的的解寓常数(Kd)結合于所述需要的分子。本发明还涉及包括至少一种本发明氨基酸序列的化合物(如本文中定义)。所述化合物也在本文中称为"本发明的化合物"。由本文中进一步的描述，本发明的其它方面和实施方案将变得清楚。在本说明书和权利要求中，术语"生物学条件"指动物体(和具体地，哺乳动物，诸如小鼠、大鼠、兔、狗或灵长类动物)或人体内(例如，在至少一个细胞、组织、器官或生物体液，诸如血液或淋巴液中)可以存在的条件(或条件组)，所述动物或人可以是健康动物或人或患有疾病或病症的动物或人。术语"生物学条件"还包括体外或细胞测定或符合和/或代表动物体或人体内可以存在的条件的模型的条件。所述条件(无论在人体或动物体体内或在体外或细胞测定或模型中离体存在)对技术人员而言应该是清楚的。由本文中的公开内容还应该清楚的是，所述"第一生物学条件"与所述"第二生物学条件"至少在一方面不同。例如，第一生物学条件可以包括在第一生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，且第二生物学条件包括第二生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，其中所述第一和第二生理学区室或流体，在正常生理学条件下，由至少一种生物膜诸如细胞膜、细胞小泡或亚细胞区室的壁、或血管壁分开。按照一个具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列(或包括本发明氨基酸序列的化合物)还能够，在人或动物体内，穿过所述生物膜和或执行容许其穿过所述生物膜的生物学作用或机制(诸如主动或被动运输机制)，以使得本发明的氨基酸序列或化合物从第一生理学区室(其中它暴露于所述第一生物学条件)进入到第二生理学区室(其中它暴露于所述第二生理学条件)中。因此，按照本发明的一个具体的但非限制性方面，所述第一生物学条件可以包括人体或动物体的至少一种细胞外普遍存在的生理学条件(即，细胞外条件，诸如在所述细胞直接接触的环境或附近中、和/或在人体或动21物体循环中的条件)，且所述第二生物学条件可以包括所述细胞中普遍存在的条件(即，细胞内条件)(或反之亦然)。例如，按照本发明的这个具体但非限制性方面，所述第二生物学条件可以包括在人体或动物体细胞的至少一种细胞内或亚细胞区室(诸如内体区室)中普遍存在的生理学条件，且所述叢二生物学条件可以包括所述细胞外普遍存在的条件(或反之亦然)。按照本发明的另一个具体但非限制性方面，所述第一生物学条件可以包括在所述人体或动物体的循环中(例如在血流或淋巴系统中)普遍存在的生理学条件，且所述第二生物学条件可以包括在人体或动物体的至少一种组织或细胞中(诸如，在所述细胞的至少一种亚细胞区室，诸如内体区室中)普遍存在的条件(或反之亦然)。按照本发明的一个具体方面，当本发明的氨基酸序列(象这样或与需要的分子结合)能够被吸收(例如，通过内在化、胞饮作用、胞转、胞吞、吞噬或类似的生物学机制)或已经被吸收，并且处于由人体或动物体的至少一种细胞以胞吐作用或其它方式转移出细胞的过程中时，所述第一生物学条件可以包括这样的生理学条件，在所述生理学条件下，氨基酸序列在被细胞吸收前存在(例如，在本发明的氨基酸序列通过内在化或胞饮作用、胞转或胞吞被吸收进入的细胞外部，例如在血流或淋巴系统中)，且所述第二生物学条件包括这样的生理学条件，在所述生理学条件下，氨基酸序列在氨基酸序列已经被吸收到细胞中后存在(例如，在亚细胞区室中，其中本发明的氨基酸序列随着内在化、胞饮作用、胞转或胞吞(立即)存在(诸如内体、溶酶体、胞饮泡、或其它细胞小泡);或反之亦然。如下文中更详细解释地，当所述需要的分子是在其再循环过程中被该细胞吸收(即，进行内在化、胞饮作用、胞转或胞吞或类似生物学机制)的分子，如关于例如血清清蛋白的情形中时，这个方面是特别重要的。因此，在一个具体但非限制性方面，所述氨基酸序列针对进行再循环并在该过程中被至少一种细胞吸收的意欲或需要的分子，且所述第一生物学条件包括关于涉及需要的化合物再循环、的动物体或人体的至少一种细胞的细胞外条件(即，在所述细胞外普遍存在的条件，诸如在细胞表面或在细胞的直接接触的环境或附近中的条件，和/或在循环中，例如在血流或淋巴系统中普遍存在的条件)，且所述第二生物学条件包括细胞内普遍存在的条件(即，细胞内的条件或在它的一种细胞内或亚细胞区室内的条件,诸如该细胞内的内体或小泡中，和具体地在涉及蛋白质或多肽再循环的细胞内或亚细胞区室内的条件)。作为本发明这个方面的非限制性实例，本发明的氨基酸序列可以针对通过人体或动物体的至少一种细胞进行再循环的血清蛋白(诸如，血清清蛋白)，且所述第一生物学条件可以包括在所述人体或动物体的循环中普遍存在的条件，且所述第二生物学条件可以包括所述细胞内普遍存在的条件(即，细胞内的条件或在它的一种细胞内或亚细胞区室内的条件，诸如该细胞内的内体或小泡中，和具体地在涉及蛋白质或多肽再循环的细胞内或亚细胞区室内的条件)。作为本发明这个方面的另一个非限制性实例，本发明的氨基酸序列可以针对由所述细胞再循环的细胞表面上的蛋白质或多肽(诸如受体)，且所述第一生物学条件可以包括在细胞表面处或在动物体或人体的所述细胞直接接触的环境中普遍存在的条件，且所述第二生物学条件可以包括所述细胞内普遍存在的条件(即，细胞内的条件或在它的一种细胞内或亚细胞区室内的条件，诸如在该细胞内的内体或小泡中，和具体地在涉及蛋白质或多肽再循环的细胞内或亚细胞区室内的条件)。这个方面(包括它的两个具体实例)还可以容许使本发明的氨基酸序列(或包括本发明氨基酸序列的化合物，如本文中进一步所述)靶向特异性细胞或组织，其中所述需要的分子通过内在化、胞饮作用、胞转或胞吞被吸收到所述特异性细胞或组织中(不管是作为再循环一部分还是其它方面)。在细胞外，本发明的氨基酸序列或化合物将以高亲和性或亲和力结合于所述需要的分子(即，以如本文中关于在所述第一生物学条件下结合所述的缔合常数或解离常数)，并且在结合于所述需要的分子的同时，会因此被吸收到细胞内。随着所述内在化、胞饮作用、胞转或胞吞，本发明的氨基酸序列或化合物与所述需要的化合物的亲和性或亲和力将下降(即，达到如本文中关于在所述第二生物学条件下结合所述的缔合常数或解离常数)，从而使，氨基酸序列或化合物从所述需要的分子中释放出来，并可以在细胞中执行其意欲的或理想的生物学、生理学、药物或治疗作用。通常，如技术人员应该清楚地，该机制还可用于容许本发明的氨基酸序列或化合物穿越细胞的细胞膜并进入所述细胞，并且还可以用于细胞内耙向本发明的化合物。按照另一个具体但非限制性方面，所述第一生物学条件和所述第二生物学条件可以关于pH而不同，其中所述第一生物学条件可以包括高于7.0的生理学pH,例如高于7.1的pH或高于7.2的pH，诸如7.2-7.4范围内的pH;且所述第二生物学条件可以包括低于7.0的生理学pH,例如低于6.7的pH或低于6.5的pH,诸如6.5-6.0范围内的pH(或反之亦然)。按照另一个具体但非限制性方面，所述第一生物学条件和所述第二生物学条件可以关于蛋白酶的数量和类型而不同。氨基酸序列对蛋白酶降解的易感性是高度可变的并且是序列和蛋白质依赖的,蛋白质体内降解水平应该依赖于该氨基酸序列实际遭遇的蛋白酶的类型。例如在内体中，存在许多半胱氨酸组织蛋白酶；在溶酶体中，存在一大组脂肪酶、糖酶、蛋白酶和核酸酶，它们在酸性pH(4.8)时具有最佳活性；在细胞外空间中和在血流中，许多其它蛋白酶(例如丝氨酸蛋白酶)具有活性。按照另一个具体但非限制性方面，所述第一和第二生物学条件关于下列因素的任意两种、任意三种或基本所有而不同pH、离子强度、蛋白酶含量；其中所述因素可以如本文中所述和/或可以区别于如本文中所述。按照另一个具体但非限制性方面，所述第一生物学条件可以包括第一生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，且所述第二生物学条件包括第二生理学区室或流体普遍存在的生理学条件，其中所述第一和第二生理学区室或流体，在正常生理学条件下，由至少一种生物膜诸如细胞膜、细胞小泡或亚细胞区室的壁、或血管壁分开，其中所述第一生理学区室或流体中普遍存在的条件和所述第二生理学区室或流体普遍存在的条件关于下列因素的任意两种、任意三种或基本全部而不同pH、离子强度、蛋白酶含量；其中所述因素可以如本文所述和/或可以区别于本文中所述。如由本文中的描述应该清楚地，本发明的氨基酸序列和化合物是这样的，以致它们分别在所述第一和第二生物学条件下，以不同的解离常数或缔合常数(如本文中定义)结合于它们各自的需要的分子。这在本文中通常称为"条斧丝^^智^",且显示出所述条件性的结合的氨基酸序列在本24文中也称为"姿,丝游，氨基酸序列(诸如，例如，"姿/f丝游韵袭贫谬，)或为"条斧丝游翁会欽'。本发明的条件性氨基酸序列(以及包括本发明条件性氨基酸序列的化合物)优选是这样的，以致它们在所述第二生物学条件(或生物学条件组)下，以这样的解离常数(KD)结合于它们意欲或需要的分子，所述解离常数(KD)是该条件性的氨基酸序列在所述第一生物学条件(或生物学条件组)下结合于它的意欲的或需要的分子的解离常数的至少10倍，更优选地100倍，更优选地至少1000倍;和/或在所述第二生物学条件(或生物学条件组)下，以这样的结合亲和性(Ka)結合于它的意欲的或需要的分子，所述结合亲和性(Ka)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件(或生物学条件组)下结合于所述意欲或需要的分子的结合亲和性的至少10分之一，更优选地100分之一，更优选地至少IOOO分之一。因此，通过举例说明而非限制的方式，当本发明的氨基酸序列可以在所述第一第二生物学条件下，以约l(T7摩尔/升的解离常数(Kd)和/或以约107M—1结合亲和性(Ka)結合于所述需要的分子时，本发明的氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以约10—6摩尔/升或更高的解离常数(Kd)和/或以約106M—1或更低的结合亲和性(KA),优选地以约IO'5摩尔/升或更高的解离常数(Kd)和/或以約105M"或更低的结合亲和性(KA),和更优选地以约l(T4摩尔/升或更高的解离常数(Kd)和/或以約1(^M"或更低的结合亲和性(KA)结合于所述需要的分子。另外，本发明的氨基酸序列和化合物优选地是这样的，以致它们在所述第一生物学条件下，以10_6摩尔/升或更低的解离常数(KD),更优选地以l(T7摩尔/升或更低的解离常数(Kd)，和甚至更优选地以10—8摩尔/升或更低的解离常数(Kd)結合于所述意欲或需要的分子。此外，本发明的氨基酸序列或化合物还优选地是这样的，以致它们在所述第二生物学条件下，以10.6摩尔/升或更高的解离常数(KD),更优选地以1CT5摩尔/升或更高的解离常数(Kd)，和甚至更优选地以IO'4摩尔/升或更高的解离常数(Kd)結合于所述意欲或需要的分子。如技术人员应该清楚地，解离常数可以是实际或表观解离常数。用于确定解离常数的方法应该是技术人员清楚的，并且例如，包括本文中提到的技术。在这个方面，还应该清楚的是，可能不能测量大于10—4摩尔/升或10—3摩尔/升(例如，10'2摩尔/升)的解离常数。因此，当不能测量解离常数时，应该认为为了本发明的目的，解离常数是10—5摩尔/升的解离常数的至少1000倍。任选地，如技术人员也应该清楚地，可以基于(实际或表观)缔合常数(KA)，根据关系[KD-1/KA]，计算(实际或表观)解离常数。为了该目的，技术人员应该清楚用于确定在某一pH值处缔合常数的方法，且例如包括本文中提到的技术。而且，由此，应该清楚本发明的氨基酸序列还可以是这样的，以致它们在第二生物学条件下以这样的结合亲和性(Ka)結合于所述需要的分子，所述结合亲和性(KA)少于所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的结合亲和性至少10倍。亲和性表示分子相互作用的强度或稳定性。通常通过Kd，或解离常数表示亲和性，其具有单位摩尔/升，简单表示为M。还可以将亲和性表示为缔合常数，Ka，其等于1/Kd，且具有单位(摩尔/升)"，简单表示为M"。贯穿本文，我们将通过其Kd值表示分子相互作用的稳定性。但是应该理解，由于关系式Ka-l/Kd，通过其Kd值指定分子相互作用的强度，也自动指定Ka值。Kd也表征热力学意义中的分子相互作用强度，因为它通过众所周知的关系式DG:RT.ln(Kd)(等价地，DG--RT.ln(Ka))与结合自由能(DG)相关，其中R等于气体常数，T等于绝对温度且hi表示自然对数。有意义的生物学复合物的Kd典型地在1(X10M(O.lnM)-l(T5M(10000nM)的范围内。相互作用越强，其Kd越低。还可以将Kd表示为复合物解离率常数(表示为koff)，与其缔合率(表示为k^)的比。换言之，Kd-解离率/缔合率(k。fj/k。n)。清楚地表示为K『缔合率/解离率(k。n/k。ff)。解离率k。ff具有单位s"(其中s是秒的SI单位符号)。缔合率kon具有单位M'V1。缔合率可以在102M"s"—约107M'V1之间变化，接近双分子相互作用的扩散-限制性缔合率常数。解离率通过关系式tu^ln(2)/koff，与给定分子相互作用的半衰期相关。解离率可以在l(TV'(接近具有多日t^的不可逆复合物)一Is'1(t1/2=0.69s)的范围内变化。两分子之间分子相互作用的亲和性可以通过不同的技术，诸如众所周26知的表面等离子体共振(SPR)生物传感器技术(例如，Ober等，国际免疫学(Intern.Immunology)，13,1551-1559,2001使用了Biacore3000SPR生物传感器研究不同pH条件下清蛋白与FcRn的亲和性)测量，其中将一个分子固定在生物传感器芯片上，并在流动条件下使另一个分子经过该固定的分子，从而产生缔合率(K。n)、解离率(k。ff)测量值和由此的Kd(或Ka)值。应该注意到，如果测量过程以某种方式影响所示分子固有的结合亲和性，例如通过与在一个分子的生物传感器上的涂层相关的人为产物，则测量的Kd对应于表观Kd。而且，如果一个分子包含多于一个关于另一个分子的识别位点，则可以测量表观Kd。在所述情形中，测量的亲和性可能受到两分子相互作用亲和力的影响。例如，关于固定的人FcRn的SPR实验对人IgG显示出比FcRn和固定的IgG相互作用亲和性显著更高的亲和性(亲和力)，相当于FcRn-IgG相互作用2:1的化学定量关系(Sanchez等,生物化学(Biochemistry)，38,9471-9476,1999)。可以用于评估亲和性的另一种方法是Friguet等的2-步ELISA(酶联免疫吸附测定)程序(免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)，77,305-19，1985)。该方法建立溶液相结合平衡测量法，并避免将所述分子之一吸附到支持物诸如塑料上可能涉及的人为产物。例如，Nguyen等(蛋白质工程设计和选择(ProteinEngDesSel),19，291-297,2006)近期利用Friguet测定测量了Fab构建体与清蛋白的亲和性。然而，精确测量Kd可能需要大量劳动，所以，通常确定表观Kd值来评估两分子的结合强度。应该注意到只要以一致的方式进行所有测量(例如，保持测定条件不变)，则表观Kd测量值可以用作真实Kd的近似值，且因此在本文件中，应该认为Kd和表观Kd是同等重要或相关的。最后，应该注意到在许多情形中，有经验的科学家判断相对于一些参考分子来确定结合亲和性是方便的。例如，为了评估分子A和B之间的结合强度，人们可以例如使用参考分子C，已知所述参考分子C结合于B并由荧光基团或发色基团或其它化学部分，诸如用于在ELISA或FACS中简单检测(荧光激活的细胞分类)的生物素或其它形式(用于荧光检测的荧光团、用于光吸收检测的发色团、用于链霉抗生物素蛋白-介导的ELISA检测的生物素)适当标记。典型地，将所述参考分子C保持为固定浓度，且B的浓度由于给定的B浓度或量而变化。作为结果，获得对应于A浓度的IC50值，在所述浓度时，在缺乏A的条件下，对C测量的信号减半。倘若Kd参考，参考分子的Kd,以及参考分子的总浓度c参考是已知的，则可以由下列公式Kd=IC50/(l+c参考/Kd参考)获得关于相互作用A-B的表观Kd。注意，如果c参考"^Kd参考，则Kd-IC50。倘若人们以一致的方式进行IC50测量(例如，保持c参考固定)，则可以通过IC50评估分子相互作用的强度或稳定性，并且贯穿本文将该测量判定为等价于Kd或表观Kd。优选地，作为单价形式的本发明氨基酸序列(如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以优于3000nM,优选地优于300nM,更优选地优于30nM诸如优于3nM的亲和性(Kd)結合于所述意欲或需要的分子，并且应该在所述第二生物学条件下，以差至少10倍、优选地差超过100倍，诸如差至少IOOO倍或更多的亲和性结合于所述意欲或需要的分子。例如,且不限制地,单价氨基酸序列可以在所述第二生物学条件下，以比3nM更差，更优选地比30nM更差，更优选地比300nM更差，诸如比3000nM更差的亲和性结合于所述意欲或需要的分子。除相互作用的亲和性外，相互作用的动力学也可以是分子的条件性结合行为中的激励因数(drivingfactor)。例如缔合率和解离-率中的差别可以在影响结合事件结果中起作用，例如随着改变生物学条件与结合抗原分开的速度，随着改变生物学条件结合于抗原的速率。优选地，作为单价形式的本发明氨基酸序列(如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以优于10-'s—1,优选地优于10-、—1，更优选地优于10-33_1诸如优于10、"的解离率结合于所述意欲或需要的分子，且应该在所述第二生物学条件下以差至少10倍，优选地差超过100倍，诸如差至少1000倍或更多的解离率结合于所述意欲或需要的分子。例如，且不限制地,单价氨基酸序列可以在所述第二生物学条件下，以比l(T4s"更差，更优选地比IO'3s"更差，更优选地比10—2s"更差，诸如比10'1s-1更差的解离率结合于所述意欲或需要的分子。优选地,作为单价形式的本发明氨基酸序列(如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以优于102]^13—1,优选地优于103M-1S-1,更优选地优于104M—1s'1诸如优于105M—1s'1的缔合率结合于所述意欲或需要的28分子，且应该在所述第二生物学条件下，以差至少10倍，优选地差超过100倍，诸如差至少1000倍或更多的缔合率结合于所述意欲或需要的分子。例如，且不限制地,单价氨基酸序列可以在所述第二生物学条件下，以比105NT1s"更差，更优选地比104M—1s"更差，更优选地比103M"s—1更差:诸如比1(^M"s"更差的相应缔合率，结合于所述意欲或需要的分子。在本发明另一个实施方案中,可以作为单价，二价或多价形式的本发明氨基酸序列(例如如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以0.1s"-IO-6s",优选地0.1s"-l(T5s"和更优选地0.01s'1-IO-4s"的解离率(K。ffrate)(g卩，解离率)，结合于所述意欲或需要的分子，且所述本发明的氨基酸序列应该在所述第二生物学条件下，以所述第一生物学条件下解离率的至少1,5倍(higherormore)的解离率，优选地以所述第一生物学条件下解离率的大于1,7倍(higherormore)的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的2倍的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的3倍的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的5倍的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的10倍的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的20倍的解离率结合于所述意欲或需要的分子。在本发明另一个实施方案中，可以作为单价，二价或多价形式的本发明氨基酸序列(例如如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以0.1s"-IO-6s"，优选地0.1s"■IO-5s"和更优选地0.01s-'-10-4s"的解离率(K。ffmte)(即，解离率)，结合于所述意欲或需要的分子，且所述本发明的氨基酸序列应该在所述第二生物学条件下，以所述第一生物学条件下解离率的至少1,5倍的解离率，优选地所述第一生物学条件下解离率的大于1，7倍的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的2倍的解离率,更优选地在所述第一生物学条件下解离率的3倍的解离率，更优选地在所述第一生物学条件下解离率的5倍的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的10倍以上的解离率，更优选地所述第一生物学条件下解离率的20倍的解离率结合于所述意欲或需要的分子；且其中，所述本发明的氨基酸序列单价结合于血清蛋白(优选地，血清清蛋白)并以单价、二价或多价方式结合于靶蛋白。在本发明另一个实施方案中，可以作为单价，二价或多价形式的本发明氨基酸序列(例如如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以解离率(K。ffrate)(g卩，解离率)0.1s—1-10'6s—1结合于所述意欲或需要的分子，且所述本发明的氨基酸序列应该，在所述第二生物学条件下，以所述第一生物学条件下解离率的至少2倍以上的解离率结合于所述意欲或需要的分子。在本发明另一个实施方案中，可以作为单价，二价或多价形式的本发明氨基酸序列(例如如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以解离率(K。ffrate)(g卩，解离率)O.ls"-10_6s"结合于所述意欲或需要的分子，且所述本发明的氨基酸序列应该，在所述第二生物学条件下，以所述第一生物学条件下解离率的至少5倍以上的解离率结合于所述意欲或需要的分子。在本发明另一个实施方案中,可以作为单价，二价或多价形式的本发明氨基酸序列(例如如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以解离率(k^rate)(即，解离率)0.01s"-10'4s—1结合于所述意欲或需要的分子，且所述本发明的氨基酸序列应该，在所述第二生物学条件下，以所述第一生物学条件下解离率的至少2倍的解离率结合于所述意欲或需要的分子；且其中，所述本发明的氨基酸序列单价结合于血清蛋白(优选地，血清清蛋白)并以单价、二价或多价方式结合于靶蛋白。在本发明另一个实施方案中,可以作为单价，二价或多价形式的本发明氨基酸序列(例如如本文中所述)应该，在所述第一生物学条件下，以解离率(K。ffrate)(即，解离率)0.01s"-l(T4s"结合于所述意欲或需要的分子，且所述本发明的氨基酸序列应该，在所述第二生物学条件下，以所述第一生物学条件下解离率的至少5倍的解离率结合于所述意欲或需要的分子;且其中，所述本发明的氨基酸序列单价结合于血清蛋白(优选地，血清清蛋白)并以单价、二价或多价方式结合于靶蛋白。可以以任何本身已知的合适方式，包括，例如，斯卡査德分析和/或竞争结合测定，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心式竞争测定，及其在本领域中本身已知的不同变体，确定氨基酸序列分别在第一和第二生物学条件下与意欲或需要的分子的结合(包括所述结合的缔合30常数、解离常数、亲和性、缔合率或解离率)。而且，如上提到地，可以在人体或动物体内体内测量所述结合，或-当这不可行或行不通时-例如，在体外或细胞测定或对应于和/或代表动物体或人体内可以存在的条件的模型的条件下，离体地测量所述结合。例如，当所述第一或第二生物学条件包括人或动物循环中普遍存在的生理学条件时，可以在血液样品、血浆样品或另一种源自所述人或动物的合适血液-或血浆-来源制剂或溶液中确定本发明的氨基酸序列在所述条件下的结合。当所述第一或第二生物学条件包括细胞中普遍存在的生理学条件时，可以在合适的细胞提取物中确定本发明的氨基酸序列在所述条件下的结合。当所述第一或第二生物学条件在pH和/或离子强度方面不同时，例如可以利用一种或多种合适的生理学缓冲液或溶液确定本发明的氨基酸序列在所述第一和第二生物学条件下(即，在pH和/或离子强度的相关值处)的结合。本发明的氨基酸序列可以是能够结合于(如本文中所述)和/或对意欲或需要的分子具有亲和性的任何蛋白质或多肽(或其衍生物，诸如加入聚乙二醇的衍生物)。按照本发明的具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列可以选自由下列各项组成的组具有免疫球蛋白折叠的蛋白质和肽，基于除免疫球蛋白外其它蛋白质支架的蛋白质和肽，其包括但不限于蛋白质A结构域、淀粉酶抑肽、纤连蛋白、脂笼蛋白、CTLA-4、T-细胞受体、设计的锚蛋白重复序列和PDZ结构域(Binz等，自然生物技术(Nat.Biotech)2005,巻23:1257),和基于DNA或RNA的结合部分，包括但不限于DNA或RNA适体(Ulrich等.CombChemHighThroughputScreen20069(8):619-32);且特别地选自由具有免疫球蛋白折叠的蛋白质和肽(或选自任意前述各项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体、衍生物、等)组成的组。而且，按照一个具体但非限制性方面,本发明的氨基酸序列可以包括四种彼此间由三种互补性决定区隔开的构架区或基本由其组成(或来自所述蛋白质或多肽的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体、衍生物、等。如本文中进一步所述，所述部分或片段优选地至少包括所述蛋白质或多肽的至少一种CDR)。例如，本发明的氨基酸序列可以选自由下列各项组成的组抗体和抗体片段、源自抗体或抗体片段的结合单位和结合分子、和抗体片段、结合单位或结合分子；且特别选自由下列各项组成的组重链可变结构域、轻链可变结构域、结构域抗体和合适于作为结构域抗体使用的蛋白质和肽、单结构域抗体和适合于作为单结构域抗体使用的蛋白质和肽、纳米抗体⑧和dAbsTM(或选自所述蛋白质或多肽的合适'部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体、衍生物、等。而且，所述部分或片段优选地至少包括至少一种CDR)。根据本发明的氨基酸序列是被如何选择的，它优选地包括4-500个氨基酸残基，更优选地5-300个氨基酸残基,和甚至更优选地10-200个氨基酸残基，诸如20-150个氨基酸残基，例如约30,40,50,60,70,80，90，100,110:120,130或140个氨基酸残基。而且，本发明的氨基酸序列优选地包括单氨基酸链(具有或不具有二硫键/键合)。在一个具体但非限制性实施方案中，本发明的氨基酸序列是基本不包括免疫球蛋白折叠的小线性肽。在该实施方案中，本发明的氨基酸序列可以包括3-50,优选地5-40,诸如约10，15,20或25个氨基酸残基。所述肽可以例如是小的合成或半-合成肽和/或可以源自或包括至少一种来自针对所述意欲或需要的分子的本发明免疫球蛋白(即，其中所述免疫球蛋白可以如本文中进一步所述)的CDR。例如，所述肽可以源自或包括至少一种来自本发明重链可变结构域、轻链可变结构域、结构域抗体、单结构域抗体、纳米抗体TM或dAbsTM，和特别来自本发明纳米抗体的CDR(诸如CDR1,CDR2,和特别CDR3)。