专利名称：从植物中提制科罗索酸的方法
技术领域：
本发明涉及一种从植物中提取药用活性成分的绿色化学生产方法，更具体涉及一种从植 物中提制科罗索酸的可工业化生产的方法。
技术背景科罗索酸(Corosolic acid)属于五环三萜酸类化合物，为熊果酸(Ursolic acid)的衍生 物。与熊果酸相比，科罗索酸在2位碳上多了一个a羟基，通常又称2oc-羟基熊果酸。由于科罗索酸结构复杂，人工合成困难，国内外均自中草药或植物中提取。科罗索酸纯 品为白色结晶性粉末，熔点242 244"C，无臭，无味，可溶于热乙醇等极性有机溶剂，微溶 于氯仿、乙醚等脂溶性溶剂，不溶于石油醚和水中。<formula>formula see original document page 3</formula>科罗索酸(Corosolic acid)的化学结构示意图国内已有多个学者对植物中三萜酸及其科罗索酸进行了分离纯化，但国外尚未见报道。 枇杷叶富含科罗索酸、熊果酸等三萜酸类物质，性微寒，味苦辛，止咳平喘，清肺和胃，降 气化痰，收载于历版中国药典。枇杷叶三萜酸类物质具有消炎平喘、增强免疫、降糖、抗癌 等临床药理作用，是治疗急性黄胆型肝炎和慢性病毒性肝炎的理想药物，且毒副作用小。中国专利申请200710009556. 7，陈剑锋等报道了从枇杷叶中分离制备科罗索酸的方法， 其做法是采用80 100%亲水性有机溶剂水溶液，于50 80。C提取总三萜酸，在碱性条件下， 趁热过滤除杂和活性炭脱色，枇杷叶提取液采用大孔吸附树脂富集纯化科罗索酸，但该方法 生产步骤繁琐、活性炭脱色过程科罗索酸损失率较大，枇杷叶提取液的粘度和水溶性杂质含 量很高，严重限制了大孔吸附树脂对科罗索酸的吸附量和选择性，导致科罗索酸总收率较小、 生产总成本剧高不下、制备的科罗索酸纯度偏低。陈龙胜等仅考察了溶剂萃取条件对科罗索酸提取率的影响(陈龙胜等，林产化学与工业，2006， 26 (3)， 110)，但科罗索酸的分离纯化工艺尚未成熟。大叶紫薇提取物具有降糖、降脂、抗肿瘤等功能，其降血糖的主要药效成分为科罗索酸。纵伟等采用2次制备薄层层析分离法，从大叶紫薇叶中提取了 corosolic acid，并且采用HPLC 法对大叶紫薇叶中corosolicacid含量进行了测定(纵伟等，热带作物学报，2006， 27 (2)， 103)。中国专利ZL 200410064929.7，孙宏斌等报道了科罗索酸的化学合成制备方法。中药溪黄草为民间习用草药，用于治疗湿热泻痢、跌打瘀肿、急性黄疸型肝炎、急性胆 囊炎等疾病。其主要成分有溪黄草甲素(rabdoserrin A)，溪黄草乙素(rabdoserrin B) ， 2 a-羟基熊果酸，熊果酸等。吴剑峰等采用HPLC法测定GAP基地不同施肥区域和不同采收期 溪黄草药材中2a-羟基熊果酸的含量变化，(吴剑峰等，药学进展，2004, 28 (7)， 318;吴 剑峰等，中草药，2004， 35 (1)， 81)。发明内容本发明的目的是提供一种从植物中提制科罗索酸的方法。该方法不仅制备工艺简单、分 离纯化效率高、容易工业化生产，而且制备的科罗索酸纯度高、生产成本低，适合工业化大规 模生产。本发明的植物中提制科罗索酸的方法以含有科罗索酸的植物为原料，采用5 10倍植 物干重的纯水或自来水煮沸2次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液经真空浓縮成浸膏； 滤渣加入5 10倍植物干重的30 60%乙醇或甲醇水溶液，加入溶液重量的0. 