专利名称：香鳞毛蕨苷e及其分离方法
技术领域：
本发明涉及一种从香鳞毛蕨中提取的新的医用化合物及其分离提取方法。
背景技术：
香鳞毛蕨D/^/^/7's资份ag/wis(L.)Sc/^T为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，落叶
多年生草本，生于高寒地区的滑石坡、森林中的碎石坡上和火山周围的岩浆缝 隙中(Fig.l-1)。香鳞毛蕨在我国分布广泛，黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古和河 北地区均有分布，在黑龙江省香鳞毛蕨主要分布于五大连池、塔河县白卡兽山、 呼中大白山的高山地带及小兴安岭北部地区。原植物香鳞毛蕨为鳞毛蕨科 (Dryopterideceae)植物，香鳞毛蕨D/yo/^Ws教纷flg/ww^JSc/iW/植株高20 30cm，根状茎粗短，直立或斜生，上部密被褐色三角状披针形鳞片。鳞片边缘疏生 不整齐的齿，叶簇生。叶柄长5 8cm，连同叶轴或羽轴密被卵形至披针形淡黄色 鳞片，有光泽。叶片长12 18cm，宽2 4cm，长披针形或倒披针形，中部以上渐尖 或短縮为钝尖，向下渐狭至叶柄顶部，草质，二回羽状裂。羽片25 35对，互生或少 数近对生，宽披针型，长1.5 2cm，宽0.8 lcm，先端钝，基部楔形，小羽片5 7对, 矩圆形，生于侧脉中下部或基部，囊群盖圆肾形，边缘啮蚀状，被多数腺体，膜质， 灰白色，宿存。孢子椭圆形，具不规则的小瘤。植物略具香味，故有香鳞毛蕨之称。
发明内容
本发明的目的是提供一种有多种医疗用途的新化合物及其分离方法。
上述的目的通过以下的技术方案实现
香鳞毛蕨苷E，外观为白色粉末，溶于甲醇，分子式为C17H2409,分子结 构式为<formula>formula see original document page 5</formula>所述的香鱗毛蕨苷E的分离方法:
取香鳞毛蕨干粉，经水提，减压浓缩至膏状，将浸膏溶解，经大孔吸 附树脂柱色谱后，依次分别用水和30%乙醇洗脱，将30%乙醇组分回收，干 燥成干粉；
用溶剂溶解至膏状，湿法上硅胶色谱柱，以氯仿甲醇梯度洗脱，经 回收，点薄层色谱板合并，其中将氯仿甲醇重量比为3: 1,洗脱部分组分 X (33-35)回收浓缩，干燥成干粉；
湿法装入硅胶色谱柱，用洗脱液CHCI3-MeOH-H20洗脱，洗脱液中 CHCI3-MeOH-H20的体积比为5: 1: 0.1,洗脱得到组分Xl、组分X2、 组分X3;
将其中组分X3部分回收，干燥成干粉，装入ODS色谱柱，用洗脱 剂30%甲醇洗脱，得到组分X3-2和组分X3-5部分，将其中组分X3-5 部分经HPLC，洗脱液为35%甲醇，得到香鳞毛蕨苷E。
上述的香鳞毛蕨苷E的分离方法，所述的以氯仿甲醇梯度洗脱过程 中，氯仿与甲醇比例为12: 1、 9: 1、 6: 1、 3: l以及l: 1。 这个技术方案有以下有益效果
1.经临床检验，本发明提取的化合物香鳞毛蕨苷E具有显著的抗肿瘤活性，对多种人癌细胞具有直接杀伤作用并对细胞增殖有抑制作用。
并可以通过促进T、 B淋巴细胞的增殖活化，达到对免疫紊乱的调节。
2. 其他功能正在实验中，前景看好。
3. 经临床检验，香鳞毛蕨还能治疗各种皮肤病和关节炎，如牛皮癣、 皮疹、皮炎、脚气和干癣等。特别对关节炎和牛皮癣的治疗效果非常 显著。试用该产品的黑龙江省北部的居民把香鳞毛蕨视为"皮肤病的 克星"，用香鳞毛蕨的水煎液涂擦患处以治疗上述疾病。由此攻克了世 界上治疗这些疑难皮肤病的难题。
4. 经检测，用本发明产品水煎液洗头，能够达到去头屑止痒的目的，有治
病和美容的双重功效，且无任何毒副作用。
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图1本发明提取与分离具体技术路线。
图2为本发明中的细胞增殖抑制活性测试方法流程图。
本发明的
具体实施例方式
实施例l:
香鳞毛蕨苷E,白色粉末，可溶于甲醇，分子式为C17H2409。<formula>formula see original document page 6</formula>