参考例如WO03/050531(埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)和AlgonomicsN.V.),其描述了用于识别和选择肽，具体地结合于给定靶标或目的靶标的免疫球蛋白重链可变结构域CDR序列的方法。按照另一个优选实施方案，本发明的氨基酸序列选自由下列各项组成的组结构域抗体、单结构域抗体和适合于作为单结构域抗体使用蛋白质和肽、纳米抗体⑧和dAbsTM(或其合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体、衍生物)。最优选地，本发明的氨基酸序列是VHH结构域纳米抗体⑧。有关用于生成所述Vhh结构域纳米抗体⑧的纳米抗体和方法的描述，参考本文中进一步引用的现有技术。本发明的氨基酸序列针对的意欲或需要的分子可以是任何合适或需要的分子。通常，它应该是人体或动物体中存在的分子，例如人体或动物体中天然存在的分子；当人或动物患有疾病或病症时所述人体或动物体中存在的分子;或人体或动物体中天然不存在的(但被施用或以别的方式进入人体或动物体中的)分子。当所述需要或意欲的分子是人体或动物体中或患有疾病或病症的人体或动物体上天然存在的分子时，所述分子可以例如是任何生物学分子，诸如蛋白质、(多)肽、受体、抗原、抗原决定簇、酶、因子、等。基于本文中的公开内容，技术人员应该清楚这些和其它合适生物学分子的实例。当所述需要或意欲的分子是人体或动物体中天然不存在的分子时，所述分子可以例如是异源蛋白质、病毒(外壳上存在的蛋白质)、细菌或真菌(细胞壁中存在的蛋白质)、外源性化学物质化合物、等。基于本文中的公开内容，技术人员应该清楚这些和其它合适生物学分子的实按照一个具体但非限制性实施方案(本文中更详细描述)，所述意欲或需要的分子可以是血清蛋白，诸如清蛋白,和具体地人血清蛋白，诸如人血清清蛋白。本发明氨基酸序列可以针对的其它血清蛋白的实例是国际申请WO04/003019(也见EP1517921)中提到的那些。按照一个具体但非限制性实施方案，所述意欲或需要的分子可以是任何生物学分子，所述生物学分子在其存在的人体或动物体内，经历再循环、内在化、胞饮作用、胞转或胞吞或以别的方式被所述人体内的至少一种细胞或组织吸收。一些非限制性实例包括一些血清蛋白，诸如血清清蛋白和一些受体。按照一个具体但非限制性实施方案，所述意欲或需要的分子可以是在人体或动物体的至少一种细胞或组织表面上存在的任何生物学分子。而且，一些非限制性实例包括受体，诸如胰岛素受体。按照该实施方案的特殊方面，例如，作为再循环(例如受体再循环)的一部分，这种生物学分子还可以被这样的细胞吸收，其中所述生物学分子存在于所述细胞上。在其它方面中，本发明涉及用于生成本发明的氨基酸序列的方法。一方面，所述方法至少包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下能够以10—s摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子的氨基酸序列；c)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下，以这样的解离常数(KD)结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离常数(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少10倍；禾口d)分离在所述第一生物学条件下能够以10—5摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子和在所述第二生物学条件下以这样的解离常数(Kd)结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离常数(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少10倍；具体地，所述方法可以包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下能够以l(T5摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子的氨基酸序列；从而提供在所述第一生物学条件下能够以10—5摩尔/升或更低的解寓常数(Kd)结合于所述需要的分子的氨基酸序列组、集合或文库；禾口c)筛选步骤b)中获得的氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下以这样的解离常数(KD)结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离常数(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少10倍；和d)分离在所述第一生物学条件下能够以10—5摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子和在所述第二生物学条件下以这样的解离常数(Kd)结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离常数34(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少10倍。通常，在这些方法中，步骤b)，即筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下能够以10—5摩尔/升或更低的解离常数(Kd)结合于所述需要的分子的氨基酸序列，是通过在所述第一生物学条件下筛选进行的。类似地，在这些方法中，步骤C)，即筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下，以这样的解离常数(Kd)結合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离常数(Ko)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少10倍，所述步骤c)是在所述第二生物学条件下进行的。在其它方面，本发明涉及用于生成本发明氨基酸序列的方法。在一方面，所述方法至少包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下能够以0.1s-1和10_6s"的解离率,例如诸如0.01-0.00001的koff结合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下以这样的解离率结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离率是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离率至少1.5倍以上的解离率，更优选地1.7倍以上的解离率，更优选地2倍以上的解离率，更优选地3倍以上的解离率，更优选地4倍以上的解离率，更优选地5倍以上的解离率，更优选地10倍以上的解离率；和d)分离所述氨基酸序列。在本发明另一个实施方案中，所述方法可以包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下能够以0.1s'1和10-6s"的解离率,例如诸如0.01-0.00001的k^结合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下以这样的解离率结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离率是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离率至少2倍以上；和d)分离所述氨基酸序列。在本发明另一个实施方案中，所述方法可以包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下，例如pH7.2-7,4，例如7.2下，能够以0.1s'1和l(T6s'1的解离率,例如诸如0.01-0.00001的解离率(k。ff)结合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下，例如pH5-6，例如pH5.5下，以这样的解离率结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离率是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离率至少2倍以上；和d)分离所述氨基酸序列；和任选地e)体内评估(例如在食蟹猴中PK评估)所述氨基酸序列的半衰期。在本发明另一个实施方案中，所述方法可以包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下，例如pH7.2-7，4，例如7.3下，能够以0.1s—1和10—6s—1的解离率，例如诸如0.01-0.00001的解离率(koff)结合于所述需要的分子的氨基酸序列；禾口c)(筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下，例如pH5-6，例如pH5.5下，以这样的解离率结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离率是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离率的至少2倍以上诸如3倍、5倍、10倍、100倍、1000倍；或d)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下不结合于所述需要的分子的氨基酸序列)，和e)分离所述氨基酸序列；和任选地36f)体内评估(例如在食蟹猴中PK评估)所述氨基酸序列的半衰期。在本发明另一个实施方案中，所述方法可以包括下列步骤a)提供氨基酸序列组、集合或文库；和b)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第二生物学条件下，例如pH5-6，例如pH5.5下，能够以0.1s-1和10'6s"的解离率,例如诸如0.01-0.00001的解离率(k。ff)结合于所述需要的分子的氨基酸序列；和c)(筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下，例如pH7.2-7.4,例如7.3下，以这样的解离率结合于所述需要的分子的氨基酸序列，所述这样的解离率是所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下结合于所述需要的分子的解离率的至少2倍以上诸如3倍、5倍、10倍、100倍、1000倍；或d)筛选所述氨基酸序列组、集合或文库，以获得在所述第一生物学条件下不结合于所述需要的分子的氨基酸序列)，和e)分离所述氨基酸序列；和任选地f)体内评估(例如在食蟹猴中PK评估)所述氨基酸序列的半衰期。如技术人员应该清楚地，还可以将筛选步骤作为选择步骤进行。例如，已知抗体-抗原相互作用通常对缓冲液条件、pH和离子强度变化敏感，但是最经常的是没有对那些变化进行评分或研究，且不经常使用它们来设计药物治疗剂，因为这些变化总体上是不可预知的。例如通过筛选结合蛋白的所有组成成分以获得敏感相互作用的发生，例如通过分别在第一和第二生物学条件下进行结合测定,和确定的相对结合强度，发现了具有需要的结合特征的结合蛋白。可以利用任何合适的结合测试包括ELISA、基于BIAcore的方法、斯卡査德分析等，测量所述相对相互作用强度。所述测试将揭示哪些结合蛋白表现出对所选参数(pH)敏感的相互作用和到何种程度。备选地，通过例如从噬菌体、核糖体、酵母或细胞文库中，利用优选富含需要的敏感性的选择中的条件，选择结合蛋白的所有组成成分，从而发现了具有需要的结合特征的结合蛋白。采取在pH方面不同的第一和第二生物学条件作为实例，在碱性pH(例如，pH7.4)培养噬菌体抗体文库并且利用较低pH(例如，6.0)的缓冲液洗脱结合的噬菌体粒子，将富集那些识别易受PH变化影响的抗原的噬菌体抗体。在所述选择的重复周期后，筛选各个克隆，从而识别在该pH范围内表现出pH-依赖性结合的结合蛋白。还可以从设计的蛋白质文库中分离具有需要的结合特征的结合蛋白，在所述蛋白质文库中将推定结合位点改造为包含在某些"敏感的"相互作用中优选的氨基酸残基或序列，例如关于pH-敏感性的组氨酸。例如，已知FcRn和IgG的相互作用对pH非常敏感，当pH从pH6.0升至7.0时，降低超过2个数量级。亲和性转变的主要机制基础是结合位点的组氨酸含量组氨酸残基的咪唑侧改变通常在pH6.0-7.0的范围内脱质子。预测在推定结合位点中明确包含组氨酸(例如，利用优先将该残基引入文库中的寡核苷酸，如使用三核苷酸和本领域中已知的，例如Knappik等，分子生物学杂志(J.MoLBiol)2000,巻296:57-86)以较高频率产生基本依赖于pH结合的氨基酸序列。因此，术语"筛选"，用于本说明书中时，可以包括选择、筛选或选择和/或筛选技术的任何合适组合。通常，可以作为单独或独立的筛选步骤，或作为单独筛选过程的一部分执行步骤b)和c)。当作为单独筛选过程的一部分执行步骤b)和c)时，所述筛选过程可以例如包括下列步骤i)在所述第一生物学条件下，使氨基酸序列组、集合或文库与所述需要的分子相接触(即，从而使能够以10—5摩尔/升或更低的解离常数(Kd)结合于所述需要的分子的氨基酸序列结合于所述需要的分子，且从而使不能够以IO-5摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子的氨基酸序列不结合于所述需要的分子)；ii)除去步骤i)中不结合的氨基酸序列(即，在所述第一生物学条件下，不以l(T5摩尔/升或更低的解离常数(Kd)結合于所述需要的分子的那些氨基酸序列)；以便保留与意欲一需要的分子结合(并且在所述第一生物学条件下也存在)的氨基酸序列组或集合；iii)使所述氨基酸序列组或集合经历所述第二生物学条件，从而使，不条件性地结合(如本文中定义)于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列保持与所述意欲或需要的分子的结合，且从而使，条件性地结合(如本文中定义)于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列不再保持与所述意欲或需要的分子的结合；iv)分离条件性地结合(如本文中定义)于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列和不条件性地结合(仍结合于所述需要的分子)的氨基酸序列；和任选地，v)收集条件性地结合于所述意欲或需要的分子的氨基酸序列。例如，可以通过提供合适的载体或支持物(诸如，柱、珠、或固体表面诸如多-孔板的孔表面、或Biacore的静止相)容易地执行这种单筛选过程，其中将所述需要的分子适当地固定(例如，共价地或通过抗生物素蛋白-链霉抗生物素蛋白连接)于所述载体或支持物上；使所述载体或支持物与所述氨基酸序列组、集合或文库相接触；洗掉不结合于与所述载体或支持物相结合的需要的分子的氨基酸序列；将条件改变为所述第二生物学条件，并收集在所述第二生物学条件下，不结合于与所述载体或支持物相结合的需要的分子的氨基酸序列。备选地，如下文中更详细描述地，可以通过富集关于结合于所述需要的分子的条件性结合物的氨基酸序列组、集合或文库(如本文中所述)，获得本发明的氨基酸序列。在以上方法中使用的氨基酸序列组、集合或文库可以是任何合适的氨基酸序列组、集合或文库。例如，所述氨基酸序列组、集合或文库可以是免疫球蛋白序列或免疫球蛋白序列片段的组、集合或文库，诸如免疫球蛋白可变结构域序列或其片段的组、集合或文库，例如Vh-，Vl-或Vhh-序列或其片段的组、集合或文库。在一个具体但非限制性方面，所述氨基酸序列组、集合或文库是结构域抗体的、能够作为结构域抗体使用的蛋白质的、"dAb"的、单结构域抗体的、能够作为单结构域抗体使用的蛋白质的、或纳米抗体的(或任何前述各项的合适片段的)组、集合或文库。所述氨基酸序列的组、集合或文库可以是首次用于实验的组、集合或文库；可以是合成或半-合成氨基酸序列的组、集合或文库(例如，但不限于,通过亲和力成熟产生的氨基酸序列的组、集合或文库),或可以是免疫组、集合或文库。在一个实施方案中，所述组、集合或文库是通过用抗原适当免疫哺乳动物(诸如兔、大鼠、小鼠、猪或狗、或骆驼科动物(camelid))(从而使所述哺乳动物形成针对所述抗原的抗体)获得的免疫组、集合或文库,39并然后由获自所述哺乳动物的生物学样品(诸如血液或B-细胞样品)开始，产生免疫球蛋白序列组、集合或文库。例如，由本文中引用的现有技术，技术人员应该清楚用于获得和筛选所述免疫组、集合或文库的方法和技术。在一个优选的方面,免疫球蛋白序列的组、集合或文库获自已被预期血清蛋白(例如被血清清蛋白)适当免疫的哺乳动物。在另一个优选的方面,所述组、集合或文库是获自骆驼科动物的VHH序列的组、集合或文库，和具体地，获自已被预期的血清蛋白(例如被血清清蛋白)适当免疫的骆驼科幼物的Vhh序列的免疫组、集合或文库。所述组、集合或文库可以包括任何合适数量的氨基酸序列，诸如1,2,3或约5，10,50,100,500,1000,5000,104,105,106,107,108或更多序列。以上氨基酸序列的组、集合或文库可以包括一种或多种在选择和/或筛选过程前未知的序列，例如如果这些序列是一种或多种给定氨基酸序列随机化步骤(例如通过易错PCR或其它方法)的结果。而且，可以通过合理或半-经验的方法，诸如计算机建模技术或生物静力学或数据-开采技术，获得或定义以上氨基酸序列组、集合或文库中的一种或多种或全部氨基酸序列，其中可以将氨基酸序列定义或提议为被预期或认为赋有某些特性诸如增高的稳定性、pH最适度、蛋白酶敏感性或其它特性或其组合。在所述组、集合或文库中(和/或在本文中所述的筛选步骤中)，所述组、集合或文库中存在的氨基酸序列还可以适当地显示在合适的宿主或宿主细胞上，例如在噬菌体粒子、核糖体、细菌、酵母细胞等上。此外，例如由本文中引用的现有技术，技术人员应该清楚合适的宿主或宿主细胞、用于在所述宿主或宿主细胞上显示氨基酸序列的合适技术、和用于筛选所述宿主或宿主细胞上显示的氨基酸序列组、集合或文库的合适技术。当在合适的宿主或宿主细胞上显示氨基酸序列时，还可能(和习惯)首先从所述宿主或宿主细胞分离编码需要的氨基酸序列的核苷酸序列，并且然后通过在合适的宿主生物体中适当表达所述核苷酸序列获得需要的氨基酸序列。此外，如技术人员应该清楚地，这可以以任何本身已知的合适方式执行。通过非-限制性实例的方法，所述组、集合或文库可以包括1、2或多种彼此不同的氨基酸序列(例如，具有设计的点突变或具有随机化位置)，包括(compmmise)源自天然多样化氨基酸序列(例如免疫文库)的不同组，或任何其它不同氨基酸序列来源(如例如在Hoogenboom等，自然生物技术(NatBiotechnol)23:1105,2005禾卩Binz等，自然生物技术(NatBiotechnol)2005,23:1247中所述)的多种氨基酸序列。所述氨基酸序列的组、集合或文库可以显示在噬菌体粒子、核糖体、细菌、酵母细胞、哺乳动物细胞表面上，并且与这些载体中编码所述氨基酸序列的核苷酸序列相连。这使得所述组、集合或文库可以按照选择程序分离本发明的需要氨基酸序列。本发明的氨基酸序列还可以包含一种或多种关于一种或多种其它抗原、抗原决定簇、蛋白质、多肽、或其它化合物的另外的结合位点。可以将本文中公开的氨基酸序列有利地用作关于其它部分(诸如其它氨基酸序列、蛋白质或多肽、或其它化学实体)的融合配偶体，和具体地用作关于治疗部分诸如治疗蛋白质或多肽、治疗化合物(包括，但不限于，小分子)或其它治疗实体的融合配偶体。所述包括至少一种本发明的氨基酸序列和至少一种其它化合物、部分或实体的构建体或融合物本文中也称为"本发剪游众合欽'。因此，在其它方面，本发明提供包括本发明公开的氨基酸序列或基本由其组成的化合物，诸如多肽或蛋白质构建体，所述本发明公开的氨基酸序列任选地，通过一种或多种合适的连接体或间隔区，与至少一种治疗部分相连。如本文中进一步所述，所述多肽或蛋白质构建体可以例如(但不限于)是融合蛋白。本发明还涉及多肽或蛋白质构建体或融合蛋白的治疗用途，以及包括所述多肽或蛋白质构建体或融合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由治疗蛋白质、多肽、化合物、因子或其它实体组成。在优选的实施方案中，所述治疗部分针对需要的抗原或靶标，能够结合于需要的抗原(和具体地，能够特异性结合于需要的抗原)，和/或能够与需要的靶标相互作用。在另一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由治疗蛋白质或多肽组成。在另一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不限于免疫球蛋白片段)，诸如抗体或抗体片段(包41括但不限于ScFv片段)组成。在再一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由抗体可变结构域，诸如重链可变结构域或轻链可变结构域组成。在优选的实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由至少一种结构域抗体或单结构域抗体，"dAb"或纳米抗体⑧组成，这样由此产生的多肽或蛋白质构建体或融合蛋白是多价构建体和优选地多特异性构建体。在本说明书中，所谓"多价"化合物、蛋白质、多肽或构建体意指包括至少2个结合单位(g卩，结合于相同或不同表位)的化合物、蛋白质、多肽或构建体，其全部能够结合于相同(类型)的生物学分子。在本说明书中，所谓"二价"化合物、蛋白质、多肽或构建体意指包括2个结合单位的化合物、蛋白质、多肽或构建体，其能够结合于相同(类型)的生物学分子。在本说明书中，所谓"单价"化合物、蛋白质或多肽意指基本由1个结合单位组成的化合物、蛋白质或多肽，其能够结合于生物学分子。在本说明书中，所谓"结合单位"意指任何能够结合如本文中所述的生物学分子,诸如本发明的氨基酸序列或治疗部分(均如本文中所述)的氨基酸序列、肽、蛋白质、多肽、构建体、融合蛋白、化合物、因子或其它实体。当化合物、蛋白质、多肽或构建体包括2个或更多结合单位时，所述结合单位可以任选地通过一种或多种合适的连接体彼此相连。在本说明书中，所谓"多特异性"化合物、蛋白质、多肽或构建体意指包括至少2个结合单位的化合物、蛋白质、多肽或构建体，其中至少第一结合单位能够结合于第一生物学功能分子和其中至少第二结合单位能够结合于第二生物学功能分子，在本说明书中，所谓"双特异性"化合物、蛋白质、多肽或构建体意指包括2个结合单位的化合物、蛋白质、多肽或构建体，其中所述第一结合单位能够结合于第一生物学功能分子和其中所述第二结合单位能够结合于第二生物学功能分子。所述第一和第二生物学功能分子可以是不同的分子或可以是相同的生物学分子，在该情形中，所述双特异性化合物识别或结合于位于(atto)不同位点的生物学分子。在具体实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由至少一个单价纳米抗体⑧或二价、多价、双特异性或多特异性纳米抗体⑧构建体组成。在其它具体实施方案中，本发明的化合物可以包括两个或更多本发明的氨基酸序列(和任选地，一个或多个如本文中所述的其它部分)，其任选地通过一种或多种合适的连接体相连，其中所述两个或更多本发明的氨基酸序列可以针对相同的需要的或意欲的分子(例如,从而提供在所述第一生物学条件下具有增高亲和力的条件性的结合物)，针对相同需要的或意欲的分子上表位的不同部分(而且，例如，从而提供在所述第一生物学条件下具有增高亲和力的条件性结合物)，或针对不同的意欲或需要的分子。按照上一个非限制性实施方案，本发明的化合物可以是双特异性(或多特异性)化合物，其条件性地结合于2种或更多不同的预期的需要的分子。同样地，本发明的化合物可以是这样的，以致它在所述第一生物学条件下(或备选地，在所述第二生物学条件下)结合于第一和第二意欲或需要的分子，或可以是这样的，以致它在所述第一生物学条件下结合于第一意欲或需要的分子，而在所述第二生物学条件下结合于第二意欲或需要的分子。因此，当由所述第一生物学条件变化为所述第二生物学条件时，所述本发明的化合物因此会从第一意欲或需要的分子中释放出来并结合于第二意欲或需要的分子。由本文中的进一步说明，所述本发明化合物中条件性的结合物为了延长治疗化合物、部分或实体的半衰期目的的一些具体但非限制性应用将变得清楚。在其它实施方案中,本发明的化合物可以包括至少1种如本文中所述的条件性的结合单位，和一种或多种本身不是条件性的结合物的其它结合单位。而且，由本文中的进一步说明，所述本发明化合物中条件性的结合物为了延长治疗化合物、部分或实体半衰期目的的一些具体但非限制性应用将变得清楚。本发明还涉及编码本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白质、多肽、融合蛋白或多价或多特异性构建体的核苷酸序列或核酸。本发明还包括包括上述核苷酸序列或核酸的遗传构建体，和一种或多种本身已知的用于遗传构建体的元件。所述遗传构建体可以处于质粒或载体的形式。所述遗传构建体和其它遗传构建体是本领域技术人员已知的。43本发明还涉及包含所述核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白质、多肽、融合蛋白或多价或多特异性构建体的宿主或宿主细胞。而且，所述宿主或宿主细胞是本领域技术人员已知的。本发明通常还涉及用于制备本文中所述氨基酸序列、化合物、蛋白质、多肽、融合蛋白或多价或多特异性构建体的方法，所述方法包括在这样的条件下培养或维持本文中所述的宿主细胞，在所述条件下，所述宿主细胞产生或表达如本文中所述的氨基酸序列、化合物、蛋白质、多肽、融合蛋白或多价或多特异性构建体，且任选地，还包括分离由此产生的氨基酸序列、化合物、蛋白质、多肽、融合蛋白或或多价或多特异性构建体。而且，可以如本文中提到的申请人的共同-待审专利申请中通常所述的方式，执行所述方法。可以将本发明的氨基酸序列和化合物设计为并用于任何本身已知的合适目的，其依赖于选择本发明化合物中存在的条件性结合物所针对的意欲或需要的化合物,和还依赖于本发明化合物中存在的其它部分、化合物或结合单位(其可以是条件性的或非-条件性的结合单位)。基于本文中的公开内容，所述目的以及适于所述应用的本发明氨基酸序列和化合物对技术人员而言应该是清楚的。按照本发明的一个具体但非限制性应用，本发明的氨基酸序列针对血清蛋白,并能够作为融合配偶体，结合单位或部分使用，从而增长治疗部分或化合物的半衰期(如本文中所述)。'能够结合于血清蛋白的氨基酸序列及其在多肽构建体中用于增加治疗相关蛋白质、多肽和其它化合物半衰期的用途是本领域中己知的。例如，WO91/01743、WO01/45746和WO02/076489描述肽部分结合于能够融合于治疗蛋白和其它治疗化合物和实体从而增长其半衰期的血清清蛋白。然而，这些肽部分是细菌或合成来源的，其在治疗中的使用是较不优选的。新生儿Fc受体(FcRn)，也称为"Brambell受体"，与延长清蛋白在循环中的寿命有关(见Chaudhury等，实验医学杂志(TheJournalofExperimentalMedicine)，第3巻，第197号，315-322(2003))。FcRn受体是由可溶性轻链、跨膜区和约50个氨基酸的胞质尾区组成的完整膜糖蛋白，所述可溶性轻链由P2-微球蛋白组成，所述P2-微球蛋白通过三个细胞外结构域与43kDot链非共价结合。所述胞质尾区包含涉及受体内在化、以二核苷酸基序为基础的胞吞作用信号。