5 1. 0%的NaOH 或KOH调节溶液pH值，于30 48。C条件下提取1 3次，每次1 3小时，合并提取液，过 滤，滤液调节pH值至4.5 7.5静置陈化，固液分离，沉淀物即为总三萜酸粗品；于50 75 。C条件下，用不低于3倍重量的85 100%乙醇或甲醇水溶液充分溶解总三萜酸粗品，固液分 离去除不溶物，调整滤液体系中科罗索酸终浓度达到0. 5 2. 5 g/L、乙醇或甲醇终浓度为M 40°/。、 Na0H或K0H终浓度为0.2 0.5%后，滤液经大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用不 少于3倍树脂重量的纯水或自来水洗去未被吸附的总三萜酸残留料液和不少于2倍树脂重量 的40 50%乙醇或甲醇水溶液洗去吸附力较科罗索酸弱的杂质，再用不少于3倍树脂重量的 60 70%乙醇或甲醇水溶液，在中性条件下以0.5 1.5倍树脂重量/小时的流速洗脱科罗索 酸，调整洗脱液体系中乙醇或甲醇终浓度《5(m和pH值《7.0，缓慢冷却至开始析出科罗索酸 结晶、4 10'C冷藏、静置养晶、固液分离沉淀物即为科罗索酸。本发明的显著优点是一、与已有的文献相比，本发明根据科罗索酸的水不溶性特点，巧妙地采用了水煮除杂 的方式，可预先除去大部分的蛋白质、多糖、酚类物质和无机盐等水溶性杂质，却不影响科 罗索酸的回收率，这有助于降低后续总三萜酸的碱性有机溶剂提取液的粘度和水溶性杂质含 量，可大幅度提高大孔吸附树脂对科罗索酸的饱和吸附量和选择性，制备的科罗索酸纯度更 高、生产成本更低。二、 与已有的文献相比较，本发明创新性地利用了科罗索酸等三萜酸在强碱性条件下可 溶于30 60%乙醇或甲醇水溶液、而在pH值《7. 5条件下却不溶于30 60%乙醇或甲醇水溶 液的特点，不采用工艺繁琐和收率较低的层析分离技术和活性炭脱色技术，而直接采用酸性 条件下沉淀分离方式去除杂质，获得高纯度的总三萜酸粗品，具有较大的推广意义。三、 与已有的文献的采用80 100%亲水性有机溶剂水溶液于50 8(TC条件下提取时枇杷 叶提取液的粘度和水溶性杂质含量很高相比，本发明独创性地应用了低温时30，60%乙醇或 甲醇水溶液对蛋白质、多糖、精油、无机盐等杂质的溶解度较小，可以大幅度降低枇杷叶提 取液的粘度和水溶性杂质含量，以及30 60%乙醇或甲醇水溶液在强碱性条件下对枇杷叶中 科罗索酸的溶解度可高达2.0 g/L，远远大于已有文献的采用80 100%亲水性有机溶剂水溶 液的0.5 g/L溶解度水平的特点，采用碱性的30 60%乙醇或甲醇水溶液从植物中提取科罗 索酸，更利于后续进一步的分离纯化获得高纯度科罗索酸、生产成本更低，具有较大的推广 性。四、 本发明充分利用大孔吸附树脂对科罗索酸的吸附力与对蛋白质、多糖、酚类物质、 无机盐等杂质的吸附力的不同，以及在强碱性的30 60%乙醇或甲醇水溶液中科罗索酸成分 与蛋白质、多糖、无机盐等杂质的溶解度差异，真正达到科罗索酸与杂质的高效分离。五、 本发明组合采用水溶性物质的水煮除杂、总三萜酸的碱性有机溶剂提取和科罗索酸 的大孔吸附树脂富集纯化等一系列分离纯化集成技术，从植物中制备高纯度科罗索酸，具有 理论新颖、技术合理、操作安全、工艺简便、经济可行、环境友好等优点。
具体实施方式