实施例2:
香鳞毛蕨苷E的分离方法，取香鳞毛蕨干粉，经水提，减压浓縮至膏状。 将浸膏溶解至适当浓度，进行AB-8大孔吸附树脂柱色谱，依次分别用水、30°/。乙醇、60°/。乙醇和95%乙醇溶液洗脱，得到水组分，30°/。乙醇组分，60% 乙醇组分和95%乙醇组分。将其中30"/。乙醇组分回收，浓縮干燥成至干粉。 经实践证明，其中30%乙醇洗脱的组分效果最好。
用溶剂溶解至膏状，湿法上硅胶色谱柱，分别用氯仿甲醇洗脱，氯仿 甲醇的体积比例可为12: 1、 9: 1、 6: 1、 3: 1、 1: 1经回收，点薄层色谱 板合并，其中用3: l洗脱部分为组分VI (3-7)、组分VII (10-1)、组分 VIII (21-24)、组分IX (25-32)、组分X (33-35)共5部分。将组分X (33-35)部分回收浓縮，干燥成干粉。湿法装入硅胶色谱柱，用体积比例为 5: 1: 0.1的CHCIrMeOH-H20洗脱液洗脱，得到组分XI、组分X2、 组分X3。将其中组分X3部分回收，干燥成干粉。
装入ODS色谱柱，用30%甲醇作为洗脱液洗脱，得到组分X3-2和 组分X3-5部分。组分X3-5部分经HPLC，洗脱液为35%甲醇，得到香 鳞毛蕨苷E。 免疫活性测试方法如下
无菌分离小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞,与待测药物预孵1小时，刺激剂继续培
养,总计培养72小时后收获细胞，进行MTT染色，以酶标仪进行测定。
无菌摘取小鼠脾脏,除去血液和脂肪在细胞筛网上碾磨，并用RPMI1640完全 培养基冲洗，冲洗液并入试管中，离心10min( 1500r/min，)，吸去上清液，调 整细胞密度2. 4. 6. 8. 10. 20和30x107 mL。调整细胞密度为6xl07mL，经台盼 蓝染色确定活细胞数大于95%后，分别加入100L的细胞悬液和10pL的待测药 物于96孔细胞培养板中，混匀后放入5%C02、 37。C培养箱中预孵60min，再加入 10jiL的ConA(终浓度为10照/mL),继续培养72h，培养结束后，每孔加入20pL 的MTT染色液，反应4h后去上清，加入150jiL的DM50，震荡溶解并在酶标仪 上570nm处检测。
权利要求
1.一种香鳞毛蕨苷E，其特征是外观为白色粉末，溶于甲醇，分子式为C17H24O9，分子结构式为
2. —种权利要求1所述的香鳞毛蕨苷E的分离方法，其特征是取香鳞毛蕨干粉，经水提，减压浓縮至膏状，将浸膏溶解，经大孔吸 附树脂柱色谱后，依次分别用水和30%乙醇洗脱，将30%乙醇组分回收，干 燥成干粉；用溶剂溶解至膏状，湿法上硅胶色谱柱，以氯仿甲醇梯度洗脱，经 回收，点薄层色谱板合并，其中将氯仿甲醇重量比为3: 1，洗脱部分组分: X (33-35)回收浓縮，干燥成干粉；湿法装入硅胶色谱柱，用洗脱液CHCI3-MeOH-H20洗脱，洗脱液中 CHCl3-MeOH-H20的体积比为5: 1: 0.1，洗脱得到组分Xl、组分X2、 组分X3;将其中组分X3部分回收，干燥成干粉，装入ODS色谱柱，用洗 脱剂30%甲醇洗脱，得到组分X3-2和组分X3-5部分，将其中组分X 3-5部分经HPLC，洗脱液为35%甲醇，得到香鳞毛蕨苷E。
3.根据权利要求2所述的香鳞毛蕨苷E的分离方法，其特征是:所述的以氯仿:甲醇梯度洗脱过程中，氯仿与甲醇比例为12: 1、 9: 1、 6: 1、 3: 1以及1:
全文摘要
香鳞毛蕨苷E及其分离方法，香鳞毛蕨Dryopteris组份agrans(L.)Schott为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物，香鳞毛蕨苷E外观为白色粉末，溶于甲醇，分子式为C<sub>17</sub>H<sub>24</sub>O<sub>9</sub>，分子结构式如图本产品有多种医疗用途。
文档编号C07H15/00GK101302238SQ20081006410
公开日2008年11月12日 申请日期2008年3月12日 优先权日2008年3月12日
发明者匡海学, 宋庆宇, 张彦龙 申请人:黑龙江大学