所述a链是蛋白质非经典MHCI家族的成员。P2m与a链的联合对FcRn的正确折叠和离开内质网定向到内体和细胞表面非常关键。FcRn的总体结构类似于I类分子的总体结构。a-l和a-2区类似由8个反平行P链组成的平台，所述反平行(3链形成顶部为2个反平行a-螺旋的单(3-折叠，所述a-螺旋非常类似于MHCI分子中的肽裂。由于a-l螺旋的全面重新定位和由于存在Pro162所引入的a-2螺旋中的断裂而导致的所述螺旋的C-末端部分弯曲，FcRn螺旋彼此相当靠近，从而阻断肽结合。FcRn的Argl64侧链也阻断肽N-末端与MHC袋的潜在相互作用。另外，a-l和a-2螺旋间的盐桥和疏水性相互作用也有利于沟闭合。因此，FcRn不参与抗原呈递，且所述肽裂是空的。FcRn结合并运输IgG由母体循环穿过胎盘合胞滋养层到达胎儿循环，并保护成年人中IgG免于被降解。除体内稳态外，FcRn控制组织中IgG的胞转作用。FcRn位于上皮细胞、内皮细胞和肝细胞中。按照Chaudhury等(见上)，清蛋白结合FcRn从而与IgG—起形成三隱分子复合物。清蛋白和IgG非协作地结合于FcRn上的不同位点。人FcRn与琼脂糖-HSA和琼脂糖-hlgG的结合是pH依赖性的，其在pH5.0时达到最大，并在pH7.0-pH8时为零。关于FcRn以与结合IgG相同的pH依赖方式结合清蛋白的观察提示清蛋白与FcRn相互作用并由此受到保护免于被降解的机制与IgG的相同，并通过类似的与FcRn的pH敏感性相互作用受到介导。利用SPR测量各个HSA结构域结合固定的可溶性hFcRn的能力，Chaudhury显示FcRn和清蛋白通过清蛋白的D-III结构域，以pH-依赖性方式，在与IgG结合位点不同的位点上相互作用(Chaudhury，PhD论文，见http:〃www.andersonlab.com/biosketchCC.htm;Chaudhury等生物化学(Biochemistry)，ASAP文章10.1021/bi052628yS0006-2960(05)02628扁0(网页公开日期2006年3月22曰))。本申请人的WO04/041865描述能够结合于血清清蛋白(和具体地针对人血清清蛋白)的纳米抗体⑧，所述纳米抗体⑧能够与其它蛋白质c诸如，一种或多种能够结合于需要靶标的其它纳米抗体⑧)相连，从而增长所述蛋白质的半衰期。已知这些纳米抗体⑧比常规四-链血清清蛋白结合抗体更有效的和更稳定，其导致(l)较低剂量形式、较低给药频率，从而引起较少副作用；(2)改进的稳定性，从而引起施用途径的广泛选择，包括，除静脉内途径外，口服或皮下途径;(3)由于较低的材料成本引起的较低治疗成本。在这个本发明的实施方案中，所述需要的分子是血清蛋白，和具体地，在人体或动物体内进行再循环的血清蛋白。所述血清蛋白的一些非限制性实例是能够结合于FcRn诸如血清清蛋白和IgG的血清蛋白。技术人员应该清楚本发明的氨基酸序列能够结合的其它血清蛋白，其例如包括国际申请WO04/003019(还见EP1517921)中提到的血清蛋白。因此，按照这个实施方案，本发明涉及针对血清蛋白的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物学条件下，以10'5摩尔/升或更低的解离常数(Kd)和域以至少1()sm"的结合亲和性(Ka)結合于所述血清蛋白;和b)在第二生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白的解离常数至少10倍的解离常数(Ko)结合于所述血清蛋白。本发明的氨基酸序列结合(或在生理学条件下，能够结合)的血清蛋白可以是任何血清蛋白(诸如本文中和在WO04/003019中提到的那些,且具体地，可以是在天然存在所述血清蛋白的人体或动物体内进行再循环或再循环机制的任何血清蛋白。技术人员应该清楚所述血清蛋白的实例。更具体地，本发明的氨基酸序列结合(或在生理学条件下，能够结合)的血清蛋白可以选自由下列各项组成的组..血清清蛋白、免疫球蛋白诸如IgG和转铁蛋白。按照优选但非限制性实施方案，本发明的氨基酸序列结合于血清清蛋白。所述血清蛋白优选地是人血清蛋白，诸如人血清清蛋白、IgG或转铁蛋白、和具体地人血清清蛋白。然而，应该理解按照本发明的一些具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列可以与来自至少一种其它哺乳动物物种，诸如小鼠、大鼠、兔、狗或灵长类动物的相应(即，直向同源)血清蛋白交叉-反应。具体地，按照这些方面，如本文中进一步所述，本发明的氨基酸序列可以与来自至少一种其它灵长类动物物种的相应(即，直向同源)血清蛋白交叉-反应。具体地，按照该实施方案，本发明的氨基酸序列在所述第二生物学条件下，可以以这样的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白，所述解离常数(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白的解离常数的至少lO-倍，优选地100倍，更优选地1000倍。在优选的实施方案中，本发明的氨基酸序列，例如单链抗体，例如dAb或纳米抗体，在所述第二生物学条件下，根本不结合，例如本发明的氨基酸序列在pH5.5(或在pH5-6)不结合，但在生理学pH,艮P，pH7.2-7.4下结合。优选地，按照该实施方案，本发明的氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以l(T6摩尔/升或更小的解离常数(KD),优选地以10_7摩尔/升或更低的解离常数(KD)，更优选地以l(T8摩尔/升或更低的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白。而且，优选地，按照该实施方案，本发明的氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以10-6摩尔/升或更高的解离常数(KD),优选地以l(T5摩尔/升或更高的解离常数(KD),更优选地以l(T4摩尔/升或更高的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白。在本发明的另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以这样的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白，所述解离常数(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白的解离常数的至少IO分之一，IOO分之一，优选地1000分之一。在本发明另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10一6摩尔/升或更高的解离常数(Kd)，且在所述第二生物学条件下以10—7摩尔/升或更低，例如10'8摩尔/升或更低或10—9摩尔/升或更低的解离常数(KD)，结合于所述血清蛋白。在本发明另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10—5摩尔/升或更高的解离常数(KD)，且在所述第二生物学条件下，以10'6摩尔/升或更低，例如10—7摩尔/升或更低;或例如10'847摩尔/升或更低的解离常数(KD)，结合于所述血清蛋白。在本发明另一个实施方案中，本发明的氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以l(T4摩尔/升或更高的解离常数(Kd),且在所述第二生物学条件下，以10—5摩尔/升或更低，例如10—6摩尔/升或更低;或例如10'7摩尔/升或更低的解离常数(KD)，结合于所述血清蛋白。在优选的实施方案中，本发明的氨基酸序列，例如单链抗体，例如dAb或纳米抗体，在所述第一生物学条件下根本不结合，例如本发明的氨基酸序列在内体pH5.5(或在pH5-6)下结合，但在细胞外pH,即，在pH7.2-7.4下不结合。在其它优选实施方案中，本发明的氨基酸序列，例如单链抗体，例如dAb或纳米抗体，是二价或多价氨基酸序列，其中一个结合区段针对人血清清蛋白且其中所述人血清清蛋白结合区段在pH5.5(或在pH5-6)下不结合，但在pH7.2-7.4下结合;和任选地，本发明的氨基酸序列，例如单链抗体，例如dAb或纳米抗体，结合于关于治疗干预的耙蛋白(例如处于单价或多价，例如二价形式)。所述关于治疗干预靶标的实例是TNF超家族的蛋白质(Aggarwal，自然综述免疫学(NatureReviewsImmunology)3:747,2003)。该蛋白质超家族由19个成员组成，其通过29个受体发信号。这些配体，在调节正常功能，诸如免疫应答、血细胞生成和形态发生时，还在肿瘤发生、移植排斥、败血症性休克、病毒复制、骨吸收、类风湿性关节炎和糖尿病中有所涉及。已经批准了对人使用TNF阻滞剂治疗TNF-相关的自体免疫疾病。尽管大部分配体结合于单受体，其它结合于多于一种受体。例如，TRAIL结合于5种受体(DR4,DR5，DVRl,DCR2和OPG)之多，而BAFF结合于三种受体、跨膜活化剂和亲环蛋白配体相互作用剂(TACI)、B-细胞成熟抗原(BMCA)和BAFFR(Aggarwal，2003，图1)。还存在关于针对TNP超家族不同配体的受体之间串扰的证据。由此得出结论，为了获得最大治疗益处，所有配体与特定受体的相互作用，或特定配体与其所有受体的相互作用将会同时受到抑制。因此，为了有效的治疗，需要多种不同结合分子或具有多结合特异性的结合分子。关于治疗干预的可能耙标的其它实例是受体酪氨酸激酶亚-家族，即Eph家族，包括16种已知的Eph受体(14存在于哺乳动物中)和9种已知的肝配蛋白配体(8种存在于哺乳动物中)。Eph受体和肝配蛋白配体指导系统定位细胞和调节细胞形态学的能力反映出它们在发育中的不同作用。这些膜锚定配体和受体涉及双向信号传导(进入受体携带细胞和配体携带细胞。Eph受体，首先显示出是轴突路径选择(pathfinding)和神经元细胞转移的重要调节剂(Drescher等.，细胞(Cell)82:359，1995;Henkemeyer等.，细胞(Cell)86:35,1996),现已知它们在控制一批多样的其它细胞-细胞相互作用中，包括在血管内皮细胞(Wang等.，细胞(Cell)93:741,1998;Adams等.，基因发育(GenesDev.)13:295,1999;Gerety等.，分子细胞(Mol.Cell)4:403,1999)和分化的上皮细胞(Orioli等.，EMBO杂志(EMBOJ.)15:6035,1996;Flanagan和Vanderhaeghen神经科学年度综述(Annu.Rev.Neurosci.)21:309,1998;Frisen等，EMBO杂志(EMBOJ.)18:5159,1999;Cowan等.，神经元26:417,2000)的那些中起作用。肝配蛋白和肝配蛋白受体双向信号传导与轴突指导、血管发生和骨重建有关。在治疗学上，存在关于对抗某些肝配蛋白-Eph受体信号传导过程的兴趣。基于其关于彼此间亲和性和序列保守性，将肝配蛋白和Eph受体分为2类，艮卩A和B。通常，9种不同的EphARTKs(EphAl-EphA9)杂乱地结合于6种A-肝配蛋白(肝配蛋白Al-肝配蛋白A6)，并受到其的活化，并且EphB亚类受体(EphBl-EphB6和，在一些情形中，EphA4)与3种不同的B-肝配蛋白(肝配蛋白B1-肝配蛋白B3)相互作用。因此，为了获得最大治疗益处，全部肝配蛋白配体与特定Eph受体的相互作用，或特定肝配蛋白与其全部Eph受体的相互作用将同时受到抑制。因此，还于本文，为了有效的治疗，需要多种不同的结合分子或具有多结合特异性的结合分子。B7超家族的共刺激分子是关于治疗干预的可能靶标的其它实例。在MHC分子的情况下，除抗原性肽("信号l")外，需要在APC上存在共-刺激分子("信号2")，以获得关于首次用于实验的抗原反应性T细胞的有效刺激。将CD80,CD86,CD28,细胞毒素T淋巴细胞抗原4(CTLA4)，可诱导的共刺激剂(ICOS),程序性死亡l(PD-1),和OX40用作靶标，从而操作T-细胞以减慢自体免疫疾病的进程,或通过增高T-细胞活性治疗肿瘤。CD80(以前称为B7-l)和CD86(B7-2)在活化的抗原呈递细胞(APC)诸如49树突细胞，巨噬细胞或B-细胞的膜上表达。由T-细胞表面上的反受体检测到共刺激分子的存在。选择性阻断T-细胞上所述共刺激分子和它们同源活化受体(CD28)的相互作用可以因此抑制T-细胞活化(Howard等.，当前药物靶标和炎性过敏症(Curr,DrugTargetsInflamm.Allergy)4:85,2005;Stuart和Racke,治疗学耙标专家观点(ExpertOpinionTher.Targets)6:275,2002)。针对T-细胞的活化的自体-抗原由于其效应子功能对在自体免疫疾病诸如类风湿性关节炎或多发性硬化中的组织损伤的至少部分负责，并是通过提供对B-细胞的"帮助"产生高-亲和性自体-反应性抗体的间接原因。因此，阻断CD80禾H/或CD86与CD28的相互作用能够治疗自体免疫病症。在人疾病的动物模型以及在人中，通过利用针对CD80或CD86的封闭单克隆抗体，或利用反受体的可溶性形式，严格地确定了这些原理(Stuart和Racke,2002)。CD152(以前称为CTLA4)是T-细胞上关于CD80和CD86的其它反受体。然而，与CD28不同，CD152与CD80禾n/或CD86的相互作用不引起T-细胞活化。认为CD152以比CD28更高的亲和性与CD80和CD86相互作用,并且可以因此起关于CD28的诱杀型受体的作用，从而剥夺CD28的配体，并因此间接地降低T-细胞的活化(Collins等.，免疫性(Immunity)17:201,2002)。备选地，CD152还可以转导阴性信号进入T-细胞，从而引起较低的T-细胞活化总水平。不管机制如何，CD152信号传导的活性导致抑制T-细胞响应，特别地当表面CD152表达变高时，T-细胞刺激后的晚期(48-72H)。通过使用单克隆抗体阻断其与CD80和/或CD86的相互作用而阻断CD152信号传导增高体内T-细胞活化水平，并且证明了这有益地用作肿瘤疫苗治疗中的辅助治疗。由于在T细胞激活过程中，CTLA4信号传导的抑制导致与CD28阻断非常不同的后果，其可以有利于设计CD80禾口/或CD86中和治疗实体，所述治疗实体抑制CD80和/或CD86与CD28的相互作用，但是不抑制其与CTLA4的相互作用，或反之亦然。CD80和CD86还以高水平存在于许多B-细胞来源的淋巴瘤。因此，单克隆抗体、其片段和其它结合CD80和/或CD86的蛋白质能够，通过恢复效应子功能、诱导细胞死亡或作为免疫毒素或放射性毒素缀合物的耙实50体，有效用于治疗所述肿瘤(Friedberg等.，血液(Blood)106:11摘要2435，2005)。由于CD80和CD86均结合于任一反受体，认为这些分子具有至少部分重叠功能性作用(部分功能冗余性)。由此得出结论，为了获得最大治疗益处，CD80和CD86与CD28或CD152的相互作用均需要同时受到抑制。潜在地，这可以通过利用CD152的可溶形式(Abatacept,CTLA4-Ig,见Linsley等.实验医学杂志(J.Exp.Med.)174:561,1991)、其亲和性变体(Belatacept，LEA29Y，见Larsen等,，美国移植杂志(Am.J.Transplant)5:443,2005)或CD28(CD28-Ig,见Linsley等.，实验医学杂志(J.Exp.Med.)173:721，1991)实现。尽管这是明显有益的，但是尚未记述能够结合于CD80和CD86的单个单克隆抗体(WO04/076488,vandenBeucken等.，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)310:591,2001)。在其它优选的实施方案中，本发明的氨基酸序列，例如单链抗体,例如dAb或纳米抗体，是二价或多价氨基酸序列，其中至少一个结合区段针对血清清蛋白，例如人血清清蛋白,和其中所述血清清蛋白结合区段在例如pH5.5(或例如在pH5-6,或例如ph5.3-5.7)下结合，但在pH7.2-7.4下不结合。如本文中关于本发明的氨基酸序列所述地，所述第一生物学条件可以包括第一生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件,和所述第二生物学条件包括第二生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，其中所述第一和第二生理学区室，在正常生理学条件下，由至少一种生物膜，诸如细胞膜、细胞小泡或亚细胞区室壁,或血管壁隔开。具体地，所述第一生物学条件包括人体或动物体的至少一种细胞外普遍存在的生理学条件(诸如所述人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的生理学条件)，且所述第二生物学条件包括所述细胞中普遍存在的条件(或反之亦然，尽管这对于延长半衰期的目的是不太优选的)。为了该实施方案的目的，所谓"动欽或乂氛智應/^#遏存#游主湮学条/f，意指细胞内，和具体地与血清蛋白再循环有关的细胞内可以存在的条件(诸如pH值)。具体地，所谓"动激^ftA沐一智應^/普遍^^"游仝潘,姿伊，意指在与血清蛋白再循环有关的(亚)细胞区室或小泡(例如作为胞饮作用，胞吞，胞转，胞吐和吞噬或吸收或内在化进入所述细胞的类似机制的结果)，诸如内体，溶酶体或胞饮泡内可以存在的条件(诸如pH值)。例如，所述细胞可以是包含或表达FcRn受体的细胞，特别是当本发明的氨基酸序列针对结合于FcRn的血清蛋白时。如由本文中进一步描述应该清楚地，所述细胞与某些能够结合于FcRn的血清蛋白，诸如血清清蛋白和免疫球蛋白诸如IgG的再循环有关。备选地，例如和不限于，所述细胞可以是包含或表达转铁蛋白-受体的细胞，特别是当本发明的氨基酸序列针对转铁蛋白时。为了该实施方案的目的，所谓"动激或乂氛银應//夢遏#*游主逻学条/f'通常意指其中存在所述细胞的人体或动物体内可以存在的条件(诸如pH值)，但所述条件在所述细胞外，诸如在细胞表面上或在所述细胞的直接接触的环境或附近中。具体地，所谓"动#^^乂谬_^^//宭遍^^"/^主潘^#/护'意指其中存在所述细胞的人体或动物体循环中可以存在的条件(诸如pH值)，所述条件诸如血液(流)中或淋巴系统中。因此，通常，在该实施方案中，当能够由人体或动物体的至少一种细胞吸收(例如通过内在化、胞饮作用、胞吞、胞转、胞吐、吞噬或吸收或内在化进入所述细胞的类似机制)血清蛋白时，其中所述第一生物学条件可以包括这样的生理学条件，其中所述氨基酸序列在被吸收进入细胞前存在，且所述第二生物学条件可以包括这样的生理学条件，其中所述氨基酸序列在被吸收进入细胞内后存在。具体地，当本发明的氨基酸序列针对进行再循环的血清蛋白时，其中所述第一生物学条件包括关于涉及再循环需要的化合物的动物体或人体的至少一种细胞的细胞外条件(例如循环中普遍存在的条件),和其中所述第二生物学条件包括涉及再循环需要的化合物的动物体或人体的至少一种细胞中普遍存在的条件。按照该实施方案的其它非限制性方面，所述第一生物学条件可以是大于7.0的生理学pH,和所述第二生物学条件可以是小于7.0的生理学pH。具体地，所述第一生物学条件可以是大于7.1的生理学pH,和所述第二生物学条件可以是小于6.7的生理学pH。更具体地，所述第一生物学条件可以是大于7.2的生理学pH，和所述第二生物学条件可以是小于6.5的生理学pH。更具体地，所述第一生物学条件可以是大于7.2的生理学pH,和所述第二生物学条件可以是小于6.0的生理学pH。更具体地，所述第一生物学条件可以是大于7.2的生理学pH,和所述第二生物学条件可以是小于5.7的生理学pH。例如，所述第一生物学条件可以是在7.2-7.4范围内的生理学pH,和所述第二生物学条件可以是在6.0-6.5范围内的生理学pH。例如，所述第一生物学条件可以是在7.2-7.4范围内的生理学pH，和所述第二生物学条件可以是在5.0-6.0范围内的生理学pH。例如，所述第一生物学条件可以是在7.2-7.4范围内的生理学pH,和所述第二生物学条件可以是在5.3-5.7范围内的生理学pH。在另一个实施方案中，针对血清蛋白的氨基酸序列通常可以(进一步)如本文中关于本发明的氨基酸序列所述。例如，它们可以选自由下列各项组成的组具有免疫球蛋白折叠的蛋白质和多肽；基于除免疫球蛋白外的蛋白质支架的分子，其包括但不限于蛋白质A结构域、淀粉酶抑肽、纤连蛋白、脂笼蛋白、CTLA-4、T-细胞受体、设计的锚蛋白重复序列和PDZ结构域，和基于DNA或RNA的结合部分包括但不限于DNA或RNA适体;或选自所述蛋白质或多肽的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物;和具体地选自由下列各项组成的组:抗体和抗体片段，源自抗体或抗体片段的结合单位和结合分子，和抗体片段，结合单位或结合分子;或选自前述任一项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。而且，优选地，它们选自由下列各项组成的组重链可变结构域，轻链可变结构域，结构域抗体和合适作为结构域抗体使用的蛋白质和肽，单结构域抗体和合适作为单结构域抗体使用的蛋白质和肽，纳米抗体⑧和dAbsTM;或选自前述任一项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。具体地，在该实施方案中，本发明的氨基酸序列(以及包括本发明氨基酸序列的化合物，如本文中定义)可以是这样的，以致它们以这样的方式与血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式是当氨基酸序列在灵长类动物中与所述血清蛋白分子(诸如血清清蛋白)结合或缔合时，它表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中血清蛋白诸如血清清蛋白天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。例如，在该实施方案中，本发明的氨基酸序列可以以这样的方式与人血清蛋白诸如血清清蛋白结合或缔合，所述方式是当氨基酸序列与人血清蛋白诸如血清清蛋白结合或缔合时，所述氨基酸序列在人中表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述血清蛋白(诸如人血清清蛋白)天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少约60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。而且，优选地，在该实施方案中，本发明的所述氨基酸序列以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)，结合于所述血清蛋白(诸如人血清清蛋白)。在人中，血清清蛋白的半衰期是约19天(PetersT(1996)关于清蛋白的一切"//j/6ww/"l学术出版社(AcademicPress)，圣地亚哥)。灵长类动物中的这种体内半衰期使本发明的氨基酸序列成为延长与之连接的治疗剂的血清半衰期的理想候选者。按照本发明的组合氨基酸序列和治疗剂的长血清半衰期随之容许降低施用频率和/或降低施用的量，从而为待治疗的受试者带来显著益处。该实施方案因此还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列和在人中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在人中半衰期的至少80%,更优选地至少90%,诸如95°/。或更多或与其基本相同。在该实施方案的一个具体方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致它们与来自至少一种其它灵长类动物物种的相应(即，直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)，且具体地，与来自至少一种这样的灵长类动物物种的相应(即，直向同源)血清蛋白交叉反应，所述这样的灵长类动物物种选自由下列各项组成的组来自猕猴属(Ma^m)的猴(诸如，和具体地，食蟹猴(j^acaca/osc/cw/an^)禾口/或称猴(A/acacaww/a"a》禾口沸沸(尸a;/0ww'm^)。优选地，所述交叉反应的氨基酸序列进一步是这样的，以致其在所述灵长类动物中表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中相应(即，直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)天然半衰期的至54少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少约60%(诸如约60%-80%)或优选地至少约70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。所述本发明的氨基酸序列还优选地以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)结合于来自所述灵长类动物的相应(即，直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案因此还包括本发明的化合物，所述化合物包括至少一种本发明的氨基酸序列和在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的本发明氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更多或与其基本相同。按照本发明这个实施方案的其它优选，但非限制性方面，本发明的氨基酸序列是这样的，以致它们以这样的方式与人血清蛋白(诸如人血清清蛋白)结合或缔合，所述方式是当氨基酸序列与所述血清蛋白结合或缔合时，所述氨基酸序列在人中表现出血清半衰期是至少约9天(诸如约9-14天)，优选地至少约10天(诸如约10-15天)或至少11天(诸如约11-16天)，更优选地至少约12天(诸如约12-18天或更长)或超过14天(诸如约14-19天)。所述本发明的氨基酸序列还优选地以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)，结合于所述人血清蛋白(诸如人血清清蛋白)。该实施方案因此还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列和在人中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在人中半衰期的至少80%，更优选地至少90%,诸如95°/。或更多或与其基本相同。在该实施方案的一个具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的，以致它们与来自至少一种其它灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)，且具体地，与来自至少一种这样的灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)交叉反应，所述这样的灵长类动物物种选自由下列各项组成的组来自猕猴属的猴(诸如，猕猴或食蟹猴)和狒狒。优选地，所述交叉反应的氨基酸序列在所述灵长类动物中表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类55动物中相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)天然半衰期的至少约50%(诸如约50%-70%)，优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%。