含有科罗索酸的植物为原料，采用5 10倍植物干重的纯水或自来水煮沸2次，每次l 小时，合并提取液，过滤，滤液经真空浓縮成浸膏；滤渣加入5 10倍植物干重的30 60% 乙醇或甲醇水溶液，加入溶液重量的0.5 1.0。/。的NaOH或KOH调节溶液pH值，于30 48°C 条件下提取1 3次，每次1 3小时，合并提取液，过滤，滤液调节pH值至4. 5 7. 5静置 陈化，固液分离沉淀物即为总三萜酸粗品；于50 75。C条件下，用不低于3倍重量的85 100% 乙醇或甲醇水溶液充分溶解总三萜酸粗品，固液分离去除不溶物，调整滤液体系中科罗索酸 终浓度达到0. 5 2. 5 g/L、乙醇或甲醇终浓度为30 40%、 NaOH或KOH终浓度为0. 2 0. 5% 后，滤液经大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用不少于3倍树脂重量的纯水或自来水洗 去未被吸附的总三萜酸残留料液和不少于2倍树脂重量的40 50%乙醇或甲醇水溶液洗去吸 附力较科罗索酸弱的杂质，再用不少于3倍树脂重量的60 70%乙醇或甲醇水溶液，在中性 条件下以0. 5 1. 5倍树脂重量/小时的流速洗脱科罗索酸，调整洗脱液体系中乙醇或甲醇终 浓度《50。/。和pH值《7.0，缓慢冷却至开始析出科罗索酸结晶、4 1(TC冷藏、静置养晶、固液分离沉淀物即为科罗索酸。上述总三萜酸是熊果酸类化合物或齐墩果酸类化合物中的一种或几种化合物。 上述含有科罗索酸的植物是枇杷叶、大叶紫薇叶、溪黄草、番石榴叶的一种或几种。 上述浸膏可用于进一步制备具有化痰、止咳、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服药剂。本发明理化参数测定方法如下总三萜酸、科罗索酸、熊果酸、山楂酸和齐墩果酸的含量采用高效液相色谱仪测定。测 定条件Agilent 1100型高效液相色谱仪(DAD 二极管阵列检测器)，Waters Nova-Pak ds色 谱柱(①3. 9X150 mm， 5 Mm)，流动相为甲醇-1%醋酸水溶液(88:12) (V/V)，流速1. 0 mL/min， 柱温34t:，进样量20 ixL，检测波长分别为220 nm。熊果酸和齐墩果酸标准品(纯度99%， 中国药品生物制品检定所)，科罗索酸和山楂酸标准品(纯度95%，美国Sigma公司)。本发明制备方法的实施例陈述如下实施例1将鲜枇杷叶水洗、干燥(风干、烘干或晒干均可)、粉碎、过20 30目筛得粉末，将4.9 kg枇杷叶粉末放入提取罐中，采用10倍枇杷叶干重的纯水煮沸2次，每次1小时，合并提 取液，过滤，滤液经真空浓縮成浸膏；滤渣加入10倍枇杷叶干重的30%乙醇水溶液，加入溶 液重量的1.0。/。的NaOH调节溶液pH值，于48。C条件下提取3小时，过滤，滤液调节pH值至 7.5静置陈化，固液分离，沉淀物即为总三萜酸粗品，其中科罗索酸的提取率可达96.3%;于 65。C条件下，用3倍重量的95%乙醇溶液充分溶解总三萜酸粗品，固液分离去除不溶物，调 整滤液体系中科罗索酸终浓度达到2.0 g/L、乙醇终浓度为35%、 NaOH终浓度为0.3°/。后，滤 液经HZ818大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用4倍树脂体积量的纯水洗去未被吸附的 总三萜酸残留料液和3倍树脂体积量的50%乙醇水溶液洗去吸附力较科罗索酸弱的杂质，再 用4倍树脂体积量的70%乙醇水溶液、在中性条件下以1倍树脂体积量/小时的流速洗脱^f罗 索酸；用稀盐酸水溶液调整洗脱液体系中乙醇浓度达42y。