专利名称：一种连翘酯苷a制备方法
技术领域：
本发明涉及从药用植物中提取有效成分的方法，具体是一种连翘酯苷A的制备方法。
背景技术：
连翘为木犀科连翘落叶灌木，果实入药，具有清热解毒、散结消肿、抗菌及抑制真菌等 功能。连翘酯苷A为其主要成分，它不仅对金黄色葡萄球菌等十一种致病菌有极强的抑制作 用，而且具有抑制磷酸二酯酶及抑制真菌作用。最近我们研究又发现它对活性氧具有很强的 抑制作用。鉴于它具有多种多样的生物活性功能，连翘酯苷A在医药和食品领域作为天然药 物、天然防腐剂及天然抗氧化剂有广泛的应用前景。至目前为止，尚未见有关从药用植物连 翘中大量提取高纯度连翘酯苷A的报道，基于以上原因，本发明对连翘酯苷A的提取工艺进行 了详细研究。当前，连翘酯苷A的提取分离方法，国内外均有文献报道，采用的方法为直接用水提 取或水提物再用有机溶剂提取，提取物经硅胶制备薄层析或柱层析分离得到产物。如日本学 者Sansel (Chem. Pharm. Bull, 1982, 32(12), 4548-4553)从连翘中提取连翘酯苷A采用的方法是 首先用水提取连翘，水提物再用甲醇提取，甲醇提取物用硅胶柱层析分离，以不同比例的甲 醇、氯仿进行反复梯度淋洗，分离得连翘酯苷A产物。梁文藻等(药物分析杂志，1986， 6 (5)， 263-266)从连翘中提取连翘酯苷A产物是采用化学分离方法，然后用制备性薄层板进行纯化， 最后得到纯品。上述提取方法效率低、大量使用了有毒有机溶剂，并且所用分离材料也不易 再生重复使用，因而不能移植放大为工业化生产。2006年我国学者连续申请了 "从连翘提取 物中纯化连翘酯苷A"的三项中国专利(200610027024.1、 200610027036.4、 200610027037.9)， 该方法适用于小量样品的制备，使用的分离材料昂贵。2004年本研究小组获得了有关利用大 孔吸附树脂分离、纯化连翘酯苷的专利(ZL01122779.6)，该专利适合于工业化大量制备连 翘酯苷，但所得产物中连翘酯苷的含量仅可达60%左右。因此，在原有专利的研究基础上， 本发明采用两次不同柱层析填料的柱层析，冷冻干燥，获得了纯度为85% 99%的连翘酯苷八口广叩o发明内容本发明的目的是提供一种材料便宜，工艺简单，回收率高，纯度高，适合工业化生产的 连翘酯苷A的制备方法。本发明提供的一种连翘酯苷A的制备方法，包括如下步骤-(1) 提取取干燥连翘壳或叶，用是原材料量20 40倍0 70%的乙醇水溶液提取两次， 每次提取30 90 min，提取温度60 90°C，将两次所得提取液合并，过滤，滤液6(TC减压 浓縮至比重为1. 05 1. 10的水提液；(2) 分离上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1:1 5， 先用水淋洗2 4个柱体积至淋洗呈棕黄色，再用20% 60%乙醇淋洗3~5个柱体积，收集醇淋洗液，60'C减压浓縮至比重为1. 05 1. 15得初步分离浓縮液；(3) 精制将上述初步分离浓縮液用反相层析材料柱层析，上样量为0.5 2:1，先用0% 10%乙醇淋洗2 4个柱体积至淋洗呈淡黄色，再用20% 50%乙醇淋洗2~5个柱体积，收集 醇淋洗液，6CTC减压浓縮至比重为1.05 1.2得精制浓縮液；(4) 冷冻干燥上述精制浓縮液经冷冻干燥得连翘酯苷A产品。用HPLC测定所得产品的连翘酯苷A的含量，连翘酯苷A含量可达85X 99X。步骤(2)中所述柱材料选用的大孔吸附树脂可以是AB-8或H101;氢键键合型柱层析材料可以是聚酰胺。初步分离可有效去除大量杂质，为下一步柱层析得到高纯度产品奠定基础。 步骤(3)中所述柱材料可选用反相层析材料MDS; MDS可再生重复利用，如用95%乙醇淋洗柱体即可使材料再生。步骤(4)中采用冷冻干燥可防止连翘酯苷A受热变化。含量测定方法用HPLC测定(按外标法测定)。HPLC色谱条件为色谱柱为ODS柱；流动 相为甲醇(含l。/。四氢呋喃):水(含0.01mol/L磷酸二氢钾，用磷酸调pH至3.2"36.5:63.5;流速 lml/min;检测波长332nm;柱温25°C。本发明具有如下优点(1) 本发明精制工艺简单，提取效率高。按连翘酯苷A不同用途对纯度的要求，纯度可 达85% 99%，提取率可达0. 5% 2%。(2) 本发明使用溶剂安全无毒，价格低廉可回收再用，对环境无污染；(3) 本发明使用分离精制材料便宜，且易于洗脱再生，可多次利用；总之，本发明连翘酯苷A的制备方法，不仅生产成本低、工艺简单、无污染，而且所得 连翘酯苷A的收率高、纯度高，适合工业化生产。
具体实施例方式