所述本发明的氨基酸序列还优选地以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)，结合于来自所述灵长类动物的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案因此还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列和在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的本发明氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%,更优选地至少90%，诸如95%或更多或与其基本相同。在该实施方案的另一个具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列可以是这样的，从而它们与来自至少一种灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，且当所述相应(即直向同源)血清蛋白在所述灵长类动物中半衰期是至少约10天，诸如10-15天，例如约11-13天(通过举例，在猕猴中，预期的血清清蛋白半衰期是约11-13天，具体地约11-12天)时，所述氨基酸序列在所述灵长类动物中的血清半衰期为至少约5天(诸如约5-9天)，优选地至少约6天(诸如约6-10天)或至少7天(诸如约7-11天)，更优选地至少约8天(诸如约8-12天)或超过9天(诸如约9-12天或更长)。所述本发明的氨基酸序列优选地进一步是这样的以致以如本文中所定义的解离常数(Kd)和/或结合亲和性(KA)，结合于来自所述灵长类动物物种的血清清蛋白。在该实施方案的一个特别优选方面，所述氨基酸序列与人血清清蛋白交叉反应，且更优选地，以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)结合于所述相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95°/。或更长或与其基本相同。在该实施方案的另一个具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列还可以这样的，以致它们与来自至少一种灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，且当所述相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)在所述灵长类动物中的半衰期是至少约13天，诸如13-18天(通过举例，在狒狒中，血清清蛋白的半衰期是至少约13天，且通常是约16-18天)时，所述氨基酸序列在所述灵长类动物中具有至少约7天(诸如约7-13天)，优选地至少约8天(诸如约8-15天)或至少9天(诸如约9-16天)，更优选地至少约10天(诸如10-16天或更长)或超过13天(诸如13-18天)的血清半衰期。所述本发明的氨基酸序列还优选地是这样的，以致它们以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)，结合于来自所述灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列在所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或与其基本相同。在该实施方案的另一个具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列还可以是这样的，以致它们a)以这样的方式与人血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式使当所述氨基酸序列与所述人血清蛋白结合或缔合时，所述氨基酸序列在人中表现出的血清半衰期是至少约9天(诸如约9-14天)，优选地至少约10天(诸如约10-15天)或至少11天(诸如约11-16天)，更优选地至少约12天(诸如约12-18天或更长)或超过14天(诸如约14-19天)；和b)与来自至少一种选自猕猴属物种的灵长类动物的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)(且具体地，与来自食蟹猴和/或来自猕猴的相应(即直向同源)血清蛋白)交叉反应；和c)在所述灵长类动物中具有的血清半衰期为至少约5天(诸如约5-9天)，优选地至少约6天(诸如约6-10天)或至少7天(诸如约7-11天)，更优选地至少约8天(诸如约8-12天)或超过9天(诸如约9-12天或更长)。优选地，所述氨基酸序列以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结57合亲和性(KA)结合于人蛋白质(诸如人血清清蛋白)和/或来自灵长类动物物种的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%,更优选地至少90%，诸如95°/。或更长或与其基本相同。在该实施方案的另一个具体但非限制性方面.，本发明的氨基酸序列还可以是这样的，以致它们a)以这样的方式与人血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式使当所述氨基酸序列与所述人血清蛋白结合或缔合时，所述氨基酸序列在人中表现出的血清半衰期是至少约9天(诸如约9-14天)，优选地至少约10天(诸如约10-15天)或至少11天(诸如约11-16天)，更优选地至少约12天(诸如约12-18天或更长)或超过14天(诸如约14-19天)；和b)与来自狒狒的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)交叉反应；和c)在狒狒中具有的血清半衰期为至少约7天(诸如约7-13天)，优选地至少约8天(诸如约8-15天)或至少9天(诸如约9-16天)，更优选地至少约10天(诸如约10-16天或更长)或超过13天(诸如约13-18天)。优选地，所述氨基酸序列以如本文中所定义的解离常数(KD)和/或结合亲和性(KA)结合于人血清蛋白(诸如人血清清蛋白)和/或来自狒狒的相应(即直向同源)血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案还包括本发明的化合物，所述化合物包括所述氨基酸序列，并在人和/或所述至少一种灵长类动物物种中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的氨基酸序列分别在人和/或所述灵长类动物物种中半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或与其基本相同。优选地，而且，包括该实施方案至少一种的氨基酸序列的化合物、构建体、融合蛋白等的半衰期优选地是其中存在(即，在相同的灵长类动物中)的本发明氨基酸序列半衰期的至少80%，更优选地至少90%，诸如95%或更长或与其基本相同。在本发明的这个实施方案的具体但非限制性方面，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)针对与FcRn受体结合或能够与其结合的血清蛋白(例如，作为所述血清蛋白质的再循环的一部分)并且是这样的，从而它们能够以这样的方式与所述血清蛋白结合或缔合，所述方式使当所述氨基酸序列或多肽构建体与所述血清蛋白分子结合或缔合时，不(显著)降低或抑制所述血清蛋白分子与FcRn的结合。能够与FcRn结合的一些具体但非限制性血清蛋白包括血清清蛋白和免疫球蛋白，诸如，具体地IgG。在该实施方案的另一方面，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)可以这样的方式与血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式使当氨基酸序列或多肽构建体与所述血清蛋白分子结合或缔合时，不(显著)縮短所述血清蛋白分子的半衰期。在该实施方案的其它方面，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)能够结合于不涉及所述血清蛋白和FcRn的结合的血清蛋白上的氨基酸残基。例如，当所述血清蛋白是血清清蛋白时，本发明的氨基酸序列(或包括所述氨基酸序列的化合物)能够结合于不形成血清清蛋白结构域III部分的氨基酸残基。在本发明该实施方案的一个方面，所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列或其片段，更具体地，是免疫球蛋白可变结构域序列或其片段，例如，VH-、VL-或VHH-序列或其片段。本发明的氨基酸序列可以是结构域抗体，"dAb"，单结构域抗体或纳米抗体，或其中任一项的片段。本发明的氨基酸序列可以是完全人、人源化、骆驼科动物、骆驼源化(camdized)的人或人源化的骆驼科动物的序列，且更具体地，可以包括4个构架区(分别地FR1-FR4)和3个互补性决定区(分别地CDR1-CDR3)。更具体地，按照本发明的氨基酸序列可以是(单)结构域抗体或纳米抗体。用于产生针对在该实施方案中使用的血清蛋白的氨基酸序列的方法可以通常如本文中所述，其中所述需要的化合物是需要的血清蛋白(诸如血清清蛋白)。该实施方案的其它方面涉及包括至少一种按照该实施方案的氨基酸序列的本发明化合物，所述化合物还可以任选地包括至少一个治疗部分，其包括选自至少一个由小分子、多核苷酸、多肽或肽组成的组的治疗部分。所述本发明的化合物优选地是这样的，以致它们适合于以这样的频率或，备选地，以这样的间隔向灵长类动物施用，所述频率对应于所述灵长类动物中所述血清蛋白(诸如血清清蛋白)天然半衰期的不少于50%(诸如约50%-70°/。)，优选地至少60%(诸如约60%-80%)或优选地至少70%(诸如约70%-90%)，更优选地至少约80%(诸如约80%-90%)或优选地至少约90%，所述间隔是至少4天(诸如约4-12天或更长)，优选地至少7天(诸如约7-15天或更长)，更优选地至少9天(诸如约9-17天或更长)，诸如至少15天(诸如约15-19天或更长，具体地，为了施用于人)或至少17天(诸如约17-19天或更长，特别是为了施用于人)；其中进行所述施用具体是为了维持受到该化合物治疗的受试者血清中所述化合物的需要的水平(如技术人员应该清楚地，这特别依赖于使用的化合物和/或待治疗的疾病)。临床医生或医师应该能够选择需要的血清水平和选择向待治疗受试者施用的剂量和/或量，从而在以本文中提到的频率施用本发明的化合物时，在所述受试者中获得和/或维持需要的血清水平。例如，所述剂量可以在需要的血清水平的1倍-10倍间变化，诸如需要的血清水平的2倍-4倍(其中，以本身已知的方式重新计算需要的血清水平，从而提供待施用的相应剂量)。还可以将所述本发明的化合物配制为预期和/或被包装(例如，与合适的使用说明书一起)为以上述频率施用的单位剂量，并且所述单位剂量和包装产品构成本发明另外的方面。本发明另一方面涉及本发明化合物在提供所述单位剂量或包装产品中的用途(即，通过适当地配制和/或包装所述化合物)。在该实施方案的具体方面，本发明的化合物是融合蛋白或构建体。在所述融合蛋白或构建体中，本发明的氨基酸序列可以直接与至少一种治疗部分相连，或通过连接体或间隔区与至少一种治疗部分相连。具体的实施方案涉及包括免疫球蛋白序列或其片段，更具体地，(单)结构域抗体或纳米抗体的治疗部分。60在具体方面，该实施方案还涉及多价和多特异性纳米抗体构建体，其包括至少一种作为纳米抗体的本发明氨基酸序列和至少一种另外的纳米抗体。所述纳米抗体直接与所述至少一种另外的纳米抗体相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米抗体相连，优选地，通过氨基酸序列连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米抗体相连。而且，如本文中所示，但不意欲限制，条件性地结合于至少一种血清蛋白和至少一种(其它)意欲或需要的分子的双特异性(或多特异性)化合物可以在本发明的这个实施方案中存在特殊的用途。同样地，该实施方案的化合物可以是这样的，从而它在所述第一生物学条件下(或备选地，在所述第二生物学条件下)结合于血清蛋白和所述意欲或需要的分子，或可以是这样的，从而它在所述第一生物学条件下结合于血清蛋白，但在所述第二生物学条件下结合于其它意欲或需要的分子。因此，当由所述第一生物学条件改变为所述第二生物学条件时，所述该实施方案的化合物会因此从第一血清蛋白分子中释放出来并结合于所述意欲或需要的分子(或反之亦然)。而且，在所述双特异性分子中，结合于所述意欲或需要的分子的条件性结合物可以自身形成治疗部分或起治疗部分的作用(在该情形中，它可以如本文中进一步所述)，和/或所述本发明的化合物可以包含一种或多种另外的治疗部分(如本文中定义)。图1中也说明了该实施方案所述双特异性化合物的非限制性实例，其为非限制性示意图，显示FcRn、结合于FcRn的血清蛋白(诸如血清清蛋白或IgG)、本发明的双特异性化合物(具体地，按照如本文中所述用于延长半衰期的特定实施方案的双特异性化合物)和抗原(S卩，作为第二意欲或需要的分子)之间可能的相互作用的实例。而且，表l-3概述了本发明的双特异性化合物(具体地，按照如本文中所述用于延长半衰期的特定实施方案的双特异性化合物)能够与血清蛋白(即，作为第一意欲或需要的分子)和抗原(作为第二意欲或需要的分子)结合的方式的不同非限制性实例。还参考本文中的详细说明。此外，该实施方案涉及编码按照该实施方案的氨基酸序列、或该实施方案化合物的氨基酸序列、或该实施方案的多价和多特异性纳米抗体的核苷酸序列或核酸。该实施方案还提供包含该实施方案的核苷酸序列或核酸和/或表达(或能够表达)该实施方案的氨基酸序列、或按照该实施方案化合物的氨基酸序列、或该实施方案的多价和多特异性纳米抗体的宿主或宿主细胞。而且，该实施方案涉及用于制备该实施方案的氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米抗体的方法，其包括在这样的条件下培养或维持该实施方案的宿主细胞，在所述条件下所述宿主细胞产生或表达所述产物，并任选地进一步包括由此产生的所述产物。在一个实施方案中，该实施方案涉及药物组合物，其包括选自由该实施方案的氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米抗体组成的组中的一种或多种，其中所述药物组合物适合于以在灵长类动物中血清蛋白天然半衰期至少约50%的间隔施用于所述灵长类动物。所述药物组合物还可以包括至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂。该实施方案还包括包含该实施方案的氨基酸序列、化合物或多价和多特异性纳米抗体的治疗的医学用途和方法，其中所述医学用途或方法的特征在于所述药物适合于以所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少约50%的间隔施用，且所述方法包括以所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期至少约50%的频率施用。该实施方案还涉及用于延长或增长治疗剂的血清半衰期的方法。所述方法包括使所述治疗剂与任意前述的该实施方案氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体(包括多价和多特异性纳米抗体)相接触，以使所述治疗剂与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或缔合。在一些实施方案中，所述治疗剂是生物学治疗剂，优选地是肽或多肽，在该情形中，接触所述治疗剂的步骤可以包括通过使所述肽或多肽与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体相连接，而制备融合蛋白。这些方法可以进一步包括在治疗剂与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或缔合后，向灵长类动物施用所述治疗剂。在该方法中，所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期是治疗剂本身半衰期的至少1.5倍，或与治疗剂本身的半衰期相比增加至少1小时。在一些优选的实施方案中，所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期是相应治疗部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超过20倍。在其它优选的实施方案中，所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期与相应治疗部分本身的半衰期相比，增加超过2小时，超过6小时或超过12小时。优选地，增加所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期，以使所述治疗剂具有如本文中对该实施方案化合物定义的半衰期(即，在人中和/或在至少一种灵长类动物物种中)。在另一方面，该实施方案涉及用于改进治疗剂的方法，所述方法使所述治疗剂的需要的治疗水平，在适当施用所述治疗剂以获得所述需要的治疗剂水平后，维持一段延长的时期。所述方法包括使所述治疗剂与任意前述的该实施方案氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体(包括多价和多特异性纳米抗体)相接触，从而使所述治疗剂与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或缔合。在一些实施方案中，所述治疗剂是生物学治疗剂，优选地是肽或多肽，在该情形中，接触所述治疗剂的步骤可以包括通过使所述肽或多肽与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体相连接，而制备融合蛋白。这些方法可以进一步包括在治疗剂与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或缔合后，向灵长类动物施用该治疗剂，从而在所述施用后获得需要的治疗剂水平。在该方法中，所述治疗剂在所述施用后维持需要的治疗剂水平的时间是治疗剂本身半衰期的至少1.5倍，或与治疗剂本身的半衰期相比增加至少1小时。在一些优选的实施方案中，所述治疗剂在所述施用后维持需要的治疗剂水平的时间是相应治疗部分本身半衰期的至少2倍、至少5倍、至少10倍或超过20倍。在其它优选的实施方案中，所述治疗剂在所述施用后维持需要的治疗剂水平的时间与相应治疗部分本身的半衰期相比，增加超过2小时，超过6小时或超过12小时。优选地，增加所述治疗剂在所述施用后维持需要的治疗剂水平的时间，这样可以以本文中关于该实施方案化合物定义的频率施用所述治疗剂。在另一方面中，该实施方案涉及该实施方案的化合物(如本文中定义)制备药物的用途，所述药物增加和/或扩大患者血清中所述化合物或构建体中治疗剂水平，以致能够以与单独治疗剂相比更低的剂量施用所述化合物或构建体中的所述治疗剂(即，以基本相同的施用频率)。该实施方案的氨基酸序列还优选地是这样的，以致它们可以以这样的方式与血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式使当所述氨基酸序列或多肽构建体与灵长类动物中的血清蛋白分子结合或缔合时，它们表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少约50%，优选地至少约60%，优选地至少约70%，更优选地至少约80%和最优选地至少约90%。该实施方案的氨基酸序列在向灵长类动物施用后的血清半衰期可以是所述灵长类动物中血清蛋白天然半衰期的至少50%,55%，60%,65%,70°/。，75%，80%,85%,90%,95%或至少100%。所谓"所述灵长类动物中血清蛋白天然血清半衰期"意指如下定义的血清半衰期，其中所述血清蛋白在生理学条件下处于健康个体中。将血清清蛋白作为血清蛋白的实例，则血清清蛋白在人中的天然血清半衰期是19天。已知较小的灵长类动物具有较短的血清清蛋白天然半衰期，例如在8-19天的范围内。血清清蛋白的具体半衰期可以是至少4,5,6,7,8,9,10，11,12,13,14，15,16，17,18,或19天或更长。由此得出结论，例如在人个体中，该实施方案的氨基酸序列显示出与血清清蛋白相关的血清半衰期为19天的至少约50%，即7.6天。在较小的灵长类动物中，根据这些物种中血清清蛋白.的天然半衰期，所述血清半衰期可能再短几天。在本说明书中，术语"灵长类动物"指猴和猿物种，并包括猴物种，诸如来自猕猴属的猴(诸如，和具体地，食蟹猴(7V/acaca/wcfc"/an》和或猕猴(Macacamw/aWa))和狒狒(尸opz'o，以及狨猴(来自狨(。//油n'x)属的物种)，松鼠猴(来自松鼠猴(Sw7mW)属的物种)和绢毛猴(tamarin)(来自獠狨(SagWm^)属的物种)，以及猿物种，诸如黑猩猩(尸fl"frag/o办f^)，并且还包括人。人是按照该实施方案优选的灵长类动物。通常可以将氨基酸序列或化合物的半衰期定义为例如由于由天然机制引起的序列或化合物降解和/或序列或化合物清除或螯合，多肽的血清浓度64在体内，被降低50%所需的时间。可以以任何本身已知的方式，诸如通过药物动力学分析，确定该实施方案的氨基酸序列(和包括所述氨基酸序列的化合物)在相关灵长类动物物种中的半衰期。合适的技术对本领域中的技术人员应该是清楚的，且通常可以例如包括下列步骤向灵长类动物适当地施用合适剂量的待处理的氨基酸序列或化合物；每隔一定间隔从所述灵长类动物中收集血液样品或其它样品；确定所述血液样品中该实施方案的氨基酸序列或化合物的水平或浓度；和由获得的数据(图)计算直到该实施方案的氨基酸序列或化合物的水平或浓度与给药时起始水平相比降低50%的时间。参考例如标准手册，诸如Keimeth，A等药品的化学稳定性药剂师手册(ChemicalStabilityofPharmaceuticals:AHandbookforPharmacists)和Peters等，药物代谢动力学分析实践方案(Pharmacokineteanalysis:APracticalApproach)(1996)。还参考"药物代谢动力学"("Pharmacokinetics"),MGibaldi&DPerron,由MarcelDekker出版，第2修订版(1982)。如在WO04/003019的第6和7页和在其中引用的其它参考文献中所述地，可以利用参数诸如tl/2-a，tl/2-p和曲线下面积(AUC)表示半衰期。在本说明书中，"半衰期的增加"指这些参数中任一项，诸如这些参数中任两项，或基本全部三项参数的增加。"半衰期的增加"具体指在tl/2-a和/或AUC或二者增加或不增加的条件下，tl/2-(3的增加。在另一方面，针对血清蛋白(诸如血清清蛋白，优选地，人血清清蛋白)的该实施方案的氨基酸序列，和具体地，该实施方案的免疫球蛋白序列，和更具体地，该实施方案的免疫球蛋白可变结构域序列是这样的，以致它们在猕猴中具有的半衰期是至少约4天，优选地至少约7天，更优选地至少约9天。在另一方面，该实施方案的氨基酸序列是这样的，以致它们在人中具有的半衰期是至少约7天，优选地至少约15天，更优选地至少约17天。该实施方案还涉及该实施方案的化合物，其在人中具有这样的半衰期，所述半衰期是所述化合物中存在的该实施方案的氨基酸序列半衰期的至少80%,更优选地至少90%，诸如95%或更多或基本与其相同。更具体地，该实施方案还涉及该实施方案的化合物，其在人中具有的半衰期为至少约7天，优选地至少约15天，更优选地至少约17天。该实施方案还提供包括该实施方案的氨基酸序列的化合物，具体地，除该实施方案的氨基酸序列外还包括至少一种治疗部分的化合物。按照该实施方案的化合物的特征在于，在灵长类动物中表现出与该实施方案的氨基酸序列在灵长类动物中相当的血清半衰期，更优选地，至少是该实施方案氨基酸序列在灵长类动物中血清半衰期的半衰期，和更优选地，大于该实施方案的氨基酸序列在灵长类动物中半衰期的半衰期。在一方面，该实施方案通过提供本文中公开的氨基酸序列实现该目的，所述氨基酸序列可以结合于与能够与FcR:i结合的血清蛋白，该氨基酸序列还是这样的，从而它们可以以这样的方式与血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式使当所述氨基酸序列或多肽构建体与血清蛋白分子结合或缔合时，不(显著)降低或抑制所述血清蛋白分子与FcRn的结合(即，与当氨基酸序列或多肽构建体不与其结合时，所述血清蛋白分子与FcRn的结合相比)。在该实施方案的这个方面，所谓"不显著降低或抑制"意指关于血清蛋白和FcRn的结合亲和性(如利用合适的测定，诸如SPR测量地)不被降低超过50%，优选地不被降低超过30%，甚至更优选地不被降低超过10%，诸如不被降低超过5%，或基本完全不被降低。在该实施方案的这个方面，"不显著降低或抑制"还可以意指(或另外意指)血清蛋白分子的半衰期不显著縮短(如下定义)。如技术人员通常理解地，当在本说明书中，提及结合时，所述结合优选地是特异性结合。当如本文中所述的氨基酸序列是单价免疫球蛋白序列(例如，单价纳米抗体)时，所述单价免疫球蛋白序列优选地在所述第一生物学条件下，以10—5-10"2摩尔/升或更低，和优选地10:10'12摩尔/升或更低和更优选地10—8-10"2摩尔/升的解离常数(Kd)(即，以105-1012升/摩尔或更高，和优选地107-1012升/摩尔或更高和更优选地108-1012升膽尔的缔合常数(KA)，和/或以至少107M",优选地至少10S]VT1,更优选地至少109M",诸如至少1012M"的结合亲和性(Ka))結合于人血清清蛋白。通常认为任何大于104摩尔/升的KD值(或任何小于1(^M"的Ka惶)表示非-特异性结合。优选地，该实施方案的单价免疫球蛋白序列在所述第一生物学条件下，以小于3000nM，优选地小于300nM,更优选地小于30nM,诸如小于3nM的亲和性，结合于需要的血清蛋白。可以以任何本身已知的合适方式，包括，例如，斯卡查德分析和/或竞争性结合测定，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心式竞争测定，以及本领域中本身已知的所述方式的不同变化，确定抗原-结合蛋白与抗原或抗原决定簇的特异性结合。在另一方面，该实施方案的氨基酸序列(和具体地，免疫球蛋白序列，和更具体地，免疫球蛋白可变结构域序列)还是这样的，从而它们以这样的方式与血清蛋白(诸如血清清蛋白)结合或缔合，所述方式使当氨基酸序列或多肽构建体与所述血清蛋白分子结合或缔合时，不(显著)减少所述血清蛋白分子的半衰期(即，与当所述氨基酸序列或多肽构建体不与其结合时，血清蛋白分子的半衰期相比)。在该实施方案的这个方面，所谓"不显著减少"意指血清蛋白分子的半衰期(如利用本身已知的合适技术测量地)不被减少超过50%，优选地不被减少超过30%，甚至更优选地不被减少超过10%，诸如不被减少超过5%，或基本完全不被减少。在另一方面，该实施方案的氨基酸序列(和具体地，免疫球蛋白序列，和更具体地，免疫球蛋白可变结构域序列)可以针对能够与FcRn结合的血清蛋白，并且还可以是这样的，以致它们能够结合于与所述血清蛋白与FcRn的结合无关的血清蛋白分子上的氨基酸残基(诸如血清清蛋白上的氨基酸残基)。具体地，按照该实施方案的这个方面，当该实施方案的氨基酸序列针对血清清蛋白时，它们是这样的，以致它们能够结合于不形成血清清蛋白结构域m部分的血清清蛋白氨基酸序列。