和pH值为6.0，缓慢冷却至开始析 出科罗索酸结晶、4 1(TC冷藏、静置养晶、过滤，固液分离沉淀物即为科罗索酸。 实施例2将5.3 kg大叶紫薇叶粉末放入提取罐中，加入5倍大叶紫薇叶干重的自来水煮沸2次， 每次1小时，合并提取液，过滤，滤液经真空浓縮成浸膏；滤渣加入10倍大叶紫薇叶干重的 60%甲醇水溶液，加入溶液重量的0. 5%的KOH调节溶液pH值，于3(TC条件下提取3次，每次 l小时，合并提取液，过滤，滤液调节pH值至4.5静置陈化，固液分离，沉淀物即为总三萜 酸粗品，其中科罗索酸的提取率可达91.9%;于5(TC条件下，用6倍重量的100%甲醇充分溶解总三萜酸粗品，固液分离去除不溶物，调整滤液体系中科罗索酸终浓度达到2.5 g/L、甲 醇终浓度为40%、 K0H终浓度为0.2%后，滤液经HZ801大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和， 先用3倍树脂体积量的自来水洗去未被吸附的总三萜酸残留料液和4倍树脂体积量的45%甲 醇水溶液洗去吸附力较科罗索酸弱的杂质，再用3倍树脂体积量的60%甲醇水溶液，在中性 条件下以0. 5倍树脂体积量/小时的流速洗脱科罗索酸；用稀盐酸水溶液调整洗脱液体系中甲 醇浓度达38y。和pH值为5.0，缓慢冷却至开始析出科罗索酸结晶、4 1(TC冷藏、静置养晶、 过滤，固液分离沉淀物即为科罗索酸。 实施例3将6.1kg溪黄草粉末放入提取罐中，加入8倍溪黄草干重的自来水煮沸2次，每次l小 时，合并提取液，过滤，滤液经真空浓缩成浸膏；滤渣加入5倍溪黄草干重的35%甲醇水溶 液，加入溶液重量的0.8y。的NaOH调节溶液pH值，于50"C条件下提取2次，每次2小时，合 并提取液，过滤，滤液调节pH值至6.5静置陈化，固液分离，沉淀物即为总三萜酸粗品，其 中科罗索酸的提取率可达95. 1%;于50'C条件下，用8倍重量的90%甲醇充分溶解总三萜酸 粗品，固液分离去除不溶物，调整滤液体系中科罗索酸终浓度达到1.6g/L、甲醇终浓度为 38%、 KOH终浓度为0. 3%后，滤液经HZ806大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用3倍树脂 体积量的自来水洗去未被吸附的总三萜酸残留料液和2倍树脂体积量的40%甲醇水溶液洗去 吸附力较科罗索酸弱的杂质，再用5倍树脂体积量的65%甲醇水溶液，在中性条件下以1.5 倍树脂体积量/小时的流速洗脱科罗索酸；用稀盐酸水溶液调整洗脱液体系中甲醇浓度达50% 和pH值为6.5，缓慢冷却至开始析出科罗索酸结晶、4 1(TC冷藏、静置养晶、过滤，固液 分离沉淀物即为科罗索酸。 实施例4将6.5kg番石榴叶粉末放入提取罐中，加入6倍番石榴叶干重的自来水煮沸2次，每次 l小时，合并提取液，过滤，滤液经真空浓縮成浸膏；滤渣加入8倍番石榴叶干重的40%乙醇 水溶液，加入溶液重量的0. 5%的NaOH调节溶液pH值，于45。C条件下提取2次，每次2小时， 合并提取液，过滤，滤液调节pH值至5.5静置陈化，固液分离沉淀物即为总三萜酸粗品，其 中科罗索酸的提取率可达93. 