实施例7取400g干燥连翘壳，用8Kg5(^的乙醇溶液提取两次，提取温度60。C，提取时间60min， 合并提取液，过滤，滤液6(TC减压浓縮至约比重为1.08的水提液；水提液上聚酰胺柱分离 (径高比为1:15)，上样量为1:5。先用去离子水淋洗至流出液为棕黄色时，改用30%乙醇淋洗3倍柱体积，收集30%乙醇淋洗液，减压浓縮至比重为1.08得初步分离浓縮液；初步分 离浓縮液上MDS柱精制(径高比为1:15),先用去离子水淋洗至淋洗液呈淡黄色时，再用20 %乙醇淋洗4个柱体积，收集20%乙醇的淋洗液。薄层层析检测(展开剂为丁酮乙酸乙酯 甲酸水苯=4:3:1:1:2的上层液)，合并含有单一斑点的淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为 1.10，冷冻干燥即得浅黄色连翘酯苷A产物。以连翘酯苷A为对照品，利用HPLC测定连翘 酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为99%，收率为0.5%。 实施例2取400g干燥连翘壳，用15Kg去离子水提取两次，提取温度8CTC，提取时间45min，合 并提取液，过滤，滤液6(TC减压浓縮至约比重为1.05的水提液；水提液上D101柱分离(径 高比为1:15)，上样量为1:4。先用去离子水淋洗至流出液为棕黄色时，改用20%乙醇淋洗4 倍柱体积，收集20%乙醇淋洗液，减压浓縮至比重为1.05得初步分离浓縮液；初步分离浓 縮液上MDS柱精制(径高比为1:12)，先用去离子水淋洗至淋洗液呈淡黄色时，再用30%乙 醇淋洗4个柱体积，收集30%乙醇的淋洗液。薄层层析检测(展开剂为丁酮乙酸乙酯甲酸 水:苯=4:3:1:1:2的上层液)，合并含有连翘酯苷A斑点的淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为 1.15，冷冻干燥即得浅黄色连翘酯苷A产物。以连翘酯苷A为对照品，利用HPLC测定连翘 酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为90.6。/。，收率为1.5%。实施例3取lKg干燥连翘壳，用35Kg40。/。的乙醇溶液提取两次，提取温度80'C，提取时间80min， 合并提取液，过滤，滤液6CTC减压浓縮至约比重为1. 10的水提液；水提液上AB-8柱分离(径 高比为1:15)，上样量为1:4。先用去离子水淋洗至流出液为棕黄色时，改用30%乙醇淋洗4 倍柱体积，收集30%乙醇淋洗液，减压浓縮至比重为1.06得初步分离浓縮液；初步分离浓 縮液上MDS柱精制(径高比为1:12)，先用去离子水淋洗至淋洗液呈淡黄色时，再用30%乙 醇淋洗4个柱体积，收集30%乙醇的淋洗液。薄层层析检测(展开剂为丁酮乙酸乙酯甲酸 水:苯=4:3:1:1:2的上层液)，合并含有连翘酯苷A斑点的淋洗液，6(TC减压浓縮至比重为 1.18，冷冻干燥即得浅黄色连翘酯苷A产物。以连翘酯苷A为对照品，利用HPLC测定连翘 酯苷A的含量，连翘酯苷A的纯度为87.1%，收率为1.8%。
权利要求
1.一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于包括如下步骤(1)提取取干燥连翘壳或叶，用是原材料量20～40倍0～70％的乙醇水溶液提取两次，每次提取30～90min，提取温度60～90℃，将两次所得提取液合并，过滤，滤液60℃减压浓缩至比重为1.05～1.10的水提液；(2)分离上述水提液用大孔吸附树脂或氢键键合型柱层析材料柱层析，上样量为1∶1～5，先用水淋洗2～4个柱体积至淋洗呈棕黄色，再用20％～60％乙醇淋洗3～5个柱体积，收集醇淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.15得初步分离浓缩液；(3)精制将上述初步分离浓缩液用反相层析材料柱层析，上样量为0.5～2∶1，先用0％～10％乙醇淋洗2～4个柱体积至淋洗呈淡黄色，再用20％～50％乙醇淋洗2～5个柱体积，收集醇淋洗液，60℃减压浓缩至比重为1.05～1.2得精制浓缩液；(4)冷冻干燥上述精制浓缩液经冷冻干燥得连翘酯苷A产品。
2. 如权利要求1所述的一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于步骤(2)中所述大孔吸附树 脂是AB-8或H101。
3. 如权利要求1所述的一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于步骤(2)中所述氢键键合型 柱层析材料是聚酰胺。
4. 如权利要求1所述的一种连翘酯苷A制备方法，其特征在于步骤(3)中所述柱材料是反 相层析材料MDS。
全文摘要
一种连翘酯苷A制备方法，采用连翘壳为原料，用去离子水或含水醇作为提取溶剂，依次通过初步分离柱和精制柱，用去离子水和含水醇作为洗脱剂，冷冻干燥得连翘酯苷A，含量可达85％～99％。本发明所用材料便宜，溶剂安全无毒，工艺简单；对连翘的利用率高，提取率为0.5％～2％；成本低，适合工业化生产。
文档编号C07H13/00GK101215302SQ200810054428
公开日2008年7月9日 申请日期2008年1月8日 优先权日2008年1月8日
发明者张立伟, 王引珍, 霍丽丽 申请人:山西大学