例如，但不限于，该实施方案的这个方面提供这样的氨基酸序列，其能够结合于形成结构域I和/或结构域II部分的血清清蛋白氨基酸序列。该实施方案的氨基酸序列优选地是(单)结构域抗体或适合于用作(单)结构域抗体，并同样地，可以是重链可变结构域序列(VH序列)或轻链可变结构域序列(VL序列)，且优选地是VH序列。所述氨基酸序列可以例如是所谓的"dAbs"。然而，按照特别优选的实施方案，本发明的氨基酸序列是纳米抗体。为了进一步描述和定义纳米抗体，以及本说明书中使用的一些其它术语(诸如，例如且不限于，术语"针对")，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审申请(诸如WO06/040153和共同待审国际申请PCT/EP2006/004678));以及本文中引用的其它现有技术。同样地，它们可以是属于"KERE"-类、"GLEW"-类或"103-P,R,S"-类的纳米抗体(也如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审专利申请中定义地)。优选地，本发明的氨基酸序列是人源化的纳米抗体(也如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审专利申请中定义地)。可以有利地将本文中公开的氨基酸序列用作融合配偶体，从而增加治疗部分，诸如蛋白质、化合物(包括，但不限于，小分子)或其它治疗实体的半衰期。因此，在另一方面，该实施方案提供包括或基本由如本文中公开的氨基酸序列组成的蛋白质或多肽。具体地，该实施方案提供包括或基本由至少一种该实施方案的氨基酸序列组成的蛋白质或多肽构建体，所述该实施方案的氨基酸序列任选地，通过一种或多种合适的连接体或间隔区，与至少一种治疗部分相连。如本文中进一步所述，所述蛋白质或多肽构建体可以例如(但不限于)是融合蛋白。该实施方案还涉及蛋白质或多肽构建体或融合蛋白和构建体的治疗用途，以及包括所述蛋白质或多肽构建体或融合蛋白的药物组合物。在一些实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由治疗蛋白质、多肽、化合物、因子或其它实体组成。在优选的实施方案中，所述治疗部分针对需要的抗原或靶标，能够结合于需要的抗原(和具体地，能够特异性结合于需要的抗原)，和/或能够与需要的靶标相互作用。在另一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由治疗蛋白质或多肽组成。在另一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由免疫球蛋白或免疫球蛋白序列(包括但不限于免疫球蛋白片段)，诸如抗体或抗体片段(包括但不限于ScFv片段)组成。在再一个实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由抗体可变结构域，诸如重链可变结构域或轻链可变结构域组成。在优选的实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由至少一种结构域抗体或单结构域抗体，"dAb"或纳米抗体⑧组成。按照该实施方案，该实施方案的氨基酸序列优选地还是结构域抗体或单结构域抗体，"dAb"或纳米抗体，这样由此产生的构建体或融合蛋白是多价构建体(如本文中所述)和优选地多特异性构建体(也如本文中定义)，其包括至少2个结构域抗体、单结构域抗体、"dAbs"或纳米抗体⑧(或其组合)，至少其中之一是该实施方案的氨基酸序列。在具体的实施方案中，所述至少一种治疗部分包括或基本由至少一个单价纳米抗体⑧或二价、多价、双特异性或多特异性纳米抗体⑧构建体组成。按照该实施方案，该实施方案的氨基酸序列优选地还是纳米抗体，这样由此产生的构建体或融合蛋白是多价纳米抗体构建体(如本文中所述)和优选地多特异性纳米抗体构建体(也如本文中定义)，其包括至少2个纳米抗体，至少其中之一是该实施方案的氨基酸序列。按照该实施方案的一个实施方案，该实施方案的氨基酸序列是人源化的纳米抗体。而且，当该实施方案的氨基酸序列、蛋白质、多肽或构建体意欲药物或诊断应用时，上述各项优选地针对人血清蛋白，诸如人血清清蛋白。当所述氨基酸序列是免疫球蛋白序列，诸如免疫球蛋白可变结构域序列时，还可以使用所述序列的合适(即，适合于本文中提到的目的)片段。例如，当所述氨基酸序列是纳米抗体时，所述片段可以基本如wo04/041865中所述。该实施方案还涉及包括或基本由本文中所述的氨基酸序列或其合适片段组成的蛋白质或多肽。该实施方案的氨基酸序列还可以包含关于一种或多种其它抗原、抗原决定簇、蛋白质、多肽或其它化合物的一个或多个另外的结合位点。如本文中提及地，可以将本文中所述的氨基酸序列有利地用作融合配偶体，从而增加治疗部分，诸如蛋白质、化合物(包括，但不限于，小分子)或其它治疗实体的半衰期。因此，该实施方案的一个实施方案涉及包含至少一种该实施方案的氨基酸序列和至少一种治疗部分的构建体或融合蛋白。所述构建体或融合蛋白与治疗部分本身相比，优选地具有增加的半衰期。通常，(制备和使用)所述融合蛋白和构建体可以如以上引用的现有技术中所述，但是其具有该实施方案的氨基酸序列，而不是现有技术69中所述的半衰期增加的部分。通常，本文中所述的构建体或融合蛋白优选地具有这样的半衰期，所述半衰期是相应治疗部分本身半衰期的至少1.5倍，优选地至少2倍，诸如至少5倍，例如至少10倍或超过20倍。而且，优选地，任何所述融合蛋白或构建体具有这样的半衰期，所述半衰期与相应治疗部分本身的半衰期相比，增加超过1小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，诸如超过12小时。而且，优选地，任何融合蛋白或构建体具有这样的半衰期，所述半衰期是超过1小时，优选地超过2小时，更优选地超过6小时，诸如超过12小时，和例如约1天、2天、l周、2周或3周，其优选地，不超过2个月，尽管后者可能不太关键。而且，如上所提及地，当该实施方案的氨基酸序列是纳米抗体时，可以使用它增加其它免疫球蛋白序列，诸如结构域抗体、单结构域抗体、"dAbs"或纳米抗体的半衰期。因此，该实施方案的一个实施方案涉及这样的构建体或融合蛋白，其包括至少一种该实施方案的氨基酸序列和至少一种免疫球蛋白序列，诸如结构域抗体、单结构域抗体、"dAbs"或纳米抗体。所述免疫球蛋白序列优选地针对需要的靶标(其优选地是治疗靶标)，和/或有效于或适合于治疗、预防和/或诊断目的其它免疫球蛋白序列。因此，在另一方面，该实施方案涉及多特异性(和具体地，双特异性)纳米抗体构建体，其包括至少一种本文中所述的纳米抗体，和至少一种其它纳米抗体，其中所述至少一种其它纳米抗体优选地针对需要的靶标(其优选地是治疗靶标)，和/或有效于或适合于治疗、预防和/或诊断目的其它纳米抗体。关于纳米抗体和包含一种或多种纳米抗体的多价和多特异性多肽和它们的制备的一般性描述，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审申请，诸如WO06/040153和共同待审国际申请PCT/EP2006/004678(以及这些申请中引用的其它现有技术)，并还参考例如Conrath等，生物化学杂志(J.BiolChem.)，巻276，10.7346-7350，2001;Muyldermans，分子生物技术综述(ReviewsinMolecularBiotechnology)74(2001)，277-302;以及参考例如WO96/34103和WO99/23221。埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审申请中存在关于该实施方案一些特殊多特异性和/或多价多肽的一些其它实例。具体地，关于为了增加半衰期包括至少一种针对血清蛋白的纳米抗体的多价和多特异性构建体、编码所述构建体的核酸、包括所述构建体的组合物、上述各项的制备、和上述各项的用途的一般性描述，参考埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的国际申请WO04/041865。通常可以与其中所述半衰期增加的纳米抗体类似地使用本文中所述的氨基酸序列。在一个非-限制性实施方案中，所述其它纳米抗体针对处于单体和/或多聚体(即三聚体)形式的肿瘤坏死因子(x(TNF-a)。所述纳米抗体构建体的一些实例可以存在于埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审国际申请中，其名称为"改良的针对肿瘤坏死因子-a的纳米抗体TM(ImprovedNanobodiesTMagainstTumorNecrosisFactor-alpha)"，其与本申请具有相同的优先权和相同的国际申请日。该实施方案还涉及编码本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白和构建体的核苷酸序列或核酸。该实施方案还包括遗传构建体，其包括上述核苷酸序列或核酸，和一种或多种关于遗传构建体的本身已知的元件。所述遗传构建体可以处于质粒或载体的形式。而且，所述构建体通常可以如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其它现有技术所述。该实施方案还涉及包含所述核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)本文中所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白和构建体的宿主或宿主细胞。而且，所述宿主细胞通常可以如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其它现有技术中所述。该实施方案还涉及用于制备本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的方法，所述方法包括在这样的条件下培养或维持本文中所述的宿主细胞，在所述条件下，所述宿主细胞产生或表达如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，且任选地，还包括分离由此产生的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体。而且，通常可以如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其它现有技术中所述地执行所述方法。该实施方案还涉及药物组合物，其包括至少一种如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，和任选地，至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂。所述制剂、载体、赋形剂和稀释剂通常可以如埃博灵克斯股份有限公司(AblynxN.V.)的共同待审专利申请和本文中提到的现有技术，以及其中引用的其它现有技术中所述。然而，由于本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体具有增加的半衰期，所以优选地将它们施用到循环中。同样地，可以以任何容许所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体进入循环的合适方式，诸如静脉内、通过注射或输注，或以任何其它容许所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体进入循环的合适方式(包括口服施用、经由皮肤施药、透粘膜施用、鼻内施用、通过肺的施用等)施用它们。而且，还例如由WO04/041862的教导，技术人员应该清楚合适的施用方法和途径。因此，在另一方面，该实施方案涉及用于预防和/或治疗至少一种能够通过使用如本文中所述的化合物、融合蛋白或构建体预防或治疗的疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用药物有效量的该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，和/或药物有效量的包括所述该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的药物组合物。能够通过使用如本文中所述的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体预防或治疗的疾病和病症通常与能够通过使用该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体中存在的治疗部分预防或治疗的疾病和病症相同。待治疗的受试者可以是任何灵长类动物，但是具体地是人。如技术人员应该清楚地，待治疗的受试者应该具体地是患有本文中提及疾病和病症或处于本文中提及疾病和病症危险的人。更具体地，本发明涉及治疗方法，其中施用该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的频率是该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体所针对的血清蛋白的天然半衰期的至少50%，优选地至少60%,优选地至少70%,更优选地至少80%和最优选地至少90%。72属于本发明范围内的对灵长类动物具体施用频率是该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体所针对的血清蛋白天然半衰期的至少50%，55%,60%，65%,70%，75%,80%,85%,90%，95%或至少100%。换言之，属于本发明范围内的具体施用频率是每4,5,6,7,8，9,10，11，12,13,14，15,16,17，18,或19天。不限制地，上文提到的施用频率特别适合于维持利用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体治疗的受试者血清中的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的需要的水平，任选地，在施用意欲建立所述需要的血清水平的一次或多次(起始)剂量后。如技术人员应该清楚地，所述需要的血清水平可以特别依赖于使用的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体和/或待治疗的疾病。临床医生或医师应该能够选择需要的血清水平，和选择向待治疗受试者施用的剂量和/或量，从而在以本文中提到的频率施用该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体时，在所述受试者中获得和/或维持需要的血清水平。在本发明的上下文中，术语"预防和/或治疗"不仅包括预防和/或治疗疾病，通常还包括预防疾病的发作，减缓或逆转疾病进程，预防或减缓一种或多种与疾病相关症状的发作，减轻和/或缓解一种或多种与疾病相关的症状，减少疾病和/或其任意相关症状的严重性和/或持续时间，和/或预防疾病和/或其任意相关症状严重性的进一步增加，预防、降低或逆转由疾病导致的任何生理学损伤，和通常任何有益于待治疗患者的药理学作用。待治疗的受试者可以是任何灵长类动物，但是具体地是人。如技术人员应该清楚地，待治疗的受试者应该具体地是患有能通过本文中提及的治疗部分治疗的疾病和病症或处于能通过本文中提及的治疗部分治疗的疾病和病症危险的人。在另一个实施方案中，该实施方案涉及用于免疫治疗，和具体地用于被动免疫治疗的方法，所述方法包括向患有本文中提及疾病和病症或处于本文中提及疾病和病症危险的受试者施用药物有效量的该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，和/或药物有效量的包括所述该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的药物组合物。该实施方案还涉及用于延长或增加治疗剂的血清半衰期的方法。在这73些方法中，治疗剂与任意该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，包括多价和多特异性纳米抗体相接触，以使该治疗剂与所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或缔合。所述治疗剂和所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体可以以技术人员已知的各种方式结合或缔合。在生物学治疗剂，诸如肽或多肽的情形中，该治疗剂可以按照本领域中已知的方法与所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体融合。所述治疗剂可以直接融合，或利用间隔区或连接体分子或序列融合。在优选的实施方案中，所述间隔区和连接体由氨基酸组成，但是可以如本领域中熟知的方式使用其它非-氨基酸间隔区或连接体。因此，接触所述治疗剂的步骤可以包括通过连接所述肽或多肽和该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，包括多价和多特异性纳米抗体来制备融合蛋白。所述治疗剂还可以与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体直接结合。作为一个实例，多价和多特异性纳米抗体可以包括至少一种结合所述血清蛋白(诸如血清清蛋白)的可变结构域和至少一种结合所述治疗剂的可变结构域。用于延长或增加治疗剂血清半衰期的方法还可以包括在所述治疗剂与该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体结合或缔合后，向灵长类动物施用所述治疗剂。在所述方法中，如本文中别处所述地，以显著量延长或增加所述治疗剂的半衰期。按照适合于预防和/或治疗待预防或治疗的疾病或病症的治疗方案，施用所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体和/或包括所述氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的组合物。临床医生通常应该能够根据因素，诸如待预防或治疗的疾病或病症，待治疗疾病的严重性和/或其症状的严重性，待使用的该实施方案特定纳米抗体或多肽，待使用的特殊施用途径和药物制剂或组合物，患者的年龄、性别、体重、饮食、一般状态，和临床医生熟知的类似因素，确定合适的治疗方案。通常，所述治疗方案应该包括以一种或多种药物有效量或剂量，施用一种或多种该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体，或一种或多种包括所述该实施方案的氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的组合物。临床医生也可以根据以上引用的因素确定具体的待施用量或剂通常，为了预防和/或治疗本文中提到的疾病和病症，并根据待治疗的具体疾病或病症，待使用的特定氨基酸序列、化合物、融合蛋白或构建体的功效和/或半衰期，使用的具体施用途径和具体药物剂型或组合物，通常应该以这样的量，在一天中连续地(例如通过输注)作为单次每日剂量或作为多次分开的剂量施用该实施方案的纳米抗体和多肽，所述量是1克-0.01微克/kg体重/天，优选地O.l克-0.1微克/kg体重/天，诸如约1,10,100或1000微克/kg体重/天。临床医生通常能够根据本文中提到的因素确定合适的每日剂量。还应该清楚地是，在具体情形中，临床医生可以选择偏离这些量，例如，基于以上引用的因素和他的专业判断。通常，可以由对类似常规抗体或抗体片段通常施用的量获得一些关于待施用量的指导，所述类似常规抗体或抗体片段针对基本通过相同途径施用的相同靶标，然而考虑亲和性/亲和力、功效、生物分布、半衰期和技术人员熟知的类似因素中的差别。通常，在以上方法中，应该使用该实施方案的单纳米抗体或多肽。然而，组合使用两种或更多该实施方案的纳米抗体和/或多肽属于该实施方案的范围。该实施方案的纳米抗体和多肽还可以与一种或多种其它药物活性化合物或原理组合使用，即作为组合的治疗方案，其可以或可以不引起协同作用。而且，临床医生应该能够基于以上引用的因素和他的专业判断，选择所述其它化合物或原理，以及合适的组合治疗方案。具体地，该实施方案的纳米抗体和多肽可以与其它药物活性化合物或原理组合使用，所述药物活性化合物或原理用于或能够用于预防和/或治疗能够用该实施方案融合蛋白或构建体预防或治疗的疾病和病症，且作为其结果，可以或可以不获得协同作用。如临床医生应该清楚地，可以以关于有关疾病或病症本身已知的任何方式，确定和/或关注按照该实施方案使用的治疗方案的效力。临床医生还应该能够，在适当和或个案基础上，改变或修改具体的治疗方案，从而获得理想的治疗效果，以避免、限制或减少不希望的副作用，和/或在一方面获得理想治疗效果和另一方面避免、限制或减少不希望副作用之间获得适当的平衡。通常，应该遵从所述治疗方案，直到获得理想的治疗效果和/或只要是为了维持理想治疗效果。而且，这可以由临床医生确定。发明详述由本文中进一步的描述，本发明的其它方面、实施方案、优势和应用将变得清楚，其中a)图1是非限制性示意图，显示FcRn、与FcRn结合的血清蛋白(诸如血清清蛋白或IgG)、本发明的双特异性化合物(具体地，按照如本文中所述用于延长半衰期的具体实施方案的双特异性化合物)和抗原(即，作为第二意欲或需要的分子)之间可能的相互作用的实例。参考本文中进一步的描述。b)图2是这样的示意图，其显示FcRn和与FcRn结合的血清蛋白之间的相互作用是pH依赖性/敏感性的。参考本文中进一步的描述。c)表l-3概述本发明的双特异性化合物(具体地，按照如本文中所述用于延长半衰期的具体实施方案的双特异性化合物)能够与血清蛋白(即，作为第一意欲或需要的分子)和抗原(作为第二意欲或需要的分子)结合的方式的不同非限制性实例。还参考本文中的迸一步描述。d)除非另外指示或定义，所有使用的术语具有它们在本领域中的普通含义，技术人员应该对此很清楚。参考例如标准手册，诸如Sambrook等,"分子克隆:实验室手册"("MolecularCloning:ALaboratoryManual")(第2版)，巻1-3，冷泉港实验室出版社(ColdSpringHarborLaboratoryPress)(1989);RAusubel等，编辑，"当前分子生物学方案"("Currentprotocolsinmolecularbiology"),GreenPublishing禾卩WileyInterscience,纟丑约(1987);Lewin，"基因II"("GenesII"),JohnWiley&Sons,纽约，N.Y.，(1985);Old等.，"基因操作原理遗传工程入门"("PrinciplesofGeneManipulation:AnIntroductiontoGeneticEngineering")，第2版,力口禾ll,畐尼亚大学出版社(UniversityofCaliforniaPress),伯克利，CA(1981);Roitt等.，"免疫学"("Immunology")(第6版)，Mosby/Elsevier,爱丁堡(2001);Roitt等.，Roitt基本免疫学(Roitt，sEssentialImmunology),第10版，BlackwellPublishing,UK(2001);和Janeway等，"免疫生物学"("lmmunobiology，，)(第6版)，GarlandSciencePublishing/ChurchillLivingstone,纽约(2005),以及本文中引用的一般背景；e)除非另外指示，术语"免疫球蛋白序列"-无论其在本文中用于指重链抗体或指常规4-链抗体-均作为包括全长抗体、其各条链、以及其所有部分、结构域或片段(包括但不限于，抗原-结合结构域或片段，诸如分别地，VHH结构域或Vh/Vl结构域)的一般术语使用。另外，术语"序列"用于本文中(例如，在如"免疫球蛋白序列"、"抗体序列"、"可变结构域序列"、"vhh序歹U"或"蛋白质序列"中)时，应该通常理解为包括相应的氨基酸序列以及编码所述氨基酸序列的核酸序列或核苷酸序列，除非上下文需要更有限的解释；f)如技术人员应该清楚地，除非另外指示，可以且已经以本身已知的方式执行没有特别详细描述的所有方法、步骤、技术和操作。还参考例如标准手册和本文中提到的一般
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，和其中引用的其它参考。g)认为核酸序列或氨基酸序列是"(处于)基本分离的形式"-例如，与其天然生物学来源和/或从中获得其的反应培养基或培养基相比-当其与至少一种在所述来源或培养基中通常与其相联合的其它成分，诸如其它核酸、其它蛋白质/多肽、其它生物学成分或大分子或至少一种污染物、杂质或微量组分分隔开时。具体地，当对其纯化至少2-倍，具体地至少10-倍，更具体地至少100-倍，和至多1000-倍或更多时，认为核酸序列或氨基酸序列是"基本分离的"。如利用合适的技术，诸如合适的层析技术，诸如聚丙烯酰胺-凝胶电泳所确定地，"处于基本分离形式"的核酸序列或氨基酸序列优选地基本是同源的；h)术语"结构域"用于本文中时，通常指抗体链的球状区，和具体地，重链抗体的球状区，或基本由所述球状区组成的多肽。通常，所述结构域应该包括例如，作为折叠或通过二硫键稳定的肽环(例如3或4个肽环);i)术语"抗原决定簇"指由抗原-结合分子(诸如本发明纳米抗体或多肽)和更具体地，由所述分子的抗原-结合位点识别的抗原上的表位。术语"抗原决定簇"和"表位"也可以交替用于本文中；77j)认为能够结合于特异性抗原决定簇、表位、抗原或蛋白质(或其至少一个部分、片段或表位)，对其具有亲和性和/或对其具有特异性的氨基酸序列(诸如本发明的纳米抗体、抗体、多肽，或其通常的抗原结合蛋白或多肽或片段)"针对(against或directedagainst)"所述抗原决定簇、表位、抗原或蛋白质；k)术语"特异性"指特定抗原-结合分子或抗原-结合蛋白(诸如本发明的纳米抗体或多肽)分子能够结合的不同抗原或抗原决定簇类型的数量。可以基于亲和性和/或亲和力确定抗原-结合蛋白的特异性。亲和性，由抗原与抗原-结合蛋白解离的平衡常数(KD)表示，是抗原决定簇和抗原-结合蛋白上的抗原-结合位点之间结合强度的量度标准Kd値越小，则抗原决定簇和抗原-结合分子之间的结合强度越强(备选地，还可以将亲和性表示为亲合性常数(KA)，其为l/Ko)。如技术人员应该清楚地(例如基于本文中进一步的公开内容)，根据特异性目的抗原，可以以本身已知的方式确定亲和性。亲和力是抗原-结合分子(诸如本发明的纳米抗体或多肽)和相关抗原之间结合强度的量度标准。亲和力与抗原决定簇和其在抗原-结合分子上的抗原结合位点之间的亲和性以及抗原-结合分子上存在的相关结合位点的数量有关。可以以任何本身已知的合适方式，包括，例如斯卡査德分析和/或竞争性结合测定，诸如放射性免疫测定(RIA)、酶免疫测定(EIA)和夹心式竞争测定，和其在本领域中本身已知的不同变体，确定抗原-结合蛋白与抗原或抗原决定簇的特异性结合为了一般性描述重链抗体及其可变结构域，特别参考下列参考文献，将其作为一般
背景技术：