2%;于75'C条件下，用5倍重量的85%乙醇溶液充分溶解总三 萜酸粗品，固液分离去除不溶物，调整滤液体系中科罗索酸终浓度达到0.5 g/L、乙醇终浓 度为38%、 NaOH终浓度为0.5%后，滤液经D101大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用5 倍树脂体积量的纯水洗去未被吸附的总三萜酸残留料液和6倍树脂体积量的48%乙醇水溶液 洗去吸附力较科罗索酸弱的杂质，再用6倍树脂体积量的68%乙醇水溶液、在中性条件下以 0. 8倍树脂体积量/小时的流速洗脱科罗索酸；用稀盐酸水溶液调整洗脱液体系中乙醇浓度达45呢和pH值为7.0，缓慢冷却至开始析出科罗索酸结晶、4 1(TC冷藏、静置养晶、过滤，固 液分离沉淀物即为科罗索酸。以上实施例旨在进一步举例描述本发明，而不是以任何方式限制本发明。
权利要求
1. 一种从植物中提制科罗索酸的方法，其特征在于以含有科罗索酸的植物为原料，采用5～10倍植物干重的纯水或自来水煮沸2次，每次1小时，合并提取液，过滤，滤液经真空浓缩成浸膏；滤渣加入5～10倍植物干重的30～60％乙醇或甲醇水溶液，加入溶液重量的0.5～1.0％的NaOH或KOH调节溶液pH值，于30～48℃条件下提取1～3次，每次1～3小时，合并提取液，过滤，滤液调节pH值至4.5～7.5静置陈化，固液分离，沉淀物即为总三萜酸粗品；于50～75℃条件下，用不低于3倍重量的85～100％乙醇或甲醇水溶液充分溶解总三萜酸粗品，固液分离去除不溶物，调整滤液体系中科罗索酸终浓度达到0.5～2.5g/L、乙醇或甲醇终浓度为30～40％、NaOH或KOH终浓度为0.2～0.5％后，滤液经大孔吸附树脂吸附科罗索酸至饱和，先用不少于3倍树脂重量的纯水或自来水洗去未被吸附的总三萜酸残留料液和不少于2倍树脂重量的40～50％乙醇或甲醇水溶液洗去吸附力较科罗索酸弱的杂质，再用不少于3倍树脂重量的60～70％乙醇或甲醇水溶液，在中性条件下以0.5～1.5倍树脂重量/小时的流速洗脱科罗索酸，调整洗脱液体系中乙醇或甲醇终浓度≤50％和pH值≤7.0，缓慢冷却至开始析出科罗索酸结晶、4～10℃冷藏、静置养晶、固液分离沉淀物即为科罗索酸。
2. 根据权利要求1所述的从植物中提制科罗索酸的方法，其特征在于所述总三萜酸是熊 果酸类化合物或齐墩果酸类化合物中的一种或几种化合物。
3. 根据权利要求1所述的从植物中提制的科罗索酸的方法，其特征在于所述浸膏用于进 一步制备具有化痰、止咳、平喘、消炎、抗病毒或降血糖作用的口服药剂。
全文摘要
本发明提供一种从植物中提制科罗索酸(corosolic acid)的方法，包括水溶性物质的水煮除杂、总三萜酸的碱性有机溶剂提取和科罗索酸的大孔吸附树脂富集纯化步骤。以含有科罗索酸的植物为原料，纯水煮沸去除水溶性物质；滤渣采用碱性的30～60％乙醇或甲醇水溶液提取总三萜酸、在pH 4.5～7.5条件下沉淀分离制得总三萜酸粗品；总三萜酸粗品经85～100％乙醇或甲醇充分溶解并去除不溶物，滤液经大孔吸附树脂的吸附与洗脱，调整科罗索酸洗脱液中乙醇或甲醇终浓度≤50％和pH值≤7.0，在此条件下沉淀分离制得科罗索酸。本发明制备工艺简单、分离纯化效率高、容易工业化生产、生产成本低，具有较大推广性。
文档编号C07J63/00GK101274953SQ20081007106
公开日2008年10月1日 申请日期2008年5月19日 优先权日2008年5月19日
发明者陈剑锋 申请人:福州大学