提及VrijeUniversiteitBmssel的WO94/04678，WO95/04079和WO96/34103;Unilever的WO94/25591，WO99/37681,WO00/40968,WO00/43507,WO00/65057,WO01/40310,WO01/44301,EP113423l和WO02/48193;VlaamsInstituutvoorBiotechnologie(VIB)的WO97/49805，WO01/21817,WO03/035694,WO03/054016和WO03/055527;AlgonomicsN.V.和申请人的WO03/050531;加拿大国家研究委员会(NationalResearchCouncilofCanada)的WO01/90190;抗体学会(InstituteofAntibodies)的WO03/025020(=EP1433793);以及申请人的WO04/041867,WO04/041862,WO04/041865,WO04/041863,WO04/062551和申请人的其它公开的专利申请；Hamers-Casterman等.，自然(Nature)1993年6月3日；363(6428):446-8;Davies和Riechmann，FEBS通讯(FEBSLett.)1994年2月21日；339(3):285-90;Muylde腿ns等.，蛋白质工程(ProteinEng.)1994年9月；7(9):1129-3;Davies和Riechmann,生物技术(Biotechnology)(NY)1995年5月；13(5):475-9;Gharoudi等"应用生物技术第9届讨论会(9thForumofAppliedBiotechnology)，Med.Fac.LandbouwUniv.Gent.1995;60/4a部分I:2097-2100;Davies和Riechmann,蛋白质工程(ProteinEng.)1996年6月；9(6):531-7;Desmyter等.，自然结构生物学(NatStructBiol.)1996年9月；3(9):803-11;Sheriff等.，自然结构生物学(NatStructBiol.)1996年9月；3(9):733-6;Spinelli等.，自然结构生物学(NatStructBiol.)1996年9月；3(9):752-7;ArbabiGhahroudi等.,FEBS通讯(FEBSLett.)1997年9月15日；414(3):521-6;Vu等.，分子免疫学(MolImmunol.)1997年11-12月；34(16-17):1121-31;Atarhouch等,，骆鸵实践和研究杂志(JournalofCamelPracticeandResearch)1997;4:177-182;Nguyen等.，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)1998年1月23曰；275(3):413-8;Lauwereys等.，EMBO杂志(EMBOJ.)1998年7月1日；17(13):3512-20;Frenken等.，研究免疫学(ResImmunol.)1998年7-8月;149(6):589-99;Transue等.，蛋白质(Proteins)1998年9月1日；32(4):515-22;Muyldermans和Lauwereys，分子识别杂志(J.Mol.Recognit.)1999年3-4月；12(2):131-40;vanderLinden等.，生物化学和生物物理录集(Biochim.Biophys.Acta)1999年4月12日；1431(1):37-46.;Decanniere等.，结构折叠和设计(StructureFold,Des.)1999年4月15日；7(4):361-70;Nguyen等.，分子免疫学(Mol.Immunol.)1999年6月；36(8):515-24;Woolven等.，免疫遗传学(Immunogenetics)1999年10月；50(1-2):98-101;Riechmann禾卩Muyldermans,免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)1999年12月10日；231(1-2):25-38;Spinelli等.，生物化学(Biochemistry)2000年2月15日；39(6):1217-22;Frenken等.，生物技术杂志(J.Biotechnol.)2000年2月28日；78(1):11-21;Nguyen等.，EMBO杂志(EMBOJ,)2000年3月1日；19(5):921-30;vanderLinden等.，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)2000年6月23日；240(1-2):185-95;Decanniere等.，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)2000年6月30日；300(1):83-91;vanderLinden等"生物技术杂志(J.Biotechnol.)2000年7月14日；80(3):261-70;Harmsen等.，分子免疫学(Mol.Immunol.)2000年8月；37(10):579-90;Perez等.，生物化学(Biochemistry)2001年1月9日；40(1):74-83;Conrath等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2001年3月9日；276(10):7346-50;Muyldermans等.，生物化学科学趋势(TrendsBiochemSci.)2001年4月；26(4):230-5;MuyldermansS.，生物技术杂志(J.Biotechno.)2001年6月；74(4):277-302;Desmyter等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2001年7月13日;276(28):26285-90;Spinelli等.,分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)2001年8月3日；311(1):123-9;Conrath等.，抗菌剂化学疗法(AntimicrobAgentsChemother.)2001年10月；45(10):2807-12;Decanniere等.，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)2001年10月26日；313(3):473-8;Nguyen等.，现代免疫学(AdvImmunol.)2001;79:261-96;Muruganandam等.，FASEB杂志(FASEBJ.)2002年2月；16(2):240-2;Ewert等.，生物化学(Biochemistry)2002年3月19日；41(11):3628-36;Dumoulin等.，蛋白质科学(ProteinSci.)2002年3月；11(3):500-15;Cortez-Retamozo等.，国际癌症杂志(Int.J.Cancer.)2002年3月20日；98(3):456-62;Su等.,分子生物学进展(Mol,Biol.Evol.)2002年3月；19(3):205-15;vanderVaartJM.，分子生物学方法(MethodsMolBiol.)2002;178:359-66;Vranken等.，生物化学(Biochemistry)2002年7月9日；41(27):8570-9;Nguyen等.，免疫遗传学(Immunogenetics)2002年4月；54(1):39-47;Renisio等.，蛋白质(Proteins)2002年6月1日；47(4):546-55;Desmyter等.，生物化学杂志G.Biol.Chem.)2002年6月28日；277(26):23645-50;Ledeboer等.,每日科学杂志(J.DairySci.)2002年6月；85(6):1376-82;DeGenst等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2002年8月16日；277(33):29897-907;Ferrat等.，生物化学杂志(Biochem.J.)2002年9月1日；366(Pt2):415-22;Thomassen等.，酶和微生物技术(EnzymeandMicrobialTechnol.)2002;30:273-8;Harmsen等.，应用微生物学和生物技术(Appl.Microbiol.Biotechno1.)2002年12月；60(4):449-54;Jobling等.,自然生物技术(NatBiotechnol.)2003年1月；21(1):77-80;Conrath等.，免疫学发展和比较(Dev.Comp.Immunol.)2003年2月；27(2):87-103;Pleschberger等.，生物缀合物化学(Bioconjug.Chem.)2003年3-4月；14(2):440-8;Lah等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2003年4月18日；278(16):14101-11;Nguyen等.，免疫学(Immunology.)2003年5月；109(1):93-101;Joosten等.，微生物细胞实情(Microb.CellFact.)2003年1月30日；2(1):l;Li等.,蛋白质(Proteins)2003年7月1日；52(1):47-50;Loris等,，生物化学(BiolChem.)2003年7月25日；278(30):28252-7;vanKoningsbruggen等.，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)2003年8月；279(1-2):149-61;Dumoulin等.,自然(Nature.)2003年8月14日；424(6950):783-8;Bond等.，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)2003年9月19日；332(3):643-55;Yau等.，免疫学方法杂志(J.Immunol.Methods)2003年10月1日；281(1-2):161-75;Dekker等"病毒杂志(J.Virol.)2003年11月；77(22):12132-9;Meddeb誦Mouelhi等.，Toxicon,2003年12月；42(7):785-91;Verheesen等.，生物化学和生物物理录集(Biochim.Bi叩hys.Acta)2003年12月5日；1624(1-3):21-8;Zhang等.，分子生物学杂志(J.Mol.BioL)2004年1月2日；335(1):49-56;Stijlemans等.,生物化学杂志(J.Biol.Chem,)2004年1月9日；279(2):1256-61;Cortez-Retamozo等"癌症研究(CancerRes.)2004年4月15日；64(8):2853-7;Spinelli等.，FEBS通讯(FEBSLett.)2004年4月23日；564(1-2):35-40;Pleschberger等.，生物缀合物化学(Bioconjug.Chem.)2004年5-6月；15(3):664-71;Nicaise等.，蛋白质科学(ProteinSci.)2004年7月；13(7):1882-91;Omidfar等.,月中瘤生物学(TumourBiol.)2004年7-8月；25(4):179-87;Omidfar等.，肿瘤生物学(TumourBiol.)2004年9-12月；25(5-6):296-305;Szynol等"抗菌剂化学疗法(AntimicrobAgentsChemother.)2004年9月;48(9):3390-5;Saerens等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2004年12月10日；279(50):51965-72;DeGenst等.，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)2004年12月17日；279(51):53593-601;Dolk等.，应用和环境微生物学(Appl.Environ.Microbiol.)2005年1月；71(1):442-50;Jo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用于在两种条件之间表现出10-倍、100-倍或1000-倍差别的优选相互作用。还应该清楚的是，pH6.0表示"酸性pH"条件，且该条件还可以指如Kamei等提出的5-6范围内的内体pH(2005)。内在化后，本发明氨基酸序列、血清蛋白和/或抗原(作为第二意欲或需要的化合物)之间的相互作用随着内在化，可能基本不受影响，被减弱或增强(提供本发明化合物和血清蛋白或抗原之间的相互作用中至少之一受到影响)。如果相互作用2和3对内在化引起的条件改变均不敏感，则抗原、复合结合蛋白和血清蛋白之间在循环中形成的复合物得到大规模再循环，这归因于血清蛋白与FcRn的相互作用(例如，通过与IgG上或血清清蛋白上容许与FcRn相互作用的位点的相互作用)。将第一非限制性实例描述为表l中的情形B:在该情形中，第一结合蛋白和其抗原之间的相互作用随着pH的降低而丧失，并释放进入内体区室。作为结果，抗原本身被降解，但是复合结合蛋白被拯救免于降解。可以使用所述方法来避免在循环中积累复合结合蛋白-Ag复合物。该复合物形成抗原量下降(sink)，这有时迫使增加药物剂量(例如，对一些抗-TNF-阻滞剂)。另一种优势是再循环复合结合蛋白，并因此不需要与不再循环的分子一样的频繁注射和高剂量给药。这种选择性去除将再循环药物本身(例如，纳米抗体融合)，并容许比如果要清除纳米抗体融合本身更有效地，从循环中清除抗原。按照这个实例，这种从循环中有效清除抗原(但猛烈攻击结合蛋白)的途径有利于使用缺乏效应子Fc部分的结合蛋白(诸如，例如纳米抗体、结构域抗体或其它分子)，所述效应子Fc部分通过与Fcy受体的相互作用，介导抗体依赖性细胞-介导的细胞毒性(ADCC)或抗体-依赖性细胞-介导的吞噬作用(ADCP)和IgG-复合物的联合清除(L0vdal等.，2000)。另外，药物的再循环可以正向影响其免疫原性，因为更少的药物易于进行蛋白水解裂解和导致MHCII类呈递的内体处理。这两种特性均可以对药物的功效作出贡献。将另一种非限制性实例描述为表l中的情形C:在生理学pH下，在循环中不存在复合结合蛋白与抗原的结合，但是在胞饮作用事件后存在。当该区室中的特异性吸收是优选的时候，例如，当在循环中与抗原的相互作用能够以非-优选的方式影响其功能(由于位阻现象，干扰具有抗原功能的复合结合蛋白)时，这样的设置是有效的。由于其与血清蛋白的相互作用而本身是长寿命分子的复合蛋白在低pH下结合的结果是抗原能够受到保护而免于被降解，和被拯救而免于被降解。然而，一旦它从细胞中释放出来，它就与复合蛋白分开，并容许其起独立分子的作用。例如，能够使用所述设置增加内源性存在的细胞因子或激素的半衰期。在另一种非限制性实例(表2中的情形D、E和F)中，第二结合蛋白和血清蛋白之间的相互作用随着pH从7.4降至6.0而减小。作为结果，在复合结合蛋白-血清蛋白复合物(有或无与之结合的抗原)的胞饮作用后，复合结合蛋白会失去关于FcRn或补救受体的结合亲和性，并在内体区室中被破坏。如果抗原半衰期的延长应该受到尺寸增加的限制并且再循环是不需要的(例如，如果抗原是优选以不同方式清除的细菌或病毒)，则能够设想使用所述相互作用。该方法还可以适合于快速破坏循环抗原(细胞因子、毒素)。表2中的三种不同情形描述了会发生的是，复合结合蛋白与抗原的相互作用对pH改变(D)不敏感，或在pH7.4和6.0之间变化(E和F的情形)。情形F的有价值应用可以是通过本发明的氨基酸序列或化合物或其它靶向例如RabllGTP酶(Ward等.2005)的结合分子，控制内体区室的命运，从而干扰胞吐或干扰Na,K-ATP酶，从而增强内体酸化(Rybak等.，1997)。而且，例如，如果在与疾病或其它病症相关的患者中存在过高血清水平(IgG或清蛋白)，则可以增强溶酶体降解途径。备选地，该应用可能是有价值的，从而快速消除在先施用的抗体，所述抗体的作用应该被限制在小时间范围内(例如，从而避免不希望的抗体副作用)。通过施用复合结合蛋白，防止结合分子(纳米抗体、结构域抗体或其它分子)受到由肾小球滤过引起的快速清除，并在不需要维持与载体(例如IgG或清蛋白)结合时在内体中起作用，因为预期的作用是无论如何都将全部内体内容物改变路径(reroute)为溶酶体降解途径。在另一种非限制性实例(表3的情形G、H和I)中，第二结合蛋白和血清蛋白之间的相互作用随着pH从7.4降至6.0而增加。例如，当在生理学pH下，几乎不存在或不存在结合蛋白与血清蛋白的结合时，在循环中，结合蛋白自由地与抗原相互作用，且该相互作用不受任何与血清蛋白的相互作用的影响。后一种相互作用可以导致一些位阻现象，干涉抗原-组合结合蛋白复合物的药物动力学，或干涉与组合蛋白结合的抗原的功能。在内在化抗原-复合结合蛋白复合物内在化和pH下降后，且优选地在PH6.0下，复合结合蛋白的第二结合位点的结合会变得足以补救复合结合蛋白免于降解。在该情形中，与复合结合蛋白结合的抗原可以被保留(情形G)或免于被降解(情形H)。在一种最后的情形(情形I)中，与抗原的结合仅发生在低pH下，这可能是拯救由于被复合结合蛋白拯救而释放进入内体区室中的细胞内蛋白质的途径。在本发明的这些方面和实例中，本发明的氨基酸序列或化合物本身的结合本身可以足以诱导有偏向的清除抗原，但优选地，使本发明氨基酸序列或化合物和抗原的复合物主动靶向内体区室，例如通过本发明另一种识别细胞-表面靶标(优选地，FcRn)的氨基酸序列或化合物，所述细胞-表面的耙标是通过内体区室，或通过识别在通过内体区室循环的循环中存在的因子，而被有规则地内在化和清除的。优选的是，该细胞-表面靶标是FcRn，或血清蛋白是IgG或清蛋白、或转铁蛋白。在另一方面，本发明包括用于产生针对抗原和/或血清蛋白的结合蛋白的方法，所述抗原和/或血清蛋白在它们的相互作用中，例如对内在化引起的环境改变敏感。已知抗体-抗原相互作用有时对缓冲液条件、pH和离子强度中变化敏感，但最经常地是，没有对那些变化进行评分或研究，且不经常使用它们设计药物治疗剂，因为变化总体上是不可预知的。例如，通过关于发生敏感相互作用筛选结合蛋白的所有组成成分，例如通过在2种代表性条件下(例如在pH7.4下和在pH6.0下)进行结合测定，发现具有需要的结合特征的结合蛋白，并确定相对结合强度。可以使用任何合适的结合测试，包括ELISA、基于BIAcore的方法、斯卡查德分析等测量所述相对相互作用强度。所述测试将揭示哪种结合蛋白表现出对所选参数(pH、离子强度、温度)敏感的相互作用，以及程度。本发明的条件性结合物可以备选地通过利用会优先富集需要敏感性的选择中的条件，例如从噬菌体、核糖体、酵母或细胞文库中，选择结合蛋白的所有组成成分而产生。在生理学pH下培养噬菌体抗体文库和通过仅将pH改变为例如6.0来洗脱结合的噬菌体粒子，将洗脱具有pH-敏感性相互作用的那些噬菌体。类似地，能够使用离子强度的改变(例如，NaCl或KC1，从150mM变为10mM)，从而确定对这些相互作用高度敏感的相89件。例如，Christensen等.,(2001):观察到在新形成的胞饮泡中pH由7.2降至6.2时，[Ca2+]pin0降低2个数量级，随后随着胞饮泡成熟[C^+]pino显著增加，这些暗示低钙浓度是早期内体的独特生理学特性。还能够从设计的蛋白质文库中分离具有需要的结合特征的条件性结合蛋白，其中将推定结合位点改造为包含氨基酸残基或序列，所述氨基酸残基或序列在某些"敏感的"相互作用中是优选的，例如关于pH-敏感性的组氨酸。例如，已知FcRn和IgG之间的相互作用对pH非常敏感，当pH由pH6.0上升至7.0时降低超过2个数量级。亲和性转变的主要机制基础是结合位点的组氨酸含量组氨酸残基的咪唑侧改变通常在pH6.0-7.0的范围内脱质子。预测在推定结合位点中包含组氨酸(例如，利用优选引入文库中该残基的寡核苷酸)以较高频率产生具有pH-敏感性相互作用的结合蛋白。使用的术语和表述作为说明而非限制性术语使用，且不意欲使用所述术语和表述排除所示和所述特征的任何等价物及其部分，承认多种修改可能属于该实施方案的范围。引入本文中所述的全部参考文献作为参考，具体地为了上文中提到的教导。(legend)图1.本发明氨基酸序列可能的相互作用。图2.对pH改变敏感的相互作用1。图3.周质制备物的人血清清蛋白-特异性ELISA分析，所述周质制备物包含来自所选克隆的his-标记的纳米抗体蛋白片段。将可溶性纳米抗体蛋白片段的周质制备物加入到ELISA板的孔中，所述板己被HSA抗原包被，并另外被PBS+l。/。酪蛋白封闭。通过单克隆生物素化的抗-his抗体，以及随后辣根-缀合链霉抗生物素蛋白执行检测。如实施例1中所述，由TMB-底物显影ELISA。在450nm处，利用ELISA-阅读器测量OD-值(Y-轴)。每个柱代表各种周质提取物。图4.不同pH下，清蛋白-结合纳米抗体和人血清清蛋白之间相互作用的表面等离子体共振测量法。在pH5，pH6或pH7下，将可溶性纳米抗体蛋白片段的周质制备物注射到固定的人血清清蛋白上。图4A和4B分别显示纳米抗体4A1和4C3的相互作用。图5.氨基酸序列。图6.仅在中性条件下，而不在酸性条件下结合的纳米抗体(克隆)。图7.仅在酸性条件下，而不在中性条件下结合的纳米抗体(克隆)。实验部分实施例h鉴定条件性的血清清蛋白特异性纳米抗体在兽医系道德委员会(EthicalCommitteeoftheFacultyofVeterinaryMedicine)(根特大学(UniversityGhent),比利时)批准后，按照标准方案，以每周一次的时间间隔，用6次肌肉内注射人血清清蛋白，以及小鼠血清清蛋白、食蟹猴血清清蛋白和狒狒血清清蛋白的混合物，交替免疫2只美洲鸵(117，118)。文库构建当最后一次抗原注射后4天在美洲驼中诱导了适当的免疫应答时，收集150ml血液样品，并按照制造商的指示，通过在Ficoll-Paque的密度梯度离心纯化外周血淋巴细胞(PBL)。随后，从这些细胞中提取总RNA，并将其用作RT-PCR的初始材料，从而扩增编码基因片段的纳米抗体。将这些片段克隆到噬菌粒载体pAX50中。按照标准方法(见，例如本文中引入的申请人提交的现有技术和申请)制备噬菌体并将其保存在4"C，以便将来使用。选择选择所有组成成分以获得与血清清蛋白的结合在第一个选择中，在室温(RT)下，以100吗/ml，将人血清清蛋白(西格玛(Sigma)A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nimc,威斯巴登，德国)上过夜(ON)。在RT下，用处于PBS中的4%Marvel封闭板2小时。用PBST清洗3次后，将噬菌体加入到4%Marvel/PBS中，并在RT下温育1小时。充分清洗后，用0.1M三乙醇胺(TEA)洗脱，并用1MTris-HClpH7.5中和结合的噬菌体。选择所有组成成分以获得与血清清蛋白的条件性结合为了富集条件性的结合物，所述结合物具有pH敏感性相互作用，在生理学pH下与抗原一起温育噬菌体文库，并在酸性pH下洗脱，如下在第一选择中，在室温(RT)下，以100pg/ml，将人血清清蛋白(西格玛A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nunc,威斯巴登，德国)上过夜(ON)。在RT下，用处于PBS中的4。/。MarvelpH7.3封闭板2小时。用PBS/0.05。/。吐温20(PBST)pH7.3清洗5次后，将噬菌体加入到2%Marvel/PBSpH7.3中，并在RT下温育2小时。通过用PBSTpH7.3清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用PBSpH5.8清洗2次。在RT下，用PBSpH5.8洗脱结合的噬菌体30分钟，并用1MTris-HClpH7.5中和结合的噬菌体。在第二选择中，在RT下，在被调节为pH7.3的2%Marvell/CPA缓冲液(10mM柠檬酸钠+10mM磷酸钠+10mM乙酸钠+115mMNaCl)中，与人血清清蛋白一起，温育噬菌体文库2小时。通过用CPA/0.05。/。吐温20(CPAT)pH7.3清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用CPATpH5.8清洗2次。在RT下，用CPApH5.8洗脱结合的噬菌体30分钟，并用1MTris-HClpH7中和结合的噬菌体。在第三选择方案中，在RT下，在2°/。Marvell/CPApH5.8中，与人血清清蛋白一起，温育噬菌体文库2小时。通过用CPATpH5.8清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用CPApH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脱结合的噬菌体30分钟。在第四选择方案中，在RT下，在2%Marvell/PBSpH5.8中，与人血清清蛋白一起，温育噬菌体文库2小时。通过用PBSTpH5.8清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用PBSpH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脱结合的噬菌体30分钟。在所有的选择中，观察到富集。将来自每种选择的产物作为集合，再克隆到表达载体pAX51中。挑取菌落，并在96深孔板(lml体积)中生长，并通过加入IPTG诱导纳米抗体的表达。按照标准方法(见例如本文中引用的现有技术和申请人提交的申请)，制备周质提取物(体积~80(Xl)。由ELISA进行文库评估通过在固相包被的人血清清蛋白上进行ELISA，筛选各个纳米抗体的周质提取物，以获得清蛋白特异性。利用生物素化的小鼠抗-his抗体(SerotecMCA1396B)进行对与固定的人血清清蛋白结合的纳米抗体片段的检测，所述生物素化的小鼠抗-his抗体是利用链霉抗生物素蛋白-HRP(DakoCytomation^P0397)检测的。通过加入TMB底物溶液(Pierce34021)显影信号，并在450nm波长处进行检测。在淘选(panning)轮1后，可获得阳性克隆的高击中率。图3说明了典型的ELISA结果。通过ELISA选择纳米抗体与清蛋白的条件性或pH-敏感性结合。为了富集条件性的结合物，所述结合物具有pH敏感性相互作用，可以在生理学pH下与抗原一起温育噬菌体文库，并在酸性pH下洗脱，如下'.在第一选择方案中，在室温(RT)下，以100pg/ml，将人血清清蛋白(西格玛A-8763)包被在Maxisorp96-孔板(Nunc,烕斯巴登，德国)上过夜(ON)。在RT下，用处于PBS中的4。/。MarvelpH7.3封闭板2小时。用PBS/0.05。/。吐温20(PBST)pH7.3清洗5次后，将噬菌体加入到2%Marvel/PBSpH7.3中，并在RT下温育2小时。通过用PBSTpH7.3清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用PBSpH5.8清洗2次。在RT下，用PBSpH5.8洗脱结合的噬菌体30分钟，并用1MTris-HClpH7.5中和结合的噬菌体。在第二选择方案中，在RT下，在被调节为pH7.3的2。/。Marvell/CPA缓冲液(10mM柠檬酸钠+10mM磷酸钠+10mM乙酸钠+115mMNaCl)中，与人血清清蛋白一起，温育噬菌体文库2小时。通过用CPA/0.05。/。吐温20(CPAT)pH7.3清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用CPATpH5.8清洗2次。在RT下，用CPApH5.8洗脱结合的噬菌体30分钟，并用1M93Tris-HClpH7中和结合的噬菌体。在第三选择方案中，在RT下，在2%Marvell/CPApH5.8中，与人血清清蛋白一起，温育噬菌体文库2小时。通过用CPATpH5.8清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用CPApH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脱结合的噬菌体30分钟。在第四选择方案中，在RT下，在2%Marvell/PBSpH5.8中，与人血清清蛋白一起，温育噬菌体文库2小时。通过用PBSTpH5.8清洗10次，除去未结合的噬菌体，并随后用PBSpH7.3清洗2次。在RT下，用lmg/ml胰蛋白酶/CPApH7.3洗脱结合的噬菌体30分钟。在所有的选择中，观察到富集。将来自每种选择的产物作为集合，再克隆到例如表达载体pAX51中。挑取菌落，并在96深孔板(lml体积)中生长，并通过加入IPTG诱导纳米抗体的表达。按照标准方法(见例如本文中引用的现有技术和申请人提交的申请)，制备周质提取物(体积~80|al)。通过表面等离子体共振(BIAcore)针对发生pH-敏感性相互作用而筛选纳米抗体所有组成成分为了活化利用NHS/EDC和为了钝化利用乙醇胺(Biacore胺偶联试剂盒)，将人血清清蛋白通过胺偶联固定在CM5传感器芯片表面上。固定大约1000RU人血清清蛋白。在25。C进行实验。为了纳米抗体与清蛋白的pH依赖性结合使用的缓冲液(Biacore)如下10mM柠檬酸钠(Na3C6H507)+10mM磷酸钠(Na2HP04)+10mM乙酸钠(CH3COONa)+115mMNaCl。通过加入HCl或NaOH(根据测量的混合物pH)使该化合物变为pH7、pH6和pH5。在pH7、pH6和pH5的运行缓冲液中稀释周质提取物。以流速45(^1/分钟，将样品注射到活化的和参照表面上1分钟。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1%P20的3s脉冲再生那些表面。利用BiacoreT100评估软件实现评估。表1中记录了不同纳米抗体在pH7和pH5条件下的解离率。大多数纳米抗体(4A2，4A6,4B5,4B6,4B8,4C3,4C4,4C5,4C8,4C9,4D3,4D4,4D7和4D10)在pH5具有比在pH7更快的解离率(2-6倍解离率差别)。纳米抗体4A9在pH5具有比在pH7更慢的解离率(0.54倍解离率差别)。对于其它纳米抗体，包括4C12,4B，4B10,IL6R202,Alb-8,和4D5，在不同pH条件下与抗原的结合不变。由此能够使用对纳米抗体所有组成成分的直接筛选，来获得与抗原的条件性结合。通过ELISA筛选纳米抗体的条件性结合为了针对它们与清蛋白的条件性结合筛选纳米抗体，还可以利用两种代表性的条件，pH5.8和pH7.3进行结合ELISA，并确定相对结合强度。用100pl处于碳酸氢盐缓冲液(50mM,pH9.6)中的1pg/ml人血清清蛋白溶液，在4。C，包被Maxisorb微量滴定板(Nunc,商品号430341)过夜。包被后，用含有0.05%吐温20的PBS(PBST)清洗该板3次，并在室温(RT)下，用含有2%Marvel的PBS(PBSM)封闭2小时。封闭步骤后，用PBSTpH5.8清洗包被的板2次，将在PBSMpH5.8中稀释10倍的每种周质样品等分试样(100pl)转移到包被的板中，并容许在RT下结合1小时。将样品温育后，用PBST清洗该板5次，并在RT下，与100)il处于2y。PBSM中的1:1000小鼠抗-myc抗体稀释液一起温育1小时。在RT下1小时后，用PBST清洗该板5次，并与100^与辣根过氧化物酶缀合的山羊抗-小鼠抗体的1:1000稀释液一起温育。1小时后，用PBST清洗板5次，并与100pi慢TMB(Pierce，商品号34024)—起温育。20分钟后，利用100jxlH2SO4终止反应。在450nm处测量每个孔的吸光度。对如本文中所述的各种条件性选择方案，在该ELISA中分析了92种周质提取物。图6描述关于在中性pH，即pH7.4下条件性地结合于人血清清蛋白，但在酸性，即pH5.8下不结合于人血清清蛋白的纳米抗体的结果。图7描述关于在酸性pH，即pH5.8下条件性地结合于人血清清蛋白，但在中性pH，即pH7.4下不结合于人血清清蛋白的纳米抗体的结果。在对人血清清蛋白的一轮选择，以及随后的总洗脱后，鉴定了在酸性pH下(n=16)或在中性pH下(ri=19)条件性地结合于清蛋白的纳米抗体。将选择条件推向条件性结合的方向，导致较高比例的条件性结合的纳米抗体(『23)。实施例2:分析条件性结合对纳米抗体药物代谢动力学行为的作用1.构建双特异性纳米抗体形式产生双特异性纳米抗体，其例如由C-末端条件性HSA-结合纳米抗体、9个氨基酸Gly/Ser连接体和N-末端抗-靶标纳米抗体组成。可以将这些构建体作为c-myc,His6-标记的蛋白质，表达在大肠杆菌(￡."//)中，并随后利用固定的金属亲和性层析(IMAC)和尺寸排阻层析(SEC)从培养基中纯化出来。2.在形成多特异性形式后而保持条件性的结合。通过表面等离子体共振(BIAcore)评估抗-HSA纳米抗体或dAbs以多特异性纳米抗体形式的条件性pH-结合特性，例如如本申请中所公开的条件性的结合物与一种或多种纳米抗体或结合于一种或多种蛋白质靶标的dAb相连。还评估了与食蟹猴血清清蛋白的交叉-反应性。为了活化利用NHS/EDC和为了钝化利用乙醇胺(Biacore胺偶联试剂盒)，将人和食蟹猴血清清蛋白通过胺偶联固定在CM5传感器芯片表面上。在25"C进行实验。为了纳米抗体与清蛋白(Biacore)的pH依赖性结合使用的缓冲液如下10mM柠檬酸钠0^3<:611507)+10mM磷酸钠(^2见04)+10mM乙酸钠(013(:0(^&)+115mMNaCl。通过加入HC1或NaOH(根据测量的混合物pH)使该混合物变为pH7、pH6和pH5。在pH7、pH6和pH5的运行缓冲液中稀释纯化的纳米抗体。以流速45^1/分钟，将样品注射到活化的和参照表面上1分钟。用甘氨酸-HClpH1.5+0.1%P20的3s脉冲再生那些表面。利用BiacoreT100评估软件实现评估。3.食蟹猴中双特异性纳米抗体形式的药物代谢动力学特征在食蟹猴中进行了药物代谢动力学研究。通过弹丸注射(bolusinjection)(1.0ml/kg，大约30秒)，将纳米抗体(例如IL6R-4D10，艮卩，通过9个氨基酸Gly/Ser连接体与条件性的清蛋白结合的结合区段相连的IL-6受体结合区段)静脉内施用于左或右臂的头静脉中，以获得2.0mg/kg的剂量。通过ELISA确定血浆样品中的纳米抗体浓度。血浆样品中的浓度确定如下用100(il处于碳酸氢盐缓冲液(50mM,pH9.6)中的5pg/ml12B2-GS9-12B2(B2弁1302nr4.3.9)溶液，在4。C，包被Maxisorb微量滴定板(Nunc,商品号430341)过夜。包被后，用含有0.1%吐温20的PBS清洗该板3次，并在室温(RT)下，用含有"/。酪蛋白的PBS(250pl/孔)封闭该板2小时。在单独的非-包被板(Nunc,商品号249944)中，以PBS稀释血浆样品，和纳米抗体-标准物(掺加到100%汇集的空白食蟹猴血浆中)的连续稀释物，从而在由处于PBS中的10%汇集的食蟹猴血浆组成的最终样品基质中获得需要的浓度/稀释度。在RT下，在非-包被板中温育所有预-稀释物30分钟。封闭步骤后，(用含有0.m吐温20的PBS)清洗包被的板3次，并将每种样品稀释物的等分试样(10(^1)转移到包被的板中，并容许在RT下结合1小时。样品温育后，(用含有0.1%吐温20的PBS)清洗该板3次，并在RT下，与100^处于PBS中的100ng/mlsIL6R溶液(Peprotech,商品号20006R)—起温育1小时。在RT下1小时后，(用含有0.1%吐温20的PBS)清洗该板3次，并与100^的处于含有P/。酪蛋白(R&D系统,商品号BAF227)的PBS中的250ng/ml生物素化多克隆抗-IL6R抗体溶液一起温育。温育30分钟(RT)后，(用含有0.1。/。吐温20的PBS)清洗板3次，并与100与辣根过氧化物酶(DaktoCytomation,商品号P0397)缀合的链霉抗生物素蛋白的1/5000稀释液(在包含P/。酪蛋白的PBS中)一起温育30分钟(RT)。30分钟后，(用含有0.1。/。吐温20的PBS)清洗板3次，并与100pd慢TMB(Pierce,商品号34024)—起温育。20分钟后，利用100plHC1(1N)终止反应。在450nm处测量每个孔的吸光度(Tecan日出分光光度计(TecanSunrisespectrophotometer)),并关于620nrn处的吸光度对其进行校正。该测定测量游离纳米抗体以及与sIL6R和/或食蟹猴血清清蛋白结合的纳米抗体。基于具有关于各种纳米抗体可变斜率的S形标准曲线，确定每份血浆样品中的浓度。在2次独立的测定中分析每份单独的血浆样品，并且为了药物代谢动力学数据分析计算平均血浆浓度。在从中央区室消除的条件下，用二-区室建模，计算所有参数。表1.第二氨基酸序列和抗原之间，而非第一氨基酸序列和血清蛋白之间的pH-依赖性相互作用<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>表2.第一氨基酸序列和血清蛋白的相互作用优先地发生在生理学pH下<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>E2++相同++在内体区室中释放Ag，降解；用于防止纳米抗体-Ag复合物在循环中积累的方法F2++相同++如果靶标是例如RabllGTP酶或Na+，K+，ATP酶，则内体改变路径请注意pH6.0可以意指酸性生理学pH，即还可以是5.5或更低或更高。pH7.4可以意指中性生理学pH，即还可以是pH7.2-7.4(且可能更高或更低一点)。表3.氨基酸序列与血清蛋白在酸性pH下的优先结合+主l冃相互pH6.0pH7.4纳米抗体最相互pH6.0pH7.4抗原最终结果形作用终结果作用G2++仅结合于内体区室中的血清蛋白(在低pH下)；在血清蛋白释放后，纳米抗体也脱离；半衰期延长限于再循环作用；保持尺寸的优势++++当在循环中时，不干扰具有纳米抗体功能的血清蛋白的结合99<table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table>权利要求1.针对需要的分子的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物学条件下，以10-5摩尔/升或更低的解离常数(KD)和/或以至少105M-1的结合亲和性(KA)结合于所述需要的分子；和b)在第二生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少10倍的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。2.按照权利要求l的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少100倍的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。3.按照权利要求1的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在第二生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离常数的至少1000倍的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。4.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10-6摩尔/升或更低的解离常数(&)结合于所述需要的分子。5.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以W摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。6.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10-s摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。7.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以10—摩尔/升或更高的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。8.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以10-5摩尔/升或更高的解离常数(&)结合于所述需要的分子。9.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以1(^摩尔/升或更高的解离常数(KD)结合于所述需要的分子。10.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括在第一生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，且所述第二生物学条件包括在第二生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，其中所述第一和第二生理学区室，在正常生理学条件下，由至少一种生物膜诸如细胞膜、细胞小泡或亚细胞区室的壁、或血管壁分开。11.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括人体或动物体的至少一种细胞外的普遍存在的生物学条件，且所述第二生物学条件包括所述细胞内普遍存在的条件。12.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括所述人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的生物学条件，且所述第二生物学条件包括人体或动物体的至少一种组织或细胞内普遍存在的条件。13.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第二生物学条件包括在人体或动物体细胞的至少一种亚细胞区室中普遍存在的生理学条件，且所述第一生物学条件包括所述细胞外普遍存在的条件。14.按照权利要求1-13中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的条件，且所述第二生物学条件包括所述人体或动物体细胞的至少一种亚细胞区室中普遍存在的生理学条件。15.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的条件，且所述第二生物学条件包括所述人体或动物体细胞的至少一种内体、脂质体、胞饮泡区室或所述细胞中存在的其它小泡中普遍存在的生理学条件。16.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以被所述人体或动物体的至少一种细胞吸收(例如，通过内在化、胞饮作用、胞吞、胞转、胞吐、吞噬或吸收或内在化进入所述细胞的类似机制)，其中所述第一生物学条件包括这样的生理学条件，其中所述氨基酸序列在被吸收进入细胞之前存在，且所述第二生物学条件包括这样的生理学条件，其中所述氨基酸序列在被吸收进入细胞后存在。17.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的意欲或需要的分子，其中所述第一生物学条件包括关于至少一种涉及再循环需要的化合物的动物体或人体细胞的细胞外条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述需要的化合物的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。18.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的意欲或需要的分子，其中所述第一生物学条件包括在动物体或人体循环中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述需要的化合物的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。19.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的血清蛋白，其中所述第一生物学条件包括在动物体或人体循环中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述血清蛋白的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。20.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对血清清蛋白，其中所述第一生物学条件包括在动物体或人体循环中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述血清清蛋白的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。21.按照权利要求1-17中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的意欲或需要的分子，其中所述第一生物学条件包括在涉及再循环所述意欲和需要的化合物的动物体或人体的至少一种细胞的细胞表面或直接接触环境中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括所述细胞中普遍存在的条件。22.按照权利要求1-17中任一项或21的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对被所述细胞再循环的所述细胞表面上的蛋白质或多肽，其中所述第一生物学条件包括所述动物体或人体细胞直接接触的环境中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括所述细胞中普遍存在的条件。23.按照权利要求1-17中任一项，21或22的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对被所述细胞再循环的所述细胞表面上的受体，其中所述第一生物学条件包括所述动物体或人体细胞直接接触的环境中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括所述细胞中普遍存在的条件。24.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件和所述第二生物学条件关于下列因素中任意1项、任意2项、任意3项或基本全部而不同pH、离子强度、和蛋白酶依赖性。25.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.0的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于7.0的生理学pH。26.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.1的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于6.7的生理学pH。27.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.2的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于6.5的生理学pH。28.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是7.2-7.4范围内的生理学pH，且所述第二生物学条件是6.0-6.5范围内的生理学pH。29.按照权利要求1-20或24-27中任一项的氨基酸序列，其针对血清蛋白，具体地，人血清蛋白。30.按照权利要求1-20或24-29中任一项的氨基酸序列，其针对进行再循环的血清蛋白，具体地，进行再循环的人血清蛋白。31.按照权利要求1-20或24-30中任一项的氨基酸序列，其针对血清清蛋白，具体地，人血清清蛋白。32.按照权利要求1-20或24-31中任一项的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它哺乳动物物种的血清清蛋白。33.按照权利要求1-20或24-32中任一项的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它哺乳动物物种的血清清蛋白，所述其它哺乳动物物种选自由下列各项组成的组小鼠、大鼠、兔和灵长类动物。34.按照权利要求1-20或24-33中任一项的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它灵长类动物物种的血清清蛋白，所述其它灵长类动物物种选自由下列各项组成的组选自猕猴属(M"^m)的猴(诸如，和具体地，食蟹猴(Mm"m/mc/c^z^)和/或猕猴(Macacaww/"加)和狒狒wraZw船)。35.按照权利要求1-18或21-28中任一项的氨基酸序列，其针对细胞-表面蛋白。36.按照权利要求1-18，21-28或35中任一项的氨基酸序列，其针对受体。37.按照权利要求1-18，21-28，35或36中任一项的氨基酸序列，其针对进行再循环的细胞-表面蛋白，和具体地，进行再循环的受体。38.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组具有免疫球蛋白折叠的蛋白质和多肽；基于除免疫球蛋白外的其它蛋白质支架的分子，所述支架包括但不限于，蛋白质A结构域、淀粉酶抑肽(tendamistat)、纤连蛋白、脂笼蛋白、CTLA-4、T-细胞受体、设计的锚蛋白重复序列和PDZ结构域,和基于DNA或RNA的结合部分，包括但不限于DNA或RNA适体；或选自所述蛋白质或多肽的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。39.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组包括四种彼此间由三种互补性决定区隔开的构架区或基本由其组成的蛋白质和多肽；或选自所述蛋白质或多肽的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。40.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组抗体和抗体片段，源自抗体或抗体片段的结合单位和结合分子,和抗体片段，结合单位或结合分子；或选自前述任一项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。41.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组重链可变结构域、轻链可变结构域，结构域抗体和适合于作为结构域抗体、单结构域抗体使用的蛋白质和肽和适合于作为单结构域抗体、纳米抗体TM和dAbsTM使用的蛋白质和肽；或选自前述任一项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。42.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其包括4-500个氨基酸残基，优选地，5-300个氨基酸残基，更优选地，10-200个氨基酸残基，诸如20-150个氨基酸残基，例如约30,40,50,60,70,80,90,100,110,120，130或140个氨基酸残基。43.按照前述权利要求中任一项的氨基酸序列，其包括单氨基酸链(具有或不具有二硫键/键合)。44.包括权利要求1-43中任一项的氨基酸序列的化合物。45.按照权利要求44的化合物，其中所述化合物还包括至少一种另外的部分或结合单位。46.按照权利要求44或45的化合物，其中所述化合物包括2个(或更多)按照权利要求l-43中任一项的氨基酸序列，和任选地，还包括至少一种另外的部分或结合单位。47.按照权利要求46的化合物，其中所述化合物包括2个(或更多)按照权利要求1-43中任一项的针对相同需要的分子或针对所述相同需要的分子不同部分或表位的氨基酸序列。48.按照权利要求46的化合物，其中所述化合物包括2个(或更多)按照权利要求1-43中任一项的针对2种(或更多)不同需要的分子的氨基酸序列。49.按照权利要求47的化合物，其中所述化合物包括2个(或更多)按照权利要求1-43中任一项的针对2种(或更多)不同需要的分子的氨基酸序列，且其中所述化合物还是这样的，以致它在所述第一生物学条件下结合于这2种(或全部)需要的分子。50.按照权利要求47的化合物，其中所述化合物包括2个(或更多)按照权利要求1-43中任一项的针对2种(或更多)不同需要的分子的氨基酸序列，且其中所述化合物还是这样的，以致它在所述第一生物学条件下结合于至少一种(或更多)所述需要的分子；且在所述第二生物学条件下结合于至少一种(或更多)所述需要的分子。51.按照权利要求44-50中任一项的化合物，其中所述化合物中存在的至少一种按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列针对血清蛋白。52.按照权利要求51的化合物，其中所述化合物中存在的至少一种按照权利要求l-43中任一项的氨基酸序列针对选自由血清清蛋白、IgG和转铁蛋白组成的组中的一种血清蛋白。53.按照权利要求44-52中任一项的化合物，其中所述另外的部分或结合单位(如果存在)是治疗部分或结合单位。54.按照权利要求53的化合物，其中所述治疗部分选自由小分子、多核苷酸、多肽或肽组成的组中的至少一种。55.按照权利要求44-54中任一项的化合物，所述化合物是融合蛋白或构建体。56.按照权利要求55的化合物，其中在所述融合蛋白或构建体中，按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列直接与所述至少一种治疗部分相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种治疗部分相连(和/或结合至少一种治疗部分)。57.按照权利要求44-56中任一项的化合物，其中所述治疗部分包括免疫球蛋白序列或其片段。58.按照权利要求57的化合物，其中所述治疗部分包括(单)结构域抗体或纳米抗体。59.多价和多特异性纳米抗体构建体，其包括至少一种按照权利要求1_43中任一项的作为纳米抗体的氨基酸序列和至少一种另外的纳米抗体。60.按照权利要求59的多价和多特异性纳米抗体构建体，其中所述按照权利要求1-43中任一项作为纳米抗体的氨基酸序列直接与所述至少一种另外的纳米抗体相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米抗体相连。61.按照权利要求42的多价和多特异性纳米抗体构建体，其中所述按照权利要求1-43中任一项作为纳米抗体的氨基酸序列通过连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米抗体相连，且其中所述连接体是氨基酸序列。62.核苷酸序列或核酸，其编码按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求44-58中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求59-62中任一项的多价和多特异性纳米抗体。63.宿主或宿主细胞，其包括按照权利要求62的核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求44-58中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求59-62中任一项的多价和多特异性纳米抗体。64.用于制备按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求44-58中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求59-62中任一项的多价和多特异性纳米抗体的方法，所述方法包括在这样的条件下培养或维持按照权利要求63的宿主细胞，在所述条件下，所述宿主细胞产生或表达按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求44-58中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求59-62中任一项的多价和多特异性纳米抗体，且任选地，还包括分离由此产生的按照权利要求1-43中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求44-58中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求59-62中任一项的多价和多特异性纳米抗体。65.针对血清蛋白的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物学条件下，以10—5摩尔/升或更低的解离常数(Kd)和/或以至少1()SM"的结合亲和性(K》结合于所述血清蛋白;禾口b)在第二生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白的解离常数至少10倍的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白。66.按照权利要求65的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以这样的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白，所述解离常数(KD)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白的解离常数的至少100倍。67.按照权利要求65或66的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以这样的解离常数(Kd)結合于所述血清蛋白，所述解离常数(Kd)是所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白的解离常数的至少1000倍。68.按照权利要求65-67中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10—6摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述血清蛋白。69.按照权利要求65-68中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10—7摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述血清蛋白。70.按照权利要求65-69中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下，以10'8摩尔/升或更低的解离常数(KD)结合于所述血清蛋白。71.按照权利要求65-70中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以10—6摩尔/升或更高的解离常数(KD)结合于所述血清蛋白。72.按照权利要求65-71中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以10—5摩尔/升或更高的解离常数(KD)结合于所述血清蛋白。73.按照权利要求65-72中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下，以10—4摩尔/升或更高的解离常数(KD)结合于所述血清蛋白。74.按照权利要求65-73中任一项的氨基酸序列，其中其中所述第一生物学条件包括在第一生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，且所述第二生物学条件包括在第二生理学区室或流体中普遍存在的生理学条件，其中所述第一和第二生理学区室，在正常生理学条件下，由至少一种生物膜诸如细胞膜、细胞小泡或亚细胞区室的壁、或血管壁分开。75.按照权利要求65-74中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括人体或动物体的至少一种细胞外普遍存在的生理学条件，且所述第二生物学条件包括所述细胞内普遍存在的条件。76.按照权利要求65-75中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括所述人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的生理学条件，且所述第二生物学条件包括人体或动物体的至少一种组织或细胞中普遍存在的条件。77.按照权利要求65-76中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的条件，且所述第二生物学条件包括所述人体或动物体细胞的至少一种亚细胞区室中普遍存在的生理学条件。78.按照权利要求65-77中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件包括人体或动物体的血流或淋巴系统中普遍存在的条件，且所述第二生物学条件包括所述人体或动物体细胞的至少一种内体、脂质体、胞饮泡区室或所述细胞中存在的其它小泡中普遍存在的生理学条件。79.按照权利要求65-78中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可以被所述人体或动物体的至少一种细胞吸收(例如，通过内在化、胞饮作用、胞吞、胞转、胞吐、吞噬或吸收或内在化进入所述细胞的类似机制)，其中所述第一生物学条件包括这样的生理学条件，其中所述氨基酸序列在被吸收进入所述细胞之前存在，且所述第二生物学条件包括这样的生理学条件，其中所述氨基酸序列在被吸收进入所述细胞后存在。80.按照权利要求65-79中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的意欲的或血清蛋白，其中所述第一生物学条件包括关于至少一种涉及再循环所述需要的化合物的动物体或人体细胞的细胞外条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述需要的化合物的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。81.按照权利要求65-80中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的意欲的或血清蛋白，其中所述第一生物学条件包括在动物体或人体循环中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述需要的化合物的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。82.按照权利要求65-81中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对进行再循环的血清蛋白，其中所述第一生物学条件包括在动物体或人体循环中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述血清蛋白的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。83.按照权利要求65-82中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对血清清蛋白，其中所述第一生物学条件包括在动物体或人体循环中普遍存在的条件，且其中所述第二生物学条件包括在至少一种涉及再循环所述血清清蛋白的动物体或人体细胞中普遍存在的条件。84.按照权利要求65-74中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.0的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于7.0的生理学pH。85.按照权利要求65-74中任一项或84的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.1的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于6.7的生理学pH。86.按照权利要求65-74，84或85中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.2的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于6.5的生理学pH。87.按照权利要求65-74或84-86中任一项的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是7.2-7.4范围内的生理学pH，且所述第二生物学条件是6.0-6.5范围内的生理学pH。88.按照权利要求65-87中任一项的氨基酸序列，其针对血清蛋白，进行再循环的血清蛋白。89.按照权利要求65-88中任一项的氨基酸序列，其针对人血清蛋白。90.按照权利要求65-89中任一项的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它哺乳动物物种的血清清蛋白。91.按照权利要求65-90中任一项的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它哺乳动物物种的血清清蛋白，所述其它哺乳动物物种选自由下列各项组成的组小鼠、大鼠、兔和灵长类动物。92.按照权利要求65-90中任一项的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它灵长类动物物种的血清清蛋白，所述其它灵长类动物物种选自由下列各项组成的组选自猕猴属的猴(诸如，和具体地，食蟹猴和/或猕猴和狒狒。93.按照权利要求65-91中任一项的氨基酸序列，其能够以这样的方式与所述血清蛋白结合或缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与所述血清蛋白分子结合或缔合时，不(显著)縮短所述血清蛋白分子的半衰期。94.按照权利要求65-92中任一项的氨基酸序列，其能够结合于能够与FcRn结合的血清蛋白，其中所述氨基酸序列能够以这样的方式与所述血清蛋白结合或缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与所述血清蛋白分子结合或缔合时，不(显著)减少或抑制所述血清蛋白分子与FcRn的结合。95.按照权利要求94的氨基酸序列，其能够结合于所述血清蛋白上的氨基酸残基，所述氨基酸残基不涉及所述血清蛋白与FcRn的结合。96.按照权利要求65-95中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组具有免疫球蛋白折叠的蛋白质和多肽；基于除免疫球蛋白外的其它蛋白质支架的分子，所述支架包括但不限于蛋白质A结构域、淀粉酶抑肽、纤连蛋白、脂笼蛋白、CTLA-4、T-细胞受体、设计的锚蛋白重复序列和PDZ结构域,和基于DNA或RNA的结合部分，包括但不限于DNA或RNA适体;或选自所述蛋白质或多肽的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。97.按照权利要求65-96中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组包括四种构架区或基本由其组成的蛋白质和多肽，所述四种构架区由三种互补性决定区彼此分开；或选自所述蛋白质或多肽的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。98.按照权利要求65-97中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组抗体和抗体片段，源自抗体或抗体片段的结合单位和结合分子,和抗体片段，结合单位或结合分子；或选自前述任一项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。99.按照权利要求65-98中任一项的氨基酸序列，其选自由下列各项组成的组重链可变结构域、轻链可变结构域，结构域抗体和适合于作为结构域抗体、单结构域抗体使用的蛋白质和肽和适合于作为单结构域抗体、纳米抗体TM和dAbsTM使用的蛋白质和肽；或选自前述任一项的合适部分、片段、类似物、同源物、直向同源物、变体或衍生物。100.按照权利要求65-99中任一项的氨基酸序列，其包括4-500个氨基酸残基，优选地，5-300个氨基酸残基，更优选地，10-200个氨基酸残基，诸如20-150个氨基酸残基，例如约30，40,50,60,70,80,90，100,110,120，130或140个氨基酸残基。101.按照权利要求65-100中任一项的氨基酸序列，其包括单氨基酸链(具有或不具有二硫键/键合)。102.按照权利要求65-101中任一项的氨基酸序列，其以这样的方式与至少一种灵长类动物物种的血清蛋白结合或缔合，所述方式是当所述氨基酸序列与所述灵长类动物中的所述血清蛋白结合或缔合时，所述氨基酸序列表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少50%。103.按照权利要求102的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白天然血清半衰期的至少60%。104.按照权利要求102或103的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白的天然血清半衰期的至少80%。105.按照权利要求102-104中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出这样的血清半衰期，所述血清半衰期是所述灵长类动物中所述血清蛋白的天然血清半衰期的至少90%。106.按照权利要求65-105中任一项的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出至少4天的血清半衰期。107.按照权利要求106的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出至少7天的血清半衰期。108.按照权利要求106或107的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列表现出至少9天的血清半衰期。109.包括权利要求65-108中任一项的氨基酸序列的化合物。110.按照权利要求109的化合物，其中所述化合物还包括至少一种治疗部分。111.按照权利要求109或110的化合物，其中所述化合物包括至少一种按照权利要求65-101中任一项的氨基酸序列，至少一种按照权利要求1-43针对需要的分子的氨基酸序列(其可以或可以不形成治疗部分)，和任选地，还包括至少一种治疗部分。112.按照权利要求lll的化合物，其中所述化合物还是这样的，以致它在所述第一生物学条件下结合于血清蛋白和所述至少一种需要的分子。113.按照权利要求lll的化合物，其中所述化合物还是这样的，以致它在所述第一生物学条件下结合于所述血清蛋白，且在所述第二生物学条件下结合于所述至少一种需要的分子。114.按照权利要求lll的化合物，其中所述化合物还是这样的，以致它在所述第一生物学条件下结合于所述至少一种需要的分子，且在所述第二生物学条件下结合于所述血清蛋白。115.按照权利要求110-114中任一项的化合物，其中所述治疗部分选自由小分子、多核苷酸、多肽或肽组成的组中的至少一种。116.按照权利要求109-115中任一项的化合物，所述化合物是融合蛋白或构建体。117.按照权利要求116的化合物，其中在所述融合蛋白或构建体中，按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列直接与所述至少一种治疗部分相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种治疗部分相连(和/或结合至少一种治疗部分)。118.按照权利要求110-117中任一项的化合物，其中所述治疗部分包括免疫球蛋白序列或其片段。'119.按照权利要求118的化合物，其中所述治疗部分包括至少一种(单)结构域抗体或纳米抗体。120.多价和多特异性纳米抗体构建体，其包括至少一种按照权利要求65-108中任一项的作为纳米抗体的氨基酸序列和至少一种另外的纳米抗体。121.按照权利要求120的多价和多特异性纳米抗体构建体，其中所述按照权利要求65-108中任一项的作为纳米抗体的氨基酸序列直接与所述至少一种另外的纳米抗体相连，或通过连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米抗体相连。.122.按照权利要求121的多价和多特异性纳米抗体构建体，其中所述按照权利要求65-108中任一项的作为纳米抗体的氨基酸序列通过连接体或间隔区与所述至少一种另外的纳米抗体相连，且其中所述连接体是氨基酸序列。123.核苷酸序列或核酸，其编码按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求109-119中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体构建体。124.宿主或宿主细胞，其包括按照权利要求123的核苷酸序列或核酸，和/或表达(或能够表达)按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求109-119中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体。125.用于制备按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求109-119中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体的方法，所述方法包括在这样的条件下培养或维持按照权利要求124的宿主细胞，在所述条件下，所述宿主细胞产生或表达按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求109-119中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体，且任选地，还包括分离由此产生的按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，或按照权利要求109-119中任一项的化合物的氨基酸序列，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体。126.包括选自由下列各项组成的组中的一种或多种的药物组合物按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，按照权利要求109-119中任一项的化合物，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体，其中所述药物组合物适合于对灵长类动物，以所述灵长类动物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%为间隔进行施用。127.按照权利要求126的药物组合物，还包括至少一种药用载体、稀释剂或赋形剂。128.任何按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，按照权利要求109-119中任一项的化合物，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体用于制备用于对灵长类动物施用的药物的用途，其中以所述灵长类动物中所述血清蛋白天然半衰期的至少50%的间隔施用所述药物。129.按照权利要求128的用途，其中所述灵长类动物是人。130.按照权利要求129的用途，其中以至少7天的间隔施用所述药物。131.治疗方法，包括将任何按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，按照权利要求109-119中任一项的化合物，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体施用于需要所述治疗的灵长类动物，其中所述施用以所述灵长类动物中所述血清蛋白的天然半衰期的至少50%的频率发生。132.按照权利要求131的方法，其中所述灵长类动物是人。133.按照权利要求132的方法，其中以至少7天的间隔施用所述药物。134.用于延长或增加治疗剂血清半衰期的方法，所述方法包括使所述治疗剂与任何按照权利要求65-108中任一项的氨基酸序列，按照权利要求109-119中任一项的化合物，或权利要求120-122中任一项的多价和多特异性纳米抗体相接触，以使得所述治疗剂与所述氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米抗体结合或缔合。135.权利要求134的方法，其中所述治疗剂是生物学治疗剂。136.权利要求135的方法，其中所述生物学治疗剂是肽或多肽，且其中接触治疗剂的步骤包括通过使所述肽或多肽与所述氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米抗体相连接，而制备融合蛋白。137.权利要求134-136中任一项的方法，还包括在治疗剂与所述氨基酸序列、化合物、或多价和多特异性纳米抗体结合或缔合后，向灵长类动物施用所述治疗剂。138.权利要求137的方法，其中所述治疗剂在所述灵长类动物中的血清半衰期是治疗剂本身半衰期的至少1.5倍。139.权利要求138的方法，其中所述治疗剂在灵长类动物中的血清半衰期与治疗剂本身半衰期相比，增加至少l小时。140.针对需要的分子的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第一生物学条件下，以l(T6摩尔/升或更高的解离率结合于所述需要的分子；和b)在第二生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下结合于所述需要的分子的解离率至少2倍的解离率结合于所述需要的分子。141.按照权利要求140的氨基酸序列，其中所述解离率是5倍更多。142.按照权利要求140的氨基酸序列，其中所述解离率是10倍更多。143.按照权利要求140的氨基酸序列，其中所述解离率是IOO倍更多。144.按照权利要求140的氨基酸序列，其中所述解离率是1000倍更多。145.按照权利要求140的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下不结合于所述需要的分子。146.针对需要的分子的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列a)在第二生物学条件下，以10—6摩尔/升或更高的解离率结合于所述需要的分子；和b)在第一生物学条件下，以所述氨基酸序列在所述第二生物学条件下结合于需要的分子的解离率的至少2倍的解离率结合于所述需要的分子。147.按照权利要求146的氨基酸序列，其中所述解离率是5倍更多。148.按照权利要求146的氨基酸序列，其中所述解离率是10倍更多。149.按照权利要求146的氨基酸序列，其中所述解离率是100倍更多。150.按照权利要求146的氨基酸序列，其中所述解离率是1000倍更多。151.按照权利要求146的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列在所述第一生物学条件下不结合于所述需要的分子。152.按照前述权利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件和所述第二生物学条件关于下列因素中任一项、任两项、任三项或基本全部而不同pH、离子强度、和蛋白酶依赖性。153.按照前述权利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.0的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于7.0的生理学pH。154.按照前述权利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.1的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于6.0的生理学pH。155.按照前述权利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是高于7.2的生理学pH，且所述第二生物学条件是低于5.7的生理学pH。156.按照前述权利要求140-151的氨基酸序列，其中所述第一生物学条件是7.2-7.4范围内的生理学pH，且所述第二生物学条件是5.0-6.0范围内，例如5.5的生理学pH。157.按照前述权利要求140-156的氨基酸序列，其针对血清蛋白，具体地，人血清蛋白。158.按照前述权利要求140-156的氨基酸序列，其针对进行再循环的血清蛋白，具体地，进行再循环的人血清蛋白。159.按照前述权利要求140-158的氨基酸序列，其针对人血清清蛋白和针对来自至少一种其它哺乳动物物种的血清清蛋白。160.按照前述权利要求140-159的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列针对a)人血清清蛋白和b)针对一个耙蛋白或相同序列的多个靶蛋白或在与多于一个靶蛋白结合的情形中的不同序列的多个靶蛋白是二价或多价的。161.权利要求160的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列是纳米抗体或dAbs。全文摘要本发明涉及结合于血清蛋白诸如血清清蛋白的氨基酸序列；涉及包括所述氨基酸序列或基本由其组成的化合物、蛋白质和多肽；涉及编码所述氨基酸序列、蛋白质或多肽的核酸；涉及包括所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的组合物，且具体地药物组合物；和涉及所述氨基酸序列、蛋白质和多肽的应用，本发明所述的结合基本在不同生理学状况下是条件性的，例如在酸性条件下和pH-中性条件下是不同的。文档编号C07K16/18GK101589057SQ200780043274公开日2009年11月25日申请日期2007年10月11日优先权日2006年10月11日发明者亨德里克斯·雷内瑞斯·雅各布斯·马托伊斯·霍根博姆,伊格纳茨·约瑟夫·伊莎贝拉·拉斯特斯申请人:埃博灵克斯股份有限公司